Duyuru

Collapse
No announcement yet.

Ardıç Süperkritik, Juniperus communis

Collapse
X
  • Filtrele
  • Zaman
  • Göster
Hepsini Sil
new posts

  • Ardıç Süperkritik, Juniperus communis



    Ağaç | 3-10 m | 4-5 Aylar | Ca, Ho, Na | Kozalakları, Eter yağı

    Ardıç, Wacholder, Juniperus communis L.
    Bıldırcın Ardıcı Hakiki Ardıç
    Kuvvet Ardıcı Şifalı Ardıç
    Kudret Ardıcı

    Familyası: Selvigillerden, Zpressengwâchse, Cupressaceae

    Drugları: Ardıç kozalağı; Juniperi fructus
    Ardıç yağı; Juniperi aetheroleum
    Ardıç’ın meyveleri (kozalağı) Eterik yağı (kısaca yağı), çay, tentür ve natürel ilaç yapımında ve de Eterik yağı ise aroma tedavisinde kullanılır.

    Giriş: Servigillerin bir alt grubu olan Juniperusgillere takriben 60 Ardıç türü dahildir. Ardıçgilleri (Juniperiusgiller) 3 önemli ana gruba ayrılırlar;
    1) Oxycedrusgiller, buna örnek Şifalı Ardıç’ı gösterebiliriz. 2) Caryocedrusgiller, buna örnek olarak Juniperuis drupacea’yı gösterebiliriz ve 3) Sabinagiller, buna da örnek olarak Kara ağacı gösterebiliriz. Bunlardan Sabinagillerin çok zehirli olması nedeni ile bu grubu Kara Ardıç bahsinde ayrıca işleyeceğiz. Hakiki Ardıcın ayrıca bir düzine alt türü vardır. İşte bundan en önemlileri;
    a) Cüce Ardıç (Türk Ardıcı); J.Comminus ssp.nana Bu tür genellikle Kuzey Anadolu dağlarında yetişir. Birde Alp Cüce Ardıcı; J.C.ssp.Alpina vardır. Bu türde genellikle Alplerde yetişir. Ayrıca İspanya Ardıcı; J.C.ssp.Hemisphaeria, Japon Ardıcı; J.C.ssp.Nipponika, Amerika Ardıcı; J.c:ssp.Despressa ve Çin Ardıcı; J.C.ssp.Communis, Cüce Ardıç; J.C.ssp.Nana ve Katran Ardıcı; J.Oxycedrus Türkiye’de yetişir ve Hakiki Ardıç Trakya Cüce Ardıç Kuzey Anadolu ve Katran Ardıcı Toros’larda yetişir. Ardıç meyveleri çok eskiden beri böbrekleri yıkayıcı olarak ve ödeme karşı kullanılmıştır.

    Botanik: Ardıç çalı veya ağaç şeklinde tek veya çok gövdeli 3-10 m yük-sekliğinde, geriden piramidimsi üst kısmı ve orta taç görünümündedir. Yaprakları 20 mm uzunluğunda 2 mm genişliğinde ucu sivri iğne gibi veya küt, dalların uç kısmında üçlü ve dörtlü şekilde dizilmiştir. Erkek ve dişi çiçekleri ayrı ayrı ağaçlarda olduğu gibi aynı bitkide de olabilir ve çiçekleri üçlü pul şeklinde çokça yaprakçıktan oluşur. dişi çiçeklerin döllenmesi ile birlikte küçük meyve şeklindeki kozalakları meydana gelir ve bunlar olgunlaştığında siyahımsı kahverengi veya morumsu renkte, 0,5-1 cm çapında küre şeklinde ve genellikle topluca bir arada olur.

    Yetiştirilmesi: Fidanları veya çeltikleri güneye bakan yönlere ekilir, büyüyerek kozalak vermesi yıllar alabilir.

    Hasat zamanı: Eylül ortalarından Ekim sonlarına kadar Ardıç kozalakları toplanır, toplanması zor olduğundan Ardıç dibine bez serilerek kozalakları dökülür ve dökülen kozalaklar eski iğne yapraklarından ayıklanır ve sonra kurutulur. Kurutulan Ardıç kozalakları özel kaplarda muhafaza edilir. Ardıç kozalaklarının olgunlaşması iki yıl sürer, olgunlaşan siyahımsı esmer veya morumsu kozalakların yanında yeşil renkli bir yılık olgunlaşmamış kozalaklarda olabilir, bunlarında ayıklanması gerekir.

    Birleşimi: Ardıç kozalağının birleşimindeki maddeleri önemine göre şöyle sıralayabiliriz;
    a) Eterik yağlar %0,5-2,5 arasında olup en önemleri; α-Pinen %34, B-Myrcen %11, θ-Muurden %10, Sabinen %7,5, Limonen %3, Elemen %2,9, B-Caryophyllen %2,7, α-Cadinen %2,5, B-Pinen %2,5 ve Terpinen %2,1 içerir.
    b) Proanthocyanidinler (Proantosiyanidinler); (+)-Afzelechin, (+)-Catechin (Kateşin), (-)-Epiafzelechin, (-)-Epicatechin, (-)-Epigallocatechin ve (+)-Gallocatechin içerir.
    c) Diterpenler; İzocommunasit, cis-Communasit ve trans-Communasit
    d) Ayrıca vitaminler, mineraller, reçine, zamk, pektin, organik asitler, Flavonglikozitler, ham şeker ve yağ içerir. en kaliteli Ardıç yağı (Ardıç eter yağı) Bosna’da elde edilir. Türkiye’de yetişen Cüce Ardıç kozalaklarında da %1,41 oranında eterik yağ bulunur ve oldukça kalitelidir.

    Açıklama: Ardıç yağı (Eterik yağı) ile yapılan tedavi denemeleri çok eskiye dayanır. İlk defa 1844’de Berlin’de Ardıç yağı ile tavşanlar üze-rinde Dr. Semon tedavi denemesi yapmıştır. Önce tavşanın midesine 15 gr Ardıç yağı doldurur ve tavşanın yaşadığını görünce 30 gr Ardıç yağı ile deneyine devam eder ve tavşanlar ölür. Ölüm nedenini araştıran doktor yağın böbrekleri tahriş ettiğini iddia eder. Bu ilmi olmayan tamamen yanlış tedavi denemesine dayanarak 1844’den 1993’e kadar ütün uzmanlar Ardıç yağının böbrekleri tahriş edebileceğini bu nedenle en fazla 6 hafta kullanılmasını tavsiye ederler. Prof. Dr. Heinz Schilcher, Berthold.M.Hell ve ekipleri 1993’de Berlin Üniversitesi’nde Ardıç yağı ve Ardıç kozalağı ile yaptıkları geniş çaplı araştırma ve tedavi denemelerinde hiçbir yan tesir tespit edememişlerdir. Bunun üzerine geriye dönük araştırmada Dr.Semon’un ilmi olmayan çalışmasının bu yanılgıya sebep olduğunu tespit etmişlerdir. Ardıç kozalağı ortalama %1 Eterik yağ içerir. 3 kg Ardıç kozalağından 30 gr Ardıç yağı elde edilir. Ortalama 6 Ardıç kozalağı 1 gr yapar ve bundan 10 mg Eter yağı elde edilir. 30 gr Eter yağı elde etmek için 18.000 Ardıç kozalağı gerekir. Bugün tedavi maksadı ile 10-30 mg Eter yağı veya 6-18 Ardıç kozalağı gerekir. Bir insan günde 300-1000 gr ekmek yiyebilir fakat bu oranı 500.000 gr yani 500 kg.a çıkarmak mümkün müdür? İşte gerçekten ilim adamı olmayan insanların yanlış gözlemleri, insanların 1884’den 1993’e kadar Ardıç kozalağı veya yağı hakkında yanlış düşünmelerine neden olmuştur ve hala aynı yanılgıda ısrar edenler de mevcuttur. (Z.P.4.95.205) Ardıç yağında bazen Ardıç odunu, yaprağı ve dallarının da damıtma sırasında ayıklanmaması nedeni ile kalitesiz yağlar elde edilebilir. (NM.5.95.48, Nhp.5.95.738)

    Araştırmalar: Ardıç yağı ve kozalağı ile fareler, tavşanlar, köpekler ve kemeler (lağım fareleri) üzerinde tedavi denemeleri yapılmıştır;
    1) İ.Janku, M.Hava ve O.Motl 1957 ve 1960’da kemeler üzerinde yaptığı tedavi denemesinde Ardıç yağının idrar söktürücü olduğunu tespit etmişlerdir. (HHB.V.569)
    2) G.Vogel 1957’de kemeler üzerinde yaptığı tedavi denemesinde Ardıç yağının safra arttırıcı olduğunu tespit etmiştir. (HHB.V.569)
    3) A.G.Winter 1957’de kemeler üzerinde yaptığı tedavi denemesinde Ardıç yağının idrar yoları enfeksiyonunu önlediği ve bakterileri yok ettiğini tespit etmiştir. (HHB.V.569)
    4) B.Lasheras, P.Turillas ve E.Cenarruzabeitia 1986’da kemeler üzerinde Ardıç kozalağı ile yaptıkları tedavi denemesinde tansiyonu düşürdüğünü tespit etmişlerdir. (HHB.V.574)
    5) S.K.Swanston-Flatt, C.Day, C.J.Bailey ve P.R.Flatt 1990’da fareler üzerinde Ardıç kozalağı ile yaptıkları tedavi denemesinde kandaki şekeri düşürdüğünü tespit etmişlerdir. (HHB.V.574)
    6) N.Mascola, G.Autore, F.Capasso, A.Menghini ve M.P.Fasulo 1987’de Ardıç kozalağı ile kemeler üzerinde yaptıkları tedavi denemesinde ödemi (vücudun su toplaması) önlediğini tespit etmişlerdir. (HHB.V.574)
    Hayvanlar üzerinde yapılan araştırmalar çok olumlu olup, bunu insanlar üzerinde yapılacak tedavi denemesinin takip etmesi gerekmektedir. Umarız ki bu yönde de araştırmalarda yakında yapılır.
    7-) Finladiya ve isviçrede yapılan Klinik araştırmalarda Prostat, akciğer ve karaciğer kanserine karı etkili olduğu
    8-) Prof. Nu-Man Tsai, Tıbbi Laboratuvar ve Biyoteknoloji Bölümü CİLT KANSERİNİ (melanom) Chung Shan Tıp Üniversitesi, No. 110, Sec. 1, Jianguo N. Rd., Taichung 40201, Tayvan.
    10-) Chang Gung Üniversitesi, Taoyuan, Tayvan yapılan klinik araştırmada İnsan GLİOBLASTOMlarında Antitümör ETKİLERİ TESBİT EDİLMİŞTİR.
    11-) Chung Shan Tıp Üniversitesi, Taichung, Çin Cumhuriyeti, Tayvan TARAFINDAN YAPILAN ÇALIŞMADA KOLON KANSERİNİ Ardıç Ekstraktı ile tedavi etmişlerdir.
    12-) Finlandiya ve İsveç Üniversitelerinin yaptığı ortak çalışmadan NÖROBLATOMU Ardıç Eklstraktı ile tedavi edilebleceği belgelenmiştir.

    Tesir şekli: idrar ve ter söktürücü, safrayı artırıcı, tansiyon düşürücü, hazmettirici, antiseptik, metabolizmayı kuvvetlendirici ve kandaki şekeri düşürücü etkinliğe sahiptir.
    Kullanılması:
    a) Araştırmalara göre Ardıç yağı ve kozalağı başta Nöroblastom, Gliobastom, Melanom, Prostat, karaciğer, Akçiğer, Kolon kanserine karşı etkili olduğu belgelenmiştir. Artı idrar yolları enfeksiyonu, şeker hastalığı, yüksek tansiyon, safra yetersizliği, idrar yetersizliği ve ödem gibi rahatsızlıklara karşı kullanılır.
    b) Komisyon E’nin 05/12/1984 tarih ve 228 nolu Monografi bildirisine göre başta sindirim rahatsızlıklarına karşı kullanılır.
    c) Aroma tedavisinde; Ardıç yağı (Ardıç eter yağı); sara, korku, sinirlilik, bronşit, üşütme hastalıkları, verem, bağırsak enfeksiyonu, gastrit, sindirim rahatsızlıkları, şeker hastalığı, ara doku deri iltihaplanması, mesane hastalıkları, idrar yolları ve böbrek taşları, böbrek iltihaplanması, nikris, romatizma ve eklem rahatsızlıklarına karşı kullanılır.
    d) Homeopati’de; Ardıç tentürü başta hidrops (ara doku ve organlarda kanın sıvı maddesinin toplanması), ödem (vücutta su toplanması), böbrek iltihaplanması, yüksek tansiyon, nikris, kanın kirlenmesi ve metabolizma rahatsızlığına karşı kullanılır.

    Çayı: Ardıç kozalağı iki şekilde hazırlanabilir;
    1) Ardıç kozalağından 10-15 adet veya 1 yemek kaşığı demliğe konur ve üzerine 300-400 ml kaynar su ilave edilir ve 5-10 dk demlenmeye bıraktıktan sonra süzülerek içilir.
    Ardıç kozalağından 10-15 adet veya bir yemek kaşığı bir bardağa konur ve üzerine 300-400 ml soğuk su ilave edilerek 5-10 saat bekle-tildikten sonra süzülerek içilir.

    Çay Harmanları

    Gökçek ödeme çayı (vücudun su toplaması)
    20 g Ardıç kozalağı
    20 g Altın başak otu
    20 g Kırkkilit
    20 g Biberiye yaprağı
    20 g Kayışkıran kökü

    Gökçek böbrek ve mesane çayı;
    25 g Ayı Üzümü yap.
    25 g Ardıç kozalağı
    25 g Altın başak otu
    25 g Atkuyruğu

    Gökçek böbrek mesane çayı (mesane üşütmesi nedeni ile idrar artırıcı);
    30 g Kayışkıran kökü
    20 g Ardıç kozalağı
    30 g Altınbaşak otu
    20 g Ayı Üüzmü yap.

    Gökçek böbrek ve mesane çayı (idrar yollarını yıkayıcı);
    20 g Ardıç kozalağı
    20 g Maydanoz tohumu
    20 g Atkuyruğu otu
    20 g Kayışkıran kökü
    20 g Rezene tohumu
    20 g Altınbaşak otu

    Gökçek böbrek ve mesane çayı (idrar yollarındaki taşlarını yıkayıcı);
    30 g Hindiba otu ve kökü
    30 g Ardıç kozalağı
    30 g Maydanoz tohumu
    30 g Ayı Üzümü yap
    30 g Altınbaşak otu

    Gökçek İdrar yolları çayı:
    20g Maydanoz kökü
    20g Ardıç kozalağı
    20g Kayışkıran kökü
    20g Huş yaprağı
    10g Meyan kökü
    10g Civanperçemi otu

    Gökçek İdrar yolları çayı:
    20g Maydanoz kökü
    20g Ardıç kozalağı
    20g Kayışkıran kökü
    20g Ak huş yaprağı
    10g Meyan kökü
    10g Civanperçemi otu

    Gökçek Romatizma çayı;
    20 g Harpago kökü
    20 g Ardıç kozalağı
    20 g Isırgan otu
    20 g Huş yaprağı
    10 g Kuşburnu meyvesi
    10 g Nane yaprağı

    Gökçek Kanı ve idrar yollarını temizleyici çay;
    20 g Huş yaprağı
    20 g Isırgan otu
    20 g Hindiba otu ve kökü
    20 g Altın başak otu
    20 g Ardıç kozalağı

    Aroma tedavisi: Olgunlaşmış Ardıç kozalakları su buharı ile damıtılarak (destilasyonu) yapılarak eterik yağı elde edilir. Ardıç yağı (eter yağı) genellikle renksiz, fakat nadiren yeşile, sarıya veya esmerimsi renge çalabilir. Bu yağdan günde 3-5 defa 5-6 damla alınabilir. Haricense genellikle kramplı, romatizmalı, ağrılı kaslara ve eklemlere sürülerek ovalanır ve masajı yapılır.

    Homeopati’de: Ardıç kozalaklarından 20 gr iyice ezildikten sonra bir şişeye konur ve üzerine %70’lik 80 ml Etanol (alkol) ilave edilerek iki günde bir çalkalanır. Şişe güneş ışınlarından uzakta muhafaza edilir ve 4-6 hafta sonra süzülerek Homeopati’de <> adı ile anılan tentür elde edilir. Bu tentürden günde 3-5 defa 10-15 damla 4-6 hafta süreyle alınır.

    Ekstresi: Ardıç kozalaklarının alkolle ekstraksiyonu ile elde edilen ekstre aynı tentür gibi kullanılır.

    Hastalığın belirtisi (semptom):
    1) Üşütme nedeni ile böbrek iltihaplanması
    2) Kronik böbrek yatakları iltihaplanması
    3) Vücudun su toplaması (ödem) ve idrarda azalma
    4) İdrarın kokulu menekşe gibi kokması
    5) Böbrek civarında bir ağırlık varmış gibi his
    6) İdrarın azalması ve yoğunlaşması
    7) Böbreklerin kronik iltihaplanması
    1) Bu gibi hallerde Ardıç tentürü gerekir.

    Yan tesirleri: Ardıç kozalağının bilinen bir yan tesiri yoktur. Bu konuyu araştırma bölümünde inceledik.
    Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
    Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

  • #2
    Juniperus communis L.'nin Su Özü, Hücre Ölümünü İndükler ve p53 ve PI3K/Akt Yolları aracılığıyla Kanser Hücrelerini Sitostatik İlaçlara Duyarlılaştırır

    Atso Raasmaja , 1, * Ulla Stenius , 2 ve Aram Ghalali 2 Atso Raasmaja , 1, * Ulla Stenius , 2 ve Aram Ghalali 2
    Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
    1 Farmakoloji ve Farmakoterapi Anabilim Dalı, Eczacılık Fakültesi, Helsinki Üniversitesi, Posta Kutusu 56, 00014 Helsinki, Finlandiya
    2 Çevre Tıbbı Enstitüsü, Karolinska Institutet, PO Box 210, 17177 Stockholm, İsveç; es.ik@suinets.allu (ABD); es.ik@ilalahg.mara (AG)
    * Yazışma: if.iknisleh@ajamsaar.osta
    Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
    Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır .
    Git: Soyut


    Ardıç ( Juniperus communisL.), genellikle yiyecek ve içeceklerde baharat olarak ve beslenme amaçlı kullanılan kuzey iğne yapraklı bir bitkidir. Ardıç özütünün (JE) insan nöroblastom hücrelerinde p53 aktivitesini, hücresel stresi ve gen ekspresyonunun neden olduğu hücre ölümünü etkilediği daha önce bildirilmişti. Bu nedenle ardıçın p53 ve Akt sinyali üzerindeki etkileri, Western blot, konfokal mikroskopi ve MTT analizi kullanılarak A549 akciğer, 22RV1 ve DU145 prostat ve HepG2 karaciğer kanseri hücrelerinde daha ayrıntılı olarak incelenmiştir. Ardıcın aynı anda hücre canlılığını azalttığını, p53 yolunu aktive ettiğini ve PI3K/Akt yolunu etkisiz hale getirdiğini bulduk. p53 aktivasyonu, artan nükleer p53 seviyesi ile ilişkilendirildi. Akt defosforile edildi ve inaktivasyonu, artan PHLPP1 ve PHLPP2 fosfataz seviyeleri ile ilişkilendirildi. PARP'ın paralel artışları, JE'nin hücre ölümünü aktive ederek hücre canlılığını azalttığını göstermektedir. Ek olarak, JE gemsitabin ve 5-florourasil antikanser ilaçlarının etkilerini güçlendirdi. Böylece JE, p53 ve Akt yolakları yoluyla farklı kanser hücre dizilerinde hücre ölümünü aktive edebilir.

    Anahtar Kelimeler: hücre ölümü, bitki özü, Juniperus communis L., p53, Akt, A549 küçük olmayan akciğer kanseri hücreleri
    Git: 1. Giriş


    Bitki kaynaklı fitokimyasallar, potansiyel beslenme ve sağlığı geliştirme stratejileri için bileşikler olarak geniş çapta çalışılmıştır. Ardıç ( Juniperus communis L., Cupressaceae) kuzey iğne yapraklı bir bitkidir ve meyveleri baharat olarak ve başka amaçlarla kullanılmıştır. Ardıç özütü (JE) birçok fenolik bileşik içerdiğinden, potansiyel fizyolojik etkilerine, spesifik biyoaktif özellikleri aracılık edebilir. Önceki çalışmalarda, JE'nin p53 aktivitesi, hücresel stres ve gen ekspresyonu gibi çeşitli hücresel fonksiyonları etkilediği ve ayrıca insan nöroblastom hücrelerinde hücre ölümünü indüklediği bulunmuştur [ 1 , 2 , 3 ].

    p53 ve PI3K/Akt sinyal yolakları, hücre sağkalımı ve apoptozun iki anahtar düzenleyicisidir ve bunların bozulmuş işlevleri birçok kanser türüyle bağlantılıdır [ 4 ]. Tümör baskılayıcı protein p53, sitozol ve çekirdekte aktiftir ve birçok hücresel proteinin yanı sıra gen ekspresyonunu kontrol eder [ 5 , 6 ]. p53, doğrudan sitozolik etkiler ve nükleer translokasyon yoluyla protein fosforilasyonu/defosforilasyonu ve gen asetilasyonu/deasetilasyonuna etki eder. Akt'nin aktivitesi, plazma zarına bağlı ikinci haberci sisteminin bir parçası olarak fosfatidilinositol-3-kinaz (PI3K) tarafından düzenlenir [ 7 , 8]. PI3K tarafından fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfat (PIP3) üretimi Akt fosforilasyonuna yol açar. Akt, fosforile edilmiş formunda aktiftir ve daha sonra çekirdeğe yer değiştirebilir ve gen ekspresyonunu kontrol edebilir. Akt fosforilasyonunun kendisi PHLPP1 ve PHLPP2 fosfatazlar tarafından düzenlenir ve bunların bozulmuş işlevi kanserle bağlantılıdır [ 9 , 10 ].

    Amacımız, A549 akciğer kanseri, 22RV1 ve DU145 prostat kanseri ve HepG2 karaciğer kanseri hücrelerinde hücre ölümünün düzenlenmesi üzerindeki ardıç meyvesi ekstresinin moleküler etkilerini incelemekti. JE'nin etkileri, hücre canlılığı, p53, pAkt, PHLPP1/2, pGsk3Ser9 ve PARP bölünmesi seviyeleri üzerinde spesifik olarak analiz edildi. Ek olarak, JE'nin etkileri, iki antikanser ilacı, gemsitabin ve 5-florourasil ile kombinasyon halinde incelenmiştir.

    Git: 2. Sonuçlar

    2.1. Ardıç Özü Birkaç Kanser Hücre Çizgisinde Azalmış Hücre Canlılığı


    JE'nin hücre canlılığı üzerindeki etkileri, A549 küçük olmayan akciğer kanseri, 22RV1 ve DU145 prostat kanseri ve HepG2 hepatoselüler karsinom hücre dizilerinde analiz edildi. JE'nin tüm bu kanser hücre dizilerinde benzer hassasiyetle hücre canlılığında doza bağlı bir azalmaya neden olduğunu bulduk (Şekil 1A ve Şekil 3A–C). Azalan hücre canlılığının nedenlerini anlamak için, JE'nin bu etkilerine hücre ölümüyle ilgili mekanizmaların aktivasyonu ve aracılık edip etmediğini araştırdık (örn., p53 ve pAkt yolları).
    Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-20-02054-g001.jpg
    Şekil 1
    Ardıç özü (JE), hücre canlılığını azalttı ve küçük olmayan akciğer kanseri A549 hücrelerinde P53 ve apoptozun aktivasyonunu indükledi. Hücreler, Malzemeler ve Yöntemler bölümünde tarif edildiği gibi büyütüldü, daha sonra 24 saat aç bırakıldı ve 24 saat boyunca JE ile inkübe edildi. ( A ) Hücre proliferasyonu, MTT tahlili ile tahmin edildi. ( B ) Hücre lizatları, Western blot ile bölünmemiş PARP (116 kDa) ve bölünmüş PARP (85 kDa) için analiz edildi. Yükleme kontrolü olarak Cdk2 kullanıldı. ( C ) Hücreler sabitlendi ve P53 için boyandı ve konfokal mikroskopi ile analiz edildi (büyütme: 63x). Sinyaller nicelendirildi ve kontrol yüzdesi olarak sunuldu. ( D ) Hücre lizatları, Western blot ile P53 için analiz edildi. Şekil B ve Dyeniden aynı deneylerden elde edilir ve Cdk2 yükleme kontrolü ( B )' de gösterilir . Veriler, çubuklar ± üç bağımsız deneyden standart sapma olarak sunulmuştur. * Kontrolden önemli ölçüde farklı, p ≤ 0.05.

    2.2. Ardıç Özü, Hücre Çoğalmasının İnhibisyonuna Paralel Olarak p53 Yolunu Aktive Etti

    p53 proteinindeki ve PARP bölünmesindeki değişiklikler genellikle apoptozu saptamak için kullanılır ve p53'ün nükleer lokalizasyonunun proapoptotik özellikleri için çok önemli olduğu düşünülür [ 11 ]. Burada, A549 hücreleri JE ile tedavi edildiğinde bölünmüş PARP seviyesinde doza bağlı bir artış ve bölünmemiş PARP'de bir azalma tespit edildi (Şekil 1B). Daha sonra, JE'nin küçük olmayan akciğer kanseri A549 hücrelerinde p53 seviyeleri ve nükleer translokasyon üzerindeki etkilerini de inceledik. JE'nin p53 seviyesini arttırdığını bulduk (Şekil 1D) ve p53'ün nükleer translokasyonunu indükledi (Şekil 1C). P53 ve PARP üzerindeki etkiler, hücre sayısında azalmaya paralel olarak meydana geldi ve hücre ölümünde aktif bir rol oynadı.

    2.3. Ardıç Özü Akt Yolunu Devre Dışı Bıraktı

    Akt'nin hücreleri apoptoza karşı koruduğu ve kanser tedavisini engellediği bilinmektedir. JE'nin, Akt'nin aktive edilmiş bir formu olan pAkt seviyesi üzerindeki etkisi, A549 hücrelerinde incelenmiştir. JE'nin hem Serin 473 (Ser473) hem de Treonin 308 (Thr308) kalıntılarında Akt fosforilasyonunu doza bağlı bir şekilde azalttığını bulduk (şekil 2A). Akt aşağı akış hedefi pGsk3β'nın fosforilasyonu inhibe edildi, bu da JE'nin Akt sinyalini azalttığını doğruladı (şekil 2A). Ayrıca, JE, fosfatazlarını, PHLPP1 ve PHLPP2'yi hedefleyerek Akt'yi düzenler gibi görünmektedir. JE, her iki fosfatazın seviyelerini, pAkt seviyelerindeki düşüşlerle ilişkili olacak şekilde arttırdı (şekil 2B). Tüm bu sonuçlar, Akt yolunun azalmış aktivitesi ile uyumludur ve JE ile indüklenen hücre ölümünde Akt'nin önemli bir rolüne işaret eden artan hücre ölümü seviyesine karşılık gelir.
    Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-20-02054-g002.jpg
    Ayrı bir pencerede aç
    şekil 2
    JE, A549 hücrelerinde Akt sinyal yolunu inhibe etti. Serum açlığı çeken A549 hücreleri, 24 saat boyunca JE ile işlendi. ( A ) Hücre lizatları, Western blot ile pAkt Ser473, pGSK3P Ser9 ve pAkt Thr308 için analiz edildi. ( B ) Hücre lizatları, Western blot ile PHLPP1 ve PHLPP2 için analiz edildi. ( A , B ) Yükleme kontrolü olarak Cdk2 kullanıldı. Veriler, çubuklar ± üç bağımsız deneyden standart sapma olarak sunulmuştur. * Kontrolden önemli ölçüde farklı, p ≤ 0.05. 2.4. Ardıç Ekstraktının Prostat ve Hepatoselüler Karsinom Hücreleri Üzerindeki Etkileri


    JE'nin etkileri, ardıç kaynaklı mekanizmaların genelliğini ve hücre ölümünün aktivasyonunu araştırmak için prostat ve hepatoselüler kanser hücrelerinde daha fazla incelenmiştir. Ardıç tedavisinin 22RV1 ve DU145 prostat kanseri ve HepG2 hepatoselüler karsinom hücrelerinde de p53 seviyesini arttırdığı gösterildi (Figür 3D–F). Anti-proliferatif etkiler doğrultusunda (Figür 3A–C), JE, 22RV1 ve DU145 prostat kanseri hücrelerinde ve HepG2 hepatoselüler karsinom hücrelerinde hem pAkt hem de pGsk3β düzeylerini düşürdü (Figür 3D–F).
    Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-20-02054-g003.jpg
    Ayrı bir pencerede aç
    Figür 3
    JE, prostat ve karaciğer kanseri hücrelerinde hem pAkt seviyelerini hem de hücre proliferasyonunu azalttı. Serum açlığı çeken 22RV1, DU145 ve HepG2 hücreleri, 24 saat boyunca JE ile işlendi. ( A – C ) Hücre proliferasyonu MTT tahlili ile tahmin edildi. ( D – F ) Hücre lizatları, Western blot ile pAkt Ser473, pGsk3β Ser9 ve P53 için analiz edildi. Yükleme kontrolü olarak Cdk2 kullanıldı. Veriler, çubuklar ± üç bağımsız deneyden standart sapma olarak sunulmuştur. * Kontrolden önemli ölçüde farklı, p ≤ 0.05. 2.5. Ardıç Özü A549 Küçük Akciğer Kanseri Hücrelerini 5-Florourasil ve Gemsitabine Karşı Duyarlılaştırdı


    JE aracılı mekanizmaların diğer hücre ölüm yollarıyla etkileşimi, akciğer ve pankreas kanserlerinde antikanser ilaçları olarak kullanılan 5-florourasil ve gemsitabin kullanılarak incelenmiştir. JE'nin bu bileşiklerin etkinliğini artırıp artırmadığını belirlemek için, JE'nin hücre canlılığı ve A549 hücrelerinde 5-florourasil ve gemsitabin tarafından indüklenen pAkt aktivasyonu üzerindeki etkilerini araştırdık. Tek başına 5-florourasil ve gemsitabin ile hücre canlılığındaki azalmalar, pAkt ve onun aşağı akış hedefi pGsk3β'deki azalma ile ilişkilendirildi (Şekil 4A, B). Hücreler, JE ve antikanser ilaçların bir kombinasyonu ile tedavi edildiğinde, hem pAkt hem de pGsk3β'deki azalmalar önemli ölçüde güçlendi, bu da pAkt yolunda 5-florourasil/gemsitabin ve ardıç arasında bir etkileşim olduğunu düşündürdü.
    Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-20-02054-g004.jpg
    Ayrı bir pencerede aç
    Şekil 4
    JE, A549 hücrelerinde pAkt'ı azalttı ve gemsitabin ve 5-florourasil'in etkisini artırdı. Serum açlığı çeken A549 hücreleri, 24 saat boyunca JE ve/veya gemsitabin veya 5-florourasil ile tedavi edildi. ( A ) Hücre proliferasyonu MTT tahlili ile tahmin edildi. ( B ) Hücre lizatları, Western blot ile pAkt Ser473 ve pGSK3p Ser9 için analiz edildi. Yükleme kontrolü olarak Cdk2 kullanıldı. Veriler, çubuklar ± üç bağımsız deneyden standart sapma olarak sunulmuştur. *Kontrolden önemli ölçüde farklı, p ≤ 0.05.

