Duyuru

**igokcek** · 13 September 2012, 12:56

Gurmar, Gymnema Sylvestre

**igokcek** · 13 September 2012, 12:56

DİYABET (Şeker hastalığı) Gurmar ile Tedavisi Mümkündür. Klinik Araştırmalar ile Belgelenmiştir.

Gymnem sylvestre R Br İzole Gymnemik Asit in vivo anti-ülser, anti-stres, anti-alerjik ve fonksiyonel özellikler

Lilly Baptista Arun , ¹Aarrthy M Arunachalam , ²Kantha Deivi Arunachalam , ¹Sathesh Kumar Annamalai , ¹ ve Kalaivani Amit Kumar ³
Yazar bilgileri Madde notları Telif Hakkı ve Lisans bilgileri Uyarı, Bu makale PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır .

Arka fon
Gymnema sylvestre , potansiyel antidiyabetik aktivitesi ve diğer sağlık yararları nedeniyle şu anda birçok poli-bitkisel formülasyonda kullanılan oldukça değerli bir etno farmakolojik olarak önemli bir tıbbi bitkidir. Bu çalışma Gymnema sylvestre yapraklarında bulunan biyoaktif bileşiklerin anti-stres, anti-alerjik ve anti-kanser aktivitesini analiz etmek için yapıldı .

Yöntemler
Sulu ekstraktlardan biyoaktif bileşikler için ön fitokimyasal tarama, alkaloidler, triterpenler, flavonoidler, steroidler ve saponinlerin varlığını ortaya koydu. Antioksidan aktiviteler DPPH radikal süpürme yöntemi kullanılarak araştırıldı. Ekstrenin karakterizasyonu vb toplam fenol, toplam flavonoid, indirgeyici güç ve antioksidan potansiyelleri bakımından Yüksek Performanslı İnce Tabaka Kromatografisi (HPTLC) standart bileşik ve fitokimyasal analizi kullanılarak gerçekleştirilmiştir i n in vivo albino fareler üzerinde çalışmalar kanıtlamıştır saflaştırılmış fraksiyon, süt kaynaklı lökositoz / eozinofili karşısında anti-stres / anti-alerjik aktiviteye sahiptir ve aspirin kaynaklı mide ülserlerini inhibe edebilir.

Sonuçlar
Sulu ekstrakt için nicel tahmin toplam antioksidan (9.13 ± 0.04 μg / g), flavonoidler (125.62 ± 26.84 μg / g), tanen (111.53 ± 15.13 μg / g), toplam fenol içeriği (285.23 ± 1.11 μg / g) ve serbest radikal süpürücü (% 52.14 ±% 0.32). Ayrıca sulu ekstrakt art arda TLC ve silika kolon kromatografisi ile saflaştırıldı. Arıtılmış fraksiyonlar HPTLC ve GC-MS ile karakterize edildi ve bileşen, gymnemik asit olarak tanımlandı. Ekstraktın antimikrobiyal aktivitesinin gücü bakteri ile incelenmiştir. Farmakolojik deneyler, oral olarak verilen tüm bitkilerin özlerinin, farelerde asprin kaynaklı mide ülseri modeline karşı önemli gastrik koruma gösterdiğini açıkça göstermiştir. Ayrıca iyileşme etkileri histopatolojik inceleme ile de doğrulanmıştır. Sonuçlar

Gymnema sylvestre yapraklarının sulu özleri, anti ülserojenik, Anti alerjik, Anti stres, sitoprotektif mekanizmaya bağlı olabilecek özelliklere sahiptir. Bu sonuçlar, mide ülseri tedavisinde bitkinin etno tıbbi kullanımını destekler.

Anahtar Kelimeler: Gymnema sylvestre , Gymnemik asit, Anti-stres, Anti-ülser, Anti-alerjik, Antioksidan aktiviteler, Yaprak ekstresi

Bitkiler her zaman prototipik bir ilaç kaynağı olmuştur ve daha önce mevcut olan ilaçların çoğu doğrudan veya dolaylı olarak onlardan türetilmiştir. Çok sayıda kimyasal bileşiği temsil eden çok çeşitli bitki kaynaklı aktif ilkeler, çeşitli hastalıkların tedavisinde olası kullanımlarıyla tutarlı aktivite göstermiştir [ 1 ]. Son yıllarda, tıbbi bitki araştırmalarında etno botanik bilgilerinin kullanımı, bilimsel topluluğun bölümlerinde dikkate değer bir ilgi kazanmıştır [ 2 ]. Hindistan'ın Tamil Nadu kentinde Batı Ghats'ın Tirunelveli tepelerinde Kanitribals tarafından yaygın olarak kullanılan şifalı bitkilerin Etno botanik araştırmalarından birinde Gymneme sylvestre'nin kullanımlarına göre en önemli tür olduğunu ortaya koymuştur [ 2 ].

Çeşitli sağlık rahatsızlıklarının önlenmesi ve tedavisi için bitki kısımlarının ve izole edilmiş fitokimyasalların kullanımı çok eskiden beri pratikte olmuştur [ 3 ]. Böyle bir bitkiden biri , Hindistan'ın çoğuna dağıtılan ve genellikle geleneksel tıpta mide, idrar söktürücü ve diyabetes mellitus'u kontrol etmek için bir ilaç olarak bilinen Mesnringi olarak bilinen Gymnema sylvestre R.Br'dir. Gymnema sylvestre R. Br [ 4 ] orta ve güney Hindistan'ın tropikal ormanlarında ve Asya'nın bazı bölgelerinde yetişen odunsu, tırmanıcı bir bitkidir [ 5]. Genç sapları ve dalları olan tüylü bir çalıdır ve 2.5-6 cm uzunluğunda ve genellikle oval veya eliptik olan belirgin bir filoloksik karşıt düzenleme desenine sahiptir, çiçekler küçük, sarı, umbellat cymes ve foliküller terete, mızrak şeklinde , 3 inç uzunluğa kadar [ 6 ].

Gymnema sylvestre , halktan, ayurveda ve homeopatik tıp sistemlerinde çağlardan beri diyabet tedavisinde kullanılmaktadır [ 1 , 4 , 7 ]. Ayrıca astım, göz şikayetleri, aile planlaması, yılan ısırığı, idrar şikayetleri, mide rahatsızlıkları, kazıklar, kronik öksürük, solunum problemleri, kolik ağrı, kardiyopati, kabızlık, hazımsızlık ve hemoroid, hepatosplenomegally tedavisinde kullanılır [ 8 ]. Ayrıca antimikrobiyal [ 9 ], antitümör [ 5 ], obezite [ 10 ], antienflamatuar [ 11 ] ve Anti-hiperglisemik Aktiviteye [ 12 ] sahiptir.

G. sylvestre'nin alternatif bir ilaç olarak kullanımında bir artış olduğu için , bu doğal kaynağın değerlenmesine katkıda bulunmak için bu parametreleri analiz etmek daha da önemli hale gelmiştir [ 13 ]. G. Sylvestre çeşitli ticari formülasyonlarda kullanılır. Madhu Rakshak, Doğa bakımı Gymnema (Dabur India Ltd., Yeni Delhi, Hindistan), Dolabi (Hamdard Laboratories, Yeni Delhi, Hindistan), Kan şekeri (Nutrasanus), Glikoz Desteği (Vitabse, Monroe), Nutrilite (Amway Pvt. Ltd. ) Dibecon, Ayurslim, Meshashringi (Himalaya Drug Co., Bangalore, Hindistan) ve diğerleri [ 13 , 14 ].

Bugüne kadar birçok ticari ilaç mevcut olmasına rağmen, bitki ekstraktlarının anti-stres, anti-alerjik ve antiülser aktivitesi hakkında hiçbir rapor mevcut değildir, bu nedenle mevcut çalışma, altta yatan mekanizmaları ve etki tarzını keşfetmek için çeşitli in vivo sistemler kullanılarak gerçekleştirilmiştir . . Bazı araştırmacılar Gymnema sylvestre'deki biyoaktif 'gymnemagenin' in mevsimsel varyasyonunu rapor ettiğinden [ 13 , 15 ] , bu nedenle toplanan bitkinin fitokimyasal bileşenlerini çalışmamız için karakterize etmek kaçınılmazdır. Bu nedenle başlangıçta yaprak ekstraktının fitokimyasal bileşenlerini karakterize ettik ve farmakolojik özellikleri için karakterize ettik.

Yöntemler

Tek bir popülasyondan aynı yaş grubundaki bitkilerden G. sylvestre'nin taze yaprakları, Temmuz 2010'da deneysel Bitkisel Bahçe, Tamil Üniversitesi, Thanjavur, Tamil Nadu, Hindistan'dan toplandı. Herbaryum, kimlik doğrulaması için hazırlandı (Ref. No: SRM \ CENR \ PTC \ 2010 \ 03) ve taksonomik tanımlama, Dr. Jayaraman, Profesör, Botanik Bölümü, Madras Christian College, Tambaram, Chennai, Tamil Nadu tarafından yapıldı ve daha fazla referans için araştırma laboratuvarında tutuldu.

Sulu ekstraktın hazırlanması

G. sylvestre'nin yaprakları önce kiri uzaklaştırmak için damıtılmış su ile yıkandı ve daha sonra yumuşak sabun çözeltisi ile yıkandı ve üç kez damıtılmış su ile durulandı. Yapraklar, kağıt mendil ile lekelenmiştir ve oda sıcaklığında en az 2 hafta boyunca gölgede kurutulmuştur. Tamamen kurutulduktan sonra yapraklar küçük parçalar halinde kesildi ve bir mikserde toz haline getirildi ve daha sonraki çalışmalarda kullanılmak üzere düzgün bir boyut aralığı elde etmek için 20 um gözenekli bir elek kullanılarak elendi. 20.0 g elenmiş yaprak tozu, 500 mL Erlenmeyer şişesinde 100 mL steril damıtılmış suya ilave edildi ve 5 dakika kaynatıldı. Şişeler, sürekli karanlık koşullar altında 30 ° C'de tutuldu. Ekstrakt süzüldü ve hava geçirmez bir kapta saklandı ve daha sonra kullanılmak üzere güneş ışığından korundu [ 16 , 17 ].

Ön fitokimyasal aktivite

G. sylvestre ekstrelerinin kalitatif fitokimyasal analizi, alkaloitlerin (Mayer's, Wagner, Dragendorff testi), flavonoidler (alkalin reaktif, Shinoda), fenolikler (kurşun asetat, alkalin) varlığını belirlemek için Parekh ve Chanda [ 18 ] yöntemlerini izleyerek gerçekleştirildi. reaktif testi), triterpenler (liberman-burchard testi), saponinler (köpük testi), tanenler (jelatin). Sonuçlar nitel olarak pozitif (+) veya negatif (-) olarak ifade edilmiştir [ 19 ]. Çalışma için kullanılan kimyasallar Sigma-Aldrich'ten (Chennai, Hindistan) satın alınmıştır.

Nicel fitokimyasal analiz
Toplam fenolik içeriğin tahmini

Her bir ekstraktın toplam fenolik içeriği, uyarlanmış bir Folin Ciocalteu kolorimetrik yöntem kullanılarak ölçüldü. Yaklaşık 200 ul% 10 (v / v) Folin Ciocalteu reaktifi, fosfat tamponunda (75 mM, pH 7.0) 100 ul sulu ekstrakt ile karıştırıldı. Pozitif kontrol olarak gallik asit ve negatif kontrol ve absorbans olarak fosfat tamponu, UV-Vis 3000+ çift ışınlı spektrofotometre (Lab India, Maharashtra, Hindistan) kullanılarak 30 dakikalık inkübasyondan sonra 765 nm'de ölçülmüştür. 0.05 ila 0.5 mM arasında değişen gallik asit konsantrasyonları kullanılarak standart bir eğri hesaplandı ve sonuçlar, kurutulmuş ağırlığın mg / g gallik asit eşdeğerleri (GAE) olarak ifade edildi [ 20 , 21 ]. Tüm deneyler üç kez gerçekleştirildi ve sonuçların ortalama ± SD olarak ifade edilmesi için ortalaması alındı.

Toplam flavonoidlerin tahmini

Flavonoid tayini için alüminyum klorür kolorimetrik yöntem kullanıldı. Her numunenin 250 ul'si, 1.25 ml deiyonize su ve 0.075 ml% 5 sodyum nitrit ile karıştırıldı. 6 dakika sonra 0.15 ml% 10 alüminyum klorür ilave edildi ve 6 dakika sonra ürün 0.5 ml 1 M sodyum hidroksit ve 2.5 ml deiyonize su ile karıştırıldı. Toplam flavonoidler, UV-Vis 3000+ çift ışınlı spektrofotometre (Lab India, Maharashtra, Hindistan) kullanılarak 510 nm'de ölçüldü. Sonuçlar, katkin eşdeğeri mg CE / g bitki ekstraktı olarak verildi [ 22 , 23 ].

Toplam antioksidan kapasite

Toplam antioksidan kapasite deneyi için, suda çözündürülmüş 0.3 ml jimnastik özü (10 mg / ml), 3 ml reaktif çözeltisi (0.6 M sülfürik asit, 28 mM sodyum fosfat ve 4 mM amonyum molibdat) ile karıştırıldı. Reaksiyon karışımı inkübe edildi ve absorbans, reaktif şahitine karşı 695 nm'de ölçüldü. Standart olarak gallik asit kullanıldı ve toplam antioksidan kapasite, askorbik asidin eşdeğerleri olarak ifade edildi [ 23 , 24 ].

DPPH radikal süpürücü analizi

Blios yöntemi, DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil) serbest radikalinin atılma aktivitesinin belirlenmesi için kullanıldı. Reaksiyon karışımı (DPPH ve ekstrakt) vortekslendi, inkübe edildi ve absorbansı 517 nm'de ölçüldü. Bitki ekstraktının atılma kabiliyeti aşağıdaki denklem kullanılarak hesaplanmıştır:
D P P HS c a v e n g i n ga c t i v i t y ( %)= [ ( A b sc o n t r o l - A b ss a m p l e ) ] ×100 ( A b sc o n t r o l ) ]

Burada, Abs kontrolü numune olmadan DPPH'nin emilmesidir; Abs örneği DPPH'nin numune ile absorbansıdır [ 25 ].

G. sylvestre ekstresinin saflaştırılması ve karakterizasyonu
HPTLC taraması

Yüksek Performanslı İnce Tabaka Kromatografisi, örnek bileşenlerin ayrılmasının, gelişmiş bir iş istasyonu kullanılarak algılama ve elde etme ile yüksek performanslı katmanlarda elde edildiği düzlemsel bir kromatografidir. Camag 100 μl şırınga örnek aplikatörü, ikiz oda tankı, model CAMAG İkizden cam odaya (20 × 10) İnce Katman Kromatografisi (TLC) tarayıcı ve Camag TLC tarayıcı III yazılımı Win Cats 4.03 ile donatılmış bir Linomat V ile donatılmış Camag HPTLC Sistemi çalışmada kullanılmıştır. TLC Alüminyum levhalar (20 cm x 10 cm) silika jel GF 254 kullanıldı. Metanol içinde hazırlanan% 92 saflıkta 20 ul referans standart gymnemic asit (1 μg / μl stok çözeltisi) TLC plakasına uygulandı. TLC plakasına her numuneden 20 μl ekstrakt uygulandı. Eşzamanlı sonuçlar için üç özdeş plaka hazırlandı. Plakalar, bölme doygunluğu koşulları altında 80 nm'ye kadar geliştirildi. Çözücünün havayla kurutulmasından sonra plakalar, absorbans modunda 290 nm dalga boyunda tarayıcı III kullanılarak tarandı [26 , 27 ].

Gaz kromatografisi analizi

Analiz, 6890 N Model kaynaşmış bir silis kolonu HP-5MS silika kolonu (Agilent J&W Gc kolonu) 30 Uzunluk (m), 0.250 Diam ile donatılmış bir Agilent gaz kromatografisinde gerçekleştirildi. (mm), 0.25 Film (μm), Chemstation yazılımı kullanılarak K. Hari Chandra Prasad tarafından işletilen bir kütle seçici detektör 5973B inert XL MSD ile arayüzlenmiştir. Analitik koşullar enjektör ve transfer hattı sıcaklıkları sırasıyla 250 ° C ve 280 ° C idi, fırın sıcaklığı 60 ° C'de (5 dakika boyunca izotermal), 4 ° C / dk ila 130 ° C'ye (10 ° için izotermal) bir artışla programlandı. min), daha sonra 4 ° C / dk ila 240 ° C; kullanılan taşıyıcı gaz 1 ml / dakikada helyumdu; 2 ul enjeksiyon (% 10 heksan çözeltisi); ayrılma oranı 1:50, ayrık akış 50 ml / dakika idi; standart elektronik darbe (EI) MS kaynak sıcaklığı 230 ° C idi; MS dörtlü sıcaklığı 150 ° C idi; kütle tarama aralığı eV'de 30-550 amu idi;⁻¹ ; ve sonuçtaki EM voltajı 2000 V'dur [ 3 , 4 , 28 ].

Antimikrobiyal etkinlik

Daha önceki çalışmalarımızda bildirildiği gibi [ 16 , 19 ] , antimikrobiyal aktivite testleri, 10 ⁸ içeren 100 μl süspansiyon kullanılarak disk difüzyon yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. Muller Hington Agar (MHA) üzerindeki CFU / ml bakteri. 6 mm çapındaki diskler, 30 mg / ml konsantrasyonda 10 μl ekstraktlar (300 ug / disk) ile emprenye edildi ve klinik patojenler aşılanmış agar plakaları üzerine yerleştirildi. Negatif kontroller, bitki özütlerini çözmek için kullanılan çözücüler kullanılarak hazırlandı. Test edilen her mikrobiyal türdeki bir suşun / izolatın duyarlılığını belirlemek için standart referans standart olarak loloksasin (10 μg / disk), Siprofloksasin (10 μg / disk), netilmisin (30 μg / disk) ilaçları pozitif referans standartları olarak kullanıldı. Aşılanan plakalar, klinik bakteri suşlarının büyümesi için 37 ° C'de 24 saat inkübe edildi. Antimikrobiyal aktivite, test organizmalarına karşı inhibisyon bölgesinin iki kez ölçülmesiyle değerlendirildi. Gymneme sylvestre'nin antimikrobiyal aktivitesiekstrakt Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli ve Strepococcus pyogenes büyümesine karşı değerlendirildi [ 29 , 30 ] .

Farmakolojik özellikleri

Araştırmada SRM Üniversitesi Hayvan Evi, SRM Tıp Koleji Hastanesi ve Araştırma Merkezi'nden elde edilen 25 g - 30 g ağırlığında İsviçre albino erkek fareleri kullanıldı. Hayvanlar, 24 saatte bir yenilenen kabukla kaplanmış polipropilen kafeslere (47 cm x 34 cm x 18 cm) yerleştirildi. Hayvanlar standart pelet diyeti ve su ad libitum ile beslendideney boyunca. Deney hayvanları kontrollü bir ortamda (12:12 saat aydınlık ve karanlık döngüsü) ve sıcaklıkta (24 ° C ± 2 ° C) tutuldu. Deneyler Hayvanlar Üzerinde Deney Denetimi ve Denetimi Komitesi (CPCSEA), Yeni Delhi, Hindistan kılavuz ilkelerine uygun olarak gerçekleştirilmiş ve deney protokolü Hayvan Deneyleri Etik Komitesi (Etik izin numarası: 14 / IAEC) tarafından onaylanmıştır. / 10) SRM Üniversitesi. Hayvanlar, deneylere başlamadan önce bir hafta boyunca iklimlendirildi.

Anti-stresin in vivo değerlendirilmesi (adaptojenik aktivite)

Fareler altı gruba ayrıldı (n = 6). Grup I'e araç,% 5 polietilen glikol (5 ml / kg, ip); grup II süt (4 ml / kg, ip) ile muamele edildi; test grupları III-VI farklı G. sylvestre konsantrasyonu ile tedavi edildiekstrakt (50-200 mg / kg, ip) ve 1 saat ilaç tedavisinden sonra her hayvana pastörize süt (4 ml / kg, ip) enjekte edildi. Toplam lökosit sayısı tedaviden önce ve ayrıca süt enjeksiyonundan 24 saat sonra her grup için kontrol edildi. Retro-orbital pleksustan kan örnekleri alındı. Toplam lökosit sayısı da ilaç uygulamasından önce ve süt enjeksiyonundan 24 saat sonra her grupta kontrol edildi. İşaretlemek için WBC pipet içinde kan emildi ve 5 dakika boyunca bir kenara bırakıldı. Toplam uygulamada lökosit ve eozinofil sayıları, ilaç uygulamasından önce ve süt enjeksiyonundan 24 saat sonra her grupta alındı. İlaç uygulamasından önce ve 24 saat sonra toplam lökosit ve eozinofil sayısındaki fark hesaplandı [ 31 ].

Anti-alerjik aktivite –Sarı farelerde süt kaynaklı eozinofili

Eozinofili, aşağıda açıklanan protokole göre süt kullanılarak farelerde indüklenmiştir. Fareler her grupta altı hayvandan oluşan altı gruba ayrıldı. Retro-orbital pleksustan kan alındı. Grup I'e araç,% 5 polietilen glikol (5 ml / kg, ip); grup II negatif kontrol görevi gördü ve süt (4 ml / kg, ip) ile muamele edildi; test grupları III-VI farklı G. sylvestre konsantrasyonu ile tedavi edildiekstrakt (50-200 mg / kg, ip) ve 1 saat ilaç tedavisinden sonra her hayvana kaynamış ve soğutulmuş süt (4 ml / kg, ip) enjekte edildi. Eozinofil sayısı tedaviden önce ve süt enjeksiyonundan 24 saat sonra her grupta yapıldı ve kan örnekleri retro-orbital pleksustan alındı. Eozinofil sayısı ilaç uygulamasından önce ve süt enjeksiyonundan 24 saat sonra her grupta yapıldı. Kan, WBC pipetinde emildi ve eozin boyası ile seyreltildi. Eozin çözeltisi, eozinofil dışındaki tüm yuvarların yok edilmesini kolaylaştırır. Neubaur'un odasına yukarıdaki sıvı yüklendi ve eozinofili sayıldı. Tedaviden 24 saat önce ve sonra eozinofil sayısındaki fark hesaplandı [ 32 , 33 ].

Antiülser aktivite - Aspirin kaynaklı ülser testi

Otuz aç fare, her biri altı fareden oluşan beş grup olarak kullanıldı. Bu modelin I ve II gruplarına sırasıyla 20 mg / kg po, distile su (2 ml / kg) ve omeprazol verilirken, III, IV, V ve VI gruplarına 50, 100,150 ve 200 mg / kg po ekstrakt verildi. Tüm gruplardaki hayvanlar, ilgili tedaviden sonra 18 saat aç bırakıldı ve anestetik eter ile anestezi uygulandı. Karın ksifoid işleminin altında küçük bir orta hat kesisi ile açılmış ve midenin pilor kısmı kaldırılmış ve bağlanmıştır [ 34 ]. Kan dolaşımına çekilmekten kaçınmak için önlemler alındı. Mide kesilmiş dikişlerle dikildi. Pilor ligasyonundan dört saat sonra sıçanlar kurban edilmiş ve mide çıkarılmıştır [ 35 ].

Daha sonra mide daha büyük eğrilik boyunca kesildi ve ülserler için gözlendi. Ülserlerin sayısı bir büyüteç kullanılarak sayıldı ve ülserlerin çapı vernier kaliperleri kullanılarak ölçüldü. Dharmani ve arkadaşları tarafından bildirildiği gibi (2005) [ 36 ] lezyonların insidansını ve şiddetini derecelendirmek için keyfi skorlama sistemi kullanıldı: (i) skor 10 = denuded epitel; (ii) skor 20 = peteşiyal ve yan kanamaları; (iii) skor 30 = bir veya iki ülser; (iv) skor 40 = çoklu ülser; (v) skor 50 = delikli ülser.

Daha sonra ülser indeksi (UI), Umamaheswari ve arkadaşları (2007) tarafından bildirildiği üzere yukarıdaki skorlamalardan hesaplanmıştır [ 37 ].
UI = U _N + U _s + U _p × 10 ⁻¹

Nerede,

Burada U _N hayvan başına ülser sayısının ortalaması, U _S ülser skorunun ortalama şiddeti ve U _p ülser insidansı olan hayvanların yüzdesidir [ 37 ].

Histopatolojik değerlendirme

Mide ülser değerlendirmesinin ardından histopatolojik inceleme için% 10 formalin çözeltisine daldırıldı. Gastrik doku örnekleri 24 saat nötr tamponlu formalin içine sabitlendi. Midelerden alınan doku kesitleri, G. sylvestre'nin ülserojenik ve / veya ülserojenik aktivitesini incelemek için histolojik olarak incelendi . Dokular% 10 tamponlu formalin içine sabitlendi ve bir doku işlemcisi kullanılarak işlendi. İşlenen dokular parafin bloklarına gömüldü ve döner mikrotom kullanılarak yaklaşık 5 um kalınlığında kesitler kesildi. Bu bölümler rutin prosedürler kullanılarak hematoksilin ve eozin ile boyandı. Slaytlar, bu değişikliklerin şiddetini değerlendirmek için keyfi bir ölçek kullanarak tıkanıklık, kanama, ödem ve erozyon gibi morfolojik değişiklikler açısından mikroskobik olarak incelendi [19 , 35 , 37 ].

istatistiksel analiz

Tüm deneyler kopyalar halinde yapıldı ve veriler ortalama ± SD olarak ifade edildi. İstatistiksel anlamlılık tek yönlü ANOVA ve ardından Dunnet karşılaştırma testi kullanılarak hesaplandı. P <0,05 değerleri anlamlı kabul edildi.

sonuçlar ve tartışma
Fitokimyasal tarama

G. sylvestre'nin sulu ekstraktlarının ön fitokimyasal taramasının sonuçları, alkaloidler, fenoller, flavonoidler, steroller, tanenler ve triterpenler olduğunu ortaya koymuştur (Tablo 1 ). Tablo 2'de gösterildiği gibi toplam flavonoidler 125.62 ± 26.84 μg / g, toplam fenol içeriği 285.23 ± 1.11 μg / g ve tanen 111.53 ± 15.13 μg / g idi. G. sylvestre'nin su ekstraktında mevcuttu . Flavonoidler ve fenolik bileşikler, antioksidan ve lipit peroksidasyon inhibisyon özellikleri gibi çok çeşitli biyolojik aktiviteler sergiledi. tablo 1

G. sylvestre yaprak ekstresinin fitokimyasal taraması

Alkaloidler	+
triterpenoidler	+
Glikozidleri	-
Saponinler	+
Tanenler fenolleri	+
Flavonoidler	+
steroidler	+

+
Mevcut. -Yok. Tablo 2

G. sylvestre'nin yaprak ekstraktının fitokimyasal bileşiklerinin tahmini

Toplam antioksidan ^a	9.13 ± 0.04
Flavonoidler ^b	125,62 ± 26,84
Tanen ^c	111.53 ± 15.13
Toplam fenol içeriği ^d	285,23 ± 1,11
Serbest radikal süpürücü ^d	52,14 ± 0,32

Tabloda verilen tüm değerler, üçlü belirleme aracıdır. Ortalama ± standart sapma olarak sunulan veriler; ^bir Galik asit eşdeğeri; ^b Tannik asit eşdeğeri, ^c Quercetin eşdeğeri, ^d Kateşin eşdeğeri. Bu, toplam antioksidan 9.13 ± 0.04 μg / g ve DPPH radikal süpürme deneyi sırasıyla% 52.14 ± 0.32 test edilerek kanıtlanmıştır (Tablo 2 ). Tüm bu sonuçlar flavonoidlerin önemli bir antioksidan özellik kaynağı olabileceğini gösterir, ancak aktivite çoğunlukla moleküler yapılarına ve hidroksil gruplarının konumuna bağlıdır.

