Kızılcık Meyvesi Ekstraktının Antimikrobiyal ve Antioksidan Değerlendirilmesi mas L.
Demet Yigit
Erzincan Üniversitesi, Eğitim Fakültesi, Fen Eğitimi Bölümü, Erzincan, Türkiye
Bu çalışmada, Kızılcık meyvelerinin su ve metanol özleri (Cornus mas L.) antioksidan ve antimikrobiyal özelliklerin değerlendirilmesi üzerine araşdırma yapıldı. Antioksidan özellikler, 2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikal temizleme kabiliyeti ve lipit peroksidasyon inhibisyon aktivitesinin belirlenmesi ile değerlendirildi. Ekstraktların toplam fenolik içerikleri de Folin yöntemi ile tespit edilmiştir. Meyvelerin özleri antioksidan potansiyele sahiptir. DPPH radikal temizleme etkinliği, su ekstraktında (% 36.6) ve metanol ekstraktından (% 30.6) daha yüksekti. Bunun aksine, meyvelerin metanol ekstraktı su ekstraktından (% 16.7) daha fazla aktiviteye (% 18.9) sahiptir, ayrıca daha yüksek fenolik bileşik içeriklerine sahiptir.
Yukarıdaki ekstraktların antimikrobiyal aktiviteleri, 5 bakteri (Entorobacter aerogenes, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeroginosa, Staphylococcus aureus) ve 5 maya türüne (Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapisilosis, Candida tropicalis)ait insan patojenik suşlarının 93 klinik izolatına karşı da test edildi. Sonuçlar kızılcık kirazlarının potansiyel olarak zengin antimikrobiyal ajan kaynağı olduğunu göstermiştir. En etkili antibakteriyel aktivite, 25 mm inhibisyon bölgesi ve 0.156 mg / ml Minimum İnhibitör Konsantrasyon (MIC) değerine sahip S. aureus'a karşı kızılcık meyvesinin metanol ve su özütü ile ifade edildi. Sadece meyvenin metanol ekstreleri, test edilmiş insan patojen klinik izolatlarına karşı antifungal aktiviteye sahiptir.
Anahtar kelimeler
Antimikrobiyal aktivite, Antioksidan aktivite, Kızılcık kiraz
1. GİRİŞ
Meyve ve sebzeler sağlıklı, fonksiyonel gıdalar olarak kanser ve kardiyovasküler hastalık gibi başlıca kronik hastalıklara karşı riskleri önler. Meyve ve sebzelerin bu özellikleri çeşitli antioksidan bileşiklere bağlanmıştır. Serbest radikallerin proteinlere, lipitlere ve nükleik asitlere oksidatif hasara neden olduğunu gösteren birçok kanıt vardır. Serbest radikaller bu hastalıklardan en çok sorumlu olan faktördür. Bu nedenle, serbest radikalleri nötralize edebilen antioksidanlar, bu hastalıkların önlenmesinde önemli olabilir.
Meyve ve sebzeler birçok farklı antioksidan bileşen içerir. Flavonlar, flavononlar, izoflavonlar, antosiyaninler, kateşin ve izokatekin, sıklıkla görülen bazı polifenollerdir ve insan diyetinin bileşenleri güçlü antioksidan aktivitelere sahiptir. Şifalı bitkiler çeşitli ilaçların en büyük kaynağıdır. Özellikle bitki özlerinin antimikrobiyal aktivitesinin farmasötikler, doğal terapiler ve alternatif tıp dahil birçok uygulaması vardı. Aslında, meyve ve sebzeler sadece birincil gıda kaynağı değil, aynı zamanda potansiyel yararlı sağlık etkileri olabilecek çeşitli biyoaktif bileşenler de içerirler. Bu nedenle meyve ve sebzeler insan bakteriyel ve fungal patojenlerine karşı önemli bir güç sergiler.
Şifalı bitkiler çeşitli ilaçların en büyük kaynağıdır. Özellikle antimikrobiyal bitki ekstraktlarının aktivitesi, farmasötikler, doğal terapiler ve alternatif tıp da dahil olmak üzere birçok uygulamaya sahiptir. Aslında meyve ve sebzeler sadece birincil gıda kaynağı değil, sağlık etkileri potansiyel yararlı olabilecek çeşitli biyoaktif bileşenler içerirler. Bu nedenle meyve ve sebzeler insana bakteriyeler ve fungal patojenlere karşı önemli bir güç sergiler.
Kızılcık (Cornus mas L.) Türkiye'nin farklı bölgelerinde yaygın olarak yetiştirilmektedir. Değişir bir çalıdan koyu kahverengi dalları ile 7-8 m yüksekliğe ulaşan küçük bir ağaca ve yeşilimsi dallar üzerinde yetişir. Yapraklar zıttır, 4-10 cm uzunluğundadır ve dikdörtgen şeklinde ovaldir. Çiçekler sarı yaprakları ile 5–10 mm çapında ve 10–25 arası kümeler halinde kış sonu yetişir. Meyve sert olarak, dikdörtgen, kırmızı yaklaşık 2 cm uzunluğunda ve 1.5 cm çapında tek bir tohuma sahiptir.
Türkiye'de kızılcık sadece taze değil aynı zamanda reçel, marmelat şurubu ve çeşitli alkolsüz içecekler olarak da tüketilmektedir. Kirazlar zengin vitamin kaynağıdır ve potasyum, a-tokoferol, askorbik asit, biyotin, riboflavin, mükemmel bir kaynak dahil mineraller, lif ve yüksek miktarda antosiyanin içerir. Gıda olarak tüketimin yanı sıra, Türkiye'de bitki yaprakları, kabukları ve meyveleri geleneksel ilaç olarak kullanılmaktadır. Bitki astım krizi, öksürük, bronşit, ishal, diyabet, hemoroid, gastrointestinal için kullanılır bozuklukları, yara iyileşmesi ve diüretik olarak, yara iyileşmesi, anti-enflamatuar, idrar antienflamatuar ve bağışıklık sistemini güçlendirir.