    Git: 3. Tartışma


    Verilerimiz, düşük konsantrasyonlarda JE'nin birkaç kanser hücre hattında Akt'nin fosforilasyonunu inhibe ettiğini göstermektedir. Ardıçın hücreleri sitostatik ilaçlara karşı duyarlı hale getirdiğini gösteren sonuçları da sunuyoruz. Son raporlar, farklı ilaçların ve doğal ürünlerin birlikte kullanımının kanser tedavisinin etkinliğini artıracağını öne sürdü. Örneğin, statinler ve etoposid, doksorubisin veya 5-florourasil kombinasyonu ile tümörijenik hücrelerde apoptozun güçlenmesi bulundu [ 12 , 13 ]. Ayrıca, statin tedavisi, A549 küçük olmayan akciğer kanseri hücrelerinde etoposid ve 5-florourasil duyarlılığını arttırdı [ 14]. Statin kaynaklı apoptoz duyarlılığına, Akt fosforilasyonunun inhibisyonu ve nükleer translokasyonun aracılık ettiği öne sürülmüştür. Benzer şekilde, doğal bileşiklerin ve ekstraktların kullanımı ile artmış apoptoz bulunmuştur. Örneğin, kanser hücrelerinde şarap ve biberiye tedavilerinin antitümör etkilerine çeşitli bileşiklerin birleşik etkisi aracılık edebilir [ 15 , 16 ]. Daha önceki çalışmalar, ardıç özü [edilen insan SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde, p53 miktarı ve nükleer translokasyonunu arttırarak hücre ölümünü aktive edilen, özellikle de göstermiştir 3]. Bu çalışmada, JE'nin antikanser etkileri, p53 aktivasyonu ve pAkt inaktivasyonu ile paralel olarak görülmüştür; bu, özün, bu yolların her ikisini de düzenleyerek ve muhtemelen başka yollarla hücre ölümünü desteklediğini düşündürmektedir.

    JE'nin bir bileşim analizi, flavonlar, flavonoller, fenolik asitler, flavanoller ve biflavonoidler [ 1 , 2 , 3 , 17 ] olmak üzere beş ana gruba ayrılan birkaç fenolik bileşiği tanımladı . En bol bulunan fenolik bileşikler rutin, apigenin, isoscutellarein, hypolaetin, protocatechuic asit ve rutin idi. Burada, etkili konsantrasyonlar, doz bağımlılığı, maruz kalma süreleri ve mekanizmalar, incelenen tüm kanser hücre dizilerinde benzerdi ve nöroblastom hücrelerinde daha önceki bulgularımız ile karşılaştırılabilirdi. Buna göre, fenolik bileşiklerin benzersiz bir kombinasyonundan oluşan JE'nin spesifik apoptotik mekanizmalarla kanser hücrelerini hedef aldığı varsayılmıştır.

    Mevcut sonuçlar, JE'nin hücre ölümünü aktive etme yeteneğinin, burada çeşitli kanser hücre tiplerinde görüldüğü gibi daha genel bir etki olduğunu kanıtladı. Daha önceki çalışmalarda, JE yalnızca artan p53 aktivitesi ve hücre ölümü gösteren insan SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde incelendi [ 1 , 3 ]. Bu çalışmada, JE'nin antikanser etkileri, A549 küçük olmayan akciğer kanseri A549, 22RV1 ve DU145 prostat kanseri ve HepG2 hepatoselüler karsinom hücrelerinde de bulundu. İlginç bir şekilde, JE'nin etkileri, tek başına ilgili bileşikler için kullanılanlardan 100-1000x daha düşük konsantrasyonlarda bile oldukça küçük miktarlarda gözlemlendi. Tanımlanan fenolik bileşikler, JE işlemlerinde nanomolar konsantrasyonlarda mevcuttu [ 3]. Genel olarak, tek başına kullanıldığında, saf fenolik bileşikler, hücre canlılığını azaltmada veya mikromolar konsantrasyonlarda hücre ölümünü aktive etmede etkili olmuştur. Bu, örneğin SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde [ 1 , 18 , 19 ] apigenin ve kurkumin için veya A549 küçük akciğer kanseri hücrelerinde [ 20 , 21 ] naringenin ve kersetin için gösterilmiştir . Bu nedenle, JE'nin etkilerinin, ortak veya farklı mekanizmalar yoluyla birkaç bitki polifenolleri arasındaki güçlenme, sinerji veya her ikisinden kaynaklandığını öneriyoruz.

    PI3K/Akt sinyal yolu, insan kanserlerinde sıklıkla yukarı regüle edilir ve sitostatik ilaçlar tarafından indüklenir. Sonuçlarımız, JE'nin fosforilasyonunu inhibe ederek PI3K/Akt yolunu inhibe ettiğini göstermektedir. Treonin 308 ve Serin 473 defosforile edildi ve Akt yolunun tam aktivasyonu Treonin 308'deki Akt fosforilasyonuna bağlı olduğundan ve Serin 473'teki fosforilasyon treonin kaynaklı aktivasyonun korunmasına yardımcı olduğundan, Akt yolunun inaktivasyonu ile sonuçlandı. Bu inhibisyona, PHLPP1 ve PHLPP2 fosfataz seviyelerindeki JE kaynaklı artışlar aracılık edebilir. Bu fosfatazlar, Akt defosforilasyonundan sorumludur [ 10]. Hem PHLPP1 hem de PHLPP2, tümör baskılayıcılardır ve birçok kanserde aşağı regüle edilir, böylece Akt aktivitesini korur ve ayrıca çoğalmayı, büyümeyi ve hayatta kalmayı destekler. Ek olarak, JE, Akt'nin aşağı akış hedefi olan pGSK3β'nın fosforilasyonunu ve aktivasyonunu azalttı.

    Hücre ölümünün bir diğer önemli düzenleyicisi de p53 tümör baskılayıcıdır. p53, tümörlerin çoğunda mutasyona uğramış veya etkisiz hale getirilmiştir. Bu çalışmada, p53'ün nükleer translokasyonu ve bölünmüş/sağlam PARP oranı paralel olarak indüklendi ve bu, A549 hücrelerinde hücre ölümünün aktivasyonunu gösterdi. p53'ün JE tarafından aktivasyonu, akciğer, karaciğer ve prostat kanseri hücrelerinde Akt yolunun inhibisyonu ile aynı anda görüldü. Bu ve daha önceki sonuçlar, hücre ölümünün aktivasyonunun ardıç polifenollerinin birleşik etkileri aracılığıyla gerçekleştiğini göstermektedir [ 1 , 3 ]. Benzer güçlenme ve etkileşim, kanser hücrelerini doksorubisin, 5-florourasil ve gemsitabin gibi sitostatik ilaçlara duyarlı hale getiren statinler için de rapor edilmiştir [ 12 ,13 , 14 ] ve bitki özleri veya bileşikleri [ 1 , 15 ]. İlginç bir şekilde JE, A549 hücrelerinde 5-florourasil ve gemsitabinin antitümör etkilerini güçlendirebildi. İlaç kombinasyonlarının kullanımı sinerjik terapötik etkilere sahip olabilir, seçiciliği iyileştirebilir ve yan etkileri azaltabilir [ 22 ].

    p53 aktivasyonu ve Akt inhibisyonunun JE'nin hücre ölümünü teşvik eden mekanizmalar olduğu ve özellikle [ 23 , 24 ] sitostatik ilaçlarla birlikte kanser hücrelerinde ilaç kombinasyonlarının mekanizmalarını incelemek için potansiyel bir modeli temsil ettiği öne sürülmektedir . Mevcut sonuçların kesin mekanizmaları hala bilinmemektedir. Apoptoz ve ilaç duyarlılığının düzenlenmesinde PI3K/Akt, p53 ve PTEN aktivitelerinin etkileşimleri, örneğin küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücre dizilerinde bulunmuştur [ 23 , 24 ]. Bitki özleri ve bileşikleri, kanser ve diğer hastalıklara karşı ilaç geliştirme için potansiyel bir kaynak olarak geniş ilgi görmüştür [ 25].]. Bu nedenle, JE'nin p53'ü aktive etmek, PI3K/Akt yolunu inaktive etmek ve hücre ölümünü yeniden aktive etmek için birkaç amplifiye edici hedefi var gibi görünüyor.

    Git: 4. Malzemeler ve Yöntemler

    4.1. Bitki Malzemesi ve Reaktifler


    Baharat için yetiştirilen olgun ve kurutulmuş ardıç meyveleri ( Juniperus communis L.), Paulig Ltd, Finlandiya'dan ( http://www.pauliggroup.com ) ticari olarak elde edildi . Öğütülmüş ardıç meyvelerinin özleri, daha önce tarif edildiği gibi hazırlandı [ 17 ]. Kısaca, özütleme, üç saatlik bir hidrodistilasyon sırasında kaynar su ile gerçekleştirildi ve uçucu yağların çıkarılmasıyla sonuçlandı. Sulu ekstrakt süzüldü, dondurularak kurutuldu ve 4 °C'de saklandı. Ekstrakt verimi 422 mg/g öğütülmüş çilek olmuştur. Antikanser ilaçları 5-florourasil (5-Fu) ve gemsitabin, sırasıyla Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) ve Eli Lilly'den (Indianapolis, IN, ABD) satın alındı. 4.2. Hücre kültürü


    İnsan karsinoma hücre çizgileri A549, DU145, 22RV1 ve HepG2, ATCC'den (Manassas, VA, ABD) satın alındı. A549 hücre çizgisi, vahşi tip p53 ve Akt genotipi ile karakterize edilir. DU145, mutasyona uğramış bir p53 ve vahşi tip PTEN'e sahiptir; 22RV1, vahşi tip p53 ve PTEN'e sahiptir; ve HepG2, vahşi tip p53 genine ve PTEN'e sahiptir. A549 ve DU145 hücreleri, %10 inaktive edilmiş fetal bovin serumu (FBS) ve 1 mM sodyum piruvat ile DMEM içinde büyütüldü. 22RV1 hücreleri, %10 FBS ile takviye edilmiş Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) RPMI-1640 içinde büyütüldü. HepG2 hücreleri MEM'de Earl tuzları ve l ile büyütüldü.- 1 mmol/L sodyum piruvat, esansiyel olmayan amino asitler ve %10 inaktive edilmiş FBS ile takviye edilmiş glutamin. Ortam, penisilin-streptomisin ile desteklendi. Serum açlığı çeken hücreler, 24 saat boyunca %0.1 serum ile desteklenmiş ortam ile kültürlendi. DMSO, hücrelere eklendiğinde <%0.4'lük nihai konsantrasyonda 5-florourasil ve gemsitabini çözmek için kullanıldı. DMSO'nun hiçbir etkisi gözlenmedi. 4.3. Western Blotlama


    Hücreler PBS ile yıkandı ve IPB-7 tamponu (trietanolamin-HCl (TEA), 1 M, pH 7.8; NaCl, 5 M; sodyum deoksikolat, %4; Igepal CA-630 veya Nonidet P-40, %10) içinde parçalandı. inhibitörlü (1 mg/mL fenilmetilsülfonil florür, 0.1 mg/mL tripsin inhibitörü, 1 mg/mL aprotinin, 1 mg/mL leupeptin, 1 mg/mL pepstatin, 1 mmol/L Na 3 –VO 4ve 1 mmol/L NaF. Numuneler SDS-PAGE'ye tabi tutuldu ve bir PVDF membranı (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD) üzerine lekelendi. Protein bantları, Santa Cruz Biotechnology, Inc.'den (Santa Cruz, CA, ABD) Ser473 veya Thr308, p53, PARP ve Cdk2 tortusunda fosforile edilmiş Akt'ye karşı antikorlar kullanılarak problanmıştır; Cell Signaling'den pGSK3p Ser9 (Beverly, MA, ABD); PHLPP1 ve PHLPP2 antikorları, Bethyl Laboratories Inc.'den (Montgomery, TX, ABD) alınmıştır. Proteinler, ECL prosedürü (Amersham Biosciences, İsveç) ile görselleştirildi. Sonuçlar NIH Image 1.62 yazılımı ile analiz edildi. 4.4. konfokal mikroskopi


    Hücreler %4 formaldehit ile sabitlendi, %2 BSA tamponu içinde %0.2 Triton X-100 ile geçirgenleştirildi. İmmün boyama, fare monoklonal p53 antikoru kullanılarak yapıldı. İkincil antikorlar, Alexa 488 (NY, ABD'deki ThermoFisher Scientific'ten (Kat. Numarası: A1101) ile konjuge edildi. Hücreler, x63 plan A ile donatılmış bir Zeiss LSM 510 META konfokal lazer tarama mikroskobu (Zeiss, Oberkochen, Almanya) ile analiz edildi. yağa daldırmalı lens 488 nm'de bir argon lazeri uyarıldı ve floresan görüntüleri 500 ila 550 nm arasında kaydedildi Belirtilen proteinlerin lokalizasyonu, çok izli modda Zeiss LSM görüntüleme yazılımı ile ölçüldü. 4.5. MTT Testi


    Hücre canlılığı, MTT tetrazolyum tuzunu formazana dönüştürmek için hücresel mitokondriyal kapasiteyi saptayan 3-(4,5-dimetiltiazol-2il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili ile belirlendi. Hücreler, MTT (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) içeren ortam ile 4 saat süreyle inkübe edildi. Hücreler daha sonra DMSO içinde parçalandı. Absorbans 570-620 nm'de ölçüldü. 4.6. İstatistiksel analiz


    İstatistiksel analiz Student's t -testi kullanılarak yapıldı. Veriler ortalama ± SD olarak sunuldu. Deneyler, farklı hücre grupları ile en az üç kez yapıldı. Sonuçlar, p ≤ 0.05'te istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi .

    Git: 5. Sonuçlar


    Sonuç olarak, birkaç bitki fenolik bileşiği içeren JE, PI3K/Akt inhibisyonu ve p53 yollarının aktivasyonu yoluyla A549 küçük olmayan akciğer kanseri, HepG2 hepatokarsinom ve 22RV1 ve DU145 prostat kanseri hücrelerinde doza bağlı bir şekilde hücre ölümünü aktive etti. Bu düzenlemeye ardıçın Akt fosforilasyonu/defosforilasyonu, PHLPP1 ve PHLPP2, pGsk3 ve bozulmamış/parçalanmış PARP ve p53 aktivasyonu üzerindeki etkileri aracılık etti. Mevcut sonuçlar ayrıca JE'nin farklı kökenlerden ve spesifik hedef mekanizmalar yoluyla çeşitli kanser hücrelerinde hücre ölümünü teşvik edici etkilere sahip olduğunu göstermiştir.

    Git: Kısaltmalar
    A549 Küçük olmayan akciğer kanseri hücre hattı
    DMEM Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamı
    DMSO Dimetil sülfoksit
    DU145 Prostat kanseri hücre hattı
    HepG2 Hepatoselüler karsinom hücre hattı
    MTT 3-(4,5-Dimetiltiazol-2il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür
    P53 transkripsiyon faktörü
    pAkt fosforile Akt
    PARP Poli (ADP-riboz) polimeraz
    PBS fosfat tamponlu salin
    pGsk3Ser9 Fosforillenmiş glikojen sentaz kinaz-3
    PHLPP1/2 fosfatazlar
    PI3K fosfatidilinositol-3-kinaz
    PIP3 Fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfat
    ÇAY trietanolamin-HCl
    Git: Yazar Katkıları


    AR ve AG, tasarım, deneyler ve yazıya katkıda bulundu, ABD, çalışmaların ve el yazmasının tasarımına ve yazılmasına katkıda bulundu.

    Git: Finansman


    Bu araştırma Finlandiya'daki İsveç Kültür Vakfı tarafından finanse edildi.

    Git: Çıkar çatışmaları


    Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

    Git: Referanslar

    1. Lantto TA, Colucci M., Závadová V., Hiltunen R., Raasmaja A. SH-SY5Y ve CV1-P hücrelerinde fesleğen, ardıç, defne ve maydanozdan kurkumin, resveratrol ve bitki özlerinin sitotoksisitesi. Gıda Kimyası 2009; 117 :405–411. doi: 10.1016/j.foodchem.2009.04.018. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    2. Lantto TA, Dorman HJD, Shikov AN, Pozharitskaya ON, Makarov VG, Tikhonov VP, Hiltunen R., Raasmaja A. Sibirya çamının kimyasal bileşimi, antioksidan aktivitesi ve hücre canlılığı etkileri ( Pinus sibirica Du Tour) özü. Gıda Kimyası 2009; 112 :936–943. doi: 10.1016/j.foodchem.2008.07.08. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    3. Lantto TA, Laakso I., Dorman HJ, Mauriala T., Hiltunen R., Kõks S., Raasmaja A. Cellular Stress and p53-Associated Apoptosis by Juniperus communis L. İnsan SH-SY5Y Nöroblastom Hücrelerinde Berry Özü Tedavisi . Int. J. Mol. bilim 2016; 17 :1113. doi: 10.3390/ijms170711113. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    4. Iurlaro R., León-Annicchiarico CL, Muñoz-Pinedo C. Onkogenler ve Tümör Bastırıcılar Tarafından Kanser Metabolizmasının Düzenlenmesi. Met. enzimol. 2014; 542 :59-80. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
    5. Whibley C., Pharoah PDP, Hollstein M. p53 polimorfizmleri: Kanser etkileri. Nat. Rev. Kanser. 2009; 9 :95-107. doi: 10.1038/nrc2584. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    6. Bieging KT, Mello SS, Attardi LD p53 aracılı tümör baskılama mekanizmalarının çözülmesi. Nat. Rev. Kanser. 2014; 14 :359–370. doi: 10.1038/nrc3711. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    7. Rodgers SJ, Ferguson D., Mitchell C., Ooms L. Fosfoinositid fosfatazlar tarafından kanserde PI3K efektör sinyallemesinin düzenlenmesi. Biosci. Rep. 2017; 12 :BSR20160432. doi: 10.1042/BSR20160432. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    8. O'Neill AK, Niederst MJ, Newton AC Hayatta kalma sinyal yollarının fosfataz PHLPP tarafından baskılanması. ŞUBAT J. 2013; 280 :572–583. doi: 10.1111/j.1742-4658.2012.08537.x. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    9. Tiligada E. Hücresel stres, hücre döngüsü ve antikanser ajanlar arasındaki çapraz konuşma sırasında nükleer translokasyon. Kör. Med. Kimya 2006; 13 :1317-1320. doi: 10.2174/092986706776872952. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    10. Grzechnik AT, Newton AC PHLPP Tarih boyunca: PHLPP fosfatazların yaşamında on yıl. Biyokimya. Soc. Trans. 2016; 44 :1675-1682. doi: 10.1042/BST20160170. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    11. O'Brate A., Giannaakou P. p53 konumunun önemi: Nükleer mi yoksa sitoplazmik posta kodu mu? İlaç Direnci. Güncellemeler 2003; 6 :313-322. doi: 10.1016/j.drup.2003.10.004. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    12. Roudier E., Mistafa O., Stenius U. Statinler, memeli rapamisin hedefi (mTOR) aracılı Akt sinyalinin inhibisyonunu indükler ve p53 eksikliği olan hücreleri sitostatik ilaçlara duyarlı hale getirir. Mol. Kank. orada. 2006; 5 doi: 10.1158/1535-7163.MCT-06-0352. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    13. Mistafa O., Stenius U. Statinler, pankreas kanseri hücrelerinde P2X7 reseptörü aracılığıyla Akt/PKB sinyalini inhibe eder. Biyokimya. farmakol. 2009; 78 :1115–1126. doi: 10.1016/j.bcp.2009.06.016. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    14. Miraglia E., Högberg J., Stenius U. Statinler, pAkt sinyal yolunun modifikasyonları yoluyla antikanser etkileri sergiler. Int. J. Oncol. 2012; 40 :867-875. doi: 10.3892/ijo.2011.1223. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    15. Barron CC, Moore J., Tsakiridis T., Pickering G., Tsiani E. Şarapla insan akciğer kanseri hücre çoğalmasının ve hayatta kalmasının engellenmesi. Kanser Hücresi İnter. 2014; 14 :6. doi: 10.1186/1475-2867-14-6. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    16. Moore J., Megaly M., MacNeil AJ, Klentrou P., Tsiani E. Biberiye özütü, Akt/mTOR/p70S6K aktivasyonunu azaltır ve A549 insan akciğer kanseri hücrelerinin çoğalmasını ve hayatta kalmasını engeller. Biyomedya. Eczacı. 2016; 83 :725–732. doi: 10.1016/j.biopha.2016.07.043. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    17. Hinneburg I., Dorman HJD, Hiltunen R. Seçilmiş mutfak bitkilerinden ve baharatlardan elde edilen ekstraktların antioksidan aktiviteleri. Gıda Kimyası 2006; 97 :122–129. doi: 10.1016/j.foodchem.2005.03.028. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    18. Das A., Banik NL, Ray SK Flavonoidlere maruz kalan insan malign nöroblastom SH-SY5Y hücrelerinde kalpain ve kaspaz kaskadlarının katılımı ile apoptoz mekanizması. Int. J. Kanser. 2006; 119 :2575–2585. doi: 10.1002/ijc.22228. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    19. Karmakar S., Davis KA, Choudhury SR, Deeconda A., Banik NL, Ray SK Bcl-2 inhibitörü ve apigenin, insan malign nöroblastom hücre dizilerinde sinerjistik olarak çalıştı ve dışsal ve içsel yolların aktivasyonu ile apoptozu arttırdı. Biyokimya. Biyofiz. Araş. Komün. 2009; 388 :705–710. doi: 10.1016/j.bbrc.2009.08.071. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    20. Lee ER, Kang YJ, Choi HY, Kang GH, Kim JH, Kim BW, Han YS, Nah SY, Paik HD, Park SY, et al. İnsan Akciğer Epitel Karsinomu A549 Hücrelerinde Sentetik Naringenin Türevleri Tarafından Apoptotik Hücre Ölümünün İndüklenmesi. Biol. Eczacılık Boğa. 2007; 30 :2394–2398. doi: 10.1248/bpb.30.2394. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    21. Xingyu Z., Peijie M., Dan P., Youg W., Daojun W., Xinzheng C., Xijun Z., Yangrong S. Quercetin, Aurora B kinazını hedefleyerek akciğer kanseri büyümesini baskılar. Kank. Med. 2016; 5 :3156–3165. doi: 10.1002/cam4.891. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    22. Lehár J., Krueger AS, Avery W., Heilbut AM, Johansen LM, Price ER, Rickles RJ, Short GF, Staunton JE, Jin X., ve diğerleri. Sinerjik ilaç kombinasyonları, terapötik olarak ilgili seçiciliği geliştirme eğilimindedir. Nat. Biyoteknoloji. 2009; 27 :659–666. doi: 10.1038/nbt.1549. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    23. Tsai JY, Tsai SH, Wu CC Kemopreventif izotiyosiyanat sülforafan, küçük hücreli olmayan insan akciğer kanseri hücrelerinde anoikis direncini ve ankrajdan bağımsız büyümeyi azaltır. Toksikol. Uygulama farmakol. 2019; 362 :116–124. doi: 10.1016/j.taap.2018.10.020. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    24. Guntur VP, Waldrep JC, Guo JJ, Selting K., Dhand R. Artan P53 Proteini Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanserini İn Vitro Paklitaksel ve Cisplatine Karşı Duyarlılaştırır. Antikanser Araş. 2010; 30 :3557–3564. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
    25. Gorzynik-Debicka M., Przychodzen P., Cappello F., Kuban-Jankowska A., Gammazza AM, Knap N., Wozniak M., Gorska-Ponikowska M. Zeytinyağı ve Bitki Polifenollerinin Sağlığa Potansiyel Faydaları. Int. J. Mol. bilim 2018; 19 :547. doi: 10.3390/ijms19030686. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
    Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
    Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

    Yorum yap


    • #3
      Juniperus oxycedrus subsp.'nin antidiyabetik aktivitesi üzerine biyoaktivite rehberli bir çalışma . oxycedrus L. yaprakları

      Nilüfer Orhan aMustafa Aslan aBetül Demirci bFatma Ergun a

      https://doi.org/10.1016/j.jep.2012.01.042Hakları ve içeriği alın Soyut

      etnofarmakolojik alaka düzeyi


      Juniperus (Cupressaceae) türleri yayılış gösteren ülkelerde halk ilacı olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Kaynatma katran ardıcı subsp. oxycedrus L. yaprakları Türkiye'de kan şekerini düşürmek için dahili olarak kullanılmaktadır. Çalışmanın amacı


      Juniperus oxycedrus subsp.'nin hipoglisemik ve antidiyabetik aktivitelerini belirlemek . oxycedrus yaprakları ve biyoaktivite rehberli izolasyon tekniği ile aktif bileşikleri tanımlamak için. Malzemeler ve yöntemler


      Juniperus oxycedrus subsp.'nin etanol ve su özleri . oxycedrus (Joso), oral uygulamadaki yapraklar normal, glukoz-hiperglisemik ve streptozotosin ile indüklenen diyabetik sıçanlarda in vivo modeller kullanılarak incelenmiştir . Yoluyla , in vivo biyo-güdümlü bölümlere ayırma işlemleri, polar olmayan bir fraksiyon ayrıldı , n ana etken fraksiyon olarak silika jel kolon kromatografisi ile heksan subextract. Bu fraksiyonun alt fraksiyonlarının antidiyabetik aktiviteye sahip olduğu bulundu ve kimyasal bileşimleri aynı anda GC-FID ve GC-MS ile araştırıldı. Sonuçlar


      Bu, Joso yapraklarının antidiyabetik bileşenleri hakkında ilk rapordur. Palmitik, linoleik ve linolenik asit gibi yağ asitleri, alt fraksiyonlarda ana bileşikler olarak bulundu. Çözüm


      Sonuçlar, Joso yaprağı ekstresinin ve aktif bileşenlerinin diyabetes mellitus için faydalı olabileceğini gösterdi. grafik soyut

      1. İndir : Yüksek çözünürlüklü görüntüyü indirin (211KB)
      2. İndir : Tam boyutlu resmi indir
      Tanıtım

      Diabetes mellitusun tarihsel hesapları ilk olarak 2000 yılı aşkın bir süre önce birkaç eski kültürün tıbbi metinlerinde ortaya çıktı. Ek olarak, diyabet için kaydedilen tedaviler, büyük ölçüde diyet ve bitki bazlı ilaçları içeriyordu (Cheng, 2000). Diyabet için uzun bir kullanım geçmişine sahip bir bitkiden geliştirilmiş, onaylanmış bir antidiyabetik ilacın yalnızca bir örneği vardır: Fransız leylakından metformin ( Galega officinalis)) (Marles ve Farnsworth, 1995). Çok sayıda başka bitki, antidiyabetik ilaç geliştirme için aday olmaya devam ediyor ve bu bitkilerin birçoğu için antidiyabetik endikasyonları destekleyen klinik veriler ortaya çıkmaya başlıyor. Bu bakış açısı, diyabet yönetiminde bu bitkiler için mevcut olan fırsatı ve klinik antidiyabetik etkinlikleri için kanıtların durumunu özetlemektedir (Vuksan ve Sievenpiper, 2005).

      ardıçCupressaceae familyasına (Cypress familyası) ait en çeşitli kozalaklı ağaç türlerinden biridir. Kuzey yarımkürede Kuzey Kutup Dairesi'nden Afrika tropiklerinin dağlarına, deniz seviyesinden kereste hattının üstüne kadar geniş bir alana yayılmıştır (Adams, 2011). Ardıç meyveleri, özellikle kozalaklı ağaçlardan elde edilen tek baharat olan Avrupa mutfağında baharat olarak kullanılmaktadır. Böğürtlenler, kuzey Avrupa ve özellikle İskandinav mutfağında et yemeklerine keskin ve berrak bir tat vermek için kullanılmaktadır (Loizzo ve diğerleri, 2007). Bazı türlerinin toksik etkileri olmasına rağmen ardıç bitkisinin dünyanın çeşitli yerlerinde halk hekimliğinde birçok kullanım alanı bulunmaktadır (Seca ve Silva, 2006). Türkiye'de; ardıç katranı, yaprakları ve meyveleri yaraları iyileştirmek, karın ağrısı ve mide rahatsızlıkları, kadın hastalıkları, hemoroid, soğuk algınlığı, öksürük, bronşit, eklemlerde kalsinozis, mantar enfeksiyonlarına karşı, şeker hastalığı, böbrek iltihabı ve böbrek taşı düşürmeye yöneliktir (Tuzlacı ve Erol 1993, Yeşilada ve ark. 1995, Honda ve ark. 1996). Ek olarak kaynatmaJuniperus oxycedrus subsp. oxycedrus (Joso) yaprakları Eğirdir ve Isparta'da şeker hastalığında dahili olarak kullanılmaktadır (Tuzlacı ve Erol, 1993).

      Bu çalışma, normoglisemik, glukoz-hiperglisemik ve streptozotosin ile indüklenen diyabetik sıçanlarda Joso yapraklarının hipoglisemik aktivitesini değerlendirmeyi ve biyoaktivite rehberli fraksiyonasyon ve izolasyon teknikleri ile aktif bileşenlerini belirlemeyi amaçladı.Bölüm snippet'leri

      Bitki materyali


      Juniperus oxycedrus L. ssp. oxycedrus L. (Joso) yaprakları, Yozgat'ın (Türkiye) Akdağmadeni ilçesine bağlı Karapiri ilçesinden Temmuz 2007'de toplanmıştır. Bitki, N. Orhan tarafından teşhis edilmiş ve bir fiş örneği (GUEF 2616) Gazi Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Herbaryumunda saklanmaktadır.Su ekstraktının hazırlanması


      Doğranmış kuru yapraklar (1000 g), sürekli karıştırılarak 3 saat boyunca sıcak damıtılmış su (50 °C, 20 l) ile özümlendi . Ekstrakt süzüldü ve 40 °C'de indirgenmiş basınç altında buharlaştırıldı ve daha sonra liyofilize edildi (Water-Extract,Joso yaprağı ekstrelerinin hipoglisemik etkileri


      Bitkinin yapraklarının kaynatılması Türkiye'de diyabet için dahili olarak kullanılmaktadır, bu nedenle Joso yapraklarının iddia edilen hipoglisemik etkisini kanıtlamak için su ve etanol ekstraktları STZ ile indüklenen diyabetik hayvanlarda test edilmiştir. Etanol ekstraktlarının hipoglisemik etkisi, normoglisemik ve glukoz-hiperglisemik sıçanlarda 500 ve 1000 mg/kg dozlarında da araştırıldı . Normal, glukoz-hiperglisemik ve diyabetik sıçanlardan elde edilen veriler Tablo 1'de gösterilmiştir. Joso yapraklarının su özütü şunu göstermiştir.Tartışma


      Eski günlerden beri bitkiler birçok rahatsızlığı tedavi etmek için kullanılmaktadır, örneğin dünya çapında çok sayıda insanı etkileyen bir hastalık olan şeker hastalığının tedavisinde çeşitli tıbbi bitki türleri kullanılmaktadır.