Karakterizasyonu G. sylvestre sulu ekstrakt

G. sylvestre yapraklarının ekstraktlarının HPTLC ile ayrılması için farklı mobil fazları test ederek, gymnemagenin'in simetrik ve tekrarlanabilir piklerle istenen çözünürlüğü, mobil olarak n-butanol: asetik asit: su (6: 3: 1) kullanılarak elde edildi. evre. G. sylvestre'nin standart ve yaprak ekstraktının kromatogramları sırasıyla Şekil 1'de gösterilmektedir .

Şekil 1
Görüntü referans standart gymnemagenin içinde G. sylvestre insert sulu özü HPTLC kromatogramları .

Şekil l'den kalibrasyon eğrisinin doğrusal olduğu gözlenmiştir; korelasyon katsayısı konsantrasyon ve alan arasında iyi bir doğrusallık olduğunu göstermiştir. Test numunesinin pik saflığını belirlemek için, in vivo ve in vitro metanol ekstraktı yansıtma spektrumlarını standartla karşılaştırdık, bu da Şekil 1'de gösterildiği gibi test örneği saflığı sağlar . G. sylvestre'nin yaprak ekstraktlarına uygulandığında , gymnemagenin içeriği% 2.34 kuru ağırlık olarak bulunmuştur. Ayrıca, korelasyon katsayısı değeri 0.99, konsantrasyon ve alan arasındaki iyi doğrusallığı gösterir. Önerilen HPTLC yöntemi kullanılarak gymnemagenin Rf'sinin 0.63 olduğu bulunmuştur. Referans standart gymnemagenin kromatogramları bir ek ve sulu ekstraktın kromatogramları olarak gösterilmiştir.

G. sylvestre yapraklarının sulu ekstraktının temsili bir kromatogramı Şekil 2'de gösterilmiştir ve 18 bileşenin varlığını gösterir. Gymnemagenin bu atamaları, standart kullanılarak hesaplanan lineer tutma indekslerinin literatürde bildirilenlerle karşılaştırılmasıyla desteklenmiştir [ 5 , 38 , 39 ]. GC spektrumu ekstrakte edilmiş biyoaktif molekülü gymnemik asit olarak doğruladı ve görüntüdeki ekler standart gymnemagenin'i göstermektedir.

şekil 2
G. sylvestre'nin Gaz Kromatogramı görüntü içerisine yerleştirilir GC Standart gymnemagenin kromatogramı. Antimikrobiyal etkinlik

G.sylvestre ekstrelerinin klinik patojenlere karşı antimikrobiyal aktiviteleri, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli ve Strepococcus pyogenes patojenlerinin inhibisyon bölgesi ile nicel olarak değerlendirildi . T inhibisyon bölgeleri hesaplanandan çapları Tablo l'de tablo halinde 3 ve bölgeler iyi Şekil gözlemlenmemiştir 3 . Tablo 3

Gymnema sylvestre'nin sulu ekstraktının in vitro antibakteriyel taranması

Bacillus cereus	-	9 ± 0.22	11 ± 0.52
Escherichia coli	8 ± 0.3	9 ± 0.41	12 ± 0.21
Staphylococcus aureus	-	12 ± 0.28	15 ± 0.32
Pseudomonas aerugenosa	-	9 ± 0.34	13 ± 0.41
Streptococcus pyogenes	-	11 ± 0.41	13 ± 0.57

Değerler, üç tekrar deneyin ortalama ± standart sapmasıydı. Çalışma için kullanılan tür MTCC'den elde edilmiştir.

Ayrı bir pencerede aç
Figür 3
Gymnema sylvestre sulu ekstraktlarının patojenlere karşı inhibisyon bölgesi A) Bacillus cereus B) Escherichia coli C) Staphylococcus aureus D) Pseudomonas aerogenosa E) Streptococcus pyogenes disk difüzyon yöntemiyle.

Sonuçlarımız, bitki özleri tarafından hem Gram-pozitif hem de Gram-negatif organizmalar için büyümenin inhibisyonunu gösterdi. Benz ve Bauer (1988) tarafından bildirildiği gibi, [ 40 ] gram negatif bakteriler, lipopolisakarit moleküllerinin mevcudiyeti nedeniyle hidrofilik bir dış zara sahiptir; böylece bitki ekstraktlarının küçük hidrofilik çözünenleri dış zarı hidrofilik trans-membran kanalları sağlayan bol porin proteinlerinden geçirebilir. Dış zar makromoleküllere ve hidrofobik bileşiklere karşı bir penetrasyon bariyeri görevi görür. Böylece biyoaktif bileşikler zarı geçti ve seçilen patojenlerin büyümesini inhibe etti.

Bu antimikrobiyal aktivite, daha fazla araştırmaya ihtiyaç duyan bu bitki türlerinde bildirilen veya tanımlanan alkaloidler, fenoller ve terpenoidler gibi ikincil metabolitlerde bulunan farklı bileşiklerle ilgilidir. Test edilen bitki ekstrelerinin gram negatif bakterilere karşı antimikrobiyal aktivitesi düşük veya aktif değildir. Genel olarak, Gram pozitif bakteriler antimikrobiyal ajanlara karşı daha yüksek direnç gösterir ve bu Staphylococcus aureus'un duyarlılık sonuçlarından anlaşılır .

G. sylvestre'nin anti-stres aktivitesi

Stres temel olarak zihin ve bedenin homeostazdaki değişikliklere karşı bir reaksiyonudur [ 41 ]. Travma, kirli havaya maruz kalma, radyasyon, reaktif azot ve oksijen türlerinden kaynaklanan ve immün yetmezliğe ve oksidatif strese neden olan fizyolojik bir durumdur [ 42 ]. Beyaz kan hücrelerinin (lökositler) sayısındaki artış, organizmalardaki stres seviyelerini değerlendirmede en güvenilir bir biyobelirteçtir. Sütün parenteral uygulaması lökosit sayısında belirgin bir artış yarattı ve bu stresli durum bir anti-stres veya adaptojenik ilacın uygulanmasıyla normalleştirilebilir [ 43 ]. Çeşitli konsantrasyonlarda G. sylvestre ile önceden muamele edilmiş farelerekstrakt sütle indüklendiğinde lökosit sayısında azalma gösterirken, negatif kontrol lökosit sayısını önemli ölçüde azaltamaz (Tablo 4 ). Tablo 4

G. sylvestre'nin yaprak ekstraktının farelerde süt kaynaklı lökositoz ve eozinofil üzerindeki etkisi

ben	% 5 PEG	121.23 ± 13.15	53.0 ± 19.34
II	Süt	3180.21 ± 136.0	84,1 ± 42,90
III	50 mg / kg	2025.03 ± 272.87	66,7 ± 16,67 *
IV	100 mg / kg	2483.34 ± 148.14 *	66,6 ± 10,54 *
V	150 mg / kg	1766.67 ± 316.14 *	50.0 ± 12.91 *
VI	200 mg / kg	1545,89 ± 732,49 *	37.8 ± 74.11

Veriler ortalama ± SEM olarak sunulmuştur; * Taşıt + süt grubuna göre <0.05 (grup II; negatif kontrol).

Tedavi edilen gruplar (IV-VI) artan konsantrasyonla birlikte lökosit sayımlarında anlamlı bir azalma gösterdi (p <0.05). Bu nedenle G. sylvestre özütü, farelerde sütün neden olduğu lökositoza karşı koruyucu etki göstermiştir. Bu belirtiler depresif hastalarda veya yoğun stres altındaki kişilerde gözlenen bazı çekirdek semptomları temsil eder. Abrus precatorius [ 32 ], Alchornea cordifolia [ 44 ] ve Evolvulus alsinoides [ 45 ] özlerinden benzer aktivite bildirilmiştir .

G. sylvestre'nin anti-alerjik aktivitesi

Eozinofillerin bronşiyal astım, rinit ve ürtiker gibi alerjik bozukluklarla ilişkili enflamatuar ve sitotoksik olaylara aracılık ettiği bildirilmektedir [ 46 ]. Tablo (4) 'te gösterildiği gibi, (II) grubuna kaynatılmış ve soğutulmuş sütün uygulanması, (I) grubuna kıyasla eozinofil sayısında anormal bir artış gösterdi. Wechsler (2007) [ 47 ], periferik eozinofilde toplam lökosit sayısının% 4'ünden fazlasına artmanın doğrudan solunum bozukluğu ile ilişkili olduğunu ve doğada genellikle alerjik olduğunu bildirmiştir. Çeşitli G. sylvestre ekstreleri (grup III-VI) ile ön işleme tabi tutulan fareler , sütün neden olduğu eozinofil sayısında önemli (p <0.05) azalma gösterdi. Böylece, Brahmans ve Dardymov tarafından bildirildiği gibi, 1969 [ 48] Bir adaptojenin en önemli özelliği, çok çeşitli fiziksel, kimyasal ve biyolojik faktörlerin olumsuz etkilerine karşı direnci arttırma yeteneğidir; önceki patolojik durumdan bağımsız olarak. Bu durumlarda G. sylvestre ekstraktları eozinofilleri önemli ölçüde azaltmıştır, bu da bu ekstraktların alerjik ve astımlı durumlarda yararlı olduğunu göstermektedir.

G. sylvestre'nin anti-alerjik aktivitesi, tanenlerin (111.53 μg / g), toplam fenollerin (285.23 μg / g) ve flavonoidlerin (125.62 μg / g) varlığına bağlı olabilir. Sonuç olarak, G. sylvestre'nin sulu ekstraktı anti-alerjik aktiviteye ve sütün neden olduğu eozinofili antagonize ederek mast hücrelerini stabilize etme potansiyeline sahiptir. Chen ve ark., 2013 [ 49 ] tarafından bildirildiği gibi , fenolik bileşikler anti-alerjik etkilere kısmen Ca2 + akışının azaltılması ve mast hücrelerinde cAMP yükselmesi yoluyla aracılık edilebilir. Benzer şekilde G.sylvestre özütü, anti-alerjik etkileri indükleyen bileşik olabilecek daha yüksek fenolik içeriğe (285.23 μg / g) sahiptir.

G. sylvestre ekstresinin antiülser aktivitesi

G. sylvestre ekstresinin antiülser aktivitesi, bu çalışmada aspirin kaynaklı ülserlere karşı fare modellerinde oluşturulabilir. Negatif kontrol grubu, mukozal bütünlük ve rejenerasyon için gerekli olan prostaglandin sentezinin inhibisyonu ve bunu takiben mukozal kan akışında azalma ve bunun sonucunda ülser oluşumu nedeniyle meydana gelen 9.7 ± 0.03 ülser indeksi gösterdi [ 50 ]. Tüm dozlarda sulu ekstre, doza bağlı koruma sağladı ve 150 mg / kg ve 200 mg / kg dozları, negatif kontrole kıyasla önemli bir koruma sağladı (% 89 ve% 100, p <0.05) (Tablo 5 ). Tablo 5

G. sylvestre yaprak ekstraktlarının farelerde aspirin kaynaklı mide ülseri üzerine etkisi

ben	Kontrol	6/6	9.7 ± 0.03	-
II	Omeprazol - 20 mg / kg	6/6	3.5 ± 0.01	% 72
III	Ekstrakt olarak 50 mg / kg	6/6	6.2 ± 0.05	% 44
IV	100 mg / kg ekstrakt olarak	6/6	5.9 ± 0.05	% 56
V	Ekstrakt olarak 150 mg / kg	6/6	2.1 ± 0.02 *	% 89
VI	Ekstrakt olarak 200 mg / kg	6/6	0.5 ± 0.07 *	100%

Veriler ortalama ± SEM olarak sunulmuştur; * Negatif kontrole kıyasla <0.05.

Şekil 4'ten , enflamatuar aracıların üretiminin de lezyon mekanizmaları için önemli bir faktör olduğu gözlenmektedir. Ek olarak, gastrik kan akışı stazı ve mikro vasküler bozulma hemoraji ve nekrotik doku hasarına neden olur.

Midenin brüt görünümleri (A) Kontrol (B) Asprin (C) ile indüklenen Normal Grup Ülseri Omeprazol ile tedavi edilen bölüm (D) G. sylvestre ile tedavi edilen bölümün yüksek konsantrasyonu .

Farelerin gastrik mukozasının histolojik çalışmaları, G. sylvestre ile tedavi edilen gruptaki mide erozyonu ve lezyonlarında kontrol grubuna kıyasla Omeprazol ile tedavi edilen gruba benzer önemli bir azalma olduğunu göstermiştir (Şekil 5 ).

Resim 5
Mide mukozasının HE boyamasının fotomikrografileri (büyütme × 100). (Hematoksin ve Eosin) (A) Kontrol Grubu (B) Asprin (C) ile indüklenen Normal Grup Ülseri Omeprazol ile tedavi edilen kısım (D) Tedavi edilen yüksek konsantrasyonda G. sylvestre .

Şekil 5'te görüldüğü gibi , bağırsak metaplazisi her zaman objektif olarak histolojik yöntemlerle sınıflandırılamaz, çünkü geleneksel hematoksilin-eozin (HE) boyaması kullanılarak emici hücrelerin fırça sınırını tanımak bazen zordur. Kontrol grubunda (Şekil 5 A) makroskopik veya mikroskopik lezyon gözlenmedi. Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ülsere bağlı grupta aspirin kaynaklı lineer kanamalar ve mukozal tabakadaki mukozal eritem gibi makroskopik morfolojik değişikliklerin mide içine uygulanması gözlendi (Şekil 5 B). Choi ve ark., 2010 tarafından benzer sonuçlar bildirilmiştir [ 51] aspirin ile indüklenen sıçanlarda baskın mukozal hiperemi ve midenin toplam glandüler alanını kaplayan ödemli hemorajik lezyonlar gösterdiği ve tedavi edilmemiş ülserasyonlu farelerde akut ülserasyonun gösterilmesinde belirgindi. Omiprazol (20 mg / kg) (Şekil 5 C) ve tedavi edilen G. sylvestre (Şekil 5 D) ile tedavi edilen fareler , ülser grubuna kıyasla gastrik hasar oluşum alanlarını önemli ölçüde azaltmıştır. Bizim sonuçlarımızdan, gastrik mukozadaki lezyonların, 100 mg / kg'lık dozlarda G. sylvestre ile tedavi edilen hayvanlarda önemli ölçüde azaldığı görülmüştür .

Kontrol bölümünde (Şekil 5 A) mide mukozası tabakası alt mukozası enflamasyon mukozasının sub mukozal kronik enflamatuar infiltrat ile sağlam olduğunu gösterir. Aspirin ile tedavi edilen grupta (Şekil 5 B) kesit, submukozal konjesyon ödemi ve filtratta yüksek inflamasyon sub mukozal kronik inflamatuar gösterdi. Omeprazol ile tedavi edilen grupta (20 mg / kg) (Şekil 5 ° C) göstermektedir hemen hemen normal görünür olan histopatoloji hiçbir önemi değişim.

Bu nedenle, genel histolojik skorlar, asprin kaynaklı ülsere karşı G. sylvestre ile yapılan ön tedavinin, etkili epitelizasyon, glandüler organizasyon, mukozanın rejenerasyon eğilimi ve azalmış ülser krateri ile önemli ülser koruması ortaya çıkardığını göstermiştir. G. sylvestre sulu ekstraktımız, Cassia sieberiana [ 52 ], Simaba ferruginea [ 53 ], Voacanga africana [ 54 ], Cayratia trifolia [ 55 ] , Calotropis gibi diğer tıbbi bitkilerin anti-ülser özelliklerine kıyasla daha koruyucu etkili göstermiştir. prosera [ 56 ], Cola cordifolia kabuğu ve yaprakları [ 57 ], Solanum torvum [ 58 ] yaprakları ve kırmızı alg Gracilaria changii [ 59 ] . G. sylvestre'nin aspirini indükleyen ülseri 100 mg / kg'da koruduğu bulunmuştur.

Al-Rejaie ve diğerleri, 2012 [ 60 ], G. sylvestre (100, 200 ve 400 mg / kg) ile ön tedavinin, sıçanlarda etanol kaynaklı mide mukozal hasarının zarar verici etkisine karşı koruma gösterdiğini bildirmiştir. Ayrıca 400 mg / kg'da bile etanolün ülserojenik etkisine karşı sadece% 63 koruma sağlandığını bildirdi. Etanol tedavisinin kendisi, mukozal hücrelerde toksik serbest radikalleri biriktirerek hayvanların mide proteinlerini ve nükleik asit içeriğini önemli ölçüde azalttı. Ancak sonuçlarımız, aspirinin neden olduğu ülserin 200 mg / kg ekstrakt ile tamamen korunduğunu ümit ediyor.

Taranması fitokimyasal G. sylvestre ekstraktının flavonoidlerin varlığını göstermiştir (Tablo gösterdi 1 ve ve2)2 , gözlenen anti-ülser aktivitesi için bir sebep teşkil edebilir). Çünkü flavonoidler, anti-enflamatuar aktiviteleri nedeniyle mide mukozasını çeşitli ülserojenik ajanlara karşı koruma yeteneğine sahiptir [ 61 ]. Ayrıca serbest radikal aracılı stres, gastrointestinal bozuklukların patogenezindeki endişelerden biri olmuştur [ 62 ]. Bu nedenle, G. sylvestre ekstresinin antioksidan aktivitesi (Tablo 2 ), serbest radikal temizleme özellikleri nedeniyle bu tür lezyonların önlenmesinde de etkili olmuştur.

Sonuç

Gymnema sylvestre , çok eski zamanlardan beri kullanılan iyi çalışılmış bir şifalı bitkidir. Bu bitkiden izole edilen çok çeşitli bileşikler, çeşitli in vitro ve in vivo çalışmalar kullanılarak yapısal, fonksiyonel ve farmasötik özellikleri ile karakterize edildi . Bu makale, G. sylvestre'nin anti-stres, anti-alerjik ve anti-kanser özelliklerini gerçekleştirmek için daha iyi bir kapsam sağlamak için bazı standart prosedürleri detaylandırmayı amaçlamaktadır . Bu nedenle bitki, gymnemagenin'in bu etkilerden sorumlu bileşiklerden biri olduğunu göstermenin yanı sıra umut verici bir anti ülserojenik ilaç kaynağıdır. Bu tür bulgular, güçlü, daha güvenli ve etkili bir antiülser ajanın gelecekteki gelişimi için çaba göstermede son derece önemlidir. Farklı in vivo tahliller bir kez daha bu bitkinin birkaç hastalığı tedavi etmek için güçlü bir kaynak olduğunu kanıtladı.

Rakip ilgi alanları

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.

Şuraya git: Yazar katkıları

LBA çalışmayı gerçekleştirdi; AMA çalışmanın tasarımına katıldı. KDA ve SKA yöntemler üzerinde çalıştı, veri analizi yaptı, makaleyi yazdı ve eleştirel olarak gözden geçirdi. KAK Histopatolojik değerlendirme yaptı. Tüm yazarlar son makaleyi okudu ve onayladı.

Şuraya git: Yayın öncesi geçmişi

Bu yazı için yayın öncesi geçmişine buradan ulaşabilirsiniz:

http://www.biomedcentral.com/1472-6882/14/70/prepub

Şuraya git: alındı

Yazarlar, araştırma çalışmalarını yürütmek için altyapı ve laboratuar tesislerini sağladıkları için SRM Üniversitesi'ne şükranlarını sunmayı ve zamanında yardımları için SRM Tıp Koleji'ne şükranlarımızı sunmak istiyoruz.