Kirazlar, meyveleri vitamin, organik asit, yağ bakımından zengin olduğu için hala araştırılmaktadır. Asit ve tanenler özellikle son yıllarda yapılan çalışmalar antioksidan üzerine odaklanmıştır. Bu bitki ekstraktının antifungal aktivitesi hakkında spesifik bir çalışma yoktur. Dinda ve arkadaşları, incelemelerinde sistematik bir çalışmanın yeni bir geliştirme için yararlı olabileceğini bildirdi. Bildiğimiz kadarıyla, elimizdeki literatürde sadece bir rapor vardır ve bu da Ekstraktların Candida albicans'a karşı antifungal aktivitesinin açıklanmasıdır.
The specific objectives of this study were to determine the total phenolic contents, and antioxidant properties of cornelian cherries, to investigate the antimicrobial properties on some human pathogenic clinical isolates, especially different Candida species.
Bu çalışmanın özel hedefleri toplam fenolik içeriğini ve antioksidan özelliklerini belirlemek, bazı insan patojeniklerinin antimikrobiyal özelliklerini araştırmak, klinik izolatlar, özellikle farklı Candida türlerine karşı yöntemler hazırlamaktır.
2. MALZEME VE YÖNTEMLER
2.1. Ekstraktların Hazırlanması
Kızılcık meyveleri (C. mas L.) Türkiye'nin Erzincan bölgesinin Bayırbağ köyünde
meyveleri olgunlaştığında toplanıyor. Taze meyve numuneleri laboratuvara taşınıyor ve tohumlar elle çıkarılıyor. Meyveler bir Soxhlet cihazında 24 saat boyunca metanol ile ekstre ediliyor ve sonra metanol bir döner buharlaştırıcı ile buharlaştırılıyor.
Su ekstreleri de bir cam şişede 20 g malzemeye kaynar su ilave edilerek hazırlanıyor ve odada inkübe ediliyor. Sonra döner çalkalayıcıda 2 saat boyunca oda sıcaklığında bekletiliyor (200 rpm). Karışım Whatman (No.1) filtre kağıdı kullanılarak filtre ediliyor ve daha sonra filtrat liyofilize ediliyor. Tüm ekstraktlar –24 ° C'de kullanılana kadar dondurucuda saklanıyor.
2.2. Mikroorganizmaları Test Edin
Antimikrobiyal aktivite 53 bakteri ve 40 Candida türünün klinik izolatlarına karşı başarılı sonuç vermiştir. Mikroorganizmalar Erzurum Tıp Fakültesi Klinik Mikrobiyoloji Bölümü tarafından sağlandı. Mikroorganizma türleri, izolasyon kökenleri ve sayıları Tablo 1'de verilmiştir.
2.3. Antimikrobiyal etkinlik
2.3.1. Disk difüzyon testi
Meyvelerin metanol ve su ekstraksiyonu çözücülerle (metanol ve steril arıtılmış su) çözündürüldü. Son konsantrasyon 30 mg / ml olarak ayarlandı. Antimikrobiyal test, 108 koloni oluşturan birim (CFU) / ml bakteri ve besin agarına yayılmış 106 CFU / ml maya içeren süspansiyon kullanılarak disk difüzyon yöntemi ile gerçekleştirildi.
6 mm çapında disk özütlerle emprenye edilmiş ve aşılanmış besin agarına (NA) yerleştirilmiştir. Negatif kontroller aynı çözücüler (metanol ve su) kullanılarak hazırlanmış. Pozitif kontroller Gram-pozitif bakteriler için Ofloksasin, Gram-negatif bakterilerde Cefaperazon-sulbaktam için Amfoterisin B Candida spp kullanılmış. Aşılanan plakalar bakteriler için 37 ° C'de 24 saat, maya için 48 saat boyunca 35 ° C'de süreyle inkübe ediliyor. Daha sonra inhibisyon bölgesinde antimikrobiyal aktivite ölçülerek değerlendiriliyor.
2.3.2. Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK)
Mikroorganizmalar için Minimal İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK) değerleri belirlenmiş ve disk difüzyon analizinde duyarlı oldukları bulunmuştur.
Ekstraktların (MİK) değerleri mikrobiyal suşlar, bir mikro-kuyu seyreltme metoduna göre belirlenmiştir. Aşıları mikroorganizmalar 12 saatlik et suyu kültürlerinden hazırlandı ve süspansiyonlar McFarland standart bulanıklık 0.5'e ayarlandı.
İlk olarak % 10 dimetil sülfoksit içerisinde çözündürülen özler,10 mg / ml'ye seyreltildi ve daha sonra bir konsantrasyon aralığında besin suyu içeren steril bir test tüpünde seri iki kat seyreltme yapıldı (0.078-10 mg / ml). 96 oyuklu plakalar her bir oyuğa 95 ul besin suyu (NB) ve 5-i 1 aşı dağıtılmasıyla hazırlandı.
Başlangıçta en yüksek konsantrasyonda hazırlanan 100 ul ekstraktlar ilave edildi, ardından önce kuyu, daha sonra seri dilüsyonlardan 100 ul diğer kuyulara aktarıldı. Plakalar 24 saat (bakteri suşları için) ve 48 saat (mantar suşları için) inkübe ediliyor. (MİK) mikroorganizmaların büyümesini engellemek için yapılan ekstraktların konsantrasyonunu en düşük olarak tanımladı.