      Türkiye'deki etnobotanik araştırmalar, diyabet ve hiperglisemik durum semptomlarını hafifletmek için birçok bitki ilacının kullanıldığını ortaya koydu. Daha önce de belirtildiği gibi, Juniperus oxycedrus subsp. oxycedrus (Joso) yaprakları, Eğirdir, Isparta'da dahili olarak kullanılmaktadır (Tuzlacı ve Erol, 1993).Sonuçlar


      İn-vivo antidiyabetik aktivite çalışmalarında, bitki ekstraktının antidiyabetik aktiviteye sahip olup olmadığını belirlemek için üç genel model kullanılır. Normoglisemik sıçanlar hipoglisemik etkiyi ortaya çıkarmak için, glukoz yüklü sıçanlar bağırsaklardan glukoz emilimi üzerindeki etki için ve STZ-diyabetik sıçanlar antihiperglisemik etkiyi değerlendirmek için kullanılır. Bu nedenle bu çalışmada üç farklı deneysel model bir arada kullanılmıştır.

      Tablo 1'de gösterildiği gibi, Joso yaprağı etanol özütüteşekkür


      Bu çalışma Nilüfer Orhan'ın “ Halk Tıbbında Diabetes Mellitus İçin Kullanılan Juniperus Türleri Üzerine Farmakognoz Araştırmaları ” adlı doktora tezinin bir parçası olup Gazi Üniversitesi Araştırma Fonu tarafından maddi olarak desteklenmiştir ( 02/2007-07 ).Referanslar (27)Daha fazla referans görüntüle (25) tarafından alıntılandı
      Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
      Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

      Yorum yap


      • #4
        Juniperus Communis Extract, Juniperus Oxycedrus Extract, Juniperus Oxycedrus Katranı, Juniperus Phoenicea Extract ve Juniperus Virginiana Extract'ın Güvenlik Değerlendirmesine İlişkin Nihai Rapor


        İlk Yayınlandı 1 Ocak 2001 Araştırma Makalesi
        https://doi.org/10.1080/10915810160233758 Soyut


        Ortak jumper, Avrupa, Asya ve Kuzey Amerika'da yetişen bir ağaçtır. Juniperus communis ve Juniperus oxycedrus'un olgun meyvesi, sırasıyla Juniperus Communis Extract ve Juniperus Oxycedrus Extract üretmek için ekstrakte edilen alkoldür. Juniperus Oxycedrus Katranı, J. oxycedrus'un odunundan elde edilen uçucu yağdır. Juniperus Phoenicea Extract, Juniperus phoenicea'nın sakızından gelir ve Juniperus Virginiana Extract, Juniperus virginiana'nın ağacından çıkarılır. Juniperus Oxycedrus Katranı damıtmanın bir yan ürünü olarak üretilse de, Ekstraktların hiçbirinin üretim süreci hakkında hiçbir bilgi mevcut değildi. Bu jumper çeşitlerinden elde edilen yağlar sadece koku bileşenleri olarak kullanılır; genellikle kaynak malzemenin buharla damıtılmasıyla üretilirler, ancak bu prosedürün ekstrakt üretmek için kullanılıp kullanılmadığı bilinmemektedir. Bir rapor, Juniper Communis Oil ve Juniperus Communis Extract'ın kimyasal bileşiminin benzer olduğunu, her biri çok çeşitli terpenoidler ve aromatik bileşikler, ara sıra alifatik alkoller ve aldehitler ve daha nadiren alkanlar içerdiğini belirtir. Juniperus Oxycedrus Tar'ın temel bileşeni, bir seskiterpen olan kadinendir, ancak kresol ve guaiacol da bulunur. Bununla birlikte, ekstraksiyon farklılıklarının veya bitki büyüme koşulları gibi herhangi bir başka faktörün bir sonucu olarak meydana gelebilecek kompozisyon değişikliklerinin kapsamını gösteren hiçbir veri mevcut değildi. Diğer bileşenlerin bileşimi hakkında bilgi mevcut değildi. Ekstraktların tamamı kozmetik formülasyonlarda biyolojik katkı maddesi olarak işlev görür, ve Juniperus Oxycedrus Tar, saç bakım maddesi ve koku bileşeni olarak kullanılır. Mevcut güvenlik testi verilerinin çoğu, çeşitli jumper çeşitlerinden elde edilen yağların kullanıldığı çalışmalardan alınmıştır. Kompozisyonda özütle beklenen benzerlik nedeniyle, bu veriler dikkate alındı. Hayvanları kullanan akut çalışmalar, yağ veya katranın çok az toksisitesini göstermektedir. J. communis ve J. virginiana ve Juniperus Oxycedrus Tar'dan elde edilen yağlar hayvanlarda cildi tahriş edici değildi. J. virginiana'dan elde edilen yağ bir duyarlılaştırıcı değildi ve J. communis'ten elde edilen yağ, hayvan testlerinde fototoksik değildi. Juniperus Oxycedrus Tar, birkaç tahlilde genotoksik olmuştur. Ekstraktların hiçbiri için genotoksisite verisi mevcut değildi. Juniperus Communis Extract, doğurganlığı etkiledi ve albino sıçanların kullanıldığı çalışmalarda düşük yaptı. Klinik testler, test edilen yağların hiçbirinde tahriş veya hassasiyet göstermedi, ancak katrana karşı bazı hassasiyet belirtileri gösterdi. Bu veriler, bu bileşenlerin güvenliğini değerlendirmek için yeterli görülmedi. Ek veri ihtiyaçları, mevcut kullanım verilerinin yoğunluğunu içerir; kozmetikte işlev; üretim yöntemleri ve kirlilik verileri, özellikle pestisitler; ultraviyole (UV) absorpsiyon verileri; UVA veya UVB aralığında absorpsiyon meydana gelirse, ışığa duyarlılaştırma verilerine ihtiyaç vardır; dermal üreme/gelişimsel toksisite verileri (etkisiz bir seviyenin belirlenmesini içerir); her ekstrakt için iki genotoksisite analizi (biri memeli sisteminde); pozitifse, Ulusal Toksikoloji Programı (NTP) yöntemleri kullanılarak gerçekleştirilen 2 yıllık bir dermal kanserojenlik testi gereklidir; Juniperus Oxycedrus Tar üzerinde NTP yöntemleri kullanılarak gerçekleştirilen 2 yıllık bir dermal kanserojenlik testi; ve her bir ekstrakt ve katranla ilgili tahriş ve hassasiyet verileri (yağlara ilişkin mevcut veriler tahmin edilemediği için bu verilere ihtiyaç vardır). Bu veriler elde edilene kadar, mevcut verilerin kozmetik formülasyonlarda bu bileşenlerin güvenliğini desteklemek için yetersiz olduğu sonucuna varılmıştır.

        Referanslar
        Abifadel, R. , P. Mortureux , M. Perromat , G. Ducombs ve A. Taieb. 1992 . Atopik dermatitte tatlandırıcılara ve parfümlere karşı duyarlılık . Kontakt Dermatit27: 43 – 46 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Adams, RP 1985 . Sedir ağacı yağı, biyosit ve yakıt kaynağı olarak kurak arazi ardıçlarının araştırılması. NTIS Rapor Numarası: PB88–102074.
        Google Akademik
        Adams, RP 1991 . Ardıç ve diğer orman ağacı yağlarının analizi . Mod. Yöntemler Bitki Anal. Yeni Ser.12: 131 – 157 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Agrawal, OP , S. Bharadwaj ve R. Mathur. 1980 . Juniperus communis meyvelerinin doğurganlık önleyici etkileri . Planta Med.39: 98 – 101 .
        Google Akademik
        Basto, AS ve A. Azenha. 1991 . Tütsü nedeniyle kontakt dermatit . Kontakt Dermatit24: 27 – 29 .
        Google Akademik | Medline
        Bilsland, D. ve A. Strong. 1990 . Bir aromaterapistte Fransız kadife çiçeği (Tagetes patula) esansiyel yağından kaynaklanan alerjik kontakt dermatit . Kontakt Dermatit23: 55 – 56 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Blakeway, JM 1982 . Uçucu yağların koruyucu özellikleri . J.Jpn. Kozmetik Bilimi Soc.6: 212 – 221 .
        Google Akademik
        Bonaga, G. ve GC Galletti. 1985 . Ardıç yağındaki uçucu bileşenin yüksek çözünürlüklü gaz kromatografisi ve kombine gaz kromatografisi/kütle spektrometrisi ile analizi . Ann Chim.75: 131 – 136 .
        Google Akademik
        Bouhlal, K., P. Meynadier, J. Peyron ve J. Meynadier. 1989 . Parfüm endüstrisinde kullanılan yaygın beton ve mutlakların cilt üzerindeki etkileri . J. Ess. Yağ Res.1: 169 – 195 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Budavari, S., ed. 1989 . Merck endeksi. Kimyasallar, ilaçlar ve biyolojik maddeler ansiklopedisi, 11. baskı. , 429 , 829, 1265, 1267. Rahway, NJ : Merck & Co. Committee on Food Chemicals Codex. 1996. Gıda kimyasalları kodeksi. Juniper Berries Oil, 207 ile ilgili monograf spesifikasyonları. Washington, DC: National Academy Press.
        Google Akademik
        Da Cunha, AP ve OLR Roque. 1989 . Juniperus communis L. Ssp'nin uçucu yağı ve alkollü özütünün kimyasal bileşimi. Nona Syme . J. Ess. Sıvı yağ. Res.1: 15 – 17 .
        Google Akademik | çapraz referans
        De Rijke, D. , R. Ter Heide ve H. Boelens. 1982 . Uçucu yağlarda küçük halkalı yeni bileşikler . Parfüm Aroması7: 31 – 37 .
        Google Akademik
        Dupuis, J. 1995 . EEC kozmetik direktifi. Güncellenmiş sürüm—1 Ağustos 1995 tarihine kadar tüm değişiklikleri içerir. Dir.76/768/EEC.
        Google Akademik
        Gıda ve İlaç İdaresi (FDA). 1984 . Kozmetik bileşenlerin kullanım sıklığı ve konsantrasyonu . FDA veritabanı. Washington, DC : FDA .
        Google Akademik
        FDA. 1992 . Kozmetik Ürün Bileşeni ve Kozmetik Hammadde Bileşimi Açıklamalarının Gönüllü Dosyalamasında Değişiklik . Besledi. Kayıt 57: 3128 – 3130 .
        Google Akademik
        FDA. 1994 . OTC İlaç İnceleme Madde Durum Raporu. Washington, DC : FDA . FDA. 1998. Kozmetik içerik maddelerinin kullanım sıklığı. FDA veritabanı. Washington, DC: FDA.
        Google Akademik
        Forbes, PD , F. Urbach ve RE Davies. 1977 . Koku hammaddelerinin fototoksisite testi . Gıda Kozmetik Toxicol.15: 55 – 60 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Frosch, PJ , B. Pilz , KE Andersen , D. Burrows , JG Camarasa , A. Dooms-Goossens ve G. Ducombs. 1995 . Kokularla yama testi: Avrupa Çevresel ve Kontakt Dermatit Araştırma Grubu'nun parfümlerin sık kullanılan 48 bileşeniyle yaptığı çok merkezli bir çalışmanın sonuçları . Kontakt Dermatit33: 333 – 342 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Fujii, T. , S. Furukawa ve S. Suzuki. 1972 . Tuvalet eşyaları için bileşik parfümler üzerine çalışmalar. Sabunlar için tahriş edici olmayan bileşik parfümler üzerinde . Yukugaku21: 904 – 908 .
        Google Akademik
        Gennaro, AR, ed. 1990 . Remington'ın farmasötik bilimleri, 765 . Easton, PA : Mack Publishing Co. .
        Google Akademik
        Gökçe, S. 1991 . Buhar halinde aroma bileşiklerinin antibakteriyel etkisi . J. Antibakt. Mantar önleyici. Temsilciler.19: 329 – 334 .
        Google Akademik
        Gosselin, RE , RP Smith ve HC Hodge, ed. 1984 . Ticari ürünlerin klinik toksikolojisi, 5. baskı. , Bölüm II, 230 . Baltimore : Williams ve Wilkins .
        Google Akademik
        Grant, J., ed. 1972 . Hackh'in kimyasal sözlüğü, 4. baskı. , 367 . New York : McGraw-Hill .
        Google Akademik
        Gupta, RC , MV Reddy ve K. Randerath. 1982 . Radyoaktif olmayan aromatik kanserojen-DNA eklentilerinin 32P etiketleme sonrası analizi . Karsinojenez3: 1081 – 1092 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Heston, BİZ 1975 . C3H-A(vy) ve C3H-A(vy)fB farelerinde meme bezi tümörleri ve hepatom oluşumunda sedir ağacı talaşı ve diyetin olası etkilerinin test edilmesi . J. Natl. Kanser Enstitüsü 54: 1011 – 1014 .
        Google Akademik | Medline
        İşihara, M. 1977 . Kozmetik ürünlerin içerikleri ile kapalı yama testleri sorunları . J.Jpn. Kozmetik Bilimi Soc.1: 87 – 102 .
        Google Akademik
        Jenner, PM , EC Hagan , JM Taylor , EL Cook ve OG Fitzhugh. 1964 . Gıda aromaları ve ilgili yapıdaki bileşikler. I. Akut oral toksisite . Gıda Kozmetik Toxicol.2: 327 – 343 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Kligman, AM 1966 . İnsan tahlili ile temas alerjenlerinin tanımlanması. III. Maksimizasyon testi. Temas duyarlılaştırıcıların taranması ve derecelendirilmesi için bir prosedür . J. Yatırım. Dermatol.47: 393 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Kligman, AM ve W. Epstein. 1975 . Temas alerjenlerini belirlemek için maksimizasyon testinin güncellenmesi . Kontakt Dermatit1: 231 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Lacy, MJ , CR Kent ve EW Voss. 1987 . d-Limonene: Tavşan kanının toplanmasında kullanım için etkili bir vazodilatör . laboratuvar animasyon. Bilim 37: 485 – 487 .
        Google Akademik | Medline
        Lawrence, BM 1984 . Uçucu yağlarda ilerleme . Parfüm Aroması9: 35 – 38 .
        Google Akademik
        Lawrence, BM 1990 . Uçucu yağlarda ilerleme . Parfüm Aroması15: 63 – 71 .
        Google Akademik
        Lehninger, AL 1975 . Biyokimya, 2. baskı. , 296 . New York : Değer .
        Google Akademik
        Lewis, RJ, ed. 1993a . Tehlikeli kimyasallar masası referansı, 3. baskı. , 750 . New York : Van Nostrand Reinhold .
        Google Akademik
        Lewis, RJ, ed. 1993b . Hawley'nin yoğunlaştırılmış kimyasal sözlüğü, 12. baskı. , 667 . New York : Van Nostrand Reinhold .
        Google Akademik
        Mambetsadykov, MB , ES Matyev , MA Orozov , VM Varvashtyan , ZS Dzhumagulova ve KM Sushanlo. 1990 . Ortak ardıç esansiyel yağının kimyasal bileşimi ve farmakolojik özellikleri . Kim. Çiftlik. Zh.24: 59 – 60 .
        Google Akademik
        Maruzzella, JC ve NA Sicurella. 1960 . Uçucu yağ buharlarının antibakteriyel aktivitesi . J. Am. Eczacılık Doç.49: 692 – 694 .
        Google Akademik
        Maurer, B. 1994 . Alkaloidler, bazlar ve uçucu yağlar . Parfüm Aroması19: 19 – 27 .
        Google Akademik
        McChesney, JD ve RP Adams. 1985 . Bitki özlerinin petrokimyasal ikameler ve biyolojik olarak aktif bileşikler için birlikte değerlendirilmesi . Ekonomik Botanik39: 74 – 86 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Phillips, DH , B. Schoket , A. Hewer ve PL Grover. 1990 . Polisiklik aromatik hidrokarbonların karışımları ile insan ve fare derisinde DNA eklenti oluşumu . IARC Sci. Yayın.104: 223 – 229 .
        Google Akademik
        Rafique, M. , M. Hanif ve FM Chaudhary. 1993 . Pakistan ardıç meyvelerinin uçucu yağının değerlendirilmesi ve ticari kullanımı . Pakistan J. Sci. Sanayi Res.36: 107 – 109 .
        Google Akademik
        Reddy, MV ve K. Randerath. 1986 . Yapısal olarak çeşitli DNA eklentileri için 32P-son etiketleme testinin duyarlılığının Nükleaz P1 aracılı arttırılması . Karsinojenez7: 1543 – 1551 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline | ISI
        Rempe, JM, LG Santucci, ed. 1997 . Japon kozmetik bileşenlerinin CTFA listesi, 3. baskı. , 14 , 56 . Washington, DC : CTFA .
        Google Akademik
        Koku Malzemeleri Araştırma Enstitüsü (RIFM). 1974 . Koku hammaddeleri monografları. Sedir Ağacı Yağı Virginiana . Gıda Kozmetik Toxicol.12: 845 – 846 .
        Google Akademik | çapraz referans
        RIFM. 1975 . Koku hammaddeleri monografları. Ardıç Tar . Gıda Kozmetik Toxicol.13: 733 – 734 .
        Google Akademik
        RIFM. 1976 . Koku hammaddeleri monografları. Ardıç meyvesi yağı . Gıda Kozmetik Toxicol.14: 333 .
        Google Akademik | çapraz referans
        RIFM. 1992 . RIFM 1992 çapraz referans listesi, 75 . Hackensack, NJ : Koku Malzemeleri Araştırma Enstitüsü .
        Google Akademik
        RIFM. 1996 . Cedarwood Oil, Virginia'nın fiziksel özellikleri . Açık epikutan testi (OET) kullanılarak Cedarwood Oil, Virginia üzerinde cilt hassaslaştırma çalışması. Hackensack, NJ : Koku Malzemeleri Araştırma Enstitüsü .
        Google Akademik
        Karaca, FJC ve WEH Sahası. 1965 . Uçucu yağların ve doğal kaynaklı diğer bazı ürünlerin kronik toksisitesi . Gıda Kozmetik Toxicol.3: 311 – 323 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Rothe, A. , A. Heine ve E. Rebohle. 1973 . Cilt ve solunum yolu için mesleki bir alerjen olarak ardıç meyvelerinden elde edilen yağ . Berufsdermatosen21: 11 – 16 .
        Google Akademik | Medline
        Rudzki, E. ve Z. Grzywa. 1977 . Uçucu yağ duyarlılığı için tarama maddesi olarak Peru Balsamı . Dermatolojik 155 : 115 – 121 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Rudzki, E. ve Z. Grzywa. 1986 . Parfüm karışımına alerji . Kontakt Dermatit15: 115 – 116 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Rudzki, E. , Z. Grzywa ve S. Brud. 1976 . 35 uçucu yağa duyarlılık . Kontakt Dermatit2: 196 – 200 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Sax, NI ed. 1979 . Endüstriyel malzemelerin tehlikeli özellikleri, 5. baskı. , 455 . New York : Van Nostrand Reinhold .
        Google Akademik
        Schoket, B. , I. Horkay , A. Kosa , L. Paldeak , A. Hewer , PL Grover ve DH Phillips. 1990 . Sedef hastalarının derisinde, organ kültüründe insan derisinde ve kömür-katranı ve ardıç topikal uygulamasını takiben fare derisinde ve akciğerinde DNA eklentilerinin oluşumu . J. Yatırım. Dermatol.94: 241 – 246 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Schwartz, CC, JG Nagy ve WL Regelin. 1980 . Ardıç yağı verimi, terpenoid konsantrasyonu ve geyik üzerindeki antimikrobiyal etkiler . J. Yaban Hayatı Yönetimi.44: 107 – 113 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Takacsova, M. , A. Pribela ve M. Faktorova. 1995 . Kekik, adaçayı, ardıç ve kekiklerin antioksidan etkilerinin incelenmesi . Die Nahrung39: 241 – 243 .
        Google Akademik | çapraz referans | Medline
        Takizawa, Y. , M. Noda , T. Kawamura , Y. Sakabe ve T. Ishibashi. 1985 . Doğal gıda katkı maddelerinin mutajenite araştırması II. Özet ve sonuç . Mutat. Res.147: 275 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Ueno, S. , N. Oyamada , K. Kuboto ve M. Ishizaki. 1984 . Doğal gıda katkı maddelerinin (tatlandırıcı maddeler) DNA'ya zarar veren etkinliği (II) . Shokuhin Eiseigaku Zasshi (J. Food Hyg. Soc. Japan)25: 378 – 382 .
        Google Akademik | çapraz referans
        Amerika Birleşik Devletleri Farmakope Sözleşmesi, Inc. 1995 . Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi ve Ulusal Formüler, 861 – 862 . Rockville, MD : Amerika Birleşik Devletleri Farmakope Sözleşmesi .
        Google Akademik
        Van Andel, P., E. Bleumink ve JP Nater. 1974 . Ahşap katranlarına pozitif yama testlerinin önemi . Trans. Aziz John Hastanesi. Dermatol. Soc.60: 94 – 98 .
        Google Akademik | Medline
        Wade, AE , JE Holl , CC Hilliard , E. Molton ve FE Greene. 1968 . Sıçanlarda ve farelerde ilaç metabolizmasının sedir ağacı ortamı tarafından değiştirilmesi . Farmakolog1: 317 – 328 .
        Google Akademik
        Wenninger, JA ve GN McEwen, Jr., ed. 1997 . Uluslararası kozmetik içerik sözlüğü ve el kitabı, 7. baskı. , 701 – 702 . Washington, DC : CTFA .
        Google Akademik
        Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
        Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

        Yorum yap


        • #5
          Epub 2019 17 Temmuz. Juniperus communis, Tümör Büyümesini Engelleyerek ve Apoptozu İndükleyerek Melanom Tümör Oluşumunu Bastırıyor

          Hong-Wei Gao1, Xiao-Fan Huang2 3, Tzi-Peng Yang3 4, Kai Fu Chang2 3, Ling-Wen Yeh3, Ming-Chang Hsieh3 4, Jun-Cheng Weng5, Nu-Man Tsai3 4
          Bağlantılar genişletmek
          Patoloji Bölümü, Üç Hizmetli Genel Hastane, Ulusal Savunma Tıp Merkezi, Taipei, TayvanSoyut


          Metastatik kapasitesi ve ölüm oranı yüksek olan melanom, Batı ülkelerinde sık görülen bir deri kanseridir. Bu çalışmanın amacı, Juniperus communis (JCo) ekstraktının melanomun baskılanmasında etkili olup olmadığını ele almak ve in vitro ve in vivo olarak dahil olan antikanser mekanizmalarını aydınlatmaktı.. JCo ekstraktının tümör baskılama ve toksisite üzerindeki antitümör kapasiteleri değerlendirildi ve sonuçlar, hücre döngüsünün aracılık edilmesi, otokrin sinyallemesinin azaltılması ve apoptozun indüklenmesi yoluyla tümör yükünün azaldığını gösterdi. Ayrıca, JCo özütü, yalnızca düşük patolojik ve fizyolojik toksisite ile test deneklerinin hayatta kalma oranını önemli ölçüde uzatmıştır. Ek olarak, JCo özütü, tümör eliminasyonu sürecinde kanser kök hücre ile ilişkili anjiyojenik ve metastatik proteinleri de azalttı. Bu sonuçlara dayanarak, bu çalışma, JCo özütünün tümör büyümesini baskıladığını ve apoptozu indüklediğini ve JCo özütünün melanom tümörijenezinin önlenmesi için yararlı olabileceğini düşündürmektedir.


          ................................................

          Juniperus Communis Extract, Kan-Beyin Bariyeri Yoluyla İnsan Glioblastomlarında Antitümör Etkiler Gösterir

          Tsai W.-C. a · Tsai N.-M. b,c · Chang K.-F. b,c · Wang J.-C. NS

          a
          Patoloji Anabilim Dalı, Üç Hizmetli Genel Hastane, Ulusal Savunma Tıp Merkezi, Taipei, Tayvan
          b Tıbbi Laboratuvar ve Biyoteknoloji Departmanı, Chung Shan Tıp Üniversitesi, Taichung, Tayvan
          c Chung Shun Tıp Üniversitesi Tıp Enstitüsü, Taichung, Tayvan
          d Departman Tıbbi Görüntüleme ve Radyolojik Bilimler Bölümü, Chang Gung Üniversitesi, Taoyuan, Tayvan

          Yazar bağlantıları, Sorumlu Yazar, Anahtar Kelimeler: ardıçGliomasitotoksisiteapoptozneovaskülarizasyon

          Cell Physiol Biochem 2018;49:2443–2462
          https://doi.org/10.1159/000493842

          Soyut

          Arka Plan/Amaç: Juniperus communis'ten (JCo)elde edilen bitkisel materyallerantikanser aktiviteye sahiptir. Bu çalışmada, bir JCo berry özütünün glioblastoma büyümesini baskılamadaki etkinliğini değerlendirdik.

          Yöntemler: JCo özütünün normal ve glioma hücre dizilerinin yaşayabilirliği üzerindeki etkileri, değiştirilmiş bir 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili kullanılarak analiz edildi. JCo özütü ve temozolomidin (TMZ) glioma hücreleri üzerindeki sinerjik terapötik etkisi, MTT analizi ile incelenmiştir. Apoptotik yolu belirlemek için akış sitometrisi analizi, terminal deoksinükleotidil transferaz aracılı nick end etiketleme (TUNEL) testi ve western blotlama yapıldı. in vivo belirlemek içinJCo özü etkinliği, sıçan 5 x 10 enjekte edilmiştir 4 arka deri ve beyin yarımkürede sıçan glioma RG2 hücreleri daha sonra ya JCo özü veya araç içeren sırt derisinde bir deri altı enjeksiyonu yapıldı. Son olarak, JCo toksisitesini değerlendirmek için kan ve histolojik incelemeler yapıldı.

          Sonuçlar: IC 50 JCo ekstresi değerleri sırasıyla 24 ve 48 saat sonra gliyoblastoma hücre çizgilerinde 57-69 ug / mL ve 49-67 ug / mL idi. Bununla birlikte, non-tümör hücre çizgilerinde, ilgili IC 50 JCo ekstresi değerleri 76-105 ug / mL ve 77-108 ug / mL idi. JCo özü daha güçlü bir sitotoksisite ve IC daha geniş bir aralığı vardı 50Temozolomidin (TMZ) neden olduğu etkilerle karşılaştırıldığında, normal hücrelere kıyasla gliomadaki değerler. Ek olarak, akış sitometrisi analizi, TUNEL testi ve western blotlamanın sonuçları, JCo özütünün, içsel ve dışsal apoptotik yolaklar yoluyla glioma hücre döngüsü durmasını indüklediğini ortaya koydu. İn vivoAraştırmalar, hayvan MRI'sı ile ölçüldüğü üzere JCo ile tedavi edilen sıçanlarda tümör boyutunda önemli bir azalma, JCo özütünün glioma hücre büyümesini etkili bir şekilde inhibe ettiğini ve kan-beyin bariyerini başarıyla geçtiğini gösterdi. İmmünohistokimyasal (IHC) boyama, JCo ile tedavi edilen glioma hücrelerinin sırasıyla %44,49, %5,88 ve %5,85'inde PCNA, VEGFR-1 ve VEGFR -2'nin pozitif sinyallerini saptadı. Bununla birlikte, PCNA, VEGFR-1 ve VEGFR-2'nin pozitif sinyalleri, araçla tedavi edilen glioma hücrelerinin sırasıyla %73,08, %9,67 ve %11,70'inde saptandı. PCNA ve VEGFR-1 ve -2'nin IHC incelemesi, JCo özütünün neovaskülarizasyon derecesini önemli ölçüde azalttığını gösterdi. Bununla birlikte, kan hücresi sayımı ve karaciğer enzimlerinin serum seviyelerinde, böbrek fonksiyon indeksinde,

          Sonuç: JCo özütü, kan-beyin bariyerine nüfuz etti ve PI3K/AKT/mTOR yolunun baskılanması yoluyla neovaskülarizasyonu azaltarak glioma hücre apoptozunu önemli ölçüde indükledi. Ayrıca, JCo özütü, neoplastik olmayan hayati organlar için TMZ'den daha az sitotoksikti.

          © 2018 Yazar(lar). Yayınlayan S. Karger AG, Basel

          Tanıtım
          2008 ve 2012 yılları arasında, Amerika Birleşik Devletleri'nde birincil merkezi sinir sistemi (CNS) tümörü vakalarının sayısı 100.000 kişi başına yaklaşık 28.57 idi [ 1 ]. Çocuklarda ve ergenlerde, primer CNS tümörleri en yüksek insidans ve mortalite oranlarına sahiptir. Meningiom en yaygın tip olmasına ve primer beyin tümörlerinin (PBT'ler) yarısından fazlasını oluşturmasına rağmen [ 1 ], malign PBT'lerin yaklaşık %80'i gliomlardır. Glioblastoma, tüm malign gliomaların %46.3'ünü oluşturur ve en kötü prognoza sahiptir. Radyoterapi ve kemoterapi ile kombine cerrahi müdahale, glioblastoma için standart tedavilerdir [ 2 ]. Radyoterapi ve kemoterapinin komplikasyonları arasında nörotoksisite, kognitif bozukluk, radyonekroz ve sekonder malignite yer alır.3 , 4 ]. Yakın zamanda geliştirilen bir terapötik, temozolomid (TMZ), DNA hasarına neden olan ve tümör apoptozunu indükleyen bir alkilleyici ajan olarak işlev görür [ 5 ]. Işınlama ve kemoterapi kombinasyonu, yüksek dereceli gliomalar için temel terapötik strateji haline gelmiştir. Son raporlar, O göstermiştir 6 -methylguanine DNA metiltransferaz (YÖNETİMİ) yükselticisi unmethylation ve uzun kodlayıcı olmayan RNA MALAT1 ifade TMZ tedavi [indirgenmiş bir etki ile sonuçlanabilir 6 , 7 ]. Ek olarak, TMZ'nin nötropeni ile ilişkili sendrom, trombositopeni ve lenfopeni gibi etkisiz kemik iliği fonksiyonlarını indükleyen yan etkileri vardır [ 8]. Son zamanlarda, anti-PD-1/PD-L1 ve anti-CTLA-4 gibi immün kontrol noktası inhibitörleri, glioma hücrelerinin ilerlemesini bloke etme yeteneğini göstermiştir [ 9 ]. İmmünoterapinin potansiyel bir riski, ensefalit olasılığını artıran immün hücre düzensizliğinin indüklenmesi olabilir [ 9 ]. Birkaç çalışma, PBT'lerin tedavisi için geleneksel Çin tıbbının kullanılmasını önermiştir [ 10 - 13 ].