Şuraya git: Referanslar

Grover JK, Yadav S, Vats V. Hindistan'da anti-diyabetik potansiyele sahip tıbbi bitkiler. J Etnoparmakol. 2002; 81 : 81-100. doi: 10.1016 / S0378-8741 (02) 00059-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Ayyanar M, Ignacimuthu S. Batı Ghats, Hindistan'ın Tirunelveli tepelerinde Kani triballeri tarafından yaygın olarak kullanılan şifalı bitkilerin etnobotanik araştırması. J Etnoparmakol. 2011; 134 : 851–864. doi: 10.1016 / j.jep.2011.01.029. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Pedersen ME, Vestergaard HT, Hansen SL, Bah S, Diallo D, Jäger AK. Epilepsi ve konvülsiyonlara karşı kullanılan Malili tıbbi bitkilerin farmakolojik taraması. J Etnoparmakol. 2009; 121 : 472-475. doi: 10.1016 / j.jep.2008.11.006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Karthic R, Nagaraj S, Arulmurugan P, Seshadri S, Rengasamy R, Kathiravan K. Gymnema sylvestre R. Br. süspansiyon hücre ekstresi, Alloxan kaynaklı diyabetik albino erkek sıçanlarda antidiyabetik potansiyel gösterir. Asya pac j trop biomed 2012; 2 : S930 – S933. doi: 10.1016 / S2221-1691 (12) 60339-6. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Wu X, Mao G, Fan Q, Zhao T, Zhao J, Li F, Yang L. Gymnema sylvestre'den polisakkaritlerin izolasyonu, saflaştırılması, immünolojik ve anti-tümör aktiviteleri. Food Res Int. 2012; 48 : 935–939. doi: 10.1016 / j.foodres.2012.02.006. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Kanetkar P, Singhal R, Kamat M. Gymnema sylvestre: bir Anı. J Clin Biochem Natur. 2007; 41 (Eylül): 77–81. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Chattopadhyay RR. Gymnema sylvestre yaprak ekstresinin antihiperglisemik etkisinin olası mekanizması, bölüm I. Gen Pharmacol. 1998; 31 : 495-496. doi: 10.1016 / S0306-3623 (97) 00450-3. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Patel K, Gadewar M, Tripathi R. Gymnemik asidin farmakolojik ve analitik yönleri: kısa bir rapor. Asya Pasifik J Trop Dis. 2012; 2 : 414-416. doi: 10.1016 / S2222-1808 (12) 60090-5. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Satdive RK, Abhilash P, Fulzele DP. Gymnema sylvestre yaprak ekstresinin antimikrobiyal aktivitesi. Fitoterapia. 2003; 74 : 699-701. doi: 10.1016 / S0367-326X (03) 00154-0. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Preuss HG, Bagchi D, Bagchi M, Rao CVS, Dey DK, Satyanarayana S. kilo kaybı özü. Diyabet Obez Metab. 2004; 6 : 171-180. doi: 10.1111 / j.1462-8902.2004.00328.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Gymnema sylvestre yapraklarının anti-enflamatuar aktivitesinin sıçanlarda ekstrakte edilmesini sağlar. Int J Green Pharm. 2008; 2 : 114–115. doi: 10.4103 / 0973-8258.41184. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Yadav M, Lavania A, Tomar R, Prasad GBKS, Jain S, Yadav H. Appl Biochem Biotechnol. 2010; 160 : 2388-2400. doi: 10.1007 / s12010-009-8799-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Manika N, Singh S, Verma RK, Bagchi GD. Gymnema sylvestre'de biyoaktif “gymnemagenin” in ekstraksiyon etkinliği, stabilite değerlendirmesi ve mevsimsel değişimi. Ind Crops Ürünleri 2013; 44 : 572-576. [ Google Akademik ]
Siriwatanametanon N, Fiebich BL, Efferth T, Prieto JM, Heinrich M. Geleneksel olarak kullanılan Tay şifalı bitkiler: in vitro antienflamatuar, antikanser ve antioksidan aktiviteler. J Etnoparmakol. 2010; 130 : 196-207. doi: 10.1016 / j.jep.2010.04.036. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Pandey AK, Yadav S. Gymnemik asit içeriğinde varyasyon ve Gymnema sylvestre (Gudmar) Farmakognozi Res. 2010; 2 : 309-312. doi: 10.4103 / 0976-4836.72330. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Arunachalam KD, Annamalai SK, Hari S. Memecylon umbellatum'dan yaprak ekstresi aracılı biyo-uyumlu gümüş ve altın nanopartiküllerinin tek aşamalı yeşil sentezi ve karakterizasyonu. Int J Nanomedicine. 2013; 8 : 1307–1315. doi: 10.2217 / nnm.12.176. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Arunachalam KD, Annamalai SK. Chrysopogon zizanioides sulu ekstrakt biyomedikal uygulamalar için kristal gümüş ve altın nanoparçacıkların sentez aracılık. Int J Nanomedicine. 2013; 8 (Temmuz): 2375–2384. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Parekh J, Chanda SV. Bazı Hint tıbbi bitkilerinin in vitro antimikrobiyal aktivitesi ve fitokimyasal analizi. Turk J Biotechnol. 2008; 31 : 53–58. [ Google Akademik ]
Subashini SD, Arunachalam K, Annamalai SK, Subhashini S, Arunachalam K. indigofera aspalathoides yapraklarının fitokimyasal, antimikrobiyal ve yara iyileştirici özellikleri üzerine klinik öncesi çalışmalar. J Pharm Res. 2011; 4 : 3206–3211. [ Google Akademik ]
Gonçalves S, Gomes D, Costa P, Romano A. Akdeniz şifalı bitkilerden infüzyonların fenolik içeriği ve antioksidan aktivitesi. Ind Crops Ürünleri 2013; 43 : 465-471. [ Google Akademik ]
Alhakmani F, Kumar S, Khan SA. Moringa oleifera çiçeklerinin toplam fenolik içeriğinin, in vitro antioksidan ve antienflamatuar aktivitesinin tahmini. Asya pac j trop biomed 2013; 3 : 623-627. doi: 10.1016 / S2221-1691 (13) 60126-4. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Suhartono E, Viani E, Rahmadhan MA, Gultom IS, Rakhman MF, Indrawardhana D. Endonezya Güney Kalimantan'daki seçilmiş bazı tıbbi bitkilerin toplam flavonoid ve antioksidan aktivitesi. APCBEE Prosedürü. 2012; 4 : 235-239. [ Google Akademik ]
Kumar R, Tayade A, Chaurasia O, Sunil H, Singh SB. Rhodiola sp. S hidro-alkolik ekstraktlarının antioksidan aktivitelerinin ve toplam fenol ve flavonoid içeriğinin değerlendirilmesi. Pharmacogn J. 2010; 2 : 431-435. doi: 10.1016 / S0975-3575 (10) 80027-6. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Salem MZ, Ali HM, El-Shanhorey Na, Abdel-Megeed A. Callistemon viminalis yapraklarından elde edilen ekstraktların ve uçucu yağın değerlendirilmesi: Antibakteriyel ve antioksidan aktiviteler, toplam fenolik ve flavonoid içeriği. Asya Pac J Trop Med. 2013; 6 : 785–791. doi: 10.1016 / S1995-7645 (13) 60139-X. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Cieśla Ł, Kryszeń J, Stochmal A, Oleszek W, Waksmundzka-Hajnos M.Seçilen fenolik bileşiklerin serbest radikal süpürücü özelliklerini değerlendirmek için standart bir TLC-DPPH testi geliştirme yaklaşımı. J Pharm Biomed Anal. 2012; 70 : 126-135. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Puratchimani V, Jha S. Gymnema sylvestre r'nin standardizasyonu. Br. yüksek performanslı ince tabaka kromatografisi ile gymnemagenin referansı. Phytochem Anal. 2004; 15 : 164-166. doi: 10.1002 / sayfa 763. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Kanetkar PV, Singhal RS, Laddha KS, Kamat MY. Jimnema sylvestre'nin kallus kültürlerinden gymnemagenin yoluyla gymnemik asitlerin ekstraksiyonu ve miktarının belirlenmesi. Phytochem Anal. 2006; 17 : 409-413. doi: 10.1002 / pca.939. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Liu X, Ye W, Yu B, Zhao S, Wu H, Che C. Gymnema sylvestre ve Euphorbia ebracteolata'dan iki yeni flavonol glikozit. Carbohydr Res. 2004; 339 : 891-895. doi: 10.1016 / j.carres.2003.12.017. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Arunachalam KD, Annamalai SK, Arunachalam AM, Subashini K, Kennedy S.Yara iyileşme uygulamaları için tıbbi bitki özütü - Indigofera aspalathoides kullanılarak kristalin gümüş nanopartiküllerin yeşil sentezi. Asya J Chem. 2013; 25 (Mart): 311-314. [ Google Akademik ]
SM, Arunachalam KD, Annamalai SK. Urinay Kateterlerinde Bioflim'in önlenmesi için gümüş nanoparçacıkların taranması ve karakterizasyonu. Asya J Chem. 2013; 25 : 347-349. [ Google Akademik ]
Dhake A, Mali R. Bauhinia variegata kök kabuğu ekstraktlarının farelerde süt kaynaklı eozinofiliye karşı etkilerinin değerlendirilmesi . J Adv Pharm Technol Arş. 2011; 2 : 132-134. doi: 10.4103 / 2231-4040.82949. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Taur DJ, Patil RY. Abrus precatorius yapraklarının astım tedavisinde süt kaynaklı lökositoz ve eozinofili üzerine etkisi. Asya pac j trop biomed 2011; 1 : S40 – S42. doi: 10.1016 / S2221-1691 (11) 60119-6. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Mandhani A, Srivastava A, Ansari M, Kapoor R, Singh U, Kumar V. Laparoskopik radikal nefrektomi sonrası liman bölgesi metastazı: tek merkezli bir deneyim. Farmakognozi Arş. 2010; 2 : 102-106. doi: 10.4103 / 0974-8490.62955. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Brodie D. Sıçanlarda pilor ligasyonu ile üretilen gastrik hiperaktivite mekanizması. J Dig Dis. 1966; 11 : 231-241. doi: 10.1007 / BF02233904. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Muniappan M, Sundararaj T. Bambusa arundinacea'nın antienflamatuar ve antiülser aktiviteleri. J Etnoparmakol. 2003; 88 : 161-167. doi: 10.1016 / S0378-8741 (03) 00183-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Dharmani P, Mishra PK, Maurya R, Singh Chauhan V, Palit G. Allophylus serratus: potansiyel anti-ülserojenik aktiviteye sahip bir bitki. J Etnoparmakol. 2005; 99 : 361–366'da açıklanmaktadır. doi: 10.1016 / j.jep.2005.01.011. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Umamaheswari M, Asokkumar K, Rathidevi R, Sivashanmugama T, Subhadradevi V, Ravi TK. Jasminum grandiflorum L. J Ethnopharmacol'un antiülser ve in vitro antioksidan aktiviteleri . 2007; 110 : 464-470. doi: 10.1016 / j.jep.2006.10.017. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
RB, Naik DG, Dandge CN, Rupanar SV bırakır. Esansiyel yağın antioksidan ve antimikrobiyal aktivitelerinin kimyasal incelenmesi ve değerlendirilmesi. J Essent Oil Res. 2011; 23 (Haziran): 12-20. [ Google Akademik ]
Rao GS, Sinsheimer JE. Gymnemagenin yapısı. Chem Commun. 1968; 24 : 1681-1682. [ Google Akademik ]
Benz R, Bauer K. Hidrofilik moleküllerin gram negatif bakterilerin dış zarından nüfuz etmesi. Bakteriyel ağrıları gözden geçirin. Eur J Biochem. 1988; 176 : 1-19. doi: 10.1111 / j.1432-1033.1988.tb14245.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Bhattacharya S. Muruganandam a ..: Withania somnifera'nın adaptojenik aktivitesi: sıçan modeli, kronik stresin kullanıldığı deneysel bir çalışma. Pharmacol Biochem Behav. 2003; 75 : 547-555. doi: 10.1016 / S0091-3057 (03) 00110-2. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Kannur DM, Hükümet VI, Akki KS. Sıçanlarda Caesalpinia bonduc tohum ekstraktlarının adaptojenik aktivitesi. J Etnoparmakol. 2006; 108 : 327-331. doi: 10.1016 / j.jep.2006.05.013. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Sharma P, Kirar V, Meena DK, Suryakumar G, Misra K. Valeriana wallichii'nin soğuk, hipoksi ve kısıtlayıcı çoklu stres hayvan modeli kullanarak adaptojenik aktivitesi. Biomed Yaşlanma Pathol. 2012; 2 : 198-205. doi: 10.1016 / j.biomag.2012.10.001. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Umukoro S, Aladeokin AC. Farelerde Alchornea cordifolia yaprak ekstresinin anti-stres ve antikonvülsan aktivitelerinin değerlendirilmesi. J Etnoparmakol. 2010; 127 : 768-770. doi: 10.1016 / j.jep.2009.11.023. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Gupta P, Sharma U, Gupta P, Siripurapu KB, Maurya R. Evolvosides CE, Evolvulus alsinoidlerden flavonol-4-O-triglikozitler ve anti-stres aktivitesi. Bioorg Med Chem. 2013; 21 : 1116-1122. doi: 10.1016 / j.bmc.2012.12.040. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Kroegel C, Warner J, Virchow JC Jr, Matthys H. Sağlık ve hastalıkta pulmoner bağışıklık hücreleri: eozinofil lökosit (Bölüm II) Eur Respir J. 1994; 7 : 743-760. doi: 10.1183 / 09031936.94.07040743. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Wechsler ME. Pulmoner eozinofilik sendromlar. Immunol Alerji Kliniği Kuzey Am. 2007; 27 : 477-492. doi: 10.1016 / j.iac.2007.07.005. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Brekhman II, Dardymov IV. Spesifik olmayan direnci artıran yeni bitkisel kökenli maddeler. Annu Rev Pharmacol. 1969; 9 : 419-430. doi: 10.1146 / annurev.pa.09.040169.002223. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Chen BH, Hung MH, Chen JY-F, Chang HW, Yu ML, Wan L, Tsai FJ, Wang TP, Fu TF, Chiu CC. Üzüm çekirdeği ekstresinin (GSE) RBL-2H3 mast hücreleri üzerindeki anti-alerjik aktivitesi. Food Chem. 2012; 132 : 968-974. doi: 10.1016 / j.foodchem.2011.11.079. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Lanza F. nsaid kaynaklı ülserlerin tedavisi ve önlenmesi için bir kılavuz. J Gastroenterol. 1998; 93 : 2037-2046. doi: 10.1111 / j.1572-0241.1998.00588.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Choi JI, Raghavendran HRB, Sung NY, Kim JH, Chun BS, Ahn DH, Choi HS, Kang KW, Lee JW. Sıçanlarda fucoidan'ın aspirin kaynaklı mide ülseri üzerine etkisi. Chem Biol Interact. 2010; 183 : 249-254. doi: 10.1016 / j.cbi.2009.09.015. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Nartey ET, Ofosuhene M, Agbale CM. Afrika laburnum “Cassia sieberiana” nın kök kabuğu ekstresinin anti-ülserojenik aktivitesi ve sıçanlarda antioksidan savunma sistemi üzerindeki etkisi. BMC Tamamlayıcı Alternatif Med. 2012; 12 : 247. doi: 10.1186 / 1472-6882-12-247. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
De Souza Almeida ES, Filho VC, Niero R, Clasen BK, Balogun SO, de Oliveira Martins DT. Simaba ferruginea A. St-Hil. hayvan modellerinde. J Etnoparmakol. 2011; 134 : 630-636. doi: 10.1016 / j.jep.2011.01.009. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Tan PV, Penlap VB, Nyasse B, Nguemo JD. Sıçanlarda farklı deneysel ülser modellerinde Voacanga africana kabuğu metanol ekstraktının anti-ülser etkileri. J Etnoparmakol. 2000; 73 : 423-428. doi: 10.1016 / S0378-8741 (00) 00292-0. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Gupta J, Kumar D, Gupta A. Deney hayvanlarında Cayratia trifolia metanolik ekstraktının gastrik anti-ülser aktivitesinin değerlendirilmesi. Asya Pasifik J Trop Dis. 2012; 2 : 99-102. doi: 10.1016 / S2222-1808 (12) 60024-3. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Bharti S, Wahane VD, Kumar VL. Calotropis procera lateks ekstrelerinin sıçanda deneysel olarak indüklenen mide ülseri üzerindeki koruyucu etkisi. J Etnoparmakol. 2010; 127 : 440-444. doi: 10.1016 / j.jep.2009.10.016. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Austarheim I, Mahamane H, Sanogo R, Togola A, Khaledabadi M, Vestrheim AC, Inngjerdingen KT, Michaelsen TE, Diallo D, Paulsen BS. Cola cordifolia kabuğu ve yapraklarından anti-ülser polisakkaritler. J Etnoparmakol. 2012; 143 : 221–227. doi: 10.1016 / j.jep.2012.06.027. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Nguelefack TB, Feumebo CB, Ateufack G, Watcho P, Tatsimo S, Atsamo AD, Tane P, Kamanyi A. J Etnoparmakol. 2008; 119 : 135-140. doi: 10.1016 / j.jep.2008.06.008. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Shu MH, Appleton D, Zandi K, AbuBakar S.Kırmızı alg Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) ekstresinin anti-inflamatuar, gastroprotektif ve anti-ülserojenik etkileri. BMC Tamamlayıcı Alternatif Med. 2013; 13 : 61. doi: 10.1186 / 1472-6882-13-61. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Al-Rejaie SS, Abuohashish HM, Ahmed MM, Aleisa AM, Alkhamees O. Erkek Wistar albino sıçanlarında etanol kaynaklı mide mukozası hasarının inhibisyonunu takiben olası biyokimyasal etkiler. Pharm Biol. 2012; 50 : 1542–1550. doi: 10.3109 / 13880209.2012.694894. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Harborne JB, Williams C. 1992'den beri flavonoid araştırmalarında gelişmeler. Fitokimya. 2000; 55 : 481-504. doi: 10.1016 / S0031-9422 (00) 00235-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Salim A.Ş. Sıçan aspirin ve etanol kaynaklı eroziv gastrite karşı korumak için temizleyici oksijen türevi serbest radikallerin kullanılması. J Pharm Sci. 1992; 81 : 943-946. doi: 10.1002 / jps.2600810921. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]

What is Gymnema (Gymnema Sylvestre)?
Gymnema sylvestre is native to the tropical forests of central and southern India. Nearly for two millennia, Indians using it as a natural diabetes treatment, they called it as a destroyer of sugar. Additionally, it reduces the taste of sugar, thus you can use it for fighting sugar cravings.

Gymnema Sylvestre commonly known as Meshashringi or Gurmar, means "sugar destroyer," because it masks the body's sense of taste to sugar. It supports the pancreas in insulin production in type 2 diabetes. It improves the ability of insulin in lowering glucose level in both type 1 and type 2 diabetes. Additionally, it decreases cravings for sweet. This is a substitute for oral blood-sugar-lowering drugs in type 2 diabetes. Take 500 mg per day of gymnema extract for a better result.
Other common names for gymnema are Gokhru (Unani), Gurmar (Hindi), Meshashringi (Sanskrit), Sirukurinjan (Tamil), Vishani (Sanskrit).
How does gymnema lower your sugar level?
The hypoglycemic action of gymnema leaves is slow in nature; instead, the prescribed hypoglycemic drugs have the rapid effect. It raises insulin production by regeneration of the pancreas cells. It improves glucose uptake by the cells by increasing the activity of the glucose utilizing enzymes, and stops adrenaline from stimulating the liver to produce extra glucose, thereby controlling blood-sugar levels. Gymnema leaves can additionally use to lowering serum cholesterol and triglycerides. It also reduces the taste of sugar and craving for sweets. The leaf extracts contain gymnemic acid, which inhibits hyperglycemia and acts as a cardiovascular stimulant.
Medicinal benefits of Gymnema
Therapeutic benefits of Gymnema Sylvestre are:
· It has been in use for thousands of years as an herbal treatment for diabetes. It can block the absorption of glucose from the intestines and helps to reduce cravings for sugar. It has also suggested for herbal weight loss applications. Chewing the leaves, or taking it in capsule form, can alter the taste of sugar and reduce the sweetness.
· It helps to reduce the carbohydrates stored as fat and increases the amount burned for energy. This leads to a reduction in fat stores and increase in energy available.
· It may reduce the amount of triglycerides and LDL (bad cholesterol) in the bloodstream thus, risk towards cardiac problems in reduced.
· It has slight diuretic effect, useful to treat water retention and may help lower blood pressure.
· It is useful to treat stomach ailments, constipation, and liver disease.
· Rheumatoid arthritis and gout have also been treating effectively.
· It also has antibacterial and antiviral properties in liquid applications.
Gymnema recommended daily dosage.
Generally, suggested dosage of 400 to 600 mg daily of an extract standardized to contain 24% gymnemic acid. Dose: 500mg/ml or 30 drops (tincture). Otherwise, you can take as an infusion of dried lead of 6 to 10 grams per day.
Gymnema available in different forms
Gymnema is commercially available as dried leaves, leaf tea bags, dip tea bags, powder, extracts, tablets and capsules.
How do you take Gymnema?
Gymnema sylvestre is very much better in taste difficult to consume so you can boil Gymnema sylvestre leafs along with green tea and filter it. If needed, sweetened it with stevia and flavored it with any herbals such as cardamom. Have a very nice cup of medicinal tea that lower blood-glucose.
Bioactive constituents of Gymnema
Bioactive constituents of Gymnema sylvestris are oleanane type of triterpenoid saponins called gymnemic acids. Gymnemic acid contains several acylated tigloyl, methylbutyroyl derivatives of deacylgymnemic acid (DAGA) which is 3-O-glucuronide of gymnemagenin (3, 16, 21, 22, 23, 28-hexahydroxy-olean-12-ene) 2. The individual gymnemic acids (saponins) include gymnemic acids, I-VII, gymnemosides A-F, and gymnemasaponins. Gymnemic acids have antidiabetic, antisweetener, and anti-inflammatory activities.
Scientific evidence for Gymnema as sugar natural herb
Gymnema sylvestre for diabetes mellitus. This study is conducted by J Altern Complement Med. 2007;13(9):977-983. This study result shows that gymnema targets several of the etiological factors connected with diabetes, including chronic inflammation, obesity, enzymatic defects, and pancreatic β-cell function, and since no single oral hypoglycemic drug presently exerts such a diverse range of effects, gymnema may be useful in the management of diabetes and the prevention of associated pathological changes, says the author.
Gymnema sylvestre: A Memoir by Kanetkar P, Singhal R, Kamat M. published in J Clin Biochem Nutr. 2007 Sep;41(2):77-81. This study result show, the active compound of the plant is a group of acids termed as gymnemic acids. It has observed that there could be a possible link between obesity, Gymnemic acids, and diabetes. This review will try to put forth an overall idea of the plant as well as present a molecular perspective linking the medicine to the most common metabolic disorders.
Possible side effects & medicine interaction of Gymnema
When taking an appropriate dosage, gymnema is safe, although extensive studies have not performed. One obvious risk is that if gymnema is successful, it may lower blood-sugar levels too far, causing a dangerous hypoglycemic reaction. For this reason, medical supervision is essential.

**igokcek** · 13 September 2012, 12:57

Gymnema Sylvestre - Rare Herb of Patalkot: India

By Dr Deepak Acharya, Garima Sancheti, Dr Anshu Shrivastava, Dr Sanjay Pawar - 2006-10-21
Chhindwara district lies between latitude 21�23' and 22�49' north and longitude 78�10' and 79�24' east. Mostly, the dense forest covers most of the area of the district. Patalkot is a lovely landscape located at a depth of 1200-1500 feet in a valley near Tamia in the north of the district.
* * *
Introduction:
Chhindwara district lies between latitude 21�23' and 22�49' north and longitude 78�10' and 79�24' east. Mostly, the dense forest covers most of the area of the district.
Patalkot is a lovely landscape located at a depth of 1200-1500 feet in a valley near Tamia in the north of the district. Because of the great depth at which it is located, this place is christened as 'Patalkot' (Patal means very deep, in Sanskrit). Patalkot is spread over an area of 79 Sq.Km. at an average height of 2750-3250 feet above Mean Sea Level. It is a treasure of forest and herbal wealth.
There are 12 villages and 13 hamlets in this valley, with a total population of nearly 2000. Because of the inaccessibility of this area, the tribals of this region were totally cut off from the civilized world. Most of the people in Patalkot belong to 'Bharia' and 'Gond' tribes. This valley is situated on the Satpura plateau in the southern central part of the Madhya Pradesh.
During the survey which carried out from 1997 to 2004, Dr Acharya explored the area of Patalkot valley that included- Gaildubbha, Karayam Rathed, Ghatlinga, Gudichhathri, Karrapani, Tamia Bharia Dhana, Bijauri, Pandu Piparia, Sajkui, Lahgadua, karrapani, Sidhouli.
All the co-authors of this article were involved in gathering information from various resources like, Internet, University libraries and oral information by traditional healers of their respective regions.
Why we select this plant?
Plants have been source of medicine for the ancient time. Thousands of books and articles have been written so far. Several thousands medicinal plants are discussed and used to cure various health disorders in India and abroad also. In India, almost 45000 plant species are growing naturally or being cultivated. There are so many popular Indian herbs used in traditional practices to cure diabetes. Gymnema sylvestre is having an important place in such antidiabetic medicinal herbs. It has shown experimental or clinical anti-diabetic activity (ENVISBSI, 2004) and it boosts your insulin level (Gent et al., 1999).
During the early 1990's, this marvelous herb was found in abundance in Patalkot valley. It's a climber and it could not survive well after the deforestation and cutting down of the big trees.
Nowadays, this herb is becoming rare in this valley. It evokes us to write an article and make it an issue so that, conservationist, botanist and NGO's come forward to rescue and save this plant in the valley.
Plant Profile:
Gymnema sylvestre (Retz.) Schultes in Roem. & Schult. Syst. Veg. 6: 57. 1820; Wight, Ic. 2 (1): 3. t. 349. 1840; Hook. f. Fl. Brit. India 4: 29. 1883; Duthie, Fl. Upper Gang. Pl. 2: 53. 1911; Jagtap & Singh in Fl. India Fasc. 24: 89. 1999. Periploca sylvestris Retz. Obs. Bot. 2: 15. 1781.
Synonyms: Periploca sylvestris Willd., Gymnema melicida Edgew.
Family: Asclepiadaceae
English Name: Suger destroyer, Periploca of the the woods.
Sanskrit names: Ajaballi, Ajagandini, Ajashringi, Bahalchakshu, Chakshurabahala, Grihadruma, Karnika, Kshinavartta, Madhunasini, Medhasingi, Meshashringi, Meshavishanika, Netaushadhi, Putrashringi, Sarpadanshtrika, Tiktadughdha, Vishani.
Local Names in India:
Hindi- Gur-mar, merasingi; Bengali- Mera-singi; Marathi- Kavali, kalikardori, vakundi; Gujarati- Dhuleti, mardashingi; Telugu- Podapatri; Tamil- Adigam, cherukurinja; Kannada- Sannager-asehambu; Malyalam- Cakkarakkolli, Madhunashini.
Taxonomic Description:
Extensive, much-branched, twining shrubs. Leaves 3-6 x 2-3 cm, ovate or elliptic-oblong, apiculate, rounded at base, sub-coriaceous. Flowers minute, greenish-yellow, spirally arranged in lateral pedunculate or nearly sessile cymes. Corolla lobes imbricate. Follicles solitary, upto 8 x 0.7 cm, terete, lanceolate, straight or slightly curved, glabrous. Seeds ovate-oblong, glabrous, winged, brown. Flowering: August-March; Fruiting: Winter.
Habitat:
Grows wild in forest as a climber also found in the plains from the coast, in scrub jungles and in thickets; wild.
Distribution in India:
It is occurring in Bihar, Central India, Western Ghats, and Konkan.
Distribution in Patalkot:
Gaildubba, Harra-ka-Char, Kareyam, Raja khoh, Sajkui etc.
Medicinal Property:
The plant is stomachic, stimulant, laxative and diuretic. It is good in cough, biliousness and sore eyes. If the leaves of the plant are chewed, the sense of taste for sweet and bitter substances is suppressed (Gent, 1999, Persaud et al., 1999, Intelegen, 2004). The leaves are said to be used as a remedy for diabetes (Prakash et al., 1986; Shanmugasundaram et al., 1990; Grover et al., 2002; Gholap & Kar, 2003}. It has been included among the most important herbs for all doshas (Mhasker & Caius, 1930; Holistic, 2004). It has shown effective activity against Bacillus pumilis, B. subtilis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus (Satdive et al., 2003). Tribals in Chhindi rub the leaves on infected body parts to cure infections.
The leaf powder is tasteless with a faint pleasant aromatic odour. It stimulates the heart and the circulatory system, increases the secretion of urine, and activates the uterus. Tribals of Central India prepare decoctions of Methi/ fenugreek (Trigonella foenum-graecum), Gudmar (Gymnema sylvestre), Arjuna (Terminalia arjuna), Ajwan (Trachyspermum ammi), gokshura (Tribulus terrestris), vayu-vidanga (Embelia ribes), Guduchi (Tinospora cordifolia), Harra (Terminalia chebula), and chitrak (Plumbago zeylanica) to cure diabetes and stress related disorders.
Traditional healers from various states of India use this plant in various ailments. Leaf is given in gastric troubles in Rajasthan. Traditional healers of Maharastra prescribe it in urinary problems and stomachache whereas in Madhya Pradesh, tribals and local healers apply the leaf extract in cornea opacity and other eye diseases. In Andhra Pradesh it is used in glycosuria.
Gymnema in Vedas:
According to Charak Samhita, it removes bad odour from breast milk. It is aperitive. This plant is useful as purgative, in eye troubles. Leaf extract and flower is beneficial for eyes. Bark is given in the diseases caused by vitiated kapha (phlegm). According the Bagbhat, rootbark useful in piles. Ayurveda tells that it is acrid, alexipharmic, anodyne, anthelmintic, antipyretic, astringent, bitter, cardiotonic, digestive, diuretic, emetic,expectorant, laxative, stimulant, stomachic, uterine tonic; useful in amennorrhoea, asthma, bronchitis, cardiopathy, conjunctivitis, constipation, cough, dyspepsia, haemorroids, hepatosplenomegaly, inflammations, intermittant fever, jaundice and leucoderma. Root emetic and removes phlegm; external application is useful in insect bite (ENVISBSI, 2004).
Chemical Composition:
The leaves contain hentriacontane, pentatriacontane, a-and �-chlorophylls, phytin, resins, tartaric acid, formic acid, butyric acid, anthraqui-none derivatives, inositol, d -quercitol and "gymnemic acid". The leaves give positive tests for alkaloids. Flavonol glycosides, kaempferol and quercetin have been isolated from the aerial parts of the plant (Liu et al., 2004). Three new oleanane-type triterpene glycosides were isolated from the leaves of the plant. Six oleanane-type saponins (Ye et al., 2000, 2001). Few new tritepenoid saponins, gymnemasins A, B, C and D were also isolated from the leaves of Gymnema sylvestre (Suttisri et al., 1995, Sahu et al., 1996).
Few important companies in Product Manufacturing:
Active Ingredients Group., Inc., China
Amitco International Botanical & Nutritional Division, USA
Camden-Grey Essential Oils, Miami, USA.
Christina's Body & Fitness, USA
Dabur, India
Himalaya Herbals, India
Natural Remedies Pvt. Ltd. India
Philly Pharmacy, USA
S&D Chemicals (Canada) Ltd. Canada
(*Names arranged alphabetically)
Concluding Remarks:
It is the need of the hour to save this highly important medicinal plant of Patalkot valley. If proper initiatives would not be taken in time, there would not be single Gymnema plant in the valley. It is urged to the scientists, conservationists, researchers, NGO's and other bodies to come forward and take moves to protect this important herb. Local farmers should be encouraged to cultivate this herb. Government and policy makers are having lots of plans/ ideas but they find problems in proper implementations. It is the youth and people from literate world who should come forward to take this task in their hands.
Acknowledgement:
Author (DA) is grateful to Dr S A Brown, Principal, Danielson College, Chhinwara for kind counsel time to time. Thanks are due to Dr MK Rai, Head, Department of Biotechnology, Amaravati University, Amaravati for supporting and encouraging me all the way. Thanks are due to all the tribals of Patalkot valley for sharing their indigenous knowledge with us.
References:
ENVISBSI, 2004.
Gent JF, Hettinger TP, Frank ME, Marks LE. 1999. Taste confusions following gymnemic acid rinse. Chem Senses;24:393-403.
Gholap S, Kar A. Effects of Inula racemosa root and Gymnema sylvestre leaf extracts in the regulation of corticosteroid induced diabetes mellitus: involvement of thyroid hormones. Pharmazie 2003;58:413-5.
Grover JK, Yadav S, Vats V. 2002. Medicinal plants of India with anti-diabetic potential. J Ethnopharmacol. 81(1):81-100.
Persaud SJ, Al-Majed H, Raman A, Jones PM. 1999. Gymnema sylvestre stimulates insulin release in vitro by increased membrane permeability. 1999. J Endocrinol. 163(2):207-212.
Shanmugasundaram ER, Rajeswari G, Baskaran K, Rajesh Kumar BR, Radha Shanmugasundaram K, Kizar Ahmath B. 1990. Use of Gymnema sylvestre leaf extract in the control of blood glucose in insulin-dependent diabetes mellitus. J Ethnopharmacol. 30(3): 281-94.
Holistic, 2004. holisticonline.com/Remedies/Diabetes/diabetes_ayurveda.htm (viewed on 28/10/04)
Intelegen, 2004. intelegen.com/nutrients/gymnema_sylvestre_for_diabetes.htm (viewed on 28/10/04)
Satdive RK, Abhilash P, Fulzele DP. 2003. Antimicrobial activity of Gymnema sylvestre leaf extract. Fitoterapia. 74(7-8): 699-701.
Liu X, Ye W, Yu B, Zhao S, Wu H, Che C. 2004. Two new flavonol glycosides from Gymnema sylvestre and Euphorbia ebracteolata. Carbohydr Res. 339 (4):891-895.
Mhasker KS, Caius JF. 1930. A study of Indian medicinal plants. II. Gymnema sylvestre R.Br. Indian J Med Res Memoirs. 16:2-75.
Prakash AO, Mather S, Mather R. 1986. Effect of feeding Gymnema sylvestre leaves on blood glucose in beryllium nitrate treated rats. J Ethnopharmacol 18:143-144.
Ye W, Liu X, Zhang Q, Che CT, Zhao S. 2001. Antisweet saponins from Gymnema sylvestre. J Nat Prod. 64(2): 232-235.
Ye WC, Zhang QW, Liu X, Che CT, Zhao SX. 2000. Oleanane saponins from Gymnema sylvestre. Phytochemistry. 53(8):893-899.
Sahu NP, Mahato SB, Sarkar SK, Poddar G. 1996. Triterpenoid saponins from Gymnema sylvestre. Phytochemistry. 41(4):1181-1185.
Suttisri R, Lee IS, Kinghorn AD. 1995. Plant-derived triterpenoid sweetness inhibitors. J Ethnopharmacol. 47(1):9-26.
About the Authors:
Dr Deepak Acharya: He is the Director of a herbal formulation company in Ahmedabad, India. He has been documenting ethnobotanical knowledge of tribals of Central and Western India. He has written 30 research papers in National and International journals of repute. He writes popular articles for web and magazines. Meet him on his homepage dracharya.tripod.com or contact via email on deep_acharya@rediffmail.com
Ms Garima Sancheti: She is a research scholar, working in the field of Radiation and Cancer Biology from Department of Zoology (University of Rajasthan, India). She has to her credit various research papers in scientific journals as well as articles on web. Contact her on garimasancheti@rediffmail.com
Dr Anshu Shrivastava: He is a Botanist and PhD from BSI- Jodhpur, currently working as Research Associate in SRISTI- Ahmedabad. He can be contacted on ansh24@gmail.com
Dr Sanjay Pawar: He is a botanist in Chhindwara, Madhya Pradesh. Contact him on drpawar@rediffmail.com