2.4. Antioksidan Etki
Antioksidan etki, tiyosiyanat yöntemiyle belirlendi. Ekstraktların stok çözeltileri 2 mg / ml konsantrasyonda hazırlandı. Stok çözeltiler 2.5 ml 0.02 M ile karıştırıldı, linoleik asit emülsiyonu [pH 7.4 fosfa-tamponlu salin içinde eşit ağırlıkta bir Tween-20 (Sigma) içerir] ve nihai hacim, fosfat tamponlu salin (0.02 M, pH 7.4) ile 5 ml'ye ayarlandı, bir test tüpünde tutuldu ve karanlıkta 40 ° C'de inkübe edildi.
Ekstraktların nihai konsantrasyonları 100 ug / ml idi. Butillenmiş hidroksitoluen (BHT), pozitif kontrol (100 ug / ml) olarak kullanıldı. Peroksit miktarı 24 saat inkübasyondan sonra FeCl2 ve tiyosiyanat ile renklendirmeden sonra 500 nm'de absorbans ölçülerek belirlendi.
Düşük absorbansda antioksidan etki daha yüksek gösterdi. Üç örnek için antioksidan aktivite ölçümleri yapıldı ve değerler üç kopyanın ortalamasıdır. Bu etkinlik Lipid Peroksidasyon İnhibisyon Yüzdesi ve denklem ile hesaplama şeklinde verildi.
Lipid peroksidasyon inhibisyonu
2.5. DPPH Radikal Süpürme Etkinliği
İlk önce metanol içinde 0.5 mM DPPH radikal çözeltisi hazırlandı ve daha sonra bu çözeltinin 1 ml'si 3 ml numune çözeltisi ile karıştırıldı. Ekstraktların nihai konsantrasyonları 100 ug / ml idi. BHT, aynı konsantrasyonda pozitif kontrol olarak kullanıldı. 30 dakika inkübasyondan sonra karanlıkta, absorbans 517 nm'de ölçülmüştür. DPPH'nin absorbansını azaltmak çözeltisi, DPPH radikal süpürme aktivitesinde bir artışı gösterir. Bu etkinlik DPPH radikal süpürme yüzdesi ve denklem ile hesaplanır.
Kontrol çözeltisi 3 ml etanol ile karıştırılmış 1 ml DPPH çözeltisi içeriyor. 3 örnek replikasyonlar için DPPH radikal süpürme aktivitesi ölçümleri gerçekleştirildi ve değerler ortalama üç replikattır.
2.6. Toplam Fenolik Bileşiklerin Tayini
Ekstrakt çözeltisi bir tüpe aktarılmış ve daha sonra hacim su ilavesile 4 ml'ye ayarlanmıştır. Daha sonra buna 0.25 ml Folin-Ciocalteu Reaktif ekleniyor, 3 dakika sonra ise 0.75 ml Na2C03 çözeltisi ilave ediliyor. Karışım bir çalkalayıcıda oda sıcaklığında 2 saat süreyle karıştırılıyor, sonra 760 nm'de ölçüldü. Fenolik bileşiklerin toplam miktarı üç numune replikasyonu için gerçekleştiriliyior ve değerler ortalama üç kopya olarak sunuluyor. Kalibrasyon eğrisi için standart olarak gallik asit kullanılmıştır. Fenolik bileşik muhtevası, aşağıdaki denklem temel alınarak kalibrasyon eğrisinde gallik asit eşdeğeri olarak ifade edildi:
Y= 0.2582X
Y, örneğin emilimidir ve X, eşdeğeri (ug / ml) gallik asittir.
3. SONUÇLAR VE GÖRÜŞLER
3.1. Antioksidan Aktiviteler
Kızılcık meyvelerinin su ve metanol ekstraktlarının antioksidan aktiviteleri linoleik içerisinde oluşan peroksit miktarının tiyosiyanat yöntemi kullanılarak belirlendi inkübasyon sırasında asit emülsiyonu spektrofotometrik olarak belirlenir. Suyun antioksidan aktiviteleri arasında çok fazla fark olmamasına rağmen, metanol ekstraktlarında, yüksek antioksidan aktivite metanol ekstraktından elde edilirken, düşük aktivite su özlü kızılcık meyvelerinden (% 16.7 ve% 18.9, (Şekil 1).
Kızılcık meyveleri yüksek fenolik içerik, askorbik asit, renk ve tattan da sorumlu olan antosiyanin içeriği ve ayrıca antioksidan özelliklere sahip. Tüm ekstraktların antioksidan potansiyele sahip olduğu ve bulgular bu verilerle uyumludur.
DPPH serbest radikali, birincil antioksidan aktivitenin belirlenmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır, yani saf antioksidan bileşiklerin, bitkinin ve meyvenin serbest radikal temizleme faaliyetleri özler ve gıda malzemeleri. Deney, metanol içindeki DPPH radikallerinin azaltılmasına dayanmaktadır ve 517 nm'de bir absorbans düşüşüne neden olan su 100 ug / ml su ve kızılcık meyvesi metanol özü konsantrasyonunda, temizleme faaliyetleri sırasıyla% 36.6 ve% 30.6 idi
Bulmak ilginç metanol ekstraktlarının daha yüksek antioksidan aktiviteye sahip olmasına rağmen; DPPH radikalleri temizleme faaliyetleri su ekstraktlarından daha düşüktü. Ancak, oranlarla karşılaştırıldığında ve meyve özlerinde kullanılan yaygın sentetik antioksidanların DPPH aktivitesinin kızılcık su ve metanol ekstraktlarının radikal süpürücü aktivitesi BHT (Şekil 2). Kızılcık meyve suyunun güçlü antioksidan güce sahip olduğu bulundu, diğer meyve sularından daha yüksektir. Ayrıca, bazı yazarlara potansiyel antioksidan bildirilmiştir. Kızılcık yaprak ve çiçeklerinin aktivites. Ekstraktlarda bulunan toplam fenolik bileşikler Folin-ciocalteu kullanılarak belirlendi fenol reaktifi. Lipid Peroksidasyon aktivitesi gibi, toplam fenolik bileşiklerin miktarları da metanol meyve özütlerinde su özütlerine göre daha yüksektir. Fenolik bileşik içeriği 100 ug / ml cornelian metanol ekstraktında 4.5 ug / ml gallik asit eşdeğeri olarak mevcuttu kiraz meyveleri ve içeriği 1.7 ug / ml gallik ile 100 ug / ml su ekstraktından elde edilmiştir.(Tablo 1).