          Şifalı otlar, çeşitli insan hastalıkları için alternatif tedaviler sağlar. Şifalı bitkilerin farmasötik etkileri arasında anti-inflamatuar [ 14 ], antibiyotik [ 15 ] ve immün düzenleyici aktiviteler [ 16 ] yer alır. Son zamanlarda yapılan çalışmalarda likenler, Juniperus ve Angelica gibi çeşitli bitki türlerinden elde edilen ekstraktların beyin tümörü hücre ilerlemesine ve anjiyogeneze karşı etkili olduğu kanıtlanmıştır [ 17 - 19 ]. Bitkisel ilaç terapötiklerin daha yarısı diğer kemoterapötik maddeler daha az yan etkilere sahip, doğal beslenme bitkiler, [ayıklanır 20]. Bununla birlikte, bitkisel ilaçların kanser tedavisindeki uygulamaları bazı dezavantajlarla sınırlı kalmaktadır [ 21 ]. İlk olarak, bitki özleri, genellikle saflaştırılması zor olan birçok bileşik içerir. Bu bileşikler arasındaki etkileşimler, öngörülemeyen bitkisel ilaç etkilerine yol açabilir. Ayrıca, bazı bitkisel terapötiklerin altında yatan mekanizmalar hala bilinmediğinden, in vitro ve in vivo sırasında gözlenen sitotoksik etkilerdeki farklılıklarçalışmalar ayrıca şifalı bitkilerin uzun süreli kullanımını da kısıtlamaktadır. Son olarak, kan-beyin bariyeri (BBB) ​​nedeniyle beyin tümörü büyümesini baskılamak için bitkisel terapötikleri kullanmak zordur. Bu nedenle, BBB yoluyla gelişmiş penetrasyon ve beyin tümörlerine güçlü sitotoksisite ile bitkisel terapötiklerin geliştirilmesi, glioblastoma multiforme (GBM) hastaları için etkili bir terapötik seçenek sunabilir.

          Juniperus communis (JCo), güneybatı Asya ve Kuzey Amerika'da yetişen yüksek rakımlı bir bitkidir [ 22 ]. JCo meyvelerinden ve yapraklarından bazı alkaloidler, flavonoidler, glikozitler, tanenler, fenolik bileşikler ve steroidler kloroform ve metanol kullanılarak ekstrakte edilebilir [ 23 ]. Bu kimyasal bileşenlerin farmakolojik aktiviteleri arasında anti-inflamatuar [ 24 , 25 ], antifungal [ 26 ], analjezik [ 27 ], hepatoprotektif [ 23 ], antimikrobiyal, anti-mikobakteriyel [ 28 , 29 ] ve nöroprotektif [ 22 ] yer alır.] Etkileri. Yakın tarihli bir çalışmada, Benzina ve ark. JCo'dan ekstrakte edilen deoksipodofilotoksinin meme kanseri hücrelerinde apoptozu indüklediğini gösterdi [ 30 ]. Ayrıca Lantto ve ark. JCo berry özütünün, PI3K/AKT/mTOR yolunun inhibisyonu yoluyla nöroblastom hücrelerinde potansiyel olarak p53 ile ilişkili apoptozu indüklediğini gösterdi [ 18 ]. Bu nedenle, JCo ekstraktının glioblastoma hücre proliferasyonu üzerindeki etkisini analiz ettik.

          Bu çalışmada, JCo ekstraktının glioblastoma hücreleri üzerindeki etkilerini incelemek için in vitro ve in vivo testler uyguladık. Sonuçlarımız, JCo özü bileşenlerinin, insan glioblastomlarında tümör proliferasyonunu inhibe etmek ve hücre apoptozunu indüklemek için BBB'ye nüfuz ettiğini gösterdi.
          Malzemeler ve yöntemler

          Kloroform ve aseton ekstraksiyonu ile bitki ekstraktının hazırlanması
          Juniperus communis'in (JCo) kökleri Chung-Yuan Co. (Taipei, Tayvan) tarafından sağlandı. Bir kupon herbaryum örneği Ulusal Savunma Tıp Merkezindeki (Taipei, Tayvan) Eczacılık Okuluna yatırıldı. JCo ekstraksiyonu daha önce tarif edildiği gibi yapıldı [ 19 ]. Toplam 12 kg kurutulmuş ve toz haline getirilmiş JCo rizomları, bitki materyalini elde etmek için üç kez aseton (ekstraksiyon başına 24 L), üç kez kloroform (ekstraksiyon başına 24 L) ve daha sonra tekrar aseton ile özümlendi. Ekstrakt DMSO içinde çözüldü, 25°C'de 1 saat çalkalanarak inkübe edildi ve daha ileri çalışmalara geçmeden önce 4°C'de saklandı.

          Hücre hatları ve kültür koşulları
          DBTRG-05MG (insan GBM), RG2 (sıçan GBM), SVEC (fare vasküler endotelyal hücreleri) ve MDCK (fare böbrek hücreleri), American Type Culture Collection'dan (Rockville, MD) elde edildi. Ek olarak, GBM8401, GBM8901, G5T/VGH ve N18 hücreleri, Chung-Shan Tıp Üniversitesi'nin laboratuvar koleksiyonundan elde edildi. DBTRG-05MG, GBM8401, GBM8901, G5T / VGH ve N18 hücreler,% 5 CO içeren nemli bir atmosferde 37 ° C 'de RPMI 1640 içinde kültürlenmiştir 2 . RG2, Svec ve MDCK hücreleri,% 5 CO içeren nemli bir atmosferde 37 ° C 'de, Dulbecco değiştirilmiş Kartal ortamı (DMEM, Gibco) içinde kültürlenmiştir 2 . Ortam, %10 fetal sığır serumu (GIBCO, Meksika), %1 sodyum piruvat (GIBCO, ABD), %1 HEPES tampon solüsyonu (GIBCO, ABD) ve %1 penisilin/streptomisin (GIBCO, ABD) ile desteklendi.
          Sitotoksisite analizi


          JCo özütünün sitotoksisitesini belirlemek için, hücre canlılığını ölçmek için değiştirilmiş bir 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili kullandık. İlk, 5 × 10 3100 uL büyüme ortamındaki glioma veya normal hücreler 96 oyuklu plakalarda inkübe edildi ve tedaviden önce 20 saat büyütüldü. Daha sonra 100 uL JCo özütü ve TMZ ortam (500 ug/mL) içinde çözüldü ve hücrelere eklendi. 24-48 saat inkübasyondan sonra, ilaç içeren ortam, 8-12 saatlik inkübasyon için MTT (500 µg/mL) içeren 50 µL taze ortam ile değiştirildi. MTT ortamı daha sonra çıkarıldı ve her bir oyuğa 50 uL DMSO ilave edildi. 550 nm'de çözünmüş çözeltilerin absorbansı, bir MRX Microtiter Plate Luminometer (DYNEX, Sunnyvale, CA) kullanılarak saptandı. Muamele edilmemiş kontrol hücrelerinin absorbans değeri% 100 olarak tanımlandı ve IC 50 , işlenmemiş hücrelerde ninki ile karşılaştırıldığında ilaçla işleme tabi tutulmuş hücrelerde emilmede% 50'lik bir azalmaya neden olan konsantrasyon olarak tanımlanmıştır.
          JCo ve TMZ'nin sinerjik etkileri

          İlk olarak, 5 x 10 3 hücre / 100 uL, 96 oyuklu bir plakanın her bir göze yerleştirilmiş ve hücreler 70% -80% konfluansa ulaşılana kadar 12-18 saat için kültürlenmiştir. İki tip tedavi uygulandı: grup I, 0, 20, 40, 80, 120 ve 160 ug/mL'de 50 uL TMZ ile tedavi edildi; ve grup II, 50 uL JCo özütü (40 µg/mL) veya 50 uL JCo özütü ile 0, 10, 20, 40, 60 ve 80 µg/mL'de 50 µL TMZ (80 µg/mL) ile tedavi edildi. ). 24 ve 48 saat kuluçkadan sonra, hücre canlılığını analiz etmek için MTT tahlili yapıldı. Sinerjistik etki kombinasyon indeksi (CI) = (IC hesaplanması sureti ile tespit edilmiştir 50 / IS kombine ilaç 50 sadece grubunun ilacın I) + (IC 50 kombine ilaç / IC 50sadece grup II'nin ilacı). Chou-Talalay yöntemine göre, aşağıdaki ilaç-ilaç etkileşim kriterleri CI tarafından dikkate alınmıştır: sinerjistik etki, CI < 0.9; katkı etkisi, CI = 0.9–1.1; ilaçların antagonist etkisi, CI > 1.1 [ 31 ].
          Hücre döngüsü analizi

          DBTRG-05MG ve RG2 (2 × 10 6hücreleri) 18 saat inkübe edildi ve bir zaman süreci ve bir ilaç dozaj grubuna bölündü. Süreli grupta, hücre döngüsü, 60 ug/mL JCo özütü eklendikten sonra 0, 6, 12, 24 ve 48. saatlerde analiz edildi; ilaç dozaj grubunda 0, 30, 60 ve 90 µg/mL içeren çeşitli konsantrasyonlarda JCo özü incelenmiştir. Hücre döngüsü durumu, JCo özütünün uygulanmasından 24 saat sonrasına kadar akış sitometrisi ile tespit edildi. Her iki glioma hücresi grubu tripsinize edildi, toplandı ve iki kez PBS ile yıkandı. Hücreler, 5 dakika boyunca 1000 rpm'de santrifüjlendi, 0.5 mL PBS içinde yeniden süspanse edildi, 4.5 mL %70 buz gibi soğuk etanol içinde sabitlendi ve 4°C'de saklandı. Analiz gününde hücreler, santrifüjleme ile toplandı ve topaklar, %0.1 Triton-100 (Sigma) ve 1 mg/mL RNaz A (Sigma) içeren 0.2 mg/mL propidyum iyodür içinde yeniden süspanse edildi. Hücre süspansiyonu karanlıkta 20 °C±2 °C'de 30 dakika inkübe edildi ve ardından bir akış sitometresi (FACSCalibur; Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, ABD) kullanılarak DNA içeriği için analiz edildi. Hücre döngüsünün her aşamasındaki hücrelerin yüzdesi, bir BD Cell quest bilgisayar programı kullanılarak hesaplandı. Veriler, üç kopya halinde gerçekleştirilen üç deneyden toplanmıştır.

          Hücre apoptozunu tespit etmek için terminal deoksinükleotidil transferaz aracılı nick end etiketleme (TUNEL) testi
          JCo özütü ile glioma hücrelerinde apoptoz indüksiyonunu değerlendirmek için TUNEL testini kullandık (In Situ Cell Death Detection Kit, TUNEL kiti, Roche, Almanya). Başlangıçta, 2 x 10 6 hücre kültürlenebilir ve ayrık zaman noktalarında analiz (0, 6, 12, 24, ve 48 saat 50 ug / ml JCo özü tedaviden sonra) ilave edilmiştir. JCo ile muamele edilmiş hücre grubunda, askıya alınan hücreler toplandı. Kontrol grubunda yapışık ve yüzen hücreler toplandı. Hücreler, silan kaplı cam slaytlar üzerinde 15 dakika boyunca oda sıcaklığında %3.7 formaldehit ile sabitlendi. TUNEL testi için tüm prosedürler daha önce yayınlanmış bir protokolü takip etti [ 19]. Floresan boyamadan sonra, slaytları gözden geçirmek ve apoptozun derecesini ölçmek için bir floresan mikroskobu (Nikon, Kawasaki, Japonya) kullandık. Son olarak, 48 saatlik JCo özü tedavisi için görüntü temsilcisini inceledik.

          Western blot analizi
          JCo özütleme işleminden sonra hücre döngüsünü ve apoptozla ilişkili protein ekspresyonunu saptamak için western blot yöntemini kullandık. İlk, 2 × 10 6DBTRG-05MG ve RG2 hücreleri, 18 saat boyunca bir kültür kabında inkübe edildi. Hücreler, zaman süreci grubunda 0, 6, 12, 24 ve 48 saat boyunca 60 ug/mL JCo özütünün uygulanmasından sonra toplandı. Tedavinin doza bağımlılığını analiz etmek için hücreler 0, 30, 60 ve 90 µg/mL JCo özütünün eklenmesinden 24 saat sonra toplandı. Tüm hücreler, 10 dakika boyunca 4 °C'de RIPA tamponu (100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, %0.1 SDS ve %1 Triton X-100) içinde inkübasyon yoluyla parçalandı. Ham hücre lizatları, temizlenmiş süpernatanlar elde etmek için 10 dakika boyunca 15.000 rpm'de santrifüjlendi. Her gruptan hücre lizatları (30 ug), %10 sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezine tabi tutuldu. Proteinler poliviniliden diflorür (Millipore, MA, ABD) üzerine aktarıldı ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca TBST içinde %5 yağsız süt ile bloke edildi. TBST (12.5 mM Tris/HCl, pH 7.6, 137 mM NaCl, %0.1 Tween 20) içinde %5 yağsız süt ile bloke edildikten sonra, lekeler gece boyunca 4 °C'de birincil antikorlarla inkübe edildi, ardından ikincil antikorla inkübe edildi . Bu çalışmada, birincil antikorlar hücre döngüsü ile ilgili proteinleri siklin A, siklin B1, siklin D1, Cdk2, Cdk4, RB, p-RB, p53, p-p53, p21 ve p-p21 (1/200 seyreltme) tanıdı. ; Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, ABD) ve apoptozla ilgili protein Fas, Fas ligandı, kaspaz-8, Bax, Bcl-2, AIF, kaspaz-9 ve kaspaz-3 (1/200) seyreltme; Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, ABD). Lekeler, oda sıcaklığında 30 dakika süreyle uygun bir HRP etiketli ikincil antikor ile inkübe edildi, kapsamlı bir şekilde yıkandı ve bir T-Pro LumiFast Plus Kemilüminesans Tespit Kiti (T-Pro BIOTECHNOLOGY, ABD) üreticinin talimatlarına göre. Dahili kontrol olarak bir monoklonal fare anti-β-aktin antikoru (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) kullanıldı.
          Apoptotik yolakları tespit etmek için kaspaz inhibitörü tahlili

          JCo özütü ile tedavi edilen glioma hücrelerinin apoptotik yolunu belirlemek için, çeşitli pro-kaspaz alt tiplerinin nispi protein ekspresyonu western blot analizi ile tespit edildi. Başlangıçta x 10 5 5 DBTRG-05MG ve RG2 hücreler 18 saat daha inkübe edildi. Bu hücreler dört gruba ayrıldı: kaspaz inhibitörü (-)/JCo (-); kaspaz inhibitörü (+)/ JCo (-); kaspaz inhibitörü (-)/ JCo (+); ve kaspaz inhibitörü (+)/ JCo (+). Birincil antikorlar, pro-kaspaz 8, 9 ve 3 idi ve dahili kontrol olarak β-aktin kullanıldı.

          Deri altı tümörlerin bir hayvan modelinde JCo'nun terapötik etkileri
          Bir in vivo çalışmada JCo özütünün terapötik etkilerini kontrol etmek için , antitümör aktivitesini izlemek için hayvan deneylerinde DBTRG-05MG insan GBM hücreleri kullanıldı. 1 x 10 'nın deri altına implantasyonu 7 hücre / 100 uL National Laboratory Animal Center (Taipei, Tayvan) elde edilen (10-12 haftalık), erkek Foxn1 nu / nu farelerinde gerçekleştirilmiştir. Tümör taşıyan grup ve araç grubu hayvanlar, tümör implantasyonundan 5 ila 23 gün sonra her 2 günde bir sırasıyla 200 mg/kg JCo özütü ve %5 DMSO'nun deri altından enjeksiyonu (sc. enjeksiyon) yoluyla JCo ile tedavi edildi. Tümör implantasyonu ve JCo sc arasındaki mesafe. enjeksiyon yerleri 2 cm idi. Tümör hacmi 1 geçtiğinde hayvanlar feda edildi, 500 mm 3veya aşılamadan 100 gün sonra. Tümör hacmi L x H x W x 0.5236 (20) olarak hesaplandı.

          Yerinde bir glioma modelinde JCo'nun terapötik etkisi
          Beyin tümörlü hayvanlarda JCo'nun terapötik etkilerini saptamak için, JCo ile tedavi edilen ve araçla tedavi edilen sıçanlar arasındaki tümör boyutundaki fark MRI ile incelendi. Ulusal Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nden (Taipei, Tayvan) sekiz F334 dişi sıçan (8-10 haftalık, 150-180 g ağırlık) elde edildi. Başlangıçta, 5 × 10 4RG2 (rat GBM) hücreleri, uygun anestezi altında stereoskop ile tüm sıçanların beyin yarıkürelerine aşılandı. Daha sonra, sıçanlar, JCo özütünün veya aracın uygulanması için iki eşit gruba ayrıldı. JCo özütü (%5 DMSO ile 200 mg/kg) sc idi. tümör inokülasyonundan sonra 3. gün ile 7. gün arasında günlük olarak uygulanır. Araç grubunda, JCo tedavisi ile aynı zaman noktalarında deri altı bölgeye %5 DMSO enjekte edildi. Tümör hacmi, tümör hücrelerinin aşılanmasından sonraki 11. ve 13. günlerde Ulusal Tayvan Üniversitesi'nde (Taipei, Tayvan) 7-T manyetik rezonans görüntüleme (7 Tesla, Bruker BioSpec 70/30 MRI) ile ölçüldü ve hesaplandı. Tümör hacmi 1 aştığında sonunda, hayvanlar kurban edilmiş, 500 mm 3veya tümör aşılamasından 100 gün sonra. Tümör bileşenleri ve kalp, karaciğer, dalak, akciğer, böbrek ve bağırsak dahil olmak üzere bazı hayati organlar hematoksilen ve eozin (H&E) ve immünohistokimyasal (IHC) boyamaya tabi tutuldu.

          H&E boyama
          JCo özütü varlığında veya yokluğunda tümör ve normal dokuların GBM'sinin histolojik H&E boyaması için dokular %10 nötr formalin içinde sabitlendi. Dokular kurutulduktan ve parafin mumu içine gömüldükten sonra, doku kesitleri (4 µm/kesit) temiz cam lamlara yerleştirildi ve 60 °C'de 30 dakika boyunca bir fırında kurutuldu. Boyamadan önce doku slaytları deparafinize edildi, yeniden hidratlandı ve ardından Mayer hematoksilen ve eozin Y solüsyonu ile 3 dakika boyunca boyandı.

          immünohistokimya
          JCo özütünün etkisinin altında yatan olası mekanizmayı bir in vivo ortamda incelemekçalışmada, anjiyojenik faktörlerin IHC boyamasını gerçekleştirdik. Tüm doku kesitlerinin ksilen içinde mumu giderildi, alkol içinde yeniden hidratlandı ve endojen peroksidaz aktivitesini bastırmak için 5 dakika boyunca %3 hidrojen peroksite daldırıldı. Antijen alımı, 0.01 mol/L sodyum sitrat tamponu (pH 6.0) içinde her bölümün 30 dakika ısıtılmasıyla (100 °C) gerçekleştirildi. Fosfat tamponlu salin [PBS] içinde her biri 5 dakika boyunca üç durulamadan sonra, kesitler 1 saat boyunca oda sıcaklığında anti-PCNA, anti-VEGFR1, anti-VEGFR2 ve anti-parçalanmış kaspaz-3 için birincil antikorlarla inkübe edildi ( 1/200 seyreltme; Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, ABD) PBS içinde seyreltildi. Her biri PBS'de 5 dakikalık üç yıkamadan sonra, kesitler oda sıcaklığında 1 saat biotin etiketli sekonder immünoglobulin (1:100, DAKO, Glostrup, Danimarka) ile inkübe edildi. Üç ilave yıkamadan sonra,
          Sonuçlar

          JCo özütü ve TMZ'nin beyin tümörü ve diğer hücre dizileri üzerindeki sitotoksik etkileri
          Tümör ve tümör olmayan hücrelerde JCo özü ve TMZ sitotoksisitesini karşılaştırmak için, YO değerlendirildi 50 DBTRG-05MG, G5T / VGH, GBM8401, GBM8901, RG2 (glioblastoma hücre hatları) değerleri, N18 (nöroblastoma hücre çizgisi), CTX TNA2 (sıçan astrosit hücre dizisi), SVEC (vasküler endotel hücre dizisi) ve MDCK (böbrek endotel hücre dizisi). Glioblastoma ve nöroblastom hücrelerinin JCo özütü ile tedavisi, 24 ila 48 saatlik gözlem arasındaki ilaç konsantrasyonuna bağlı olarak hücre canlılığının çeşitli derecelerde inhibisyonu ile sonuçlandı (Şekil 1 ). IC 50 JCo ekstresi değerleri tively ec Resp, 24 ve 48 saat sonra gliyoblastoma hücre çizgilerinde 57-69 ug / mL ve 49-67 ug / mL idi. ilgili IC 50JCo özütünün değerleri, tümör olmayan hücre hatlarında 76-105 µg/mL ve 77-108 µg/mL idi (Tablo 1 ). IC farkı 50 tümör ve tümör olmayan hücre hatları arasında değerler, ilaç tatbikatından güvenliğini ve etkinliğini teyit etmiştir. Bunun aksine, IC 50 TMZ değerleri 24 ve 48 saatte JCo özütü önemli ölçüde daha yüksekti, fakat tümör ve neoplastik olmayan hücre çizgileri arasındaki farklar anlamlı değildi.
          Tablo 1.

          JCo'nun IC50'si GBM hücre dizilerinde özütlenir. Not: Değerler, 24 saat ve 48 saatte ortalama + SD (μg/ml) şeklindedir. a: Tümör ve normal hücreler arasında anlamlı fark vardı. (p < 0.05). b: JCo tedavi grubu ile TMZ grubu arasında anlamlı fark (p < 0.05)


          1.


          JCo özü ile GBM hücrelerinin büyüme inhibisyonu. DBTRG-05MG, RG2, GBM8401, GBM8901, G5T/VGH ve N18'i içeren tümör hücreleri, gece boyunca 96 oyuklu kültür plakalarında inkübe edildi ve 24 ve 48 saat boyunca JCo özütü (0-200 ug/ml) ile işlendi. . Hücre canlılığı, MTT tahlili kullanılarak belirlendi. Kontrol grubu olarak işlem görmemiş kuyucuklar kullanıldı.


          JCo özütü ile hücre döngüsünün durdurulması

          Glioblastomaların hücre döngüsü kesintisini saptamak için, çeşitli konsantrasyonlarda ve zamanlarda JCo özütünün eklenmesinden sonra DBTRG-05MG ve RG2 glioma hatlarını analiz etmek için akış sitometrisini kullandık. 60 ug/mL JCo özütünün GBM hücrelerine uygulanması, S fazında hücre döngüsünün önemli ancak kademeli olarak durdurulmasıyla sonuçlandı, %12.61, %5.51, %7.49. 0, 6, 12, 24 ve 48. saatlerde sırasıyla %5.57 ve %6.26 ve G2/M fazı, %36.86, %36.93, %32.04, %33.00 ve %35.93 (Şekil 2A). Ek olarak, kontrol grubuyla karşılaştırıldığında (G0/G1: %50.54; S: 12.61; G2/M: %36.86), GBM hücrelerinin daha yüksek bir oranı G0/G1 fazındaydı (%57.48, %61.29, %57,58) ve tümör hücrelerinin daha düşük bir yüzdesi 30, 60 ve 90 uygulamasından sonra S (%7,24, %6,35, %8,38) ve G2/M (%35,28, %32,36, %34,04) fazlarındaydı. sırasıyla µg/mL JCo özütü (Şekil 2 B). Hücre döngüsü durdurma derecesi, JCo reaksiyon süresi ve dozaj düzeyine bağlıydı. Western blot analizi, JCo özütünün yalnızca p53, fosforile edilmiş p53 ve p21 gibi tümör baskılayıcı genlerin ekspresyonunu arttırmakla kalmayıp, aynı zamanda Rb, CDK2, CDK4, siklin A dahil olmak üzere hücre döngüsü kontrol noktası proteinlerinin ekspresyonunu da inhibe ettiğini ortaya koydu. siklin B1 ve siklin D1 (Şekil 2C). Bu nedenle, glioblastoma hücre proliferasyonunun inhibisyonu, G1-to-S faz kontrol noktasının inhibisyonu yoluyla JCo özütünün uygulanmasıyla etkili bir şekilde durduruldu.
          incir. 2.

          JCo özütü ile muamele edilmiş hücrelerin hücre döngüsü dağılımı ve ilgili protein ekspresyonu. Bir zaman süreci analizi olarak 0-48 saat boyunca 60 µg/ml JCo özütü ile muamele edilmiş DBTRG-05MG ve RG2 hücreleri; Dozaj analizi olarak 24 saat süreyle 30, 60 ve 90 μg/ml JCo. JCo özüt işleminden sonra, akış sitometrisi ile FL2 yoğunluğu için hücre döngüsü analizi yapıldı. JCo, (A) bir zaman süreci sırasında ve (B) DBTRG-05MG ve RG2'de bir konsantrasyon serisini kullanarak G0/G1 fazında indüklenmiş hücre döngüsü durdurmasını çıkarır. Her sütun ortalama ± SD'yi gösterir (*: kontrol ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde arttı; *: kontrol ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde azaldı; p< 0.05). (C) Hücre döngüsü ile ilişkili proteinler, zaman süreci sırasında ve western blot kullanılarak dozaj analizi ile tespit edildi. Protein ekspresyon indeksleri = (numune yoğunluğu/numune β-aktin yoğunluğu)/(kontrol yoğunluğu/kontrol β-aktin yoğunluğu). ND algılanamaz anlamına gelir.


          JCo özütü, içsel ve dışsal yollarla etkileşime girerek GBM hücre apoptozunu tetikler


          Hücre döngüsü analizi, JCo ile muamele edilmiş DBTRG-05MG ve RG2 glioblastoma hücre numunelerinin daha yüksek bir alt G1 fazı tümör hücresi yüzdesi içerdiğini gösterdi (%14.03, %25.93, %42.06, DBTRG-05MG hücrelerinde %45.60; %16.22, RG2 hücrelerinde %29,36, %40,39, %59,30) kontrol grubuna göre (%2,04, %1,98, %1,45, DBTRG-05MG hücrelerinde %2,05; RG2 hücrelerinde %6,64, %6,57, %6,64, %6,57) 6, 12, 24 ve 48 sa (Şekil 3 A ve 3 B). TUNEL testinde, JCo ile tedavi edilen glioblastoma hücrelerinin çoğu, floresan mikroskobu kullanılarak saptanabilen bir DNA yoğunlaşması gösterdi (Şekil 3C). JCo özütü tarafından indüklenen glioblastoma hücrelerinde apoptotik yolun araştırılması için, Fas ve Fas-L proteinleri, JCo tedavisinden önce ve sonra DBTRG-05MG ve RG2 glioblastoma hücre dizilerinde tespit edildi. Araçla tedavi edilen glioblastoma hücrelerine göre, JCo ile tedavi edilen tümör hücreleri, daha yüksek Fas seviyelerine sahipti, ancak 6 saat sonra daha düşük Fas-L seviyelerine sahipti (Şekil 3NS). Procaspaz-8'den aktive kaspaz-8'e geçiş, dışsal apoptotik yolun çok önemli bir adımıdır. JCo özütü ile tedavi edilen glioblastoma hücrelerinde procaspaz-8'in daha düşük ekspresyonu, dışsal apoptotik yolun aktivasyonunu önerdi. İçsel apoptotik yolun faktörleri Bax, Bcl-2, AIF, kaspaz-3 ve kaspaz-9'u içerir. Bu nedenle, JCo özütünün dışsal apoptotik yolu aktive edip etmediğini belirlemek için bir immünoblotlama deneyi gerçekleştirdik. Bax, AIF, C-kaspaz-3 ve C-kaspaz-9'un protein ekspresyonu, JCo ile tedavi edilen DBTRG-05MG'de gözlendi ve tümör hücrelerinde RG2, tedavi edilmeyen tümör hücrelerinden daha yüksekti. Ek olarak, JCo ile muamele edilmiş hücrelerde Bcl-2 ve procaspaz 8 ve 9'un azaltılmış bir ifadesi gözlendi. Ayrıca, kaspaz-3, -8 inhibitörlerinin eklenmesi, ve bu iki glioblastoma hücre hattındaki -9, procaspaz-3, -8 ve -9 protein ekspresyonunu önemli ölçüde arttırdı. Bununla birlikte, JCo özütü ve kaspaz inhibitörlerinin kombinasyonu, aktif kaspaz-3, -8 ve -9 formlarının ekspresyonunu indükleyebilir (Şek. 4 A ve 4 B). Bu faktörlerin ifadesine dayanarak, JCo özütünün hem içsel hem de dışsal apoptotik yollar yoluyla glioblastoma apoptozu indüklediğini gösterdik.
          Şekil 3.


          JCo özütü, içsel ve dışsal bir yol aracılığıyla GBM hücre apoptozunu tetikler. GBM hücreleri, zaman süreci (0-48 saat için 60 µg/ml) ve dozaj (24 saat için 30, 60 ve 90 µg/ml) analizi için JCo özütü ile işlendi. Tedaviden sonra, alt G1 faz hücrelerinin yüzdesindeki artış (A) zamana ve (B) doza bağımlıydı. Sonuçlar ortalama ± SD'yi gösterir (*p< 0.05). (C) GBM hücreleri, TUNEL tahlilinde ve PI karşıt boyamasında 60 ug/ml JCo özütleme işleminden sonra apoptotik oluşum gösterdi. (a) Apoptotik cisim, (b) DNA parçalanması ve (c) DNA yoğunlaşması, floresan mikroskobu (400X) altında gözlendi. (D) Western blot kullanılarak zaman süreci ve dozaj analizi ile apoptoz ile ilişkili proteinlerin tespiti. Protein ekspresyon indeksleri = (numune yoğunluğu/numune β-aktin yoğunluğu) / (kontrol yoğunluğu/kontrol β-aktin yoğunluğu).


          4.


          (A) Tedavi edilen kaspaz-3, 8 veya 9 inhibitörü öncesinde, GBM hücreleri 60 ug/ml JCo (24 saat) ile işleme tabi tutuldu ve western blotlama ile nispi protein aktivasyonunu analiz etti. C-Kaspaz-3: Bölünmüş Kaspaz-3. (B). Sonuçlar ortalama ± SD'yi gösterir ( * kontrol ile karşılaştırıldığında, p< 0.05; #JCo ile karşılaştırıldığında, p< 0.05).