"Gymnema Sylvestre - Rare Herb of Ptalkot: India"

Disabled World - Disability News for all the Family

**igokcek** · 27 September 2012, 15:09

Gymnema Sylvestre'ın Farklı Coğrafi Çeşitlerinin Ayırt Edilmesi, Tip 2 Diyabet Tedavisinde Kullanılan Bir Tatlı Olmayan Bitki

Ha Thanh Tung Pham a, 1, Minh Chau Hoang b, 1, Thi Kim Quy Ha a, Lan Huong Dang a, Tran üzerinde van
, Thi Bich Thu Nguyen d, Chul Ho Lee e, Kazandı Keun Oh a, *

Kore Biyoaktif Doğal Malzeme Bankası, Farmasötik Bilimler Araştırma Enstitüsü, Eczacılık Fakültesi, Seul Ulusal Üniversitesi, Seul, 151-742,
Kore Cumhuriyeti
b Nam Duoc İlaç Anonim Şirketi, Hanoi, Vietnam
c Hanoi Eczacılık Üniversitesi, Hanoi, Vietnam
d Ulusal Tıbbi Malzemeler Enstitüsü, Hanoi, Vietnam
e Laboratuvar Hayvanları Kaynak Merkezi, Kore Biyobilim ve Biyoteknoloji Araştırma Enstitüsü, Kore Cumhuriyeti

Coğrafi çeşitlilik
morfoloji
Anatomi
ITS dizileri
Gymnemoside
3b-glukuronid oleane-triterpen
Glikoz alımı
Öz
Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br. eski Sm. (Asclepiadaceae), bilinen bir Ayurveda anti-tatlı bitkisidir.
tip 2 diabetes mellitus tedavisi. Daha önce G. sylvestre'nin coğrafyaya dayalı kimyasal varyasyon, G. sylvestre üzerine yapılan çoğu araştırma,
Hindistan. Morfolojik ve anatomik tanımlar, ITS1-5.8S-ITS2 DNA dizilemesi ve asit hidrolizi analizler Vietnam'dan G. sylvestre örneklerinin Hint kökenli olanlardan ayırt edilebilir olduğunu gösterdi ve böylece farklı coğrafi dağılımlara sahip G. sylvestre örnekleri arasında bir farklılık olduğunu düşündürmektedir. bir Vietnam G. sylvestre çeşidindeki 3b-glukuronid oleane-triterpenleri hedefleyen LC-MS destekli strateji, bilinen dört bileşiğin ve daha önce tarif edilmemiş dokuz bileşiğin izole edilmesine yol açtı. gymnemosides ND1-ND9. İzole edilen bileşiklerin hiçbiri Hint örneğinde rapor edilmemiştir, ayrıca G. sylvestre'nin coğrafi çeşitliliğini desteklemek. Üç bileşik, gymnemosides ND7-9, önemli ölçüde etkilendi 3T3-L1 adiposit hücrelerinde 2-NBDG alımında uyarıcı etkiler ve bu nedenle kurşun olarak potansiyele sahiptir anti-diyabet ajanları için moleküller.

1. Giriş
Son yıllarda, fonksiyonel gıdalar ve sağlık arasındaki ilişkinin artan bir farkındalığı, fizyolojik fonksiyonel bitkilerin gelişmesi nedeniyle potansiyel sağlık yararları (Zhao ve ark., 2017). Gymnema sylvestre(Retz.) R.Br. eski Sm. (Asclepiadaceae) iyi bilinen bir ilaçtır geleneksel tıpta uzun bir geçmişi olan bitki
ve tip 2 diabetes mellitus (T2DM) tedavisinde etkinliği için kapsamlı bir şekilde çalışılmıştır (Pothuraju ve ark., 2014).
Bu bitki basit bir çay demleme gibi formülasyonlarda kullanılmıştır,çay poşetleri, içecekler ve şekerlemeler (Tiwari et al., 2014) ve ayrıca çeşitli gıda preparatlarında şeker homeostazı ve obezite ve kan kolesterolünün kontrolü seviyeleri. G. sylvestre buğday (Triticum aestivum) ile harmanlanmıştır,
baklagiller, yağsız kuru süt, bitkisel yağlar ve baharat formülleri insüline bağımlı olmayan diyabet hastaları için uygun diyet takviyeleri veya yemek alternatifleri (Shobana ve ark., 2007). G. sylvestre'nin çoğu çalışması materyal kullanılarak yapılmıştır.
Ana aktif bileşenleri, C-3'te bir b-glukuronik asit ve bir oleane triterpen tipi aglikon (Pothuraju üzerinde C-23'te bir hidroksil ikamesi olan bir grup jimnastik asitidir. vd., 2014). Bu gymnemik asitler uzun zamandır bilinmektedir. Tatlı tat hislerini seçici bir şekilde bastırmadaki rolleri insanlar (Warren ve Pfaffmann, 1959) (Frank vd., 1992) (Gent ve diğerleri, 1999). Kashima ve diğ. Son zamanlarda öznel G. sylvestre uygulanan gönüllülerde tatlı tat yoğunluğu kontrol grubuna göre azalmış ve sylvestre ekstresinin postprandiyal gastrointestinal kan akışını ve mide boşalmasını geciktirmedeki rolü,müteakip glisemik metabolizma (Kashima ve diğerleri, 2017).
Farklı G. sylvestre ekstraktlarının LC-MS analizi tabi coğrafi dağılımlar (Hindistan, Vietnam ve Çin) asit hidrolizi arasındaki LC paternlerinde benzerlikler ortaya çıkarmıştır. Vietnam ve Çin'den örnekler, ancak Hint kökenli örnekleri. Özellikle, gymnemagenin, 23- hidroksil triterpen aglikon, Hint örneğinde bulundu ancak
Vietnamca ve Çince örneklerde değil (Şekil S7, Ek veri). Bu sonuç önerilen kimyasal varyasyon ile tutarlıdır.
Çin'den G. sylvestre çeşitlerinde, oleanan tiplerinde 23-hidroksil fonksiyonel grubun olmaması triterpen glikozitler (Ye ve diğerleri, 2001b). Kimyasal değişimler
tıbbi bir bitkinin bileşimi farmakolojik faaliyet, güvenlik ve standardizasyon. Bu nedenle, bu çalışmada, G. sylvestre'nin iki çeşidinin
morfolojik ve anatomik analizler ve ITS1-5.8S-ITS2 DNA dizi karşılaştırmaları dahil olmak üzere farklı yaklaşımlar. Ayrıca, Vietnam'dan toplanan G. sylvestre'den 3b-glukuronid oleanetriterpeni hedefleyen bir izolasyon işlemi gerçekleştirildi ve dokuzun saflaştırılması ve aydınlatılması ile sonuçlandı.
gymnemosides ND1- adlı daha önce tarif edilmemiş bileşikler ND9 (1e9) ve bilinen dört bileşik (10e13). Tüm izolatlar farklılaştırılmış 3T3-L1 adiposit hücrelerinde glukoz alımı üzerindeki etkilerini, floresans etiketli bir glikoz probu olarak 2-NBDG kullanarak potansiyelinin belirlenmesi amacıyla değerlendirildi.
T2DM tedavisi için Vietnam G. sylvestre çeşididir.

2. Sonuçlar ve tartışma

2.1. İki Gymnema'nın morfolojik ve anatomik analizi sylvestre çeşitleri

Makroskopik ve mikroskobik ayrıntılı açıklamalar
Vietnam G. sylvestre çeşidi (GSV) ve Hint G. sylvestre çeşidi (GS-I) olmak üzere iki örneğin özellikleri
G. sylvestre (Retz.) R.Br. ile eşleşen morfolojik özellikler. eski
Sm., Çin Florasında tarif edilmiştir (Wu ve Raven, 1995) (Şek. S1 ve
S2, Ek veriler). Bu benzerliklere rağmen, iki örneği ayırt etmek için bazı ayırt edici özellikler kullanılabilir
(Şekil 1A): (1) tüysüz veya tüylü genç dallar
GS-V'de fakat GS-I'de yoğun tüylü; (2) yaprak bıçakları çeşitlidir
ve her iki numunede de obovattan ovate değişiyordu, ancak
GS-V'de obovat ve kalın kağıt olması muhtemel ancak obovat ve
GS-I'de tiner; (3) neredeyse aynı olan adaksiyal ve abaxial yapraklar
GS-V'de orta damarda tüysüz ve hafif tüylü, ancak GS-I'de orta damarda tüylü; (4) dört ila beş çift yan damar
GS-V'de, venation sistemindeki üç ila dört çiftin aksine
Tabanda yakınsayan üç daha belirgin damarlı GS-I; ve
(5) genişletilmiş bir akü ile mızrak şeklinde folikül meyveleri
GS-V'de gaga ama dar mızrak şeklinde küçük meyveler
şekil ve GS-I'de gaga yok (bkz.Şekil 2).
Bu iki örneğin bilimsel isimlerini doğrulamak için,
morfolojik özelliklerini TYPE örnekleriyle karşılaştırdı
G. sylvestre Müzesi Ulusal d'Histoire'da
Naturelle, Paris, Fransa. GS-V örneği, Tonkin, Vietnam'da toplanan HOLOTYPE örneği MNHN-P-P04256786'ya benzerdi (Şekil S3, Ek veriler), GS-I örneği
"TYPE" örneği MNHN-P-P00645841 ile karşılaştırılabilir
Hindistan (Şekil S4, Ek veriler). Başka bir SYNTYPE örneği,
MNHN-P-P00442712 (Şekil S5, Ek veriler)
Madagaskar (Afrika) da GS-I ile eşleşti. Tüm tipler
yukarıda bahsedilen G. sylvestre olarak tanımlanmıştır. Her ne kadar iki
çalışılan örneklerin aynı tür olduğu belirlendi,
farklılıklar yeterince açıktı, bu da örneklerin
iki farklı G. sylvestre (Retz.) R.Br. çeşidini temsil eder. eski Sm

2.2. Farklı Gymnema'nın ITS1-5.8S-ITS2 dizi analizi katılmalar

ITS bölgesi kodlamayan iki bölgeyi kapsar, ITS1 ve ITS2, yüksek oranda korunmuş 5.8S rRNA geni (Beyaz ve diğerleri, 1990). 21 numunenin çoklu hizalama analizi de 5.8S bölgesinin korunmasını, sadece iki nükleotid polimorfizmleri (SNP'ler). Örnekler arasındaki farklılıklar temel olarak ITS1 ve ITS2 bölgelerinde meydana geldi (Şekil S6-A, Ek veriler), yakından arasında önemli bir ayrılık vaat ediyor ilgili türler. Buna göre, komşu birleşen filogenetik ağaç türler arası tüm örnekler arasında net bölünmeler gösterdi % 90.9 (G. sylvestre Indian çeşitliliği ile G. latifolium) ila% 96,4 (G. sylvestre Vietnamese çeşidi arasında)
ve G. yunnanense) (Şekil S6-B, Ek veriler). Türler düzeyinde, G. sylvestre örnekleri ikiye ayrıldı doğal kökenlerinden kuvvetle söz eden gruplar (Şekil 1B)
Vietnam ve Hindistan. İkisi arasındaki moleküler farklar G. sylvestre örnek grupları morfolojik analizle tutarlıydı ve ayrıca iki grubun ayrımını da destekledi
çeşitleri.

2.3. Bileşiklerin izolasyonu ve yapısal aydınlatılması

Vietnamca Gymnema sylvestre çeşitli Pozitif kütle fragmantasyon modunda LC-MS yoluyla, 3bglucuronid oleane-triterpenler etkili bir şekilde ayırt edilebilir nötr bir kaybına bağlı olarak G. sylvestre'deki diğer triterpenlerden 176 Da (glukuronik aside karşılık gelir). Böylece, LC-MS güdümlü hedef glukuronid triterpenlerini izole etmek için strateji kullanıldı G. sylvestre'den aşağıdaki prosedür ile:

(1) ekstraksiyon G. sylvestre ultrasonik koşullar altında% 60 EtOH ile ayrılır;
(2) makrogözenekli kolon kromatografisi (CC) bazlı ayırma reçine;
(3) zenginleştirilmiş triterpenoid elde etmek için silika jel CC'yi açın fraksiyonu;
(4) RP-18 (CC), Sephadex LH-20 (CC) ve art arda yarı hazırlayıcı HPLC; ve
(5) yapısal MS, NMR ve asit hidroliz / HPLC analizi ile açıklama. Olarak sonuç olarak, gymnemoside ND1-ND9 (1e9) olarak adlandırılan önceden tanımlanmamış dokuz bileşik ve bilinen dört bileşik (10e13) belirledi.

Amorf toz halinde elde edilen Gymnemoside ND1 (1) Ra25'tir. D -24.50 (c 0.2, MeOH), C42H66O16 moleküler formülüne sahiptir. m / z'de protondan arındırılmış moleküler iyon pikiyle belirlenir. 825.4315 [MeH] - (C42H65O16, 825.4278 için hesaplanan) ve 10 endeks hidrojen eksikliği. IR spektrumu,
3399, 2943 ve 1706 cm 1 hidroksil ve karbonil işlevleri. 1 H NMR spektrumu, dH 0.81, 0.97, 0.99, 1.26, 1.38 ve 1.58'de altı metil singlet (her biri 3H, s)
gözlemledi. Ayrıca, dH 5.31 (lH, br'de bir olefinik proton sinyali s) ve dH 4.98 (d, J ¼ 7.5 Hz) ve dH 5.37 (d'de iki anomerik proton, J = 8.0 Hz) aşikardı. 13C NMR spektrumu sinyaller gösterdi. dC 181.6 ve 172.5'teki iki karboksil grubu dahil 42 karbon için, dC 143.6 ve 123.5'te iki olefinik karbon sinyali, iki anomerik
dC 107.0 ve 106.1'deki karbonlar ve dC 62.7 ila 89.3 aralığındadır. Yukarıdaki spektroskopik veriler önerilir. 1, iki şeker kısmı olan oleane tipi triterpene
(Yoshikawa ve diğerleri, 1998). DC 181.6'daki karboksilik asit, H-30 (dH 1.58) ile HMBC korelasyonları aracılığıyla C-29'a atanan, H-19 (dH 2.70) ve H-21 (dH 2.52). Bir karşılaştırma ile literatür ve HMBC analizi, dH 4.41 (d, J ¼ 10.3 Hz) ve dH 3.75 (d, J ¼ 10.3 Hz) oksijenli metilen protonları C-28'e (dC 68.2) bağlı ve dH'de oksijenli metin protonu 4,81 (dd, J = 12,0, 4,9 Hz) C-16'da (dC 67,0) ortaya konmuştur (Ye ve diğ., 2000). Aglikonun nispi konfigürasyonu analiz edildi.

Şekil 1. A. Gymnema sylvestre'nin iki çeşidini farklılaştıran seçici morfolojik ve anatomik özellikler. B. Ribozomal bazlı komşu birleşen filogenetik ağaç
Gymnema cinsinden farklı örneklerin dahili kopyalanmış aralayıcı (ITS) dizileri. 1000 replikasyon yüzdesi (>% 75) olarak ifade edilen bootstrap değerleri,
dalları. Altı çizili örnekler bu çalışmada doğrudan dizilenmiştir ve diğer numune dizileri Blast analizi ile GenBank'tan elde edilmiştir. Marsdenia tenacissima oldu. Bu çalışma için bir dış grup örneği olarak kullanılır

proton birleştirme kalıpları ve bir NOESY deneyi yoluyla. Gürültülü H-3 dH 3.32 (dd, J ¼ 11.5, 4.0 Hz) ile H-5 dH 0.74 (d, J = 11.7 Hz) OH-3'ün b yönünde bulunduğunu gösterdi. H-27 dH 1.38 (3H, s) ve H-16 dH 4.81 arasındaki NOESY çapraz zirveleri (dd, J = 12.0, 4.9 Hz) OH-16'nın bir b oryantasyon. Ek olarak, H-30 (3H, s) arasındaki NOESY korelasyonları ve H-18 dH 2.61 (dd, J ¼ 13.8, 3.9 Hz), Me-29'un ekvatoral konformasyonu. Bu nedenle, 1, 3b-16b-28-trihidroksolean-12-en-29-oik asit olduğu sonucuna varıldı. veya myrtillogenik asit. 1'in asit hidrolizi, bir şeker karışımı verdi; otantik şeker standartlarıyla karşılaştırılarak D-glukoz ve D-glukuronik asit olarak tanımlandı. Onların varlığı desteklendi. Pozitif kütle fragmanı iyonları 629 [M-2 H2O-162 (glikoz) þ

Şekil 2. Vietnam Gymnema'sından izole edilen 13 bileşiğin kimyasal yapıları Sylvestre çeşidi.

H] þ ve 453 [M-2 H2O-162-176 (glukuronik asit) H] and ve iki COZY'de gözlenen farklı dizi heksoz proton sinyali tayfı. İlk şeker grubunda, dH 4.98 (d,
J <7.5 Hz) açıkça anomerik proton idi ve birleşme sabiti bu glikozit parçasının b-izomer formunda var olduğunu gösterdi. Bu şeker kısmının, bir b-glukuronik asit olduğu, Proton H-50 dH 4.63 (d, J = 9.5 Hz) ile karboksilik asit C-60 (dC 172.5) arasında HMBC korelasyonu. Ekranın çift sinyali (J ¼ 8.0 Hz) anomerik proton H-100 (dH 5.37 ppm) ve ikisinin varlığı C-600'e (dC 62.7) bağlı oksijenli metilen protonları ortaya çıktı bir b-glukopiranosil ikamesi. HMBC hakkında daha fazla araştırma spektrumlar, Glu-H100 (dH 5.37) ve GluAC30 (dC 87.8) ve Glu-H10 (dH 4.97) arasında C-3 (dC'deki aglikon ile çapraz tepeler gösterdi.
89.3), şeker gruplarının bağlantısını destekler. Bu nedenle, bileşik 1, 3b, 16b, 28-trihidroksolean-12- olarak açıklandı. en-29-oik asit 3-O-b-D-glukopiranosil (1/3) -O-b-D-glukuronopiranosid. Amorf toz olarak gymnemoside ND2 (2) elde edildi a25 ile D -23.30 (c0.2, MeOH). Moleküler formülü, m / z 825.4297'de HRESIMS iyon piklerine dayanarak C42H66O16 olarak belirlenmiştir. [MeH] - (C42H65O16 825.4278 için hesaplanmıştır). 2'nin asit hidrolizi de D-galaktoz ve D-glukuronik asit olarak tanımlanan şekerlerin bir karışımını verdi. 1 2 aglikonu için H ve 13C spektroskopik verileri (Tablo 1 ve 2), 1 ile aynı sinyalleri
3-O-b-D-glikozun kimyasal kaymalarında küçük bir değişiklik, 3-O-b-D-galaktozun kimyasal kaymalarına uymaktadır. Bu nedenle, bileşik 2, 1 glikosidik bir izomer olarak açıklandı, 3b, 16b, 28-trihidroksolean-12-en-29-oik asit 3-O-b-D-galaktopiranosil (1/3) -O-b-D-glukuronopiranosid. Bileşik 13, a25 ile amorf bir toz halinde elde edildi.
D -17.60 (c0.2, MeOH) ve C36H56O11'in moleküler formülü, m / z 663.3778 [MeH] 'de HRESIMS iyon zirveleri ile belirlendi - (hesaplanan C36H55O11 663.3750 için). 13C NMR verilerinin karşılaştırılması bileşik 13 ile gymnemik asit A'nm bileşikleri (Wang vd., 2004) bileşik 13'te dC 43.1 olan ancak rapor edildiği bildirilen C-20 rezonansı dışında benzer kimyasal kaymalar ortaya çıkarmıştır. Gymnemik asit A'da dC 28.5 (Tablo S2, Ek veriler). için 13 yapısını teyit, bir HMBC deneyi yaptık ve H-30 (3H, s, dH 1.59), H-19'dan açıkça tanımlanmış korelasyonlar (dH 1.82, 1.71) ve H-21 (dH 2.52, 1.93) ila C-20 (dC 43.1). Çünkü Bileşik 13'ün C-20'sindeki NMR kimyasal kayması, bileşik 1 ve ezoukoginosid A (Ge ve diğ., 2016), NMR verileri gymnemik asit A'nın bileşiği, bileşik 13'teki revize edildi (Tablo S2, Ek veriler). Amorf bir toz halinde Gymnemoside ND3 (3) elde edildi a25 ile D -5.90 (c0.2, MeOH). C42H68O15'in moleküler formülü m / z'de bir kuimimoleküler iyon piki ile belirlendi 811.4521 [MeH] - (C42H67O15 811.4485 için hesaplanan) HRESIMS içinde. 1 H, 13C ve
Aglikon için HSQC NMR spektroskopik verileri (Tablo 1 ve 2) yedi metil grubu, bir olefinik grup ve dörtoksijenli karbonlar. Bu NMR verileri aynı değerleri paylaştı. Sitakisogenin (Yoshikawa ve diğerleri, 1994) ve Me-29, 30 (her biri 3H, s, dH 1.25) ila C-19 (dC 47.9), C-20 (dC) arasındaki HMBC korelasyonları
37.1) ve C-21 (dC 73.1) hidroksi grubu ikamesini doğruladı C-21'de. C-3'ün glikosilasyon kimyasal kayması (dC 89.4, -10.9 ppm) sitakisogenin (Yoshikawa) ile karşılaştırılarak elde edilmiştir.et al., 1994) ve Glu-H100 dH 5.36 (d,J ¼ 7,7 Hz) ila GluA-C30 (dC 87,6), Glu-H10 dH 4,95 (d, J ¼ 7,5 Hz) ila C-3 (dC 89.4) şeker kısmının yapısını ve bağlantısını doğruladı. Tüm bu verilere dayanarak, bileşik 3 aşağıdaki gibi açıklandı. Sitakizogenin 3-O-b-D-glukopiranosil (1/3) -O-b-Dglucuronopiranosid. Amorf olarak elde edilen Gymnemoside ND4 (4) a25 ile toz D -8.70 (c 0.2, MeOH), moleküler bir formüle sahiptir m / z'de HRESIMS iyon zirveleri yoluyla belirlendiği gibi C42H68O13'ün 779.4625 [MeH] - (C42H67O13 için hesaplanan 779.4582). 1 'H-NMR 4 spektrumu sekiz tersiyer metil grubu ve 12 oksimetin protonu gösterdi. 13C NMR spektrumundaki sinyaller (Tablo 1) HSQC analiz sonuçları ile birleştirildiğinde sekiz kuaterner karbon (dC 172.5'te bir karboksilik asit ve bir dC 145.3'te olefinik), 17 üçüncül karbon (12 oksijenli metin) ve dC 122.6'da bir olefinik karbon, 10 ikincil karbon (bir
dC 64.8'de oksijenli metilen) ve sekiz metil karbonu içerir. Bunlar NMR rezonansları, NOESY deneyinin sonuçları ile birlikte (Şekil 3), 4'ün, aşağıdakilere bağlı olarak bir maniladiol aglikonuna sahip olduğunu ileri sürdü. C12-C13'te bir çift bağın varlığı, bir oleane iskeleti ve bir b-sübstitüe edilmiş hidroksil grubu
C-16 (dC 64.8, dH 4.57) (Quijano ve diğerleri, 1998). Karbon sinyalleri 4'ün şeker kısımları nedeniyle elde edilenler de üst üste bindirilebilirdi. Glikozit bileşiminin ve bağlantı düzeni aynıydı. Bu nedenle bileşik 4, 3b, 16b-dihidroksolean-12-en-3-O-b-D-glukopiranosil (1/3) -O-b-D-glukuronopiranosit olarak elüe edildi. Amorf bir toz halinde Gymnemoside ND5 (5) elde edildi a25 ile D -22.30 (c 0.2, MeOH) ve moleküler formüle sahiptir. m / z'de HRESIMS iyon zirveleri ile belirlendiği üzere C42H68O15'in 811.4526 [M-H] - (C42H67O15 için hesaplanan 811.4485). 1 H, 13C ve HSQC Aglikon için NMR spektroskopik veriler (Tablo 1 ve 2) ortaya çıktı altı metil grubu ve C12-13'te bir olefinik bağ için sinyaller. Sinyaller dört oksijenli karbondan dC 67.2, 69.0, 82.0 ve 89.2 ve dört hidroksil sübstitüsyonunun pozitif kütle fragmantasyonu tespit edildi. Bu NMR rezonansları bir NOESY deneyinin sonuçları (Şekil 3) aglikonun Şekil 5, gymnemagenol, özellikle 3b, 16b, 28,29 tetrahidroksolean12-en'dir (Ye ve diğerleri, 2001a). Pozitif modda LC-MS deneyi 1 ile benzer kütle fragman desenleri gösterdi ve iniş alanı C-3 kayması (dC 89.2, μ11.0 ppm) ve C-29 (dC 82.0, þ8 ppm) gymnemagenol verileri ile karşılaştırıldığında iki şeker önerdi C-3 ve C-29'da ana aglikona bağlı kısımlar. NMR sakarit kısmı için veriler, bu iki şekerden birinin longispinogenin 3-O-b-D-glukuronopiranositin C-3'teki glukuronik asit ikamesi ile özdeşti (Ye ve ark., 2000). İkinci glikozun aglikon gymnemagenole bağlanması C-29, H-lʹʹ dH 4.84 (d, J = 7.8 Hz) ila C-29 dC 82.0 ve H-30 dH'den NOESY korelasyonu 1.21 (3H, s) ila H-18 dH 2.44 (dd, J = 13.7, 3.9 Hz). Dolayısıyla bileşik 5