Genel olarak, yüksek miktarda fenolik bileşik içeren özütler de yüksek antioksidan aktivite. Gil ve arkadaşları güçlü bir korelasyon olduğunu bildirdi, (r = 0.930 - 0.960) bazı sert çekirdekli meyvelerde toplam fenolik ve antioksidan aktivite arasında. Bu karışımdaki antioksidanlar arasındaki sinerjiden kaynaklanıyor olabilir. Kızılcık meyveleri zengindir ortalama 223-292 mg siyanidin 3-O-glukozit ile antosiyaninlerde ve fenolik içeriklerde. 100 g taze meyve başına 281-704 mg Galik asit eşdeğeri (GAE) eşdeğeri (CGE) ve sırasıyla. Sadece meyveler değil, yapraklar da fenolik içerik bakımından zengindir. (% 11.73) meyvelere (% 9.11) kıyasla.
3.2. Antimikrobiyal Aktiviteler
Kızılcık meyvelerinin su ve metanol ekstraktlarının antimikrobiyal aktivitesi değerlendirildi disk difüzyon yöntemiyle. İnsan patojenik mikroorganizmasının toplam 93 klinik izolatı 5 bakteri ve 5 Candida spp. Bu araştırmalarda kullanılmıştır (Tablo 2). Negatif kontroller inhibe edici etki göstermedi. İnhibisyon çapları ve MIC değerleri pozitif kontroller 18-20 mm arasındaydı; Ofloksasin için 0.12-1 ug / mL, 19-22 mm; 0,5-1
Sefaperazon ve 12-15 mm için ug / mL; Amfoterisin B için sırasıyla 0.12-0.5 ug /mL.
Bulgularımız meyvelerin metanol ve su ekstraktlarının antibakteriyel aktiviteye sahip olduğunu gösterdi.
Gram-pozitif ve Gram-negatif bakterilere karşı. Meyve özütünün insan patojenik kliniğinin 5 bakteri türünden 3'ü izole edilmiştir. En yüksek antibakteriyel
aktivite
25 mm ile S. aureus'a karşı kızılcık meyvelerinin metanol ekstraktıyla eksprese edildi
36,6 30,6
81
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
W 100 ug / ml M 100 ug / ml BHT 100 ug / ml
DPPH Radikal
Atma (%) inhibisyon bölgesi ve 0.156 mg / ml MIC değeri (Tablo 3). E. coli ve P. aueroginosa'ya karşı, 10 mm inhibisyon zon çapı ve 0.312 mg / ml MIC değerleri bulunmuştur. E.aerogenler ve P. mirabilis inhibe edilmedi.
Kızılcık kirazlarının antifungal aktivitesini taramak için sadece bir aktivite tespit edildi. Antikandidal aktivite, Candida albicans'a karşı meyvelerin metanol özütü ile sergilendi. 8mm inhibisyon bölgesi ve 0.625 mg / mL MIC değeri. Meyve özleri etkinlik göstermedi 4 insan patojenik Candida spp. Derste elde edilen sonuçlara göre Mevcut çalışmada, Candidal suşlarının taranan her iki meyve özüne karşı dirençli olduğu bulunmuştur. Benzer şekilde, daha önce mantarların bitki özlerine en dayanıklı olduğu bildirilmiştir.
Avrupa kornerinin yaprak ekstraktlarının antimikrobiyal aktivitesi bildirilmiştir.
Kızılcık tohumu özü (10 mg / μL), S. aureus ve E. coli. Diğer yandan farklı yazarlar metanol ve Kızılcık meyvelerinin, yapraklarının ve tohumlarının etanol özleri önemli antibakteriyel gösterdi. S. aureus, E. coli ve P. aeruginosa'ya karşı aktivite ve C. albicans'a karşı antifungal aktivite A. fumigatlar. Ayrıca, Kyriakopoulos ve Dinda bahsi geçen meyve S. aureus'a karşı antibakteriyel aktivite ekstraktının güçlü olduğunu gösterdi. Sonuçlarımız bu raporlarla uyumludur
bunun üzerinde S. aureus'a karşı anlamlı aktivite ve
E. coli, P. aeruginosa ve Candida albicans.
SONUÇLAR
Sonuç olarak, meyve ekstraktlarının antibakteriyel aktivitesi ile ilgili bulgularımız, diyare ve gastrointestinal bozukluklara karşı bazı etnofarmakolojik kullanımları haklı çıkarabilir çünkü bu meyvelerin bazı insan patojenlerine (E. coli) karşı aktiviteleri var. Öte yandan antioksidan aktivite, bağışıklığın iyileştirilmesi gibi etnofarmakolojik kullanımları destekleyebilir. Ayrıca, bu sonuçlar, bu meyvelerin sadece
gıda değil, aynı zamanda yüksek antioksidan ve antimikrobiyal etkilerle değerli bir öneme sahiptir.