          JCo özütünün ve TMZ'nin glioblastomlarda sinerjik etkileri


          0-45 µg/mL aralığındaki JCo özüt tedavisi, DBTRG-05MG ve RG2 hücrelerinin ilerlemesini engellemedi. JCo özütünün sitotoksik etkisi 60 ug/mL'de ölçülmüştür. JCo ekstraktının daha yüksek konsantrasyonları daha fazla sitotoksisiteye neden oldu (Şekil 6 A). TMZ, glioblastomlar için en yaygın kemoterapötik ajanlardan biridir. Tek başına TMZ kullanımı, 20 µg/mL'nin üzerindeki konsantrasyonlarda DBTRG-05MG ve RG2 tümör hücresi canlılığını önemli ölçüde azaltmıştır. 60 µg/mL TMZ ile çeşitli JCo özütü (0–75 µg/mL) veya 40 µg/mL JCo özütü ile çeşitli dozlarda TMZ (0–100 µg/mL) kombinasyonu, daha yüksek hücre apoptoz yüzdesi ile sonuçlandı DBTRG-05MG ve RG2 hücrelerinde tek başına TMZ veya JCo özütünün eşdeğer konsantrasyonları ile uygulananlara göre (Şekil 5 A ve 5B, CI=0.8 ve 0.68, sırasıyla). Bu nedenle, JCo özütünün TMZ ile kombinasyonu, glioblastoma büyümesinin inhibisyonu üzerinde pozitif sinerjistik etkiler gösterdi. JCo özütü ve TMZ kombinasyonunun işlev gördüğü yolu belirlemek için hücre proliferatif ve apoptotik faktörlerin western blot analizi yapıldı. JCo özütü ve TMZ'nin kombinasyon tedavisi, AKT, mTOR, P70S6K ve fosforile edilmiş formlarının ekspresyonunu aşağı regüle etti, ancak JCo özütü veya TMZ ile yapılan tedaviye kıyasla c-kaspaz-3'ünkini yukarı regüle etti (Şekil 5). C).
          Şekil 5.


          (A) DBTRG-05MG ve RG2 hücrelerinde 48 saat boyunca TMZ (60 μg/ml) ile birleştirilmiş JCo özütü (0, 15, 30, 45, 60 ve 75 μg/ml). TMZ (0, 20, 40, 60, 80 ve 100 µg/ml), DBTRG-05MG ve RG2 hücrelerinde 48 saat boyunca JCo özütü (40 µg/ml) ile birleştirildi. Sinerjik etki, GBM tümör hücrelerinin TMZ tedavisi ile birlikte JCo özütü ile doğrulandı. *: Kombinasyon grubu ile tek ilaç arasında anlamlı fark (P< 0.05). (B) Hücreler, 48 saat boyunca TMZ (60 μg/ml), JCo özü (40 μg/ml) veya ilaç kombinasyonu (T+J) ile tedavi edildi ve sinerjistik etki analizi için tespit edilen hücre proliferasyonu ve apoptoz proteinlerinin ekspresyonu için analiz edildi. batı lekeleme. Protein ekspresyon indeksleri = (numune yoğunluğu/numune β-aktin yoğunluğu)/(kontrol yoğunluğu/kontrol β-aktin yoğunluğu)


          Şekil 6.


          JCo özütü, tümör büyümesini baskılar ve subkutan ve ortotopik bir terapötik modelde apoptozu indükler. (A) DBTRG-05MG tümörleri taşıyan çıplak fareler, araç (n=5) ve 200 mg/kg JCo özütü (n=10) ile toplam 10 doz olmak üzere 2 günde bir enjeksiyon (sc) ile tedavi edildi. Tümör hacmi 2 günde bir ölçüldü ve U x Y x G olarak hesaplandı. (B) Tümör boyutu 1500 mm3'ü aştığında fareler skarlandı, hayatta kalma süresi tespit edildi. RG2 hücreleri, F344 sıçanlarının intrakraniyal bölgesine (striatum) implante edildi. Sıçan taşıyan tümörler, sc yoluyla araç (n=4) veya 200 mg/kg JCo özütü (n=4) ile tedavi edildi. 3, 4, 5, 6 ve 7. günlerde toplam 5 kez enjeksiyon. (C) 7-T MRI görüntüleme seri bölümleri (bölüm başına 1 mm) tümör hacmi yakalandı. V1 ila V6, araç kontrol farelerindendi; J1 ila J6, JCo tedavi farelerindendi (tümör alanı olarak sarı ok). Tümör hacmi Image J yazılımı ile hesaplandı (tümör alanı x kalın). Sütunlar ortalama ± SE gösterdi (*P< 0.05). (D) Hayatta kalma oranı günlük olarak izlendi. (E) Tümör kütlesi H&E boyaması (400x) ile analiz edildi.


          JCo özütü, BALB/c çıplak farelerde deri altı glioblastomları etkili bir şekilde inhibe eder


          JCo özütünün in vivo antitümör etkilerini değerlendirmek için , deri altı glioblastomları taşıyan BALB/c çıplak farelere JCo özütü enjekte ettik. JCo ile tedavi edilen farelerde tümör hacmi 16. günden sonra araçla tedavi edilen farelerdekinden önemli ölçüde daha küçüktü. Buna ek olarak, araç ile tedavi edilmiş farelerde, tümör büyüklüğü 1500 mm'nin üzerinde olduğu 3 gün 33, ama JCo ile tedavi edilen farelerde bütün tümör hacmi 1300 mm altında oldu 3 gün 1 ve 48 (Şek. Arasında 6 A). JCo ile tedavi edilmeyen tüm fareler, davranış bozukluğu ve büyük tümör hacmi nedeniyle 31. günde kurban edildi. Buna karşılık, JCo ile tedavi edilen farelerin yarısından fazlası 60. güne kadar hayatta kaldı (Şekil 6).B). Bu nedenle, JCo ile tedavi edilen çıplakların hayatta kalma süresi, araç grubundan daha uzundu.
          JCo özütü, F344 sıçanlarında in situ glioblastomaları önemli ölçüde inhibe eder


          JCo özütünün yerinde tümör büyümesini baskılama yeteneğini saptamak için, sc. yerinde beyin glioblastomları taşıyan F344 sıçanlarına JCo özütünün enjeksiyonu yapıldı. Hayvan MR görüntülerden, JCo ile tedavi edilen farelerin tümör boyutları 6.69 ± 2.48 mm olarak ölçülmüştür 3 ve 12.22 ± 2.43 mm 3 , sırasıyla günde 11 ve 13, ilgili. Bunun aksine, araç ile tedavi edilmiş farelerin tümör hacimleri 58.34 ± 7.35 mm olarak ölçülmüştür 3 ve 96,42 ± 10.74 mm 3 , sırasıyla günde 11 ve 13, ilgili. Bu nedenle, JCo ile tedavi edilen sıçanların in situ glioblastomaları, araçla tedavi edilen sıçanlarınkinden önemli ölçüde daha küçüktü ( P < 0.05, Şekil 6C). Ayrıca, JCo ile tedavi edilen sıçanların hayatta kalma oranı, araçla tedavi edilen sıçanlarınkinden önemli ölçüde daha yüksekti (Şekil 6 D). Yerinde histoloji analizi, hayvan kurban edildikten sonra araçla tedavi edilen sıçanlardakinden JCo ile tedavi edilen sıçanlardan alınan glioblastomlarda daha fazla apoptotik cisim tanımladı (Şekil 6 E).
          İn vivo analizden elde edilen JCo özütü ile glioblastoma proliferasyonunun baskılanması mekanizması


          JCo özütü ile tümör büyümesinin inhibisyon mekanizmasını doğrulamak için, in situ aşılanmış glioblastomlarda IHC boyaması ve bir TUNEL testi gerçekleştirdik. İn situ glioblastomlu tüm sıçanlarda, PCNA, VEGFR1, VEGFR2, c-kaspaz 3'ün etiketleme indeksi, araç tümör grubunda sırasıyla %73.08, %9.67, %11.70, %2.43 idi. Bununla birlikte, JCo ile tedavi edilen glioblastomlarda, tümör hücrelerinin %44,49, %5,88, %5,85 ve %6,53'ünde PCNA, VEGFR1, VEGFR2 ve c-kaspaz 3 seviyelerinde artış vardı. Bu nedenle, JCo ile tedavi edilen glioblastomlar önemli ölçüde daha düşük ekspresyona sahipti. PCNA, VEGFR1 ve VEGFR2, ancak araçla tedavi edilen glioblastomalarla karşılaştırıldığında daha yüksek bir c-kaspaz-3 ekspresyonu (Şekil 7A). Ek olarak, TUNEL testi, JCo ile tedavi edilen kafa içi glioblastomaları olan grubun, araçla tedavi edilen glioblastomalarınkinden daha yüksek apoptotik hücre yüzdesine sahip olduğunu gösterdi (Şekil 7 B).
          Şekil 7.


          JCo özütünün in vivo anti-tümör mekanizması. RG2 tümörlerini taşıyan sıçanlar, araç (n=4) ve 200 mg/kg JCo özü (n=4) ile 3 ila 7. günlerde 5 kez subkutan tedavi ile tedavi edildi. Tümör kütlesi toplandı ve immünohistokimya (IHC) ve TUNEL tahlili ile analiz edildi. Birincil antikorlar, anti-PCNA, anti-parçalanmış-Kaspaz-3, anti-VEGFR1 ve anti-VEGFR2 idi. Preparatlar ışık mikroskobu altında 400x büyütmede analiz edildi. *araç ve JCo özüt grubu arasındaki önemli fark (P< 0.05).


          İn vivo analizde JCo özütünün fizyolojik ve patolojik toksisitesi


          JCo ekstraktının neoplastik olmayan diğer organlardaki toksisitesini doğrulamak için, deneysel çıplak fare ve sıçanların kan analizinden ve iç organlarından elde edilen veriler toplandı. Kalp, karaciğer, dalak, akciğer, böbrek ve bağırsakta ne enflamatuar hücre agregasyonu ne de hücresel apoptoz, JCo özütü ile tedavi edilen ve araçla tedavi edilen hayvanlardan alınan dokuların histolojik analizi ile tanımlanmadı (Şekil 8 ). Ayrıca kırmızı kan hücreleri (RBC), trombositler (PLT), hemoglobin (HGB), hematokrit (HCT), aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT), kan üre azotu (BUN) ve kreatinin serum seviyeleri (CRE) ayrıca JCo ile tedavi edilen ve araçla tedavi edilen hayvanlardan alınan dokular arasında önemli bir fark göstermedi (Şekil 9).). Ek olarak, sınırlı sayıda kan örneği nedeniyle trombosit fonksiyonunu ve diğer immün hücre kinetiğini 12 ve 24 saatte kontrol ettik. Pıhtılaşma fonksiyonlarına yönelik tüm testlerde PT (protrombin zamanı) ve APTT (aktive kısmi tromboplastin zamanı) analiz edildi. JCo ile tedavi edilen glioma sıçanlarında ortalama PT 12 ve 24 saatte sırasıyla 15.6 ± 1.9 s ve 15.8 ± 2.1 s idi. Araçla tedavi edilen glioma sıçanlarındaki PT, sırasıyla 12 ve 24 saatte 15.7 ± 2.2 s ve 15.9 ± 2.0 s idi. Ek olarak, JCo ile tedavi edilen ve araçla tedavi edilen glioma sıçanlarında APTT ortalamaları 12 saatte sırasıyla 22.2 ± 1.7 s ve 22.8 ± 2.2 s ve 24 saatte 22.7 ± 2.4 s ve 23.0 ± 2.1 s idi. Bu nedenle, pıhtılaşma fonksiyonlarının analizi, sıçanların iki tedavi grubu arasında hiçbir fark göstermedi. Ek olarak, T hücrelerinin CD4/CD8 oranı ve interlökin-1 beta (IL-1β) ve tümör nekrotik faktör-alfa (TNF-a) seviyeleri, JCo ile tedavi edilen ve araçla tedavi edilen hayvanlarda 12 ve 24 saatte değerlendirildi. Bununla birlikte, iki tedavi grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu.
          Şekil 8.


          JCo özütü, in vivo olarak düşük fizyolojik ve patolojik toksisite gösterdi veya hiç göstermedi. 10-12 haftalık fareler, araç (n=5) ve 200 mg/kg JCo özütü (n=5) ile sc ile tedavi edildi. 10 kez 2 günde bir enjeksiyon. Hayvanlar kurban edildikten sonra organlar (kalp, karaciğer, dalak, akciğer, böbrek, bağırsak ve mide) toplandı ve H&E boyamasıyla hasar açısından analiz edildi.


          Şekil 9.


          6-8 haftalık sıçanlar, tek doz araç (n=4) ve 200 mg/kg JCo (n=4) ile sc ile tedavi edildi. enjeksiyon. Kan hücrelerinin (beyaz kan hücresi, hemoglobin, hematokrit ve trombosit) ve serum biyokimyasının (ALT, AST, kan üre nitrojeni ve kreatinin) analizi, 0, 3, 6, 12 ve 24 saat boyunca JCo ekstrakt işleminden sonra analiz edildi. Araç ve JCo ile tedavi edilen grup arasında önemli bir fark gözlenmedi. Sonuçlar ortalama ± SE'yi gösterir.


          Tartışma


          JCo özütü tarafından gliomanın baskılanmasının altında yatan mekanizma tam olarak anlaşılmamıştır. Lanto et al. JCo özütünün , in vitro olarak nöroblastom hücrelerinde apoptozu indüklemek için p53'ü etkili bir şekilde geliştirdiğini kanıtladı [ 18 ]. İnsan göğüs, prostat ve kolon kanseri hücre hatlarında, JCo özü daha düşük bir LC vardı 50 doksorubisin daha; ancak bazı insan kanser hücre dizilerinde JCo ekstraktının sitotoksik etkisi diğer kemoterapötik ajanlarınkinden daha güçlüydü [ 32]]. Ne yazık ki, in situ beyin gliomunun JCo özütü tarafından baskılandığı hipotezi hala ikna edici kanıtlardan yoksundur. Bu çalışma, JCo özütünün sc ile beyin glioma hücre apoptozunu indüklemek için BBB'ye nüfuz edebildiğini gösteren ilk çalışmadır. JCo özü enjeksiyonu.

          Bizim in vitro çalışmalar, IC 50 tüm GBM hücre çizgilerinde JCo ekstresi değerleri, her iki 24 ve 48 saat sonra normal astrositler ve endotelyal hücre çizgilerinde önemli ölçüde daha düşüktü. Bununla birlikte, IC 50 TMZ değerleri bir GBM hücre çizgileri ve normal astrositler ve endotelyal hücrelerde sitotoksik konsantrasyonların bir örtüşme gösterdi. Buna ek olarak, IC 50JCo özütünün değerleri de GBM hücre dizilerinde TMZ'nin değerlerinden daha düşüktü. TMZ ile karşılaştırıldığında, JCo özütü, GBM hücreleri için daha fazla özgüllük ile daha güçlü sitotoksik etkilere neden oldu. GBM hücrelerinin JCo özütü tarafından inhibisyon mekanizmasını araştırmak için hücre döngüsü durmasının JCo ile muamele edilmiş GBM hücrelerinin sitotoksisitesinde önemli bir rol oynayabileceğini göstermek için akış sitometrik analizini kullandık. p53 gibi tümör baskılayıcı genlerin aşırı ekspresyonu ve Rb gibi hücre çoğalmasıyla ilgili proteinlerin inhibisyonu, JCo özütünün olası bir antitümör aktivitesini destekledi. İlginç bir şekilde, siklin/CDK ailesinin hücre replikasyonu, özellikle CDK2, CDK4 ve siklin-A, -B, -D ve -E için gerekli olduğu bilinmektedir [ 33 ]. Buna karşılık, p21, CDK proteinleri için bir inhibitör görevi görür [ 33]]. JCo özütü, hücre döngüsü kontrol noktaları üzerinde kontrol uygulayarak GBM hücre replikasyonunda bir inhibisyona veya gecikmeye neden olarak G0/G1 fazındaki GBM hücrelerinin S ve G2/M fazına girmesini etkili bir şekilde bloke etti.

          Tümör apoptozunun derecesi, gelişim için yeni antikanser ilaçlarının seçilmesinde önemli bir faktör olabilir [ 34 ]. İlaç tedavisinden sonra alt G1 fazı tümör hücrelerinin daha yüksek yüzdesi, daha yüksek derecede hücresel apoptoz için bir gösterge olabilir. Floresan mikroskobu kullanan TUNEL testi, DNA fragmantasyonunu ve tümör hücrelerinin yoğunlaşmasını vurguladı [ 35 , 36 ]. İki incelememizden elde edilen sonuçlar, JCo özütünün GBM hücre apoptozunu önemli ölçüde indüklediğini gösterdi. Ayrıca, daha yüksek bir JCo özütü konsantrasyonunun GBM hücrelerinde sitotoksisiteyi indüklemede daha etkili olduğu görülmüştür. Hücresel apoptoz mekanizması, içsel ve dışsal yola ayrılabilir [ 37].]. Dışsal apoptotik yolun belirleyici faktörleri arasında Fas ligandı (Fas-L), Fas reseptörü, yarılmış kaspaz-8 ve yarılmış kaspaz-3 bulunur [ 38 ]. BAX/BAK sistemi ve apoptotik proteaz aktive edici faktör-1 (APAF-1), intrinsik apoptotik yolun ana faktörleridir [ 34 ]. Bcl2/Bcl-XL, BAX [ 39 ] için bir antagonist görevi görür . Çalışmamız, JCo özütü ile tedavinin GBM hücrelerinde DNA hasarına neden olduğunu ve içsel ve dışsal yol yoluyla apoptozu indüklediğini gösteren ilk çalışmadır.

          TMZ, özellikle GBM'li hastalar olmak üzere, tekrarlayan ve oldukça agresif astrositomalı hastalar için yaygın olarak kullanılan bir kemoterapötik ilaçtır [ 40 ]. TMZ'nin olası ciddi bir komplikasyonu, aplastik anemi, kanama ve immün yetmezliğe neden olabilen hematopoezin baskılanmasıdır [ 41].]. Bu çalışmada, JCo özütünün TMZ ile kombinasyonu ile gözlenen terapötik etki, bu iki terapötikten herhangi birinin tek tedavi olarak kullanılmasıyla gözlenen etkiden daha etkili bir tedavi olmuştur. JCo özütü ve TMZ'nin sinerjik etkisi, kemik iliği baskılanması gibi ciddi komplikasyonların insidansını azaltacak olan TMZ dozajının azaltılmasına izin verebilir. Ek olarak, mTOR ve PI3K yollarının etkileşimi, tümör hücresinin hayatta kalmasını ve anjiyogenezi indükleyen hücresel proliferatif sinyal transdüksiyonunun merkezi bir düzenleyicisidir [ 42 , 43]]. Akt, mTOR ve p70S6 ekspresyonu, bu yolları aktive edebilir ve hücre büyümesini uyaran bir fosforilasyon kaskadı indükleyebilir. Bu çalışmada, JCo özütü ve TMZ kombinasyonunun sinerjik etkilerinin Akt, mTOR ve p70S6 ekspresyonunu bloke ederek GBM proliferasyonunu inhibe ettiğini başarıyla gösterdik.

          İn vivo çalışmalarımızda, deri altı tümör boyutu, JCo ile tedavi edilen farelerde, araçla tedavi edilen farelerdekinden önemli ölçüde daha küçüktü. JCo ile tedavi edilen farelerde, araçla tedavi edilen farelere kıyasla daha büyük bir oranda tümör apoptozisi de gözlendi. Ek olarak, KBB kemoterapötik bir ilacın işlev bozukluğuna neden olabileceğinden, yerinde bir GBM hayvan modeli ve sc oluşturduk. JCo özütünün BBB'ye nüfuz edip edemeyeceğini incelemek için enjekte edilen JCo özütü. Önemli olarak, MRI ve histolojik analiz, JCo özütünün yerinde beyin tümörü proliferasyonunu etkili bir şekilde engelleyebileceğini ve hücre apoptozunu indükleyebileceğini gösterdi. Bildiğimiz kadarıyla, JCo özütünün intratümöral BBB'ye nüfuz edebileceği İngilizce olarak yayınlanan ilk çalışmayı sunduk.

          GBM'nin neden olduğu anjiyogenez, tümör hücresi proliferasyonu ve invazyonu için gereklidir [ 44 ]. GBM hücrelerinin apoptozisi, tümör mikroçevresinde trombosit kaynaklı büyüme faktörü alt birim B'yi (PDGF-B) ve/veya epidermal büyüme faktörü (EGF) reseptör ekspresyonunu artıran hipoksiyi indükleyen radyoterapi ve kemoterapiden kaynaklanır [ 45 ]. Buna karşılık, bazı antivasküler terapötik ilaçlar, perivasküler GBM hücre invazyonunu indükleyebilir ve bu da ikinci basamak tedavilere dirençle sonuçlanabilir [ 46 , 47 ].]. Çalışmamızda, JCo ile tedavi edilen farelerde in situ GBM tümörleri ile VEGFR-1 ve -2'nin daha düşük bir ifadesi ve daha yüksek bir bölünmüş kaspaz-3 ifadesi, araçla tedavi edilen gruplara göre gözlendi; sadece intratümöral anjiyogenezi inhibe etmekle kalmadı, aynı zamanda tümör hücresi apoptozisini de indükledi. Buna karşılık, neoplastik olmayan hayati organlarda düşük fonksiyonel ve histolojik hasar, yeni ilaçların geliştirilmesi için en önemli gereklilik olmalıdır. Histolojik analiz, kalp, karaciğer, böbrek, akciğer, bağırsak ve dalak dahil olmak üzere JCo ile tedavi edilen sıçanlardaki hayati organların çoğunun, araçla tedavi edilen hayvanlardakine benzer bir mikroskobik görünüme sahip olduğunu gösterdi. Ayrıca kan hücresi sayısında, serum karaciğer enzim seviyelerinde, ve böbrek fonksiyon indeksi, JCo ile tedavi edilen ve araçla tedavi edilen hayvanlar arasında tanımlandı. Bu nedenle, JCo özütünün farmakolojik etkilerinin GBM hücrelerine özgü olduğu ve neoplastik olmayan diğer hayati organları etkilemediği ortaya çıktı, bu da bu yeni bitkisel tedavinin güvenliğini doğruladı.


          Çözüm
          Bu çalışmada, JCo özütünün, anjiyogenezi inhibe ederek glioma hücre proliferasyonunu etkili bir şekilde baskılayan güvenli bir bitkisel terapötik gibi göründüğünü başarıyla gösterdik. Ek olarak, JCo özütü ve TMZ'nin bir kombinasyonu, tümör apoptozunu indüklemek için sinerjik etkiler uyguladı. Bu nedenle, JCo özütü, yüksek dereceli gliomalar için faydalı bir terapötik seçimi temsil edebilir.
          Teşekkür


          Bu çalışma, Tri-Service General Hospital, TSGH-C107-059, TSGH-C104-075, TSGH-C105-073 ve National Defense Medical Center, MAB-105-098, Tayvan, ROC tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir.

          Açıklama bildirimi


          Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

          İlgili Makaleler:

          Cell Physiol Biochem 2018;48:1694–1702Pyr3 Apoptozu İndükler ve İnsan Glioblastoma Hücrelerinde Göçü EngellerChang H.-H., Cheng Y.-C., Tsai W.-C., Tsao M.-J. ve diğerleriGiriş/Amaç: Glioblastoma multiforme (GBM) olarak da bilinen glioblastoma, yetişkinlerde en agresif beyin malignitesi olan hızlı büyüyen bir tümör türüdür. GEO'ya göre...Makaleye Git
          Onkoloji 2015;88:28-48N3-İkame Edilmiş Temozolomid Analogları, Metilguanin-DNA Metiltransferaz ve Uyuşmazlık Onarımının Üstesinden Geliyor...Zhang J., Hummersone M., Matthews CS, Stevens MFG ve diğerleri.Glioblastoma multiforme (GBM) tedavisi, temozolomid (TMZ) kemoterapisini içerir. O6-Metilguanin lezyonları, metilguanin-DNA metiltransferaz (MGMT) ile onarılır. TMZ'ye yanıt...Makaleye Git
          Onkoloji 2013;84:326-335Aurora Kinaz İnhibitörü VE-465, Glioblastoma Multiforme için Yeni Bir TedavidirLee P.-Y., Lee P.-Y., Lee P.-Y., Chen C.-L. ve diğerleriGlioblastoma multiforme (GBM), primer beyin tümörünün en yaygın ve agresif tiplerinden biridir. Radyasyon ve kemoterapi ile birlikte tam cerrahi rezeksiyondan sonra yaklaşık olarak...Makaleye Git
          Cell Physiol Biochem 2015;35:1303-1316Otofaji İnhibisyonunun Farklı Aşamalarda Glioblastomada Otofaji İndükleyicisinin Sitotoksik Etkisi Üzerindeki Etkisi...Zhao, Li C., Liu Y., Liu H. et al.Giriş/Amaç: Glioblastoma multiforme (GBM), kötü prognozlu en malign primer beyin tümörüdür. Otofaji indükleyici ve otofaji inhibitörünün kombinasyon tedavisi...Makaleye Git
          Cell Physiol Biochem 2018;51:1566–1583Peiminine, Hücre Döngüsü Durdurma ve Otofajik Akı Bloke Etme Yoluyla İn Vitro ve İn Vivo Glioblastomayı EngellerZhao B., Shen C., Zheng Z., Wang X. ve diğerleri.Giriş/Amaçlar: Glioblastoma multiforme (GBM), yetişkinlerde en yıkıcı ve yaygın primer merkezi sinir sistemi tümörüdür, düşük hayatta kalma oranı ve yüksek ölüm oranları ile...Makaleye Git
          Cell Physiol Biochem 2018;47:1108–1121Raddeanin a, ROS Üretimini ve Müteakip JNK Aktivasyonunu İndükleyerek Glioblastoma Büyümesini Bastırır...Peng F., Wang X., Shu M., Yang M. ve diğerleri.Arka Plan/Amaçlar: Anemone raddeana Regel'in aktif bir farmakolojik bileşeni olan Raddeanin A (RA), tümör baskılanmasında önemli bir rol oynar. Bu çalışmada, potansiyel olarak değerlendirdik ...Makaleye Git
          Cell Physiol Biochem 2018;48:1332–1346Nekrotik Hücre Tedavili Glioblastoma Hücrelerinden Salgılanan MCP-1 ve MIP-3α Göç/Sızmayı Teşvik Eder...Jung Y., Ahn S.-H., Park H., Park SH et al.Giriş/Amaç: Glioblastoma multiforme (GBM) erişkinlerde en sık görülen primer beyin tümörüdür. GBM'nin tanımlayıcı özellikleri, tümör hücrelerinin normal hücrelere yaygın infiltrasyonudur.Makaleye Git