H.T.T. Pham ve diğ. Fitokimya 150 (2018) 12e22

tablo 1
13e NMR yeni bileşiklerin 1e9 spektroskopik verileri (C5D5N)

Tarafından ölçüldü:
bir NMR-125 MHz'dir. b NMR-150 MHz.
c NMR-200 MHz. d28-O-benzoil ikamesi: Bz-1 (dC167.3, C), Bz-2 (dC131.7, C), Bz-3,7 (dC130.2, CH), Bz-4,6 (dC129 .5, CH), Bz-5 (dC133.8, CH)

29-O- (b-D-glukopiranosil) gymnemagenol 3-O-bD-glukuronopiranosid olarak çıkarıldı. Amorf bir toz halinde Gymnemoside ND6 (6) elde edildi a25 ile
D -15.70 (c0.2, MeOH). C36H58O10'un moleküler formülü m / z 649.3967 [MeH] 'de HRESIMS iyon zirveleri ile belirlendi [MeH] - (hesaplanan 649.3957). 1
6 için H ve 13C NMR spektroskopik veriler (Tablo 1 ve 2), 3'dekine benzer rezonansların yanı sıra ekranlı glikoz ünitesinin rezonans eksikliği GluA-C3p'nin kimyasal kayması. Buna göre bileşik 6, sitakizogenin 3-O-b-D-glukuronopiranosit olarak açıklandı. Amorf olarak elde edilen Gymnemoside ND7 (7)
a25 ile toz D -12.40'ın (c 0.2, MeOH), m / z'de HRESIMS iyon piklerine dayanan C36H58O10'un moleküler formülü 649.3985 [MeH] - (hesaplanan 649.3957). LC-MS deneyleri 176 Da kaybı gösteren pozitif mod ve üst üste bindirilebilen şeker kısmı için 13C-NMR verileri bileşik 6 ile, bir glukuronik asit varlığını ortaya çıkardı C-3'te ikame. 1 7 için H ve 13C NMR spektroskopik veriler (Tablo 1 ve 2) 5'dekine benzer rezonanslar ve eksiklik gösterdi. bir kimyasal ile gösterildiği gibi, bir glikoz ünitesinin rezonans oranı C-29 kayması (dC 74.3, 7.7 ppm). Buna göre bileşik 7, gymnemagenol-3-O-b-D-glukuronopiranosid olarak tanımlandı. Amorf toz halinde elde edilen Gymnemoside ND8 (8) Ra25'tir D -2.40 (c 0.2, MeOH), aşağıdaki moleküler formüle sahiptir:
HRESIMS iyon pikleri m / z 769.4210'da gösterildiği gibi C43H62O12 [MeH] - (hesaplanan 769.4169). HPLC-MS pozitif modda sonuç verir. 613'te [Me2 H2Oe122 þ H] þ ve 437'de [Me2 H2O122e176 H H] þ ve 8'in asit hidrolizi varlığını önerdi. glukuronik asit ve benzoil sübstitüsyonları. 1 H, 13C ve HSQC NMR
aglikon için spektroskopik veriler (Tablo 1 ve 2) altı metil grupları, bir olefinik grup ve beş oksijenli karbon (dC 60.1, 63.8, 66.9, 73.9 ve 89.4). Ekvatoral uyumu
OH-22, kimyasal kayma ile karşılaştırma yoluyla tanımlanmıştır. X alternosidinin C-22'si (Yoshikawa ve ark., 1998) ve açık NOESY H-22b (dH 4.98) ve H-18b (dH 3.06) arasındaki çapraz zirveler. Bunlar NMR rezonansları 8'in aglikonunu 3b, 16b, 28,22a, 29 olarak tanımladı pentahydroxyolean-12-en. Şekerden kaynaklanan karbon sinyalleri grup glukuronik olan 6'lı grupların üzerine bindirilebilirdi. C-3'te asit (dC 89.4). Benzoil grubunun triterpen iskeleti üzerindeki yeri, arasındaki HMBC korelasyonları ile çıkarılmıştır.

H.T.T. Pham ve diğ. Fitokimya 150 (2018) 12e22

Tablo 2
1
1e9 bileşiklerinin H NMR spektroskopik verileri (C5D5N).

Tarafından ölçüldü:
bir NMR-500 MHz'dir. b NMR-600 MHz.
c NMR-800 MHz. d 28-O-benzoil ikamesi: Bz-3,7 [her 1H, dH 8.27, (d, J ¼ 7.5 Hz)], Bz-4,6 [her 1H, dH 7.43, (t, J ¼ 7.5 Hz) ], Bz-5 [lH, dH 7.51, (t, J ^ 7.5 Hz)].

H-28 [dH 5.44, d, J = 10.5 Hz]; dH 4.96, d, J ¼ 10.5 Hz] ve Bz-C-1ʹʹ (dC 167.3). Bu bulgular 8'in 28-benzoil22a-hidroksigymnemagenol-3-O-b-D- lukuronopiranosid olarak atanmasına yol açmıştır. Amorf olarak elde edilen Gymnemoside ND9 (9) a25 ile toz D -22.50 (c 0.2, MeOH), aşağıdaki moleküler formüle sahiptir:
HRESIMS iyon pikleri m / z 661.3616'da belirlendiği gibi C36H54O11
[MeH] - (C36H53O11 661.3593 için hesaplanmıştır). HPLC-MS deneyi pozitif mod ve şeker için 13C-NMR verileri ile sonuçlanır kısmı bileşik 6'nın üstlerine bindirilebilirdi. C-3'teki glukuronik asit oranı, anomerik proton sinyalleri ile teyit edildi. [dH 5.04, (d, J ¼ 7.7 Hz)] ve C-3'ün aşağı alan kayması (dC 89.2).
geri kalan 30 karbon sinyali bir olean-12-ene'ye atandı. altı singlet metil protonuna dayanan bir aglikon olarak iskelet, tipik olefinik karbon sinyalleri ve bir karboksilik ile birlikte karbon. Karboksilik maddesinin bir g-lakton halkası oluşturması bekleniyordu. hidroksil grubu doymamışlık derecesini ve esterlenmiş bir proton sinyalinin varlığı [dH 5.46, 1H, d (J-5.5 Hz)]. Yapı COZY, HSQC ve HMBC ile tamamen aydınlatıldı spektrumları. H-30'dan metil protonların HMBC korelasyonları (dH 1.27, 3H, s) ila C-19 (dC 40.2), C-20 (dC 39.8), C-21 (dC 35.7) ve C

Şekil 3. 1
H1
H COZY (), HMBC () ve NOESY () korelasyonları, yeni bileşikler 1e9'un temsili iskeletleri olarak gösterilmektedir. A1: myrtillogenik asit; A2: gymnemagenol, A3: maniladiol ve A4: 3b, 16b, 28-trihidroksolean-12-en-29,22b-olid.

29 (dC 183.4), esterleştirilmiş metin proton H-22'den [dH 5.43, 1H, d (J = 5.5 Hz)] ila C-18 (dC 40.4), C-28 (dC 64.1) ve C-29 (dC 183.4), ve karbinol proton H-28'den (dH 4.45 ve 3.80) C-16'ya (dC) 66.7) ve C-22 (dC 79.6), bir aglikonun yapısını ortaya çıkardı. Şekil 3-A4'te gösterilmiştir. Ayrıca, H-18b [dH arasında NOE korelasyonları 2,84 (İH, dd, J ¼ 12,5, 8,9 Hz)], H-28b [dH 4,45 (İH, d, J ¼ 10,5 Hz)] ve H-22 [dH 5.46 (1H, d, J ¼ 5.5 Hz)] stereokimyayı önerdi
Şekil 3, A4'te gösterilmiştir. Böylece bileşik 9, 3-O-bD-glukuronopiranosil-3b, 16b, 28-trihidroksolean-12-en-29,22bolit olarak çıkarıldı.
NMR, MS ve optik rotasyon verilerine ve literatür değerleri ile karşılaştırmaya dayanarak, bilinen bileşikler 29-hidroksilongispinojenenin 3-O-Dglukopiranosil (1/3) -D-glukuronopiranosid (10) (Ye ve ark., 2001a), longispinogenin 3-O-D-glukopiranosil (1/3) -D-glukuronopiranosid (11) (Ye ve diğerleri, 2001a), alternosit XII (12) (Yoshikawa ve diğerleri, 1999) ve gymnemic asit A (13) (Wang ve diğerleri, 2004). Özellikle, bileşik 13 için NMR verileri revize edildi yayınlanmış orijinal makaleden ve bileşik 11 ve 12 potasyumun aksine ilk kez serbest formda bulundu. 'da toplanan aynı bitki için rapor edilen tuz formu (MK) Çin'in Guangxi Özerk Bölgesi (Ye ve diğerleri, 2001a). HRMS 13 izole edilmiş bileşiğin kimyasal profilleri, Şekil S8. 2.4. 3T3-L1'de izole bileşiklerin glikoz alımına etkileri adiposit hücreleri Bileşik 2-NBDG yaygın olarak floresan glikoz analoğudur hücreler tarafından glikoz alımını izlemek için kullanılır ve yararlı
insülin taklit bileşiklerini keşfetmek için reaktif (Lee ve diğ., 2013). Burada, bileşiklerin uyarıcı etkilerini inceledik.
1e13, 2-NBDG'nin 3T3-L1 adiposit hücreleri tarafından bir in vitro analiz (2-NBDG analizi) (Nguyen ve ark., 2017). 3T3-L1 fibroblastları, adipositlere farklılaşmaları için uyarıldı. İzole bileşikler, 4, 11 bileşikleri ve 2-NBDG ile farklılaştırılmış 3T3-L1 adipositlerine 20 mM'de ilave edildi ve
5 ve 10 mM konsantrasyonlarında gözlemlenen doz bağımlı sitotoksisiteleri nedeniyle 2 mM'de eklenmiştir (Şekil S64, Yardımcı veriler). DMSO ve insülin (0.1 mM) bu tahlilde sırasıyla negatif ve pozitif kontroller. Şekil 4A'da gösterildiği gibi bileşikler 5e10, 2-NBDG'yi önemli ölçüde arttırdı 20 mM'de alım (p <0.05). Tüm izolatların yapısal aktivite ilişkilerinin (SAR) detaylı bir analizi, 3-b-glukuronil oleanan tipi parça glikoz alımı üzerinde uyarıcı etkiler gösterebilir (bileşik 5e9). Bununla birlikte, glikosilasyon aglikon veya glukuronik asitin aktiviteleri açıkça azalttığı, özellikle glukoz glukuronik asidin C-30'una eklendiğinde
(7> 5> 10). Ek olarak, alkol fonksiyonel oksidasyonu C-29'daki bir karboksilik aside olan grup, aktiviteyi önemli ölçüde azalttı (7> 13) ve bu karboksilik grubun esterleştirilmesi, aktivite (9> 13). İnsülin ile karşılaştırıldığında, bileşikler 7e9 en fazla güçlü uyarıcı aktiviteler (p <0.01). Daha fazla araştırma bileşik 7e9'un glikoz alımı üzerindeki aktivitelerinin doza bağlıydı (Şekil 4B). 2-NBDG'nin hücrelere nakil etkinliğini doğrulamak için, ayrıca floresan ölçtük floresan mikroskopisi ile bileşik işleminden sonra adipositlerde sinyaller (Şekil 4C ve Şekil S65 - Ek veriler). Gibi beklenen, bileşik 7e9 (10 mM konsantrasyonda) üretildi adipositlerde daha yüksek yoğunluklu floresan sinyalleri ile karşılaştırıldığında kontrol grubu (DMSO ile muamele edilmiş) ve bu floresans yoğunluklar, insülin tedavisi (0.1 mM) ile elde edilenler kadar yüksekti.

H.T.T. Pham ve diğ. Fitokimya 150 (2018) 12e22

Şekil 4. Bileşik 1e13'ün, floresan glikoz türevi, 2-NBDG kullanılarak 3T3-L1 adipositleri tarafından glikoz alımı üzerindeki etkileri. (A) Tüm izole edilmiş bileşikler hücrelere uygulandı. 20 veya 2 mM'de ve insülin (100 nM) pozitif kontrol olarak kullanıldı. 2-NBDG içeren veya içermeyen 1 saatlik inkübasyondan sonra, floresan sinyal yoğunlukları Ex / Em-450 / 535 nm. Veriler, sadece DMSO tedavi grubuna kıyasla ortalama ± SDs (n ¼ 3), * p <0.05 ve ** p <0.01 olarak hesaplandı. (B) Farklılaştırılmış 3T3-L1 adipositleri 1 saat boyunca çeşitli konsantrasyonlarda (5, 10 ve 20 mM) bileşik 7e9'a maruz bırakıldı. Yeşil flüoresan sinyaller ölçülmüş ve ortalama ± SD'ler (n <3) olarak ifade edilmiştir; * p <0.05, ** araç grubuna kıyasla p <0.01 ve *** p <0.001. (C) Farklılaştırılmış 3T3-L1 adipositleri ile glikoz alımının arttırılması, birkaç bileşikte, Floresan mikroskopisi ile gösterildiği gibi 20 mM veya insülin (100 nM). Hücrelerdeki yeşil floresan önemli ölçüde arttı, bu da 2-NBDG'nin bu hücreler.

3. Sonuçlar

Morfolojik ve anatomik dahil entegre yaklaşımlar karşılaştırmalar, ITS bölgesinin dizi analizi ve kimyasal Soruşturma, farklı coğrafi bölgelerden kaynaklanan Gymnema sylvestre'ın en az iki çeşit (Hint ve Vietnam kökenli). Aglycones izolatlar C-4 değerli taş dimetile olenan türü olarak tanımlandı.

Myrtillogenik asit, chichipegenin, sitakisogenin, maniladiol, gymnemagenol ve 3b, 16b, 28-trihidroksolean12-en-29,22b-olid dahil triterpenler. Bu aglikonların bazıları, Çin çeşidi (Ye ve ark., 2001b) ve bunların hiçbiri Hint kökenli bitkilerde tespit edilir. Ayrıca, izolatların hiçbiri omurga olarak gymnemagenin veya gymnestrogenin özellikli, Hint kökenli izolatların aksine (Di Fabio ve diğerleri, 2015; Fabio ve diğerleri, 2014). G. sylvestre'ın çoğu biyoaktivite çalışması Hintlileri tipi ve bu çalışma uyarıcı ilk gösterimi sağlar G. sylvestre'den saflaştırılmış bileşiklerin etkileri 3T3-L1 adiposit hücreleri tarafından 2-NBDG alımında çeşitlilik. Sonuçları Bu çalışma, Vietnam'dan G. sylvestre çeşitliliğinin aynı zamanda glikoz tedavisi için umut verici bir bitkisel ilaçtır. İnsülin-mimetik etkisi olan metabolizma bozuklukları.

4. Deneysel bölüm
4.1. Bitki materyali

Hindistan menşeli iki G. sylvestre çeşidinin örnekleri (GS-I) ve Vietnam (GS-V1 ve GS-V2) aynı koşullar iki DSÖ İyi Tarım-Uygulama (GAP) - Nam Dinh sertifikalı çiftlikler (2090) 26.200N 106190 06.300E) ve Tay dili Nguyen eyaletleri (21 520 47.500N 105440 35.700E). Hepsi örnekleri Eylül 2016'da toplanmıştır. Kupon örnekleri GS-I, GS-V1 ve GS-V2 Tıbbi Herbaryumda biriktirildi.
Hanoi Eczacılık Üniversitesi'nin sırasıyla HNIP2016.05, HNIP-2016.06 ve HNIP-2016.07 erişim numaraları ile. Guangxi, Çin (GS-C) kaynaklı G. sylvestre'nin ticari örnekleri, Haziran 2017'de satın alındı ve hidrolizde kullanıldı

Deney.
4.2. Morfolojik ve anatomik analizler
Analiz etmek için bir EZ4 Stereo Mikroskop (Leica, Almanya) kullanıldı. G. sylvestre (Retz.) R.Br.'nin özellikleri eski Sm. (Asclepiadaceae), yaşam formu, gövde, yapraklar, çiçekler, meyveler ve tohumlar dahil. Fotoğraflar Canon SD4500IS veya Canon EOS ile çekildi 60D Canon Canon 100 mm f2.8 IS Macro (Canon Inc., Japonya). İçin anatomik analiz, taze olgun sapların ve yaprakların kesitleri döner bir mikrotom kullanılarak hazırlandı ve çift boyandı
metilen mavisi ve karmin kırmızısı ile. Işık mikroskobu Bir Canon'a bağlı MBL200 (A.Krüss Optronic, Almanya) Sonuçları görselleştirmek için SD4500IS (Canon Inc., Japonya) kullanılmıştır.

4.3. ITS1-5.8S-ITS2 dizi analizi
Toplam DNA kullanılarak 200 mg taze bitki yapraklarından ekstrakte edildi. bazı değişikliklere sahip bir DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN, Almanya). Dahili kopyalanan aralayıcı sekans, ileri astar ITS5 (50 -GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-30) ve ters astar ITS4 (50- TCCTCCGCTTATTGATATGC-30), birlikte verilir bir Mastercycler pro S kullanarak Bioneer Corporation (Kore) tarafından (Eppendorf AG., Almanya). PCR ürünleri, bir Thermo Fisher (ABD) saflaştırma kiti ve sekanslama Macrogen Inc. (Seul, Kore) tarafından yürütülmektedir. DNA dizileri Temel Yerel Hizalama Araştırması kullanılarak GenBank'ta (Ulusal Sağlık Enstitüleri) bulunan yayınlanmış sekanslarla karşılaştırıldı. Tool (Blast) (Altschul ve diğerleri, 1990). Kopyalanan dahili ara parçayı hizalamak için Geneious kullanıldı. Gymnema sylvestre'nin iki örneğinin (ITS1-5.8S-ITS2) dizileri Vietnam'ın farklı bölgelerinden toplanan (G. sylvestre V1 ve V2),
Vietnam'da yerli bir Hint kökenli örnek (GS-I) ve 18 Beş türün ITS dizileri, G. sylvestre, G. latifolium, G. inodorum, G. yunnanense ve Marsdenia tenacissima (bir dış grup olarak), bir Blast analizi ile elde edilmiştir. Detaylı bilgi analiz örnekleri ve hizalamaları Tablo S2'de verilmiştir ve Şekil S5 (Ek veriler). Son olarak, Ciddi DNA sekanslama analiz yazılımı (sürüm 8.1.8, Biomatters Ltd., Yeni Zelanda) komşu bir filogenetik ağaç oluşturmak için kullanılır % 75'in üzerinde yeniden örnekleme bootstrap değerleri (yüzde olarak ifade edilir) 1000 replikat) (Kearse ve diğerleri, 2012). 4.4. 3b-glukuronid oleane-triterpenlerin ekstraksiyonu ve izolasyonu.

4.4.1. Genel deneysel prosedürler

Optik rotasyon bir JASCO P-2000 polarimetre üzerinde ölçüldü (JASCO International Co. Ltd., Tokyo, Japonya). IR verileri kaydedildi Nicolet 6700 FT-IR spektrometresinde (Thermo Electron Corp., Waltham, MA, ABD). NMR verileri bir AVANCE kullanılarak analiz edildi. 500 MHz spektrometre (Bruker, Almanya), JNM-ECA 600-MHz spektrometre (Jeol, Japonya) veya AVANCE III 800 HD spektrometre 5 mm CPTCI kriyoprob ile birleştirilmiştir (Bruker, Almanya). HRESIMS değerleri Agilent Technologies kullanılarak belirlendi. Bir Agilent ile donatılmış 6130 Quadrupole LC / MS spektrometre Technologies 1260 Infinity LC sistemi (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, ABD) ve INNO C18 sütunu (4.6 150 mm, parçacık 5 mm boyut, 12 nm, J.K. Shah & Company, Kore). Silika jel (parçacık boyut: 63e200 mm) ve RP-C18 (parçacık boyutu 40e63 mm), Merck'ten (Darmstadt, Almanya) ve Sephadex'ten satın alındı CC için Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) LH-20 kullanılmıştır. Silika jel 60 F254 ve RP-18 F254 TLC plakaları, Merck (Darmstadt, Almanya). Bir Gilson HPLC arıtma sistemi Optima Pak C18 kolonu (10 250 mm, parçacık 10 mm ebadında; RS Tech, Seoul, Korea) akış hızı ile kullanılmıştır. 2 mL / dakika ve 205 ve 254 nm'de UV saptaması yapıldı. 4.4.2. Ekstraksiyon ve izolasyon işlemi Vietnam G. sylvestre çeşidinin hava parçaları (10 kg) toz haline getirildi,% 60 EtOH ile sonike edildi ve süzüldü ve çözücü vakum altında buharlaştırıldı. Ham ekstrakt (1 kg) % 30 EtOH içerisinde süspanse edildi, Diaion HP20 makro gözenekli. reçine ile yıkandı ve% 30 EtOH,% 50 EtOH,% 95 EtOH ile yıkandı ve ardışık elüsyon işlemiyle aseton. % 95 EtOH fraksiyonu (300 g) silika jel kolon kromatografisine tabi tutuldu. N-heksan / EtOAc kullanarak (15 45 cm; 63e200 mm parçacık boyutu) (10: 1 ila 0: 1 arasında gradyan) ve daha sonra EtOAc / MeOH (6: 1 ila 0: 1) ince katmana dayalı sekiz fraksiyon (A-G) elde etmek için kromatografi profili. Fraksiyonu, reversedphase silika jel kolon kromatografisi ile ayrıldı ve MeOH / 10 alt fraksiyon (FI-FX) elde etmek için H20 (h / h, 2: 3 ila 1: 0). Subfraksiyon FII (10.0 g), silika jel CC ile yeniden kromatografiye tabi tutuldu. (5 20 cm; parçacık boyutu 40e63 mm) ve CH2Cl2 / Üç alt fraksiyon elde etmek için MeOH (h / h, 6: 1 ila 0: 1 arasında gradyan),
FII.N1 ila FII.N3. FII.N2 fraksiyonu sırasıyla Sephadex LH-20 (MeOH) ve HPLC (Optima Pak C18, MeCN / H2O (v /v, 3: 7), bileşik 1 (22.5 mg), 2 verecek şekilde 2 mL / dakika akış hızı (4.7 mg) ve 13 (45.0 mg). Kesir FII.N3, ters fazlı silika jel kromatografik kolon Dört alt fraksiyon vermek için MeCN / H20 (v / v, 1: 5 ila 1: 0) (FII.N3.R1-4). Subfraksiyon F.II.N3.R1, HPLC (Optima) ile saflaştırıldı. Pak C18, MeCN / H2O (v / v, 3: 7), 2 mL / dakika akış hızı) bileşikler 3 (12.0 mg) ve 10 (18.1 mg). Alt fraksiyon F.II.N3.R3, HPLC (Optima Pak C18, MeCN / H2O (h / h, 8:25), akış hızı ile saflaştırıldı. 5 mL (7.9 mg) ve 6 (14.0 mg) verecek şekilde 2 mL / dakika) ilave edildi. Sephadex LH-20'ye art arda Fraksiyon F.II.N3.R4 uygulandı. (MeOH) ve HPLC (Optima Pak C18, MeCN / H2O (h / h, 7:20), akış 7 (5.5 mg) ve 9 bileşiklerini vermek üzere 2 mL / dakika kolonların hızı (5.1 mg). Fraksiyon FV, ters fazlı silika jel kolon kromatografisiyle kromatografiye tabi tutuldu ve MeCN / H20 (h / h, 2: 5 ila 1: 0) arasında, 10 alt fraksiyon (FV.R1-R10) elde edilir. subfraksiyon FV.R10, HPLC (Optima Pak C18, MeCN / H20 (h / h, 2: 5), akış hızı 2 mL / dakika) verecek şekilde bileşik 12 (9.1 mg) elde edildi. kesir Sephadex LH-20'ye (MeOH) art arda F.V. R6 uygulandı ve HPLC (Optima Pak C18, MeCN / H2O (h / h, 7:20), 2 mL / dk akış hızı) 8 (6.1 mg) ve 11 (17.0 mg) bileşiklerini vermek üzere kolonlar. Bileşik 4 (5.0 mg) HPLC (Optima) ile fraksiyon FX'den saflaştırıldı Pak C18, MeCN / H20 (h / h, 3: 5), 2 mL / dk akış hızı).

4.4.3. Daha önce tarif edilmemiş bileşiklerin karakteristik verileri

1E9 4.4.3.1. Gymnemosid ND1 (1). Amorf toz; Ra25'tir D -24,50 (c0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.09) nm, IRnmax: 3399, 2943, 1706, 1371, 1051, 1030 cm 1 . 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 825.4315 [MEH] - (C42H65O16 için hesaplanan, 825,4278).
4.4.3.2. Gymnemosid ND2 (2). Amorf toz; Ra25'tir D -23.30 (c 0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.01) nm, IRnmax: 3416, 2920, 1728, 1441, 1084, 1021 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 825.4297 [MEH] - (C42H65O16 için hesaplanan, 825,4278).
4.4.3.3. Gymnemoside ND3 (3). Amorf toz; Ra25'tir D -5.90 (c 0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.01) nm, IRnmax: 3374, 2932, 1712, 1367, 1081, 1023 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 811.4521 [MEH] - (C42H67O15 için hesaplanan, 811,4485).
4.4.3.4. Gymnemoside ND4 (4). Amorf toz; Ra25'tir D -8,70 (c 0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.17) nm, IRnmax: 3399, 2926, 1720, 1459, 1352, 1164, 1083, 1022 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 'H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 779.4625 [MEH] - (C42H67O13 için hesaplanan, 779,4582).
4.4.3.5. Gymnemosid ND5 (5). Amorf toz; Ra25'tir D -22.30 (c0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.12) nm, IRnmax: 3389, 2913, 1731, 1435, 1085, 1025 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 811.4526 [MEH] - (C42H67O15 için hesaplanan, 811,4485).
4.4.3.6. Gymnemosid ND6 (6). Amorf toz; Ra25'tir D -15,70 (c0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.10) nm, IRnmax: 3399, 2926, 1720, 1455, 1083, 1032 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 649.3967 [MEH] - (C36H57O10 için hesaplanan, 649,3957).
4.4.3.7. Gymnemoside ND7 (7). Amorf toz; Ra25'tir D -12.40 (c0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.05) nm, IRnmax: 3409, 2946, 1736, 1465, 1362, 1067, 1032 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 649.3985 [MEH] - (C36H57O10 için hesaplanan, 649,3957).
4.4.3.8. Gymnemoside ND8 (8). Amorf toz; Ra25'tir D -2.40 (c 0.2, MeOH); UV (MeOH) 1max (log ε) 200 (3.18), 230 (2.67) nm, IRnmax: 3374, 2933, 1716, 1446, 1380, 1095, 1020 cm 1 ; 13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 769.4210 [M eH] - (hesaplanan: C43H61O12, 769.4169).
4.4.3.9. Gymnemoside ND9 (9). Amorf toz; Ra25'tir D -22,50 (c 0.2, MeOH); UV (MeOH) lmax (log ε) 200 (3.15), IRnmax: 3414, 2953, 1706, 1350, 1051, 1005 cm 1;
13C NMR Tablo 1; 1 H NMR Tablo 2; HRESIMS m / z 661.3616 [MEH] - (C36H53O11, 661.3593 için hesaplanmıştır).