Demet Yigit
Erzincan Üniversitesi, Eğitim Fakültesi, Fen Eğitimi Bölümü, Erzincan, Türkiye
Bu çalışmada, Kızılcık meyvelerinin su ve metanol özleri (Cornus mas L.) antioksidan ve antimikrobiyal özelliklerin değerlendirilmesi üzerine araşdırma yapıldı. Antioksidan özellikler, 2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikal temizleme kabiliyeti ve lipit peroksidasyon inhibisyon aktivitesinin belirlenmesi ile değerlendirildi. Ekstraktların toplam fenolik içerikleri de Folin yöntemi ile tespit edilmiştir. Meyvelerin özleri antioksidan potansiyele sahiptir. DPPH radikal temizleme etkinliği, su ekstraktında (% 36.6) ve metanol ekstraktından (% 30.6) daha yüksekti. Bunun aksine, meyvelerin metanol ekstraktı su ekstraktından (% 16.7) daha fazla aktiviteye (% 18.9) sahiptir, ayrıca daha yüksek fenolik bileşik içeriklerine sahiptir.
Yukarıdaki ekstraktların antimikrobiyal aktiviteleri, 5 bakteri (Entorobacter aerogenes, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeroginosa, Staphylococcus aureus) ve 5 maya türüne (Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapisilosis, Candida tropicalis)ait insan patojenik suşlarının 93 klinik izolatına karşı da test edildi. Sonuçlar kızılcık kirazlarının potansiyel olarak zengin antimikrobiyal ajan kaynağı olduğunu göstermiştir. En etkili antibakteriyel aktivite, 25 mm inhibisyon bölgesi ve 0.156 mg / ml Minimum İnhibitör Konsantrasyon (MIC) değerine sahip S. aureus'a karşı kızılcık meyvesinin metanol ve su özütü ile ifade edildi. Sadece meyvenin metanol ekstreleri, test edilmiş insan patojen klinik izolatlarına karşı antifungal aktiviteye sahiptir.
Anahtar kelimeler
Antimikrobiyal aktivite, Antioksidan aktivite, Kızılcık kiraz
1. GİRİŞ
Meyve ve sebzeler sağlıklı, fonksiyonel gıdalar olarak kanser ve kardiyovasküler hastalık gibi başlıca kronik hastalıklara karşı riskleri önler. Meyve ve sebzelerin bu özellikleri çeşitli antioksidan bileşiklere bağlanmıştır. Serbest radikallerin proteinlere, lipitlere ve nükleik asitlere oksidatif hasara neden olduğunu gösteren birçok kanıt vardır. Serbest radikaller bu hastalıklardan en çok sorumlu olan faktördür. Bu nedenle, serbest radikalleri nötralize edebilen antioksidanlar, bu hastalıkların önlenmesinde önemli olabilir.
Meyve ve sebzeler birçok farklı antioksidan bileşen içerir. Flavonlar, flavononlar, izoflavonlar, antosiyaninler, kateşin ve izokatekin, sıklıkla görülen bazı polifenollerdir ve insan diyetinin bileşenleri güçlü antioksidan aktivitelere sahiptir. Şifalı bitkiler çeşitli ilaçların en büyük kaynağıdır. Özellikle bitki özlerinin antimikrobiyal aktivitesinin farmasötikler, doğal terapiler ve alternatif tıp dahil birçok uygulaması vardı. Aslında, meyve ve sebzeler sadece birincil gıda kaynağı değil, aynı zamanda potansiyel yararlı sağlık etkileri olabilecek çeşitli biyoaktif bileşenler de içerirler. Bu nedenle meyve ve sebzeler insan bakteriyel ve fungal patojenlerine karşı önemli bir güç sergiler.
Şifalı bitkiler çeşitli ilaçların en büyük kaynağıdır. Özellikle antimikrobiyal bitki ekstraktlarının aktivitesi, farmasötikler, doğal terapiler ve alternatif tıp da dahil olmak üzere birçok uygulamaya sahiptir. Aslında meyve ve sebzeler sadece birincil gıda kaynağı değil, sağlık etkileri potansiyel yararlı olabilecek çeşitli biyoaktif bileşenler içerirler. Bu nedenle meyve ve sebzeler insana bakteriyeler ve fungal patojenlere karşı önemli bir güç sergiler.
Kızılcık (Cornus mas L.) Türkiye'nin farklı bölgelerinde yaygın olarak yetiştirilmektedir. Değişir bir çalıdan koyu kahverengi dalları ile 7-8 m yüksekliğe ulaşan küçük bir ağaca ve yeşilimsi dallar üzerinde yetişir. Yapraklar zıttır, 4-10 cm uzunluğundadır ve dikdörtgen şeklinde ovaldir. Çiçekler sarı yaprakları ile 5–10 mm çapında ve 10–25 arası kümeler halinde kış sonu yetişir. Meyve sert olarak, dikdörtgen, kırmızı yaklaşık 2 cm uzunluğunda ve 1.5 cm çapında tek bir tohuma sahiptir.
Türkiye'de kızılcık sadece taze değil aynı zamanda reçel, marmelat şurubu ve çeşitli alkolsüz içecekler olarak da tüketilmektedir. Kirazlar zengin vitamin kaynağıdır ve potasyum, a-tokoferol, askorbik asit, biyotin, riboflavin, mükemmel bir kaynak dahil mineraller, lif ve yüksek miktarda antosiyanin içerir. Gıda olarak tüketimin yanı sıra, Türkiye'de bitki yaprakları, kabukları ve meyveleri geleneksel ilaç olarak kullanılmaktadır. Bitki astım krizi, öksürük, bronşit, ishal, diyabet, hemoroid, gastrointestinal için kullanılır bozuklukları, yara iyileşmesi ve diüretik olarak, yara iyileşmesi, anti-enflamatuar, idrar antienflamatuar ve bağışıklık sistemini güçlendirir.