          Referanslar
          1. Ostrom QT, Gittleman H, Xu J, Kromer C, Wolinsky Y, Kruchko C, Barnholtz-Sloan JS: CBTRUS İstatistik Raporu: 2009-2013 yıllarında Amerika Birleşik Devletleri'nde teşhis edilen birincil beyin ve diğer merkezi sinir sistemi tümörleri. Neuro Oncol 2016; 18:v1-v75.
          2. Lukas RV, Nicholas MK: Yüksek dereceli Gliomaların tedavisinde güncelleme. Neurol Clin 2013; 31: 847-867.
          3. Muldoon LL, Soussain C, Jahnke K, Johanson C, Siegal T, Smith QR, Hall WA, Hynynen K, Senter PD, Peereboom DM, Neuwelt EA: Merkezi sinir sistemi malignitesinde kemoterapi uygulama sorunları: bir gerçeklik kontrolü. J Clin Oncol 2007; 25: 2295-2305.
          4. Tilly H, Lepage E, Coiffier B, Blanc M, Herbrecht R, Bosly A, Attal M, Fillet G, Guettier C, Molina TJ, Gisselbrecht C, Reyes F, Groupe d'Etude des Lymphomes de l'Adulte: Yoğun konvansiyonel kemoterapi (ACVBP rejimi), kötü prognozlu agresif Hodgkin olmayan lenfoma için standart CHOP ile karşılaştırıldığında. Kan 2003; 102: 4284-4289.
          5. Patel M, Vogelbaum MA, Barnett GH, Jalali R, Ahluwalia MS: Tekrarlayan glioblastomda moleküler hedefli tedavi: mevcut zorluklar ve gelecekteki yönler. Uzman Görüşü Araştırma İlaçları 2012; 21: 1247-1266.
          6. Hegi ME, Diserens AC, Gorlia T, Hamou MF, de Tribolet N, Weller M, Kros JM, Hainfellner JA, Mason W, Mariani L, Bromberg JE, Hau P, Mirimanoff RO, Cairncross JG, Janzer RC, Stupp R: MGMT gen susturma ve glioblastomda temozolomidden fayda sağlar. N Engl J Med 2005; 352: 997-1003.
          7. Li H, Yuan X, Yan D, Li D, Guan F, Dong Y, Wang H, Liu X, Yang B: Uzun Kodlamayan RNA MALAT1 Dirençli glioblastoma hücre hatlarının temozolomide duyarlılığını azaltır. Cell Physiol Biochem 2017; 42: 1192-1201.
          8. Li G, Yang QY, Guo Y, Mou YG, Zhang XH, Wu QL: MGMT ekspresyon paternine dayalı olarak glioma hastaları için temozolomidin genişletilmiş kullanımı: 32 vaka deneyimi. Çin J Neurooncol 2012; 10: 158–165.
          9. Tan AC, Heimberger AB, Khasraw M: Gliomalarda Bağışıklık Kontrol Noktası İnhibitörleri. Curr Oncol Temsilcisi 2017; 19: 23.
          10. Bonham M, Arnold H, Montgomery B, Nelson PS: Bitkisel bileşik PC-SPES'in moleküler etkileri: prostat karsinomunda aktivite yollarının tanımlanması. Kanser Res 2002; 62: 3920-3942.
          11. Hu H, Ahn NS, Yang X, Lee YS, Kang KS: Ganoderma lucidum özü, MCF-7 insan göğsünde hücre döngüsü durmasını ve apoptozu indükler. Int J Kanser 2002; 102: 250-253.
          12. Kao ST, Yeh CC, Hsieh CC, Yang MD, Lee MR, Liu HS, Lin JG: Çin tıbbı Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang, G0/G1 tutuklaması yoluyla apoptozu indükleyerek hepatoma hücre hatlarının çoğalmasını engelledi. Yaşam Bilimi 2001; 69: 1485-1496.
          13. Lee SM, Li ML, Tse YC, Leung SC, Lee MM, Tsui SK, Fung KP, Lee CY, Waye MM: Bir Çin bitki özü olan Paeoniae Radix, p53'ten bağımsız bir yolda apoptozu indükleyerek hepatoma hücre büyümesini engeller. Yaşam Bilimi 2002; 71: 2267-2277.
          14. Nam JS, Jagga S, Sharma AR, Lee JH, Park JB, Jung JS, Lee SS: Geleneksel karışık şifalı bitki özünün (MEMH) monosodyum ürat kristalinin neden olduğu gut artriti üzerindeki anti-inflamatuar etkileri. Çene J Nat Med 2017; 15: 561-575.
          15. Chen X, Yang L, Zhang N, Turpin JA, Buckheit RW, Osterling C, Oppenheim JJ, Howard OM: Çin bitkisel tıbbının bir bileşeni olan Shikonin, kemokin reseptör fonksiyonunu inhibe eder ve insan immün yetmezlik virüsü tip 1 Antimicrob Agents Chemother 2003; 47: 2810-2816.
          16. Li J, Li J, Zhang F. Çin bitkisel tıbbının dendritik hücrelerin olgunlaşması ve işlevi üzerindeki bağışıklık düzenleyici etkileri. J Ethnopharmacol 2015; 171: 184-195.
          17. Emsen B, Aslan A, Togar B, Turkez H. Liken bileşiklerinin zeytintorik, fizodik ve psoromik asitlerin sıçan nöron ve glioblastoma hücrelerinde in vitro antitümör aktiviteleri. Eczacı Biol 2016; 54: 1748-1762.
          18. Lantto TA, Laakso I, Dorman HJ, Mauriala T, Hiltunen R, Kõks S, Raasmaja A: Cellular Stress and p53-associated apoptosis by Juniperus communis L. Berry, insan SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde tedaviyi özümser. Uluslararası J Mol Sci 2016; 17ii: E1113.
          19. Lin YL, Lai WL, Harn HJ, Hung PH, Hsieh MC, Chang KF, Huang XF, Liao KW, Lee MS, Tsai NM: Angelica sinensis'in metanol özütü hücre apoptozunu indükler ve insan malign beyin tümörlerinde tümör büyümesini baskılar. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med 2013; 2013: 394636.
          20. Newman DJ: Potansiyel ilaçlara yol açan doğal ürünler: eski bir süreç mi yoksa ilaç keşfi için yeni umut mu? J Med Kimya 2008; 51: 2589-2599.
          21. Wood DM, Athwal S, Panahloo A: Diyabetli bir hastada 'bitkisel' bir ilacın avantajları ve dezavantajları: bir vaka sunumu. Diyabet Med 2004; 21: 625-627.
          22. Bais S, Abrol N, Prashar Y, Kumari R: Sıçanlarda Juniperus communis L. agianst Freund'un adjuvan kaynaklı artritinden izole edilen standartlaştırılmış amentoflavonun modülatör etkisi (histopatolojik ve X Işını analizi). Biomed Pharmacother 2017; 86: 381-392.
          23. Vasilijević B, Knežević-Vukčević J, Mitić-Ćulafić D, Orčić D, Francišković M, Srdic-Rajic T, Jovanović M, Nikolić B: Juniperus communis var. saksatilis. Gıda Kimyasal Toksikol 2018; 112: 118-125.
          24. Tavares WR, Seca AML: Juniperus L. Metabolitlerinin Farmasötik Potansiyelinin Mevcut Durumu. İlaçlar (Basel) 2018; 5ii:E81.
          25. Tunon H, Olavsdotter C, Bohlin L: Bazı İsveç şifalı bitkilerinin anti-inflamatuar aktivitesinin değerlendirilmesi. Prostaglandin biyosentezinin ve PAF kaynaklı ekzositozun inhibisyonu. J Ethnopharmacol 1995; 48: 61-76.
          26. Abbassy MA, Marei GI: J. communis ve Thymus vulgaris'in uçucu yağlarının iki fitopatojenik mantara karşı antifungal ve kimyasal bileşimi. J Appl Sci Res 2013; 9: 4584-4588.
          27. Banerjee S, Mukherjee A, Chatterjee TK: Juniperus communis Linn şifalı bitkisinin metanolik ekstraktının analjezik aktivitelerinin değerlendirilmesi. Int J Pharm ve Pharm Sci 2012; 4: 547-550.
          28. Pepeljnjak S, Kosalec I, Kalodera Z, Blaˇzevi´c N: Ardıç esansiyel yağının (Juniperus communis L., Cupressaceae) antimikrobiyal aktivitesi. Açta Eczanesi 2005; 55: 417-422.
          29. Carpenter CD, O'Neill T, Picot N, Johnson JA, Robichaud GA, Webster D, Gray CA: Kanada tıbbi bitkisi Juniperus communis'ten anti-mikobakteriyel doğal ürünler. J Ethnopharmacol 2012; 143: 695-700.
          30. Benzina S, Harquail J, Jean S, Beauregard AP, Colquhoun CD, Carroll M, Bos A, Gray CA, Robichaud GA: Juniperus communis'ten izole edilen deoksipodofilotoksin, meme kanseri hücrelerinde apoptozu indükler. Antikanser Ajanlar Med Chem 2015; 15: 79-88.
          31. Chou TC: Chou-Talalay yöntemi kullanılarak ilaç kombinasyon çalışmaları ve bunların sinerji miktar tayini. Kanser Araştırma 2010; 70: 440-446.
          32. Ghaly NS, Mina SA, Younis NAH: Mısır'da yetiştirilen J. communis L.'nin hava kısımlarının in vitro sitotoksik aktivitesi ve fitokimyasal analizi. J Pharm Sci & Res 2016; 8: 128-131.
          33. Ferenbach DA, Bonventre JV: Hızlandırılmış böbrek yaşlanmasına ve CKD'ye yol açan AKI sonrası uyumsuz onarım mekanizmaları. Nat Rev Nephrol 2015; 11: 264-276.
          34. Wong JH, Cho Wing Sze S, Ng TB, Chi Fai Cheung R, Tam C, Zhang KY, Dan X, Chan YS, Chi Shing Cho W, Cheuk Wing Ng C, Miu Yee Waye M, Liang W, Zhang J, Yang J, Ye X, Lin J, Ye X, Wang H, Liu F, Chan DW ve diğerleri: Apoptoz ve kanser önleyici ilaç keşfi: tıbbi mantarların ve bitkilerin gücü. Curr Med Kimya DOI: 10.2174/0929867324666170720165005.
          35. Kressel M, Groscurth P: Parçalanmış DNA'nın yerinde etiketlenmesiyle apoptotik ve nekrotik hücre ölümünün ayrımı. Hücre Dokusu Res 1994; 278: 549-556.
          36. Otsuki Y, Li Z, Shibata MA: Apoptotik tespit yöntemleri – morfolojiden gene. Prog Histochem Cytochem 2003; 38: 275-339.
          37. Sarvothaman S, Undi RB, Pasupuleti SR, Gutti U, Gutti RK: Apoptoz: miyeloid hücre gelişimindeki rol. Kan Res2015; 50: 73-79.
          38. Chicheportiche Y, Bourdon PR, Xu H, Hsu YM, Scott H, Hession C, Garcia I, Browning JL: TWEAK, tümör nekroz faktörü ailesinde zayıf bir şekilde apoptozu indükleyen yeni bir salgılanan ligand. J Biol Chem 1997; 272: 32401–32410.
          39. Schuler M, Green DR: p53'e bağlı apoptoz mekanizmaları. Biochem Soc Trans 2001; 29: 684-688.
          40. Friedman HS, Kerby T, Calvert H: Temozolomid ve malign glioma tedavisi. Clin Cancer Res 2000; 6: 2585-2597.
          41. Sorg UR, Kleff V, Fanaei S, Schumann A, Moellmann M, Opalka B, Thomale J, Moritz T: hematopoietik kök hücreleri hedefleyen O6-metilguanin-DNA-metiltransferaz (MGMT) gen tedavisi: güvenlik konularını ele alan çalışmalar. DNA Onarımı (Amst) 2007; 6: 1197-1209.
          42. Fingar DC, Blenis J: Rapamisin hedefi (TOR): besin ve büyüme faktörü sinyallerinin entegratörü ve hücre büyümesi ve hücre döngüsü ilerlemesinin koordinatörü. Onkogen 2004; 23: 3151-3171.
          43. Shi Q, Qin L, Wei W, Geng F, Fan R, Shin YS, Guo D, Hood L, Mischel PS, Heath JR: Tek tümör hücrelerinde hücre içi sinyal yollarının profilini çıkarmak için tek hücreli proteomik çip. Proc Natl Acad Sci USA 2012; 109: 419-424.
          44. Kioi M, Vogel H, Schultz G, Hoffman RM, Harsh GR, Brown JM: Vaskülogenezin inhibisyonu, ancak anjiyogenezin değil, farelerde ışınlamadan sonra glioblastomanın tekrarını önler. J Clin Yatırım 2010; 120: 694-705.
          45. Louis DN: Malign gliomaların moleküler patolojisi. Annu Rev Pathol 2006; 1: 97-117.
          46. Lucio-Eterovic AK, Piao Y, de Groot JF: Antivasküler endotelyal büyüme faktörü tedavisi sırasında glioblastoma direnci ve istilasının aracıları. Clin Cancer Res 2009; 15: 4589-4599.
          47. Pàez-Ribes M, Allen E, Hudock J, Takeda T, Okuyama H, Viñals F, Inoue M, Bergers G, Hanahan D, Casanovas O: Antianjiyogenik tedavi, tümörlerin artan lokal invazyon ve uzak metastaza doğru malign ilerlemesini ortaya çıkarır. Kanser Hücresi 2009; 15: 220–231.
          Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
          Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

          Yorum yap


          • #6
            Üç Juniperus türünün uçucu yağlarının in vitro antimikrobiyal ve antiinflamatuar aktivitelerine dayalı olarak etkinliğe yönelik ayrımı

            Yazar bağlantıları bindirme panelini açarReham S. Darwish birHala M. Hammoda birDoaa A. Ghareeb b cAli SA Abdelhamid cEl Moataz Bellah El Naggar dFathallah M. Harraz birEman Shawky bir
            Daha fazla göster
            Mendeley'e ekle
            Paylaş
            Anmak
            https://doi.org/10.1016/j.jep.2020.112971Hakları ve içeriği alın Soyut

            etnofarmakolojik alaka düzeyi


            Ardıç bitkileri, halk hekimliğinde antiseptik olarak ve romatoid artrit gibi inflamatuar bozuklukların tedavisinde yaygın olarak kullanılan sedir ağacı yağının önemli kaynakları olarak kabul edilir, ancak iddia edilen kullanımları destekleyecek yeterli bilimsel kanıt yoktur ve herhangi bir spesifikasyonu yoktur. en aktif olarak belirli Juniperus türleri. Çalışmanın amacı


            Bu çalışmanın amacı, üç Juniperus türünün uçucu madde profilinin çıkarılmasıdır ; J. communis , J. yatayis ve J. chinensis'e ek olarak, incelenen üç uçucu yağın antimikrobiyal ve anti-inflamatuar aktivitelerine dayalı olarak LPS (lipopolisakkarit) ile uyarılan WBC'lerde (Beyaz kan hücreleri) etkinliğe yönelik ayrımcılığına ek olarak, Her bir yağın biyolojik aktiviteleri üzerindeki spesifik değişkenlik etkisi. Malzemeler ve yöntemler


            Çalışılan üç bitkinin uçucu yağlarının uçucu bileşenlerinin profillenmesi, GC-FID (Gaz kromatografisi – alev iyonizasyon dedektörü) ve GC–MS (Gaz kromatografisi - kütle spektrometrisi) kullanılarak elde edildi. İncelenen uçucu yağların antimikrobiyal aktiviteleri araştırılmış ve yağlar için minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) belirlenmiştir. Pro-inflamatuar sitokinlerin üretimi, ELISA (Enzim bağlantılı immünosorbent tahlili) ile değerlendirildi. Her aktiviteden sorumlu biyobelirteçlerin tanımlanması, çok değişkenli istatistiksel analiz kullanılarak gizli yapılar modeline ortogonal projeksiyonun oluşturulması yoluyla denendi. Sonuçlar


            İncelenen üç bitkinin uçucu yağlarında kırk beş bileşen tanımlanmıştır. J. horizontalis yağı, E. coli'ye karşı en yüksek aktiviteyi gösterirken, J. communis , S. aureus'a karşı en yüksek aktiviteyi göstermiştir . OPLS model biplotu , J. communis ve J. horizontalis'ten alınan J. chinensis petrol örneğinin sınıflar arası ayrımını gösterdi . Üç yağlar, pro-enflamatuar sitokinler, tümör nekroz faktörü (TNF) üretimini azaltmak anlamlı bulunmuştur - a (IL) -1, interlökin p ve y, interferon (INF- γ)lipopolisakkarit ile aktive olan beyaz kan hücrelerinde. Tüm çalışılan yağlar TNF-a azaltılması benzerdi α ve INF y ise, J. chinensis yağı, IL-1'e karşı yüksek bir potans p . TNF- α ve INF- γ proinflamatuar mediatörlerin katsayı grafikleri, 1-terpineol, 4-terpineol, bornyl asetat, dl-limonen ve α- pinene'nin her iki aktiviteye de pozitif katkı sağladığını gösterirken, β- thujone, 3-carene ve γ -muurolen, IL-1 β inhibitör aktivitesine pozitif katkı sağlayanlardı . Çözüm


            İncelenen üç yağ arasında uçucu profillerinde gözlemlenen farklılıklar, spesifikler arası değişkenliğin test edilen yağların biyolojik aktiviteleri üzerindeki etkisini göstermektedir. Test edilen yağların, E.coli ve S. aureus'a karşı iyi antibakteriyel aktivitelere sahip olduğu , halk arasında topikal bir antiseptik olarak kullanımını haklı çıkarırken, insan WBC'lerinde gözlemlenen anti-inflamatuar etkilerin en azından kısmen, bunların üzerindeki inhibitör etkisine bağlı olduğu gösterilmiştir. proinflamatuar sitokinlerin üretimi. grafik soyut

            1. İndir : Yüksek çözünürlüklü görüntüyü indirin (297KB)
            2. İndir : Tam boyutlu resmi indir
            Tanıtım

            Juniperus cinsi , iğne yapraklı Cupressaceae familyasına ait cinslerden biridir. Avrupa, Asya ve Kuzey Amerika dahil olmak üzere kuzey yarımkürenin ılıman bölgelerinde dağılırlar (Seca ve Silva, 2005; Tumen ve diğerleri, 2012). Juniperus cinsi yaklaşık 68 tür içerir. En yaygın olarak bilinen türler arasında J. communis , J. indica, J. recurva, J. horizontalis, J. chinensis ve J. squamata bulunur.

            Ardıç bitkileri, halk hekimliğinde yara iyileşmesi, antiseptik, rubefacient olarak ve anksiyete, sinirsel gerginlik ve strese bağlı durumlara karşı aromaterapide yaygın olarak kullanılan sedir ağacı yağının önemli kaynakları olarak kabul edilir (Cioanca ve ark., 2015). Yağ, cilt sağlığı bakımı ve romatoid artrit ve gut gibi inflamatuar bozuklukların tedavisi için kullanılır (Han ve Parker, 2017). Ardıç anti-inflamatuar potansiyeli deneysel olarak kurulmuş ve farklı ülkelerin halk tıbbında iletilmiştir. Ardıç bitkileri, anti-inflamatuar ve analjezik özellikleri nedeniyle Tunus, Mısır ve Arap yarımadası dahil olmak üzere birçok Arap ülkesinde birçok geleneksel şifacı tarafından reçete edilmektedir. İlgili Juniperus communis; çilek idrar söktürücü, emmenagog, sindirim ve iltihap önleyici olarak idrar antiseptiği olarak kullanılır. Havadan parçalar, akut ve kronik sistit, albüminüri, mesane nezlesi, böbrek baskılanması, beyaz akıntı ve amenore için kullanılır. Ayrıca ağaç kabuğu astım, bel soğukluğu, artrit, solunum yolu rahatsızlıkları, diyabet, mesane rahatsızlıkları, kronik piyelonefrit, öksürük, karın rahatsızlıkları ve cilt rahatsızlıklarının tedavisinde kullanılır (Bais ve diğerleri, 2014). Öte yandan, J. horizontalis'in dallarının veya etli konilerinin infüzyonu öksürük, soğuk algınlığı ve ateş tedavisinde kullanılır. Koniler veya dallar buhar banyosu olarak da kullanılabilir (Moerman, 1998; Thomas, 1990). İle ilgili olarak , J. chinesis; sapları paraziter cilt problemleri ve romatizma tedavisinde kullanılır. Meyve konvülsiyonlar, aşırı terleme ve hepatit tedavisinde kullanılır. Kök yanık ve haşlanma tedavisinde kullanılmaktadır (Duke ve Ayensu, 1985). Ayrıca, kurutulmuş öz odun soğuk algınlığı, idrar yolu enfeksiyonu, ürtiker, dizanteri, kanama, lökor ve romatizmal artrit tedavisinde geleneksel bir ilaç olarak kullanılmıştır (Lim ve ark., 2002).

            Juniperus uçucu yağlarının ana bileşenlerinin α- pinene, β- pinene, sabinene, myrcene, dl-limonen ve bornyl asetat olduğu bilinmektedir (Ehsani ve diğerleri, 2012; Tumen ve diğerleri, 2012). Farklı Juniperus türlerinin uçucu yağlarının çoğu benzerliklere sahip olsa da, son çalışmalar kimyasal bileşen benzerliklerinin esasen eşdeğer biyolojik etkinlik sağlamadığını göstermiştir. Bu nedenle, farklı türlerin yağlarını sadece kimyasal bileşenlerine göre değil, daha da önemlisi, etkinlikle ilişkili işaretler olarak bilinen hedeflenen aktiviteden sorumlu olan kimyasal işaretlere göre ayırmaya çalışmak son derece önemlidir (Shawky ve diğerleri, 2018). .

            Bu arada inflamatuar süreç sırasında vasküler geçirgenlikte, lökosit birikiminde değişiklikler olduğu, ayrıca inflamatuar mediatörlerin salınımının meydana geldiği bildirilmektedir (Chen ve ark., 2018; Mendes ve ark., 2018). Fiziksel, biyokimyasal ve biyolojik uyarılar, makrofajlar gibi inflamatuar lökositlerin aktivasyonu ile sonuçlanır ve immün yanıt olarak proinflamatuar proteinlerin, sitokinlerin ve enzimlerin indüksiyonuna ve sentezine yol açar. Sitokinler, konakçının enfeksiyona, bağışıklık tepkilerine, iltihaplanmaya ve travmaya tepkilerini düzenler. Bazı sitokinler hastalığı daha kötü hale getirir (iltihaplanma öncesi), bazıları ise iltihabı azaltır ve iyileşmeyi destekler (iltihap önleyici). İnterlökin (IL)-1 ve tümör nekroz faktörü (TNF- α ) gibi zararlı proinflamatuar sitokinleri bloke etmeye odaklanan anti-inflamatuar aktivite). Bu proinflamatuar belirteçlerin kronik ve kontrolsüz aktivasyonu, bazı inflamatuar hastalıkların gelişmesine neden olur. Bu nedenle, sentetik ilaçların yan etkilerinin üstesinden gelmek için bu enzimleri hedeflemek ve inflamatuar sinyal iletim yollarını bozmak için doğal kaynaklı ilaçları keşfetmeye acil bir ihtiyaç vardır (Atanasov ve ark., 2015).

            Bu çalışmanın amacı, Juniperus türlerinin üç uçucu yağının uçucularının profilini çıkarmaktı ; GC-FID-MS ile J. communis , J. horizontalis ve J. chinensis , kemometriyle birleştirilmiş analizler, ayrıca incelenen üç uçucu yağın antimikrobiyallerine dayalı olarak etkinliğe yönelik ayrımcılığına ve inter- uçucu yağların kimyasal bileşenleri üzerindeki spesifik değişkenlik etkisi ve bunun her bir yağın biyolojik aktiviteleri üzerindeki müteakip etkisi.Bölüm snippet'leri

            Bitki materyali


            J. communis , J. horizontalis ve J. chinensis'in havadan parçaları (yaprakları ve dalları) , Mısır, Kahire'deki Uluslararası Bahçe'den üç yıl üst üste (2017, 2018 ve 2019) Aralık'ta (kış sezonu) toplandı. Her bitki 3 yıl boyunca her yıl üç kez toplanmıştır; her seferinde her bitkiden 500 g toplandı (her bitkiden 1500 g/yıl). Bitkilerin kimliği, Mısır, Kahire, El Orman Bahçesi'ndeki bitki tanımlama uzmanı Dr. Therese Labib tarafından doğrulandı. ÜçGC/MS analizi kullanılarak incelenen üç yağın uçucu bileşen profillerindeki değişkenlik


            J. communis , J. yatayis ve J. chinensis'in uçucu bileşenlerinin spesifik değişkenliğini incelemek için , incelenen üç bitkinin (hava kısımları) uçucu yağları Aralık 2017, 2018 ve 2019'da toplandı ve tarafından analiz edildi. Sırasıyla yağ bileşenlerinin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için GC-MS ve GC-FID.

            Tablo 1'in kapsamlı çalışması, incelenen üç bitkinin uçucu yağlarında kırk beş bileşenin tanımlandığını göstermiştir. Yağ verimi ile ilgili olarak, J.Çözüm


            Üç Juniperus türünden ekstrakte edilen üç uçucu yağın uçucularının, kemometriyle birleştirilmiş GC-MS analizi kullanılarak profillenmesi, spesifikler arası değişkenlikten kaynaklanan test edilen yağlar arasında uçucu profillerinde bir varyasyon olduğunu göstererek etkili bir şekilde gerçekleştirildi. Her bir yağın etkililiğe dayalı ayrımı, yağları biyolojik özelliklerine göre ayırt etmek için antimikrobiyal ve antiinflamatuar aktivitelerin ardından OPLS modellemesi değerlendirilerek yapıldı.Referanslar (50)
            Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
            Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

            Yorum yap


            • #7
              Katran Ardıcı Stech-Wacholder Juniperus Oxycedrus L.[/B]
              Toros Ardıcı



              Familyası: Selvigillerden, Zypressengewâchse, Cupressaceae

              Drugları: Katran Ardıç kozalağı; Juniperi Oxycedrus fructus
              Katran Ardıç eter yağı; “ “ aetheroleum
              Katran Ardıç yağı (katranı); Juniperi pix

              Toros Ardıç kozalağının Çayı içilir, eterik yağı çıkarılır ve odunlarından Katran elde edilir.
              Vatanı Akdeniz ülkeleri olan bitki Balkanlarda da yetişir ve 3-5 m boyunda nadiren 14 m.yi bulabilir. Yaprakları 4-14 mm uzunluğunda, 1-2 mm genişliğinde ve ucu oldukça sivridir. Kozalakları 6-10 mm çapında önce açık sarı, sonra olgunlaşınca kırmızı veya esmerimsi kırmızı renk-tedir.

              Birleşimi: Kozalaklarında ortalama %1 eterik yağ türevi içerir ve bunların önemlileri; α-Pinen %60, B-Myrcen %25-30, θ-Muurolen %2, Limonen %1 ve çok az miktarda Terpinen-4-ol %0,5 içerir. Katranda (Juniperi pix) δ-Cadinen %25-30, Calamenen %15-16, θ-Muurolen %6 ve az miktarda diğer eterik yağlar içerir. Eskiden Akdeniz ve Ege bölgesinde bulunan Toros Ardıcının dal, odun ve yaprakları güğümlere konur ve altı yakılarak katranı elde edilir. Yapılan araştırmalarda Ardıç katranının mikropları öldürdüğü ve mantarı yok ettiği ispatlanmıştır. Eskiden deri hastalıkları, ekzema, sedef hastalığı, uyuz, saç dökülmesi, kaşıntı ve romatizmaya karşı kullanılmıştır. Dahili olarak günde 3-5 defa 3-4 damla alınabilir. Avrupa'da sabun, şampuan ve kozmetik maddelere katkı maddesi olarak katılmaktadır. Türkiye'de Hakiki Ardıç kozalağı yerine genellikle Toros Ardıç kozalağı kullanılmaktadır. Oysa Karadeniz bölgesinde yaygın olarak yetişen Cüce Ardıcın kozalakları daha etkilidir.
              Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
              Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

              Yorum yap


              • #8
                Juniperus Communis Özü Kan-Beyin Bariyeri Yoluyla İnsan Glioblastomlarında Antitümör Etkiler Gösterir

                Tsai1; Nu-Man Tsai2 3, Kai Fu Chang2 3, Jun-Cheng Wang4
                Bağlantılar
                • 1Patoloji Anabilim Dalı, Üç Hizmetli Genel Hastane, Ulusal Savunma Tıp Merkezi, Taipei, Tayvan.
                • 2Tıbbi Laboratuvar ve Biyoteknoloji Bölümü, Chung Shan Tıp Üniversitesi, Taichung, Tayvan.
                • 3Chung Shun Tıp Üniversitesi Tıp Enstitüsü, Taichung, Tayvan.
                • 4Tıbbi Görüntüleme ve Radyolojik Bilimler Bölümü, Chang Gung Üniversitesi, Taoyuan, Tayvan.
                Ücretsiz makaleSoyut


                Arka plan/amaç: Juniperus communis'ten (JCo) elde edilen bitkisel materyaller antikanser aktiviteye sahiptir. Bu çalışmada, bir JCo berry özütünün glioblastoma büyümesini baskılamadaki etkinliğini değerlendirdik.

                Yöntemler: JCo özütünün normal ve glioma hücre hatlarının yaşayabilirliği üzerindeki etkileri, değiştirilmiş bir 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili kullanılarak analiz edildi. JCo özütü ve temozolomidin (TMZ) glioma hücreleri üzerindeki sinerjik terapötik etkisi MTT analizi ile incelenmiştir. Apoptotik yolu belirlemek için akış sitometri analizi, terminal deoksinükleotidil transferaz aracılı nick end etiketleme (TUNEL) testi ve western blotlama yapıldı. JCo özütünün in vivo etkinliğini belirlemek için, sıçanlara arka deride ve beyin yarıküresinde 5 x 104 sıçan glioma RG2 hücreleri enjekte edildi ve daha sonra arka deriye JCo özü veya araç içeren bir deri altı enjeksiyonu yapıldı. Son olarak, JCo toksisitesini değerlendirmek için kan ve histolojik incelemeler yapıldı.

                Sonuçlar: JCo özütünün IC50 değerleri, sırasıyla 24 ve 48 saat sonra glioblastoma hücre hatlarında 57-69 µg/mL ve 49-67 µg/mL idi. Bununla birlikte, tümör olmayan hücre hatlarında, JCo özütünün ilgili IC50 değerleri 76-105 µg/mL ve 77-108 µg/mL idi. JCo özütü, temozolomidin (TMZ) neden olduğu etkilere kıyasla, normal hücrelere kıyasla gliomada daha güçlü bir sitotoksisiteye ve daha geniş bir IC50 değerleri aralığına sahipti. Ek olarak, akış sitometrisi analizi, TUNEL testi ve western blotlamanın sonuçları, JCo özütünün, içsel ve dışsal apoptotik yolaklar yoluyla glioma hücre döngüsü durmasını indüklediğini ortaya koydu. İn vivo çalışmalarda, hayvan MRI'sı ile ölçüldüğü üzere JCo ile tedavi edilen sıçanlarda tümör boyutunda önemli bir azalma, JCo özütünün glioma hücre büyümesini etkili bir şekilde inhibe ettiğini ve kan-beyin bariyerini başarıyla geçtiğini gösterdi. İmmünohistokimyasal (IHC) boyama, JCo ile tedavi edilen glioma hücrelerinin sırasıyla %44.49, %5.88 ve %5.85'inde PCNA, VEGFR-1 ve VEGFR-2'nin pozitif sinyallerini saptadı. Bununla birlikte, PCNA, VEGFR-1 ve VEGFR-2'nin pozitif sinyalleri, araçla tedavi edilen glioma hücrelerinin sırasıyla %73.08, %9.67 ve %11.70'inde tespit edildi. PCNA ve VEGFR-1 ve -2'nin IHC incelemesi, JCo özütünün neovaskülarizasyon derecesini önemli ölçüde azalttığını gösterdi. Bununla birlikte, JCo ve araçla tedavi edilen sıçanlar arasında kan hücresi sayımı ve hepatik enzimlerin serum seviyelerinde, böbrek fonksiyon indeksinde ve hayati organların histolojik görünümünde önemli farklılıklar saptanmamıştır. PCNA, VEGFR-1 ve VEGFR-2'nin pozitif sinyalleri, araçla tedavi edilen glioma hücrelerinin sırasıyla %73.08, %9.67 ve %11.70'inde tespit edildi. PCNA ve VEGFR-1 ve -2'nin IHC incelemesi, JCo özütünün neovaskülarizasyon derecesini önemli ölçüde azalttığını gösterdi. Bununla birlikte, JCo ve araçla tedavi edilen sıçanlar arasında kan hücresi sayımı ve hepatik enzimlerin serum seviyelerinde, böbrek fonksiyon indeksinde ve hayati organların histolojik görünümünde önemli farklılıklar saptanmamıştır. PCNA, VEGFR-1 ve VEGFR-2'nin pozitif sinyalleri, araçla tedavi edilen glioma hücrelerinin sırasıyla %73.08, %9.67 ve %11.70'inde tespit edildi. PCNA ve VEGFR-1 ve -2'nin IHC incelemesi, JCo özütünün neovaskülarizasyon derecesini önemli ölçüde azalttığını gösterdi. Bununla birlikte, JCo ve araçla tedavi edilen sıçanlar arasında kan hücresi sayımı ve hepatik enzimlerin serum seviyelerinde, böbrek fonksiyon indeksinde ve hayati organların histolojik görünümünde önemli farklılıklar saptanmamıştır.