4.5. Asit hidrolizi

Asit hidrolizi gerçekleştirmek için 2 mg bileşik 1 veya 2 ilave edildi. % 60 etanol içinde 1 mL 5 M HC1'e karıştırıldı ve karışım, 90 ° C için 24 saat. Hidroliz çözeltileri etil ile ekstre edildi. asetat ve sulu asit çözeltisi buharlaştırılarak monosakkarit kalıntısı. Monosakkaritler tanımlandı. 1'de glikoz ve glukuronik asit ve galaktoz ve glukuronik olarak TLC ile otantik numuneler ile karşılaştırıldığında 2 asit MeCOEt: izo-PrOH: aseton: H20 (20: 10: 7: 6); saptama% 20 H2SO4 ve ısıtma ile gerçekleştirildi. Optik dönüş F fraksiyonunun hidroliz ürününden izole edilmiş saflaştırılmış şekerler şekerin D-glukoz, D-galaktoz ve D-glukuronik asit olduğunu ortaya çıkardı.

4.6. 3T3-L1 adipositlerinin farklılaşması

3T3-L1 fibroblastları 3T3-L1 adipositlerine farklılaştırıldı % 10 fetal sığır serumu içeren DMEM (HyClone, UT, ABD) kullanarak (FBS) (HyClone, UT, ABD), 1 mM deksametazon (Sigma, MO, ABD), 520 mM 3-izobütil-1-metil-ksantin (Sigma, MO, ABD) ve 1 mg / mL insülin (Roche, Almanya). Hücreler sürekli inkübe edildi % 10 FBS, 1 mg / mL insülin, 100 ile desteklenmiş taze DMEM ile U / mL penisilin ve 100 mg / mL streptomisin (Gibco, NY, ABD). taze ortam dört ila altı gün boyunca iki günde bir değiştirilir. adipogenezin indüksiyonu.

4.7. Sitotoksisite deneyi

3T3-L1 adipositleri, 96 oyuklu plakalar üzerine tohumlandı. DMEM% 10 FBS ile desteklendi ve bir gün boyunca inkübe edildi. Hücreler daha sonra serumsuz içinde çözülen bileşiklere maruz bırakıldı. 24 saat boyunca ortam. Daha sonra sitotoksisite deneyleri yapıldı. (3- (4,5-dimetil-2-tiazolil) -2,5-difenil-2H-tetrazolium kullanılarak bromür (MTT) (Sigma, MO, ABD). Her oyukta, 20 mL 2 mg / mL MTT çözeltisi ilave edildi ve karanlıkta 37 ° C'de 4 saat süreyle inkübe edildi. Süpernatantı çıkardıktan sonra formazan 100 mL DMSO ve absorbans, 550 nm'de ölçüldü. bir mikroplaka okuyucu (VersaMax ™, Radnor, PA, ABD).

4.8. Glikoz alım seviyelerinin ölçülmesi

Glikoz alım deneyleri, glikoz 2- [N- (7-nitrobenz-2-oksa-1,3-diazol-4-il) floresan türevi kullanılarak yapıldı amino] -2-deoksiglukoz (2-NBDG) (Invitrogen, OR, ABD) daha önce tarif edildiği gibi (Nguyen ve diğerleri, 2017; Yang ve diğerleri, 2017) hafifçe modifikasyonları. Kısaca 3T3-L1 adipositleri, 96-% 10 FBS ile desteklenmiş glukoz içermeyen ortamdaki oyuk plakaları. glikoz alım deneyi aşağıdaki gibi yapıldı: hücreler tedavi edildi. Test bileşikleri veya insülin ile pozitif kontrol olarak ve 2-NBDG ile veya 2-NBDG ile inkübe edilir. Kültürler inkübe edildi. 37 ° C'de ve% 5 C02'de 1 saat süreyle karıştırıldı ve hücreler soğuk suyla yıkandı fosfat tamponlu tuzlu su (PBS). Floresan sinyal yoğunluğu floresans mikroplaka okuyucu (Spectra Max GEMINI) ile sırasıyla 450/535 nm Ex / Em dalga boyları kullanılarak ölçüldü XPS, Molecular Devices, CA, ABD). Floresan görüntüler yakalamak için, 3T3-L1 adipositleri, sterilize edilmiş cam lameller kullanılarak glikoz içermeyen ortam ve deney prosedürleri yukarıda tarif edildiği gibi gerçekleştirildi. 1 saatlik inkübasyondan sonra, hücreler soğuk PBS ile yıkandı ve görüntüler floresan ile elde edildi mikroskopi (Olympus ix70 Floresan Mikroskop, Olympus Corporation, Tokyo, Japonya).

4.9. İstatistiksel analiz

Veriler üç bağımsız deneyin ortalama ± SD'leri olarak hesaplandı. Gruplar arasındaki farklar varyans analizi (ANOVA) ile belirlenmiştir. İstatistiksel anlamlılık
* p <0.05, ** p <0.01 ve *** p <0.001'de kabul edildi.
Çıkar çatışmaları
Yazarlar herhangi bir finansal çıkar beyan etmiyorlar.
Teşekkür
Bu çalışma mali açıdan kısmen
KBNMB (NRF-2017M3A9B8069409) ve Temel Bilimler
Kore Ulusal Araştırma Vakfı aracılığıyla Araştırma Programı (NRF-2017R1E1A1A01074674)
Bilim, Bilişim ve Planlama. Dr. Khuat'ı kabul etmek istiyoruz
Vietnam Tarımsal Genetik Enstitüsü'nden Huu Trung
DNA dizilimi ve analizinde destek.
Ek A. Tamamlayıcı veriler
Bu makaleyle ilgili tamamlayıcı verileri şu adreste bulabilirsiniz:
https://doi.org/10.1016/j.phytochem.2018.02.013.
Referanslar
Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W., Lipman, D.J., 1990. Temel yerel
hizalama arama aracı. J. Mol. Biol. 215, 403e410. https://doi.org/10.1016/S0022-
2836 (05) 80360-2.
Di Fabio, G., Romanucci, V., Di Marino, C., Pisanti, A., Zarrelli, A., 2015. Gymnema
sylvestre R. Br., bir Hint şifalı bitki: geleneksel kullanımlar, kimyasal bileşim ve biyolojik aktivite. Curr. Pharmaceut. Biotechnol. 16, 506e516.
Fabio, G.D., Romanucci, V., De Marco, A., Zarrelli, A., 2014. Triterpenoidler
Gymnema sylvestre ve farmakolojik aktiviteleri. Moleküller 19,
10956e10981. https://doi.org/10.3390/molecules190810956.
Frank, R.A., Mize, S.J.S., Kennedy, L.M., de los Santos, H.C., Green, S.J., 1992. Etkisi
Gymnema sylvestre özü sekiz tatlandırıcı tatlılık özler. Chem.
Duyu 17, 461e479. https://doi.org/10.1093/chemse/17.5.461.
Ge, Y.-W., Tohda, C., Zhu, S., He, Y.-M., Yoshimatsu, K., Komatsu, K., 2016. Etkileri
aksonal bir büyüme tahlilinde eleutherococcus senticosus yapraklarından oleanane tipi triterpen saponinler. J. Nat. Prod. 79, 1834e1841. https://doi.org/
10,1021 / acs.jnatprod.6b00329.
Gent, J.F., Hettinger, T.P., Frank, M.E., Marks, L.E., 1999. Aşağıdaki tat karışıklıkları
gymnemik asit durulaması. Chem. Duyu 24, 393e403.
Kashima, H., Eguchi, K., Miyamoto, K., Fujimoto, M., Endo, M.Y., Aso-Someya, N.,
Kobayashi, T., Hayashi, N., Fukuba, Y., 2017. Oral tatlı tadı bastırma
Gymnema sylvestre ile duyum, postprandiyal gastrointestinal kanı etkiler
insanlarda akış ve mide boşalması. Chem. Duyuları 42, 295e302. https: //
doi.org/10.1093/chemse/bjw126.
Kearse, M., Moir, R., Wilson, A., Stones-Havas, S., Cheung, M., Sturrock, S., Buxton, S.,
Cooper, A., Markowitz, S., Duran, C., Thierer, T., Ashton, B., Meintjes, P.,
Drummond, A., 2012. Geneious Basic: entegre ve genişletilebilir bir masaüstü
dizi verilerinin organizasyonu ve analizi için yazılım platformu. Biyoinformatik 28, 1647e1649. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/bts199.
Lee, J., Jung, D.-W., Kim, W.-H., Um, J.-I., Yim, S.-H., Oh, W.K., Williams, D.R., 2013.
Romanın keşfi için oldukça görsel, basit ve hızlı bir testin geliştirilmesi
canlı omurgalılarda insülin taklitleri. ACS Chem. Biol. 8, 1803e1814. https: //
doi.org/10.1021/cb4000162.
Nguyen, P.H., Choi, H.S., Ha, T.K.Q., Seo, J.Y., Yang, J.L., Jung, D.-W., Williams, D.R.,
Oh, W.K., 2017. Morinda longissima ve onların insülininden antrakinonlar
AMP ile aktifleştirilen protein kinaz (AMPK) aktivasyonu yoluyla taklit aktiviteler. Bioorg.
Med. Chem. Lett 27, 40e44. https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2016.11.034.
Pothuraju, R., Sharma, R.K., Chagalamarri, J., Jangra, S., Kumar Kavadi, P., 2014.
Obezite ve diyabet yönetiminde Gymnema sylvestre'ın sistematik bir derlemesi. J. Sci. Gıda Tarım 94, 834e840. https://doi.org/10.1002/jsfa.6458.
Quijano, L., Rios, T., Fronczek, F.R., Fischer, N.H., 1998.
manchadiol ___ 'dan BacchariS salicina1Dr Lydia Rodrıguez-Hahn anısına
(1932e1998) .1. Fitokimya 49, 2065e2068. https://doi.org/10.1016/S0031-
9422 (98) 00363-X.
Shobana, S., Kumari, S.R.U., Malleshi, N.G., Ali, S.Z., 2007. Pirincin glisemik yanıtı,
normoglisemik buğday ve parmak darı esaslı diyabetik gıda formülasyonları
konular. Int. J. Food Sci. Nutr. 58, 363e372. https://doi.org/10.1080/
09637480701252229.
Tiwari, P., Mishra, B.N., Sangwan, N.S., 2014. Fitokimyasal ve farmakolojik
Gymnema sylvestre'ın özellikleri: önemli bir tıbbi bitki. BioMed Arş.
Int. 2014 https://doi.org/10.1155/2014/830285, 830285e18.
Wang, Y., Feng, Y., Wang, X., Xu, H., 2004. Yeni bir izolasyon ve tanımlanması
Gymnema sylvestre bileşenidir. Batı Çin J. Pharm. Sci. 19, 336e338.
Warren, R.M., Pfaffmann, C., 1959. Potasyum ile tatlı duyarlılığın baskılanması
gymnemate. J. Appl. Physiol. 14, 40e42.
White, T.J., Bruns, T., Lee, S., Taylor, J., 1990. Amplifikasyon ve doğrudan sekanslama
filogenetik için fungal ribozomal rna genleri. In: PCR Protokolleri. Elsevier,
s. 315e322. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-372180-8.50042-1.
Wu, Z.Y., Raven, P.H., 1995 (Gentianaceae - Boraginaceae). Çin Florası, cilt.
16. Science Press, Pekin ve Missouri Botanik Bahçesi Yayınları, St. Louis.
Yang, J.L., Ha, T.K.Q., Lee, B.W., Kim, J., Oh, W.K., 2017. PTP1B inhibitörleri
AMPK ve ACC yoluyla Iris sanguinea tohumları ve insülin taklit faaliyetleri
fosforilasyon. Bioorg. Med. Chem. Lett. https://doi.org/10.1016/
j.bmcl.2017.09.031.
Ye, W., Liu, X., Zhang, Q., Che, C.T., Zhao, S., 2001a. Antisweet saponinler
Gymnema sylvestre. J. Nat. Prod. 64, 232e235.
Ye, W.-C., Liu, X., Zhao, S.-X., Che, C.-T., 2001b. Triterpenler ___ 'dan Gymnema sylvestre
Çin'de büyüyor. Biochem. SYSTEMAT. EcoL. 29, 1193e1195. https://doi.org/
10.1016 / S0305-1978 (01) 00.060-6.
Ye, W.-C., Zhang, Q.-W., Liu, X., Che, C.-T., Zhao, S.-X., 2000. Oleanane saponinleri
Gymnema sylvestre. Fitokimya 53, 893e899. https://doi.org/10.1016/
S0031-9422 (99) 00.483-5.
Yoshikawa, K., Ogata, H., Arihara, S., Chang, H.-C., Wang, J.-D., 1998. Antisweet
doğal ürünler. Xiii. Gymnema alternifolium'dan alternosid I-X'in yapıları. Chem. Pharm. Boğa. 46, 1102e1107. https://doi.org/10.1248/
cpb.46.1102.
Yoshikawa, K., Takahashi, K., Matsuchika, K., Arihara, S., Chang, H.-C., Wang, J.-D.,
1999. Antisweet doğal ürünler. Xiv. XI-XIX alternosidlerinin yapıları
Gymnema alternifolium. Chem. Pharm. Boğa. 47, 1598e1603. https://doi.org/
10,1248 / cpb.47.1598.
Yoshikawa, K., Taninaka, H., Kan, Y., Arihara, S., 1994. Antisweet doğal ürünler. XI.
Stephanotis lutchuensis Koidz'den sitakisosides VI-X yapıları. var.
japonica. Chem. Pharm. Boğa. 42, 2455e2460.
Zhao, J.-Q., Wang, Y.-M., Yang, Y.-L., Zeng, Y., Mei, L.-J., Shi, Y.-P., Tao, Y.- D., 2017.
Antioksidanlar ve "Liucha" kaynaklı bir glukozidaz inhibitörleri (genç yapraklar ve
Sibirya laevigata sürgünler). Food Chem. 230, 117e124.

**igokcek** · 12 October 2012, 22:11

Şeker Hastalığı Nasıl Tedavi Edilir İnsülin Direnci Nasıl Düşer Şeker Hastaları Ne Kullanmalı

Gurmar Toz Ekstraktı, Bitki Ekstraktı, , Bitkisel Ekstrakt, Bitki Tozu, Bitki Ekstresi

GURMAR İle Diyabet

GURMAR İle Klinşk Araştırmalar Ve Pankreas Zafiyeti

**igokcek** · 25 February 2013, 13:35

GURMAR İle Diyabet

GİNKGO İle Diyabet Ve Pankreas Zafiyeti

GURMAR İle Şeker Hastalığı

Şeker Hastalığına Ne İyi Gelir, Gurmar İle Diyabet Hastalığına Bitkisel Çözüm

**igokcek** · 27 March 2013, 15:08

GURMAR İle Diyabet

GURMAR İle Alerjik Astım Ve Aşırı Kilo

**igokcek** · 05 April 2013, 17:15

GURMAR İle Şeker Hastalığı (Diyabet)

Şeker Hastalığının Bitkisel Tedavisi, Diyabetin Bitkisel Tedavisi, Gurmar, Alkol Diyabeti Tetikler,

**igokcek** · 19 April 2013, 12:53

GURMAR İle Şeker Hastalığı

GURMAR İle Şeker Hastalığının Sebepleri

**igokcek** · 30 April 2013, 17:39

GURMAR İle Şeker Hastalığı Ve Diyabet

GURMAR İle Diabet Ve Şeker Hastalığı

**igokcek** · 24 May 2013, 15:44

GURMAR İle Diyabet, Şeker Ve Asit Beta Hücreleri

Diyabet Hastalığı, Şeker hastalığına en etkili bitki Gurmar, Damar Tıkanıklıkları Açıldı

**igokcek** · 19 June 2013, 14:14

GURMAR İle Diyabet

Gurmar Forte Şekeri Sıfırlar, Diyabet Hastalığı, Alkol Pankreası Yağlanmasını Tetikler,

**igokcek** · 17 July 2013, 14:09

GURMAR İle Şeker

GURMAR İle Diyabet Ve Şeker Tedavisi

**igokcek** · 21 August 2013, 08:39

GURMAR İle Şeker

Gymnema sylvestre (R.Br.) Yaprak Ekstraktının İmmünomodülatör Etkisi : Sıçan Modelinde Bir İn Vitro Çalışma

Vineet Kumar Singh , ^#¹Padmanabh Dwivedi , ^2,^‡BR Chaudhary , ^1,^‡ve Ramesh Singh ^#^3,^*
Jagadeesh Bayry, Editör
Yazar bilgileri Madde notları Telif Hakkı ve Lisans bilgileri Uyarı
Bu makale PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır . İlişkili Veriler

Yardımcı Malzemeler Veri Kullanılabilirliği Bildirimi
Şuraya git: Öz

Gymnema sylvestre Wild R.Br (aile: Asclepidaceae), antik çağda Hindistan'da diyabet, obezite, astım vb. Tedavisinde halk tıbbında kullanılan değerli bir tıbbi bitkidir. Diabetes mellitus, lenfosit apoptozu ve azalmış hücre aracılı ve humoral bağışıklık ile immünolojik olarak karakterize bir sendromdur. Hastalıkları hafifletmek için bağışıklık tepkilerinin modülasyonu ilgi çekicidir ve geleneksel bitkisel ilaçlar bu konuda önemli bir rol oynayabilir. Bu çalışmada, metanolik G ekstraktının immünomodülatör potansiyelini değerlendirmeyi amaçladık . sylvestresıçan modelini kullanarak yaprak. Yaprak ekstraktının HPLC analizi, gymnemik asit için gerçekleştirildi. Yöntem, referans standart olarak gymnemagenin kullanılarak gymnemik asitlerin, aktif bileşenlerin ortak bir aglikona ilk hidrolizini takiben gymnemagenin kantitatif tahminini içerir. Jimnemik asit içeriği de (ağ / ağ)% 2.40 idi G . sylvestre yaprak ekstresi. G'nin metanolik ekstraktının in vitro immünomodülatör aktivitesi . sylvestre yaprağı (1–200μg / ml) sıçan peritoneal makrofajlarında ve mitojen (ConA, PHA ve LPS) ile indüklenen dalak lenfosit proliferasyonu üzerindeki nitroblue tetrazolium indirgeme ve nitrit salınımı üzerindeki etkileri ölçülerek değerlendirildi. G . sylvestreyaprak ekstraktı makrofajlarda NO ve ROS üretiminde ve doza bağlı olarak lenfositlerin çoğalmasında önemli (<0.05) artış göstermiştir. AT ₅₀ değeri sırasıyla, NBT azaltma, nitrit serbest bırakılması ve limfoproliferasyon 3.10, 3.75 ve 2.68μg / ml olmuştur. Makrofajlarda NO ve ROS üretiminde 100 μg / ml ve lenfosit proliferasyonunda 20 μg / ml'de potansiyel etki gözlenmiştir. G . sylvestre yaprak özütü makrofaj reaktivitesini uyarır ve PMA veya LPS ile birleştirildiğinde aktivite seviyesini daha da arttırır. Bu bulgular, metanolik ekstresi aktif bileşikler, jimnemik asit varlığına işaret G . sylvestrebağışıklık sisteminin hem miyeloid hem de lenfoid bileşenlerini uyaran ve bu nedenle doğuştan gelen bağışıklık fonksiyonunu geri yükleyebilen yaprak. Bu çalışma ile G'nin anti-diyabetik özelliği hakkında geleneksel bilgi . sylvestre bilimsel olarak immünomodülatör özellikleri ile desteklenir.

Şuraya git: Giriş

Bağışıklık sistemi disfonksiyonu, birçok hastalığın patofizyolojisinden sorumludur. Bu tür hastalıkları hafifletmek için bağışıklık sisteminin uyarılması veya istenmeyen bağışıklık reaksiyonlarının baskılanması yoluyla bağışıklık tepkilerinin modülasyonu yıllardır büyük ilgi görmektedir. İmmünomodülatör tedavi, çeşitli hastalık durumları için, özellikle konakçının savunma mekanizmalarının, bağışıklık yanıtının bozulması koşullarında aktive edilmesi gerektiğinde, geleneksel kemoterapiye bir alternatif sağlayabilir.

Bitkisel ilaçların immünomodülatör özellikleri ve etki mekanizmalarının bilgisi, sadece folklorik ilaçları doğrulayacak yeni terapötik ajanların keşfi için değil, aynı zamanda bağışıklık fonksiyonu ve olası immünoterapi yolları hakkında yeni bilgiler sağlamak için de istenmektedir. Yeni gelişen bir dal olan immünofarmakoloji, immünomodülatörleri aramayı amaçlamaktadır ve birçok araştırmacı, bazı immün yanıtların sonucunu kontrol etmek için immünomodülatör olarak işlev görebilen bitki kaynaklı doğal maddelerin tanımlanmasına odaklanmıştır.

Gibi bir çok bitki, Achyrocline alata [ 1 ], kuşkonmaz racemosus [ 2 ], Azadirachta indica [ 3 ], centella Asiatica [ 4 ], Chenopodium ambrosioides [ 5 ], Clausena excavata [ 6 - 8 ,] versikolor Coriolus [ 9 ], Curcuma longa [ 10 ], Enicostema axillare [ 11 ], Phyllanthus debelis [ 12 ], Pouteria cambodiana[ 13 , 14 ] ve Tinospora cordifolia'nın [ 15 - 17 ] bağışıklık fonksiyonunu değiştirdiği ve sıçan ve farelerde geniş bir immünomodülatör etki dizisine sahip oldukları gösterilmiştir. Bitki kaynaklı immünomodülatör ajanlar, bağışıklık sisteminin yetkin hücrelerini aktive ederek bağışıklık tepkisini arttırır ve tıbbi bitkiler üzerindeki sistematik çalışmaların klinik yararları ile ilgili profilaktik ve terapötik iddiaları kanıtlama ihtiyacı vardır [ 18 ]. Avrupa'nın geleneksel bir bitki ilacı olan Viscum album , ekstrakt preparatları, kanserde ve ayrıca çeşitli inflamatuar patolojilerin tedavisinde tamamlayıcı tedavi olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bir in vitroçalışma, kanser hücrelerinin kemoterapötik ilaçlara ve Viscum albüm ekstraktına eşzamanlı olarak maruz bırakılmasından herhangi bir güvenlik riski beklenmediğini göstermiştir [ 19 ]. Kaveri'nin Fransa, Paris'teki grubu, Viscum albüm preparatlarının terapötik yararı için mekanik temeli tanımlamak için çeşitli hücresel ve moleküler yaklaşımları inceledi ve bu preparatların sitotoksisite, endotelyal hücreler, sitokin ile indüklenen PGE önleyerek anti-enflamatuar etki apoptosis indüksiyonu ₂ Siklo-oksijenaz-2 ve diğer immünomodülatör mekanizmalar [seçici inhibisyonu yoluyla salgılanmasını 20 - 30 ].

Tip 2 diyabet, endokrin bozukluğuna bağlı bozulmuş karbonhidrat, yağ ve protein metabolizması ile karakterize bir sendromdur. İmmünolojik olarak, diyabetiklerde lenfosit apoptozu [ 31 ] ve hücre aracılı ve humoral bağışıklığın depresyonu bildirilmiştir [ 32 , 33 ]. Gymnema sylvestre R.Br (Family, Asclepidaceae), antik çağda Hindistan'da diyabet, obezite, astım vb. Tedavisinde halk tıbbında kullanılan iyi bilinen ve oldukça değerli bir tıbbi bitkidir [ 34 ]. Hindistan'da pazarlanan Ayurveda anti-diyabetik formülasyonlar çoğunlukla G içerir . sylvestre . Endokrin ve bağışıklık sistemi, diyabet kaynaklı lenfosit apoptozu arasındaki yakın ilişki [ 31] ve hücre aracılı ve humoral bağışıklığın depresyonu [ 32 , 33 ] ve tıbbi bitkilerin antioksidan özellikleri ile ilişkili anti-diyabetik aktiviteleri [ 35 ] G'nin olduğu varsayımına yol açmıştır . yağ ve glikoz metabolizmasının endokrin korelasyonlarını etkileyen sylvestre yaprağı ekstresi [ 36 - 41 ] ayrıca bağışıklık fonksiyonunun modülasyonunda rol oynayabilir. Bu nedenle, bu çalışmada, metanolik G ekstraktının immünomodülatör aktivitesini değerlendirmeyi amaçladık . sıçan peritoneal makrofaj yanıtları ve dalak lenfosit proliferasyonu üzerine in vitro sylvestre yaprağı .

Şuraya git: Malzemeler ve yöntemler

Kimyasallar

Phorbol miristat asetat (PMA), tetrazolium boyalar, NBT (Nitroblue Tetrazolium) ve MTT [3- (4, 5-dimetiltiozol-2-il) -2,5 difenil tetrazolium bromür], mitojenler [konkanavalin A (Con A), fitohemaglutinin (PHA) ve lipopolisakarit (LPS)] ve Kültür ortamı (RPMI-1640), Sigma, ABD'den temin edilmiştir. Antibiyotik-Antimikotik solüsyon, L-glutamin, fetal sığır serumu (FBS), lenfosit ayırma ortamı (Hisep), dimetil sülfoksit (DMSO) Himedia Laboratories Pvt. Ltd. (Hindistan). Kültür ortamına% 5 ısı ile inaktive edilmiş FBS, Antibiyotik-Antimikotik solüsyon, 10mM HEPES ve 50μM Merkaptoetanol eklendi. Kullanılan diğer tüm kimyasallar ve çözücüler analitik derecedeydi. Bitkisel Bitki

G . sylvestre R.Br (Aile, Asclepidaceae: Botanik eşanlamlı, Asclepias geminata Roxb. ve Periploca sylvestres Retz.), yaygın olarak ormanların Periploca (İngilizce) ve Gurmar (Hintçe) tropik ormanlara özgü odunsu bir liana Orta ve Güney Hindistan, Asya ve tropikal Afrika'nın bazı bölümleri. Taze yaprak G . sylvestre , Banaras Hindu Üniversitesi (BHU) Rajiv Gandhi Güney Kampüsü'nden, Mirzapur, Barkachha'da (25.15 ° K: 82.60 ° E) toplandı. Kupon örneği Hindistan'ın Botanik Araştırması, Allahabad, Orta Bölge Merkezi, Uttar Pradesh, Hindistan'ın sulak bölümünde hazırlandı, doğrulandı ve saklandı (Ref. No.VKS-1).