Kirazlar, meyveleri vitamin, organik asit, yağ bakımından zengin olduğu için hala araştırılmaktadır. Asit ve tanenler özellikle son yıllarda yapılan çalışmalar antioksidan üzerine odaklanmıştır. Bu bitki ekstraktının antifungal aktivitesi hakkında spesifik bir çalışma yoktur. Dinda ve arkadaşları, incelemelerinde sistematik bir çalışmanın yeni bir geliştirme için yararlı olabileceğini bildirdi. Bildiğimiz kadarıyla, elimizdeki literatürde sadece bir rapor vardır ve bu da Ekstraktların Candida albicans'a karşı antifungal aktivitesinin açıklanmasıdır.
The specific objectives of this study were to determine the total phenolic contents, and antioxidant properties of cornelian cherries, to investigate the antimicrobial properties on some human pathogenic clinical isolates, especially different Candida species.
Bu çalışmanın özel hedefleri toplam fenolik içeriğini ve antioksidan özelliklerini belirlemek, bazı insan patojeniklerinin antimikrobiyal özelliklerini araştırmak, klinik izolatlar, özellikle farklı Candida türlerine karşı yöntemler hazırlamaktır.
2. MALZEME VE YÖNTEMLER
2.1. Ekstraktların Hazırlanması
Kızılcık meyveleri (C. mas L.) Türkiye'nin Erzincan bölgesinin Bayırbağ köyünde
meyveleri olgunlaştığında toplanıyor. Taze meyve numuneleri laboratuvara taşınıyor ve tohumlar elle çıkarılıyor. Meyveler bir Soxhlet cihazında 24 saat boyunca metanol ile ekstre ediliyor ve sonra metanol bir döner buharlaştırıcı ile buharlaştırılıyor.
Su ekstreleri de bir cam şişede 20 g malzemeye kaynar su ilave edilerek hazırlanıyor ve odada inkübe ediliyor. Sonra döner çalkalayıcıda 2 saat boyunca oda sıcaklığında bekletiliyor (200 rpm). Karışım Whatman (No.1) filtre kağıdı kullanılarak filtre ediliyor ve daha sonra filtrat liyofilize ediliyor. Tüm ekstraktlar –24 ° C'de kullanılana kadar dondurucuda saklanıyor.
2.2. Mikroorganizmaları Test Edin
Antimikrobiyal aktivite 53 bakteri ve 40 Candida türünün klinik izolatlarına karşı başarılı sonuç vermiştir. Mikroorganizmalar Erzurum Tıp Fakültesi Klinik Mikrobiyoloji Bölümü tarafından sağlandı. Mikroorganizma türleri, izolasyon kökenleri ve sayıları Tablo 1'de verilmiştir.
2.3. Antimikrobiyal etkinlik
2.3.1. Disk difüzyon testi
Meyvelerin metanol ve su ekstraksiyonu çözücülerle (metanol ve steril arıtılmış su) çözündürüldü. Son konsantrasyon 30 mg / ml olarak ayarlandı. Antimikrobiyal test, 108 koloni oluşturan birim (CFU) / ml bakteri ve besin agarına yayılmış 106 CFU / ml maya içeren süspansiyon kullanılarak disk difüzyon yöntemi ile gerçekleştirildi.
6 mm çapında disk özütlerle emprenye edilmiş ve aşılanmış besin agarına (NA) yerleştirilmiştir. Negatif kontroller aynı çözücüler (metanol ve su) kullanılarak hazırlanmış. Pozitif kontroller Gram-pozitif bakteriler için Ofloksasin, Gram-negatif bakterilerde Cefaperazon-sulbaktam için Amfoterisin B Candida spp kullanılmış. Aşılanan plakalar bakteriler için 37 ° C'de 24 saat, maya için 48 saat boyunca 35 ° C'de süreyle inkübe ediliyor. Daha sonra inhibisyon bölgesinde antimikrobiyal aktivite ölçülerek değerlendiriliyor.
2.3.2. Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK)
Mikroorganizmalar için Minimal İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK) değerleri belirlenmiş ve disk difüzyon analizinde duyarlı oldukları bulunmuştur.
Ekstraktların (MİK) değerleri mikrobiyal suşlar, bir mikro-kuyu seyreltme metoduna göre belirlenmiştir. Aşıları mikroorganizmalar 12 saatlik et suyu kültürlerinden hazırlandı ve süspansiyonlar McFarland standart bulanıklık 0.5'e ayarlandı.
İlk olarak % 10 dimetil sülfoksit içerisinde çözündürülen özler,10 mg / ml'ye seyreltildi ve daha sonra bir konsantrasyon aralığında besin suyu içeren steril bir test tüpünde seri iki kat seyreltme yapıldı (0.078-10 mg / ml). 96 oyuklu plakalar her bir oyuğa 95 ul besin suyu (NB) ve 5-i 1 aşı dağıtılmasıyla hazırlandı.
Başlangıçta en yüksek konsantrasyonda hazırlanan 100 ul ekstraktlar ilave edildi, ardından önce kuyu, daha sonra seri dilüsyonlardan 100 ul diğer kuyulara aktarıldı. Plakalar 24 saat (bakteri suşları için) ve 48 saat (mantar suşları için) inkübe ediliyor. (MİK) mikroorganizmaların büyümesini engellemek için yapılan ekstraktların konsantrasyonunu en düşük olarak tanımladı.