                Sonuç: JCo özütü, kan-beyin bariyerine nüfuz etti ve PI3K/AKT/mTOR yolunun baskılanması yoluyla neovaskülarizasyonu azaltarak önemli ölçüde glioma hücre apoptozunu indükledi. Ayrıca, JCo özütü, neoplastik olmayan hayati organlar için TMZ'den daha az sitotoksikti.
                Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
                Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

                Yorum yap


                • #9
                  Juniperus communis özütü, in vitro ve in vivo olarak kolorektal adenokarsinomun hücre döngüsü durmasını ve apoptozunu indükler

                  Wen-Lin Lai , 1, 2, * Shan-Chih Lee , 3, 4, * Kai-Fu Chang , 1, 5 Xiao-Fan Huang , 1, 5 Chia-Yu Li , 6 Chien-Ju Lee , 1 Chun- Yu Wu , 7 Hui-Ju Hsu , 1, 2 ve Nu-Man Tsai 1, 2
                  Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
                  1 Tıbbi Laboratuvar ve Biyoteknoloji Bölümü, Chung Shan Tıp Üniversitesi, Taichung, Çin Cumhuriyeti, Tayvan
                  2 Klinik Laboratuvar, Chung Shan Tıp Üniversitesi Hastanesi, Taichung, Çin Cumhuriyeti, Tayvan
                  3 Tıbbi Görüntüleme ve Radyolojik Bilimler Bölümü, Chung Shan Tıp Üniversitesi, Taichung, Tayvan, Çin Cumhuriyeti
                  4 Tıbbi Görüntüleme Bölümü, Chung Shan Tıp Üniversitesi Hastanesi, Taichung, Tayvan, Çin Cumhuriyeti
                  5 Tıp Enstitüsü, Chung Shan Tıp Üniversitesi, Taichung, Tayvan, Çin Cumhuriyeti
                  6 Yaşam-ve-Ölüm Çalışmaları Bölümü, Nanhua Üniversitesi, Chiayi, Tayvan, Çin Cumhuriyeti
                  7 Kardiyoloji Anabilim Dalı, Dahiliye Anabilim Dalı, Ditmanson Tıp Vakfı Chia-Yi Christian Hastanesi, Chia-Yi, Tayvan, Çin Cumhuriyeti

                  Yazışma: Chun-Yu Wu: < wt.ude.umsc@namun;c3000x#& :iasT naM-uN | ;e3000x#&moc.liamg@0202usHuJiuH;c3000x#& :usH uJ-iuH | ;e3000x#&moc.liamg@825uwyj >
                  * Bu yazarlar bu çalışmaya eşit katkıda bulunmuştur.
                  Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır .
                  Git: Soyut


                  Juniperus communis (JCo), yaraları, ateşi, şişmeyi ve romatizmayı tedavi etmek için kullanılan iyi bilinen bir geleneksel Çin şifalı bitkisidir. Bununla birlikte, JCo ekstraktının kolorektal kanser (CRC) üzerindeki antikanser etkisinin altında yatan mekanizma henüz açıklığa kavuşturulmamıştır. Bu çalışma, JCo özütünün in vitro ve in vivo antikanser etkilerini ve ayrıca kesin moleküler mekanizmaları araştırdı. Hücre canlılığı, MTT tahlili kullanılarak değerlendirildi. Hücre döngüsü dağılımı, akış sitometrisi analizi ile incelendi ve hücre apoptozu, terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP çentik ucu etiketleme (TUNEL) tahlili ile belirlendi. Protein ekspresyonu western blot kullanılarak analiz edildi. canlılarda _JCo özütünün aktivitesi, bir ksenograft BALB/c fare modeli kullanılarak değerlendirildi. Tümörler ve organlar, hematoksilen-eozin (HE) boyama ve immünohistokimya yoluyla incelendi. Sonuçlar, JCo özütünün CRC hücrelerine karşı normal hücrelere göre daha yüksek sitotoksisite sergilediğini ve 5-florourasil ile birleştirildiğinde sinerjistik etkiler gösterdiğini gösterdi. JCo , p53/p21 ve CDK4/siklin D1'in düzenlenmesi yoluyla G 0 /G1 fazında uyarılmış hücre döngüsü durdurmasını ve dışsal (FasL/Fas/kaspaz-8) ve içsel (Bax/Bcl-2/ kaspaz-9) apoptotik yollar. canlılardaÇalışmalar, JCo özütünün proliferasyonun inhibisyonu ve apoptozun indüklenmesi yoluyla tümör büyümesini baskıladığını ortaya koydu. Ek olarak, tedaviden sonra vücut ağırlığında veya normal organların histolojik morfolojisinde belirgin bir değişiklik olmadı. JCo özütü, hücre döngüsü durmasını ve in vitro ve in vivo apoptozu indükleyerek CRC ilerlemesini bastırdı , bu da JCo özütünün CRC tedavisinde potansiyel uygulamasını ortaya koydu.

                  Anahtar Kelimeler: Kolorektal kanser, Juniperus communis, Hücre döngüsü, Apoptoz, Sinerjistik etki
                  Git: giriiş


                  Kolorektal kanser (CRC), insanlarda en yaygın üçüncü malign kanserdir ve dünya çapında yıllık kansere bağlı ölümlerin yaklaşık %9,2'sini oluşturur ( 1 ). CRC'nin tümörijenezi çok faktörlüdür ve normal rektal mukozanın malign metastatik karsinoma dönüşmesiyle sonuçlanan epigenetik ve genetik değişikliklerin progresif birikimi ile ilişkilidir ( 2 ). Diyet, CRC'nin etiyolojisinde rol oynayan ana çevresel faktörlerden biridir ve CRC vakalarının yaklaşık %90'ı yüksek miktarda kırmızı et, doymuş yağlar ve n-6 çoklu doymamış yağ asitleri alımı ve düşük vitamin ve lif alımı ile ilişkilidir ( 3 ) . . KRK için standart tedavi, tümörün boyutuna, konumuna ve hastalık evresine bağlı olarak radyoterapi veya kemoterapi ile birlikte cerrahidir (4 ). Bununla birlikte, 5-florourasil (5-FU), doksorubisin ve mitomisin dahil olmak üzere standart kemoterapi rejimleri, mukozit, diyare ve dermatit gibi yan etkiler sergiler ( 5 – 8 ). Bu nedenle, CRC tedavisi için yeni anti-CRC ajanları veya kombinasyon tedavisi için karşılanmamış bir klinik gereksinim bulunmaktadır. Son zamanlarda, doğal materyaller, çeşitli kanserler için önleyici veya terapötik ajanlar olarak potansiyel göstermiştir ( 7 , 8 ).

                  Son zamanlarda yeni ilaçların geliştirilmesinde doğal malzemeler ve doğal sağlık ürünleri kullanılmaya başlandı. Şu anda mevcut olan kimyasal ilaçlar bitkiler, deniz organizmaları ve mikroplar gibi doğal malzemelerden elde edilmektedir ( 9 ). Son analizler, paklitaksel, vinblastin, topotekan ve etoposid dahil klinik kullanımda olan en az 73 onaylı antikanser ilacının bitkilerden elde edildiğini göstermiştir ( 10 , 11 ). Doğal ürünler, çeşitli moleküler yapıları ve biyolojik afiniteleri nedeniyle antikanser ajanların keşfinde yaygın olarak kullanılmaktadır ( 12 ). Doğal ürünler ağırlıklı olarak geleneksel ve bitkisel ilaçları içerir ve son çalışmalar biyofonksiyonları ve kanser tedavisindeki uygulamalarına odaklanmıştır ( 13).

                  Juniperus communis (JCo), Cuppressaceae familyasına ait, yaprak dökmeyen, iğne yapraklı bir çalıdır ( 14 ). JCo özü geleneksel olarak ağrı, yara, ateş, şişlik ve romatizma tedavisinde bitkisel bir ilaç olarak kullanılmıştır ( 15 , 16 ). Son çalışmalar, JCo özütünün anti-oksidatif, anti-mikrobiyal, anti-inflamatuar, anti-diyabetik ve anti-hiperlipidemik aktiviteler sergilediğini göstermiştir ( 17 ). – 20 ). JCo özütünün antikanser aktivitesi, melanom, ağız kanseri, meme kanseri, akciğer kanseri ve karaciğer ve kolon karsinomları ile ilgili olarak tümör büyümesinin inhibisyonuna dayalı olarak gösterilmiştir ( 21 – 24 ). α-pinen, d-limonen ve terpinolene dahil olmak üzere JCo ekstraktındaki bileşikler, anti-kanserojen aktiviteler göstermiştir ( 25 – 31 ). Bununla birlikte, az sayıda çalışma, JCo özütünün antikanser mekanizmasını in vitro ve in vivo araştırmıştır .

                  Bu çalışma, JCo özütünün in vitro ve in vivo antikanser etkilerini incelemeyi ve CRC'de JCo özütü tarafından indüklenen tümör büyümesi inhibisyonunun altında yatan kesin moleküler mekanizmayı belirlemeyi amaçladı. Ek olarak, JCo özütü ve klinik ilaç 5-FU kombinasyonu, in vitro antikanser etkilerinin yanı sıra JCo özütünün in vivo toleransı için analiz edildi . Sonuçlarımız, CRC tedavisinde klinik bir terapötik ajan veya adjuvan terapötik ajan olarak JCo özütünün potansiyelini göstermiştir.

                  Git: Araç ve yöntemler

                  Hücre kültürü ve reaktifler


                  İnsan kolorektal adenokarsinomu (HT-29, ATCC® HTB-38), fare kolon kanseri (CT-26, BCRC 60447 ), köpek böbrek epiteli (MDCK, BCRC 60004) ve fare vasküler endotelyal (SVEC, BCRC 60220) hücre hatları, American Type Culture Collection'dan (ATCC, ABD) veya Bioresource Collection and Research Center'dan (BCRC, Tayvan) elde edilmiştir. HT-29, SVEC ve MDCK hücreleri, Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamında (DMEM, Gibco BRL, ABD) kültürlendi; CT-26 hücreleri, %10 fetal sığır serumu, HEPES (10 mM), piruvat (1 mM) ve penisilin/streptomisin solüsyonu (100 U/mL penisilin ve 100 ug/mL streptomisin; tümü ile desteklenmiş RPMI-1640 ortamında kültürlendi; hepsi Gibco BRL'den). Hücreler rutin olarak %5 CO2'de kültür kaplarında büyütüldü .37°C'de nemlendirilmiş atmosfer. HT-29 hücrelerinde TP53'ün durumu, nükleik asitlerin (AccuBioMed Co., Ltd., Tayvan) otomatik ekstraksiyonu ve Femtopath İnsan Primer Setleri (HongJing Biotech, Tayvan) kullanılarak sekanslama ile belirlendi.

                  JCo meyveleri Nepal'den taze olarak elde edildi ve buhar distilasyonu ile ekstraksiyona tabi tutuldu ( 22 ). Ayrıntılı ekstraksiyon akış şeması, laboratuvarımızda küçük ölçekte test edilmiştir. Yaklaşık 400 g meyve, 2 L'lik bir buhar damıtma ünitesinde 100 dakika boyunca 100-105°C'de yaklaşık 7,2 mL/dakikalık bir akış hızında buharla damıtıldı. Phoenix (ABD) daha sonra JCo özütünün büyük ölçekli üretimi için görevlendirildi. 5-FU ve etoposid (VP-16), Sigma-Aldrich'ten (ABD) satın alındı. Her deneyden önce, tüm özler veya kimyasallar, dimetil sülfoksit (DMSO, Sigma-Aldrich) içinde çözündürüldü ve taze ortamda seyreltildi. Sitotoksisitenin belirlenmesi


                  Sitotoksisite, 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili kullanılarak analiz edildi. Kısaca hücreler, karşılık gelen kültür ortamını içeren 96 oyuklu plakalarda (5 x 103 hücre/oyuk) gece boyunca kültürlendi , ardından 24, 48 veya 72 için çeşitli konsantrasyonlarda JCo özütü (0-100 ug/mL) ile işleme tabi tutuldu. h. Daha sonra, her oyuktaki ortam, MTT çözeltisi (400 ug/mL; Sigma) ile değiştirildi ve plakalar 6-8 saat inkübe edildi. İnkübasyondan sonra, formazan kristallerini çözündürmek için DMSO ilave edildi ve 550 nm'de absorbans, bir mikroplaka okuyucu (Molecular Devices, Spec384, ABD) kullanılarak ölçüldü. % 50 engelleyici konsantrasyon (ICso ), göreli canlılığa karşı grafik temel alınarak hesaplandı.JCo özü konsantrasyonu. Hücre canlılığı (%), absorbans (tedavi edilmiş hücreler) / absorbans (kontrol hücreleri) x 100 olarak hesaplandı. HT-29 hücrelerinde JCo ekstraktının (0-100 μg/mL) konsantrasyonu test edildikten sonra, 65 μg/mL'lik doz Hücre ölümünü indükleyen (IC70 ) , CRC hücrelerine karşı antikanser mekanizmasını incelemek için ileri deneylerde kullanıldı.JCo özütünün ve klinik ilaçların sinerjik etkileri


                  HT-29 hücreleri, JCo özütü (0, 20, 40, 60 ve 80 μg/mL) ve 0.25 μg/mL 5-FU kombinasyonu veya 5-FU (0, 0.125, 0.25, 0,5 ve 1 μg/mL) ve 40 μg/mL JCo özütü 72 saat süreyle. Hücre canlılığı daha sonra MTT tahlili ile belirlendi. Kombinasyon indeksi (CI) şu şekilde hesaplandı: [IC50 ( ilaç A+B) / IC50 ( ilaç A)] + [IC50 ( ilaç A+B) / IC50 ( ilaç B)]. İlaçların kombinasyon etkileri, sinerjizmi (CI<1), aditiviteyi (CI=1) ve antagonizmi (CI>1) ( 32 ) değerlendirmek için CI'lere dayalı olarak değerlendirildi. Hücre döngüsü analizi


                  Hücre döngüsü dağılımı, propidium iyodür (PI) boyaması ve akış sitometrisi analizi kullanılarak belirlendi. Kısaca, HT-29 hücreleri ( 2x106 hücre/tabak) 0, 6 , 12, 24 ve 48 saat boyunca 65 µg/mL JCo özütü ile işlendi, ardından PI/RNaz boyama çözeltisi (40 µg) ilave edildi. /mL PI ve 100 ug/mL RNase; Sigma) ve gece boyunca 4°C'de inkübasyon. Her hücrenin DNA içeriği (FL2 yoğunluğu), FACScan (Beckton Dickinson, ABD) ve Kaluza Akış Sitometri Analizi yazılımı (versiyon 1.2, Beckman Coulter, ABD) kullanılarak ölçüldü. Terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP nick uç etiketleme (TUNEL) testi


                  Apoptoz, Yerinde Hücre Ölümü Tespit kiti, POD (Roche, Almanya) kullanılarak tespit edildi. Silan kaplı cam slaytlar veya parafinden arındırılmış doku kesitleri üzerindeki hücreler, fosfat tamponlu salin (PBS) ile yeniden hidratlandı, endojen peroksidazı etkisiz hale getirmek için metanol içinde %3 H202 ile işleme tabi tutuldu ve geçirgenleştirme çözeltisi ( %0.1 Triton X-100 inkübe edildi) ile inkübe edildi. %0.1 sodyum sitrat tamponu) buz üzerinde. Numuneler daha sonra TUNEL reaksiyon solüsyonu ile 37°C'de 2 saat inkübe edildi ve PI ile zıt boyama yapıldı. TUNEL-pozitif hücreler gözlendi ve bir floresan mikroskobu (ZEISS AXioskop2, Almanya) kullanılarak 400x büyütmede fotoğraflandı. Western blotlama


                  JCo özü ile muamele edilmiş hücreler, bir proteaz inhibitörü (Bio Basic Inc., Kanada) ve bir fosfataz inhibitörü (Bionovas, Kanada) içeren RIPA lizis tamponu ile parçalandı ve 30 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edildi. 12.000 g'de santrifüj edildikten sonra4°C'de 30 dakika boyunca, süpernatantın protein içeriği, bir bisinkoninik asit (BCA) protein tahlil kiti (Pierce, ABD) kullanılarak ölçüldü. Eşit miktarlarda (20 ug) protein numunesi %8-12,5 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) kullanılarak çözüldü ve 0.22 um poliviniliden diflorür (PVDF) membranlarına (PALL Corp., ABD) aktarıldı. Zarlar, %5 yağsız kuru süt ile bloke edildi ve anti-p53, anti-p-p53, anti-Rb, anti-pRb, anti-CDK2, anti-CDK4, anti-siklin A, anti-siklin birincil antikorları ile inkübe edildi. B1, anti-siklin D1, anti-FasL, anti-Fas, anti-Bax, anti-Bcl-2, anti-kaspaz-8, anti-kaspaz-9, anti-kaspaz-3, çoğalma önleyici hücre nükleer antijeni ( PCNA), anti-vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), anti-VEGF reseptörü 1 (VEGFR1), anti-VEGF reseptörü 2 (VEGFR2), anti-matriks metalloproteinaz (MMP)-2, anti-MMP-9 (Santa Cruz, ABD), anti-p21 ve anti-β-aktin (iReal Biotechnology Co., Ltd., Tayvan) gece boyunca 4°C'de. Zarlar, tris-tamponlu tuzlu su içinde %0.5 Tween-20 ile üç kez yıkandı ve 2 saat boyunca biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile inkübe edildi, ardından peroksidaz-konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile inkübe edildi. 1 saat Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). anti-p21 ve anti-β-aktin (iReal Biotechnology Co., Ltd., Tayvan) gece boyunca 4°C'de. Zarlar, tris-tamponlu tuzlu su içinde %0.5 Tween-20 ile üç kez yıkandı ve 2 saat boyunca biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile inkübe edildi, ardından peroksidaz-konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile inkübe edildi. 1 saat Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). anti-p21 ve anti-β-aktin (iReal Biotechnology Co., Ltd., Tayvan) gece boyunca 4°C'de. Zarlar, tris-tamponlu tuzlu su içinde %0.5 Tween-20 ile üç kez yıkandı ve 2 saat boyunca biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile inkübe edildi, ardından peroksidaz-konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile inkübe edildi. 1 saat Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Tayvan) gece boyunca 4°C'de. Zarlar, tris-tamponlu tuzlu su içinde %0.5 Tween-20 ile üç kez yıkandı ve 2 saat boyunca biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile inkübe edildi, ardından peroksidaz-konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile inkübe edildi. 1 saat Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Tayvan) gece boyunca 4°C'de. Zarlar, tris-tamponlu tuzlu su içinde %0.5 Tween-20 ile üç kez yıkandı ve 2 saat boyunca biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile inkübe edildi, ardından peroksidaz-konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile inkübe edildi. 1 saat Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Tris-tamponlu salin içinde %5 Tween-20 ve biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile 2 saat inkübe edildi, ardından peroksidaz konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile 1 saat inkübe edildi. Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Tris-tamponlu salin içinde %5 Tween-20 ve biotin-konjuge sekonder antikorlar (Santa Cruz) ile 2 saat inkübe edildi, ardından peroksidaz konjuge streptavidin (Jackson ImmunoResearch Inc., ABD) ile 1 saat inkübe edildi. Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Antikor reaktif proteinler, geliştirilmiş bir kemilüminesans reaktifi (ECL, T-Pro Biotechnology, Tayvan) ile işlendi ve bir floresan/kemilüminesans görüntüleme analizörü (GE LAS-4000, GE Healthcare Life Sciences, ABD) kullanılarak tespit edildi. Protein ekspresyonu, ImageJ 1.47t yazılımı (NIH, ABD) kullanılarak ölçüldü ve şu şekilde hesaplandı: (numunenin yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu) / (kontrolün yoğunluğu / β-aktin yoğunluğu). Kaspaz-3 aktivasyonunun tespiti


                  HT-29 hücreleri ( 6 oyuklu bir kültür plakasında 5 x 105 hücre/kuyu), 2 saat boyunca kaspaz-3 inhibitörü (1 uM; Z-DEVD-FMK, BIOSCIENCES, ABD) ile ön işleme tabi tutuldu, ardından 65 ile tedavi edildi . 24 saat boyunca μg/mL JCo özütü. Tedavi edilen hücrelerde pro-kaspaz-3 ve parçalanmış kaspaz-3'ün ekspresyon seviyeleri western blotlama ile belirlendi. In vivo tümör büyümesi ve immünohistokimya


                  Dişi BALB/c fareleri (10-12 hafta; 19-23 g), 12 saatlik bir aydınlık/karanlık döngüsü ile sürdürülen bir laminer hava akışı odasında (kafes başına 6 adet) bulunan Ulusal Laboratuvar Hayvan Merkezi'nden (Tayvan) elde edildi. (bağıl nem: %55-60; sıcaklık: 25±1°C) ve dengeli bir diyet ve suya serbest erişime izin verdi. Deneyden önce, fareler 1 hafta boyunca laboratuvar koşullarına alıştırıldı. Deney, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzuna göre Chung Shan Tıp Üniversitesi'nde (CSMU) yapıldı. CRC modeli, BALB/c farelerinin yanlarına 1x106 CT -26 hücre sc enjekte edilerek oluşturulmuştur. Fareler, araç kontrolü (n=4) ve JCo özüt tedavisi (n=6) gruplarına randomize edildi. Tümör hacimleri 15 mm3'ü aştığında(7 gün hücre enjeksiyonu), tümör taşıyan fareler, 40 gün boyunca her 2 günde bir 200 mg/kg JCo özütü ile tedavi edildi ve tümör hacmi 1500 mm3'ü ( LxHxWx ) aştığında karbondioksit boğulmasıyla öldürüldü. π/6 mm 3 ). Bu prosedür, CSMU'nun Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır (ödenek numarası: CSMU-IACUC-1543). Tümör kitleleri ve organları toplandı, %4 nötr formalin ile sabitlendi, parafine gömüldü ve immünohistokimyasal (IHC) ve hematoksilen-eozin (HE) boyaması için kesitler halinde kesildi.

                  Kesitler deparafinize edildi ve yeniden hidratlandı ve endojen peroksidaz inaktive edildi. Kesitler, PBS içinde %10 sığır serum albümini (BSA) ile bloke edildi ve gece boyunca 4°C'de anti-PCNA, anti-VEGF, anti-VEGFR1, anti-VEGFR2, anti-MMP-2, anti- MMP-9 ve bölünme önleyici kaspaz-3 (Santa Cruz). Yıkandıktan sonra, slaytlar 2 saat boyunca biyotinlenmiş bir ikincil antikor (Süper Hassas Polimer HRP IHC Detection System kiti, BioGenex, ABD) ile inkübe edildi. Son olarak, slaytlar bir avidin-biotin kompleksi ile inkübe edildi, 3,3'-diaminobenzidin (DAB) ile reaksiyona sokuldu ve hematoksilen ile zıt boyandı. Tüm numuneler bir mikroskop kullanılarak gözlemlendi ve fotoğraflandı ve Quickscore yöntemi kullanılarak puanlandı ( 33 ). istatistiksel analizler


                  Veriler, ortalama±SD veya standart hata olarak rapor edilir. IC50 değerleri , Microsoft Excel 2016 (ABD) kullanılarak doğrusal regresyon analizi ile belirlendi. İstatistiksel anlamlılık Student t -testi ve tek yönlü varyans analizi kullanılarak belirlendi. Hayatta kalma analizleri Kaplan-Meier yöntemi kullanılarak yapıldı. P-değerleri <0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

                  Git: Sonuçlar

                  JCo özütü, CRC hücrelerinin canlılığını azalttı


                  CRC hücreleri, çeşitli konsantrasyonlarda JCo özütü ile muamele edildi ve hücre canlılığı, MTT tahlili ile tespit edildi. Sonuçlar, JCo özütünün HT-29 ve CT-26 hücrelerinin canlılığını doza bağlı bir şekilde azalttığını gösterdi (Şekil 1). Da gösterildiği gibitablo 1, JCo özütünün tümör hücrelerindeki (HT-29 ve CT-26 hücreleri) ortalama IC50'si, normal hücrelerdekinden (MDCK ve SVEC hücreleri) önemli ölçüde düşüktü, bu da tümör hücreleri için JCo özütünün normal hücrelere göre daha yüksek seçiciliğini gösterir.
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf001.jpg
                  Şekil 1
                  Juniperus communis (JCo) özütünün kolorektal kanser hücre dizilerinde büyüme inhibisyonu üzerindeki etkisi . HT-29 ( A ), CT-26 ( B ), MDCK ( C ) ve SVEC ( D ) hücreleri, 24, 48 ve 72 saat boyunca JCo özütünün seri dilüsyonları ile işlendi ve hücre canlılığı, 3 ile değerlendirildi. -(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili. Veriler, ortalama±SD olarak rapor edilir. *P<0.05 , kontrole karşı (ANOVA). tablo 1

                  Juniperus communis'in ( JCo ) sitotoksisitesi (ICso ) , kolorektal kanser hücrelerinde ve normal hücrelerde ekstrakte edilir.
                  JCo özü
                  24 saat 66.71±0.48.0 a,c 27,8±0,2 a,b,c >88,3 c 81,1±2,2 b,c
                  48 saat 60,02±0,21 a,b,c 22,7±0,9 a,b,c >88,3 c 74,8±0,3 b,c
                  72 saat 54,32±1,58 a,b,c 27,3±4,5 a,b,c >88,3 b,c 71,2±0,6 b,c
                  5-FU
                  24 saat >10 2,7±0,03 bir >10 6,8±1,3
                  48 saat 1,3±0,4 0,3±0,02 bir >10 1,4±0,05
                  72 saat 0,7±0,03 0,4±0,01 bir 1,1±0,01 0,8±0,03
                  VP-16
                  24 saat >100 bir 44,1±0,4 66,0±1,0 46,2±3,2
                  48 saat 3,3±2,2 9,4±0,03 25,7±2,7 2,2±0,6
                  72 saat 2,3±0,02 4,1±0,1 bir 2,7±0,2 1,0±0,001
                  Ayrı bir pencerede aç
                  IC50 : yarı maksimum inhibitör konsantrasyon. Veriler, µg/mL cinsinden ortalama±SD olarak rapor edilir. tümör hücreleri ve normal hücreler arasında bir P<0.05; b JCo özüt grubu ile 5-FU tedavi grubu arasında P<0.05; c JCo özüt grubu ile VP-16 tedavi grubu (ANOVA) arasında P<0.05.

                  JCo özü ve 5-FU'nun sinerjik etkileri


                  5-FU ile kombinasyon halinde uygulandığında JCo özütünün sinerjistik, katkı maddesi veya antagonistik bir etkiye sahip olup olmadığını analiz etmek için HT-29 hücreleri, 0.25 μg/mL 5-FU veya 5-FU (0-1 μg/mL) ile 40 μg/mL JCo özütü ile birlikte. 72 saatlik tedaviden sonra hücre canlılığı MTT tahlili ile belirlendi. Da gösterildiği gibişekil 2, CRC hücrelerinin canlılığı, 0.25 μg/mL 5-FU (%42.94±0.69) ile kombine JCo özütü ile tedaviden sonra, yalnızca JCo özütü (%61.30±0.17) ile tedaviden sonra daha düşüktü. Buna karşılık, hücre canlılığı, 40 µg/mL JCo özütüyle kombine edilmiş 5-FU (%41.82±1.45) ile tedaviden sonra, tek başına 5-FU (%67.94±0.35) ile tedaviden sonra azaldı. İlaç kombinasyonlarının sinerjistik, katkı maddesi veya antagonistik etkileri Chou-Talalay yöntemi kullanılarak belirlendi ( 32 ). CI, 72 saatlik bir tedavi süresinden sonra JCo özütü ve 5-FU (CI<1) kombinasyonunun sinerjistik bir etkisini ortaya koyan 0.79'du.
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf002.jpg
                  şekil 2
                  Juniperus communis (JCo) özü, kolorektal kanser hücrelerinin 5-florourasil (5-FU) duyarlılığını artırır. HT-29 hücreleri, tek başına ( A ) JCo özütü (0, 20, 40, 60 ve 80 μg/mL) veya 0.25 μg/mL 5-FU ile kombinasyon halinde JCo özütü veya ( B ) 5-FU ( 0, 0.125, 0.25, 0.5 ve 1 μg/mL) veya 72 saat boyunca 40 μg/mL JCo özütü ile kombinasyon halinde 5-FU. Hücre canlılığı, 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili ile değerlendirildi. Veriler, ortalama±SD olarak rapor edilir. * Kombinasyon grubunda tek ilaca karşı P < 0.05 . 5-FU ile kombinasyon halinde JCo özütü, sinerjik bir etki (CI<1) (ANOVA) sergiledi. JCo özütü CRC hücrelerinde G 0 /G1 fazında indüklenen hücre döngüsü durdurma


                  JCo özütü ile muamele edilmiş CRC hücreleri toplandı ve PI ile boyandı. Hücre döngüsü dağılımı daha sonra bir akış sitometresi kullanılarak FL2 yoğunluğu ölçülerek analiz edildi (Şekil 3A). Sonuçlar, G 0 /G1 fazı hücrelerinin yüzdesinin, JCo ekstraktı muamelesinden 48 saat sonra %51,66±0,19'dan %68,86±0,47'ye yükseldiğini, S ve G2 / M fazı hücrelerinin yüzdelerinin ise 18,34±0,2'den düştüğünü gösterdi. sırasıyla %8,48±0,07 ve 29,99±0,48 ila %22,66±0,66 (Şekil 3B).
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf003.jpg
                  Figür 3
                  Juniperus communis (JCo) özü, G 0 /G1 tutuklanmasını indükler ve HT-29 hücrelerinde hücre döngüsü ile ilişkili proteinlerin ekspresyonunu düzenler. A , HT-29 hücreleri, 0, 6, 12, 24 ve 48 saat boyunca 65 ug/mL JCo özütü ile muamele edildi, propidyum iyodür ile boyandı ve akış sitometrisi ile FL2 yoğunluğu için analiz edildi. B , JCo ekstraktı uygulanmış hücrelerde hücre döngüsü dağılımı ( G0 /Gı , S ve G2 / M fazları), Kaluza Akış Sitometri Analizi yazılımı kullanılarak analiz edildi. Veriler, ortalama±SD olarak rapor edilir. *P<0,05'e karşı kontrol, önemli bir artışla, # P<0,05'e karşıönemli bir düşüş (ANOVA) ile kontrol. C , JCo özütü ile muamele edilmiş hücrelerde hücre döngüsü ile ilişkili proteinlerin ifadesi western blotlama ile belirlendi.
                  Ek olarak, JCo özütü, hücre döngüsü düzenleyicileri (p53, p-p53 ve p21), tümör baskılayıcılar (Rb ve p-Rb) ve G 0 / G 1 fazı (CDK4 ve siklin D1,Şekil 3C). Birlikte ele alındığında, bu sonuçlar, JCo özütünün tümör büyümesini önleme etkisinin, hücre döngüsü ile ilgili protein ekspresyonunun düzenlenmesi yoluyla hücre döngüsü durdurmasının indüklenmesi ile ilişkili olduğunu ileri sürdü. JCo, kaspaz kaskadını düzenleyerek hücre apoptozunu tetikledi


                  SubG 1 fazındaki hücrelerin yüzdesi (apoptoz zirvesi), JCo özütü ile tedaviden sonra önemli ölçüde %5,61±0,19'dan %20,70±0,09'a yükseldi (Şekil 4A). Bu artışın JCo özütü tarafından hücre apoptozunun indüklenmesinden kaynaklanıp kaynaklanmadığını belirlemek için, JCo özütü ile tedavi edilen hücrelerde apoptozu saptamak için TUNEL tahlilini kullandık. Veriler, JCo özütü ile muamele edilmiş hücrelerin TUNEL-pozitif olduğunu ve apoptotik cisimlerin varlığının yanı sıra anoikis, kromatin yoğunlaşması ve DNA parçalanması dahil olmak üzere apoptotik morfolojiler gösterdiğini ortaya koydu (Şekil 4B).
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf004.jpg
                  Şekil 4
                  Juniperus communis (JCo) özütünün HT-29 hücrelerinde dışsal ve içsel apoptotik yolaklar üzerindeki etkileri . A , JCo özütleme işleminden sonra SubG 1 faz hücrelerinin yüzdesi, akış sitometrisi ile analiz edildi. Veriler, ortalama±SD olarak rapor edilir. *P<0.05 , kontrole karşı (ANOVA). B , Hücre apoptozu, TUNEL tahlili (ölçek çubuğu 50 um) ile 48 saat boyunca 65 ug/mL JCo özütü ile muameleden sonra belirlendi. Apoptotik morfolojiler, anoikis, kromatin yoğunlaşması, DNA fragmantasyonu ve apoptotik cisimlerin görünümünü (ok) içeriyordu. C , JCo ekstraktı ile muamele edilmiş hücrelerde dışsal ve içsel apoptotik yolların bileşenlerinin protein ekspresyon seviyeleri western blotlama ile analiz edildi.D , 2 saat boyunca 1 uM Z-DEVD-FMK (kaspaz-3 inhibitörü) ile ön işleme tabi tutulan HT-29 hücreleri, 24 saat boyunca 65 ug / mL JCo özütü ile muamele edildi ve kaspaz-3 aktivasyonu, western blotlama ile belirlendi.
                  Daha sonra, HT-29 hücrelerinde JCo özütü ile muamele ile aktive edilen apoptotik yolu belirlemek için western blot işlemi gerçekleştirdik. JCo özütünün hem dışsal (FasL, Fas ve pro-kaspaz-8) hem de içsel (Bax, Bcl-2 ve bölünmüş kaspaz-9) apoptotik yolakları aktive ettiğini bulduk.Şekil 4C). Ayrıca, kaspaz-3'ün JCo özütünün neden olduğu aktivasyonu, hücrelerin bir kaspaz-3 inhibitörü ile ön işleme tabi tutulmasıyla bloke edildi (Şekil 4D). Birlikte, bu sonuçlar JCo özütünün apoptozu ve tümör hücresi ölümünü tetiklemek için apoptozun dışsal ve içsel yollarını aktive ettiğini gösterdi. JCo özütü, anjiyogenez ve metastazla ilişkili proteinlerin ekspresyonunu azalttı


                  JCo ekstraktının anjiyogenez ve metastaz üzerindeki etkileri western blotlama ile belirlendi. Sonuçlar, JCo özü tedavisinin otokrin anjiyogenez ile ilişkili proteinler VEGF, VEGFR1 ve VEGFR2 ve metastazla ilişkili protein MMP-9'un protein ekspresyon seviyelerini azalttığını gösterdi (Şekil 5). Bu nedenle, JCo özütü, bu ilişkili proteinlerin ekspresyonunu aşağı doğru düzenleyerek tümör proliferasyonunu, anjiyogenezi ve metastazı inhibe edebilir.
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf005.jpg
                  Şekil 5
                  Juniperus communis (JCo) özü ile tedavi edilen HT-29 hücrelerinde otokrin anjiyogenez ve metastazda yer alan proteinlerin ekspresyonu . HT-29 hücreleri, 0, 6, 12, 24 ve 48 saat boyunca 65 μg/mL JCo özütü ve vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), VEGF reseptörü 1 (VEGFR1), VEGF reseptörü 2 (VEGFR2) ifadeleri ile muamele edildi. ), matris metalloproteinaz (MMP)-2 ve MMP-9 western blotlama ile analiz edildi. JCo ekstraktının tümör taşıyan farelerde CRC üzerindeki etkileri


                  Tümör büyümesinin in vivo baskılanmasını analiz etmek için , tümörleri taşıyan CRC fare modelleri oluşturulmuştur. Sonuçlar, JCo özütü (703±192.80 mm3) ile tedavi edilen farelerde, 25. günde araç grubunda (1459.84±144.14 mm3) olduğundan önemli ölçüde daha düşük bir tümör hacmi gösterdi (Şekil 6A). Hayatta kalma oranı, JCo özü tedavi grubunda %100, araç grubunda ise sadece %25 idi (Şekil 6B). Böylece, JCo özü, hayvanlarda tümör büyümesini ve uzamış yaşam beklentisini bastırdı.
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf006.jpg
                  Şekil 6
                  Juniperus communis (JCo) özütünün bir BALB/c fare modelinde CT-26 tümörlerinin inhibisyonu üzerindeki etkisi . Deri altı tümör taşıyan fareler, 40 gün boyunca her 2 günde bir 200 mg/kg JCo özütü ( sc ) ile tedavi edildi. A ve B , Tümör hacimleri her 2 günde bir hesaplandı ve tümör hacmi 1500 mm3'ü aştığında fareler öldürüldü . C - E, Proliferatif hücre nükleer antijeni (PCNA), vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), VEGF reseptörü 1 (VEGFR1), VEGF reseptörü 2 (VEGFR2), matris metalloproteinaz (MMP)-2, MMP-9 ve parçalanmış kaspazın protein ekspresyon seviyeleri -3, immünohistokimya ile saptandı ve Quickscore yöntemi (ölçek çubukları 100 um) kullanılarak puanlandı. JCo özütünün neden olduğu hücre apoptozu, TUNEL tahlili kullanılarak ölçüldü. Veriler, ortalama±SD olarak rapor edilir. *P<0,05 vs araç (ANOVA veya t - testi).
                  Daha sonra, hücre proliferasyon belirteçleri (PCNA), anjiyogenez proteinleri (VEGF/VEGFR1/VEGFR2), metastaz proteinleri (MMP-2/MMP-9) ve apoptoz proteinleri (yarılmış kaspaz) dahil olmak üzere ana düzenleyici proteinler üzerinde JCo özütünün etkilerini araştırdık. -3), IHC analizi ile in vivo . Sonuçlar, JCo özütünün PCNA (%27.6), VEGF (%24.1), VEGFR1 (%13.3), VEGFR2 (%13.4), MMP-2 (%39.1) ve MMP-9 (26.4) protein ekspresyon seviyelerini azalttığını gösterdi. %) ve yarılan kaspaz-3 ekspresyonunu araç grubuna göre (%692.1) arttırdı (araç grubundaki değerler %100 olarak kabul edildi) (Şekil 6C-E). TUNEL pozitiflik oranı araç grubunda %3.2±0.33 ve JCo tedavi grubunda %40±3.33 olup, JCo ekstraktının artmış apoptozu tetiklediğini göstermektedir (Şekil 6E). Bu sonuçlar, JCo özütünün, tümör proliferasyonunu inhibisyonu ve hücre apoptozunun indüklenmesi yoluyla tümör gelişimini baskıladığını gösterdi.

                  Hayvan çalışmalarında, araç grubuna kıyasla JCo özü tedavi grubunda belirgin bir vücut ağırlığı kaybı veya karaciğer, dalak, bağırsak, mide, kalp, akciğer ve böbrekte hasar gözlenmedi (Şekil 7A ve B), JCo ekstraktının terapötik seyrinin iyi tolere edildiğini düşündürmektedir.
                  Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı 1414-431X-bjmbr-54-10-e10891-gf007.jpg
                  Şekil 7
                  Juniperus communis (JCo) ekstresinin fare vücut ağırlığı ve hayati organlar üzerindeki etkileri . A , Tümör taşıyan farelerin vücut ağırlıkları, 40 gün boyunca JCo özüt tedavisinden sonra her 2 günde bir kaydedildi. Veriler, ortalama±SD olarak rapor edilir. B , Hayati organlar toplandı ve hematoksilen-eozin (HE) boyaması ile analiz edildi. JCo özütü ve araç grupları arasında vücut ağırlığı ve histolojik morfoloji (ölçek çubukları, 100 µm) açısından önemli farklılıklar kaydedilmedi.
                  Git: Tartışma


                  Biriken kanıtlar, birçok bitki özütünün ve karışımının, hücre döngüsünün bozulmasına ve apoptozun indüklenmesine dayalı olarak antikanser ve kemopreventif etkilere sahip olduğunu göstermektedir ( 34 , 35 ). JCo, geleneksel Çin tıbbında ve bitkisel tıpta uzun bir kullanım geçmişine sahip iyi bilinen bir bitkidir. JCo, akciğer kanseri, meme kanseri, nöroblastom, karaciğer kanseri ve kolon kanserine karşı antikanser etkiler göstermiş olsa da, bu etkilerin altında yatan moleküler mekanizmalar henüz tam olarak anlaşılamamıştır. Sonuçlarımız, JCo özütünün in vitro ve in vivo olarak tümör hücresi büyümesini inhibe ettiğini gösterdi.ve tümör taşıyan farelerin hayatta kalma oranını arttırdı. Ek olarak, 5-FU ile birleştirilen JCo özütü, CRC hücrelerinde sinerjik bir etkiye sahipti. Moleküler mekanizmalar bağlamında, sonuçlarımız JCo özütünün hücre döngüsü durmasını indüklediğini ve tümör hücresi ölümünü tetiklemek için dışsal ve içsel apoptotik yolları aktive ettiğini gösterdi. Ayrıca, JCo özü tedavisi, otokrin anjiyogenez ve metastaz ile ilişkili proteinlerin ekspresyonunu azalttı. IHC boyaması kullanılarak hayvan modelinde benzer bir etki mekanizması tespit edildi. Önemli olarak, JCo özütü, 40 gün boyunca JCo özütü ile tedavi edilen farelerde normal hücrelere karşı daha düşük sitotoksisite ve çok az organ hasarı sergiledi veya hiç organ hasarı göstermedi.

                  Hücre döngüsü, hücre proliferasyonu, bölünmesi ve büyümesinin düzenlenmesinde önemli bir rol oynar ve birçok kanser tedavi edici ilacın hedefidir ( 36 ). Yakın tarihli bir çalışma, A549, MCF7, TK6 ve U937 insan hücre hatlarının JCo özütü (dallardan ve yapraklardan yapılmış) ile işlenmesinin, G2/M faz hücrelerinin artan birikimiyle sonuçlandığını bildirdi ( 23 ) . Başka bir çalışma, JCo özütü (meyvelerden yapılır) ile tedavinin G 2 , M ve G 0 fazlarındaki hücre yüzdelerini arttırdığını ve karaciğer ve kolon karsinomlarında ve miyosarkomda hücre ölümüne yol açtığını gösterdi ( 24). Çalışmamızda, JCo özütü ile tedavi, p53 protein ekspresyonunu yukarı regüle etti ve p21 protein ekspresyonunu aşağı regüle etti. p21, hücre döngüsünün farklı fazlarını düzenleyen sikline bağımlı bir kinaz inhibitörüdür. G1 /S geçişini düzenleyen CDK4/siklin D1'in protein ekspresyon seviyeleri, G0 /G1 faz hücrelerinin birikmesini tetikleyen JCo özütü ile muameleden sonra azaldı .

                  Programlanmış hücre ölümünün bir şekli olan apoptoz, inflamatuar bir yanıt oluşturmadan hücre oluşumu ve hücre ölümünü dengeleyen önemli bir fizyolojik süreçtir ( 37 ). Ayrıca, apoptozun uyarılması kanser tedavisinde önemli bir terapötik stratejidir. Apoptoza, kaspaz-3 aktivasyonunu tetiklemek için sırasıyla kaspaz-8 ve kaspaz-9 aktivasyonunu içeren ekstrinsik (ölüm reseptörü) ve intrinsik (mitokondriyal bozulma) apoptotik yollar olmak üzere iki ana yol aracılık eder ( 30 , 35 ).). Bu nedenle, CRC hücrelerinde JCo özütü tarafından aktive edilen apoptotik yolu tanımlamak için western blot işlemi gerçekleştirdik. Sonuçlarımız, hem dışsal (FasL, Fas ve pro-kaspaz-8) hem de içsel (Bax, Bcl-2 ve bölünmüş kaspaz-9) apoptotik yolların JCo özütü tarafından aktive edildiğini ve sonunda apoptoz ve morfolojik değişikliklerle sonuçlandığını ortaya koydu. anoikis, kromatin yoğunlaşması, DNA parçalanması ve apoptotik cisimlerin görünümü dahil.

                  JCo özütünün antikanser etkisini ve altta yatan mekanizmayı in vivo araştırmak için bir CT-26 tümör taşıyan fare modeli kuruldu. Araç grubuna kıyasla JCo özütü tedavi grubunda ortalama tümör hacmi önemli ölçüde azaldı ve hayatta kalma oranı önemli ölçüde arttı. IHC boyaması, JCo özütünün hücre proliferasyonunu, otokrin anjiyogenezi ve metastazı inhibe ettiğini ve tümör taşıyan farelerde apoptozu indüklediğini gösterdi; bu bulgular in vitro olarak elde edilenlerle tutarlıdır.tahliller. Ayrıca, 40 günlük tedaviden sonra vücut ağırlığı ve karaciğer, dalak, bağırsak, mide, kalp, akciğerler ve böbreklerin histolojik morfolojisi açısından JCo özü tedavisi ve araç grupları arasında anlamlı bir fark yoktu. Bu sonuçlar, JCo özütünün, düşük ve iyi tolere edilen bir dozda normal hücrelere veya organlara karşı bariz sitotoksisite göstermeden, hem in vitro hem de in vivo olarak CRC hücrelerinde anti-proliferatif, anti-anjiyojenik ve anti-metastatik aktiviteler sergilediğini ve apoptozu tetiklediğini gösterdi. .

                  Önceki çalışmalar, JCo'nun antikanser etkileri olan birçok saf doğal bileşik içerdiğini göstermiştir. Örneğin, JCo'dan izole edilen deoksipodofillotoksin, mitokondriyal (iç) yolun aracılık ettiği kaspaz bağımlı apoptozun güçlü bir indükleyicisidir ve ayrıca malign meme kanseri hücrelerinde MAPK/ERK ve NFκB sinyal yolları aracılığıyla hücre hayatta kalmasını engeller ( 38 ). Başka bir çalışma, seçilmiş Juniperus türlerinden izole edilen podofillotoksin ve deoksipodofillotoksinin lösemi hücre hatlarına karşı etkili olduğunu göstermiştir ( 39 ). JCo'nun (meyvelerden yapılan) metanolik ekstraktından izole edilen imbrikatolik asit, CaLu-6 hücrelerinde G1 faz hücrelerinin birikmesini ve siklin A, D1 ve E1'in aşağı regülasyonunu indükler ( 40). Bu çalışmada, moleküler ağırlığı 500 Da'dan az olan JCo özütünün ana bileşenleri, kullanılarak belirlendiği üzere a-pinen (%27.8), karan (%14.3), d-limonen (%10.7) ve terpinolen (%7.4) içerir. gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS) ve Ulusal Standartlar ve Teknoloji Enstitüsü ve Wiley kütüphane veritabanları. Önceki çalışmalar, a-pinenin insan hepatoma hücre dizilerinde G2/M fazında hücre döngüsü durmasını indüklediğini ( 25 ) , paklitaksel ile kombine edildiğinde küçük hücreli olmayan akciğer karsinomuna karşı sinerjik bir etkiye sahip olduğunu ( 26 ) ve indüklediğini göstermiştir. apoptoz ve melanomla ilgili olarak anti-metastatik koruma sağlar ( 27 ). d-limonen, SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde otofajiyi indükler ( 28), anjiyogenezi ve metastazı inhibe eder, insan kolon kanseri hücrelerinde hücre ölümünü indükler ( 29 ) ve insan lösemi hücrelerinde kaspaz bağımlı bir mitokondriyal yol aracılığıyla hücre apoptozunu indükler ( 30 ). Adaçayı ve biberiye gibi bitkilerin ortak bir bileşeni olan terpinolen, K562 hücrelerinde AKT1'in protein ekspresyon seviyesini azaltarak hücre proliferasyonunu inhibe eder ( 31 ). Bu çalışmaların sonuçları, JCo özütünün antikanser bileşikleri içerdiğini ve bu özütün, CRC tedavisinde gelecekteki bir antikanser ajanı veya bir adjuvan terapötik ajan olarak potansiyel gösterdiğini göstermektedir.

                  Sonuç olarak, sonuçlarımız JCo özütünün hem in vitro hem de in vivo olarak CRC hücre büyümesini baskıladığını ve ayrıca 5-FU ile kombinasyon halinde sinerjik bir etki gösterdiğini gösterdi. Bu nedenle, JCo özütü, CRC tedavisi için potansiyel bir terapötik ajan olarak hizmet edebilir.

                  Git: Teşekkür


                  Bu araştırma, Tayvan'daki Chung Shan Tıp Üniversitesi Hastanesi Vakfı (No. CSH-2013-A-025 ve CSH-2014-A-019) ve Tayvan'daki Chung Shan Tıp Üniversitesi Vakfı (No. CSMU/PU) tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir. -103-2). Akış sitometrisi (FACScan), Ulusal Bilim Konseyi, Eğitim Bakanlığı ve Chung Shan Tıp Üniversitesi tarafından desteklenen Chung Shan Tıp Üniversitesi Enstrüman Merkezinde gerçekleştirilmiştir.

                  Git: Referanslar

                  1. Bray F, Ferlay J, Soerjomataram I, Siegel RL, Torre LA, Jemal A. Küresel kanser istatistikleri 2018: 185 ülkede 36 kanser için dünya çapında GLOBOCAN insidans ve mortalite tahminleri. CA Can J Clin. 2018; 68 :394–424. doi: 10.3322/caac.21492. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  2. Grady WM, Carethers JM. Kolorektal kanser patogenezinde genomik ve epigenetik kararsızlık. Gastroenteroloji. 2008; 135 :1079–1099. doi: 10.1053/j.gastro.2008.07.076. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  3. Yang P, Cartwright C, Chan D, Ding J, Felix E, Pan Y, et al. Balık yağlarının insan akciğer kanserine karşı antikanser aktivitesi, PGE2 ve PGE3 oluşumundaki değişiklikler ve Akt fosforilasyonunun değişmesi ile ilişkilidir. Mol Carcinog. 2014; 53 :566–577. doi: 10.1002/mc.22008. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  4. Marshall JL, Haller DG, de Gramont A, Hochster HS, Lenz HJ, Ajani JA, et al. Evre II ve III kolon kanseri için adjuvan tedavi: uluslararası gastrointestinal onkoloji derneğinin fikir birliği raporu. Gastrointestinal Kanser Araş. 2007; 1 :146–154. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
                  5. Smitha KT, Anitha A, Furuike T, Tamura H, Nair SV, Jayakumar R. Kolon kanseri ilaç dağıtımı için paklitaksel yüklü amorf kitin nanopartiküllerinin in vitro değerlendirilmesi. Kolloidler Sörf B Biyoarayüzleri. 2013; 104 :245–253. doi: 10.1016/j.colsurfb.2012.11.031. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  6. Ashwanikumar N, Kumar NA, Nair SA, Kumar GSV. 5-florourasil (5-FU) ve metotreksatın (MTX) PLGA ve polietilenimin rastgele kopolimerik nanomikelleri yoluyla ikili ilaç dağıtımı, gelişmiş hücre alımı ve sitotoksisite sergiliyor. Kolloidler Sörf B Biyoarayüzleri. 2014; 122 :520–528. doi: 10.1016/j.colsurfb.2014.07.024. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  7. Granci V, Cai F, Lecumberri E, Clerc A, Dupertuis YM, Pichard C. Balık yağı emülsiyonu ile kolon kanseri hücresi kemosensitizasyonu apoptotik mitokondri yolunu içerir. Br J Nutr. 2013; 109 :1188–1195. doi: 10.1017/S000711451200308X. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  8. Yao Q, Fu T, Wang LU, Lai Y, Wang Y, Xu C, et al. Akciğer kanseri A549 hücrelerinin omega-3 uzun zincirli çoklu doymamış yağ asidi kaynaklı ölümünde otofajinin rolü. Oncol Lett. 2015; 9 :2736–2742. doi: 10.3892/ol.2015.3110. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  9. Mann J. Kanser kemoterapisinde doğal ürünler: geçmiş, şimdi ve gelecek. Nat Rev Kanser. 2002; 2 ::143–148. doi: 10.1038/nrc723. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  10. Pan L, Chai H, Kinghorn AD. Daha yüksek bitkilerden antitümör ajanlar için devam eden araştırma. Phytochem Lett. 2010; 3 :1–8. doi: 10.1016/j.phytol.2009.11.005. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  11. Lin X, Peng Z, Su C. Costunolide ve dehidrokostuslaktonun potansiyel anti-kanser aktiviteleri ve mekanizmaları. Int J Mol Sci. 2015; 16 :10888–10906. doi: 10.3390/ijms160510888. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  12. Bindseil KU, Jakupovic J, Wolf D, Lavayre J, Leboul J, van der Pyl D. Pure bileşik kitaplıkları; doğal ürün bazlı ilaç keşfi için yeni bir bakış açısı. Bugün İlaç Teşhisi. 2001; 6 :840-847. doi: 10.1016/S1359-6446(01)01856-6. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  13. Newman DJ, Cragg GM. 1981'den 2014'e kadar yeni ilaç kaynakları olarak doğal ürünler. J Nat Prod. 2016; 79 :629-661. doi: 10.1021/acs.jnatprod.5b01055. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  14. Moein MR, Ghasemi Y, Moein S, Nejati M. Juniperus excelsa M. B subsp.'nin antimikrobiyal, antifungal ve antioksidan aktivitelerinin analizi. Polycarpos (K. Koch) Takhtajan esansiyel yağı. Farmakognozi Arş. 2010; 2 :128–131. doi: 10.4103/0974-8490.65505. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  15. Kiritikar KR BB. Dehradun. Hindistan:: Uluslararası Kitap Distribütörleri; 1994. Hint Şifalı Bitkileri. 2. baskı. [ Google Akademik ]
                  16. Tunon H, Olavsdotter C, Bohlin L. Bazı İsveç şifalı bitkilerinin anti-inflamatuar aktivitesinin değerlendirilmesi. Prostaglandin biyosentezinin ve PAF kaynaklı ekzositozun inhibisyonu. J Etnofarmakol. 1995; 48 :61-76. doi: 10.1016/0378-8741(95)01285-L. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  17. Ved A, Gupta A, Rawat AK. Juniperus communis Linn'in fenol bakımından zengin fraksiyonunun antioksidan ve hepatoprotektif potansiyeli . Yapraklar. Farmakog Mag. 2017; 13 :108–113. doi: 10.4103/0973-1296.197648. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  18. Elshafie HS, Caputo L, De Martino L, Grulova D, Zheljazkov VZ, De Feo V, et al. Üç Juniperus türünden elde edilen uçucu yağların biyolojik araştırmaları ve antimikrobiyal, antioksidan ve sitotoksik aktivitelerinin değerlendirilmesi. J Appl Mikrobiyol. 2020; 129 :1261–1271. doi: 10.1111/jam.14723. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  19. Fierascu I, Ungureanu C, Avramescu SM, Cimpeanu C, Georgescu MI, Fierascu RC, et al. Romanya'nın güney alt-Karpat tepelerine özgü vahşi büyüyen Juniperus communis L.'nin (Cupressaceae) hidroalkolik ekstraktının genoprotektif, antioksidan, antifungal ve anti-inflamatuar değerlendirmesi . BMC Tamamlayıcı Alter Med. 2018; 18 :3. doi: 10.1186/s12906-017-2066-8. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  20. Banerjee S, Singh H, Chaterjee TK. Juniperus communis Linn'in metanolik ekstraktlarının anti-diyabetik ve anti-hiperlipidemik potansiyelinin değerlendirilmesi . Uluslararası J Pharma Biosci. 2013; 4 :10–17. [ Google Akademik ]
                  21. Gao HW, Huang XF, Yang TP, Chang KF, Yeh LW, Hsieh MC, et al. Juniperus communis, tümör büyümesini inhibe ederek ve apoptozu indükleyerek melanom tümör oluşumunu baskılar. J Chin Med'im. 2019; 47 :1171–1191. doi: 10.1142/S0192415X19500605. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  22. Lee CC, Hsiao CY, Lee SC, Huang XF, Chang KF, Lee MS, et al. Juniperus communis özü kullanılarak hücre döngüsü durması ve apoptozun indüklenmesiyle ağız kanserinin baskılanması . Biosci Temsilcisi 2020; 40 :BSR20202083. doi: 10.1042/BSR20202083. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  23. Pollio A, Zarrelli A, Romanucci V, Di Mauro A, Barra F, Pinto G, et al. Akdeniz etnomedikal bitkilerinden elde edilen metanolik ekstraktların insan kanser hücre hatları üzerindeki polifenolik profili ve hedeflenen biyoaktivitesi. Moleküller. 2016; 21 :395. doi: 10.3390/moleküller21040395. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  24. Bayazıt V. Bazı hayvansal ve bitkisel ekstraktlar ile bazı kimyasalların karaciğer ve kolon karsinomu ve miyosarkom üzerine sitotoksik etkileri. Suudi Tıp J. 2004; 25 :156-163. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
                  25. Chen W, Liu Y, Li M, Mao J, Zhang L, Huang R, et al. Alfa-pinenin insan hepatom hücre hatları üzerindeki anti-tümör etkisi, G2/M hücre döngüsü durmasını indükleyerek. J Pharmacol Sci. 2015; 127 :332-338. doi: 10.1016/j.jphs.2015.01.008. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  26. Zhang Z, Guo S, Liu X, Gao X. Alfa-pinen ve beta-pinenin küçük hücreli olmayan akciğer kanserine (NSCLC) karşı paklitaksel ile sinerjistik antitümör etkisi İlaç Res (Stuttg) 2015; 65 :214–218. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
                  27. Matsuo AL, Figueiredo CR, Arruda DC, Pereira FV, Scutti JA, Massaoka MH, et al. Schinus terebinthifolius Raddi'den (Anacardiaceae) izole edilen a-Pinene, apoptozu indükler ve bir melanom modelinde antimetastatik koruma sağlar. Biochem Biophys Res Komün. 2011; 411 :449–454. doi: 10.1016/j.bbrc.2011.06.176. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  28. Russo R, Cassiano MG, Ciociaro A, Adornetto A, Varano GP, Chiappini C, et al. SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde bergamot esansiyel yağının neden olduğu otofajide D-Limonene rolü. PloS Bir. 2014; 9 :e113682. doi: 10.1371/journal.pone.0113682. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  29. Chidambara Murthy KN, Jayaprakasha GK, Patil BS. Kan portakallarından elde edilen D-limonen bakımından zengin uçucu yağ, insan kolon kanseri hücrelerinde anjiyogenez, metastaz ve hücre ölümünü engeller. Hayat Bilimi. 2012; 91 :429–439. doi: 10.1016/j.lfs.2012.08.016. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  30. Ji J, Zhang L, Wu YY, Zhu XY, Sv SQ, Sun XZ. Apoptozun d-limonen tarafından uyarılmasına, insan lösemi hücrelerinde kaspaz bağımlı bir mitokondriyal ölüm yolu aracılık eder. Lök Lenfoma. 2006; 47 :2617–24. doi: 10.1080/00268970600909205. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  31. Okumura N, Yoshida H, Nishimura Y, Kitagishi Y, Matsuda S. Bitkisel adaçayının bir bileşeni olan Terpinolene, K562 hücrelerinde AKT1 ekspresyonunu azaltır. Oncol Lett. 2012; 3 :321–324. doi: 10.3892/ol.2011.491. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  32. Zhao L, Wientjes MG, Au JL. Kombinasyon kemoterapisinin değerlendirilmesi: doğrusal olmayan regresyon, eğri kayması, izobologram ve kombinasyon indeksi analizlerinin entegrasyonu. Klinik Kanser Arş. 2004; 10 :7994–8004. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-04-1087. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  33. Detre S, Jotti GS, Dowsett M. İmmünohistokimyasal yarı niceliklendirme için bir “hızlı skor” yöntemi: meme karsinomlarında östrojen reseptörü için doğrulama. J Clin Pathol. 1995; 48 :876-878. doi: 10.1136/jcp.48.9.876. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  34. Ye YT, Zhong W, Sun P, Wang D, Wang C, Hu LM, et al. Küçük hücreli dışı akciğer kanserinde Salvia miltiorrhiza Bunge'nin metanol özütü tarafından PI3K/Akt yolunun PTEN aracılı inhibisyonu yoluyla indüklenen apoptoz. J Etnofarmakol. 2017; 200 :107-116. doi: 10.1016/j.jep.2016.12.051. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  35. Sui Y, Li S, Shi P, Wu Y, Li Y, Chen W, et al. Selaginella doederleinii Hieron'dan elde edilen etil asetat özü, kaspaz bağımlı apoptoz yolu yoluyla insan akciğer kanseri hücreleri A549'un büyümesini engeller. J Etnofarmakol. 2016; 190 :261–271. doi: 10.1016/j.jep.2016.06.029. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  36. Shukla S, Fu P, Gupta S. Apigenin, prostat kanserinde apoptoz proteinlerinin inhibitörünü ve Ku70-Bax etkileşimini hedefleyerek apoptozu indükler. Apoptoz. 2014; 19 :883-894. doi: 10.1007/s10495-014-0971-6. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  37. Haanen C, Vermes I. Apoptoz ve inflamasyon. Arabulucular Inflamm. 1995; 4 :5–15. doi: 10.1155/S0962935195000020. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  38. Benzina S, Harquail J, Jean S, Beauregard AP, Colquhoun CD, Carroll M, et al. Juniperus communis'ten izole edilen deoksipodofillotoksin, meme kanseri hücrelerinde apoptozu indükler. Antikanser Ajanlar Med Chem. 2015; 15 :79-88. doi: 10.2174/1871520614666140608150448. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  39. Och M, Och A, Ciesla L, Kubrak T, Pecio L, Stochmal A, et al. Polonya'da yetiştirilen seçilmiş Juniperus türlerinde sitotoksik aktivite, podofillotoksin ve deoksipodofillotoksin içeriğinin incelenmesi. Eczacı Biol. 2015; 53 :831-837. doi: 10.3109/13880209.2014.943246. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  40. De Marino S, Cattaneo F, Festa C, Zollo F, Iaccio A, Ammendola R, et al. Juniperus communis L. kaynaklı imbrikatolik asit, CaLu-6 hücrelerinde hücre döngüsü ilerlemesini önler. Bitki Med. 2011; 77 :1822–1828. doi: 10.1055/s-0030-1271104. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
                  Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
                  Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

                  Yorum yap


                  • #10



                    Bitkisel ürünler |Bitkisel İlaçlar |Alternatif Tıp | Doğal Tedavi | Gökçek Şifa | Hastalıklarla İlgili Bilgiler
                    Youtube Kanalımızı Takip Edin | Facebok Sayfamızı Takip Edin

                    Yorum yap


                    • #11
                      ARDIÇ Kozalağı Safra artırıcı, idrar ve ödem atıcı, Prostat, Karaciğer, Akciğer ve Kolon Kanseri



                      Ardıç Süperkritik Testis ve Penis Kanseri, İdrar Söktürücü, İdrar Yolları Enfeksiyonu, Ödem Önleyici




                      Beyin Tümörü, Sinir Tümörü ve Her türlü Kansere karşı Ardıç Süperkritik

                      Konu ozgurcay tarafından (https://bitkiara.com/vb5/member/18435-ozgurcay Saat 05 June 2023, 14:35 ) değiştirilmiştir.

                      Yorum yap

                      Hazırlanıyor...
                      X