Yaprak ekstraktının hazırlanması

Toplanan yapraklar damıtılmış su ile yıkandı, gölgede kurutuldu, toz haline getirildi ve tekrar kullanılıncaya kadar hava geçirmez bir kapta saklandı. Kurutulmuş toz (20 g), iki gün boyunca oda sıcaklığında (25 ± 1 ° C) 200 ml% 70 metanol içerisinde bekletilerek karıştırıldı. İki gün sonra özüt süzüldü ve tortu, iki gün daha aynı miktarda metanol içine daldırıldı ve daha sonra süzüldü. Toplanan hidro metanolik ekstrakt (GS ekstraktı), 40 ° C'nin altındaki düşük basınç altında döndürülerek buharlaştırıldı ve –20 ° C'de saklandı. İçin , in vitro kültürü deneyleri, GS özü, DMSO içinde çözülmüş ve daha sonra PBS ve kültür ortamı ile seyreltildi; tahlil kültüründe nihai DMSO konsantrasyonu <% 0.1 (h / h) idi.

Ekstrakt analizi

G'nin ana bileşeni . sylvestre , gymnemik asitler olarak bilinen 17 oleanan tipi triterpenoid saponinlerin bir karışımıdır [ 34 , 42 ]. Farklı referans standartlarının mevcudiyeti zor olduğundan, jimnastik asitlerinin tahmini, ekstrenin önce alkali sonra asit ile hidrolize edilmesi ile gerçekleştirilir. Bu şekilde elde edilen gymnemagenin, HPLC ile tahmin edilir ve toplam gymnemik asit, moleküler ağırlık düzeltmeleri uygulanarak hesaplanır. G'nin analizi . sylvestreyaprak ekstraktı Natural Remedies Pvt. Ltd., Bangalore, Hindistan. Referans standardı, gymnemagenin, 10 mg 5 dakika sonikasyon ile 20 ml HPLC dereceli metanol içinde çözülmüş, soğutulmuş ve nihai hacim metanol ile 50 ml'ye yapılmıştır. HPLC örneği, asit-baz hidrolizi kullanılarak hazırlandı. Kısaca, 1 g ince yaprak tozu 30 ml% 50 (h / h) metanol içinde çözüldü. Çözeltiye, 2 ml% 12 (a / h) KOH ilave edildi ve bir kaynar su banyosu üzerinde 1 saat geri akıtıldı. Çözelti soğutuldu, 5.5 ml 4N HC1 ilave edildi ve tekrar kaynar su banyosu üzerinde 1 saat geri akıtıldı. Soğutulduktan sonra çözelti, santrifüjden geçirildi, süpernatan aktarıldı ve pH,% 12 KOH ile 7.5-8.5'e ayarlandı. Nihai hacim,% 50 metanol ile 100 ml'ye yapıldı, membran filtreden süzüldü ve HPLC analizine tabi tutuldu.

Kromatografik ayırma, Luna 5μ C-18 (2) boyutunda kolon üzerinde gerçekleştirildi; 250 x 4.60mm (Phenomenex). Mobil faz fosfat tampon oluşturmuştur (1 mM KH ₂ PO ₄ve çözücü A olarak% 0.05 Ortofosforik asit) ve çözücü B olarak Asetonitril kullanıldı. Gradyan elüsyon programı kullanıldı: 0 ila 20 dakika,% 25 çözücü B; 20-25 dakika,% 55 solvent B; 25 ila 30 dakika,% 60 solvent B; 30 ila 35 dakika,% 60 solvent B; Akış hızı, 1.5 ml / dakika idi. Referans standart 20 ul enjekte edildi ve kromatogram kaydedildi. Aynısı üç kez tekrarlandı ve ortalama alan ve% bağıl standart sapma (RSD) hesaplandı (RSD <% 1). 20 ul numune ekstraktı enjekte edildi ve kromatogram kaydedildi. Gymnemagenin (Mol.wt. 506.70) miktarı, gymnemik asit (Mol.wt. 809.00) miktarına dönüştürüldü ve gymnemik asit (GA) içeriği aşağıdaki formülle hesaplandı:
GA içeriği( %w / w )=Numune alanıStandart alanı× ağ .standart( mg )Standart seyreltme( ml )× Örnek dilüsyonu( ml )ağ .numunenin( mg )× 809.00506,70× Standardın saflığı( % )
Hayvanlar

Varanasi, Banaras Hindu Üniversitesi Tıp Bilimleri Enstitüsü bünyesinde yetiştirilen wister sıçanlar alındı ve bu çalışmada kullanıldı. Vücut ağırlığı 200 ila 250 g arasında değişen 2 ila 3 aylık hayvanlar seçildi ve kontrollü sıcaklıkta (25 ± 1 ° C) laboratuvar koşullarına alıştırıldı. Sıçanlar, standart polipropilen kafeslere (boyut: 41 x 28 x 14 cm), pelet gıda ve içme suyu cam şişesi için olanaklara sahip paslanmaz çelik üst ızgaraya yerleştirildi. Kafeslerde pirinç kabuğu yatağı (yaklaşık 2 cm kalınlığında) vardı. Sıçanlar standart pelet gıda ve libitum ile beslendi . Aquaguard (Eureka Forbes Ltd., Bombay, Hindistan) filtrelenmiş su, cam şişelerdeki hayvanlara paslanmaz çelik sipper tüpleri ve ad libitum ile sağlanmıştır . Bağışıklık fonksiyonunda cinsel dimorfizm omurgalılarda rapor edilir [43 , 44 ]; bu nedenle çalışmaya sadece erkekler dahil edilmiştir. Bir deneyde, 3-4 sıçandan peritoneal makrofajlar toplandı ve her bir in vitro analiz, NBT indirgeme ve Nitrit testi için toplandı . Bu sıçanların dalağı lenfoproliferasyon deneyi için toplandı. Karışık lenfosit reaksiyonunu önlemek için splenosit süspansiyonları bir araya getirilmedi. Üç farklı bağımsız deney gerçekleştirildi.

Etik Beyanı

Hindistan Hükümeti, Kurumsal Etik Komitesi ve Hayvanlar Üzerinde Deney Denetimi ve Denetimi Amaçlı Komite'nin (CPCSEA) yönergeleri takip edildi. Çalışma Banaras Hindu Üniversitesi, Varanasi Merkezi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı (Ref. No. Dean / 12-13 / CAEC / 29).

Alıştırmadan sonra, sıçanlara peritoneal makrofajları ortaya çıkarmak üzere uyarıcı olarak 2 ml FBS ile intraperitonal olarak enjekte edildi. 72 saat sonra sıçanlara barbitürat (Nembutal'in ip enjeksiyonu; ağırlıkça 40 mg / kg vücut) ile anestezi uygulandı. Periton eksüdaları, kültür ortamı ile lavaj yoluyla toplandı. Lavajı takiben dalak eksize edildi. Sıçanlara barbitürat doz aşımı ve ardından akciğer hasadı ile ötenazi uygulandı. Karkaslar toprağın altına gömüldü. Periton eksüdaları, 8 dakika boyunca 30 dakika boyunca 400xg'de santrifüjlendi ve hücre pelleti, iki kez 0.2 M PBS (pH 7.2) ile yıkandı ve tam kültür ortamında yeniden süspanse edildi. Hücre sayısı bir hemasitometrede belirlendi ve hücre canlılığı (>% 90) tripan mavisi boya dışlama tekniği ile test edildi. Hücre yoğunluğu 5 x 10 'a ayarlanmıştır ⁶ hücre / ml.

Dalak lenfosit süspansiyonunun hazırlanması

Periton lavajı takiben eksize edilen dalak tartıldı ve Tripathi ve ark.'nın [ 45 , 46 ] yöntemini izleyerek dalak hücresi süspansiyonu hazırlandı . Kısaca, aseptik koşullar altında dalak derhal preslendi ve tek hücre süspansiyonu elde etmek için tam kültür ortamına (5 ml / dalak) <100 um gözenek boyutuna sahip bir naylon süzgeçten akıtıldı. Dalak hücresi süspansiyonu, hemolizat tamponu ile muamele edildi, PBS ile iki kez yıkandı ve tam kültür ortamında yeniden süspanse edildi. Dalak lenfositleri, lenfosit ayırma ortamı, HiSep (Yoğunluk 1.077 g / ml) kullanılarak yoğunluk gradyanlı santrifüj ile izole edildi. Lenfositler hemasitometrede sayılmıştır ve tripan mavisi eksklüzyon testiyle canlılığı açısından değerlendirilir ve canlı hücreleri (>% 90) yoğunluğu 2 x 10 ayarlanmıştır edildi ⁷ hücre / ml. İn vitro testler

NBT azaltma deneyi

Berber ve Slapnickova yöntemini takiben NBT redüksiyon analizi yapıldı [ 47 ]. Kısaca, makrofaj hücre süspansiyonu (10 tohumlandı ⁵ , düz tabanlı 96 oyuklu bir plaka içerisinde hücre / oyuk) (Yuvası ^® Biotech., Çin). Pozitif kontrol kültüründe 1 μg / ml'lik nihai konsantrasyonu vermek için kuyuya PMA veya LPS eklenmiştir. PMA ve LPS içeren veya içermeyen oyuklara GS özü ilave edildi (nihai konsantrasyon: 1, 5, 10, 20, 50, 100 ve 200 ug / ml) ve ortam ile 100 μl'ye nihai hacim yapıldı. Herhangi bir uyarıcı, PMA, LPS veya GS özütü içermeyen makrofaj hücre süspansiyonu, iyi temsil edilmemiş muamele edilmiş kontrolde. 100 ul kültür ortamı içeren ek kuyu boş olarak görev yaptı. Tüm deneyler üç kez yapıldı.

Plaka nemlendirilmiş CO inkübe edilmiştir ₂ 37 ° atmosferi ° C de 24 saat karıştırıldı. İnkübasyondan sonra, her bir oyuğa NBT (1 mg / ml) ihtiva eden 50 ul RPMI ilave edildi ve ayrıca yukarıdaki gibi 2 saat süreyle inkübe edildi, 700xg'de santrifüjlendi, PBS ile yıkandı ve% 70 metanol içinde sabitlendi. Her oyuğa yirmi mikrolitre% 0.1 Triton X-100 karıştırıldı ve formazan kristalleri 120 ul KOH (2 M) ve 140 ul DMSO karıştırılarak çözüldü. Optik yoğunluk (OD), 620 nm'de ELISA plaka okuyucu (Thermo Multiscan) yardımıyla ölçüldü. OD, boş oyuğun arka plan OD'sinin çıkarılmasıyla düzeltildi. Stimülasyon oranı (% SR) aşağıdaki gibi hesaplandı:
%SR=OD ile tedavi edilen hücreler-OD tedavi edilmemiş hücrelerOD tedavi edilmemiş hücreler× 100

Nitrit deneyi

Makrofaj kültüründe bazal ve uyarılmış nitrit salımı analiz edildi. Nitrit içeriği, Ding ve ark. [ 48 ]. Makrofajların ve GS özüt tedavisinin in vitro kültürü, alt NBT indirgeme analizinde tarif edilenle aynıydı. Levha CO inkübe edildi ₂ 200xg'de santrifüjlendi, 24 saat boyunca 37 ° de atmosfer C ve süpernatan toplandı. Eşit hacimde süpernatan ve Griess reaktifi karıştırıldı ve optik yoğunluk (OD), ELISA plaka okuyucu yardımıyla 540 nm'de ölçüldü. OD, boş oyuğun arka plan OD'sinin çıkarılmasıyla düzeltildi. Nitrit konsantrasyonları kalibrasyon eğrisinden, doğrusal regresyondan çıkarıldı [ S1 Şek], standart olarak sodyum nitrit kullanılarak yapılmıştır. Stimülasyon oranı (% SR) aşağıdaki gibi hesaplandı:
%SR=Tedavi edilen hücrelerdeki nitrit içeriği-Muamele edilmemiş hücrelerde nitrit içeriğiMuamele edilmemiş hücrelerde nitrit içeriği× 100

Dalak lenfosit proliferasyon deneyi

Lenfosit proliferasyonu, Berridge ve arkadaşlarının yöntemlerini takiben tetrazolium tuzuna (MTT) dayalı kolorimetrik olarak değerlendirildi. [ 49 ]. Tetrazolium tuzlarını kullanan kolorimetrik yöntem, lenfoproliferasyonu ölçen avantajlı bir alternatif yöntem olmuştur [ 50 ]. Tetrazolium tuzu, metabolik olarak aktif hücrelerin mitokondrilerinde renkli bir formazan ürününe indirgenir. 570 nm'deki absorbans miktarı ile ölçüldüğü gibi formazan miktarı, kültürdeki canlı hücre sayısı ile doğru orantılıdır. Böylece, tuzun mitokondriyal dehidrogenazlar ile renkli formazan ürününe dönüştürülmesinin ölçülmesi , in vitro kültürün son saatlerinde hücre sayısının ( kendi başına mitoz değil ) bir ölçüsünü sağlar [ 51]. Renkli formazana birikimi pozitif birleştirilmesi ile ilişkilidir ³ son saatleri esnasında hücre bölünmesinin S-faz hücresel DNA'ya-timidin in vitro mitojenik uyarım koşulları altında blastojenezi bir doğrudan ölçümünü [olan kültür, 52 ] .

Sıçandan izole edilmiş dalak lenfositleri, tedavi edilmemiş / bazal, mitojen ile indüklenmiş ve ayrıca GS ekstraktı ile uyarılmış lenfoproliferasyon açısından test edilmiştir. Dalak lenfositleri (10 ⁶oyuk başına), düz tabanlı 96 oyuklu kültür plakasının oyuğuna ekildi. Kuyuya mitojenler ilave edildi; nihai konsantrasyon ConA için 5 ug / ml ve PHA ve LPS için 10 ug / ml olmuştur. GS özü (Nihai konsantrasyonlar: 1, 5, 10, 20, 50, 100 ve 200 ug / ml) mitojen içeren veya içermeyen oyuğa ilave edildi ve nihai hacim, kültür ortamı ile birlikte 200μl / oyuk yapıldı. Mitojen içermeyen kültür ortamı ile lenfosit süspansiyonu, işlenmemiş kontrol proliferasyonunu iyi temsil etti. Farklı mitojenlere sahip lenfosit kültürleri pozitif kontrolleri temsil etti. 200 ul kültür ortamı içeren ek kuyu boş olarak görev yaptı. Tüm deneyler üç kez yapıldı. Nemlendirilmiş CO Kuluçkadan sonra ₂48 saat boyunca 37 ° C'de atmosfer, her kuluçka kuyusuna MTT (5 mg / ml) ilave edildi ve plaka tekrar 4 saat süreyle inkübe edildi. İnkübasyondan sonra, plaka 10 dakika boyunca 400xg'de santrifüjlendi, süpernatan aspire edildi ve formazan 100 ul DMSO içinde çözüldü. Optik yoğunluk (OD) 570 nm'de ELISA plaka okuyucusunda ölçüldü. OD, boş oyuğun arka plan OD'sinin çıkarılmasıyla düzeltildi. Stimülasyon oranı (% SR) aşağıdaki gibi hesaplandı:
%SR= OD ile tedavi edilen hücreler-OD tedavi edilmemiş hücrelerOD tedavi edilmemiş hücreler× 100
istatistiksel analiz

Veriler, üç bağımsız deneyden elde edilen üçlü tayinlerin ortalama ± SEM'i olarak sunulmuştur. Veriler ANOVA ve ardından Duncan'ın Çoklu Aralık testi ile analiz edildi. Regresyon analizi, konsantrasyon-tepki ilişkisi kurmak için gerçekleştirilmiştir ve AT edilmiş ₅₀ ,% 50 uyarılması için gerekli olan etkili konsantrasyon, lineer regresyon denklemi [ekstrapole edilmiş S2 Şekil ]. Tüm istatistiksel analizler Microsoft Excel ve SPSS for Windows kullanılarak yapıldı. Tüm boş hipotezler p <0.05'te test edilmiştir.

Şuraya git: Sonuçlar

NBT azaltma

GS özü, 50, konsantrasyon bağımlı bir tarzda, NBT azalma kadar stimüle ug / ml (R ² = 0.85, y 0.74x-33.90 =; p <0.05), 100 ug // ml'de, olmak maksimal (% 120) yukarıda bir daha fazla stimülasyon gözlendi ( Şekil İA ). EC ₅₀değeri 3.10 μg / ml idi. NBT redüksiyonunun uyarılması, 50, 100, 200μg / ml ekstrakt konsantrasyonunda standart immünoelisitör, PMA veya LPS'nin neden olduğundan önemli ölçüde (p <0.05) daha yüksekti; 5, 10 ve 20 ug / ml ise, LPS veya PMA'ya benzer uyarıcı etki gösterdi; ve 1 μg / ml özüt, bundan daha az. Makrofajlar, PMA veya LPS varlığında ekstrakt ile inkübe edildiğinde, her konsantrasyonda önemsiz olsa da, daha yüksek seviyede bir NBT boya azalması meydana geldi. PMA veya LPS varlığında 50, 100 ve 200 ug / ml ekstrakt konsantrasyonunda maksimum NBT azalması gözlendi; 1, 5, 10 ve 20 μg / ml, sadece PMA ( Şekil 1B ) veya sadece LPS ( Şekil 1C ) ile gösterildiği kadar azalma gösterdi .

Şekil 1
Periton makrofajları Sıçan NBT azaltılması , in vitro ile muamele Gymnema Sylvestre , tek başına yaprağı ekstresinin (A) ve PMA 1 ug / ml (B) ve LPS 1 ug / ml (C) ile kombinasyon halinde.
GS1-GS200, sırasıyla 1–200μg / ml ekstrakt konsantrasyonunu temsil eder. Aynı alfabe taşıyan çubuklar önemli ölçüde farklılık göstermez. [Tedavi etkisi ANOVA: F = 10.69 (8,18); p <0.05, (B) F = 7.57 (7,16); p <0.05, (C) F = 14.27 (7,16); p <0.05] gerçekleşti. Nitrit salınımı

Makrofaj kültüründe nitrit salınımı, karşılaştırıldığında, sırasıyla 1, 5, 10, 20, 50, 100 ve 200 μg / ml GS özü ile kültürlendiğinde% 49, 54, 79, 91, 122, 134 ve 126 ile uyarıldı. LPS (% 62) veya PMA'ya (% 51) kadar. Nitrit açıklamasında uyarım 50, konsantrasyona bağımlı kadar olan ug / ml (R ² = 0.91, y = 0.64x-28.25, p <0.01: EC ₅₀ doğrusal denklemi 3.75μg / ml ekstrapole değer), başka bir önemli stimülasyon 100 veya 200 μg / ml'de kaydedildi ( Şekil 2A). GS ekstraktının uyarıcı etkisi (p <0.05) 20, 50, 100 ve 200 μg / ml konsantrasyonlarda PMA veya LPS'den önemli ölçüde aştı; daha düşük konsantrasyonlar 1, 5 ve 10 μg / ml iken, PMA veya LPS ile aynı etkiye sahipti. PMA veya LPS varlığında GS özütü ile tedavi edilen makrofaj kültürleri, 10 ila 100 μg / ml konsantrasyonları, anlamlı olmamakla birlikte, tek başına GS özünden daha yüksek, ancak PMA'dan ( Şekil 2B ) veya LPS'den ( Şekil 2C ) daha yüksek düzeyde stimülasyon gösterdi .

İncir. 2
Periton makrofajları Sıçan nitrit salma in vitro ile muamele Gymnema Sylvestre , tek başına yaprağı ekstresinin (A) ve PMA 1 ug / ml (B) ve LPS 1 ug / ml (C) ile kombinasyon halinde.
GS1-GS200, sırasıyla 1–200μg / ml ekstrakt konsantrasyonunu temsil eder. Aynı alfabe taşıyan çubuklar önemli ölçüde farklılık göstermez. [Tedavi etkisi ANOVA: (A) F = 7.10 (8, 18); p <0.05, (B) F = 5.05 (7, 16); p <0.05, (C) F = 10.29 (7, 16); p <0.05] gerçekleşti. Dalak lenfosit proliferasyonu

GS ekstresinin dalak lenfosit proliferasyonu üzerindeki etkisi Şekil 3'te sunulmaktadır . Proliferatif yanıt, mitojene kıyasla sırasıyla 1, 5, 10, 20, 50, 100 ve 200 μg / ml GS özütü ile tedavi edilen kültürlerde% 26, 71, 141, 184, 193, 187 ve 141 ile uyarıldı. . uyarıcı etkisi, 20 ug / ml (R, konsantrasyon bağımlı kadar olduğu, proliferatif yanıtlar (ConA,% 93 ve LPS,% 96 PHA,% 53) uyarılmış ² y = 0.11x-2.82; = 0.93 p <0.05: ve AT ₅₀ değeri ekstrapole doğrusal denklemi 2.68μg / ml); 50 ve 100 μg / ml konsantrasyonlarda daha fazla arttırılmış stimülasyon gözlenmedi, 200 μg / ml'de azaldı ( Şekil 3A). GS ekstraktı kültürlerde PHA ile birleştirildiğinde, 50 ila 200 ug / ml konsantrasyonlar sadece PHA'dan daha yüksek seviye yanıtı gösterdi, 100μg / ml'de maksimum; daha düşük konsantrasyonlarda ise, benzer seviye yanıtı ( Şekil 3B ). Proliferatif yanıt anlamlıydı (p <0.05) ve başka bir T hücresi mitojeni ConA varlığında 50 ug / ml GS ekstraktı ile tedavi edilen lenfosit kültüründe maksimum, ancak daha yüksek konsantrasyonlarla tedavi edildiğinde azaldı ( Şekil 3C ). GS hücre ile tedavi edilen dalak lenfosit kültürleri, B hücresi mitojenleri (LPS) ile birlikte ekstre edildiğinde, 20-100 μg / ml konsantrasyonlar, LPS ile uyarılana kıyasla proliferatif yanıtı önemli ölçüde (p <0.05) ve maksimum özdeş seviyeye ( Şekil 3D ).

Şek. 3
Sadece Gymnema sylvestre yaprak ekstresi (A) ile ve PHA 10 ug / ml (B), ConA 5 μg / ml (C) ve LPS 10 μg / ml (D) ile birlikte tedavi edilen in vitro dalak lenfositlerinin proliferasyonu .
GS1-GS200, sırasıyla 1–200μg / ml ekstrakt konsantrasyonunu temsil eder. Aynı alfabe taşıyan çubuklar önemli ölçüde farklılık göstermez. [Tedavi etkisi ANOVA: (A) F = 10.58 (9, 20); p <0.05, (B) F = 27.28 (7, 16); p <0.05, (C) F = 2.66 (7, 16); p <0.05; (D) F = 5.26 (6, 14); p <0.05] gerçekleşti. Ekstrakt analizi

Yaprak ekstraktında gymnemik asidin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi, numune ekstraktının alıkonma süresi ve pik alanı ile referans standardınki karşılaştırılarak yapıldı. Yaprak ekstraktının HPLC analizinden çıkan sonuçlar Tablo 1'de özetlenmiştir . Şekil 4 , 205 nm'de benzersiz bir λ _max ve G'nin referans standart gymnemagenin kromatogramlarını göstermektedir . sylvestre yaprak ekstresi, tarif edilen yönteme göre hidrolize edilir. Yaprak ekstraktının kromatogramı, standart gymnemagenininkine benzer keskin ve simetrik bir tepe gösterdi. Yaprak ekstraktındaki gymnemik asit içeriğinin% 2.40 kuru ağırlık olduğu bulunmuştur.

Şekil 4
Gymnema sylvestre yaprak ekstresi HPLC kromatogramları ve görüntü içinde insert olarak referans standardı, gymnemagenin. tablo 1

Referans standardı ve yaprak ekstraktının HPLC parametreleri.

Gymnemagenin	8,056	21780487	-
Yaprak özü	8,061	16733596	2.40

Şuraya git: Tartışma

G . sylvestre , diyabetin yönetimi için potansiyel bir her derde deva olarak ortaya çıkmıştır. G ile ilgili birçok çalışma . sylvestre , anti-diyabetik etkisini bir dizi yolla uygulayabildiğini göstermiştir [ 34 ]. Shanmugasundaram ve ark. [ 36 ] tarafından yapılan bir çalışmada , streptozotosin kaynaklı diyabetik sıçanların G ile oral tedavisi . sylvestre ekstreleri (20 mg / gün / sıçan) açlık glikoz seviyesini normalleştirdi ve endokrin pankreasın onarımı / rejenerasyonu ile insülin seviyesindeki yükselme. G'nin etkinliği için destek . sylvestrehem tip 1 hem de tip 2 diyabetin yönetiminde, G'nin daha önce kontrol edilen iki açık etiketli klinik çalışmasından kaynaklanmaktadır . sylvestre özütü (400 mg / gün), 16-18 ay boyunca insülin tedavisine ek olarak tip 1 diyabetli 27 hastaya [ 53 ] ve geleneksel ilaç tedavisine ek olarak tip 2 diyabetli 22 hastaya oral yoldan verilmiştir [ 54 ]. G sırasında . sylvestre ekstraktı takviyesi, hastalar kan şekeri, glikosile hemoglobin ve glikosile plazma proteinlerinde önemli bir azalma gösterdi ve geleneksel ilaç dozu azaltılabilir. Başka bir çalışmada, yeni bir ekstraktın oral uygulaması, OSA ^®, 60 gün boyunca (1 mg / gün), tip 2 diyabetli küçük bir kohortta insülinotropik ve anti-hiperglisemik olduğu bildirilmiştir [ 40 ]. Aynı yeni ekstre glukoz toleransını iyileştirir vivo izole edilmiş fare adacıklardan fareler ve uyarır insülin salgılanmasında vitro [ 41 ] ve MIN6 β-hücresi çizgisinden ve Langerhans izole edilen insan adacıkları in vitro [ 39 ].

Bu çalışma ilk kez GS ekstresinin sıçan makrofajlarının ve dalak lenfositlerinin bağışıklık aktiviteleri üzerindeki etkisini değerlendirdi. Doğuştan gelen bağışıklık sisteminin ana hücresel bileşenlerini içeren makrofajlar, güçlü mikrobisidal (Sitotoksik) ile süper oksit anyon (O ₂^- ) gibi bir dizi geçici, reaktif oksijen türünün (ROS) patojenlerin fagositozunu ve de novo üretimini gerçekleştirir. ) solunum patlaması sırasındaki aktivite [ 55 ]. ROS salınımı ile sonuçlanan solunum patlaması fonksiyonu, doğal bağışıklık sisteminin anahtar mekanizmalarından (oksijene bağımlı savunma mekanizması) biridir. Solunum patlaması, çözünür bileşenler, yani PMA, lektinler, LPS veya zimosan gibi parçacıklı fagositik uyaran tarafından uygun stimülasyon üzerine açığa çıkarılabilir. Bu amaçla, peritoneal makrofajlar ile ROS üretimi, NBT'nin azaltılmasının kantitatif bir mikroplaka deneyi kullanılarak araştırıldı. NBT testi, makrofajların, hücre içinde çöken, suda çözünmeyen bir malzeme olan mavi formazan oluşturacak şekilde sarı çözünür redoks boya NBT'yi azaltma yeteneğinin değerlendirilmesini içerir. Formazanın üretim derecesi, süperoksit anyonunun (O₂ ^- ) kantitatif bir ölçümünü sağlar .