2.4. Antioksidan Etki
Antioksidan etki, tiyosiyanat yöntemiyle belirlendi. Ekstraktların stok çözeltileri 2 mg / ml konsantrasyonda hazırlandı. Stok çözeltiler 2.5 ml 0.02 M ile karıştırıldı, linoleik asit emülsiyonu [pH 7.4 fosfa-tamponlu salin içinde eşit ağırlıkta bir Tween-20 (Sigma) içerir] ve nihai hacim, fosfat tamponlu salin (0.02 M, pH 7.4) ile 5 ml'ye ayarlandı, bir test tüpünde tutuldu ve karanlıkta 40 ° C'de inkübe edildi.
Ekstraktların nihai konsantrasyonları 100 ug / ml idi. Butillenmiş hidroksitoluen (BHT), pozitif kontrol (100 ug / ml) olarak kullanıldı. Peroksit miktarı 24 saat inkübasyondan sonra FeCl2 ve tiyosiyanat ile renklendirmeden sonra 500 nm'de absorbans ölçülerek belirlendi.
Düşük absorbansda antioksidan etki daha yüksek gösterdi. Üç örnek için antioksidan aktivite ölçümleri yapıldı ve değerler üç kopyanın ortalamasıdır. Bu etkinlik Lipid Peroksidasyon İnhibisyon Yüzdesi ve denklem ile hesaplama şeklinde verildi.
Lipid peroksidasyon inhibisyonu
2.5. DPPH Radikal Süpürme Etkinliği
İlk önce metanol içinde 0.5 mM DPPH radikal çözeltisi hazırlandı ve daha sonra bu çözeltinin 1 ml'si 3 ml numune çözeltisi ile karıştırıldı. Ekstraktların nihai konsantrasyonları 100 ug / ml idi. BHT, aynı konsantrasyonda pozitif kontrol olarak kullanıldı. 30 dakika inkübasyondan sonra karanlıkta, absorbans 517 nm'de ölçülmüştür. DPPH'nin absorbansını azaltmak çözeltisi, DPPH radikal süpürme aktivitesinde bir artışı gösterir. Bu etkinlik DPPH radikal süpürme yüzdesi ve denklem ile hesaplanır.
Kontrol çözeltisi 3 ml etanol ile karıştırılmış 1 ml DPPH çözeltisi içeriyor. 3 örnek replikasyonlar için DPPH radikal süpürme aktivitesi ölçümleri gerçekleştirildi ve değerler ortalama üç replikattır.
2.6. Toplam Fenolik Bileşiklerin Tayini
Ekstrakt çözeltisi bir tüpe aktarılmış ve daha sonra hacim su ilavesile 4 ml'ye ayarlanmıştır. Daha sonra buna 0.25 ml Folin-Ciocalteu Reaktif ekleniyor, 3 dakika sonra ise 0.75 ml Na2C03 çözeltisi ilave ediliyor. Karışım bir çalkalayıcıda oda sıcaklığında 2 saat süreyle karıştırılıyor, sonra 760 nm'de ölçüldü. Fenolik bileşiklerin toplam miktarı üç numune replikasyonu için gerçekleştiriliyior ve değerler ortalama üç kopya olarak sunuluyor. Kalibrasyon eğrisi için standart olarak gallik asit kullanılmıştır. Fenolik bileşik muhtevası, aşağıdaki denklem temel alınarak kalibrasyon eğrisinde gallik asit eşdeğeri olarak ifade edildi:
Y= 0.2582X
Y, örneğin emilimidir ve X, eşdeğeri (ug / ml) gallik asittir.
3. SONUÇLAR VE GÖRÜŞLER
3.1. Antioksidan Aktiviteler
Kızılcık meyvelerinin su ve metanol ekstraktlarının antioksidan aktiviteleri linoleik içerisinde oluşan peroksit miktarının tiyosiyanat yöntemi kullanılarak belirlendi inkübasyon sırasında asit emülsiyonu spektrofotometrik olarak belirlenir. Suyun antioksidan aktiviteleri arasında çok fazla fark olmamasına rağmen, metanol ekstraktlarında, yüksek antioksidan aktivite metanol ekstraktından elde edilirken, düşük aktivite su özlü kızılcık meyvelerinden (% 16.7 ve% 18.9, (Şekil 1).
Kızılcık meyveleri yüksek fenolik içerik, askorbik asit, renk ve tattan da sorumlu olan antosiyanin içeriği ve ayrıca antioksidan özelliklere sahip. Tüm ekstraktların antioksidan potansiyele sahip olduğu ve bulgular bu verilerle uyumludur.
DPPH serbest radikali, birincil antioksidan aktivitenin belirlenmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır, yani saf antioksidan bileşiklerin, bitkinin ve meyvenin serbest radikal temizleme faaliyetleri özler ve gıda malzemeleri. Deney, metanol içindeki DPPH radikallerinin azaltılmasına dayanmaktadır ve 517 nm'de bir absorbans düşüşüne neden olan su 100 ug / ml su ve kızılcık meyvesi metanol özü konsantrasyonunda, temizleme faaliyetleri sırasıyla% 36.6 ve% 30.6 idi
Bulmak ilginç metanol ekstraktlarının daha yüksek antioksidan aktiviteye sahip olmasına rağmen; DPPH radikalleri temizleme faaliyetleri su ekstraktlarından daha düşüktü. Ancak, oranlarla karşılaştırıldığında ve meyve özlerinde kullanılan yaygın sentetik antioksidanların DPPH aktivitesinin kızılcık su ve metanol ekstraktlarının radikal süpürücü aktivitesi BHT (Şekil 2). Kızılcık meyve suyunun güçlü antioksidan güce sahip olduğu bulundu, diğer meyve sularından daha yüksektir. Ayrıca, bazı yazarlara potansiyel antioksidan bildirilmiştir. Kızılcık yaprak ve çiçeklerinin aktivites. Ekstraktlarda bulunan toplam fenolik bileşikler Folin-ciocalteu kullanılarak belirlendi fenol reaktifi. Lipid Peroksidasyon aktivitesi gibi, toplam fenolik bileşiklerin miktarları da metanol meyve özütlerinde su özütlerine göre daha yüksektir. Fenolik bileşik içeriği 100 ug / ml cornelian metanol ekstraktında 4.5 ug / ml gallik asit eşdeğeri olarak mevcuttu kiraz meyveleri ve içeriği 1.7 ug / ml gallik ile 100 ug / ml su ekstraktından elde edilmiştir.(Tablo 1).
Genel olarak, yüksek miktarda fenolik bileşik içeren özütler de yüksek antioksidan aktivite. Gil ve arkadaşları güçlü bir korelasyon olduğunu bildirdi, (r = 0.930 - 0.960) bazı sert çekirdekli meyvelerde toplam fenolik ve antioksidan aktivite arasında. Bu karışımdaki antioksidanlar arasındaki sinerjiden kaynaklanıyor olabilir. Kızılcık meyveleri zengindir ortalama 223-292 mg siyanidin 3-O-glukozit ile antosiyaninlerde ve fenolik içeriklerde. 100 g taze meyve başına 281-704 mg Galik asit eşdeğeri (GAE) eşdeğeri (CGE) ve sırasıyla. Sadece meyveler değil, yapraklar da fenolik içerik bakımından zengindir. (% 11.73) meyvelere (% 9.11) kıyasla.
3.2. Antimikrobiyal Aktiviteler
Kızılcık meyvelerinin su ve metanol ekstraktlarının antimikrobiyal aktivitesi değerlendirildi disk difüzyon yöntemiyle. İnsan patojenik mikroorganizmasının toplam 93 klinik izolatı 5 bakteri ve 5 Candida spp. Bu araştırmalarda kullanılmıştır (Tablo 2). Negatif kontroller inhibe edici etki göstermedi. İnhibisyon çapları ve MIC değerleri pozitif kontroller 18-20 mm arasındaydı; Ofloksasin için 0.12-1 ug / mL, 19-22 mm; 0,5-1
Sefaperazon ve 12-15 mm için ug / mL; Amfoterisin B için sırasıyla 0.12-0.5 ug /mL.
Bulgularımız meyvelerin metanol ve su ekstraktlarının antibakteriyel aktiviteye sahip olduğunu gösterdi.
Gram-pozitif ve Gram-negatif bakterilere karşı. Meyve özütünün insan patojenik kliniğinin 5 bakteri türünden 3'ü izole edilmiştir. En yüksek antibakteriyel
aktivite
25 mm ile S. aureus'a karşı kızılcık meyvelerinin metanol ekstraktıyla eksprese edildi
36,6 30,6
81
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
W 100 ug / ml M 100 ug / ml BHT 100 ug / ml
DPPH Radikal
Atma (%) inhibisyon bölgesi ve 0.156 mg / ml MIC değeri (Tablo 3). E. coli ve P. aueroginosa'ya karşı, 10 mm inhibisyon zon çapı ve 0.312 mg / ml MIC değerleri bulunmuştur. E.aerogenler ve P. mirabilis inhibe edilmedi.
Kızılcık kirazlarının antifungal aktivitesini taramak için sadece bir aktivite tespit edildi. Antikandidal aktivite, Candida albicans'a karşı meyvelerin metanol özütü ile sergilendi. 8mm inhibisyon bölgesi ve 0.625 mg / mL MIC değeri. Meyve özleri etkinlik göstermedi 4 insan patojenik Candida spp. Derste elde edilen sonuçlara göre Mevcut çalışmada, Candidal suşlarının taranan her iki meyve özüne karşı dirençli olduğu bulunmuştur. Benzer şekilde, daha önce mantarların bitki özlerine en dayanıklı olduğu bildirilmiştir.
Avrupa kornerinin yaprak ekstraktlarının antimikrobiyal aktivitesi bildirilmiştir.
Kızılcık tohumu özü (10 mg / μL), S. aureus ve E. coli. Diğer yandan farklı yazarlar metanol ve Kızılcık meyvelerinin, yapraklarının ve tohumlarının etanol özleri önemli antibakteriyel gösterdi. S. aureus, E. coli ve P. aeruginosa'ya karşı aktivite ve C. albicans'a karşı antifungal aktivite A. fumigatlar. Ayrıca, Kyriakopoulos ve Dinda bahsi geçen meyve S. aureus'a karşı antibakteriyel aktivite ekstraktının güçlü olduğunu gösterdi. Sonuçlarımız bu raporlarla uyumludur
bunun üzerinde S. aureus'a karşı anlamlı aktivite ve
E. coli, P. aeruginosa ve Candida albicans.
SONUÇLAR
Sonuç olarak, meyve ekstraktlarının antibakteriyel aktivitesi ile ilgili bulgularımız, diyare ve gastrointestinal bozukluklara karşı bazı etnofarmakolojik kullanımları haklı çıkarabilir çünkü bu meyvelerin bazı insan patojenlerine (E. coli) karşı aktiviteleri var. Öte yandan antioksidan aktivite, bağışıklığın iyileştirilmesi gibi etnofarmakolojik kullanımları destekleyebilir. Ayrıca, bu sonuçlar, bu meyvelerin sadece
gıda değil, aynı zamanda yüksek antioksidan ve antimikrobiyal etkilerle değerli bir öneme sahiptir.
Yorum yap