Nitrik oksit (NO), makrofaj sitotoksisitesinin bir başka etkili molekülüdür. L-arginin'den NOS enzimi tarafından üretilir. Üretimden kısa bir süre sonra NO, popüler olarak RNI olarak bilinen diğer azot oksitlere ayrışır. Bu nedenle nitrit, bu çalışmada makrofaj sitotoksisitesinin bir belirteci olarak da analiz edildi. Laboratuvarda, makrofajda ve mitojen kaynaklı lenfoproliferatif yanıtta nitrit salınımı ve NBT azalmasının ölçülmesi, bağışıklık sisteminin hücresel kolunun fonksiyonel değerlendirmesinin en yaygın kullanılan in vitro değerlendirmesidir: in vitro yanıt ne kadar büyük olursa , in vivo o kadar etkili bağışıklık tepkisi, bu tahlillerin performansında örtük varsayımdır.

GS ekstraktimülasyonundan sonra (1-10 μg / ml), makrofaj reaktivitesi, ROS ve NO üretimi PMA veya LPS stimülasyonu ile özdeşti, ancak daha yüksek ekstrakt konsantrasyonlarında (50-200 μg / ml) PMA veya LPS'den daha fazla gelişti. GS özütü makrofaj kültüründe PMA veya LPS ile birleştirildiğinde, sadece GS tedavisine kıyasla önemsiz olsa da daha yüksek bir stimülasyon seviyesi meydana geldi. Sonuçlar, GS ekstraktının solunum patlamasına neden olabileceğini düşündürmektedir. GS ekstraktı stimülasyonunu takiben makrofajlarla ROS ve NO üretimi , in vivo spesifik koşullar altında çeşitli aktiviteler (antimikrobiyal, antitümör, antiviral, vb.) Sağlayabilir . İzole edilmiş saponinin HeLa hücreleri üzerindeki antitümör-sitotoksik aktivitesi [ 56 ] ve AGS, SCG ve U937 hücreleri üzerindeki suda çözünür polisakkaritler fraksiyonu [57 ] 'den G . sylvestre başka bir yerde rapor edilmiştir. Bu çalışmanın sonuçları, diğer bitkisel bitki ekstraktlarının makrofajlarda [ 1 , 5 , 9 - 11 , 14 , 17 ,] ve sıçan / farede dalak lenfosit proliferasyonunda ROS ve NO üretimi üzerindeki etkilerine uygundur [ 2 , 6 - 8 , 14]. Bu çalışmada kullanılan mitojenler, Con A ve PHA, T hücresi için spesifik olarak mitojeniktir; LPS ise, B hücresi için. ConA ve LPS kaynaklı proliferatif yanıtların PHA kaynaklı yanıtlardan daha yüksek olduğunu bulduk. MTT testi ile ölçüldüğü gibi mitojenler ile veya bunlar olmadan GS ekstresi aktif bileşeni olan gymnemik asit, dalak lenfoproliferasyonu üzerindeki özdeş etkiler nedeniyle, T ve B hücresi proliferasyon stimülasyonunda eşit olarak yer alır.

Bu çalışma, GS ekstraktının makrofaj reaktivitesini önemli ölçüde uyardığını, PMA veya LPS ile kombine edildiğinde aktivite seviyesini daha da yüksek, ancak önemsiz bir şekilde arttırdığını göstermektedir. Benzer şekilde, GS ekstresi dalak lenfoproliferasyonunu uyarır. Bu çalışmada kullanılan GS ekstresi konsantrasyonları sıçan makrofajları ve lenfositleri için toksik değildir. EC ₅₀ tespit değerler şöyleydi 3.10, 3.75 ve 2.68μg / ml NBT indirgenmesi, nitrit serbest bırakılması ve lenfosit proliferasyonu, sırasıyla GS özü daha düşük bir konsantrasyonu, lenfosit proliferasyonu teşvik etmek için etkili olduğunu ortaya koymaktadır, ancak bir yüksek gereklidir için uyarma süperoksit anyonu ve makrofajlarda NO üretimi.

Örnek hazırlama yöntemi, bitkisel ilaçların analizi açısından önemlidir ve önemlidir. Ayrıca, bitkisel ilacın kalite kontrolü ve standardizasyonu bitkisel ilaç gelişiminde önemli konulardır. DSÖ düzenleme kılavuzları [ 58 ], bitkisel ilacın standardizasyonu için bir işaretleyici ve parmak izi yaklaşımının kullanılmasını önermektedir. Bu çalışmada geleneksel olarak önemli bitkisel ilaç olan G.sylvestre'yi standardize etmek için markör temelli bir yaklaşım kullanılmıştır. Biyolojik olarak aktif bileşiklerin karmaşık karışımı arasında, gymnemagenin, G numunelerinin kalitesini değerlendirmek için analitik bir işaretleyici olarak kullanılabilir . sylvestrefarklı kaynaklardan elde edilmiştir. Bu çalışmada yaprak ekstresinin HPLC karakterizasyonu, G. sylvestre'nin diğer bileşenlerinden iyi bir çözünürlükle gymnemik asidin güvenilir bir şekilde ölçülmesine izin verdi.

Bu çalışmada hazırlanan GS özütü, sadece makrofajlar ve lenfosit proliferasyonu ile süperoksit ve NO üretimini uyarmakla kalmayan, aynı zamanda elisitörler, PMA veya LPS ve mitojenler (ConA, PHA, ve LPS). GS özütü, süperoksit anyonunun sinerjik indüksiyonu ve makrofajlarda NO üretimi ve lenfositlerin çoğalması için ikinci bir sinyal sağlayabilir. Bu nedenle, bu çalışma GS ekstresinin yukarıda tartışıldığı gibi sadece diyabetteki metabolik ve endokrin bozukluklarını iyileştirmekle kalmayıp, daha önceki çalışmalarda bildirilen diyabetteki depresif bağışıklığı da iyileştirebileceğini göstermektedir [ 31 - 33 ]. GS ekstraktı ile immünomodülasyonun mekanik temelini tanımlar venormal ve diyabetik sıçan modelinde in vivo immünomodülatör aktivite daha fazla dikkati çekecektir.

Şuraya git: Sonuçlar

Mevcut çalışma, G özütünün olduğunu göstermektedir . sylvestre yaprağı, sıçan bağışıklık sistemi üzerinde modülatör etkilere sahip aktif bileşikler, Gymnemik asit içerir. G kullanımı ile ilgili geleneksel bilgi . diyabet tedavisinde sylvestre , immünomodülatör özellikleri nedeniyle bilimsel olarak desteklenmiştir. Biz inanıyoruz G . sylvestre yaprak özütü makrofaj reaktivitesini ve lenfositlerin çoğalma kapasitesini yeniden kurabilir ve böylece doğal bağışıklık fonksiyonlarını eski haline getirebilir.

Şuraya git: Destek Bilgisi

S1 GELEN Kontrol Listesi

NC3Rs ARRIVE Guidelines kontrol listesi.
(PDF)
Ek veri dosyası için burayı tıklayın. ^{(1.0 milyon, pdf)} S1 İncir

Doğrusal regresyon analizini takiben oluşturulan nitrit standart kalibrasyon eğrisi.
(TIF)
Ek veri dosyası için burayı tıklayın. ^{(890K, tif)} S2 İncir

Gymnema sylvestre yaprak ekstresi (GS) konsantrasyon-tepki (% SR) eğrisi, doğrusal regresyon analizini takiben yapılmıştır.
A- NBT azalması; B- Nitrit salınımı; C- Dalak lenfoproliferasyonu

(TIF)
Ek veri dosyası için burayı tıklayın. ^{(1,9 milyon, tif)}
Şuraya git: Teşekkür

Yazarlar, Pooja Pathak ve Babita Singh'e, Hindistan, Varanasi, UP, Udai Pratap Özerk Koleji Zooloji Bölümü'nde, tahlillerin gerçekleştirilmesinde yardımcı oldukları için teşekkür ederler.

Şuraya git: Fon Beyanı

Yazarların rapor edecek desteği veya fonu yoktur.

Şuraya git: Veri kullanılabilirliği

İlgili tüm veriler makalenin ve Destekleyici Bilgi dosyalarının içindedir.

Şuraya git: Referanslar

1. Toffoli-Kadri MC, Carollo CA, Lourenco LD, Felipe JL, Néspoli JHB, Wollf LGC, et al. Achyrocline alata (Kunth) DC'nin in vivo ve in vitro anti-inflamatuar özellikleri . J Etnoparmakol . 2014; 153 : 461-468. 10.1016 / j.jep.2014.03.008 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Gautam M, Saha S, Bani S, Kaul A, Mishra S, Patil D, et al. Asparagus racemosus'un sistemik Th1 / Th2 bağışıklığı üzerindeki immünomodülatör aktivitesi : immünoadjuvan potansiyel için uygulama . J Etnoparmakol . 2009; 121 : 241-247. 10.1016 / j.jep.2008.10.028 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
3. van der Nat JM, Klerx JPAM, van Dijk H, de Silva KTD, Labadie RP. Azadirachta indica kök kabuğunun sulu bir ekstresinin immünomodülatör aktivitesi . J Etnoparmakol . 1987; 19 : 125–131.10.1016 / 0378-8741 (87) 90036-5 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Jayathirtha MG, Mishra SH. Eclipta alba ve Centella asiatica'nın metanol ekstraktlarının ön immünomodülatör aktiviteleri . Phytomed . 2004; 11 : 361–365.10.1078 / 0944711041495236 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Cruz GVB, Pereira PVS, Patricio FJ, Costa GC, Sousa SM, Frazao JB, et al. Chenopodium ambrosioides yapraklarından hidroalkolik ekstraktın neden olduğu hücresel alım, fagositoz yeteneği ve nitrik oksit üretiminin artması . J Etnoparmakol . 2007; 111 : 148–154. 10.1016 / j.jep.2006.11.006 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Manosroi A, Saraphanchotiwitthaya A, Manosroi J. Clausena kazı Burm.f. immünomodülatör faaliyetleri odun özleri . J Etnoparmakol . 2003; 89 : 155-160. 10.1016 / S0378-8741 (03) 00278-2 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
7. Manosroi A, Saraphanchotiwitthaya A, Manosroi J. Clausena kazısından odun sıcak sulu ekstraktından fraksiyonların immünomodülatör aktiviteleri . Fitoterapi . 2004; 75 : 302-308. 10.1016 / j.fitote.2004.01.009 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Manosroi A, Saraphanchotiwitthaya A, Manosroi J. Clausena excavata Burm.f'den elde edilen ağaç ekstrelerinin in vivo immünmodülatör aktivitesi . J Etnoparmakol . 2005; 102 : 5-9. 10.1016 / j.jep.2005.04.033 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
9. Jeong S, Yang B, Kim G, Jeong H, Wilson MA, Cho Y, et al. Coriolus versicolor'un (Türkiye Kuyruk Mantarı) meyve veren gövdelerinden elde edilen polisakkaritlerin makrofaj uyarıcı aktivitesi . J Med Gıda .2006; 9 : 175-181. 10.1089 / jmf.2006.9.175 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
10. Sengupta M, Sharma GD, Chakraborty B. Karbon tetraklorid zehirli İsviçre albino farelerinde Curcuma longa sulu ekstraktının hepatoprotektif ve immünomodülatör özellikleri . Asya Pac J Trop Biomed . 2011; 1 : 193–199. 10.1016 / S2221-1691 (11) 60026-9 [ PMC içermeyen makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Saravanan S, Prakash Babua N, Pandikumara P, Karunai Raja M, Paulraja MG, Ignacimuthua S. Enicostema axillare'nin immünomodülatör potansiyeli (Lam.) A. Raynal, geleneksel bir tıbbi bitki . J Etnoparmakol . 2012; 140 : 239-246. 10.1016 / j.jep.2012.01.010 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Diwanay S, Chitre D, Patwardhan B. Kanser kemoterapisinde botanik ilaçlarla immünoproteksiyon . J Etnoparmakol . 2004; 90 : 49-55. 10.1016 / j.jep.2003.09.023 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Manosroi A, Saraphanchotiwitthaya A, Manosroi J. Pouteria cambodiana (Pierre ex Dubard) Baehni ekstresinin in vitro immünomodülatör etkisi . J Etnoparmakol . 2005; 101 : 90–94. 10.1016 / j.jep.2005.03.031 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
14. Manosroi A, Saraphanchotiwitthaya A, Manosroi J. Pouteria cambodiana ekstrelerinin fare bağışıklık sisteminin in vitro immünomodülatör aktivitesi üzerine etkileri . Fitoterapi . 2006; 77 : 189–193. 10.1016 / j.fitote.2006.01.003 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Bishayi B, Roychowdhury S, Ghosh S, Sengupta M. CCl4 zehirli olgun albino sıçanlarda Tinospora cordifolia'nın hepatoprotektif ve immünomodülatör özellikleri . J Toxicol Sci . 2002; 27 : 139-146. 10.2131 / jts.27.139 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
16. Sengupta M, Sharma GD, Chakraborty B. Sulu Tinospora cordifolia ekstraktının CCl4 zehirli erkek albino farelerinden izole edilen periton makrofajlarının fonksiyonları üzerindeki etkisi . BMC Complem Altern Med . 2011; 11 : 102.10.1186 / 1472-6882-11-102 [ PMC içermeyen makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Sharma U, Bala M, Kumar N, Singh B, Munshi RK, Bhalerao S. Tinospora cordifolia'dan immünomodülatör aktif bileşikler . J Etnoparmakol . 2012; 141 : 918–926.10.1016 / j.jep.2012.03.027 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Mandal SC, Lakshmi SM. P harmabiliş ve fitoterapi araştırmaları: Dwivedi PK, Dwivedi SK, Kalita MC, editörler. Biyoçeşitlilik ve Çevre Biyoteknolojisi . Jodhpur: Bilimsel Yayıncılar (Hindistan); 2007. s. 177-224. [ Google Akademik ]
19. Weissenstein U, Kunz M, Urech K, Baumgartner S.Standartize ökse otu ( Viscum albüm ) ekstraktlarının in vitro olarak sitostatik ve sitotoksik etkilere ilişkin kemoterapötik ilaçlarla etkileşimi . BMC Complem Altern Med . 2014; 14 : 6 10.1186 / 1472-6882-14-6 [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Duong Van Huyen Sooryanarayana JP, Delignat S, Bloch MF, Kazatchkine MD, Kaveri SV. Lenfoblastoid hücrelerin , ökseotu lektininin terapötik bir preparasyonu olan Viscum albümü Qu FrF tarafından indüklenen apoptoza karşı değişken duyarlılığı . Kemoterapi 2001; 47 : 366–376.10.1159 / 000048545 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Duong Van Huyen JP, Bayry J, Delignat S, Gaston AT, Michel O, Bruneval P, vd. Endotel hücrelerinin apoptozunun Viscum albümü ile indüksiyonu : ökseotu lektinlerinin anti-tümöral özellikleri için bir rol . Mol Med . 2002; 8 : 600-606. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
22. Duong Van Huyen JP, Delignat S, Kazatchkine MD, Kaveri SV. Lenfoblastoid ve transforme edilmiş monositik hücre hatlarının, farklı kökenli Viscum albüm ekstraktlarının sitotoksik etkilerine duyarlılığının karşılaştırmalı çalışması . Kemoterapi . 2003; 49 : 298–302.10.1159 / 000074530 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Shanmugasundaram ERB, Rajeswari G, Başkaran K, Rajesh Kumar BR, Shanmugasundaram KR, Ahmath BK. İnsüline bağımlı diyabetes mellitusta kan şekerinin kontrolünde Gymnema sylvestre yaprak ekstraktı kullanımı . J Ethnopharmacol 1990; 30 : 281-294. 10.1016 / 0378-8741 (90) 90107-5 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Elluru SR, Duong Van Huyen JP, Delignat S, Prost F, Bayry J, Kazatchkine MD, vd. Ökse otunun ( Viscum album L.) immünomodülatör etkilerinin altında yatan moleküler mekanizmalar Iscador'u çıkarır . Arzneimittelforschung . 2006; 56 : 461–466.10.1055 / s-0031-1296813 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Elluru S, Duong van Huyen JP, Wootla B, Delignat S, Prost F, Negi V, et al. Viscum albüm hazırlığının tümör regresif etkileri: İmmünomodülatör mekanizmaların araştırılması . MEDICINA (Buenos Aires) . 2007; 67 ( Ek II ): 85–89 [ Google Akademik ]
26. Elluru SR, Duong van Huyen JP, Delignat S, Kazatchkine MD, Friboulet A, Kaveri SV ve diğ. İnsan dendritik hücrelerinin olgunlaşması ve aktivasyonunun başlatılması : Kanserde tamamlayıcı tedavi olarak Viscum albümünün faydalı etkisinin altında yatan bir mekanizma . BMC Kanseri . 2008; 8 : 161.10.1186 / 1471-2407-8-161 [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Elluru SR, Duong Van Huyen JP, Delignat S, Prost F, Heudes D, Kazatchkine MD, vd. Viscum album e xtracts'ın antianjiyogenik özellikleri endotel sitotoksisitesi ile ilişkilidir . Antikanser Arş . 2009; 29 : 2945-2950. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
28. Elluru SR, Saha C, Hedge P, Friboulet A, Bayry J, Kaveri SV. Viscum albümünün antienflamatuar etkilerinin incelenmesi : Sitokin kaynaklı siklo-oksijenaz-2 ekspresyonunun inhibisyonu ve prostaglandin E2 sekresyonu. İçinde: Zänker KS, Kaveri SV editörleri. Ökseotu: Mitolojiden Kanıta Dayalı Tıp . Transl Res Biomed. Basel , Karger ; 2015, cilt 4 , ss 67–73.10.1159 / 000375427 [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Hegde P, Maddur MS, Friboulet A, Bayry J, Kaveri SV. Viscum albümü, sitokin kaynaklı siklooksijenaz-2 ekspresyonunu seçici olarak inhibe ederek anti-enflamatuar etki gösterir . PLoS One 2011; 6 ( 10 ): e26312.10.1371 / journal.pone.0026312 [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
30. Saha C, Hegde P, Friboulet A, Bayry J, Kaveri SV. Viskoz albüm aracılı COX-2 inhibisyonu, COX-2 mRNA'nın dengesizleşmesini ima eder . BİRİ PLOS . 2015; 10 ( 2 ): e0114965.10.1371 / journal.pone.0114965 [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Otton R, Soriano FG, Verlengia R, Curi R. Diyabet, lenfositlerde apoptozu indükler . J Endokrinol . 2004; 182 : 145-156. 10.1677 / joe.0.1820145 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Eliashiv A, Olumide F, Norton L, Eiseman B. Diyabette hücre aracılı bağışıklığın depresyonu . Arch Surg . 1978; 113 : 1180–1183'te açıklanmaktadır. 10.1001 / archsurg.1978.01370220066011 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
33. Geerlings SE, Hoepelman AMAÇ. Diyabetes mellituslu hastalarda (DM) bağışıklık fonksiyon bozukluğu . FEMS Immunol Med Mic . 1999; 26 : 259-265. 10.1016 / S0928-8244 (99) 00142-X [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
34. Liç MJ. Diabetes mellitus için Gymnema sylvestre : sistematik bir derleme . J Altern Complem Med . 2007; 13 : 977–983.10.1089 / acm.2006.6387 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
35. Sabu MC, Kuttan R. Tıbbi bitkilerin anti-diyabetik aktivitesi ve antioksidan özellikleri ile ilişkisi . J Etnoparmakol . 2002; 81 : 155-160. 10.1016 / S0378-8741 (02) 00034-X [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
36. Shanmugasundaram ER, Gopinath KL, Radha Shanmugasundaram K, Rajendran VM. Gymnema sylvestre yaprak özleri verilen streptozotosin-diyabetik sıçanlarda Langerhans adacıklarının olası rejenerasyonu . J Etnoparmakol . 1990; 30 : 265-279. 10.1016 / 0378-8741 (90) 90106-4 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
37. Fushiki T, Kojima A, Imoto T, Inoue K, Sugimoto E. Gymnema sylvestre yaprakları ve saflaştırılmış gymnemik asit özü, sıçanlarda glikozla uyarılan gastrik inhibitör peptit sekresyonunu inhibe eder . J Nutr.1992; 122 : 2367-2373. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
38. Persaud SJ, Al Majed H, Raman A, Jones PM. Gymnema sylvestre , artan geçirgenlik ile in vitro insülin salınımını uyarır . J Endokrinol . 1999; 163 : 207–212.10.1677 / joe.0.1630207 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
39. Liu B, Asare-Anane H, Al-Romaiyan A, Huang G, Amiel SA, Jones PM, vd. Fare beta hücrelerinde ve Langerhans'ın insan adacıklarında sulu bir Gymnema sylvestre ekstresinin insülinotropik aktivitesinin karakterizasyonu . Hücre Physiol Biochem . 2009; 23 : 124–132. 10.1159 / 000204101 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
40. Al-Romaiyan A, Liu B, Asare-Anane H, Maity CR, Chatterjee SK, Koley N, et al. Yeni bir Gymnema sylvestre özütü in vivo ve in vitro insan adacıklarından insülin sekresyonunu uyarır . Phytother Arş . 2010; 24 : 1370–376. 10.1002 / ptr.3125 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
41. El-Romaiyan A, Kral AJ, Persaud SJ, Jones PM. Yeni bir Gymnema sylvestre özütü in vivo glikoz toleransını arttırır ve insülin sekresyonunu ve in vitro sentezini uyarır . Phytother Arş . 2013; 27 : 1006-1011. 10.1002 / ptr.4815 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
42. Porchezhian E, Dobriyal R. Gymnema sylvestre'nin ilerlemelerine genel bakış : Kimya, farmakoloji ve patentler . Pharmazie 2003; 58 : 5-12. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
43. Nunn CL, Lindenfors P, Pursall ER, Rolff J. Bağışıklık fonksiyonunda cinsel dimorfizm üzerine . Phil Trans R Soc B 2009; 364 : 61-69. 10.1098 / rstb.2008.0148 [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
44. Flanagan KL. Biyomedikal araştırmalarda cinsel dimorfizm: cinsiyete göre analiz çağrısı . Trans R Soc Trop Med Hyg 2014; 108 : 385-387. 10.1093 / trstmh / tru079 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
45. Tripathi MK, Singh R.Testosteronun tatlı su yılanında bağışıklık fonksiyonu üzerindeki farklı baskılayıcı etkileri, Natrix piscator : Bir in Vitro çalışması . PLOS ONE 2014; 9 ( 8 ): e104431 10.1371 / journal.pone.0104431 [ PMC içermeyen makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
46. Tripathi MK, Singh R, Hasta AK. Tatlı su yılanı, Natrix piscator splenositlerin bağışıklık tepkilerinde günlük ve mevsimsel ritimler . BİRİ PLOS . 2015; 10 ( 2 ): e0116588 10.1371 / journal.pone.0116588 [ PMC içermeyen makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
47. Berger J, Slapnickova M. Sıçan nötrofil fagositozunun sirkadiyen yapısı . Comp Clin Pathol . 2003; 12 : 84-89. 10.1007 / s00580-003-0478-y [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
48. Ding AH, Nathan CF, Stuehr DJ. Fare peritoneal makrofajlarından reaktif azot ara maddelerin ve reaktif oksijen ara maddelerin salınması. Aktive edici sitokinlerin ve bağımsız üretim kanıtlarının karşılaştırılması . J Immunol .1988; 141 : 2407-2412'de açıklanmaktadır. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
49. Berridge MV, Herst PM, Tan AS. Hücre biyolojisinde araç olarak tetrazolium boyaları: hücresel indirgenmelerine yeni bakışlar . Biotechnol Annu Rev . 2005; 11 : 127–152. 10.1016 / S1387-2656 (05) 11004-7 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
50. Mossmann T. Hücresel büyüme ve hayatta kalma için hızlı kolorimetrik analiz: Proliferasyon ve sitotoksisite deneylerine uygulama . J İmmünol Yöntemleri . 1983; 65 : 55–63.10.1016 / 0022-1759 (83) 90303-4 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
51. Cory AH, Owen TC, Barltrop JA, Cory JG. Kültürde hücre büyüme deneyleri için bir sulu çözünür tetrazolium / formazan deneyinin kullanılması . Kanser Komünü . 1991; 3 : 207-212. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
52. Gieni RS, Li Y, Saman Camı KT. [Karşılaştırma ³ MTT ve H] timidin dahil insan için biyolojik testler MTS tabanlı ve IL-2 ve IL-4 analizi murin. Tetrazolium deneyleri, belirgin bir şekilde arttırılmış hassasiyet sağlar y . J İmmünol Yöntemleri . 1995; 187 : 85–93.10.1016 / 0022-1759 (95) 00170-F [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
53. Shanmugasundaram ERB, Rajeswari G, Başkaran K, Rajesh Kumar BR, Shanmugasundaram KR, Ahmath BK. İnsüline bağımlı diyabetes mellitusta kan şekerinin kontrolünde Gymnema sylvestre yaprak ekstraktı kullanımı . J Ethnopharmacol 1990; 30 : 281-294. 10.1016 / 0378-8741 (90) 90107-5 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
54. Başkaran K, Ahamath BK, Shanmugasundaram KR, Shanmugasundaram ERB. İnsüline bağımlı olmayan diabetes mellitus hastalarında Gymnema sylvestre'den bir yaprak ekstraktının antidiyabetik etkisi . J Ethnopharmacol 1990; 30 : 295–305.10.1016 / 0378-8741 (90) 90108-6 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
55. Babior BM 1984. Fagositlerin Solunum Patlaması . J Clin Invest . 1984; 73 : 599-601. 10.1172 / JCI111249 [ PMC içermeyen makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
56. Khanna VG, Kannabiran K. Gymnema sylvestre ve Eclipta prostrata'nın HeLa hücreleri üzerindeki yapraklarından izole edilen saponinlerin antikanser-sitotoksik aktivitesi . İnternet J Yeşil Ecz . 2009; 3 : 227–229. 10.4103 / 0973-8258.56280 [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
57. Wu X, Mao G, Fan Q, Zhao T, Zhao J, Li F, et al. Gymnema sylvestre'den polisakkaritlerin izolasyonu, saflaştırılması, immünolojik ve anti-tümör aktiviteleri . Food Res Int . 2012; 48 : 935–939. 10.1016 / j.foodres.2012.02.006 [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
58. DSÖ. Bitkisel malzemeler için kalite kontrol yöntemleri - Tıbbi bitki materyalleri için kalite kontrol yöntemlerinin güncellenmiş baskısı, 1998. 2011: 1-49. Mevcut: http://www.who.int/medicinedocs/en/d/Jh1791e/

Duyuru

Gurmar Forte, Gurmar, Gymnema Sylvestre

Gurmar Forte, Gurmar, Gymnema Sylvestre

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap