Duyuru

**igokcek** · 02 July 2012, 21:16

Galium aparin ekstraktının meme kanseri hücre dizilerinde hücre canlılığı, hücre döngüsü ve hücre ölümü üzerindeki etkileri

Yazar bağlantıları bindirme panelini açar
Harika Atmaca ^a¹ Emir Bozkurt ^a² Mustafa Cittan ^b³ Hafize Dilek Tepe ^c⁴ ^a Section of Molecular Biology, Department of Biology, Faculty of Science and Letters, Celal Bayar University, 45140 Muradiye, Manisa, Turkey ^b
Section of Analytical Chemistry, Department of Chemistry, Faculty of Science and Letters, Celal Bayar University, 45140 Muradiye, Manisa, Turkey ^c
Section of Biochemistry, Department of Chemistry, Faculty of Science and Letters, Celal Bayar University, 45140 Muradiye, Manisa, Turkey
Received 5 February 2016, Revised 4 April 2016, Accepted 5 April 2016, Available online 13 April 2016, Version of Record 22 April 2016.
Show less
Mendeley'e ekle
Paylaşmak
Anmak
https://doi.org/10.1016/j.jep.2016.04.007Get rights and content

Abstract
Ethnopharmacological relevance

Galium species have been traditionally used for its anti-cancer, antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial and cardioprotective effects in the folk medicine. Galium aparine (GA) is a typical climbing plant growing widespread in Anatolia.

Aim of the study
To investigate the potential anti-proliferative and apoptotic effect of GA methanol (MeOH) extract on MCF-7 and MDA-MB-231 human breast cancer cells and MCF-10A untransformed breast epithelial cells.

Materials and methods
First, the extract was characterized by both liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry (LC/Q-TOF/MS) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analyses. Then, cell viability and cell cycle distribution were investigated by XTT assay and PI staining by flow cytometry, respectively. Cell death was determined by Annexin V FITC/7-AAD staining.

Results
LC/Q-TOF/MS ile toplam 14 ana fitokimyasal tanımlandı ve GC-MS ile 34 uçucu bileşik belirlendi. Ekstrakt, her iki meme kanseri hücre hattında konsantrasyona ve zamana bağlı bir şekilde sitotoksikti ve 72 saatlik ekstrakt tedavisinden sonra G1 bloğu gösterdi. Bununla birlikte, MCF-10A meme epitel hücrelerine sitotoksik değildi. Akış sitometrisi analizleri, MDA-MB-231 hücrelerinde apoptozun indüklendiğini ortaya çıkardı; bununla birlikte, MCF-7 hücrelerinde nekroz indüklendi.

Çözüm
Çalışmamız, GA MeOH özütünün normal meme epitel hücrelerini bozmadan meme kanseri hücrelerine karşı potansiyel anti-kanser etkilerine sahip olabileceğini düşündürmektedir. Bu kompleks bitki kaynaklı karışım tarafından apoptotik hücre ölümünün yanı sıra apoptotik olmayan hücre ölümünün indüklenmesi, apoptoza dirençli meme kanseri hücrelerinin öldürülmesini sağlayabilir, ancak bunun biyoyararlanımını ve metabolizmasını in vivo araştırmak için daha ileri çalışmalar yapılmalıdır .

Grafik soyut
1. Download : Download high-res image (259KB)
2. Download : Download full-size image
giriiş

Bitkiler eski çağlardan beri doğal ilaç kaynağı olarak kullanılmıştır. Günümüzde ilaçların yaklaşık %25-48'i bitkilerden veya bunların sentetik türevlerinden kaynaklanmaktadır ve bitki dünyasına artan bir ilgi vardır (Tuorkey, 2015). Fitokimyasallar bitki türevleridir ve bunların 10.000'den fazlası kanser tedavisinde anti-kanser bileşikleri olarak kullanılmaktadır. Ayrıca kanser önleyici bileşiklerin etkinliğini artırabilecekleri ve toksik etkilerini azaltabilecekleri gösterilmiştir (Tuorkey, 2015; Tan ve ark., 2011).

Galium cinsi Rubiaceae familyasına aittir; dünya çapında 1000 türden oluşmakta ve Türkiye'de 101 tür ile temsil edilmektedir (Orhan ve ark., 2012, Güvenalp ve ark., 2006). Galium aparin L. (Cleavers, yerel adı: Karoon), Anadolu'da yaygın olarak yetişen ve peynir üretiminde kullanılmasından dolayı “Yoğurt otu” olarak bilinen tipik bir tırmanıcı bitkidir (Ergun ve ark., 1999). GA'nın diğer kullanım alanları ise lenf şişlikleri, yaralar, ateş, hipertansiyon, epilepsi hastalığı ve kanser tedavisidir (Orhan ve ark. 2012, Ergun ve ark. 1999, Ahmad ve Javed 2007). GA'nın rapor edilen aktif bileşenleri antrakinonlar, iridoidler, alkanlar, flavonoidler, tanenler, polifenolik asitler ve C vitaminidir (Bokhari ve diğerleri, 2013). Bir dizi in vitroÇalışmalar Galium türlerinin lösemi hücreleri, gırtlak kanseri ve baş ve boyun kanseri hücre dizileri üzerindeki anti-proliferatif etkilerini göstermiştir (Şener ve Ergun, 1988, Deliorman ve diğerleri, 2001, Yang ve diğerleri, 2009, Jian ve diğerleri., 2010). Ayrıca bazı Galium türlerinin Avrupa ve Kuzey Amerika'da geleneksel olarak kanserli ülser veya meme kanseri tedavisinde kullanıldığı bilinmektedir (Hartwell, 1971). Bununla birlikte, insan meme kanseri hücreleri üzerindeki anti-proliferatif etkileri daha önce bildirilmemiştir.

Bu çalışmada, GA MeOH özütünün MCF-7 ve MDA-MB-231 insan meme kanseri hücreleri ve MCF-10A dönüştürülmemiş meme epitel hücreleri üzerindeki potansiyel anti-proliferatif ve apoptotik etkisini araştırdık. İlk olarak, GA özütünü hem sıvı kromatografisi/dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometrisi (LC/Q-TOF/MS) hem de gaz kromatografi-kütle spektrometrisi (GC-MS) analizleri ile karakterize ettik. Hücre canlılığı ve hücre döngüsü dağılımı, sırasıyla XTT tahlili ve PI boyaması ile akış sitometrisi ile araştırıldı. Hücre ölümü, anneksin V ve 7-amino-aktinomisin D çift boyama ile belirlendi.

Bölüm snippet'leri
hücre hatları
İnsan MCF-10A dönüştürülmemiş meme epitel hücreleri, Birleşik Krallık Sağlık Koruma Ajansından elde edildi. İnsan meme kanseri hücreleri (MCF-7 ve MDA-MB-231), Interlab Cell Line Collection'dan (Genova, İtalya) satın alındı. MCF-10A hücreleri, DMEM F12'de kültürlendi ve insan meme kanseri hücreleri, 75 cm2 polistiren şişelerde ⁽ Corning Life Sciences, Tewksbury, MA) RPMI 1640'ta kültürlendi . Her iki hücre kültürü ortamı, %10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu, % 1 l - glutamin ve %1 ile desteklenmiştir.

LC/Q-TOF/MS analizi ile GA ekstraktının fitokimyasal karakterizasyonu

Biyolojik olarak aktif bileşikleri belirlemek için GA MeOH ekstraktının kalitatif fitokimyasal analizi yapıldı. Mevcut kromatografik ve MS koşulları altında toplam 14 fitokimyasal; karminomisin, piridoksin, normetanefrin, spektinomisin, kumarin, klorojenik asit, monotropein, sinamik asit, pantotenik asit, eskületin, kersitrin, p-Kumarik asit, kersetin ve luteolin tespit edilmiştir. Tablo 1, en bol bulunanların adlarını, moleküler formüllerini ve alıkonma sürelerini göstermektedir.

Tartışma

Çok sayıda bitki kaynaklı fitokimyasal bileşik ve bunların sentetik türevleri kanser tedavisinde kullanılmaktadır ve birçoğunun kanser tedavisinde potansiyel kullanımları araştırılmaktadır. Literatürde, bazı çalışmalar, bir bitkinin bütün ekstraktının, biyoaktif bileşenlerin adsorpsiyonu veya metabolizması yoluyla izole edilen bileşiklerden daha faydalı olabileceğini iddia etmektedir. Ayrıca, ekstraktlardaki çeşitli biyoaktif bileşikler, farklı indükleyerek sinerjistik etkilere sahip olabilir.

Sonuçlar
Galium türleri, kanser önleyici, antioksidan, iltihap önleyici, antimikrobiyal ve kalp koruyucu etkileri nedeniyle halk hekimliğinde çağlardan beri kullanılmaktadır. Birkaç in vitro çalışma, G. aparinin antioksidan potansiyelini bildirmiştir (Lindsey ve diğerleri, 2002, Bokhari ve diğerleri, 2013), ancak bildiğimiz kadarıyla, GA MeOH özütünün insan meme kanseri hücreleri üzerindeki etkisi araştırılmamıştır. önceki. Bu in vitro çalışma, G. aparine MeOH özütünün potansiyel anti-kanser etkilerine sahip olabileceğini düşündürmektedir.

Çıkar çatışması
Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını beyan eder.

teşekkür
Bitki materyalini temin eden Naturin Natural Products Ltd.'ye (İzmir, Türkiye) teşekkür ederiz. Mustafa Cittan burs için Türkiye Bilimsel ve Teknolojik Araştırma Kurumu'na ( BİDEB 2211-A ) teşekkür eder .

Referanslar (21)
MJ Tuorkey Fitokimyasallarla kanser tedavisi: şimdiki ve gelecekteki bakış açıları Biyomedikal. Çevre. bilim (2015)
N. Orhan ve ark. Galium spurium'un nöroprotektif ve antikonvülsan aktivitelerine yönelik UPLC-TOF-MS analizi J. Etnofarmakol. (2012)
D. Hanahan ve ark. Kanserin ayırt edici özellikleri Hücre (2000)
Z. Güvenalp et al. Türkiye'de yetişen Galium humifusum üzerine fitokimyasal araştırmalar Biyokimya Sist. ekol. (2006)
J. Bokhari ve ark. Galium aparinin çeşitli antioksidan aktivitelerinin değerlendirilmesi Spektrokim. Acta A: Mol. biyomol. spektrosk. 2013)
SS Ahmed et al. Ayubia Ulusal Parkı'nda yeterince kullanılmayan bitki türlerinin ekonomik değerini araştırmak Pak. J. Bot. (2007)
Z. Amirghofran ve ark. Çeşitli İran yerli şifalı bitkilerinin insan tümör hücre hatları üzerindeki antikanser etkileri neoplazma (2006)
KHC Beşer et al. Galium Aparine L uçucu yağlarının bileşimi . ve Galium odoratum ( L. ) Scop. Türkiye'den J. Essent. Petrol Araş. (2004)
D. Deliorman ve ark. Galium aparine kaynaklı iridoidler Eczacılık Biol. (2001)
F. Ergün et al. Galium türlerinin antimikrobiyal aktiviteleri Guede-J. Fak. Eczacılık Gazi (1999)
Bu makalenin tam metin versiyonunda daha fazla referans bulunmaktadır. (11) tarafından alıntılandı
- Yakın zamanda yapılan araştırmalar, British Columbia, Kanada'da evcil hayvan hastalıkları ve geçici bakıma alınan vahşi hayvanlar için kullanılan şifalı bitkileri doğruluyor mu?
  
  2019, Etnofarmakoloji Dergisi
  Özeti göster
- Phoenix dactylifera L. tohum ekstraktının insan kanser hücrelerinde antikanser potansiyeli ve insan meme kanseri MDA-MB-231 hücrelerinde kaspaz-3 bağımlı yol aracılığıyla aracılık edilen pro-apoptotik etkiler: in vitro ve in silico araştırması
  
  2022, BMC Tamamlayıcı Tıp ve Tedaviler
- Galium verum'un hava kısımlarının metanolik ekstraktının HT29 ve AGO hücre hatları üzerindeki etkileri
  
  2022, Çekirdek (Hindistan)
- GALİUM APARİNİN ANTİOKSİDAN, ANTİMİKROBİYAL VE ANTİPROLİFERATİF AKTİVİTELERİ
  
  2021, Ankara Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Dergisi
- Anadolu şifalı bitkilerinden izole edilen fitokimyasalların antiproliferatif, genotoksik ve sitotoksik etkileri
  
  2020, Hücresel ve Moleküler Biyoloji
- Govaniadin Hücre Kültüründe Sitotoksisite ve Geçirgenliğin Değerlendirilmesi
  
  2020, Revista Brasileira de Farmacognosia
Scopus ile ilgili tüm alıntı makaleleri görüntüleyinÖnerilen makaleler (6)
- Araştırma makalesi Cynanchum auriculatum'un köklerinden iştahı bastıran hamile glikozitler
  
  Fitokimya, Cilt 93, 2013, s. 144-153
  Özeti göster
- Araştırma makalesi Hücre içi protein glikasyonunu izlemek için karboksifloresein diasetat süksinimidil ester kullanma
  
  Analitik Biyokimya, Cilt 478, 2015, sayfa 73-81
  Özeti göster
- Araştırma makalesi Farklı periodontal hastalıklarda dişeti oluğu sıvısı interlökin-36β (-1F8), interlökin-36γ (-1F9) ve interlökin-33 (-1F11) seviyeleri
  
  Archives of Oral Biology, Cilt 60, Sayı 1, 2015, s. 77-83
  Özeti göster
- Araştırma makalesi Orta Toros Dağları'nın batı kesiminde tıbbi bitkilerin etnobotanik araştırması: Aladağlar (Niğde – Türkiye)
  
  Etnofarmakoloji Dergisi, Cilt 166, 2015, s. 53-65
  Özeti göster
- Araştırma makalesi Cezayir Galium brunneum'un hava kısımlarının kimyasal bileşenleri : Yeni hidroperoksi sterol glukosil türevlerinin izolasyonu
  
  Fitokimya Mektupları, Cilt 38, 2020, s. 39-45
  Özeti göster
- Araştırma makalesi Tayvan'da felçli hastalarda geleneksel Çin tıbbı kullanımının özellikleri: Ülke çapında nüfusa dayalı bir çalışma
  
  Etnofarmakoloji Dergisi, Cilt 186, 2016, s. 311-321

Galium aparinin çeşitli antioksidan aktivitelerinin değerlendirilmesi

Yazar bağlantıları bindirme panelini açarJasia Buhari¹ Muhammed R. Khan¹ Maria Şabir¹ Umbreen Raşit¹ Şumaila Ocak¹ Jawaid A. Zai¹
Daha fazla göster
Mendeley'e ekle
Paylaşmak
Anmak
https://doi.org/10.1016/j.saa.2012.09.056 Hakları ve içeriği alın Soyut

Metanol özü ve n-heksan, etil asetat, bütanol ve Galium aparine L'nin sulu fraksiyonu . (Rubiacea) antioksidan kapasiteleri (DPPH, süperoksit radikali, fosfomolibdat tahlili) açısından in vitro olarak değerlendirildi; ^{indirgeme gücü (ABTS, hidroksil, hidrojen peroksit, Fe 3+} 'i Fe'ye indirgemek için²⁺iyonları) ve toplam flavonoid ve fenolik içerikleri tahmin etmek. Tüm serbest radikal üreten tahlil modelleri, diferansiyel pozitif süpürücü aktiviteyi, ancak tüm fraksiyonlar için hatırı sayılır büyüklükte gösterdi. Sonuçlar, sulu fraksiyonun DPPH, ABTS, hidroksil, hidrojen peroksit ve süperoksit radikallerini güçlü bir şekilde temizlediğini gösterdi. Sırasıyla toplam fenolik içerikli süperoksit radikali DPPH IC50 değerleri ve toplam flavonoid içerikli fosfomolibdat tahlili _arasında önemli ölçüde yüksek bir korelasyon katsayısı vardı . Bu sonuçlar, sulu fraksiyonun oksidatif stres hasarlarında iyi bir antioksidan terapötik kaynağı olabileceğini düşündürmektedir. Grafik soyut

İndir : Tam boyutlu resmi indir

Öne Çıkanlar

► Fenolik ve flavonoid, G. aparin fraksiyonlarının önemli bileşenleridir . ► Sulu kısım, serbest radikalleri temizlemek için güçlü antioksidanlar oluşturdu. _{► DPPH'nin} IC50'si, süperoksit ile fenolik arasında önemli bir korelasyon vardı .

anahtar kelimeler

galyum aparin antioksidan DPPH ABTS SüperoksitFenolikler

Kısaltmalar
TPC toplam fenolik içerik
TFC toplam flavonoid içeriği
DPPH 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil
H2O2 _{_} _ _{_}hidrojen peroksit
ABTS 2,2-azino-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit
not nitro mavi tetrazolyum
TCA triklorasetik asit
TBA tiyobarbitürik asit
PMS fenazin metosülfat
NaNO2 _{_}sodyum nitrat
ROS Reaktif oksijen türleri (23) tarafından alıntılandı

Dehidrasyon işlemi Galium aparine L'nin fenolik profilini, antioksidan ve antimikrobiyal özelliklerini etkiler.

2018, Sanayi Bitkileri ve Ürünleri
Alıntı Alıntı:
Farklı G. aparine ekstraktları için elde edilen sonuçların trolox (pozitif kontrol) ile karşılaştırılması, dondurularak kurutulmuş numunenin hidrometanol ekstraktı, daha düşük bir EC50 değeri ortaya koyan tek şeydi (ekstre için 13,5 ve 23 μg/mL ve sırasıyla pozitif kontrol), TBARS inhibisyon deneyinde. Birkaç G. aparin özü fraksiyonu ile gerçekleştirilen bir çalışmada, butanol, metanol ve sulu fraksiyonlar, bu çalışmada elde edilenlerden on kat daha düşük konsantrasyonları temsil eden sırasıyla 61.7, 75 ve 58.3 μg/mL'de DPPH süpürme aktivitesini ortaya çıkardı. (Bokhari ve diğerleri, 2013). Öte yandan Abbasi ve ark. (2015), G. aparine'nin su ve aseton ekstraktları, 100 mg/mL dw konsantrasyonlarında sırasıyla yaklaşık %69 ve %55 DPPH süpürme aktivitesi gösterdi, ancak bir kez daha,

Özeti göster
Parrotiopsis jacquemontiana (Decne) Rehder'in deneysel sıçanlarda karbon tetraklorür kaynaklı hepatotoksisite üzerindeki koruyucu potansiyeli

2017, Biyotıp ve Farmakoterapi
Alıntı Alıntı:
TPC ve TFC'nin fosfomolibdat ve indirgeme gücü deneyi ile, indirgeme gücü deneyinde TPC değerleri ile gösterilen önem dışında hiçbir korelasyonu gözlenmedi. Flavonoid içeriği ile olası antioksidan kapasite arasındaki bu zayıf korelasyon, hidroksil grup pozisyonuna ve stereokimyaya atfedilebilir, dolayısıyla proton donör kapasitesini bozarak serbest radikal süpürme aktivitelerini dolaylı olarak etkiler [38]. Ancak toplu olarak, tüm P. jacquemontiana ekstraktlarının olası antioksidan aktivitesinin, bitki ekstraktlarının antioksidan potansiyelinin değerlendirilmesi için önemli yöntemlerden biri olarak TPC ve TFC'lerini ölçmek olduğu için karşılık gelen TPC ve TFC değerlerinden kaynaklandığı varsayılabilir.

Özeti göster
Undaria pinnatifida (Harvey) Suringar kaynaklı fucoidan'ın anti-artritik, antioksidan etkinliğinin in vitro ve in vivo değerlendirmesi

2017, Uluslararası Biyolojik Makromoleküller Dergisi
Özeti göster
Galium aparin ekstraktının meme kanseri hücre dizilerinde hücre canlılığı, hücre döngüsü ve hücre ölümü üzerindeki etkileri

2016, Etnofarmakoloji Dergisi
Alıntı Alıntı:
Galium türleri, kanser önleyici, antioksidan, iltihap önleyici, antimikrobiyal ve kalp koruyucu etkileri nedeniyle halk hekimliğinde çağlardan beri kullanılmaktadır. Birkaç in vitro çalışma, G. aparinin antioksidan potansiyelini bildirmiştir (Lindsey ve diğerleri, 2002; Bokhari ve diğerleri, 2013), ancak bildiğimiz kadarıyla, GA MeOH özütünün insan meme kanseri hücreleri üzerindeki etkisi araştırılmamıştır. önceki. Bu in vitro çalışma, G. aparine MeOH özütünün, normal meme epitel hücrelerini bozmadan meme kanseri hücrelerine karşı potansiyel anti-kanser etkilerine sahip olabileceğini düşündürmektedir.

Özeti göster
Thymus quinquecostatus Celak'ın antioksidan ve antidiyabetik aktivitesi

2014, Sanayi Bitkileri ve Ürünleri
Alıntı Alıntı:
İndirgeyici güç tahlili, antioksidan aktivitelerini ve kapasitelerini ölçmek için sağlam ve kullanışlı bir yöntemdir (Moein ve diğerleri, 2008). Bu tahlilde, Fe2+ ve H2O2'nin reaksiyonu ile hidroksil radikalleri üretilir ve antioksidan ajanlar Fe2+ şelatlayarak hidroksil radikallerinin oluşumunu azaltır (Bokhari ve diğerleri, 2013). Bu tahlilin sonuçları, EtOAc fraksiyonunun indirgeme gücünün diğer fraksiyonlarınkinden daha yüksek olduğunu gösterdi (Şekil 1B).

**igokcek** · 02 July 2012, 21:16

Galium verum sulu özü, baş ve boyun kanseri hücre dizilerinin hareketliliğini güçlü bir şekilde engeller ve mukozal keratinositleri toksik DNA hasarına karşı korur. Yazarlar: Marianne Schmidt Christine Polednik Jeanette Roller Rudolf Hagen Bağlantıları Görüntüle Çevrimiçi yayınlanma tarihi: 9 Temmuz 2014 https://doi.org/10.3892/or.2014.3316

Soyut Lady's Bedstraw olarak da bilinen Galium verum, Avrupa ve Asya'ya özgü otsu bir bitkidir ve geleneksel tıpta çoğu durumda bir kaynatma olarak uygulanan bir antikanser ilacı olarak kullanılmıştır. Bir Galium verum kaynatma işleminin baş ve boyun kanseri hücre hatları HLaC78 ve FADU üzerindeki etkisi analiz edildi ve her iki hücre hattında da yüksek dozlarda toksik olduğu kanıtlandı. Sitotoksisitenin, karsinom hücre hatlarında p-glikoprotein (MDR-1) ekspresyonundan etkilendiği görülmüştür. Mukozal keratinositler, MDR-1 ekspresyonu olmamasına rağmen, yüksek Galium konsantrasyonlarına karşı sadece düşük hassasiyet gösterdi. Matrigel kaplı yüzeyler üzerinde sferoid tabanlı bir istila analizi ile gösterildiği gibi, galyum ekstraktının öldürücü olmayan dozları, güçlü motilite inhibitörleri olarak işlev gördü. İstilanın engellenmesi, istilacı HLaC78 hücre hattında önemli ölçüde daha belirgindi. Matris metalloproteinazlar MMP-2 ve MMP-9 ve bunların inhibitörleri TIMP-1/-2'nin mRNA ekspresyon analizi, FADU hücrelerinde 8 saatlik bir Galium sunumundan sonra önemli TIMP-1 yukarı regülasyonunu ortaya çıkardı. Ancak jelatinolitik aktivite HLaC78'de Galium ekstraktından etkilenmedi, FADU hücrelerinde MMP-2/-9 aktivitesi Galium ekstraktı ile inkübasyondan sonra biraz arttı. Birincil mukozal keratinositlerde Galium kaynatma, DNA'yı sigara dumanındaki en DNA toksik ajanlarından biri olan benz[a]pirene karşı korumuştur. Sonuç olarak Galium ekstraktı, baş ve boyun kanserinde koruyucu ve/veya eşlik eden terapötik bir yaklaşım olarak yararlı olabilir. İlgili Makaleler PC-Spes'in kemosensitif ve kemorezistan baş ve boyun kanseri hücreleri ve primer mukozal keratinositler üzerindeki etkileri NSC‑631570'in (Ukrayna) baş ve boyun kanseri hücrelerinde antikanser etkileri: Büyüme, istila, anjiyogenez ve gen ekspresyonunun in vitro analizi Prostat hastalığının tedavisinde kullanılan bitki ekstraktlarının baş ve boyun karsinomu hücre dizileri ve malign olmayan primer mukozal hücreler üzerindeki sitotoksisitesi Chelidonine'in baş ve boyun kanseri hücre dizilerinde büyüme, istila, anjiyogenez ve gen ekspresyonu üzerindeki etkisi Yara sıvısı, STAT3 sinyal yolunun in vitro aktivasyonu yoluyla kanser hücresi çoğalmasını artırır

**igokcek** · 03 July 2012, 07:30

Yapışak otu, Galium aparin ekstresinin meme kanseri hücre hatlarında hücre canlılığı, hücre döngüsü ve hücre ölümü üzerindeki etkileri

Yazar bağlantıları yer paylaşımı panelini açarHarika Atmaca ^a¹ Emir Bozkurt ^a² Mustafa Cittan ^b³ Hafize Dilek Tepe ^c⁴
https://doi.org/10.1016/j.jep.2016.04.007 Hakları ve içeriği alın Section of Molecular Biology, Department of Biology, Faculty of Science and Letters, Celal Bayar University, 45140 Muradiye, Manisa, Turkey
Section of Analytical Chemistry, Department of Chemistry, Faculty of Science and Letters, Celal Bayar University, 45140 Muradiye, Manisa, Turkey
Section of Biochemistry, Department of Chemistry, Faculty of Science and Letters, Celal Bayar University, 45140 Muradiye, Manisa, Turkey Öz

Etnofarmakolojik alaka
Galium türleri geleneksel olarak halk tıbbında anti-kanser, antioksidan, antiinflamatuvar, antimikrobiyal ve kardiyoprotektif etkilerinden dolayı kullanılmıştır. Galium aparine (GA), Anadolu'da yaygın olarak büyüyen tipik bir tırmanma bitkisidir.

Çalışmanın amacı
GA metanol (MeOH) ekstresinin MCF-7 ve MDA-MB-231 insan meme kanseri hücreleri ve MCF-10A dönüştürülmemiş göğüs epitel hücreleri üzerindeki potansiyel anti-proliferatif ve apoptotik etkisini araştırmak.

Malzemeler ve yöntemler
İlk olarak, ekstrakt hem sıvı kromatografi / dört kutuplu uçuş zamanı kütle spektrometrisi (LC / Q-TOF / MS) hem de gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS) analizleri ile karakterize edildi. Daha sonra, hücre canlılığı ve hücre döngüsü dağılımı sırasıyla XTT testi ve PI boyama ile akış sitometrisi ile araştırıldı. Hücre ölümü, Annexin V FITC / 7-AAD boyaması ile belirlendi.

Sonuçlar
LC / Q-TOF / MS ile toplam 14 ana fitokimyasal tanımlandı ve GC-MS ile 34 uçucu bileşik belirlendi. Ekstrakt, konsantrasyon ve zamana bağlı olarak her iki göğüs kanseri hücre dizisinde sitotoksikti ve 72 saatlik özüt muamelesinden sonra G1 bloğu gösterdi . Bununla birlikte, MCF-10A meme epitel hücreleri için sitotoksik değildi. Akış sitometrisi analizleri, apoptozun MDA-MB-231 hücrelerinde indüklendiğini ortaya çıkarmıştır; ancak, MCF-7 hücrelerinde nekroz indüklendi.

Sonuç
Çalışmamız, GA MeOH özütünün, normal meme epitel hücrelerine zarar vermeden meme kanseri hücrelerine karşı potansiyel anti-kanser etkileri olabileceğini düşündürmektedir . Bu kompleks bitki kaynaklı karışım ile apoptotik hücre ölümünün yanı sıra apoptotik olmayan hücre ölümünü indükleme yeteneği, apoptoza dirençli göğüs kanseri hücrelerinin öldürülmesini sağlayabilir, ancak in vivo biyoyararlanımını ve metabolizmasını araştırmak için daha ileri çalışmalar yapılmalıdır . Grafiksel özet

Anahtar kelimeler

Galium aparine
LC / Q-TOF / MS
GC-MS
Sitotoksisite
Apoptoz
Nekroz
Meme kanseri hücreleri ¹ Çalışmayı tasarladı, istatistiksel analiz yaptı ve yazıyı yazdı. ² XTT analizi yaptı ve akış sitometrisi ile hücre döngüsü ve hücre ölümü analizi yaptı. ³ GC-MS analizi ve uçucu bileşiklerin karşılaştırmalı analizi gerçekleştirildi. ⁴ GA ekstresinin LC / Q-TOF / MS analizi ile fitokimyasal karakterizasyonu gerçekleştirildi.
Tam metni görüntüle

**igokcek** · 03 July 2012, 07:30

Galium aparine L. protects against acetaminophen-induced hepatotoxicity in rats

Author links open overlay panelBilal Sahin ^a, Sebahattin Karabulut ^b, Ahmet Kemal Filiz ^a, Mustafa Özkaraca ^c, Arzu Gezer ^d, Hüseyin Aşkın Akpulat ^e, Hilmi Ataseven ^f ^a Department of Medical Physiology, Faculty of Medicine, Sivas Cumhuriyet University, Sivas, Turkey ^b Department of Medical Services and Techniques, Vocational School of Health Services, Sivas Cumhuriyet University, Sivas, Turkey ^c Department of Veterinary Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Sivas Cumhuriyet University, Sivas, Turkey ^d Department of Health Care Services, Vocational School of Health Services, Atatürk University, Erzurum, Turkey ^e Department of Biology, Faculty of Education, Cumhuriyet University, Sivas, Turkey ^f Department of Internal Medicine, Discipline of Gastroenterology, Faculty of Medicine, Sivas Cumhuriyet University, Sivas, Turkey
Received 22 June 2022, Revised 8 August 2022, Accepted 16 August 2022, Available online 24 August 2022, Version of Record 27 August 2022.

https://doi.org/10.1016/j.cbi.2022.110119 Get rights and content

giriiş

Asetaminofen (N-asetil-para-aminofenol (APAP)) ağrı ve ateşi tedavi etmek için en yaygın olarak kullanılan reçetesiz ilaçlardan biridir. Bununla birlikte, APAP toksisitesi ilaca bağlı karaciğer hasarının ve akut karaciğer yetmezliğinin yaygın nedenlerinden biridir ve bu da onu önemli bir halk sağlığı sorunu haline getirir [1]. Terapötik dozlarda güvenli kabul edilmesine rağmen, APAP kasıtlı veya kazara doz aşımı durumlarında ciddi hepatik nekroza yol açabilir [2].

Terapötik dozlarda, APAP öncelikle karaciğerde glukuronidasyon ve sülfasyon süreçleri yoluyla toksik olmayan metabolitlere metabolize edilirken, kalıntı küçük bir fraksiyon sitokrom P450 (CYP450) sistemi tarafından kimyasal olarak reaktif bir metabolit, n-asetil-pbenzokinonimin oluşturmak üzere metabolize edilir. (NAPQI) [3]. NAPQI daha sonra hücre içi doğal bir antioksidan olan glutatyon (GSH) ile reaksiyona girerek atılacak toksik olmayan konjugatlar oluşturur [4]. Ancak APAP yüksek dozlarda alındığında hepatik GSH düzeylerini tüketen toksik NAPQI üretiminin artmasına ve bunun sonucunda karaciğerde nekrotik hücre ölümüne neden olur [5]. APAP ile indüklenen hepatik hasarın, karaciğerde oksidatif stres, DNA fragmantasyonu ve mitokondriyal disfonksiyon gibi bazı patolojik hücresel değişikliklerle karakterize olduğu ileri sürülmüştür [6]. Dahası, hepatoselüler disfonksiyon, karaciğerdeki üre döngüsü yoluyla amonyak klirensini bozarak, hepatik ensefalopati (HE) olarak bilinen bir hastalık olan beyinde toksik seviyelerde birikmesine yol açar [7]. Daha önceki çalışmalar akut hepatik hasarın neden olduğu HE'nin hem sıçanlarda hem de insanlarda [8], sıçanlarda [9] ve farelerde [10] APAP'ın aşırı dozunu takiben ortaya çıktığını göstermiştir. HE, psikiyatrik, bilişsel ve motor bozukluklarla karakterizedir ve patogenezinde amonyak, inflamasyon ve oksidatif stres arasındaki sinerjistik ilişki iyi bilinmektedir [[11], [12], [13]]. Daha da önemlisi, HE, sık hastaneye yatış nedeniyle yüksek bir sağlık yükü ile ilişkilidir ve yaşam kalitesinin bozulmasına, morbiditeye ve mortaliteye önemli ölçüde katkıda bulunur [14]. hepatik ensefalopati (HE) olarak bilinen bir hastalık olan beyinde toksik seviyelerde birikmesine yol açar [7]. Daha önceki çalışmalar akut hepatik hasarın neden olduğu HE'nin hem sıçanlarda hem de insanlarda [8], sıçanlarda [9] ve farelerde [10] APAP'ın aşırı dozunu takiben ortaya çıktığını göstermiştir. HE, psikiyatrik, bilişsel ve motor bozukluklarla karakterizedir ve patogenezinde amonyak, inflamasyon ve oksidatif stres arasındaki sinerjistik ilişki iyi bilinmektedir [[11], [12], [13]]. Daha da önemlisi, HE, sık hastaneye yatış nedeniyle yüksek bir sağlık yükü ile ilişkilidir ve yaşam kalitesinin bozulmasına, morbiditeye ve mortaliteye önemli ölçüde katkıda bulunur [14]. hepatik ensefalopati (HE) olarak bilinen bir hastalık olan beyinde toksik seviyelerde birikmesine yol açar [7]. Daha önceki çalışmalar akut hepatik hasarın neden olduğu HE'nin hem sıçanlarda hem de insanlarda [8], sıçanlarda [9] ve farelerde [10] APAP'ın aşırı dozunu takiben ortaya çıktığını göstermiştir. HE, psikiyatrik, bilişsel ve motor bozukluklarla karakterizedir ve patogenezinde amonyak, inflamasyon ve oksidatif stres arasındaki sinerjistik ilişki iyi bilinmektedir [[11], [12], [13]]. Daha da önemlisi, HE, sık hastaneye yatış nedeniyle yüksek bir sağlık yükü ile ilişkilidir ve yaşam kalitesinin bozulmasına, morbiditeye ve mortaliteye önemli ölçüde katkıda bulunur [14]. Daha önceki çalışmalar akut hepatik hasarın neden olduğu HE'nin hem sıçanlarda hem de insanlarda [8], sıçanlarda [9] ve farelerde [10] APAP'ın aşırı dozunu takiben ortaya çıktığını göstermiştir. HE, psikiyatrik, bilişsel ve motor bozukluklarla karakterizedir ve patogenezinde amonyak, inflamasyon ve oksidatif stres arasındaki sinerjistik ilişki iyi bilinmektedir [[11], [12], [13]]. Daha da önemlisi, HE, sık hastaneye yatış nedeniyle yüksek bir sağlık yükü ile ilişkilidir ve yaşam kalitesinin bozulmasına, morbiditeye ve mortaliteye önemli ölçüde katkıda bulunur [14]. Daha önceki çalışmalar akut hepatik hasarın neden olduğu HE'nin hem sıçanlarda hem de insanlarda [8], sıçanlarda [9] ve farelerde [10] APAP'ın aşırı dozunu takiben ortaya çıktığını göstermiştir. HE, psikiyatrik, bilişsel ve motor bozukluklarla karakterizedir ve patogenezinde amonyak, inflamasyon ve oksidatif stres arasındaki sinerjistik ilişki iyi bilinmektedir [[11], [12], [13]]. Daha da önemlisi, HE, sık hastaneye yatış nedeniyle yüksek bir sağlık yükü ile ilişkilidir ve yaşam kalitesinin bozulmasına, morbiditeye ve mortaliteye önemli ölçüde katkıda bulunur [14].

galyum aparinL. (GA), Rubiaceae familyasının tek yıllık bir bitkisidir. Galium cinsi Türkiye'de yaygın olarak 101 türle temsil edilmektedir [15]. Galium türleri Anadolu'da geleneksel olarak peynir yapımında sütü pıhtılaştırmak için kullanıldığı için “Yoğurt otu” olarak bilinir. GA aynı zamanda halk tıbbında lenf şişmesi, ateş, kanser, hipertansiyon, gut, epilepsi ve yara iyileşmesini tedavi etmek için kullanılır [16,17]. Ayrıca bazı galyum türlerinin hepatit ve sarılık tedavisinde kullanıldığı bildirilmiştir [[18], [19], [20]]. GA'nın sarılık tedavisinde yaygın olarak kullanılması dikkat çekicidir [21,22]. Khan ve ark. GA, Berberis lycium ve Pistacia integerrima karışımının karbon tetraklorür ile tedavi edilen sıçanlarda hepatoprotektif etkilere sahip olduğunu bildirmiştir [23]. Fitokimyasal araştırmalar, GA'nın biyoaktif bileşenlerinin tanenler, polifenolik asitler, alkanlar, iridoidler, antrakinon, flavonoidler ve C vitamini [16]. Önceki in vitro ve in vivo çalışmalar, farklı GA ekstraktlarının antimikrobiyal, antioksidan, immünomodülatör ve antikanser etkilere sahip olduğunu ortaya koydu [16,17,24,25]. GA'da bulunan doğal antioksidan bileşiklerin radikal süpürücü ve immünomodülatör etkilerine ilişkin yukarıda yer alan raporlara dayanarak, bunun önemli hepatoprotektif aktiviteye katkıda bulunabileceğini öne sürmek mantıklıdır. Bu nedenle, bu çalışma APAP kaynaklı HE sıçan modelinde GA'nın hepatoprotektif potansiyelini araştırmayı amaçladı. GA'da bulunan doğal antioksidan bileşiklerin radikal süpürücü ve immünomodülatör etkilerine ilişkin yukarıda yer alan raporlara dayanarak, bunun önemli hepatoprotektif aktiviteye katkıda bulunabileceğini öne sürmek mantıklıdır. Bu nedenle, bu çalışma APAP kaynaklı HE sıçan modelinde GA'nın hepatoprotektif potansiyelini araştırmayı amaçladı. GA'da bulunan doğal antioksidan bileşiklerin radikal süpürücü ve immünomodülatör etkilerine ilişkin yukarıda yer alan raporlara dayanarak, bunun önemli hepatoprotektif aktiviteye katkıda bulunabileceğini öne sürmek mantıklıdır. Bu nedenle, bu çalışma APAP kaynaklı HE sıçan modelinde GA'nın hepatoprotektif potansiyelini araştırmayı amaçladı. Bölüm snippet'leri

Bitki materyali
Çiçeklenme aşamasındaki Galium aparine L. bitkileri, 06 Haziran 2019, Ezine ilçesi, Yapıldac köyü yakınlarındaki Yapıldac köyünden toplanmıştır, (50–100 m), Çanakkale, Türkiye. Bitki materyallerinin taksonomik tanımlaması, Sivas Cumhuriyet Üniversitesi Biyoloji Bölümü'nden kıdemli bitki taksonomisti H. Aşkın Akpulat tarafından doğrulanmıştır. Eşsiz yapısı nedeniyle, bu türün zarar görmemesi için araştırmamızı dikkatli bir koleksiyonla ve bu nedenle sınırlı malzeme kullanarak yürüttük.

bu GA ekstraktının LC/Q-TOF/MS tahlili ile fitokimyasal tanımlaması
Biyolojik olarak aktif kompleksler, GA MEOH ekstraktlarının kalitatif fitokimyasal tahlili yapılarak belirlendi. Mevcut kromatografik/MS koşulları altında toplam 14 fitokimyasal; Kinik asit, Sitramalik asit, 1-O-Galloil-beta- d -glikoz, 5,7-Dihidroksi-4-Metilkumarin, Monotropein, Klorojenik asit, Quercetin türevi, p-kumaroil kinik asit, Rutin, Luteolin, Dimetilkafeik asit ve Apigenin belirlendi (Tablo 2).

Sıçanlarda APAP kaynaklı HE'de GA ekstraktının serum karaciğer fonksiyonları üzerindeki etkisi
Tahmin etmek için serum AST, ALT ve BIL seviyeleri ölçüldü.

Tartışma
Bu çalışma, iyi kurulmuş bir farmakolojik olarak indüklenen hepatotoksisite modeli olarak APAP ile indüklenen HE sıçan modelini kullanarak GA'nın potansiyel yararlı etkisini araştırmayı amaçladı. Mevcut çalışmanın bulguları, GA ön tedavisinin sıçanlarda karaciğer enzimlerinin serum seviyelerini ve karaciğer histoloji değişikliklerini iyileştirerek APAP kaynaklı hepatotoksisite üzerinde koruyucu etkiler ürettiğini ortaya koydu. Bununla birlikte, GA ön işleminin APAP tarafından indüklenen bozulmuş davranışsal parametreler üzerindeki terapötik etkisi kalmıştır.

Yazar beyanı
Bilal Şahin: Kavramsallaştırma, Metodoloji. Sebahattin Karabulut: Veri düzenleme, Yazma-Özgün taslak hazırlama. Ahmet Kemal Filiz: Soruşturma. Mustafa Özkaraca: İnceleme ve Düzenleme. Arzu Gezer: Soruşturma. Hüseyin Aşkın Akpulat: Yazma-Değerlendirme ve Düzenleme. Hilmi Ataseven: Denetim.

Rekabet eden menfaat beyanı
Yazarlar, bu makalede bildirilen çalışmayı etkiliyor gibi görünebilecek bilinen hiçbir rakip finansal çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını beyan eder.

teşekkürler
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi Tıp Fakültesi, CUTFAM Araştırma Merkezi, Sivas, Türkiye ve CÜTAM, Sivas, Türkiye'ye bu çalışmanın yapılması için gerekli imkanları sağladıkları için teşekkür ederiz.

Referanslar (49)
M. Méndez ve ark. Hepatik ensefalopatinin iki deneysel modelinde ilişkisel öğrenme eksikliği Davranış Beyin Res. (2009)
PH Pan ve ark. Sıçanlarda biliyer obstrüksiyonun neden olduğu karaciğer hasarı üzerine rutinin koruyucu etkileri Serbest Radikal. Biol. Med. (2014)
V. Valdiglesias ve ark. İnsan popülasyonu çalışmalarında DNA çift sarmal kırılmalarının ve genomik kararsızlığın bir belirteci olarak γH2AX Mutat. Res. Rahip Mutat. Res. (2013)
MM Ommati ve ark. N-asetilsistein tedavisi, karaciğer yetmezliği ile ilişkili lokomotor aktivite bozukluğunu köreltir İlaçBeslenme (2017)
MT İslam ve ark. Nerol'ün Wistar albino farelerinde parasetamol kaynaklı karaciğer hasarı üzerindeki etkileri Biyomed. Eczacı. (2021)
J. Özer ve ark. Hepatotoksisitenin serum biyobelirteçlerinin mevcut durumu Toksikoloji (2008)
G. Üzüm ve ark. Atorvastatinin pentilentetrazol ile tutuşturulmuş sıçanlarda hafıza eksikliği ve nöbet duyarlılığı üzerindeki etkileri Epilepsi davranışı. (2010)
A. Küçük ve ark. Yaş ve kaygının öğrenme ve hafıza üzerindeki etkileri Davranış Beyin Res. (2008)
J. Bokhari ve ark. Galium aparinin çeşitli antioksidan aktivitelerinin değerlendirilmesi Spektrokim. Acta Part A Mol. Biyomol. Spectrosc. (2013)
H. Atmaca ve ark. Tepe, Galium aparin ekstraktının meme kanseri hücre hatlarında hücre canlılığı, hücre döngüsü ve hücre ölümü üzerine etkileri J. Ethnopharmacol. (2016)

**igokcek** · 03 July 2012, 07:32

ANTIOXIDANT, ANTIMICROBIAL AND ANTIPROLIFERATIVE ACTIVITIES OF GALIUM APARINE
GALIUM APARINE’NİN ANTİOKSİDAN, ANTİMİKROBİYAL VE ANTİPROLİFERATİF AKTİVİTELERİ

Nuh KORKMAZ1,* , Alpaslan DAYANGAÇ2 , Mustafa SEVİNDİK3 1Osmaniye Korkut Ata University, Science and Literature Faculty, Department of Biology, 80000, Osmaniye, Turkey 2 Osmaniye Korkut Ata University, Faculty of Health Sciences Department of Nutrition and Dietics, 80000, Osmaniye, Turkey 3Osmaniye Korkut Ata University, Bahçe Vocational School, Department of Food Processing, 80500, Osmaniye, Turkey

Amaç: Bitkilerin birçok biyolojik aktiviteye sahip olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada Galium aparine L.'nin antioksidan, oksidan, antimikrobiyal ve antiproliferatif aktiviteleri araştırıldı. Gereç ve Yöntem: Toprak üstü kısımları Soxhlet cihazında etanol ile ekstrakte edilen bitkinin antioksidan ve oksidan potansiyelleri Rel test kitleri kullanılarak ölçüldü. Bakteri ve mantarlara karşı antimikrobiyal aktivite, agar seyreltme yöntemi kullanılarak belirlendi. Antiproliferatif aktiviteyi belirlemek için Lung Carcinoma Cell Line (A549) kullanıldı. Sonuç ve Tartışma: Çalışmalar sonucunda bitki ekstraktlarının toplam antioksidan seviyesi (TAS) değeri 5.147 ± 0.237, toplam oksidan seviyesi (TOS) değeri 18.679 ± 0.245 ve oksidatif stres indeksi (OSI) değeri 0.346 ± 0.018 olarak belirlenmiştir. Bitki ekstraktlarının 50-200 µg/mL konsantrasyonlarında test mikroorganizmalarına karşı etkili olduğu bulundu. Ayrıca bitki ekstraktının antiproliferatif aktivitesinin ekstrakt konsantrasyonundaki artışa bağlı olarak güçlü etkiler gösterdiği belirlendi. Sonuç olarak Galium aparinin yüksek biyolojik aktiviteye sahip olduğu ve bu bağlamda doğal bir farmakolojik ajan olarak kullanılabileceği belirlendi.
Anahtar Kelimeler: Galium aparine, tıbbi bitkiler, antioksidan, antiproliferatif

GİRİŞ
Otların alternatif tıpta farklı amaçlarla kullanılması eski zamanlara kadar dayanmaktadır. Bitkiler birçok farklı biyolojik etkiye sahip bileşikler içeren doğal kaynaklardır. Bunlar bileşiklerin antibakteriyel, antiviral, antioksidan gibi birçok farklı etkiye sahip olduğu bulunmuştur. antimutajenik, antikanserojenik, antidepresan ve anti tümör. Bu nedenle, bu kişilerin Düzenli olarak ot tüketenlerde kanser ve kardiyolojik rahatsızlıklar daha az görülür [1, 2]. Ilıman bölgelerde yaygın olan Galium aparine L.(Rubiaceae), yerli bir tırmanıcı bitkidir. Asya, Avrupa ve Kuzey Amerika'ya [3]. Zararlı etkisi ile dikkat çeken G. aparine potansiyel verim açısından tahıl, kolza ve şeker pancarı tarlalarında istenmeyen bir bitki türüdür [4]. Yine de, geleneksel olarak çeşitli sağlık koşulları için sayısız tıbbi uygulamada kullanılmıştır. Herşey bitki kısımları (sap, yaprak, çiçek ve tohum) ateş ve idrar yolu enfeksiyonlarında, egzamada kullanılmıştır. veya cilt hastalıkları, ülserler, kronik yaralar. Ayrıca şişmeyi, enfeksiyonu azaltmak ve inflamasyonu artırır, lenfatik akışı artırır ve kanamayı durdurur [5]. Ayrıca kaynatılarak yöresel çay olarak da kullanılır. bitki. Bazı raporlara göre, G. aparine'nin aktif bileşenleri flavonoidler, polifenolik asitler, tanenler, antrakinonlar, iridoidler, alkanlar, yağ asitleri, aromatik bileşikler, klorofiller, karotenoidler, iridoidler, seskiterpenoidler, skualen, polifenol, fitosteroller ve C vitamini. Bu aktif maddeler doğal antioksidanların alımına katkıda bulunur [6-12]. Araştırmacılar, G. aparinin kanser tedavisi, ateş, lösemi, sarılık, lenf şişmesi, bademcik iltihabı, yaralar, iskorbüt ve hipertansiyon [13]. Ayrıca İsveç'te kavrulmuş G. aparine tohumları kahve yerine kullanılmıştır [4]. Kavrulmuş genç sürgünler yenir [14] ve Türkiye'de “yoğurt” olarak bilinen sütü pıhtılaştırmak için kullanılır. ot” [7,8]. Fitoterapide uzun bir geçmişi olmasına ve modern bitki uzmanları tarafından idrar söktürücü olarak kullanılmasına rağmen, Bu etkinliği destekleyen az sayıda farmakolojik çalışma vardır. Oksidasyon, organizmaya hayati faaliyetler için enerji sağlar. arasında bir denge vardır organizmada üretilen serbest radikal miktarı ve vücudu koruyan ve uzaklaştıran antiradikaller zararlı etkilerinden [15]. Hidrojen peroksit, süperoksit anyonları ve hidroksil radikalleri dahil olmak üzere serbest radikaller, hücresel düzeyde oksidatif hasarda önemli bir rol oynamaktadır. Çalışmalar gösteriyor ki Reaktif oksijen türlerinin (ROS) neden olduğu biyokimyasal değişiklikler, çeşitli hastalıkların belirleyicileridir.
diyabetes mellitus, ateroskleroz, kanser, artrit, inflamasyon ve nörodejenerasyon gibi. İnsan vücudu, inaktive etmek için hem enzimatik hem de enzimatik olmayan birçok mekanizma geliştirmiştir. ROS, ancak bunlar şiddetli oksidatif stres koşullarıyla mücadele etmek için yeterli olmayabilir. Birçok çalışma var Oksidatif stres hastalıklarını önlemek için yapılmıştır. ile mücadelede en çok çalışılan konular oksidatif stres, daha doğal beslenme sağlayarak oksidatif stresin vücut üzerindeki etkisini azaltmaktır. sebze ve meyvelerin kullanımı artırılarak elde edilebilecek antioksidanlardır. Doğal antioksidanlar güvenlidir ve ayrıca biyolojik ve farmakolojik aktiviteler sergiler. Bu nedenle, kapsamlı çalışmalar yapılmıştır. insanların tüketebileceği antiradikal yeteneğe sahip bitkileri tanımlamak için yakın zamanda yürütülmüştür [17]. Tıbbi, aromatik ve baharat bitkileri gibi bitkiler çok çeşitli serbest radikal içerirler. antioksidan özelliklere sahip süpürücü moleküller. Bu nedenle tıbbi ve aromatik bitkiler son yıllarda alternatif bir tedavi yöntemi olarak değerlendirilmekte ve bu alanda yapılan çalışmalar giderek artmaktadır. artan. Bitkisel özlerin çoğu, oksidatif stresi önleyen antioksidan özelliklere sahiptir. Doğal Plazmadaki antioksidanların gücünü artıran antioksidanlar bazı hastalıkların görülme sıklığını azaltır kalp hastalığı, kanser ve felç gibi. Çalışmamızın amacı antioksidan, Gaziantep, Türkiye'de toplanan Galium aparine L. bitkisinin antimikrobiyal ve antiproliferatif aktiviteleri.

MALZEME VE YÖNTEM
Bitki Materyali ve Ekstraksiyon
G. aparine bitki örnekleri Gaziantep ilinden toplanmıştır. Hava parçaları yapıldıktan sonra toza indirgenmiştir. 30 gr kuru numune tartıldı ve 50 oC'de EtOH ile ekstrakte edildi. yaklaşık 6 saat (Gerhardt EV 14). Elde edilen ekstraktlar döner bir aletle konsantre edilir. buharlaştırıcı (Heidolph Laborota 4000 Döner Evaporatör). Antioksidan, Oksidan ve Oksidatif Stres İndeksi Testleri Toplam antioksidan durumu (TAS), toplam oksidan durumu (TOS) ve oksidatif stres indeksi (OSI) Çalışmamızda kullandığımız bitki özleri, Rel Assay Kitleri (Rel Assay Kit) kullanılarak belirlendi. Teşhis, Türkiye). TAS değeri mmol Trolox eşdeğeri/L olarak ifade edildi ve Trolox değeri olarak kullanıldı. kalibratör [18]. TOS değeri μmol H2O2 eşdeğeri/L olarak ifade edildi ve hidrojen peroksit kullanıldı. kalibratör olarak [19]. OSI (Rastgele Birim) aşağıdaki formülle hesaplanmıştır [20].

TOS (µmol H2O2 equiv./L)
OSI (AU) = ----------------------------------------------
TAS (mmolTrolox equiv./L) X 10

Antimikrobiyal etkinlik
En çok tanınan standartlar Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü tarafından sağlanmaktadır. (CLSI) ve Avrupa Antimikrobiyal Duyarlılık Testi Komitesi (EUCAST). antimikrobiyal tarafından önerilen agar seyreltme yöntemi kullanılarak bitki EtOH ekstraktlarının aktivite testleri gerçekleştirilmiştir. CLSI ve EUCAST. Ekstrenin standarda göre minimum inhibitör konsantrasyonları (MIC) bakteri ve mantar suşları belirlendi. Bu amaçla aşağıdaki mikroorganizmalar kullanılmıştır: Staphylococcus aureus ATCC 29213, Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC 43300, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ve Gram negatif bakteri olarak Acinetobacter baumannii ATCC 19606 kullanıldı. Ayrıca, Candida mantar olarak albicans ATCC 10231, C. krusei ATCC 34135 ve C. glabrata ATCC 90030 kullanıldı ve Amerikan kültür koleksiyonundan elde edilmiştir. Bakteri suşları Muller Hinton'da önceden kültürlendi Et suyu ortamı ve mantar suşları, RPMI 1640 Broth ortamında önceden kültürlenmiştir. Standart elde etmek için inokulum, bakteri ve mantarların bulanıklığı McFarland 0.5 ölçeğine göre ayarlandı. Tüm özler 800-12,5 μg/mL konsantrasyonlarda test edildi ve tüm dilüsyonlarda distile su kullanıldı. Kullanılan solventler özütlerde antimikrobiyal aktivite için ayrı ayrı test edildi. Amfoterisin B ve Flukonazol mantarlara karşı referans ilaçlar olarak kullanılır. Amikasin, Ampisilin ve Siprofloksasin referans olarak kullanılmıştır. Bakteriler için ilaçlar. Mantar ve bakteri üremesini engelleyen en düşük konsantrasyon minimum inhibitör konsantrasyon (MIC) olarak belirlenir [21-26].

Antiproliferatif Etkilerin Belirlenmesi
MTT tahlili (3-[4,5-dimetiltiazol-2-il] -2,5-difenil-tetrazolyum bromür) yapıldı. belirlemek için bitki örneklerinden elde edilen EtOH ekstraktının Akciğer Karsinomu Hücre Hattı (A549) üzerinde hücre canlılığı. Hücreler 3.0 mL Tripsin-EDTA solüsyonu (Sigma-Aldrich, MO, ABD) ile ayrıldı. %70-80 birleşmeden sonra. Ürün ayrıldıktan sonra plakalarda kültürlendi ve 24 saat inkübe edildi. saat. Daha sonra ekstraktlar farklı konsantrasyonlarda (25, 50, 100, 200 µg/mL) seyreltildi ve hücreler 24 saat inkübe edildi. Kontroller, fetal ile desteklenmeyen büyüme ortamında uygulandı. buzağı serumu (FCS). 48 saatlik inkübasyondan sonra süpernatantlar büyüme ortamında çözüldü ve 1 mg/mL MTT (Sigma) ile değiştirildi ve mor çökelti oluşana kadar 37°C'de inkübe edildi. bu özütlenen süpernatanlar daha sonra hücreler tarafından emilen MTT'ye (SigmaAldrich, MO, ABD) dimetil sülfoksit (DMSO) eklenerek çözündürüldü. Plakalar daha sonra bir Epoch ile 570 nm'de okundu. spektrofotometre (BioTek Instruments, Winooska, VT) [27].

SONUÇ VE TARTIŞMA
Antioksidan ve Oksidan Durumu
Son yıllarda, araştırmacılar arasında doğal ve kullanımı güvenli olan antimikrobiyal bileşiklere ve antioksidanlara artan bir ilgi olmuştur. Çok sayıda ot ve baharat tarif edilmiştir. antioksidan ve antimikrobiyal madde kaynakları olarak. Son zamanlarda yapılan çalışmalarda bildirildiğine göre, diyet ve bitkisel ürünlerdeki polifenoller oksidatif stresi önler. Bunların önleyici maddeleri gıdalar özellikle antosiyaninler, polifenoller ve flavonoidlerdir. Bir antioksidan bileşik bir maddedir düşük konsantrasyonlarda bir substratın oksidasyonunu geciktirir veya önler. Canlı organizmalar reaktif üretir çevresel etkiler ve metabolik aktivitelerin bir sonucu olarak oksijen türleri. Yüksek düzeyde üretilen ROS seviyeleri canlı organizmalar için zararlı olabilir. Antioksidan bileşikler ROS'un olumsuz etkilerini bastırır. Oksidatif stres, antioksidan bileşikler yetersiz olduğunda ortaya çıkar. Parkinson, Alzheimer, kanser veya kardiyolojik bozukluklar insanlarda oksidatif stresin bir sonucu olarak ortaya çıkar. Tamamlayıcı antioksidanlar oksidatif stresin etkilerini azaltmak için kullanılabilir [28-30]. Bu çalışmada, antioksidan ve oksidan G. aparine potansiyeli belirlendi. Elde edilen bulgular Tablo 1'de gösterilmiştir.

Tablo 1. Galium aparinin TAS, TOS ve OSI Değerleri

	TAS (mmol/L)	TOS (µmol/L)	OSI
G. aparine	5.147±0.237	18.679±0.245	0.346±0.018

* Değerler ortalama±S.D olarak sunulmuştur.

G. aparine'nin TAS, TOS ve OSI değerleri ilk kez bu çalışmada belirlendi. çalışmalarda farklı bitki türleri üzerinde yürütülen Rhus coriaria var. zebarya 7.342 olarak bildirildi, TOS değeri 5.170 ve OSI değeri 0.071 [31]. Mentha longifolia subsp.'nin TAS değeri. uzun yapraklı 3.628, TOS değeri 4.046 ve OSI değeri 0.112 olarak bildirilmiştir[32]. Calendula'nın TAS değeri officinalis 5,55 olarak bildirilmiştir [33]. Allium calocephalum'un TAS değeri 5.853 olarak bildirilmiştir, TOS değeri 16.288 ve OSI değeri 0.278 [34]. Scorzonera papposa'nın TAS değeri 5.314, TOS değeri 24.199 ve OSI değeri 0.456 olarak bildirilmiştir [35]. Ferulago'nun TAS değeri platycarpa 5.688, TOS değeri 15.552 ve OSI değeri 0.273 olarak bildirilmiştir [36]. TAS değeri Thymbra spicata 8.399, TOS değeri 6.530 ve OSI değeri 0.078 idi [37]. Gundelia'nın TAS değeri tournefortii 6.831, TOS değeri 3.712 ve OSI değeri 0.054 olarak bildirilmiştir [38]. TAS değeri Rumex çıtır 6.758, TOS değeri 5.802 ve OSI değeri 0.086 olarak bildirilmiştir [39]. Nazaran bu çalışmalarda G. aparine'nin TAS değeri Mentha longifolia subsp. uzun yapraklı ve Rhus coriaria var'dan daha düşük. zebarya, Calendula officinalis, Allium calocephalum, Scorzonera papposa, Ferulago platycarpa, Thymbra spicata, Gundelia tournefortii ve Rumex çıtır. TAS değeri organizmanın vücudunda üretilen antioksidan etkili bileşiklerin bütününü gösterir. Bunda bağlamda, TAS değeri ne kadar yüksekse, bitkinin antioksidan özelliği de o kadar yüksek olur. Sonuç olarak belirlendi G. aparinin önemli antioksidan aktiviteye sahip olduğu. TOS değeri çevresel etkiler sonucunda üretilen oksidan bileşiklerin tamamını gösterir. ve canlı organizmalarda metabolik faaliyetler. TOS değeri arttıkça bitkinin oksidatif stresi artar. OSI değeri, canlılarda çevresel etkiler tarafından üretilen oksidan bileşiklerin ne kadar olduğunu gösterir. organizmalar endojen antioksidanlar tarafından baskılanır. OSI değeri arttıkça bitki oksidanı bileşikleri baskılamakta yetersiz kalır ve oksidatif stres oluşur. G. aparine'nin TOS ve OSI değerleri Rhuscoriaria var'dan daha yüksekti. zebarya, Menthalongifolia subsp. longifolia, Allium calocephalum, Ferulago platycarpa, Thymbra spicata, Gundelia tournefortii ve Rumex çıtır ve Scorzoner apapposa'dan daha düşük. Bu bağlamda görülen G. aparinin oksidan bileşik açısından yüksek seviyelerde olduğu. Ayrıca, belirlendi G. aparine'nin oksidatif stres seviyeleri normal seviyelerdeydi. Daha önceki çalışmalarda, G. aparine metanol ekstraktının ve n-heksanının antioksidan aktiviteleri, etil asetat, bütanol ve sulu ekstreler in vitro olarak incelendi. Araştırmalar, tüm kesirlerin dikkate değer bir antioksidan aktivite sergiledi, ancak G. aparin, DPPH, ABTS, hidroksil, hidrojen peroksit ve süperoksit radikallerini güçlü bir şekilde süpürür [6, 8]. Çalışmamızda Rel Assay kullanılarak G. aparine'nin EtOH ekstraktının antioksidan aktiviteye sahip olduğu belirlendi. kitler. Sonuç olarak G. aparine'nin önemli antioksidan aktiviteye sahip olduğu belirlendi. Antimikrobiyal etkinlik Canlı organizmalar, bulundukları ortama bağlı olarak birçok mikroorganizma ile etkileşime girerler. koşullar. Doğal ortamlarında, mikroorganizmalara karşı direnç sağlarlar. Bu etkileşim sonucunda ürettikleri ikincil metabolitler. Bu kapsamda bu doğal ürünler insanlar tarafından antimikrobiyal kaynak olarak kullanılabilir. Çalışmamızda G. aparinin standart bakteri ve mantarlar incelendi. Elde edilen sonuçlar Tablo 2'de gösterilmektedir.

Tablo 2. G. aparinin Antimikrobiyal Aktivitesi

	A	B	C	D	E	F	G	H	J
G.aparine	100	100	200	100	200	100	50	50	50

MIC değerleri, µg/mL birimlerinde sunulur
A: S. aureus, B: S. aureus MRSA, C: E. faecalis, D: E. coli, E: P. aeruginosa, F: A. baumannii, G: C. albicans, H: C. glabrata,
ben: c. krusei *200, 100, 50 ve 25 µg/mL özüt konsantrasyonları Daha önceki çalışmalarda, Galium aparinin hidrometanol özütünün Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Listeria monocytogenes'e karşı antimikrobiyal aktivite, Micrococcus flavus, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Aspergillus versicolor, Aspergillus ochraceus, A. niger, Candida krusei, Penicillium funiculosum, P. okrokloron ve P. verrucosum var. siklopium [40]. Galium verum L., Galium'un etanol ve kloroform ekstraktlarının analizinin yapıldığı bildirilmiştir. salicifolium Klokov, Galium dasypodum Klokov, Galium aparine L, Galium carpaticum Klokov ve Galium pseudomollugo Klokov, Escherichia coli'ye karşı farklı konsantrasyonlarda etkilidir, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ve Candida albicans [41]. Galium mexicanum'un kloroform, metanol ve heksan ekstraktlarının Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus'a karşı antimikrobiyal aktiviteye sahip MRSA, Streptococcus pyogenes, Candida albicans, Cryptococcus neoformans ve Trichophyton rubrum [42]. Çalışmamızda Galium aparinin EtOH ekstraktının virüslere karşı etkili olduğu belirlendi. 100 µg/mL konsantrasyonlarda S. aureus, S. aureus MRSA, E. coli ve A. baumannii, E. faecalis ve 200 µg/mL'de P. aeruginosa, 50 µg/mL'de C. albicans, C. glabrata ve C. krusei. Çalışmanın sonucu Galium aparin EtOH ekstraktının mantar suşlarına karşı daha etkili olduğunu gösterdi. Sonunda, oldu bitki özlerinin büyümesini önlemede önemli bir doğal kaynak olabileceğini belirlemiştir. mikroorganizmalar. antiproliferatif aktivite Bitkiler, insanlık tarihine paralel olarak sağlığı destekleyici ve hastalıkları tedavi edici özelliklerinden dolayı tüm kültürler tarafından kullanılmıştır. İnsanların yaklaşık %80-85'inin Halkın geleneksel tıbba güveni. Geleneksel tedavinin büyük bir kısmı, bitkisel özler. Birçok çalışma, bitkilerin antikanser özelliklere sahip olduğunu bildirmiştir. Ayrıca, sahip olduğu bitkilerin özellikle destekleyici tedavilerde çok önemli sonuçlar elde ettiği bildirilmiştir. kanser tedavisinde uygulanmaktadır. Çalışmamızda G. aparine EtOH ekstraktının akciğer kanseri üzerine etkileri hücre hattı (A549) araştırıldı. Elde edilen bulgular Şekil 1'de gösterilmektedir.

Çalışmamızda G. aparine'nin EtOH ekstraktlarının güçlü sitotoksik etkiler gösterdiği belirlendi. Doz artışına bağlı olarak A549 hücre hattında. Daha önceki çalışmalarda metanolün ve G. aparine'nin etil asetat özleri, İnsan meme kanseri hücrelerine ve İnsana karşı etkiliydi. kolon kanseri hücreleri [10]. Farklı bir çalışmada, G. aparine'nin MeOH özütünün sitotoksik olduğu bildirildi. meme kanseri hücre hatları MCF-7 ve MDA-MB-23'e karşı etki [43]. Bu çalışmada A549 hücre hattı kullanılmış ve güçlü sitotoksik etkileri olduğu belirlenmiştir. Sonuç olarak, G.'nin olduğu belirlendi. aparin antikanserojen olarak kullanılabilir. Sonuç olarak, şifalı bitkiler birçok hastalığın tedavisinde kullanılmaktadır. biyolojik aktiviteler Çalışmamızda Galium aparin bitkisi belirlenmiştir. Yapılan çalışmalar sonucunda belirlendi bitki ekstraktının önemli bir antioksidan potansiyele sahip olduğu. Ayrıca sahip olduğu tespit edildi. mikroorganizmalara karşı antimikrobiyal aktivite ve özellikle yüksek antifungal aktivite. Buna ek olarak, bitkinin akciğer karsinomu hücre hattına karşı önemli antikanser etkisi gösterdiğini belirledi. Olarak Sonuç olarak bitkinin yüksek biyolojik aktiviteye sahip olduğu ve doğal ajan olarak kullanılabileceği belirlenmiştir. farmakolojik çalışmalarda.

YAZAR KATKILARI
Konsept: N.K., A.D., M.S.; Tasarım: N.K., A.D., M.S.; Kontrol: N.K., A.D., M.S.; Kaynaklar: F.S.M..;
Malzemeler: N.K., A.D., M.S.; Veri Toplama ve/veya işleme: N.K., A.D., M.S.; Analiz ve/veya
yorum: N.K., A.D., M.S.; Literatür taraması: N.K., A.D., M.S.; Makale Yazısı: F.S.M., N.K.;
Eleştirel inceleme: N.K., A.D., M.S.; Diğer: N.K., A.D., M.S.
ÇIKAR ÇATIŞMASI
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
REFERANSLAR
1. Merken, H.M., Beecher, G.R. (2000). Yüksek performansla gıda flavonoidlerinin ölçümü
sıvı kromatografisi: bir inceleme. Tarım ve Gıda Kimyası Dergisi, 48(3), 577-599.
[Çapraz Referans]
2. de Souza, L.M., Cipriani, T.R., Iacomini, M., Gorin, P.A., Sassaki, G.L. (2008). HPLC/ESI-MS
ve Maytenus yapraklarından elde edilen biyoaktif ekstrakttaki flavonoidlerin ve tanenlerin NMR analizi
ilicifolia. Farmasötik ve Biyomedikal Analiz Dergisi, 47(1), 59-67. [Çapraz Referans]
3. CABI, 2018. İstilacı Türler Özeti. [WWW Belgesi]. URL https://www.cabi.
org/isc/datasheet/24772 (2 Şubat 18'e erişildi).
4. Malik, N., Doğan, W.V. (1988). Kanada yabani otlarının biyolojisi.: 86. Galium aparine L. ve
Galium spurium L. Kanada Bitki Bilimi Dergisi, 68(2), 481-499. [Çapraz Referans]
5. Tobyn, G., Denham, A., Whitelegg, M. (2016). Batı bitkisel geleneği: 2000 yıllık
şifalı bitki bilgisi. Ejderha şarkı söylüyor.
6. Bokhari, J., Khan, M.R., Shabbir, M., Rashid, U., Jan, S., Zai, J. A. (2013). Evaluation of diverse antioxidant activities of Galium aparine. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 102, 24-29. [CrossRef] 7. Deliorman, D., Calis, I., Ergun, F. (2001). Iridoids from Galium aparine. Pharmaceutical Biology, 39(3), 234-235. 8. Aslantürk, Ö.S., Çelik, T.A., Karabey, B., Karabey, F. (2017). Active Phytochemical Detecting, Antioxidant, Cytotoxic, Apoptotic Activities of Ethyl Acetate and Methanol Extracts of Galium aparine L. Journal of Pharmaceutical Research International, 1-16. [CrossRef] 9. Goryacha, O.V., Ilyina, T.V., Kovalyova, A.M., Kashpur, N. V. (2014). Phytochemical research of Galium aparine L. lipophilic complex and study of its antibacterial activity. 10. Vlase, L., Mocan, A., Hanganu, D., Benedec, D., Gheldiu, A., Crisan, G. (2014). Comparative study of polyphenolic content, antioxidant and antimicrobial activity of four Galium species (Rubiaceae). Digest Journal of Nanomaterials and Biostructures, 9(3), 1085-1094. 11. Moubasher, H., Abd El-Ghani, M., Al-Wakeel, S., Bahoor, A. (2016). Chemotaxonomic significance of flavonoids in some species of Galium (Rubiaceae) from Libya. Austin Journal of Plant Biology, 2(1), 1014. 12. Mocan, A., Crisan, G., Vlase, L., Ivanescu, B., Badarau, A.S., Arsene, A.L. (2016). Phytochemical investigations on four Galium species (Rubiaceae) from Romania. Farmacia, 64(1), 95-99. 13. Ahmad, S.S., Javed, S.U.M.A.I.R.A. (2007). Exploring the economic value of underutilized plant species in Ayubia National Park. Pakistan Journal of Botany, 39(5), 1435-1442. 14. Taskin, T., Bitis, L. (2016). In vitro antioxidant activity of eight wild edible plants in Bursa province of Turkey. Medicine, 6, 25. 15. Shirwaikar, A., Shirwaikar, A., Rajendran, K., Punitha, I.S.R. (2006). In vitro antioxidant studies on the benzyl tetra isoquinoline alkaloid berberine. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 29(9), 1906-1910. [CrossRef] 16. Soni, H., Pandey, H., Phatak, A. K., Nayak, G., Singhai, A. K., Parihar, A., Singh, V., Rathur, A. S. (2009). Evaluation of antioxidant potential of hydro alcoholic extract of leaves of Coleus aromaticus. Advances in Pharmacology and Toxicology, 10(1), 75-82. 17. Jain, S., Gupta, A., Malviya, N., Suhur, H. (2009). Comparative antioxidant potential screening of polyherbal formulations. Advances in Pharmacology and Toxicology, 10(1), 101-110. 18. Erel, O. (2004). A novel automated direct measurement method for total antioxidant capacity using a new generation, more stable ABTS radical cation. Clinical Biochemistry, 37(4), 277-285. [CrossRef] 19. Erel, O. (2005). A new automated colorimetric method for measuring total oxidant status. Clinical Biochemistry, 38(12), 1103-1111. [CrossRef] 20. Sevindik, M. (2019). The novel biological tests on various extracts of Cerioporus varius. Fresenius Environmental Bulletin, 28(5), 3713-3717.
21. Bauer, A.W. (1966). Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disc method. American Journal of Clinical Pathology, 45, 149-158. 22. Hindler, J., Hochstein, L., Howell, A. (1992). Preparation of routine media and reagents used in antimicrobial susceptibility testing. Part 1. McFarland standards, p. 5.19.1-5.19.6. In H. D. Isenberg (ed) Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 23. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). (2012). Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically, Approved Standard, 9th ed., CLSI document M07-A9. Clinical and Laboratory Standards Institute, 950 West Valley Road, Suite 2500, Wayne, Pennsylvania 19087, USA. 24. Matuschek, E., Brown, D.F., Kahlmeter, G. (2014). Development of the EUCAST disk diffusion antimicrobial susceptibility testing method and its implementation in routine microbiology laboratories. Clinical Microbiology and Infection 20: 255-266. [CrossRef] 25. EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing). (2014). Breakpoint tables Fungal isolate for interpretation of MICs. Version 7.0. 26. EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing). (2015). Breakpoint tables for Bacteria interpretation of MICs and zone diameters, Version 5.0. 27. Bal, C., Akgul, H., Sevindik, M., Akata, I., Yumrutas, O. (2017). Determination of the antioxidative activities of six mushrooms. Fresenius Environmental Bulletin, 26(10), 6246-6252. 28. Eberhardt, M.V., Lee, C.Y., Liu, R.H. (2000). Antioxidant activity of fresh apples. Nature, 405(6789), 903-904. [CrossRef] 29. Zhao, R., Chen, Z., Jia, G., Li, J., Cai, Y., Shao, X. (2011). Protective effects of diosmetin extracted from Galium verum L. on the thymus of U14-bearing mice. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 89(9), 665-673. [CrossRef] 30. Sevindik, M. (2020). Antioxidant and antimicrobial capacity of Lactifluus rugatus and its antiproliferative activity on A549 cells. Indian Journal of Traditional Knowledge (IJTK), 19(2), 423-427. 31. Mohammed, F.S., Akgul, H., Sevindik, M., Khaled, B.M.T. (2018). Phenolic content and biological activities of Rhus coriaria var. zebaria. Fresenius Environmental Bulletin, 27(8), 5694- 5702. 32. Sevindik, M., Akgul, H., Pehlivan, M., Selamoglu, Z. (2017). Determination of therapeutic potential of Mentha longifolia ssp. longifolia. Fresenius Environmental Bulletin, 26(7), 4757- 4763. 33. Verma, P.K., Raina, R., Sultana, M., Singh, M., Kumar, P. (2016). Total antioxidant and oxidant status of plasma and renal tissue of cisplatin-induced nephrotoxic rats: protection by floral extracts of Calendula officinalis Linn. Renal Failure, 38(1), 142-150. [CrossRef] 34. Mohammed, F.S., Karakaş, M., Akgül, H., Sevindik, M. (2019). Medicinal properties of Allium calocephalum collected from Gara Mountain (Iraq). Fresenius Environmental Bulletin, 28(10), 7419-7426.
35. Mohammed, F.S., Günal, S., Şabik, A.E., Akgül, H., Sevindik, M. (2020). Antioxidant and Antimicrobial activity of Scorzonera papposa collected from Iraq and Turkey. Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi Tarım ve Doğa Dergisi, 23(5), 1114-1118. [CrossRef] 36. Mohammed, F.S., Günal, S., Pehlivan, M., Doğan, M., Sevindik, M., Akgül, H. (2020). Phenolic content, antioxidant and antimicrobial potential of endemic Ferulago platycarpa. Gazi University Journal of Science, 33(4), 670-677. [CrossRef] 37. Mohammed, F.S., Şabik, A.E., Sevindik, E., Pehlivan, M., Sevindik, M. (2020). Determination of Antioxidant and Oxidant Potentials of Thymbra spicata Collected from Duhok-Iraq. Turkish Journal of Agriculture-Food Science and Technology, 8(5), 1171-1173. [CrossRef] 38. Saraç, H., Demirbaş, A., Daştan, S.D., Ataş, M., Çevik, Ö., Eruygur, N. (2019). Evaluation of Nutrients and Biological Activities of Kenger (Gundellia tournefortii L.) Seeds Cultivated in Sivas Province. Turkish Journal of Agriculture-Food Science and Technology, 7(sp2), 52-58. [CrossRef] 39. Daştan, S.D., Durukan, H., Demirbaş, A., Dönmez, E. (2019). Bioactivity and Therapeutic Properties of Evelik (Rumex crispus), A Naturally Growing and Edible Plant in Sivas Province. Turkish Journal of Agriculture-Food Science and Technology, 7(sp2), 67-71. [CrossRef] 40. Senio, S., Pereira, C., Vaz, J., Sokovic, M., Barros, L., Ferreira, I.C. (2018). Dehydration process influences the phenolic profile, antioxidant and antimicrobial properties of Galium aparine L. Industrial Crops and Products, 120, 97-103. [CrossRef] 41. Ilyina, T.V., Goryacha, O.V., Toryanik, E. L., Kulish, I.A., Kovaleva, A.M. (2016). Antimicrobial Activity of the Genus Galium L. 42. Bolivar, P., Cruz-Paredes, C., Hernández, L. R., Juárez, Z.N., Sánchez-Arreola, E., Av-Gay, Y., Bach, H. (2011). Antimicrobial, anti-inflammatory, antiparasitic, and cytotoxic activities of Galium mexicanum. Journal of Ethnopharmacology, 137(1), 141-147. [CrossRef] 43. Atmaca, H., Bozkurt, E., Cittan, M., Tepe, H.D. (2016). Effects of Galium aparine extract on the cell viability, cell cycle and cell death in breast cancer cell lines. Journal of Ethnopharmacology, 186, 305-310. [CrossRef
rizm, "-" ya kese şeklinde dilatasyonlar, ya da belirgin sınırlı kesecikli çıkıntılar "-sifilitik oranı denek sayısı 49 vakada ceht başına 67'ye yükseldi. Aort anevrizmasının bölgesel bölgesinin göreceli sıklığı kemeri kucaklayan olarak verir, 03.3, inen torasik, 16.6, ve karın, yüzde 20. Nedenselliğe ilişkin vardığı sonuçlar, aort duvarlarının lezyonunun, bir Parçalanan, dilatasyon ve anevrizma üretme eğiliminde olan spesifik fibroid büyümesi, çoğu durumda, frengi ve az sayıda vakada romatizma ve heyecan verici ajanslar olarak alkolizm; öte yandan, basit kapak lezyonları, sıklık sırasına göre aşağıdaki ilişkileri gösterir; romatizma, sıtma zehiri, dizanteri ve frengi. Atardamar anevrizması kârlı olabilecek bir konu değildir. burada gözden geçirildi. Ölümler ve sakatlıklar büyük bir azalma gösteriyor 1869'dan sonra, aort anevrizmasında bir artışa karşılık gelen; hayır şüphe, o yıl terminolojinin getirilmesi hastalığın lokalizasyonunda daha fazla doğruluk hakkında ve onun
uygun koşullar altında giriş yapın. Ancak raporlar hiçbir zaman sınıflandırmayı aort anevrizması ve anevrizma olmak üzere iki başlıktan daha ötede gerçekleştirdi ve 1874'ten itibaren hepsi birleştirildi. Sistemik gruplar. Damar hastalıkları, bir nedeni olması dışında pek ilgi çekici değildir. geçersiz kılma, varis nedeniyle. Kısa servis sistemi ile artık yürürlükte ve sağlam işe alımların dikkatli bir şekilde seçilmesiyle, geçersiz kılma oranının on yıl için olan 0.61'den, geçersiz kılmanın yapıldığı 1871'de bulunduğu 0.27'ye düşmesi beklenebilir. Bu sevgi için tüm ordu için 50 yaşın altında. Bu açıklamalar sırasında sık sık atıfta bulunulmuştur. damarların organik lezyonlarının başlangıç noktası olarak sifiliz. İçinde Sonuç olarak ve Bulaşıcı Hastalıkları Önleme Yasasına ilişkin son geriye dönük eyleme istinaden şu soru sorulabilir: Frengi var son yıllarda orduda belirgin bir düşüş oldu mu? İstatistiksel kayıtların önceki ciltleri, birleştirilmiş Birleşik Krallık'ta birincil ve ikincil sifiliz için başvurular, belirtildiği gibi, ortalama gücün 1.000'i başına:

1861'de ... ... ... .209.8
1864'de ... ... ... 168.5 Dört yılın ortalaması 167.9
1966'da ... ... ... 139.6
1867'de ... ... ... 153.8
Kayıtların son dört cildi aşağıdaki rakamları sunar kabul oranları olarak:
Syph. Prim. Syph. Sec. Combined Total
1877 .... 48.8 .... 23.8 .... 72.6
1878 ... 60.7 ... 27.3 ... 88.0 Azalma 73.1
1879 ... 63.4 ... 29.0 ... 92.4
1880 ... 95.8 ... 30.5 ... 126.3
------ ----- --------
Ortalama 4 yıl 67.2 27.6 94.8

Primer zührevi yaralar için başvurular sadece Elçilerin tam olarak yarısının ev gücünün yarısı tarafından korunan 14 istasyon toplanır, son dört yıl sırasıyla bir kabul oranı verir 35, 40, 47 ve 74 veya ortalama 49; 14 büyük korumasız istasyon ise ortalama 124 veriyor. Askerin verimliliği açısından, daha özel olarak, askerin organik vasküler lezyonları kasma yükümlülüğüne bakıldığında. doğrudan ölümcül bir eğilim, bu Yasaların ulusal ses tarafından desteklenmesi bir görev gibi görünüyor. Aynı şekilde, eğer dikkate alınırsa sözleşmeli sağlık kaybından sivil hayata dönüşüne verilen hizmet ettiği dönem. Eğer yargılarsak, yabancı istasyonlarda sifilizin azalması Hindistan ve Akdeniz, son yıllarda çok çarpıcı değil. 1860-68 yılları için yıllık ortalama kabul oranları
kombine sifilitik grup, Bengal için 121.1; Bombay, 120.1; Madras, 129.0. 1877-80 için Bengal için 104.6 iken; Bombay, 108.4; M31adras, 128.6. Akdeniz garnizonlarında, 1859-68 yıllarını alarak, Cebelitarık için, 77.4; MIalta, 31.5; 1877-80 için ise, Cebelitarık, 52.6; Malta, 30.9.

Esas olarak istatistiklere dayanan bir makale, dikkate alınmaya uygundur. yazarın sabır duygusundan ziyade denetçinin. Sahibim niyetimi başlangıç noktasında gerçekleştirmeye çalıştım ve talep etmeliyim müstehcen bir şeyin olabileceği umuduyla, prolixity için hoşgörü dokunmuşlardır. hakkında çok fazla açıklanamazlık var çarpıntı ve onun yakından ilişkili anormal organik değişiklikleri sadece belirli alaylar. bir kombinasyonu var gibi görünüyor işte nedenler; ve olgunlaşmamış askerlerde, özel bir semptomun ortaya çıkmasıyla can sıkıcı tatbikattan kurtulma arzusu kolayca indüklenir. aşırı sigara ve akraba hoşgörüsü ile, bunlardan bazıları histeri sınırında gözden kaçırılmamalıdır. hepsi bu değil Eğitim çavuşu.

Aşağıda, hastalıkların görülme sıklığının bir özeti yer almaktadır (fVbe vasküler sistem, dört buçuk yıllık bir BgZ şarjı sırasında Cebelitarık'taki kara alayı. - Alay, bir vücut olarak, vardıklarında genç ve olgunlaşmamış, Hindistan'da bulunmuş bir miktar tecrübeli asker ve üç yıl evde, oldukça ağır içti. Cebelitarık'ta, kabuller devam ediyor. bu sınıf-perikardit, 1; valf hastalığı, ! 1; hipertrofi, 3; abdominal aort anevrizması, 2; çarpıntı, 13; varix, 2. Ölümler, yok; geçersiz, 13 veya toplam 7'de 1 geçersiz eve gönderildi. Tedavi sırasında perikardit vakası meydana geldi. anayasal sifiliz; hipertrofi vakaları, iki durumda, inatçı tippler idi, üçüncüsü, çok yoğun bir sigara içicisinde çarpıntı ve histeri ile komplike idi; kapak hastalığı vakası, bir şirkette hipertrofi ve dilatasyon ile çift idi. aşçı, alışılmış bir ayyaş; Netley'de öldü. anevrizma vakaları geçersiz kılındı; bunlardan biri frengi ile bozuldu ve sıtma romatizması; varis vakaları eski askerlerdeydi; çarpıntı vakaları genç askerlerdeydi, 7 görünüşe göre doğuştan zaaf ve iklim sebepleri, hepsi 'hafif; kalan 6'sı vardı sarhoşlar veya mastürbatörler ve bazılarında hipertrofi başladı; hepsi sigara içiyordu. Bu kişisel deneyimler, başkalarını kayıt altına almaya teşvik edebilir. Kalbin fonksiyonel hastalıklarının etiyolojisine ilişkin daha geniş bir çalışma şu anda bir miktar verimsizliğe neden olan askerler somut morbifik etkilerle orantısız.

KRONİK ÇÖZÜM OLARAK GALİUM APARİN ÜLSERLER.

F.J.B. QUINLAN, M1.D.Dubl., F.K.Q.C.P., St. Vincent Hastanesine Doktor; Materia Mediqa Profesörü ve Terapötikler, Katolik Üniversitesi; Müfettiş aynı, İrlanda Kraliyet Üniversitesi. Hastaların hastaneye kabulüyle bağlantılı olanların çok azı kronik hastalığı olan başvuranların sayısını gözlemlemiyor. başta bacaklar olmak üzere ülserler; ve bazı kurumlarda görünür. kabullerine karşı zımni bir kural olmak. Kabul edildiklerinde, özellikle yaşlı ve çökmüş kişilerse, sıklıkla bir yatakta otururlar. aylarca, hafifletilebilir hastaları dışlamak için ve bazen tatmin edici olmayan sonuçlarla. Tedavide büyük zorluk görünüyor kalıcı sağlıklı granüler eylemi sürdürmenin imkansızlığı; ve çemberleme, sünger aşılama, deri aşılama ve uygulama cıva oksit, gümüş nitrat veya kuprik sülfat gibi tahriş edici maddeler, çoğu zaman boşuna denenir. için yeni bir çareden bahsetmek isterim ben ve yukarıdakilerin tümü iyi bilindiğinde başarılı olan
yöntemler tamamen başarısız olmuştu.

JOURNAL of Janumy dergisinde yayınlandıktan hemen sonra basit bir akciğer tedavisi üzerine bir notun sonuncusu, mektuplar aldım Birleşik Krallık'ın çeşitli yerlerinden, kronik tedavisinde galyum aparinin etkilerini deneyin ülserler - benim kabul edemediğim bir öneri,bitkinin o zaman elde edilememesi için yeterli bir neden., I konuyu not aldı ve uygun bir deneme fırsatı zamanı gelince kendini gösterdi.

Galyum aparin, doğaya ait yabani bir yıllıktır. Iubiacee'ye aittir ve Sowerby's BritisA Botany, cilt. iv, s. 225-6. Mükemmel bir renkli örnek verilmiştir. aynı cildin eki, levha 658. İyi bilinen bir ottur, Birleşik Krallık'ın her yerindeki çitlerde bulunur ve Kuzey Avrupa. İki ila dört fit uzunluğa kadar uzanır, ard dikenlerle kaplı etli kare bir gövdeye sahiptir. parmak ve başparmak yukarı doğru sap boyunca çizilerek hissedilir yön. Bu durum giysilere yapışmasına neden olur: yoldan geçenler ve onun için bazı yerlerde adının "Cleavers" veya "catweed." İngiltere'deki daha yaygın adı' "kaz otu ;" İrlanda'da kendine özgü " robin" ismine sahiptir. çiti çalıştırın", yayılma Şeklinden kaynaklanır; içinde Fransa, buna "Iaillet gratoron" denir; in. Gtrmany, ":lKletterndes Labkraut." Bu ülkede, yaklaşık olarak başlangıcından itibaren ortaya çıkıyor. Sonbaharın sonuna kadar mayıs. Clonmel'den 74 yaşındaki Cornelius C., çok uzun boylu, zayıf ve yıpranmış bir yaşlı adam, St. Vincent's Hastanesine kabul için başvurdu. 8 Şubat son. Her ikisinin de muazzam ülserlerinden acı çekti bacaklar; sağdaki sekiz inç ve bir buçuk uzunluğunda ve neredeyse tüm uzvun etrafına uzanan; ve soldaki varlık biraz daha küçük. Başka bir Dublin hastanesinden yeni çıkmıştı. dört aydır çok seçkin birinin gözetimi altında bulunduğu yerde tıp adamı ve iyi bir sonuç yok. Bundan daha ümitsiz bir ülser vakası hayal edilemezdi ve çok az hastane onu kabul etme fikrini aklından geçirebilirdi. Ancak kabul edildi yardım umuduyla evinden uzun bir yol kat ettiğini ifade eden kurumun çok değerli bir arkadaşının ricası. Çemberleme, boyuttan açıkça söz konusu değil ülserlerin ve çevredeki derinin canlılığının düşük olması nedeniyle tüm yüzeyleri sünger katmanlarla aşıladım. Bu süreç her zamanki gibi devam etti ve sağlıklı bir yüzey bıraktı; bununla birlikte, granülasyonlar kısa sürede öldü ve devam ettirilemedi. Deri aşılama tamamen başarısız oldu.

Artık neredeyse Nisan ayının sonuna gelmiştik ve bu vakadaki başarısızlığımız kardeş hastanemizinki kadar eksiksizdi. Belirdi Bana göre, Dublin'deki tüm çalılıklarda görünmeye başlayan galyum aparini denemenin zamanı gelmişti. işte ben gayretine ve enerjisine dair teşekkürlerimi sunmalıyım. çabalarında yorulmak bilmeyen klinik sınıfımın üyeleri hiçbir bitki uzmanının sahip olmadığı bu bitkiyi toplayın. O zamandan beri bu ve diğer daha az ciddi vakalar için geniş bir kaynak sağlanmıştır. devam ettirilmiş ve en belirgin başarı ile kullanılmıştır. şekilde takip etmek. Sol elinde on veya on iki saplı bir demet tutmak, makas sağ elinde tutulduğunda, demet yaklaşık 'yarım inç uzunluğunda' hurdalar halinde kesilir. Bunlar bir havanın içine atılır ve dövülerek hamur haline getirilir. Buruk bir tadı olan ve hafif buruk olan bu macun koku, büyük bir lapa haline getirilir, ülsere uygulanır ve' bandajla sabitlenir. Günde üç kez yenilenir. Etkisi, hafif bir sabit uyarıcı ve sağlıklı granülasyonun güçlü bir destekleyicisi gibi görünmektedir. Bu en umutsuz durumdaki etkisi dava kesin ve herkes için açıktı. Sağlıklı eylem başladı ve o zamandan beri istikrarlı bir şekilde devam etti; ve bir aylık tedaviden sonra her iki ülser de orijinal boyutlarının yarısından önemli ölçüde daha az küçüldü. Hiç şüphem olmayan bu hareket devam ederse, ölçülebilir ve kısa bir süre içinde tedavi gerçekleşecektir. Hasta koğuşta ve herkes büyük olanı görebilir. ay boyunca gerçekleştirilen yeni dermatoz miktarı.

Yukarıdakiler kadar çarpıcı olmayan birkaç örnek daha verebilirim, ancak bu sadece tekrar olacaktır. Ancak bir tanesinden kısaca bahsetmek isterim. 34 yaşındaki Mary G., pulmoner tüketimin çok ileri bir aşamasındaydı, büyük bir zayıflama ve zayıflama ile. Sol akciğerin ciddi lezyonları onu her zaman sağ tarafında yatmaya zorladı; ve, olarak Sonuç olarak sağ omzunda ve sağ tarafında yatak yaraları oluştu. trokanter. Büyük bir su yatağına ek olarak, her iki yatak yarasını da galyum hamuruyla kapladım. Uygulama çok minnettar ve yatıştırıcı bulundu ve yatak yaralarını hızla iyileştirdi. Hızla ölmesine rağmen hala yaşıyor. Bununla birlikte, yaralardan muzdarip değildir; ve bunun başka örneklerini de yaşadım Aynı tür. Kronik ülserler söz konusu olduğunda, uygulama en çok tembel veya sağlıklı durumlarda uygundur. İrritabl ülserlerde uyarıcı özelliği ağrıya neden olur. Bu gibi durumlarda, Galyuma başlamadan önce, kümes hayvanları, iyodoform veya diğer iyi bilinen ilaçlar ile sinirliliği azaltmak için gereklidir. Bu çareyi bu kadar erken ortaya koymamın nedeni, şimdi denemenin tam zamanı. Hemen hemen her çitte serbestçe büyüyor ve sezonun geri kalanında herhangi bir miktarda alınabilir. Genel kullanımıyla ilgili olarak hemen bir zorluk kendini gösterir; yani, kış ve ilkbaharda hiç sahip olunmamalıdır. Görünüyor ki Bana göre bu zorluk, sığırlar için yeşil gıdaların son birkaç yıldır toprağın altındaki silolara gömerek tamamen tatlı ve taze tutulduğu silaj yöntemiyle etkili bir şekilde karşılanabilir. Bu plan genel olarak bilinir, ancak bununla ilgili tüm ayrıntılar Bay Thomas Christy, P.L.S.'nin kitapçığından öğrenilebilir. (Christy and Co., 155, Fenchurch Street, Londra, E.C.). Galyum durumunda, süreç bitkinin kesilmesinden oluşacaktır. çok ince, vidalı basınçla hava geçirmez kapaklı sırlı bir çömlek kavanoza sıkıştırıp toprağa gömüyor. Böylece hava, nem ve ısıdan korunduğu için kışı geçirmesi muhtemeldir. Pqpillerimden biri, Bay MI. Pierce, bunu zaten ortaya koydu ve sonucu bana bildirecek.* Bu plan, eğer başarılı olursa, diğer farmasötik bitkileri de kapsayacak şekilde genişletilebilir; çünkü her zaman yeşil otların daha fazla olduğu fikrine sahip oldum. kurutulmuş olanlardan daha güçlüdür. Gerçekten de, bu şehrin merhum Bay Donovan'ı, digitalis tentürü yapmak için, alkolün yüksük otu büyüdüğü yere getirilmesi ve canlı bitkinin içine daldırılması gerektiğini savunuyordu. Eski yazarlar tarafından galyuma birçok erdem atfedilir; ama onun istihdama ilişkin herhangi bir ima bulamadım. ülser tedavisi. Linnseus, İsveç'te çobanların saplarını sütü süzmek için kullanın - Dioscorides'in de belirttiği bir gerçektir. Kökleri güzel bir kırmızı boya oluşturur. Bunlar sahip olduğum tek kullanımlar Elimdeki kitaplarda bununla ilgili olarak tespit edebildim.

EFÜZYON İLE PERİKARDİT OLGUSU.
JOHN WV tarafından. MARTIN, M.D., Sheffield.

Aşağıdaki vaka, perikardiyal kese içine efüzyonların eşlik ettiği sinsi ve şüphelenilmeyen perikardit başlangıcına iyi bir örnektir. DAVA. Sinsi Başlangıç: Hafif Öncelikli Kas İhlali Sağ Kol ve Omuzda: Dispawa: Orthoynwa: Atanmış Çünkü, mahzen-zemin sürekli olarak W-ater ile düzeltilmiştir: Hasta Sert değil, Ateş veya Altı Bardak almaya alışkın Bira ve Bir veya İki Ruh, bir gün: [tedavi. Sonuç.-H. G. B., 20 yaşında, Sheffield'de ikamet ediyor, eskiden şarap ve alkollü içki içiyordu tüccar ve onu görmemden önceki üç ay boyunca, bir bira fabrikası için gezgin olarak işgal edildi, Ocak'ta benim bakımıma girdi 5, 1883. İri, iyi yapılmış, iyi gelişmiş ve iyi bir adamdı. beslenmiş adam. Her zaman iyi yaşamaya alışmıştı ve bira ve alkollü içkiler almak, ancak ölçüsüzlük söz konusu olduğunda asla aşırıya kaçmamak. Zaman yalan meşgul olmuştu için kısmen iş gereği seyahat ederken, beş ila altı bardak bira ve bir veya iki bardak alkollü içki ortalama, bir gün. Şimdiye kadar ailede romatizma öyküsü yoktu. hastanın bildiği gibi. Her zaman güçlü ve sağlıklı olmuştu. O ziyaretimden yaklaşık üç hafta önce ikametgahını değiştirdi. Onun eski ev çok nemliydi, mahzenin zemini neredeyse her zaman su altında üç veya dört inç, taşınacak kanalizasyon yok su kapalı. Ayrılmadan önce, mevcut nöbetin başladığını hissetti, tek semptom kuru, zahmetli bir öksürük ve dispne. Bu semptomların başlangıcından önce hafif ağrıları vardı. sağ omuz ve kol kaslarında, ancak çok hafif gerçekten ve onun tarafından araba sürerken kamçısını tutmasına atfedildi. Bu ağrılar ara sıra oluyordu. Hiçbir zaman ortak bir sevgisi olmadı. Dispumka yavaş yavaş ortopnea yükseldi. on gün boyunca ben onu görmeden önce, yatamamıştı; ve için
son dört ya da beş gece, sadece birkaç parça uyku alabildi. yirmi dakikadan yarım saate kadar.

Görüldüğünde, yüzü esmer, şişkin ve tıkalı görünüyordu. dış görünüş; konjonktiva enjekte edildi, gözlerin bakmasına neden oldu kırmızı ve ferrety. Boyun damarları dolgun ve belirgindi, değil olağanüstü bir şekilde, ancak fark edilir derecede. ifadesi yüz endişeli ve sıkıntılıydı. En çok şikayet etti nefes darlığı ve öksürüğünün rahatsızlığı, ama herhangi bir gerçek acıdan şikayet etmedi. Onun olduğunu düşünüyor gibiydi atak bronşit ve akciğerlerin tıkanmasıydı ve Sheffield'deki bir bitki uzmanından özenle bir karışım alıyor, her biri dozu onu önemli ölçüde hasta etti ve ona önemli ölçüde verdi için en ufak bir fayda sağlamadan sıkıntı semptomları rahatlatma yolundadır. Akciğerlerin dikkatli perküsyon ve oskültasyonu, akciğerlerinde herhangi bir pozitif semptom ortaya çıkarmadı. nişanlı olmak. Aynı zamanda, o kadar iyi beslenmişti ki, sabırlıydı ve yağ dokusu kaplaması o kadar boldu ki, ben derinlere yerleşmiş bir tıkanıklık olmadığı konusunda olumlu olmak istemez; ama buna dair kesin bir kanıt elde edemedim. Kalbin durumunu incelerken, üzerinde vurmalı çalgılarla artan hafif bir hassasiyet buldum. Dürtü çok zayıftı, ancak apeks vuruşunda yer değiştirme olmadı. Soldaki dördüncü kaburganın üst sınırından dikey yönde beş inç ölçülerek kalp donukluk alanı büyük ölçüde arttı. yan ve orta sternumdan yatay olarak altı buçuk inç, altıncı kaburga ile aynı seviyede, sol tarafa doğru. Oradaydı eli kalbin üzerine koyarken hiç heyecan duyulmadı. ilk ses duyulamadı; ikincisi çok hafif bir şekilde duyuldu kalbin tabanı, ikinci interkostal boşlukla aynı seviyede. Kalbin tüm yüzeyinde ve aksilla, iyi işaretlenmiş bir çift sürtünme-üfürüm duyuldu, doğru tepe, yüksek sesle ve tabanda törpüler. Herhangi bir endokardiyal üfürüm tespit edemedim. Nabzı 104, zayıftı ve içinde hafif bir heyecan vardı; hayır düzensizlik veya aralıklılık. Sıcaklık 98.40; dil temizliği; karaciğer normal; bağırsaklar düzenli; yemek için bir arzu hissetti, ancak yemeklerden sonra rahatsız edici bir tokluk hissi yaşadı. Otuz ons geçiyordu idrar günlük, çok renkli, şu anda berrak, ancak daha önce biraz zaman serbest bir şekilde biriktirir. Şeker ve albümin içermez.

**igokcek** · 03 July 2012, 07:33

Galium verum sulu özü, baş ve boyun kanseri hücre hatlarının hareketliliğini güçlü bir şekilde engeller ve mukozal keratinositleri toksik DNA hasarına karşı korur.

Marianne Schmidt¹, Christine Polednik¹, Jeanette Rulo¹, Rudolf Hagen¹
Bağlantılar yıkılmak Üyelik

¹Kulak Burun Boğaz Anabilim Dalı, Wuerzburg Üniversitesi, D-97080 Wuerzburg, Almanya.

PMID: 25017936
DOI: 10.3892/veya.2014.3316

Soyut

Lady's Bedstraw olarak da bilinen Galium verum, Avrupa ve Asya'ya özgü otsu bir bitkidir ve çoğu durumda kaynatma olarak uygulanan bir antikanser ilacı olarak geleneksel tıpta kullanılmıştır. Bir Galium verum kaynatma işleminin baş ve boyun kanseri hücre dizileri HLaC78 ve FADU üzerindeki etkisi analiz edildi ve her iki hücre dizisinde yüksek dozlarda toksik olduğu kanıtlandı. Sitotoksisitenin, karsinom hücre dizilerinde p-glikoprotein (MDR-1) ekspresyonundan etkilendiği görülmüştür. Mukozal keratinositler, MDR-1 ekspresyonundan yoksun olmalarına rağmen, yüksek Galium konsantrasyonlarına karşı sadece düşük hassasiyet göstermiştir. Ölümcül olmayan Galium özü dozları, Matrigel kaplı yüzeyler üzerinde sferoid bazlı istila analizi ile gösterildiği gibi, güçlü hareketlilik inhibitörleri olarak hareket etti. İstilanın inhibisyonu, istilacı HLaC78 hücre hattında önemli ölçüde daha belirgindi. Matriks metalloproteinazlar MMP-2 ve MMP-9 ve bunların inhibitörleri TIMP-1/-2'nin mRNA ekspresyon analizi, FADU hücrelerinde 8 saatlik bir Galium ekspresyonundan sonra önemli TIMP-1 upregülasyonu ortaya çıkardı. Bununla birlikte jelatinolitik aktivite, HLaC78'deki Galium özünden etkilenmedi, FADU hücrelerinde MMP-2/-9 aktivitesi, Galium özütü ile inkübasyondan sonra biraz arttı. Primer mukozal keratinositlerde, Galium kaynatma DNA'yı sigara dumanındaki en toksik DNA ajanlarından biri olan benz[a]pirene karşı korumuştur. Sonuç olarak Galium özü, baş ve boyun kanserinde önleyici ve/veya eşlik eden bir terapötik yaklaşım olarak faydalı olabilir. HLaC78'de Galium özünden etkilenmedi, FADU hücrelerinde MMP-2/-9 aktivitesi, Galium özü ile inkübasyondan sonra biraz arttı. Primer mukozal keratinositlerde, Galium kaynatma DNA'yı sigara dumanındaki en toksik DNA ajanlarından biri olan benz[a]pirene karşı korumuştur. Sonuç olarak Galium özü, baş ve boyun kanserinde önleyici ve/veya eşlik eden bir terapötik yaklaşım olarak faydalı olabilir. HLaC78'de Galium özünden etkilenmedi, FADU hücrelerinde MMP-2/-9 aktivitesi, Galium özü ile inkübasyondan sonra biraz arttı. Primer mukozal keratinositlerde, Galium kaynatma DNA'yı sigara dumanındaki en toksik DNA ajanlarından biri olan benz[a]pirene karşı korumuştur. Sonuç olarak Galium özü, baş ve boyun kanserinde önleyici ve/veya eşlik eden bir terapötik yaklaşım olarak faydalı olabilir.

**igokcek** · 03 July 2012, 07:33

Yeni Dermatokozmetik Ürünlerin Tasarımı İçin Malzemeler Olarak Galium verum'dan Gelen Antioksidanlar

Delia Turcov , ¹Ana Simona Barna , ^1,^*Adriana Trifan , ²Alexandra Cristina Blaga , ¹Alexandra Maria Tanasă , ¹ ve Daniela Suteu ^1,^*
Georgia Ouzounidou, Akademik Editör
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
¹ Kimya Mühendisliği Fakültesi ve Çevre Koruma “Cristofor Simionescu”, “Gheorghe Asachi” Teknik Üniversitesi, 71 A Mangeron Blvd., 700050 Iasi, Romanya
² Eczacılık Fakültesi, “Grigore T. Popa” Tıp ve Eczacılık Üniversitesi, Universitatii Caddesi, No. 16, 700115 Yaş, Romanya
^* Yazışma: moc.oohay@anrabanomisi (ASB); moc.oohay@76uetusanad (DS)

İlişkili Veriler
Veri Kullanılabilirliği Bildirimi
Git: Soyut
Bu çalışmanın amacı, polifenoller ve flavonoidler kaynağı olarak Moldova'nın (Rediu-Iasi bölgesi, Romanya) spontan florasından bitki ekstraktlarını kullanarak cilt üzerindeki oksidatif stres etkilerini önlemek için yeni dermato-kozmetik formüller elde etmektir. Bitki özleri (ham ve kurutulmuş Galium verum'dan)sp.) şu şekilde elde edildi: soğuk klasik maserasyon (M), ısı geri akış ekstraksiyonu (HTE) ve ultrason destekli ekstraksiyon (UAE). Ekstreler spektrofotometrik yöntemle (polifenoller ve flavonoidler içeriği ve DPPH antioksidan aktivite değerlendirmesi için) karakterize edildi. Oksidatif stresin cilt üzerindeki mücadele edici ve/veya hafifletici etkilerini değerlendirmek için, bu ekstraktlardan birini içeren emülsiyonların detaylandırılması ile çalışmaya devam edilmiştir. Emülsiyonlar, zaman içindeki kararlılık belirlenerek ön olarak karakterize edildi. Elde edilen sonuçlar, bu yeni ürünlerle tedavi edilen cilt üzerinde gerçekleştirilen dermatolojik testler ve mikrobiyolojik stabiliteyi belirlemek için bu emülsiyonların daha derin karakterizasyonu yönünde araştırmaları teşvik etmektedir.

Anahtar Kelimeler: Galium verum , antioksidan, ekstraksiyon, dermato-kozmetik ürün, bitkisel ekstrakt
Git: 1. Giriş
Yüzlerce yıllık olmasına rağmen geleneksel tıp, modern tıpla onun önemli bileşenlerinden birini paylaşır: biyoaktif bileşenlerin kaynağı. Sentetik ilaçlara kıyasla düşük yan etkiler nedeniyle ve çok sayıda araştırmaya rağmen, insanlık tarafından bilinen en eski sağlık hizmeti biçimi olan bitkiler [ 1 ], sağlığın korunmasında ve birçok sağlığın iyileştirilmesinde yararlı olan biyoaktif içerik maddelerini tüketmemişlerdir. koşullar.

Geleneksel bir şifalı bitki olarak uzun bir geçmişe sahip olan Galium türleri, güvenli, erişilebilir ve etkili bir doğal sağlık ilacı olduklarını kanıtladıkları için son yıllarda yoğun araştırmalara dikkat çekti. galyum sp. Rubiaceae familyasına ait olup çok yıllık otsu çiçekli bitkilerdir. Tüm dünyaya (Afrika, Asya, Kuzey Amerika, Avrupa) yayılmış 650 kadar Galium [ 2 ] türü vardır . Türlerin üçte birinden fazlası Avrupa boyunca dağılmıştır. Adı, peynir elde etmek için bu bitkinin süt kesmede temel kullanımını yansıtan Yunanca “gala” kelimesinden gelmektedir. galyumsp. geleneksel tıpta yaygın olarak kullanılan bazı bitkileri etkileyici bir iç ve dış koşullar aralığında temsil eder. Bununla birlikte, bu bitkinin tam olarak bilinmesine ve optimum kullanımına yönelik bilimsel çalışmalar, diğer bitki familyalarına kıyasla çok fazla değildir. Son yıllarda Galium sp. özellikle Galium sp açısından zengin yerel spontan floraya sahip bölgelerde yoğunlaşmıştır : Sırbistan, Slovakya, Romanya ve Ukrayna [ 3 , 4 , 5 ]. Bilimsel literatürde bildirilen türler şunlardır: G. verum , G. mollugo (çit karyolası, sahte bebeğin nefesi), G. album , G. rakip , G. pseudoaristatum , G. purpureum , G. aparine (satır, karyola, av otu, kaz otu).

Romanya'da altısı sarı çiçekli yaklaşık 38 tür tespit edilmiştir [ 2 , 4 , 6 , 7 , 8 ]. Bunlar arasında G. verum (hanım karyolası); G. mollugo L. (çit karyolası); G. aparine L. (satır veya yapışkan ot); G. odoratum L. (syn. Asperula odorata, Scop. Veya woodruff); G. rakip ; G. pseudoaristatum ; G. purpureum (syn. Asperula purpurea, kırmızımsı karyola); G. ruboides L.; G. schultestt West (orman karyolası);G. albüm Değirmen .

İki tür iyi bilinmektedir, sarı çiçek salkımına sahip Galium verum ve beyaz çiçek salkımına sahip Gallium mollugo . Terapide en sık kullanılan üç tür vardır: Galium aparine L., Galium odoratum L. ve Galium verum L. Galium verum'un ilk geleneksel tıbbi kullanımları kolleretik, idrar söktürücü veya spazmolitik tedaviydi. G. purpureum ile birlikte en yüksek toplam fenolik ve flavonoid bileşime sahip Galium verum'un çiçeklerinde ve yapraklarında karmaşık ve zengin bir fitokimyasal içerik olduğunu gösteren ayrıntılı araştırmalar vardır.. Tespit edilen başlıca bileşenler iridoid glikozitler, terpenler, fenolik asitler, flavonoidler, polisakkarit kompleksi, aldehitler, alkoller, antrakinonlar, asitler, az miktarda tanenler, saponinler, mumlar, pigmentler, C vitamini ve esansiyel yağlara aittir [ 1 , 5 , 6 , 9 , 10 ].

Zamanla fark edilen Galium türlerinin yararlı etkileri nedeniyle , artık başta bağışıklık sistemi, anti-enflamatuar süreçler, detoksifikasyon ve oksidatif stresi içeren çeşitli sağlık bozukluklarına yardımcı olduğu düşünülen galenik ilaçlar ve diyet takviyeleri bulunmaktadır. Romanya genelinde ilgilendiğimiz alanlarda yaygın olarak yayılmış türler göz önüne alındığında, Gallium verum'un rapor edilen biyolojik aktiviteleri aşağıda sunulmuştur .tablo 1.

tablo 1
Galium verum ekstraktının biyolojik aktivitesi .

İç kullanım	Üriner taş şikayetleri, İskorbüt, Dropsy, Histeri, Epilepsi, Gut, Burun kanaması, Mide sorunları, İshal, Skorbutik, sıra sıra ve damla şeklinde şikayetler, Antistres—immünomodülatör, Piyelit, Sistit, Karaciğer bozuklukları, Kardiyovasküler hastalıklar, Tiroid, yumurtalık, adrenal ve glukokortikoid hormon sentezi uyarımı (in vitro).	Antioksidan (DPPH, ABTS in vitro analizleri tarafından araştırılmış ve kanıtlanmıştır), Sitotoksik (boyun kanseri hücre dizileri HLaC78 ve FADU'da yüksek dozlarda araştırılmış ve kanıtlanmıştır: hücre hareketliliği ve istilası güçlü inhibisyon, sigaralarda benzo[a]piren toksisitesine karşı DNA koruması) , Koruyucu: hepatik koruyucu, timus koruyucu, Antimikrobiyal (antibakteriyel ve antifungal aktivite) (su, alkol, kloroform özü): Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris , Candida albicans , Endokrin sistem: morfolojik değişiklikler hipotalamus-hipofiz-adrenal eksen nörosekresyon aktivitesinin artmasına neden olur, Antihemolitik aktivite, Kolinesteraz aktivasyonu, Spesifik olmayan savunma mekanizması Gram - pozitif mikroorganizmalara ( S. aureus , L. monocytogenes ) karşı Detoksik , Antibakteriyel , antifungal	[ 1 , 9 , 11 ]
Harici kullanım	Sessiz tümörler, Memenin strumöz şişlikleri ve tümörleri, Sedef hastalığı, Gecikmiş yara iyileşmesi, Kanserli ülser, Meme kanseri, Bakteriyel ve mantar enfeksiyonları, Parazitozlar, Dişeti iltihabı, Kozmetik amaçlı	[ 1 , 2 , 7 , 12 ]

Ayrı bir pencerede aç
Git:

2. Galium Türlerinden Ekstrakt Elde Etme ve Karakterize Etme Yöntemleri
Hızlı, uygun maliyetli, kapsamlı ve tekrarlanabilir bir prosedürle yüksek kalite, güvenlik ve verimli bir ekstraksiyon elde etmek için ekstraksiyon protokolleri sürekli olarak optimize edilir. Şimdiye kadar Galium türleri için araştırılan bazı ekstraksiyon teknikleri vardır [ 7 , 9 , 11 , 12]: (i) 7 gün boyunca %20, %30, %50, %60, %70 veya %96 etanol veya metanol ile hidro-alkolik solüsyonda maserasyon; (ii) metanol içinde süzülme; (iii) Ultra ses destekli ekstraksiyon; (iv) Geri akış ekstraksiyonu; (v) NaCl ve doğal derin ötektik solvent ortamı ve ultrason destekli dispersif sıvı-sıvı faz mikro ekstraksiyonu. Bu ekstraksiyon tekniklerinin incelenmesi ve uygulanması, katı oranı: sıvı, solvent tipi, ekstraksiyon maddesinin hacmi ve konsantrasyonu, ekstraksiyon süresi gibi çalışma parametrelerinin bir dizi varyasyonuna dayanır.

Galium ekstraktlarının kalitatif ve kantitatif karakterizasyonu için çeşitli fizik-kimyasal yöntemler kullanılmıştır , örneğin: kromatografik analiz (HTLC, HPLC) [ 9 ]; Klorojenik ve kafeik asitler için MS tespiti ile desteklenen HPLC [ 6 ]; Bazı flavonların LC/MS-MS kantitatif analizi; Spektroskopi deneyi-Elektron Paramanyetik Rezonans (EPR) [ 9 ]; HPLC-DAD-MS/MS [ 12 ]; UHPLC [ 12 ]; HPLC-PDA [ 7 ].

Bu yöntemlerin yanı sıra, biyolojik olarak aktif ekstraktların ve/veya bileşiklerin müteakip kullanım yönüne uygun olarak bir dizi spesifik yöntem kullanılmıştır, örneğin: antioksidan değerlendirmesi (hücresiz modeller: H202, NO _türlerine_karşı ) , (DPPH), Trolox eşdeğer antioksidan kapasitesi (TEAC), toplam polifenol içeriği (TPC)) [ 9 , 12 ], dişi sıçanlarda in vivo deneyler, biyokimyasal analizler [ 9 ]; İstatistiksel ölçümler [ 9 ]; İmmünomodülatör aktiviteyi test etmek için lenfosit blast transformasyonu (RLBT) reaksiyonu [ 12 ]; ve G. aparinin immünomodülatör potansiyeli (sulu ekstrakt bileşiklerinde en yüksek) [12 ].

Bu çalışmanın amacı, ciltteki antioksidan stresle mücadelede, insanların yaşam kalitelerinin iyileştirilmesine ve sağlanmasına katkı sağlayacak, ekolojik ve etkili yeni ürünler elde etmektir. Bu anlamda Galium verum içeren bir dizi dermatokozmetik emülsiyonetken madde olarak ekstrakt hazırlanmış ve karakterize edilmiştir. Ekstrakt, farklı sıvı-katı ekstraksiyon yöntemleri (maserasyon (M), termal reflü ekstraksiyonu (HTE) ve ultrason yardımlı ekstraksiyon (sono-extraction-UAE)) kullanılarak elde edildi. Bu yöntemlerin etkinliği bir dizi parametreye göre değerlendirildi ( katı/sıvı oranı, ekstraksiyon süresi ve ekstraksiyon çözücü konsantrasyonu) ekstraksiyon verimi hesaplanarak. Elde edilen ekstraktlar, ekstrakte edilen biyolojik olarak aktif bileşiklerin ana sınıflarının kantitatif tayini ile karakterize edildi. Elde edilen emülsiyonlar, bir dizi parametrenin ardından stabiliteleri açısından incelendi. zamanla (pH, iletkenlik, faz homojenliği, mikrobiyolojik kararlılık).

Git: 3. Sonuçlar ve Tartışmalar
3.1. Kullanılan Ekstraksiyon Tekniklerinin Etkinliğinin Değerlendirilmesi
Ekstraksiyon yöntemleri olarak maserasyon, ısı reflü ekstraksiyonu ve ultrason destekli ekstraksiyon kullanıldı. Verimlilikleri, katı/sıvı oranı, temas süresi, bitki durumu (yeşil veya kuru) ve çözücü özütleme bileşimi gibi her teknik için belirlenen parametrelere göre hesaplanan özütleme derecesi kullanılarak takdir edildi. Bitki işlemenin her şekli için elde edilen sonuçlar: yeşil ve kurutulmuş, içinde gösterilmiştir.Tablo 2VeTablo 3. Bu amaçla, bitki ekstraktları Poleko SLW53 model termostatik fırında (Pol-Eko-Aparatura sp.j., Wodzisław Śląski, Polonya) (sıcaklık 50°C'ye kadar) 5 mL numune ekstraktının tamamen buharlaştırılmasıyla kalıntı elde etmek üzere işlendi. °C).

Tablo 2
Taze Galium verum bitkisi durumunda kullanılan sıvı-katı ekstraksiyon yöntemlerinde elde edilen ekstraksiyon derecesi .

Maserasyon (M)	M1 cr	8 gün	1:15	%30	9.57
M2 cr	%50	10.46
M3 cr	%70	10.70
M4 cr	8 gün	1:20	%30	11.55
M5 cr	%50	10.31
M6 cr	%70	11.95
M7 cr	8 gün	1:30	%30	12.00
M8 cr	%50	12.57
M9 cr	%70	14.28
M10 cr	4 gün	1:15	%50	9.81
M11 cr	11 gün	1:15	%50	11.31
Isı Geri Akışı Ekstraksiyonu (HTE)	R1 cr	60 dakika	1:20	%30	13.19
R2 cr	1:20	%50	10.79
R3 cr	1:20	%70	14.38
R4 cr	1:15	%50	14.40
R5 cr	1:30	%50	10.79
R6 cr	30 dk	1:20	%50	15.59
R7 cr	90 dakika	1:20	%50	13.58
Ultrason destekli ekstraksiyon (BAE)	ABD 1 cr	4 dakika	1:20	%30	3.19
ABD 2 cr	%50	2.80
ABD 3 cr	%70	2.39
ABD 4 cr	4 dakika	1:15	%50	1.49
ABD 5 cr	4 dakika	1:30	%50	6.02
ABD 6 cr	2 dakika	1:20	%50	3.19
ABD 7 cr	6 dakika	1:20	%50	2.80

Ayrı bir pencerede aç Tablo 3

Kuru Galium verum bitkisi durumunda kullanılan sıvı-katı ekstraksiyon yöntemlerinde elde edilen ekstraksiyon derecesi .

Maserasyon (M)	M1 sz	8 gün	1:15	%30	26.59
M2 sz	%50	26.59
M3 sz	%70	22.11
M4 sz	8 gün	1:20	%30	28.34
M5 sz	%50	28.29
M6 sz	%70	27.54
M7 sz	8 gün	1:30	%30	29.31
M8 sz	%50	28.06
M9 sz	%70	27.43
M10 sz	4 gün	1:15	%50	34.40
M11 sz	11 gün	1:15	%50	33.75
Isı Geri Akışı Ekstraksiyonu (HTE)	R1 sn	60 dakika	1:20	%30	33.59
R2 sz	60 dakika	1:20	%50	33.19
R3 sz	60 dakika	1:20	%70	34.38
R4 sz	60 dakika	1:20	%50	31.82
R5 sz	60 dakika	1:30	%50	31.82
R6 sz	30 dk	1:20	%50	33.60
R7 sz	90 dakika	1:20	%50	32.77
Ultrason Yardımlı Ekstraksiyon (BAE)	ABD 1 sn	4 dakika	1:20	%30	15.18
ABD 2 sz	%50	14.77
ABD 3 sz	%70	12.30
ABD 4 sz	4 dakika	1:15	%50	13.80
ABD 5 sz	4 dakika	1:30	%50	16.19
ABD 6 sz	2 dakika	1:20	%50	15.2
ABD 7 sz	6 dakika	1:20	%50	17.6

Ayrı bir pencerede aç
Elde edilen ve sunulan deneysel verilerin analiziTablo 2VeTablo 3incelenen ekstraksiyon işleminin, ekstraksiyon için kullanılan bitkinin durumuna (kuru veya taze) ve uygulanan ekstraksiyon tekniğine bağlı olduğunu açıkça vurgulamaktadır. Aynı teknik içerisinde katı/sıvı oranı, ekstraksiyon süresi ve ekstraktan konsantrasyonu da önemlidir. Ekstraksiyon tekniği ne olursa olsun, ekonomiklik kriteri de dikkate alındığında en iyi sonuç veren çözücünün %50 etanol konsantrasyonu olduğunu fark etmek çok kolaydır.

En iyi ekstraksiyon verimleri, aynı koşullarda, ıslak bitkiye kıyasla neredeyse iki kat verimden gözlemlenen kurutulmuş bitki durumunda elde edildi. İlk açıklama, kurutulmuş bitkinin (% 8,4 nem ile) numunelerde daha büyük miktarlarda kullanılması olabilir, çünkü taze bitki, kurutma sırasında kaybedilen önemli miktarda suya (% 69,25) ve daha uçucu olan bir miktara sahiptir. kimyasal bileşikler.

Her iki bitki türü için de genel olarak kullanılan ekstraksiyon tekniklerinin etkinlik sırası şu şekildedir: geri akış ekstraksiyonu, maserasyon ve ultrasonik destekli ekstraksiyon.

Aynı ekstraksiyon tekniği durumunda, ekstraksiyon veriminin ekstraksiyon için kullanılan çözücünün konsantrasyonuna, ekstraksiyon süresine ve ayrıca kullanılan katı/sıvı oranına bağlı olduğu açıktır. Böylece, Maserasyon (M) durumunda, maksimum verimler %34,4 (S/L + 1:15; 4 gün; solvent %50) ve %33,75 (S/L + 1:15; 11 gün; solvent) arasında kaydedilir. %50 kurutulmuş bitki durumunda ve %14,28 (S/L = 1:30; 8 gün; solvent %70) ile %12,57 (S/L = 1:30; 8 gün; solvent %50) arasında yeşil bitki örneği. Isı Geri Akış Ekstraksiyonu (HTE) kullanıldığında, maksimum verimler 34,38 (S/L = 1:20; 60 dk; solvent %70) ve %33,59 (S/L = 1: 0; 60 dk; solvent %30) arasında elde edildi. ), kurutulmuş bitki kullanıldığında sırasıyla %33,6 (S/L = 1:20; 30 dk; solvent %50) ve %15,59 (S/L = 1:20; 30 dk; solvent %50) ile 14 arasında. yeşil bitki durumunda sırasıyla %4 (S/L = 1:15; 60 dk; solvent %50), %14,38 (S/L = 1:20; 60 dk; solvent %70). Ultrason Destekli Ekstraksiyon (UAE) kullanılarak aşağıdaki maksimum verimler elde edildi: %17,6 (S/L = 1:20; 6 dk; solvent %50) ve %16,19 (S/L = 1:30; 4 dk; solvent 50) %) kurutulmuş bitki için ve %6,02 (S/L = 1:30; 4 dk; solvent %50) ve %3,19 (S/L = 1:20; 4 veya 2 dk; solvent %30 veya %50) arasında yeşil bitki durumunda.

Elde edilen ekstraksiyon verimi açısından bakıldığında, kurutulmuş bitki durumunda en iyi verimlerin elde edildiği sonucuna varabiliriz. Ek olarak, ekstraksiyon yöntemleri olarak, sırasıyla 1:20 katı/sıvı oranı ve %50 ekstraksiyon solventi (etil alkol) konsantrasyonu, içinde Maserasyon (M) koşullarında termal geri akışlı Ekstraksiyon (HTE) kullanımı S/L = 1:15 koşulları ve %50 ekstraksiyon çözücüsü (etil alkol) konsantrasyonu, en iyi sonuçların elde edilmesini sağlar.

Çalışmamıza kurutulmuş Galium verum bitkisi kullanılarak devam edilmiştir.

3.2. Toplam Polifenol ve Toplam Flavonoid Testi
Kurutulmuş Galium verum bitkisinin özütlenmesi için iki kopya halinde gerçekleştirilen deneylerin sonuçları, özütleme tekniğine ve bunları etkileyen faktörlere bağlıydı ve aşağıda sunulmuştur.Şekil 1Veşekil 2. Verilerin analiziŞekil 1polifenollerin toplam içeriği ile ilgili olarak, çalışılan ekstraksiyon yönteminin geliştirilmesinde dikkate alınan etkileyen faktörlere bağlı olarak bir dizi bilgiye izin verir. Ekstraksiyon ajanının farklı konsantrasyonları durumunda, en yüksek polifenol miktarları, HTE'nin üç varyantında ekstrakte edildi, fark çalışma koşulları tarafından yaratıldı: S/L = 1 koşullarında 71.539 μg GAE/g :20; 60 dakika ve %70 etil alkol konsantrasyonu, 63,703 μg GAE/g ardından S/L koşulları = 1:20; S/L koşulları altında 60 dakika ve %50 etil alkol konsantrasyonu ve 58,307 μg GAE/g = 1:20; 60 dakika ve %30 etil alkol konsantrasyonu. Bitki durumu göz önüne alındığında: en yüksek polifenol miktarları HTE durumunda ekstrakte edildi: 78.894 μg GAE/g (S/L koşulları altında = 1:30; 60 dakika ve %50 etil alkol konsantrasyonu), HTE: 63,703 μg GAE/g (S/L koşulları altında = 1:20; 60 dakika ve %50 etil alkol konsantrasyonu); M: 59,669 μg GAE/g (S/L koşulları altında = 1:30; 8 gün ve %50 etil alkol konsantrasyonu). Ekstraksiyon süresi ile ilgili olarak, en yüksek polifenol miktarları da HTE ile elde edilmiştir: 1:20 S/L koşullarında 69.089 μg GAE/g, %50 konsantrasyonda ekstraksiyon maddesi ve 90 dakikalık bir ekstraksiyon süresi; 1:20 S/L koşullarında 64,585 μg GAE/g, %50 konsantrasyon özütleyici ve 30 dakikalık ekstraksiyon süresi, sırasıyla 1:20 S/L koşullarında 63,703 μg GAE/g, %50 konsantrasyon özütleyici ve ekstraksiyon süresi 60 dk. en yüksek polifenol miktarları da HTE ile elde edilmiştir: 1:20 S/L koşullarında 69.089 μg GAE/g, %50 konsantrasyon ve 90 dakikalık ekstraksiyon süresi ile özütleyici; 1:20 S/L koşullarında 64,585 μg GAE/g, %50 konsantrasyon özütleyici ve 30 dakikalık ekstraksiyon süresi, sırasıyla 1:20 S/L koşullarında 63,703 μg GAE/g, %50 konsantrasyon özütleyici ve ekstraksiyon süresi 60 dk. en yüksek polifenol miktarları da HTE ile elde edilmiştir: 1:20 S/L koşullarında 69.089 μg GAE/g, %50 konsantrasyon ve 90 dakikalık ekstraksiyon süresi ile özütleyici; 1:20 S/L koşullarında 64,585 μg GAE/g, %50 konsantrasyon özütleyici ve 30 dakikalık ekstraksiyon süresi, sırasıyla 1:20 S/L koşullarında 63,703 μg GAE/g, %50 konsantrasyon özütleyici ve ekstraksiyon süresi 60 dk.

Resim, çizim vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı bitkiler-11-02454-g001.jpg'dir.

Şekil 1
Kullanılan ekstraksiyon yöntemine ve dikkate alınan fiziksel parametrelere bağlı olarak Galium verum kuru bitkisinden elde edilen bitkisel ekstraktların toplam polifenol (TPC) bileşikleri içeriği (μg GAE/g) . Koşullar: ( a ) HTE—katı/sıvı oranı = 1:20; 60 dakika; M— katı/sıvı oranı = 1:15; 8 gün ve BAE— katı/sıvı oranı = 1:20; 4 dk; ( b ) solvent konsantrasyonu = %50; HTE—60 dk, M—8 gün ve BAE —4 dk; ( c ) solvent konsantrasyonu = %50; HTE— katı/sıvı oranı = 1:20; M— katı/sıvı oranı = 1:15; ve BAE—katı/sıvı oranı = 1:20.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı bitkiler-11-02454-g002.jpg'dir.

şekil 2
Kullanılan ekstraksiyon yöntemine ve dikkate alınan fiziksel parametrelere bağlı olarak Galium verum kuru bitkisinden elde edilen bitkisel ekstraktlar için toplam flavonoid bileşikleri (TFC) içeriği (mg QE/g) . Koşullar: ( a ) HTE—katı/sıvı oranı = 1:20 ve ekstraksiyon süresi - 60 dakika; M—katı/sıvı oranı = 1:15 ve ekstraksiyon süresi -8 gün; UEA- katı/sıvı oranı = 1:20 ve ekstraksiyon süresi - 4 dk; ( b ) THE—çözücü konsantrasyonu = %50 ve ekstraksiyon süresi—8 gün; BAE—solvent konsantrasyonu = %50 ve ekstraksiyon süresi—4 dk; ( c ) HTE- solvent konsantrasyonu = %50 ve katı/sıvı oranı -1:20; M- çözücü konsantrasyonu = %50 ve katı/sıvı oranı -1:15; UEA—solvent konsantrasyonu = %50 ve katı/sıvı oranı -1:20.

Sonuç olarak, polifenol ekstraksiyonu için en iyi sonuçlar şu koşullarda HTE ile elde edilmiştir: S/L oranı 1:30, solvent konsantrasyonu %50 ve ekstraksiyon süresi 60 dakika. Bunu HTE izledi (S/L oranı 1:20, solvent konsantrasyonu %70 ve ekstraksiyon süresi 60 dakika).

Flavonoid içeriği söz konusu olduğunda, incelenen ekstraksiyon tekniklerinin performansları da dikkate alınan değişken parametreye göre analiz edildi.

Ekstraksiyon solventinin konsantrasyonu kriter olarak alındığında, en iyi sonuçlar HTE (%70) durumunda elde edilmiştir—35,998 mg QE/g, ardından 33,436 mg QE/g ile maserasyon (M). Katı/sıvı oranının değeri bir değerlendirme kriteri olarak dikkate alındığında, en iyi sonuçlar HTE (%1:30/50/60 dk)—37,984 mg QE/g, ardından maserasyon (1:15/ %50, 8 gün). Ekstraksiyon süresi değerlendirme kriteri olduğunda, en iyi sonuçlar 33.436 mg QE/g ile M (8 gün) ve ardından 32.481 mg QE/g ile HTE (%1:20/%50/90 dk) durumunda elde edildi. .

Sonuç olarak, flavonoid içeriği durumunda en iyi sonuçlar, 1:30 S/L oranı koşullarında, %50 solvent konsantrasyonunda ve 60 dakikalık ekstraksiyon süresinde HTE ekstraksiyonu (37.984 mg QE/g), ardından HTE kullanıldığında elde edildi. (35,998 mg QE/g) S/L oran koşulları 1:20, çözücü konsantrasyonu %70 ve ekstraksiyon süresi 60 dakika, maserasyona eşit (33,436 mg QE/g) S/L oran koşulları 1:15, %50 solvent konsantrasyonu ve 8 günlük ekstraksiyon süresi.

Analiz edilen bitki özleri ile ilgili olarak: (1) flavonoidlerin miktarı, polifenollerinkinden daha yüksektir. Bu gözlem, polifenollere (en kolay ve en sık tanımlanan Rosmarinik asit) kıyasla flavonoidlerin (örneğin Rutin, Quercetin ve türevleri, Kaempferol) daha fazla niteliksel ve niceliksel çeşitliliğini belirten literatürdeki diğer çalışmalarla da uyumludur [ 3 ]; (2) en yüksek miktarda ekstre edilmiş biyoaktif bileşiklere yol açan ekstraksiyon yöntemi geri akış ekstraksiyonudur (HTE), ardından maserasyondur (M); (3) HTE tekniğini 1:30 S/L oranı koşullarında ve %50 ekstraksiyon çözücü konsantrasyonunda uygulayarak, hem flavonoidlerin (37.984 mg QE/g) hem de polifenollerin (78.894 μg GAE/g) en yüksek miktarları elde edilir.

3.3. Antioksidan Aktivite Tayini
Antioksidan kapasiteyi değerlendirmek için, Galium verum kurutulmuş bitkisinden (R3 sz) ekstrakt seçildi ve en iyi ekstraksiyon verimini sunan yöntemle elde edildi (HTE-reflü sıcaklıkta: S/L = 1:20; EtOH %70). Karşılaştırma için, aynı koşullar altında elde edilen yeşil bitki özünü (R3 cr) test ettik. Elde edilen sonuçlar,Tablo 4.

Tablo 4
İncelenen ekstraktların TPC, TFC ve antioksidan aktiviteleri.

R3 cr	3,68 ± 0,11	7,62 ± 0,39
R3 sz	12,19 ± 0,28	28,25 ± 0,88

Ayrı bir pencerede aç
Tespitler üç kopya halinde yapıldı ve veriler ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunuldu. Kısaltmalar: ABTS—2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin) 6-sülfonik asit; DPPH—1,1-difenil-2-pikrilhidrazil.

Tablo 4seçilen ekstraktlar için yapılan analizler, flavonoidler ve polifenollerin içeriğine ilişkin tespitlerin sonuçlarını da içerir. Elde edilen değerlerin aşağıda sunulan sonuçların eğilimi ile uyumlu olduğu görülmektedir.Şekil 1Veşekil 2, sırasıyla, kurutulmuş bitkinin kullanılması durumunda büyük miktarlar için. Bu daha yüksek miktarlar ayrıca daha yüksek antioksidan aktivitelere yol açar.

3.4. Galium verum Ekstraktları İçeren Dermatokozmetik Emülsiyonların Ön Değerlendirmesi
Bir dermato-kozmetik preparatın kalitesini değerlendirmek için bir kriter, farklı koşullardaki stabilitedir. Bu anlamda, elde edilen dermato-kozmetik emülsiyonların stabilitesi, preparasyondan üç dakika sonra gerçekleştirilen bir dizi fiziksel analiz yoluyla ön olarak değerlendirildi: formülasyondan 24 saat sonra, oda sıcaklığında 7 gün ve 21 gün depolamadan sonra. emülsiyon kabı. Aşağıdaki fiziksel analizler yapıldı: pH tayini, santrifüj ve girdap testleri, duyusal değerlendirme (koku, renk, doku ve genel görünüm), iletkenlik ölçümü ve mikroskobik görüntülerin incelenmesi [13 , 14 ] . Elde edilen sonuçlar şu şekilde özetlenmiştir:Tablo 5.

Tablo 5

Galium verum Ekstresi ile Emülsiyonların Ön Karakterizasyonu .

Santrifüjlemeden sonra emülsiyonun görünümü
girdap testinden sonra emülsiyonun görünümü
Santrifüj ve vorteks sonrası stabilite	Bozulmamış doku ve görünüm	Hafif köpükten ince üst katman	İlk santrifüjlemeden sonra - emülsiyonun kararsız olabileceği sonucuna varan faz ayrımından dolayı yeşil sıvının ince üst tabakası. Hazırlamanın 7. gününde santrifüjlemeden sonra, emülsiyon bozulmamış ve stabil bir dokuya sahiptir.
pH (başlangıç/7 gün sonra/14 gün sonra)	5.002/5.1/5.1	5.001/5.4/5.2	5.003/5.9
Organoleptik analiz	Renk : parlak beyaz, hafif parlak. Doku : homojen, sıkı, hafif/yağsız, 72 saatten sonra topak algılanmadı. Emülgatör ve çiçek suyuna özgü zayıf koku .	Renk : parlak beyaz, hafif parlak. Doku : homojen, sıkı, hafif/yağsız, A2 ve C2'den daha yüksek viskozite, 72 saatten sonra topaklanma saptanmadı. Emülgatör ve çiçek suyuna özgü zayıf koku	Renk : parlak beyaz, hafif parlak. Doku : başlangıç -homojen, sıkı, hafif/yağsız, 72 saatten sonra topaklanma saptanmadı. Emülgatör ve çiçek suyuna özgü zayıf koku .
25 °C'de 7 günlük depolamanın ardından mikroskobik görüntü
İletkenlik ölçümü, mS, 25 °C'de 7/21 günlük depolamadan sonra	0,27/0,31	0,13/0,15	0,36/0,37

Ayrı bir pencerede aç

3.4.1. pH Tayini
Derinin pH'ının 5,6 ile 5,5 arasında değiştiği bilinmektedir. Hazırlanan emülsiyonlar üzerinde yapılan pH ölçümleri depolama süresince değişiklik göstermediklerini göstermektedir (4,99 ila 5,04) (Tablo 5). Bu özellik, kararlı iletkenlik değerlerine ve aynı zamanda herhangi bir kimyasal bozunmanın bulunmamasına atfedilebilir, böylece emülsiyonların topikal uygulama için uygun olduğu ve cilde uygulandığında tahriş riskinden kaçınmak için kabul edilebilir olduğu kabul edilebilir.

3.4.2. Faz Ayrımı
İncelenen sistemin bileşen fazlarının kararlılığı, merkezkaç ve titreşim kuvvetinin etkisi altında incelenmiştir. İşlemler tamamlandığında, fazın davranışını belirlemek için formülasyonlar incelenmiştir. Gözlemlenen sonuçlar şu şekilde özetlenmiştir:Tablo 5.

3.4.3. Mikroskobik Görüntüler
Normal sıcaklık koşullarında 7 gün bekletildikten sonra hazırlanan emülsiyon örneklerinden mikroskobik görüntüler alınmıştır. Görüntüler (Tablo 5) depolama süresi boyunca uyumluluğun ve faz homojenliğinin korunmasını öneren numunenin homojenliğini gösterir.

3.4.4. İletkenlik Ölçümleri
Birincil emülsiyonun iç fazında hapsolmuş aktif maddenin (bitki özü) davranışını belirlemek için kondüktometrik analiz yapıldı. Bir elektrolit ne kadar çok salınırsa, aktif maddenin harici sulu fazda serbestçe hareket ettiği ve etkilerin o kadar az kalıcı olacağı bilinmektedir. Depolama sırasında iletkenlik değerleri artarsa, bunun nedeni aktif maddenin difüzyonu, iç ve sulu fazların birleşmesi veya ozmotik basınç nedeniyle yağ filminin tahrip olması ve iç sulu fazın sızması olabilir [ 13 , 14 , 15 ]. Sistematikleştirilmiş ölçüm sonuçlarıTablo 5, çalışılan emülsiyonların zaman içindeki stabilitesini gösterir.

Analiz edilen emülsiyonların stabilitesi ile ilgili olarak yapılan testler, kimyasal ve mikrobiyolojik stabilite çalışmalarının ardından tüm formülasyonların iyi bir mekanik ve fiziksel stabilite sunduğunu göstermiştir. Doğal ürünün dahil edilmesi, çalışılan kozmetik formülasyonların stabilitesini olumsuz etkilememiştir.

Git: 4. Malzemeler ve Yöntemler
4.1. Bitki malzemeleri
Bu çalışmada kullanılan bitkisel materyal Galium verum sp. Haziran 2021'de Iasi-Rediu coğrafi bölgesinde (Romanya) maksimum çiçeklenme döneminde hasat edilen türler. Seçilen ekstraksiyon teknikleri için bitkilerden sadece çiçekler kullanılmıştır. Bir kısmı toplandıktan hemen sonra küçük parçalara ayrılarak işlendi, bir kısmı da karanlık ve iyi havalandırılan bir ortamda kurutulduktan sonra bir gıda değirmeni (2-5 mm arası partikül boyutu) kullanılarak öğütüldü. Ezilmiş kuru bitki, daha sonra kullanılmak üzere kağıt torbalarda veya kahverengi cam kaplarda saklandı. Ezmeden sonra, analiz için hazırlanan numunelerin nemi bir Kern termo terazisi kullanılarak belirlendi. Yeşil örneklerin nemi %69.25 ve kuru örneklerin nemi %8.4 idi.

4.2. Ekstraksiyon Prosedürü
Ekstraksiyon, aşağıdaki varyantlarda geleneksel ve geleneksel olmayan ekstraksiyon prosedürleri kullanılarak yapılmıştır: Isı Geri Akış Ekstraksiyonu (HTE), oda sıcaklığında maserasyon (M), Ultrason Destekli Ekstraksiyon (UAE), bir çalışma protokolü kullanılarak (ekstraksyon süresi, tuz/solvent oranı ve ekstraksiyon) çözücü konsantrasyonları) önceki çalışmalarımıza [ 16 , 17 ] dayalı olarak ve bazı ön testler yapıldıktan sonra belirlendi (veriler gösterilmemiştir). Tüm ekstraksiyon tekniklerinde, ekstraksiyon çözücüsünü hazırlamak için %96 etanol kullanıldı: %30, %50, %70 v / v konsantrasyonlu hidroalkolik çözelti.

Bitki özleri elde etmenin teknolojik akışı iki aşamadan oluşur: ilk aşama, bitkilerin hasat edilmesi, kurutulması, öğütülmesi ve paketlenmesinden oluşan birincil işleme ile temsil edilir.

İkinci aşama, katı-sıvının kendisinin ekstraksiyonundan oluşuyordu ve bu, proses solvent konsantrasyonunun etkinliğini, ekstraksiyon sürelerini ve katı/sıvı oranını etkileyen bir dizi fiziksel parametre dikkate alınarak gerçekleşti.

Ekstraksiyon verimliliğini değerlendirmek için ekstraksiyon verimini kullandık. Bunu hesaplamak için, her bir bitki ekstraktından 5 mL'lik bir numune, termostatik bir fırın kullanılarak 50 °C'ye kadar sabit bir sıcaklıkta kuruyana kadar (tam kurutma) buharlaştırıldı. Ekstraksiyon verimi şu bağıntıyla hesaplandı:
η% =Mr e s id _sen _⋅Vdış t r a c t _Ndış t r a c t _⋅Ms o l id _ örnek _ _ _ _ _⋅ 100
(1)
burada m _tortu, kuruyana kadar buharlaştırmadan sonra elde edilen tortunun kütlesini temsil eder, (g); V _ekstraktı —kuruluğa kadar buharlaştırma için kullanılan bitkisel ekstrakt örneğinin hacmi, (mL); n _ekstrakt — sıvı-katı ekstraksiyon tekniği ile elde edilen toplam ekstrakt hacmi, (mL); m _{katı numune} —sıvı-katı ekstraksiyon işleminde kullanılan bitkisel tozun kütlesi (g).

4.3. Toplam Polifenol İçeriği
Bitkisel ekstraktlardaki polifenol içeriğinin belirlenmesine yönelik tüm deneyler iki kez yapıldı. Polifenolik bileşiklerin miktarını değerlendirmek için, standart referanslar olarak gallik asit kullanılarak Folin-Ciocalteu yöntemi [ 18 ] kullanıldı ve sonuçlar (μg GAE/mL ekstraktı) cinsinden verildi.

Tespitler için numuneler aşağıdaki şekilde hazırlandı: Folin-Ciocalteu reaktifi (0,5 mL), 0,5 mL Galium verum sp. ekstraktlar ve sistem 5 dakika oda sıcaklığında bekletildi ve ardından 8 mL %7.5'lik sulu sodyum karbonat solüsyonu eklendi ve karışım oda sıcaklığında 2 saat karanlıkta inkübe edildi. Konsantrasyonun belirlenmesi için kalibrasyon eğrisi yöntemi kullanıldı. Standartlar ve numuneler, maksimum 760 nm dalga boyunda bir Shimadzu UV-1280 UV-VIS Spektrofotometre (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonya) kullanılarak kaydedildi.

4.4. Toplam Flavonoid İçeriği
Bitkisel ekstraktlardaki flavonoid içeriğinin belirlenmesine yönelik tüm deneyler iki kez yapıldı. Toplam flavonoidlerin miktarının tayini, flavonoidler ile alüminyum klorür arasındaki kompleksleşme reaksiyonuna dayanan spektrofotometrik yöntemle gerçekleştirilmiştir [ 19 , 20 ]. Kısaca, bitkisel ekstrakt (1 mL) numunesine %2 sulu alüminyum klorür (1 mL) çözeltisi ilave edildi ve karışım, oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edildi. Bundan sonra, absorbans değerleri bir Shimadzu UV-1280 UV-VIS Spektrofotometre (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonya) kullanılarak 510 nm'de okunmuştur. Flavonoid ölçümü için kullanılan referans standartlar kuersetin (QE) idi ve sonuçlar μg QE/mL ekstresi cinsinden verildi.

4.5. DPPH ve ABTS Yöntemleri Kullanılarak Antioksidan Aktivitenin Belirlenmesi
4.5.1. 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil Radikal Temizleme Testi (DPPH)
Tespit , üzerinde küçük değişiklikler yaptığımız Grochowski [ 20 ] tarafından açıklanan yöntem temelinde gerçekleştirildi . Bu nedenle, 150 uL 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) %0.004 metanol çözeltisine 50 uL numune eklendi. Oda sıcaklığında ve karanlıkta 30 dakika inkübasyondan sonra 517 nm'de absorbansları okundu. DPPH radikal süpürme aktivitesi, miligram Trolox eşdeğerleri (mg TE/mL ekstraktı) olarak ifade edildi.

4.5.2. 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin) 6-sülfonik asit Radikal Temizleme Testi (ABTS)
Tespitler küçük değişikliklerle Grochowski'nin yöntemine [ 20 ] göre yapılmıştır. ABTS• ^{+, 7 mM 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin) 6-sülfonik asit (ABTS) çözeltisinin 2,45 mM potasyum persülfat (1:1,}v / v ) ile karıştırılmasıyla üretilmiştir. Karışım karanlıkta, oda sıcaklığında 12-16 dakika bekletildi. Analizin başlangıcında ABTS solüsyonu, 734 nm'de 0.700 ± 0.02'lik bir absorbansa ulaşmak için metanol ile seyreltildi. Daha sonra 200 µL ABTS solüsyonuna 30 µL örnek ilave edilerek kuvvetlice karıştırıldı. Oda sıcaklığında 30 dakika inkübasyondan sonra 734 nm'de absorbans okundu. ABTS radikal süpürme aktivitesi, miligram Trolox eşdeğerleri (mg TE/mL ekstresi) olarak ifade edildi.

4.6. Dermatokozmetik Uygulamalar ile Emülsiyon Elde Edilmesi
1 mL Galium verum ekstraktına (HTE: S/L = 1:20/solvent konsantrasyonu = %50) dayalı olarak üç tip ticari W/O emülsiyonu (A, B ve C) hazırlandı . Bu emülsiyonlar, genel bileşenleri şu şekilde karakterize edilen, kullanılan bazların (emülgatör, yardımcı emülgatör ve stabilizatör) kimyasal bileşimi ile farklılaştırılmıştır:Tablo 6. A, B ve C bazlarının bileşimindeki üç ana bileşenin seçimi, yüksek geçirgenlik yoluyla ürünün performansını artırmak ve hasta/müşteri için hoş bir doku ve optimal duyusal özellikler sağlamak amacıyla yapılmıştır.

Tablo 6

Emülsiyonların formülasyonu için ana bileşenler.

emülgatör	- 3 farklı emülsiyon için 3 farklı bileşik - çok yönlü ve esnek O/W, - üstün duyusal profiller, - hoş görünüm ve hafif doku
ko-emülgatörler	- kararlılığı destekler, - viskozitelerini arttırır ve kaygan fakat aynı zamanda kaygan bir doku verir, - diğer bileşenlerin cilde daha iyi nüfuz etmesine yardımcı olur
sulu faz	çiçek suları
sabitleyici	- jelleştirici ajan - emülsifiye kremleri ve çeşitli kozmetik preparatları stabilize etmeye yardımcı olur - su içeren kozmetik bileşimlerin viskozitesini artırır
koruyucular	çok çeşitli kozmetik preparatların verimli bir şekilde korunmasını sağlar: kremler, losyonlar, tonerler, jeller, hijyen ürünleri. Ekonomik bir koruyucudur, kullanımı kolaydır ve organik kozmetikte kullanımı onaylanmıştır.
Aktif içerik	bitkisel özler

Ayrı bir pencerede aç
Nihai emülsiyonu elde etmek için daha önce tarafımızdan açıklanan bir protokol [ 17 ] kullanıldı, buna göre yağlı (A) ve sulu (B) fazlar 75 °C'ye ısıtıldı, ardından sulu fazın üzerine yağlı faz (A) eklendi. faz (B). Fazların karıştırılması, 15.000 rpm'de çalışan bir rotor-stator homojenleştirici (ESGE Zauberstab M 160 G Gourmet) kullanılarak yapıldı. Elde edilen karışım 40°C'ye (bir buz banyosu üzerinde) soğutuldu, ardından aktif bileşenler ve koruyucu madde (faz C) eklendi. Son olarak HA oligo ve HMW, Hamamelis çiçeklerinin suda çözülmesiyle elde edilen bir jel olarak eklendi. Emülsiyonlarla ilgili daha ileri çalışmalar için 15 g numune tartıldı ve yeterli kapasiteye sahip vitray kaplara yerleştirildi. Bu şekilde hazırlanan numuneler analizlerine kadar maksimum 90 gün soğuk odalarda muhafaza edilmiştir. 4.7. Ön Emülsiyon Karakterizasyonu
Emülsiyonlar, belirli koşullar altında organoleptik özellikleri ve kararlılığı vurgulamak için bir dizi analizle önceden karakterize edildi [ 13 , 14 , 15 ]. Böylece organoleptik değerlendirmeler, pH tayini, merkezkaç veya titreşim kuvveti etkisi altında fazların ayrılması, iletkenlik tayini takip edildi. Herhangi bir analizden önce numunelerin oda sıcaklığına dönmesi sağlandı

4.7.1. pH Tayini
Dermato-kozmetik emülsiyonların pH değerlerinin tespiti için dijital pH Metre (Hanna Instrument) kullanıldı ve protokol şu şekildeydi: 0,5 g emülsiyon 50 mL distile suda eritildi ve iki saat dinlenmeye bırakıldı. pH değeri, elektrotun doğrudan 24.0 ± 2.0 °C'deki numune çözeltisine sokulmasıyla ölçülmüştür. pH testi için distile su ile seyreltmeyi takiben emülsiyonlar sütsü bir görünüm sergiledi ve homojen kaldı.

4.7.2. Faz Ayrımı
Santrifüjleme için test, 25 °C'de ve 3000 rpm'de 30 dakika boyunca bir model XC-Spinplus santrifüjüne konulan 5 g numune kullanılarak gerçekleştirildi. Vorteks testi durumunda, Multi Speed Vortex MSV-3500 (Grant Instruments Ltd. Cambs, İngiltere), 5 g emülsiyon numunesi kullanıldı ve deney koşulları: 25 °C'de ve 3000 rpm'de 30 dakika idi.

4.7.3. Mikroskobik Görüntüler

Normal sıcaklık koşulları altında 7 gün depolamadan sonra hazırlanan emülsiyon numunelerinden bir binoküler mikroskop Optika B-159 (OPTIKA Srl, Ponteranica (BG)—İtalya), büyütme—1000x kullanılarak mikroskobik görüntüler alınmıştır.

4.7.4. İletkenlik Ölçümleri
İletkenlik ölçümleri, 20 gün boyunca 25 °C ortam sıcaklığında saklanan emülsiyon numuneleri üzerinde taşınabilir bir Hanna Instruments tipi kondüktometre ile gerçekleştirilmiştir.

Git: 5. Sonuçlar
Antioksidan içeriği (flavonoidler ve toplam polifenoller olarak belirlenir) açısından Galium verum özü tatmin edicidir ve bazı dermato-kozmetik preparatların formülasyonunda kimyasal varlıkların doğal olanlarla değiştirilmesi fikrine karşılık gelir.

Bir dermato-kozmetik emülsiyonun hazırlanmasına Galium verum ekstraktının dahil edilmesi, cilt tarafından kolayca emilen ve bileşenleri mekanik, fiziksel ve biyouyumluluk açısından stabil olan ince bir dokuya sahip bir müstahzar elde etmemizi sağlar. . Bu sonuçlar, bu preparasyonlar için reoloji, mikrobiyolojik stabilite, in vivo testler ve ön dermatolojik testler hakkında daha ileri testlerin geliştirilmesini teşvik etmektedir.

Git: teşekkürler
Uygulanamaz.

Git: Finansman Tablosu
Bu araştırma herhangi bir dış finansman almamıştır.

Git: Yazar Katkıları
Kavramsallaştırma, DS; metodoloji, DS ve ASB; doğrulama, DS; biçimsel analiz, DT, ASB, AT, ACB ve AMT; soruşturma, DT, ASB, AT ve ACB; yazma—orijinal taslak hazırlama, DS; yazma—inceleme ve düzenleme, DS ve ACB; süpervizyon DS Tüm yazarlar makalenin yayınlanmış versiyonunu okumuş ve kabul etmiştir.

Git: Kurumsal İnceleme Kurulu Beyanı
Uygulanamaz.

Git: Bilgilendirilmiş Onam Beyanı
Uygulanamaz.

Git: Veri Kullanılabilirliği Bildirimi
Uygulanamaz.

Git: Çıkar çatışmaları
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Git: Dipnotlar
Yayıncının Notu: MDPI, yayınlanan haritalardaki ve kurumsal bağlantılardaki yetki iddiaları konusunda tarafsız kalır.

Git: Referanslar

1. Al-Snafi AE Galium verum –Bir inceleme. Hint Am. J. Ecz. bilim 2018; 05 :2142–2149. doi: 10.5281/zenodo.1214980. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Hanganu D., Burtescu RF, Petrescu S., Pripon Furtuna FR, Chise E., Turcus V., Benedec D., Oniga I., Olah NK Galium türleri –Polifenolik içerik ve antioksidan potansiyelleri. Hop Med. Bitkiler. 2018; 1–2 :84–93. [ Google Akademik ]
3. Zaichikova SG, Bokov DO, Kiselevskii MV, Antsyshkina AM, Bondar AA, Prostodusheva TV, Shchepochkina OY, Gegechkori VI Lady's Bedstraw ( Galium verum L.) Bitki Ekstraktının GC-MS ile Kimyasal Bileşiminin Belirlenmesi. Eczacılık. J.2020 ; 12 :857–863. doi: 10.5530/pj.2020.12.123. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Ghita G., Necula R., Trifan A., Gille E., Zamfirache MM, Stanescu U. Galium verum L. ve Galium album mill'in bazı örneklerinin fitokimyasal çalışmasına ilişkin araştırmalar . bilim Ann. Al. I. Cuza Üniv. Yaş. 2012; 58 :45–50. [ Google Akademik ]
5. Shynkovenko IL, Ilyna VT, Kovalyova MA, Goryacha VO, Golembiovska IO, Koshovyi MO Galium aparin ve Galium verum özlerinin saponinleri . Vìsnik Çiftliği. 2018; 4 :16–23. doi: 10.24959/nphj.18.2225. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Mocan A., Crisan G., Vlase L., Ivanescu B., Badarau SA, Arsene LA Romanya'dan Dört Galium Türü ( Rubiaceae ) Üzerinde Fitokimyasal Araştırmalar. Farmacia. 2016; 64 :95–99. [ Google Akademik ]
7. Mocan A., Diuzheva A., Badarau S., Moldovan C., Andruch V., Carradori S., Campestre C., Tartaglia A., De Simone M., Vodnar D., et al. Beş Romen Galium Türünün Biyotahlillerle Birlikte Çok Bileşenli Fenolik Model Tayini için Sıvı Faz ve Mikrodalga Yardımlı Ekstraksiyonlar. moleküller. 2019; 24 :1226. doi: 10.3390/moleküller24071226. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
8. Tamas M., Stana D., Timis S. Galium verum L. ve G. mollugo L.'nin karşılaştırmalı fitokimyasal araştırması. Not. Bot. Hort Agrobot. Cluj-Napoca. 2006; 34 :18–20. [ Google Akademik ]
9. Farcas DA, Mot CA, Zagrean-Tuza C., Toma V., Cimpoiu C., Hosu A., Parvu M., Roman I., Silaghi-Dumitrescu R. Chemo-mapping and biochemical-modulatary and antioksidan/prooksidan Dişi sıçanlarda akut kısıtlama ve karanlık stres sırasında Galium verum ekstraktının etkisi . PLoS BİR. 2018; 13 :e0200022. doi: 10.1371/journal.pone.0200022. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
10. Tava A., Biazzi E., Ronga D., Avato P. Batı İtalyan Alplerinden Galium verum L. ve Cruciata leavipes Opiz'in Uçucu Bileşenlerinin Belirlenmesi . moleküller. 2020; 25 :2333. doi: 10.3390/moleküller25102333. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
11. Bradic J., Petkovic A., Tomovic M. Galium L. Cinsinin Bazı Türlerinin Fitokimyasal ve Farmakolojik Özellikleri ( Galium Verum ve Mollugo ) Sırp. J. Uzm. klinik Res. 2021; 21 :187–193. doi: 10.1515/sjecr-2017-0057. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Ilina T., Skowronska W., Kashpur N., Granica S., Bazylko A., Kovalyova A., Goryacha O., Koshovyi O. Cleavers Herb'den İnfüzyonların İmmünomodülatör Aktivitesi ve Fitokimyasal Profili. moleküller. 2020; 25 :3721. doi: 10.3390/moleküller25163721. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
13. Mahmood T., Akhtar N. Yeşil çay ekstraktı yüklü bir kozmetik çoklu emülsiyonun stabilitesi. bilim Dünya J.2013; 2013 :153695. doi: 10.1155/2013/153695. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Kim KM, Oh HM, Lee JH Kesme karıştırma işlemiyle kozmetiklerin emülsiyon stabilitesinin kontrol edilmesi. Kore Aust. Rheol. J.2020 ; 32 :243–249. doi: 10.1007/s13367-020-0023-4. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Hu YT, Ting Y., Hu JY, Hsieh SC Emülsiyon sistemlerinin fonksiyonel özelliklerini incelemek için teknikler ve yöntemler. J. Gıda Anal. 2017; 25 :16–26. doi: 10.1016/j.jfda.2016.10.021. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Daraban GM, Zaharia C., Suteu D., Puitel A., Tataru-Farmus RE, Badeanu M. Moldova bölgesinin (Romanya) Rom spontan florasından bitkisel özüt özelliklerinin ön değerlendirmesi. Biyoteknoloji Letonya 2021; 26 :2594–2605. doi: 10.25083/rbl/26.3/2594.2605. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Turcov D., Barna AS, Apreutesei (Ciuperca) OT, Trifan A., Puitel AC, Suteu D. Yüksek Katma Değerli Dermato-Kozmetik Ürünlerin Elde Edilmesi İçin Artık Safran Biyokütlesinden ( Crocus sativus L.) Biyoaktif Bileşiklerin Değerlendirilmesi. BioResource. 2022; 17 :4730–4744. doi: 10.15376/biores.17.3.4730-4744. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Pavun L., Đikanovic P., Jelikic-Stankov M., Đurdevic D., Uskokovic-Markovic S. Ticari elma sularında flavonoidlerin ve toplam polifenol içeriğinin belirlenmesi. Çek J. Gıda Bilimi. 2018; 36 :233–238. doi: 10.17221/211/2017-CJFS. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Grochowski DM, Uysal S., Aktumsek A., Granica S., Zengin G., Ceylan R., Locatelli M., Tomczyk M. Potentilla thuringiaca'nın in vitro enzim inhibitör özellikleri, antioksidan aktiviteleri ve fitokimyasal profili . fitokimya Letonya 2017; 20 :365–372. doi: 10.1016/j.phytol.2017.03.005. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Luca SV, Kulinowski L., Ciobanu C., Zengin G., Czerwinska ME, Granica S., Xiao J., Skalicka-Woźniak K., Trifan A. İki Cynara scolymus L. varyetesinin fitokimyasal ve multi-biyolojik karakterizasyonu : Biyo-fonksiyonel bileşenler olarak potansiyel büyük ölçekli yetiştirme ve değerlendirmeye bir bakış. End. Bitkileri Prod. 2022; 178 :114623. doi: 10.1016/j.indcrop.2022.114623. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]

**igokcek** · 10 July 2012, 16:28

Galium verum L. ekstraktının miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarına karşı kardiyoprotektif etkileri

Jovana Bradiç¹, Nevena Jeremic¹, Anica Petkoviç¹, Jovana Jeremic¹, Vladimir Zivkoviç², Ivan Srejoviç², Yasemin Sretenoviç², Stevan Matik³, Vladimir Jakovljeviç^{2 4}, Marina Tomoviç¹
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Tıp Bilimleri Fakültesi, Eczacılık Bölümü, Kragujevac Üniversitesi, Kragujevac, Sırbistan.
²Tıp Bilimleri Fakültesi, Fizyoloji Bölümü, Kragujevac Üniversitesi, Kragujevac, Sırbistan.
³Patoloji Bölümü, Kragujevac Klinik Merkezi, Kragujevac, Sırbistan.
⁴İnsan Patolojisi Anabilim Dalı, 1. Moskova Devlet Tıp Üniversitesi IM Sechenov, Moskova, Rusya.

PMID: 30632812
DOI: 10.1080/13813455.2018.1551904

Soyut

Çalışmamızın amacı, Galium verum'un metanol ekstraktının kimyasal bileşimini belirlemek ve iskemiden sonra izole edilmiş sıçan kalbinin fonksiyonel iyileşmesi ve redoks durumu üzerindeki etkilerini değerlendirmekti. Sıçanlar, 28 gün boyunca 500 mg/kg G. verum metanol ekstraktı ile tedavi edilen hayvanları içeren kontrol ve G. verum grubuna ayrıldı . Kalp fonksiyonu parametreleri ve oksidatif stres belirteçleri tahmin edildi. Hücre morfolojisi hematoksilen ve eozin (HE) boyama ile değerlendirildi. Sonuçlarımız ilk kez G. verum ekstraktının kardiyak kontraktiliteyi, sistolik ve diyastolik fonksiyonu ve ayrıca iskemiden sonra kalbin yapısal hasarını koruduğunu gösterdi. Ayrıca, G. verumekstrakt, antioksidan enzimlerin aktivitesini modüle etti ve pro-oksidanların üretimini hafifletti.

Anahtar Kelimeler: Galium verum; iskemi-reperfüzyon hasarı; oksidatif stres; sıçan kalbi.

**igokcek** · 10 July 2012, 16:38

Cleavers Bitkisinden İnfüzyonların İmmünomodülatör Aktivitesi ve Fitokimyasal Profili

Tetiana Ilina , ¹Weronika Skowrońska , ²Natalia Kashpur , ³Sebastian Granica , ^2,^*Agnieszka Bazylko , ²Alla Kovalyova , ¹Olga Goryacha , ¹ ve Oleh Koshovyi ¹
Halina Ekiert, Akademik Editör , Agnieszka Szopa, Akademik Editör ve Derek J. McPhee, Akademik Editör
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
¹ Ulusal Eczacılık Üniversitesi, 53-Pushkinska str, 61002 Kharkiv, Ukrayna; moc.liamg@68ynataniyli (TI); moc.oohay@mrahpalla (AK); moc.liamg@ysongagleh (OG); moc.liamg@iyvohsok.helo (Tamam)
² Farmakognozi Bölümü ve Fitoterapinin Moleküler Temeli, Varşova Tıp Üniversitesi, 1 Banacha str, 02-097 Varşova, Polonya; lp.ude.muw@aksnorwoks.akinorew (WS); lp.ude.muw@oklyzab.akzseinga (AB)
³ Mechnikov Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Enstitüsü, Ukrayna Ulusal Tıp Bilimleri Akademisi, 14/16-Pushkinska str., 61057 Kharkiv, Ukrayna; ten.rku@ruphsak.ilatan
^* Yazışma: moc.liamg@acinargs veya lp.ude.muw@acinargs ; Tel.: +48-22-57-20-953
Git: Soyut

G. aparinin (satırlar) toprak üstü kısımlarından elde edilen özler, British Herbal Pharmacopeia'da monografi ile bitkisel bir ilaç oluşturur. Avrupa pazarında, Galium'dan oluşan çeşitli ilaçlar ve gıda takviyeleri bulunmaktadır .özler. Halk hekimliğinde, cilt hastalıklarını tedavi etmek için Avrupa, Asya ve Amerika'da topikal olarak baltalar kullanıldı. Çeşitli ilaçlarda satırlar, insan vücudunun savunma tepkisini etkileyen immünomodülatör aktif bir bitki olarak da listelenir. Bu çalışmanın amacı, parçalayıcıların ve biyoaktif fraksiyonların ham infüzyonunun in vitro immün sistemi uyarıcı aktivitesini ve antioksidan potansiyelini araştırmaktı. Lenfositlerin, lenfosit blast transformasyonu (RLBT) yönteminin reaksiyonundaki fonksiyonel aktivitesi, immünomodülatör aktivite deneyleri ve 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), nitrik oksit (NO) ve hidrojen peroksitin doğrudan temizlenmesi için kullanıldı ( H ₂ Ö ₂) antioksidan aktivitenin incelenmesi için seçilmiştir. Hem ham ekstraktın hem de fraksiyonların önemli immüno-uyarıcı ve süpürücü aktiviteler gösterdiği gösterilmiştir. Elde edilen veriler, baltaların cilt enfeksiyonları ve yaralar için topikal ilaç olarak geleneksel kullanımını kısmen doğrulamaktadır.

Anahtar Kelimeler: Galium aparin , ayırıcılar, antioksidan aktivite, immünomodülatör aktivite, polifenoller, cilt
Git: 1. Giriş

Galium aprine L. (Rubiaceae) yaygın olarak mızrak, balta, karyola, yakalama otu veya bektaşi otu olarak bilinir; lifli kökleri, çırpınan dik gövdesi, donuk, sarımsı-yeşil yaprakları ve 4-8 köşeli küçük beyaz çiçekleri olan tek yıllık bir bitkidir. [ 1 ]. Cleavers, Büyük Britanya ve Kanarya Adaları'ndan Japonya'ya kadar Avrupa, Kuzey Afrika ve Asya bölgelerine geniş bir şekilde dağılmıştır ve çoğunlukla kısmi gölgede büyür, ancak güneşli dönemlere de dayanabilir. Genel olarak, iyi drene edilmiş herhangi bir toprakta gelişir [ 2 ]. Satırların toprak üstü kısımlarından elde edilen ekstraktlar, British Herbal Pharmacopeia'da [ 3 ] monografisi olan bitkisel bir ilaçtır. Hastalar tarafından infüzyon şeklinde diüretik, alteratif, antiinflamatuar, tonik ve büzücü olarak kullanılır .]. Halk hekimliğinde, satırlar cilt hastalıklarını tedavi etmek için Avrupa, Asya ve Amerika'da topikal olarak kullanıldı [ 5 , 6 , 7 , 8 ]. Çeşitli hayvan hastalıklarının önlenmesi ve tedavisinde balta müstahzarının uygulanmasına ilişkin birkaç rapor da vardır [ 9 , 10 ]. Avrupa pazarında, balta özleri içeren çeşitli ilaçlar ve gıda takviyeleri bulunmaktadır. Birçoğu Martindale Referansında [ 11 ] listelenmiştir. Çeşitli ilaçlarda satırlar, insan vücudunun savunma tepkisini etkileyen immünomodülatör aktif bir bitki olarak listelenir. Satır içeren bazı ilaçlar, vücudun spesifik olmayan savunma mekanizmasını uyarıcı ve detokslayıcı olarak önerilmektedir.12 ]. Galium türlerinden bitkilerin toprak üstü kısımlarının fitokimyasal bileşimi üzerine yapılan önceki çalışmalar, iridoidler (esas olarak monotropein, asperulosidik asit ve asperulosid), flavonoidler (kuersetin ve kaempferol glikozitler) ve klorojenik asitler [ 13 , 14 , 15 , 16] ana bileşikler olarak içerdiklerini göstermiştir. ]. Ayrıca Galium bitkilerinde yapılan birkaç çalışmada bazı steroidler ve alkaloidler bulunmuştur [ 17 ]. Satırlardan elde edilen etanolik ekstraktlarla ilgili önceki araştırmamız, bunların bir miktar immün sistemi uyarıcı aktiviteye sahip olduğunu gösterdi. Etanolik ekstraktın başlıca klorojenik asit türevleri, flavonoidler ve bazı iridoidlerden oluştuğu da gösterilmiştir [ 18 ].

Biyolojik olarak aktif bileşiklerin farklı sınıflarında, özellikle polisakkaritlerde immünomodülatör etkiler keşfedildi [ 19 ]. Gerçekten de papatya ve hatmi polisakkaritleri, makrofajların ve granülositlerin fagositik aktivitesinin arttırılması yoluyla spesifik olmayan bir bağışıklık tepkisini uyaran Imupret kompozit karışım bitkisel ürünündeki aktif bileşenlerdir.

Lökositler, organizmanın cilt yaralanmalarına ve enfeksiyonlara karşı ilk savunma hattıdır [ 20 ]. Patojenlere karşı inflamatuar yanıtın oluşmasından sorumludurlar. Lenfositlerin harici faktörler, yani lipopolisakarit (LPS) tarafından aktivasyonunun ana biçimlerinden biri, önemli miktarlarda reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretilmesi/salınmasıdır. ROS bakteri tahribatına neden olur, ancak in vivo yara iyileşme süreci için faydalı olmayan hücre ölüm yollarını indükleyerek sağlıklı dokuları da etkileyebilir. İyileşme sürecinin hızlandırılmasına yönelik stratejilerden biri, antioksidan aktiviteye sahip ilaçların topikal olarak uygulanmasıdır [ 21 ].

Bu çalışmanın amacı, polisakkarit kompleksi (PSC), polifenolik kompleks (PPC) ve pektin (PC) olarak adlandırılan parçalayıcıların ve biyoaktif fraksiyonların ham infüzyonunun in vitro immün sistemi uyarıcı aktivitesini ve antioksidan potansiyelini araştırmaktı. Lenfositlerin fonksiyonel aktivitesi, lenfosit blast transformasyonu (RLBT) yönteminin reaksiyonunda, immünomodülatör aktivite deneyleri için kullanıldı ve antioksidan aktivitenin incelenmesi için DPPH, NO ve H202'nin doğrudan _temizlenmesi_yapıldı .

Git: 2. Sonuçlar

2.1. G. aparin Bitki Sulu Ekstraktının Fitokimyasal Taraması

G. aparin bitkisinin sulu ekstraktının fitokimyasal taraması, polisakkaritlerin, flavonoidlerin (flavonoller ve flavonlar) ve fenolik asit türevlerinin varlığını ortaya çıkardı ve elde edilen sonuçlar önceki çalışmalara karşılık geldi [ 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 ] . 2.2. BAF'lerin Ana Gruplarının Miktar Tayini

G. aparin otu sulu ekstraktındaki ana BAF gruplarının içeriği,tablo 1altında. tablo 1

G. aparin otu sulu ekstraktındaki ana fitokimyasal grupların içeriği .

sulu özü	283,9 ± 14,1	96,3 ± 4,8	18,7 ± 0,9 bir	2,6 ± 0,1 bir	13,3 ± 0,6 bir
PPC	187,6 ± 14,1	-	28,6 ± 0,6 milyar	3,6 ± 0,1 milyar	19,2 ± 0,5 b

Ayrı bir pencerede aç
Not: PPC = polifenolik kompleks, farklı harfler a, b—istatistiksel önemi gösterir p < 0.05.

Fitokimyasalların ana gruplarının nicelleştirilmesinde, ham ekstraktın %9,63 (96,3 μg/mg) polisakkaritler, %1,87 (18,7 μg/mg) hidroksisinamik türevler (klorojenik asit olarak ifade edilir), %0,26 (2,6 μg/mg) flavonoidler içerdiği tespit edilmiştir. rutin olarak ve %1,33 (13,3 μg/mg) polifenoller/tanenler, gallik asit olarak ifade edilir. Polisakkaritlerin ve pektinlerin çıkarılmasından sonraki PPC fraksiyonu, klorojenik asit olarak ifade edilen %2,86 (28,6 μg/mg) hidroksisinnamik türevler, rutin olarak ifade edilen %0,36 (3,6 μg/mg) flavonoidler ve %1,92 (19,2 μg/mg) polifenoller içerir. / tanenler gallik asit olarak ifade edilir.

Elde edilen sonuçlar, ham ekstraktın zengin bir fenolik kaynağı, özellikle hidroksisinnamik asit türevleri olduğunu kanıtladı. Ham ekstraktın iki ana fraksiyona (PPC ve PSC) ayrılması, seçilen modeller kullanılarak her bileşik grubunun biyoaktivitesinin araştırılmasına izin verdi. Bu yaklaşım, hangi fitokimyasalların geleneksel kullanımı bağlamında G. aparin ekstraktının genel aktivitesine katkıda bulunduğunu gösterebilir . İnfüzyon elde edildikten sonra kalan kalıntıdan PC üretimi ve etkinliğinin incelenmesi, G. aparin bitkisinin karmaşık işlenmesinin uygun olduğunu düşündürür. Ham ekstrakt ve PPC fraksiyonundaki baskın bileşiklerin miktar tayini, UHPLC-DAD-MS metodolojisi ile gerçekleştirilmiştir. 2.3. Araştırılan İnfüzyon ve BAF'lerin Kimyasal Bileşimi

UHPLC-DAD-MS ³ analizi, ham ekstrakt ve PPC fraksiyonunun on üç ana bileşik ( 1 – 13 ,Şekil 1,Tablo 2). Tespit edilen bileşikler, UV-Vis spektrumları ve MS spektrumlarına dayalı olarak karakterize edildi. Bileşim, önceki araştırmamızda analiz edilen etanolik ekstraktlarla hemen hemen aynıydı [ 18 ]. Kısaca, monotropein ( 1 ), desacetylasperulosidic asit ( 2 ) ve asperulosidic asit ( 4 ) olmak üzere üç ana iridoid tanımlanmıştır. Ek olarak, yedi klorojenik asit tespit edildi ve karakterize edildi ( 3 , 5 – 8 , 12 ve 13 ). MS spektrumlarının dikkatli analizi ve Clifford'a göre vekil standartlarla karşılaştırılması şunu gösterdi: 3 , 5 – 8 ,12 ve 13 şu şekilde tanımlandı: 3- O -trans-kafeoilkinik asit, 3- O -cis-kafeoilkinik asit, 5- O -trans-kafeoilkinik asit, 4- O -trans-kafeoilkinik asit, 5- O -cis- sırasıyla kafeoilkinik asit, 3,4- O -trans-dikaffeoilkinik asit ve 3,5- O -trans-dikaffeoilkinik asit [ 22 ]. Ekstrakt, iridoidler ve klorojenik asitlerin yanı sıra flavonoidler de içeriyordu ( 9 – 11 ). Bileşik 9 ve 11, quercetin 3- O -rhamnoglucoside-7- O olarak tanımlandı-sırasıyla glikozit ve rutin. Her iki bileşik de daha önce G. aparine'den elde edilen etanolik ekstraktlarda tespit edilmişti . Bileşik 10, bir çekirdek aglikon olarak kaempferol ile 9'un bir analoğu olarak tanımlandı . 9 ve 10'un benzerliklerinden dolayı bileşik 10 , geçici olarak kaempferol O -rhamnodihekzosid, büyük ihtimalle 3- O -ramnoglukozit-7- O -glukozit olarak tanımlandı . Bu bileşik ilk kez G. aparinde tespit edildi ve başka hiçbir Galium'da rapor edilmedi.türler. Önceki çalışmamızda, analiz edilen ekstrelerdeki düşük bolluk nedeniyle tespit edilmedi. 10'un kimyasal yapısını tam olarak doğrulamak için izolasyon ve spektral analiz gereklidir.

İçinde resim, çizim vb. bulunan harici bir dosya. Nesne adı moleküller-25-03721-g001.jpg'dir.

Şekil 1
350, 325 ve 240 nm'de temsili UHPLC-DAD-MS ^{3 kromatogramı.} Tablo 2

UHPLC-DAD-MS ve sulu ekstrakt ve PPC fraksiyonunun kantifikasyon verileri.

1	monotropein ^t	4.8	238	389	227 , 209b, 191, 165, 147, 137	183, 165, 153b, 137	5,270 ± 0,160	8,120 ± 0,112
2	desacetyloasperulosidic asit ^t	11.0	239	389	371, 227b , 209, 191, 183, 165, 139, 119	183b, 165	1,960 ± 0,030	3,064 ± 0,064
3	3- O - trans -kafeoilkinik asit ^c	16.3	300s, 324	353	191b, 179, 173, 135	-	0,966 ± 0,016	1,384 ± 0,098
4	asperulosidik asit ^t	20.9	237	431	371, 269 , 251b, 225, 165	225, 165b	0,524 ± 0,006	0,806 ± 0,021
5	3- O - cis -kafeoilkinik asit ^c	22.4	300s, 324	353	191b, 179, 173	-	0,080 ± 0,001	0,121 ± 0,004
6	5- O - trans -kafeoilkinik asit ^c	23.0	301, 324	353	191b , 179, 164	179b, 164	4,680 ± 0,080	7,124 ± 0,112
7	4- O - trans -kafeoilkinik asit ^c	24.8	300'lü, 325'li	353	191, 179, 173b	179, 173b	1.140 ± 0.020	1.754 ± 0.062
8	5-O-cis-caffeoylquinic acid ^c	27.4	299sh, 324	353	191b	-	0.191 ± 0.019	0.289 ± 0.011
9	quercetin 3-O-rhamnoglucoside-7-O-glucoside ^s	29.1	260, 352	771	609b, 301	343, 301b, 271, 255, 179	0.096 ± 0.003	0.140 ± 0.002
10	kaempferol O-rhamnodihexoside ^t	32.5	261, 342	755	593b, 285	533, 285b, 267, 257, 240	n.q.	n.q.
11	quercetin 3-O-rhamnoglucoside^s (rutin) ^s	41.4	261, 353	609	465, 343, 301b	343, 301b, 255	0.064 ± 0.002	0.098 ± 0.007
12	3,4-O-trans-dicaffeoylquinic acid ^c	46.4	301, 325	515	353b , 335, 299, 255, 203, 191, 179, 173, 135	191, 179, 173b, 135	0,095 ± 0,004	0,143 ± 0,009
13	3,5- O - trans -dikaffeoilkinik ^asitler	47.4	300s, 324	515	353b	191b, 179, 173	0,092 ± 0,006	0,150 ± 0,011

Ayrı bir pencerede aç
^{t —}Galium türleri hakkındaki literatür raporlarına dayalı geçici atama , ^c — Clifford ve ark. [ 22 , 23 ], ^{s —} kimyasal standartla karşılaştırma yapılmıştır, nq — sayısallaştırılmamış, kalın harflerle — MS ³ parçalanmasına tabi tutulmuş iyon.

Geliştirilen UHPLC-DAD yöntemi kullanılarak, tespit edilen on üç bileşikten on ikisinin miktarı belirlendi. Fenolik sadece ham ekstrakt ve PPC fraksiyonunda mevcuttu. PC ve PSC komplekslerinin analizi, hiçbir fenolik bulunmadığını gösterdi (veriler gösterilmemiştir). Kantifikasyon, ham sulu ekstraktın önemli miktarlarda iridoid içerdiğini, özellikle monotropein ( 1 ) ve deasetilasperulosidik asit ( 2 ) (sırasıyla 5.27 ve 1.96 µg/mg) içerdiğini ortaya çıkardı. Bu fitokimyasallar sınıfından üçüncü bileşik ( 4 ), 0.524 ug/mg konsantrasyonunda mevcuttu. Klorojenik asitler, analiz edilen örneklerde yüksek miktarlarda oluşan ikinci grup doğal ürünlerdir. Kafeoilkinik asit kompleksi esas olarak klorojenik asitten oluşuyordu ( 6, 4.68 µg/mg), neoklorojenik asit ( 3 , 0.966 µg/mg) ve kriptoklorojenik asit ( 7 , 1.140 µg/mg). Dikaffeoilkinik asit izomerleri ( 12 ve 13 ), analiz edilen numunelerde 0.1 µg/mg'nin altında miktarda mevcuttu. Klorojenik asitlerin trans izomerlerinin yanı sıra cis türevleri de tespit edildi ve miktarları belirlendi. Bununla birlikte, varlıkları ekstraksiyon prosedürü ile bağlantılı olabilir ve artefakt olarak kabul edilmelidir [ 22 ]. Analiz edilen numunelerde bulunan başlıca flavonoid, 0.96 ug/mg konsantrasyonunda mevcut olan bileşik 9'du . Rutin ( 11 ), 0.064 ug/mg konsantrasyonunda mevcuttu. Bileşik 10düşük bolluk nedeniyle ölçülmedi.

PPC fraksiyonunun analizi, ham sulu özüt ile aynı fenolikleri içerdiğini göstermiştir. Fenoliklerin dışında, ekstraksiyon prosedürü iridoidlerin varlığına neden olmuştur. Tüm bileşiklerin miktarı da ölçüldü. Ekstraktın işlenmesi fenolik bileşiklerin ve iridoidlerin konsantrasyonunda artışa neden olmuştur. İridoid içeriği 0.806 ile 8.120 µg/mg arasında değişmiş, klorojenik asit miktarı ise 0.121 ile 7.124 µg/mg arasında olmuştur. PPC fraksiyonundaki flavonoidler de ölçüldü ve içerik 9 için 0.140 µg/mg ve rutin için 0.98 µg/mg idi ( 11 ).

Spesifik olmayan kimyasal yöntemler için elde edilen sonuçları karşılaştırmak için her bir fitokimyasal grubun toplamları UHPLC kantifikasyonundan hesaplandı. Kafeoilkinik asit türevlerinin toplamı, ham ekstrakt için 7.244 µg/mg ve PPC için 10.965 µg/mg idi. UHPLC ile ölçülen flavonoid miktarı, ham ekstrakt için 0.160 ug/mg ve PPC fraksiyonu için 0.238 ug/mg idi. Son olarak, sulu ekstraktlardaki iridoitler, PPC fraksiyonu için 7.753 ug/mg ve 11.990 ug/mg olarak ölçüldü. Kimyasal yaklaşımla niceleme, bu yöntemlerin spesifik olmadığı ve diğer bileşik gruplarının niceleme sürecine müdahale edebileceği gerçeği göz önüne alındığında bariz olan daha yüksek bir miktar göstermiştir. Analiz edilen malzemede içeriklerinin çok yüksek olması beklenmediğinden, iridoitler kimyasal yöntemle ölçülmedi. 2.4. Lenfosit Blast Dönüşümünün İn Vitro Reaksiyonu

Sunulan araştırma, G. aparin bitki sulu özü, PPC, PSC ve PC kompleksinin immünomodülatör aktivitesine ilişkin bilinen ilk çalışmadır .

İncelenen tüm numunelerin, periferik kan mononükleer hücrelerinin dönüşümsel aktivitesini önemli ölçüde uyardığı tespit edilmiştir. İncelenen maddelerin etkisi altında, mononükleer hücrelerin %36,3-65,5'i proliferasyon sürecine dahil oldu; bu, maddelerin T- ve B-lenfositleri üzerindeki uyarıcı etkisini gösterir; bu, referans madde PHA'nınkinden daha yüksektir. PPC istisnası (Tablo 3). Tablo 3

G. aparinden elde edilen sulu özütün ve diğer maddelerin lenfosit blast transformasyonu (X ± m), n = 5 indeksleri üzerindeki etkisi .

sulu özü	150	60,8 ± 3,2 *
250	65,5 ± 3,3 *
500	61,6 ± 3,5 *
PPC	150	37,6 ± 2,6 *
250	39,8 ± 2,6 *
500	36,3 ± 2,3 *
PSC	150	48,7 ± 3,5 ^#
250	58,6 ± 3,2 *
500	55,7 ± 3,3 *
bilgisayar	150	39,0 ± 3,2 *
250	52,7 ± 4,1 *
500	59,3 ± 3,1 *
PHA	250	48,1 ± 2,1 ^#
Spontan RLBT	-	8,5 ± 0,7

Ayrı bir pencerede aç
Not: PPC = polifenolik kompleks; PSC = polisakarit kompleksi; PC = pektin; PHA = fitohemaglutinin; RLBT = lenfosit blast dönüşümünün reaksiyonu; *, ^# — p < 0.05, PHA ile karşılaştırıldığında, farklı belirteçler istatistiksel olarak anlamlı farklılıkları gösterir.

Lenfosit blast transformasyon modelinin sonuçlarının özeti,Tablo 3. Elde edilen veriler, G. aparine'den incelenmekte olan tüm maddelerin bir immünomodülatör potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.

En yüksek immün sistemi uyarıcı aktivite, referans madde PHA'nınkinden 1,36 kat daha yüksek olan 250 µg/mL'lik konsantrasyonda sulu ekstrakt için gözlendi. Şaşırtıcı bir şekilde, 500 ug/mL'lik bir konsantrasyonda lenfositlerin daha düşük uyarılması sağlandı. Bununla birlikte, gözlemlenen aktivite, pozitif kontrol PHA'sından önemli ölçüde daha yüksekti.

Ayrıca, G. aparinden elde edilen sulu özütün , daha önce araştırılan etanolik preparasyonlardan daha yüksek aktivite gösterdiği gözlenmiştir [ 18 ]. Bununla birlikte, sulu ekstrakttan polisakkaritlerin uzaklaştırılması, immünomodülatör aktivitede önemli bir azalma ile sonuçlanır. Gerçekleştirilen deneyler, PPC'nin etanolik ekstraktlarla karşılaştırılabilir şekilde, referans madde PHA'dan daha düşük aktivite gösterdiğini gösterdi [ 13 ].

PSC için belirlenen immünomodülatör aktivitenin seviyesi, PHA'nınkinden daha yüksekti, ancak sulu özütünkinden önemli ölçüde daha düşüktü. Elde edilen sonuçlar, G. aparin bitkisinden elde edilen sulu ekstraktta meydana gelen polisakkaritlerin ekstraktın genel aktivitesine fenoliklerden daha fazla katkıda bulunduğunu göstermiştir. İncelenen modelde polisakkaritlerin uzaklaştırılmasının immünostimülatör aktivitede bozulmaya neden olduğu gösterilmiştir.

PSC ve PC kompleksleri için oluşturulan aktivite karşılaştırıldığında, PC'nin aktivitesinin PSC'ninkinden önemli ölçüde daha düşük olduğu bulundu (Tablo 3). 2.5. Hücresiz Modeller Kullanan İnfüzyon ve BAF'lerin Antioksidan Aktivitesi

Ham ekstraktın ve fraksiyonlarının süpürme önleyici aktivitesi, hücresiz modellerde oluşturulmuştur. Analiz edilen numunelerin DPPH, H ₂ O ₂ ve NO türlerine karşı süpürme gücü belirlenmiştir (şekil 2). Ekstrakt ve fraksiyonların konsantrasyonları, doza bağlı etkinin gözlemlenebilmesi için seçilmiştir. En zayıf aktivite DPPH süpürme yeteneği durumunda gözlendi. Kullanılan en yüksek konsantrasyon olan 500 µg/mg'deki sulu ekstrakt, pozitif kontrol ile karşılaştırılabilir aktiviteye sahiptir. Bu oldukça zayıf bir sonuçtur. Ham ekstrakt ve PPC fraksiyonu benzer aktivite gösterirken, PC ve PSC fraksiyonları zayıf süpürme etkisine sahipti. Bu gözlem, antioksidan potansiyel gösteren herhangi bir fenolik veya iridoid içermemeleri ile uyum içindedir. _{H 2} O _2'nin süpürme aktivitesi durumundaen güçlü aktivitenin PPC fraksiyonuna sahip olduğu gösterildi. Pozitif kontrol olarak kullanılan 500 µg/mg askorbik asit ile karşılaştırıldığında 125 µg/mg konsantrasyonda önemli ölçüde daha iyi antioksidandı. Sulu ekstrakt önemli ölçüde daha zayıf aktivite gösterdi (şekil 2). _{Şaşırtıcı bir şekilde, H202} - tutucu ham ekstrakt durumunda, fenolikler ve _iridoitler içermeyen PC ve PSC fraksiyonları ile benzer şekilde hareket etti (şekil 2). Bu yöntemde enzimatik reaksiyon kullanılır ve PC/PSC fraksiyonunda bulunan bileşikler teste müdahale edebilir. PC ve PSC komplekslerinin ekstraktla karşılaştırıldığında zayıf aktivite göstereceğinden şüpheleniliyordu, ancak durum böyle değildi. Bu etkinin mekanizmasının ne olduğu açık değildir. En güçlü antioksidan potansiyeli NO temizleme deneylerinde gözlendi. Fraksiyonlar ve ekstrakt, 10 ila 125 ug/mg konsantrasyon aralığında test edildi. PC ve PSC kompleksleri neredeyse hiç aktivite göstermedi. sulu ekstraktın ve PPC fraksiyonunun süpürme gücü, tüm konsantrasyon aralığında karşılaştırılabilirdi, ancak pozitif kontrol için gözlemlenenden önemli ölçüde daha güçlüydü (şekil 2).

İçinde resim, çizim vb. bulunan harici bir dosya. Nesne adı moleküller-25-03721-g002.jpg'dir.

şekil 2
DPPH ( A ), H ₂ O ₂ ( B ) ve NO ( C ) türleri, AA—askorbik asit (pozitif kontrol) karşısında ham ekstrakt ve BAF'lerin süpürme aktivitesi . *, **—sırasıyla p < 0.05 ve p < 0.01'de kontrole kıyasla anlamlı derecede daha güçlü aktivite , a— p < 0.05'te test edilen ekstrakt aktivitesi arasında anlamlı fark yok .

Git: 3. Tartışma

Geleneksel tıpta G. aparin cilt enfeksiyonları ve yaralar için topikal ajan olarak kullanılır [ 2 , 8 ]. Elde edilen sonuçlar, lenfosit blast tahlillerinde uyarıcı aktiviteye sahip olduğunu göstermektedir. Ekstrakt, ana bilgisayara bağımlı savunma yanıtını önemli ölçüde etkinleştirir. Bakteriyel enfeksiyonlarda bu çok önemlidir. Çeşitli şifalı bitki materyallerinin immüno-uyarıcı aktivitesinin deri hastalıklarının tedavisinde yararlı etkiye sahip olduğu daha önce gösterilmişti [ 24 ]. Literatürde, bitki ekstraktlarının immüno-uyarıcı aktivitesi genellikle yüksek moleküler polisakkaritlerin varlığına atfedilir [ 24 , 25 , 26] .]. Bu aynı zamanda G. aparinden [ 18 ] elde edilen etanolik ekstraktlarla ilgili önceki çalışmamızın uyarıcı aktivitesini açıklayan ana hipotezdi . Ham ekstrakttan elde edilen farklı komplekslerin mevcut değerlendirmesi, PSC ve PC'nin ham ekstraktın immün sistemi uyarıcı aktivitesine önemli ölçüde katkıda bulunduğunu kısmen doğrulamıştır. RLBT testlerinde elde edilen değerler, ham infüzyon için olduğu gibi PSC ve PC fraksiyonları için benzerdi (Tablo 3). Bu, bu iki doğal ürün grubunun tüm infüzyonun immün sistemi uyarıcı etkisinden sorumlu olduğunu düşündürür. Bununla birlikte, yüksek miktarda fenolik ve iridoid içeren PPC fraksiyonunun RLBT tahlilinde aktif olduğu da ortaya çıktı. Gözlenen etki, PSC, PC ve ham ekstrakttan önemli ölçüde daha zayıftı. Bununla birlikte, hastalar tarafından kullanılan G. aparin preparatlarında tüm fitokimyasal sınıfların sinerjistik olarak hareket ettiği varsayılabilir . Antioksidan deneylerinde, incelenen modellerde ham su ekstraktının güçlü süpürücü aktiviteye sahip olduğu gösterilmiştir. Ayrıca, esas olarak PPC fraksiyonunun bu aktiviteye katkıda bulunduğu kanıtlanmıştır. G aparinin süpürme aktivitesiEkstrakt, topikal uygulama durumunda faydalı olarak kabul edilebilir. Aşırı uyarılmış bağışıklık sistemi, yalnızca bakterilere değil, aynı zamanda konağın sağlıklı dokularına da muazzam zarar verebilecek büyük bir ROS üretimine neden olur. Öte yandan, lenfositlerin uyarılması hem ROS hem de sitokinlerin üretiminin artmasına neden olur. Antioksidan aktivite sergileyen bitki özü, dokuları hasardan koruyan ROS'u kolayca temizleyebilir. Aynı zamanda, birkaç çalışma, TNF-alfa veya IL-8 gibi artan sitokin düzeylerinin yara iyileşmesini destekleyebileceğini ve iyileştirebileceğini düşündürmektedir [ 2 ]. Yani, Galium'un gözlenen etkileriinfüzyon, sitokin üretimi, fagositoz ve diğerleri gibi diğer mekanizmaları kullanarak patojenleri ortadan kaldırmak için stimülasyon bağışıklık sistemi yoluyla yaralanmalarda topikal uygulama için önemli olarak kabul edilebilir.

Git: 4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. bitki materyali

Balta ( G. aparine ) bitkisi Mayıs 2017'de Kharkiv, Ukrayna'daki Ulusal Eczacılık Üniversitesi'nin Botanik bahçesindeki ekimden toplanmıştır. 20052017–23052017 numaralı belge örnekleri Farmakognozi Departmanına (Ulusal Eczacılık Üniversitesi, Kharkiv) tevdi edilmiştir. , Ukrayna). Tesisin kimliği, T. Gontova, D.Sc.'nin danışmanlık yardımı ile oluşturulmuştur. [ 27 ]. 4.2. Kimyasallar

Etanol, hidroklorik asit, asetik asit, kurşun (II) asetat, alüminyum klorür, granüle çinko, ferrik (III) klorür ve sodyum nitroprusit (SNP), Avantor'dan (Gliwice, Polonya) satın alınmıştır. Gallik asit, klorojenik asit ve rutin, Merck, DE'den satın alınmıştır. Askorbik asit, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikali, yaban turpu peroksidaz (HRP), hidrojen peroksit (H202), _loganin_, izoquercitrin ve diaminofluorescein (DAF ) , Sigma-Aldrich, St. Louis'den satın alınmıştır. , MO, ABD. Fosfat tamponlu salin (PBS), Biomed'ten (Lublin, Polonya) satın alınmıştır. Su, Milli-Q Plus, MILLIPORE (Billerica, MA, ABD) (18.2 MΩ cm-) kullanılarak elde edildi. 4.3. Ekstrakt ve BAF Komplekslerinin Hazırlanması

Ekstraksiyondan önce, G. aparine bitkisi 3-4 mm partikül boyutuna gelene kadar ezildi. Ekstraksiyon, solvent olarak kullanılan su ile geri akış ile ısıtma üzerine 1:10'luk bir bitki materyali: solvent genel oranında gerçekleştirildi. Ekstraksiyon, aynı koşullar altında (her biri 30 dakika) üç kez tekrarlandı. Elde edilen ekstraktlar birleştirildi, vakumlu döner buharlaştırıcıda kuruyana kadar konsantre edildi.

Aynı zamanda, aynı koşullarda, polisakkaritlerin üç hacim% 96 etanol ile çökeltildiği, santrifüjleme (10 dakika, 3000 rpm) ile ayrılan,% 96 etanol ile yeniden yıkanan ve altında santrifüjlenen ekstrakt elde edildi. aynı koşullar. Nihai polisakarit kompleksi, havada kuru bir duruma (PSC) kadar kurutuldu. PSC çökeltmesinden sonra süzüntü kalıntısı, polifenolik kompleks (PPC) elde etmek için kuruyana kadar konsantre edildi.

Pektinleri ekstrakte etmek için, incelenen türlerin sulu ekstraksiyonundan sonra doğru şekilde tartılmış kalıntı, bitki materyali: çözücü 1:7.5 oranında %0.33 oksalik asit çözeltisi ile asitleştirildi ve 1 saat boyunca bir kaynar su banyosunda ısıtıldı ( pH 3 çözeltisi). Daha sonra, bitki materyali: solvent oranını 1:20 elde etmek için saflaştırılmış su ilave edildi ve %25'lik bir amonyum hidroksit çözeltisi, pH 6'ya kadar damla damla ilave edildi ve karışım, bir kaynar su banyosunda 1 saat ısıtıldı. Ekstrakt süzüldü, vakumlu döner buharlaştırıcıda hacminin üçte birine kadar buharlaştırıldı ve pektinler üç hacim %96 etanol ile çökeltildi. Çökelti, santrifüjleme (10 dakika, 3000 rpm) ile ayrıldı, %96 etanol ile yeniden yıkandı, yeniden santrifüjlendi ve kurutuldu. Arıtılmış su ile ekstraksiyon, bitki materyali: solvent 1:20 oranında üç kez tekrarlandı. Çöken pektinler (PC) kurutuldu ve tartıldı. 4.4. G. aparin Bitki Özü ve PPC'nin Ön Fitokimyasal Taraması

Ön fitokimyasal tarama, daha önce açıklandığı gibi genel olarak kabul edilen fitokimyasal analiz yöntemleri ve teknikleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir [ 18 , 28 ]. 4.5. Kimyasal Yöntemler Kullanarak Fitokimyasalların Miktar Tayini

Toplam polisakkaritler, toplam flavonoidler, toplam polifenoller ve toplam hidroksisinnamik asit türevleri içeriklerinin tahmini için kimyasal yöntemler kullanıldı. Ham infüzyon ve BAF'ler için deneyler yapıldı. Tüm numuneler üç kez tekrarlandı. Toplam flavonoidler, European Pharmacopeia'ya [ 29 ] göre Christ-Muller metodolojisi (alüminyum klorür testi, standart olarak quercetin 3- O -ramnoglucoside kullanıldı) kullanılarak test edildi . Kafeik asit türevleri, Yezerska ve arkadaşlarına göre spektrofotometrik olarak ölçüldü. [ 30 ]. Toplam polifenoller, Kovalyova ve diğerleri tarafından yayınlanan metodoloji kullanılarak belirlendi. [ 31 ]. Toplam polisakkaritler ve pektinler, Farmakopelere göre gravimetrik olarak test edilmiştir [ 29 ,32 ]. 4.6. UHPLC-DAD-MS ³ Galium Aparin İnfüzyonu ve Biyoaktif Fraksiyonların (BAF'ler) Analizi

UHPLC analizi, vakumlu gaz gidericili çift düşük basınçlı gradyan pompası, bir otomatik numune alıcı, bir sütun bölmesi ve Amazon SL iyon tuzağı kütle spektrometresi ( Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Almanya). _{Analiz edilen ekstrakttaki bileşiklerin ayrılması Kinetex XB-C 18} ile gerçekleştirildi.analitik sütun (100 × 2,1 × 1,9 µm), Phenomenex (Torrance, CA, ABD). Sütun sıcaklığı 25 °C'de tutuldu. Elüsyon, mobil faz A (deiyonize suda %0.1 HCOOH) ve mobil faz B (asetonitril içinde %0.1 HCOOH) kullanılarak, aşağıdaki lineer gradyan ile gerçekleştirildi: 0 dakika %1B, 60 dakika %26B. Akış hızı 0.300 mL/dk olarak ayarlandı. Her numuneden beş uL otomatik numune alıcı tarafından kolona verildi. UV-vis spektrumları 190–450 nm aralığında kaydedildi. Kromatogramlar 240, 325 ve 350 nm'de elde edildi. Elüat doğrudan kütle spektrometresine verildi. İyon tuzağı kütle spektrometresi, ESI arayüzü ile donatıldı. ESI kaynağı için parametreler şu şekilde ayarlandı: nebülizör basıncı 40 psi; kuru gaz akışı 9 L/dak; kuru sıcaklık 300 °C; ve kapiler voltaj 4.5 kV. Analiz, tarama kullanılarak gerçekleştirildi.m / z 70–2200. Bileşikler, negatif iyon modunda analiz edildi. MS ² ve MS ³ parçalanmaları, akıllı parça modu kullanılarak gerçekleştirildi. Bileşikler, mevcut kimyasal standartlar ve uygun literatürle karşılaştırıldıktan sonra DAD ve MS dedektörlerinden elde edilen sinyallere göre tanımlandı [ 23 , 33 ]. 4.7. Analiz Edilen Numunelerde İçeren Fenoliklerin ve İridoidlerin Miktar Tayini

10 mg/mL'lik konsantrasyonda çözelti elde etmek için, her numunenin yaklaşık 10 mg'ı doğru bir şekilde tartılmış, DMSO içinde çözülmüştür. Çözeltiler, 0.45 um PVDF şırınga filtrelerinden süzüldü ve UHLPC-DAD analizine tabi tutuldu. Kalibrasyon standartlarının (klorojenik asit, loganin ve isoquercitrin) stok çözeltileri, doğru ağırlıklandırılmış 1 mg standart 1 mL metanol içinde çözülerek hazırlandı. Her çözeltinin sonraki 50 uL'si, her bileşiğin 50 ug/mL'lik nihai konsantrasyonunu elde etmek için su içinde 850 uL %0.1 formik asit ile karıştırıldı. Kalibrasyon eğrileri, UHPLC kolonuna enjekte edilen bileşik miktarına karşı pik alanı olarak çizilmiştir. Her bileşik için doğrusal kalibrasyon eğrileri aralığı, enjeksiyon başına 50-800 ng idi. Klorojenik asit, loganin ve isoquercitrin için regresyon faktörleri 0.9980'den yüksekti. 4.8. İmmünomodülatör Aktivite Çalışması

Lenfositlerin stimülatörü, daha önce yayınlanmış metodolojiye göre kurulmuştur [ 18 ]. Kısaca, PBMC fraksiyonu, Ficoll gradyanında santrifüjleme ile izole edildi. Kan, DTB Helsinki deklarasyonunun gerektirdiği tüm kriterleri karşıladıktan sonra sağlıklı gönüllülerden toplandı. Hücreler, pozitif kontrol PHA ile karşılaştırmalı olarak test edilen ekstrakt ve fraksiyonlarla birlikteydi. 4.9. Hücresiz Modeller Kullanılarak İnfüzyon ve BAF'lerin Antioksidan Aktivitesinin Değerlendirilmesi

4.9.1. DPPH Radikalinin Temizlenmesi

DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) radikalinin temizlenmesi, Choi [ 34 ] yöntemi kullanılarak incelenmiştir . 50, 150, 250 ve 500 µg/mL konsantrasyonlarda %50 ( v / v ) etanol içinde yüz µL ekstrakt solüsyonu 96 oyuklu bir plakada 100 µL 0.02 mM DPPH radikali solüsyonu ile karıştırıldı %96 ( v / v ) etanol içinde çözüldü. Karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika inkübasyondan sonra, bir Synergy 4 mikroplaka okuyucusunda 518 nm'de absorbans ölçüldü. DPPH radikalinin süpürme oranı, test edilen özütler içermeyen bir kontrole göre hesaplandı. Pozitif kontrol olarak askorbik asit kullanıldı.

4.9.2. Hidrojen Peroksitin Temizlenmesi

Hidrojen peroksidin (H202) temizlenmesi, _O'Dowd [ 35 ] tarafından tarif edildiği gibi yaban turpu peroksidaz _ile gerçekleştirildi . Daha sonra, PBS içinde 50, 125, 250 ve 350 ug/mL konsantrasyonlarında ekstraktın 50 uL'si, 50 uL yaban turpu peroksidaz (PBS içinde çözelti, ex tempore hazırlanmış, 98.8 mU HRP) ile 96 oyuklu beyaz bir plaka içinde karıştırıldı. ), 50 uL hidrojen peroksit (PBS içinde çözelti, _öncedenhazırlanmış , % 0,00075 _H202) ve 50 uL luminol (PBS içinde 0,005 mg/mL). Kemilüminesans, luminol solüsyonunun eklenmesinden 7.5 dakika sonra, ışıksız oda sıcaklığında ölçülmüştür. Okuyucu, 75 hassasiyetinde lüminesansı okuyacak şekilde ayarlandı. HRP/hidrojen peroksit sisteminin inhibisyon yüzdesi, test özütleri içermeyen kontrole kıyasla hesaplandı. Pozitif kontrol olarak askorbik asit kullanıldı.

4.9.3. Azot Oksit Temizleme

10, 25, 75 ve 125 ug/mL konsantrasyonda elli uL ekstrakt solüsyonu, 50 uL 5 mM DAF-2, 50 uL 3 mg/mL SNP ve 50 uL PBS ile karıştırıldı. Ölçümler, sırasıyla 495 ve 515 nm'lik uyarma ve emisyon dalga boylarında bir mikroplaka okuyucuda siyah bir 96 oyuklu plaka üzerinde karanlıkta 37 °C'de 20 dakika sonra yapıldı. Nitrojen oksidin temizlenmesi, test edilen ekstraktlar olmadan kontrollere göre hesaplandı. Pozitif kontrol olarak askorbik asit kullanıldı. 4.10. İstatistiksel analiz

Tüm istatistiksel analizler, Microsoft Office [ 32 ] kullanılarak Ukrayna Devlet Farmakopesi gerekliliklerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir . Gruplar arasındaki farklar, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak istatistiksel olarak analiz edildi. Sonuçlar ortalama ± standart sapma (SD) olarak ifade edildi. 0,05 veya 0,001'den küçük p değerleri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Git: 5. Sonuçlar

G. aparin bitkisinden ilk elde edilen sulu ekstrakt, polisakkaritler ve pektin fitokimyasal olarak profillendi ve potansiyel immünomodülatör ve süpürücü aktiviteler açısından değerlendirildi. G. aparine bitkisinden elde edilen tüm maddeler, en aktif olan sulu ekstrakt olmak üzere, bağışıklık sistemi yeterli kan hücrelerinin transformasyonel aktivitesini önemli ölçüde uyarır. Tüm numuneler ayrıca tahlillerde kullanılan bazı ROS'a karşı antioksidan özellikler gösterdi. Elde edilen veriler, G. aparinin cilt enfeksiyonları ve yaralar için topikal bir çare olarak geleneksel kullanımını en azından kısmen doğrulamaktadır . Bununla birlikte, bu tezin tam olarak doğrulanması için insan deri hücreleri ve lenfositlerin onlarla etkileşimini içeren daha fazla araştırmaya ve hayvan çalışmalarına ihtiyaç vardır.

Git: teşekkürler

Bu çalışma, Ukrayna Ulusal Bilimler Akademisi Mechnikov Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Enstitüsü İmmunorehabilitoloji Laboratuvarı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, profesyonel dil düzenleme hizmeti için Igor V. Ilyin'e teşekkür eder.

Git: Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma ve metodoloji, AK, OK ve SG; doğrulama, NK, OG ve AB; soruşturma, TI, SG, WS ve AB; yazma—orijinal taslak hazırlama, TI ve SG; yazma, gözden geçirme ve düzenleme, OG, SG, OK, WS, NK ve AB Tüm yazarlar makalenin yayınlanan sürümünü okudu ve kabul etti.

Git: Finansman

Bu proje, 2007–2013 için “Yenilikçi ekonomi” Operasyonel Programı kapsamında Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu tarafından finanse edilen CePT altyapısı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Araştırma, "Yeni ilaçların yaratılmasına yönelik modern yaklaşımlar" konulu "Sağlığın korunması alanında bilimsel ve bilimsel-teknik faaliyet" # 2301020 çerçevesinde Devlet Bütçesi pahasına Ukrayna Sağlık Bakanlığı tarafından finanse edildi. metabolik sendromun düzeltilmesi için”.

Git: Çıkar çatışmaları

Yazarlar, gönderilen eserle ilgisi olabilecek herhangi bir kuruluşla hiçbir mali ilişki beyan etmemektedir; ne de gönderilen çalışmayı etkilemiş gibi görünebilecek diğer ilişkiler veya faaliyetler.

Git: Dipnotlar

Numune Bulunabilirliği: Araştırılan ekstraktların ve fraksiyonun numuneleri yazarlardan temin edilebilir.

Git: Referanslar

1. P., Murrell G. Büyük Britanya ve İrlanda Florasını Sat : Cilt 4: Campanulaceae–Asteraceae. cilt 4 Cambridge University Press; Cambridge, Birleşik Krallık: 2006. [ Google Scholar ]
2. Brickell C. Bitkiler ve Çiçekler Ansiklopedisi. DK Yayıncılık; Londra, Birleşik Krallık: 2019. [ Google Scholar ]
3. Willoughby MJ, Mills S. British Herbal Pharmacopoeia, 1996. British Herbal Medicine Association; Gloucestershire, Birleşik Krallık: 1996. [ Google Scholar ]
4. Newall CA, Anderson LA, Phillipson JD Bitkisel İlaçlar: Sağlık Profesyonelleri İçin Bir Kılavuz. İlaç Basın; Londra, Birleşik Krallık: 1996. [ Google Scholar ]
5. Dei Cas L., Pugni F., Fico G. Valfurva'daki (Sondrio, İtalya) tıbbi türler üzerinde kullanım geleneği J. Ethnopharmacol. 2015; 163 :113–134. doi: 10.1016/j.jep.2014.12.054. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
6. Romero CD, Chopin SF, Buck G., Martinez E., Garcia M., Bixby L. Güneybatının yaygın bitkisel ilaçlarının antibakteriyel özellikleri. J. Ethnopharmacol. 2005; 99 :253–257. doi: 10.1016/j.jep.2005.02.028. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
7. Rahman IU, Ijaz F., Afzal A., Iqbal Z., Ali N., Khan SM Contributions to the fitoterapis of sindirim bozuklukları: Manoor Valley, Northern Pakistan'ın geleneksel bilgisi ve kültürel itici güçleri. J. Ethnopharmacol. 2016; 192 :30–52. doi: 10.1016/j.jep.2016.06.049. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
8. Kumar K., Sharma YP, Manhas RK, Bhatia H. Ethnomedicinal Plants of Shankaracharya Hill, Srinagar, J&K, Hindistan. J. Ethnopharmacol. 2015; 170 :255–274. doi: 10.1016/j.jep.2015.05.021. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Lans C. Kuzey Amerika'da İlk Milletler ve Amerikan Kızılderilileri tarafından tarihsel olarak kullanılan halk tıbbı ile şu anda Kanada, British Columbia'da kullanılan etnoveterinerlik bilgisi arasındaki olası benzerlikler. J. Ethnopharmacol. 2016; 192 :53–66. doi: 10.1016/j.jep.2016.07.004. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
10. Lans C., Turner N., Khan T., Brauer G., Boepple W. British Columbia, Kanada'da geviş getiren hayvanlar için kullanılan etnoveteriner ilaçlar. J. Ethnobiol. Etnomed. 2007; 3:11 . doi: 10.1186/1746-4269-3-11. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
11. Wisher D. Martindale: Eksiksiz İlaç Referansı. 37. baskı J.Med. Kütüphane Doç. 2012; 100 :75–76. doi: 10.3163/1536-5050.100.1.018. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Serrentino J. Homotoksikoloji ve kanser. J. Biomed. Terapi 2005; 7513 :4–14. [ Google Akademik ]
13. Mocan A., Crişan G., Vlase L., Ivanescu B., Bădărău AS, Arsene A. Romanya'dan dört Galium türü (Rubiaceae) üzerinde fitokimyasal araştırmalar . Farmacia. 2016; 64 :95–99. [ Google Akademik ]
14. Bokhari J., Khan MR, Shabbir M., Rashid U., Jan S., Zai JA Galium aparinin çeşitli antioksidan aktivitelerinin değerlendirilmesi . Spektrokim. Açta A. 2013; 102 :24–29. doi: 10.1016/j.saa.2012.09.056. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
15. Ergun F., Şener B. Bazı Galium türlerinde bulunan iridoidlerin HPLC ile tayini. Gazi Ecz. Fak. Der. 1986; 3 :59–63. [ Google Akademik ]
16. Deliorman Orhan D., Çalış İ., Ergun F. Galium aparinden iridoitler . eczane Biol. 2008; 39 :234–235. doi: 10.1076/phbi.39.3.234.5928. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Şener B., Ergun F. Galium aparin L. Gazi'nin alkaloidleri üzerinde izolasyon ve yapısal çalışmalar . Ecz. Fak. Der. 1988; 5 :33–40. [ Google Akademik ]
18. Ilina T., Kashpur N., Granica S., Bazylko A., Shinkovenko I., Kovalyova A., Goryacha O., Koshovyi O. Galium aparine L. Bitkilerinden etanolik özlerin fitokimyasal profilleri ve in vitro immünomodülatör aktivitesi . 2019; 8 :541. doi: 10.3390/plants8120541. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
19. Wei W., Feng L., Bao WR, Ma DL, Leung CH, Nie SP, Han QB Dendrobium officinale'den izole edilen polisakkaritlerin yapı karakterizasyonu ve immünomodülatör etkileri . J. Agric. Gıda Kimyası 2016; 64 :881–889. doi: 10.1021/acs.jafc.5b05180. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
20. Boyce DE, Jones WD, Ruge F., Harding KG, Moore K. İnsan dermal yara iyileşmesinde lenfositlerin rolü. Br. J. Dermatol. 2000; 143 :59–65. doi: 10.1046/j.1365-2133.2000.03591.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
21. Dunnill C., Patton T., Brennan J., Barrett J., Dryden M., Cooke J., Leaper D., Georgopoulos NT Reaktif oksijen türleri (ROS) ve yara iyileşmesi: ROS'un ve gelişmekte olan ROS'un fonksiyonel rolü -iyileşme sürecini hızlandırmak için modüle edici teknolojiler. Int. Yara J. 2017; 14 :89–96. doi: 10.1111/iwj.12557. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
22. Clifford M. Klorojenik Asitler Üzerine Bazı Notlar. 3. LC ve LC–MS Sürümü 3 Ocak 2017. [(17 Mayıs 2020'de erişildi)]. Teknik rapor; Çevrimiçi olarak erişilebilir: https://www.researchgate.net/publication/312590947_Some_Notes_on_the_Chlorogenic_Acids_3_LC _and_LC-MS_Version_3_January_2017 [ Google Scholar ]
23. Clifford MN, Johnston KL, Knight S., Kuhnert N. Klorojenik asitlerin LC-MS ⁿ tanımlaması için hiyerarşik şema . J. Agric. Gıda Kimyası 2003; 51 :2900–2911. doi: 10.1021/jf026187q. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
24. Chakka S., Concha JSS, Bax CE, Zeidi M., Werth VP İmmün sistemi uyarıcı bitkisel takviyelerin otoimmün cilt hastalıkları üzerindeki etkileri. J. Am. Acad. Dermatol. 2020 doi: 10.1016/j.jaad.2020.06.037. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
25. Bendjeddou D., Lalaoui K., Satta D. Anacyclus pyrethrum , Alpinia galanga ve Citrullus colocynthis'in sıcak suda çözünür polisakarit özlerinin immünostimüle edici aktivitesi . J. Ethnopharmacol. 2003; 88 :155–160. doi: 10.1016/S0378-8741(03)00226-5. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
26. Paulsen B. Bağışıklığı uyarıcı aktivitelere sahip bitki polisakkaritleri. Curr. Organ. kimya 2001; 5 :939–950. doi: 10.2174/1385272013374987. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Dobrochaeva DN, Kotox MI, Prokudin YN, Barbarich AI Key to Higher Plants of Ukraine. 2. baskı Bilim Dumka; Kiev, Ukrayna: 1999. [ Google Scholar ]
28. Olga M., Kovalyov M. İris bitkileri (Iridaceae) Čes cinsinin fenolik bileşikleri . Slov. Çiftlik. 2016; 65 :70–77. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
29. Europarat. Avrupa İlaç Kalitesi Departmanı . Avrupa Farmakopesi. 9. baskı Avrupa Konseyi; Strasbourg, Fransa: 2016. [ Google Scholar ]
30. Yezerska O., Kalynyuk T., Vronska L. Hindiba kökünde hidroksisinamik asitlerin kantitatif tayini. kimya kimya Toksikol. 2013; 7 :247–250. doi: 10.23939/chcht07.03.247. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Koshovyi OM, Zagayko A., Kolychev IO, Akhmedov EY, Komissarenko AN Yaban mersini yapraklarından elde edilen kuru ekstrenin fitokimyasal çalışması. Azerbaycan Ecz. Eczacı. J.2016 ; 16 :18–23. [ Google Akademik ]
32. Merkez SAEP Ukrayna Devlet Farmakopesi. Cilt 1 İlaçların Kalitesi için Ukrayna Bilimsel Farmakopesi Merkezi; Kharkiv, Ukrayna: 2015. [ Google Scholar ]
33. Granica S., Lohwasser U., Jöhrer K., Zidorn C. Scorzonera hispanica L. (siyah salsify) Food Chem. 2015; 173 :321–331. doi: 10.1016/j.foodchem.2014.10.006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
34. Choi CW, Kim SC, Hwang SS, Choi BK, Ahn HJ, Lee MY, Park SH, Kim SK Kore şifalı bitkileri ve flavonoidler arasındaki tahlil rehberliğinde karşılaştırma ile antioksidan aktivite ve serbest radikal süpürme kapasitesi. Bitki. bilim 2002; 163 :1161–1168. doi: 10.1016/S0168-9452(02)00332-1. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
35. O'Dowd Y., Driss F., Dang PM, Elbim C., Gougerot-Pocidalo MA, Pasquier C., El-Benna J. Zeytinyağından bir polifenol olan hidroksitirosolün antioksidan etkisi: Hidrojen peroksidin atılması, ancak değil insan nötrofilleri tarafından üretilen süperoksit anyonu. biyokimya Eczane. 2004; 68 :2003–2008. doi: 10.1016/j.bcp.2004.06.023. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]

**igokcek** · 21 July 2012, 14:26

**igokcek** · 11 August 2012, 13:02

**igokcek** · 18 August 2012, 14:11

**igokcek** · 07 September 2012, 09:00

**igokcek** · 27 September 2012, 14:36

Galium aparine L.'den Etanolik Ekstraktların Fitokimyasal Profilleri ve In Vitro İmmünomodülatör Aktivitesi

Tetiana Ilina , ¹Natalia Kashpur , ²Sebastian Granica , ^3,^*Agnieszka Bazylko , ³Igor Shinkovenko , ¹Alla Kovalyova , ¹Olga Goryacha , ¹ ve Oleh Koshovyi ¹
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
Git: Soyut

Rubiaceae familyasından Galium aparine L., Galium cinsinde yaygın olarak bulunan bir türdür . G. aparine bitkisi, halk ilaçlarının ve diyet takviyelerinin bir parçasıdır. Bu çalışmada, bitki materyalinden %20, %60 veya %96 etanol ile maserasyon yoluyla elde edilen G. aparin bitkisi etanolik ekstraktlarının kimyasal bileşimini ve immünomodülatör aktivitelerini analiz ettik. Hidroksisinnamik asit türevlerinin, flavonoidlerin ve polifenollerin içerikleri spektrofotometrik olarak belirlendi, özütleyiciler ve polisakkaritler gravimetrik olarak ölçüldü. Kalitatif kompozisyon, UHPLC-DAD-MS/MS analizi kullanılarak incelenmiştir; daha önce G. aparine'de tanımlanmayan izolasyonquercetin ramnoglucoside, kolon kromatografisi ile gerçekleştirildi ve ekstraktların immünomodülatör aktivitesi, lenfosit blast transformasyonu reaksiyonunda belirlendi. Ekstraktların ana bileşenleri iridoitler, yani monotropein, 10-desasetilasperulosidik asit ve asperulosidik asit; p -hidroksibenzoik asit; hidroksisinamik asit türevleri, yani 3- O -kafeoilkinik, 5- O -kafeoilkinik, 3,4-0 - dikafeoilkinik, 3,5- O- dikaffeoilkinik, 4,5-O-dikaffeoilkinik asitler ve kafeik asit türevleri; flavonoidler, yani rutin, quercetin 3- O -rhamnoglucoside-7- O -glucoside ve isorhamnetin 3- O-glukorhamnosid. Anlamlı bir şekilde, quercetin 3- O -rhamnoglucoside-7- O -glucoside şimdiye kadar araştırılan Galium türlerinde ilk kez izole edilmiş ve tanımlanmıştır . Tüm G. aparin bitkisi etanolik özleri, bağışıklık sistemi yeterli kan hücrelerinin transformasyonel aktivitesini uyarır, %96 etanolik özü en aktif olanıdır. Elde edilen veriler, G. aparin bitkisinden elde edilen ekstraktların immünomodülatör aktivite mekanizmalarının daha fazla araştırılmasını gerektirmektedir .

Anahtar Kelimeler: Galium aparine L., etanolik ekstraktlar, fenolik bileşikler, iridoidler, immünomodülatör aktivite, lenfosit blast transformasyonu
Git: 1. Giriş

Bağışıklık sistemindeki bozukluklar, kronik hastalıkların gelişmesine ve komplikasyonlarına yol açar. Çok sayıda çalışma, bağışıklık sistemi işlevinin restorasyonunun, çeşitli hastalıkların başarılı tedavisi için bir ön koşul olduğunu kanıtlamıştır [ 1 , 2 ]. İmmün yanıtın gelişimi, immünokompetan hücrelerin aktivasyonu, proliferasyonu ve farklılaşması ile ilişkili T-, B-lenfositleri ve makrofajların ortak etkisinin sonucudur.

Spesifik immüno-uyarıcılar arasında timus preparatları, interlökinler, interferonlar, biyolojik olarak aktif peptitler, belirli mantarların polisakkaritleri ve terapötik aşılar bulunur; bunların etkileri, hücrelerin ve vücut dokularının metabolizmasını etkileme ve immüno-yetkin hücreleri aktive etme yetenekleriyle açıklanır.

Steroller, polisakkaritler, alkaloidler, flavonoidler, lektinler ve glikoprotein gibi birçok bitki kaynaklı bileşik immünomodülasyon için kullanılır [ 3 ]. Örneğin, polisakkaritler arasında, asidik arabinogalaktan ve ramnogalacturonanın in vitro ve in vivo olarak immüno-uyarıcı etki gösterdiği gösterilmiştir [ 4 ]. Çok sayıda çalışma, saponinlerin immünomodülatif aktivitelerine bakmaktadır [ 5 , 6 , 7 , 8 ]. Triterpenoid glikozitlerin memelilerin bağışıklık sistemi üzerindeki kanıtlanmış etkisi, bağışıklık sistemi rahatsızlıklarının önlenmesi, yani insan bağışıklık sisteminin güçlendirilmesi için çok çeşitli diyet takviyelerinin geliştirilmesine katkıda bulunmuştur [ 9] ve alerjilerin önlenmesi ve tedavisi için [ 10 , 11 ].

Önceki çalışmalarımızda, Galium verum L. bitkisinin sulu ve etanolik ekstraktlarının immünomodülatif etkisi kanıtlanmıştır [ 12 , 13 ]. Galium L. cinsinin diğer türleri arasında en yaygın olanlardan biri, Ukrayna'nın her yerinde, Avrupa'da, Kuzey Amerika'da ve Asya'nın belirli bölgelerinde bulunabilen, balta ya da bektaşi otu olarak da adlandırılan Galium aparine L.'dir; kuzeydeki yaşam alanı Alaska ve Grönland'a ulaşırken, tanıtılan türler olarak Avustralya, Yeni Zelanda ve Antarktika altı adalarda bulunabilir. G. aparinin fitokimyasal bileşimi üzerine kapsamlı araştırma, balta bitkisinin iridoidler içerdiğini gösterdi: asperulosidik asit ve 10-deasetilasperulosidik asit [14 ], monotropein, asperulosit, akumin ve aucubin [ 15 ]; alkaloidler: protopin, harmin, (±)-vasisinon, (-)-l-hidroksipeganin ve (-)-8-hidroksi-2,3-dihidrodesoksipeganin [16 ] ; fenolkarbonik ve hidroksisinamik asitler: klorojenik, kafeik, n -kumarik, ferulik, kaftarik ve gentisik [ 17 , 18 ]; flavonoidler: quercetin, dihidroquercetin, rutin, hyperosid, isoquercetrin, kaempferol, kaempferol-3- O -glucoside (astragalin), epicatechin, neohesperidin, luteolin, luteolin-7- O- diglucoside ve apigenin [ 18 , 19 , 20 , 21]; kolesterol, kampesterol, stigmasterol, sitosterol, Δ -[ 5 ]-avenasterol, Δ -[ 7 ]-stigmasterol ve Δ -[ 7 ]-avenasterol [ 21 , 22 , 23 ]. Önceki çalışmalarımıza göre baldır bitkisinin ekstraktlarında triterpenoidler (oleanolik, ursolik, öskafik ve ezik asitler, betulin ve lupeol), seskiterpenoidler, skualen, aromatik bileşikler ve yüksek alkanlar ve bunların türevleri yağ asitleri, klorofiller ve karotenoidler tespit edilmiştir [ 24 , 25 ].

G. aparine bitkisinden elde edilen ekstrakt, immünomodülatör, antiinflamatuar ve detoks için ve ayrıca lenfatik ve kan dolaşım sistemlerinin işleyişini iyileştirmek için önerilen bazı galenik ilaçların ve besin takviyesinin bileşenlerinden biridir. ve bağışıklık sisteminin aktivasyonuna ve bozulmuş fonksiyonların normalleşmesine dayanan bir drenaj ilacı.

Birçok ülkenin etnofarmakolojisinde, G. aparine bitkisi cilt hastalıklarının tedavisi için kullanılmaktadır [ 26 , 27 , 28 ].

Literatürde G. aparinin çeşitli biyolojik aktiviteleri rapor edilmiştir. Önceki çalışmalar, bu bitki materyalinden elde edilen farklı ekstraktların antimikrobiyal, antioksidan ve anti-kanser etkilerini doğrulamıştır [ 18 , 25 , 29 ]. Bitki materyali potansiyel bir immünomodülatör olarak kullanılmasına rağmen , G. aparinin bu tür biyoaktivitesini araştıran hiçbir makale yoktur .

Bu makalenin amacı , in vitro lenfosit patlama transformasyon modeli (RLBT) kullanılarak G. aparinden elde edilen farklı etanolik ekstraktların kimyasal bileşimini ve immünomodülatör aktivitesini araştırmaktır .

Git: 2. Sonuçlar ve Tartışma

2.1. G. aparin Bitki Etanolik Ekstraktlarının Fitokimyasal Taraması

G. aparin otu etanolik ekstraktlarının fitokimyasal taraması, sadece Ekstrakt I'de (%20 EtOH, v / v ) polisakkaritlerin varlığını ortaya çıkarırken , incelenen tüm numunelerde flavonoidler (flavonoller ve flavonlar) ve fenolik asit türevleri tespit edildi ve tanımlandı, ve elde edilen sonuçlar önceki çalışmalarla [ 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 ] örtüşmektedir. 2.2. Analiz Edilen Ekstraktlardaki Ana Fitokimyasal Grupların Kantifikasyonu

G. aparin otu etanolik ekstraktlarındaki fitokimyasalların ana gruplarının içeriği,tablo 1altında. tablo 1

Galium aparin otu etanolik ekstraktlarındaki fitokimyasalların ana gruplarının içeriği .

Ekstrakt I (%20 EtOH, v / v )	252,7 ± 12,6	129,4 ± 1,6	75,9 ± 0,5 *	10,7 ± 0,1 #	66,1 ± 0,5 *
Ekstrakt II (%60 EtOH, v / v )	246,3 ± 12,3	nd	77,1 ± 0,6 *	10,2 ± 0,1 #	50,8 ± 0,6 #
Ekstrakt III (%96 EtOH, v / v )	163,4 ± 8,1	nd	91,2 ± 0,5 #	15,3 ± 0,1 *	69,8 ± 0,5 *

Ayrı bir pencerede aç
*, # p < 0.05'te önemli farklar , aynı işarete sahip değerler için anlamlı fark gözlenmedi; nd—algılanmadı.

Karşılaştırmalı bir çalışma, mevcut araştırmada araştırılan G. aparin bitki etanolik ekstraktları arasındaki farklılıkları göstermektedir.

En yüksek ekstraksiyon verimi (252,7 mg/mL) %20 etanol kullanıldığında (ekstrakt I) ve en düşük verim (163,4 mg/mL) %96 etanol ekstraksiyonunda (ekstrakt III) elde edildi.

Karşılaştırılabilir hidroksisinamik asit türevleri içeriği I ve II ekstraktlarında ve en yüksek içerik III ekstraktında belirtilmiştir. Flavonoid içeriği, ekstrakt I ve III'te karşılaştırılabilirken, ekstrakt II'de önemli ölçüde daha düşüktü. Ekstre I ve III benzer miktarlarda polifenol içerirken, II. ekstrede bu fitokimyasal sınıfın içeriği önemli ölçüde daha düşüktü.

Polisakkaritlerin varlığı sadece özüt I'de (129.4 mg/g) doğrulandı. Bu gözlem, polisakkaritlerin yüksek su içeriğine sahip bir solvent karışımıyla kolayca ekstrakte edildiği ve ekstraktlar etanol gibi polar organik solventlerle hazırlanırsa genellikle bulunmadığı yönündeki genel beklenti ile uyum içindedir.

Elde edilen veriler, incelenen bitkilerin büyüme koşulları veya ekstraksiyon ve analiz yöntemleri gibi çeşitli faktörlerden kaynaklanabilecek diğer araştırmacılar tarafından [ 17 , 22 ] yapılanlardan bazı farklılıklar göstermektedir. 2.3. UHPLC-DAD-MS/MS Analizi

Test edilen ekstraktların kromatografik analizi, hazırlanan ekstraktların fitokimyasal içeriğini karakterize etmek için tireli bir kromatografik teknik kullanılarak yapıldı. Analiz edilen üç ekstrede (%20 EtOH, %60, EtOH ve %96 EtOH) toplam 14 ana bileşen tespit edildi ve karakterize edildi (Şekil 1,Tablo 2).

Resim, çizim vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı bitkiler-08-00541-g001.jpg'dir.

Şekil 1
G. aparin ekstrelerinin UHPLC-DAD-MS/MS kromatogramı 254 nm'de kaydedildi. Tablo 2

Analiz edilen ekstrelerde tespit edilen bileşiklerin UHPLC-DAD-MS/MS verileri.

1	monotropin ^t	2.1	237	389	369, 227, 209b, 183, 137	381	-	nq	nq	nq
2	10-Desacetylasperulosidic asit ^t	3.7	237	389	227b, 209, 183	381	-	nq	nq	nq
3	p -Hiroksibenzoik asit ^s	5.9	259, 294	153	-	155	-	nq	nq	nq
4	3- O -Kafeoilkinik ^asitler	9.7	217, 241, 300sh, 324	353	191b, 179, 161	355	163b	8,91 ± 0,09	3,72 ± 0,12	0,53 ± 0,03
5	Asperulosidik asit ^t	14.0	235	431	371, 269, 251b, 165	433	-	nq	nq	nq
6	5- O -Caffeoylquinic asitler ⁽ Klorojenik asit)	16.2	219, 241, 299sh, 325	353	191b, 179	355	163b	18,44 ± 0,21	31,51 ± 0,19	40,61 ± 0,12
7	4- O -Kafeoilkinik ^asitler	18.2	217, 241, 300sh, 325	353	191, 179, 173b	355	337, 307, 163b	8,12 ± 0,03	4,75 ± 0,08	1,16 ± 0,02
8	Quercetin 3-O-ramnoglucoside-7-O- ^glucosides	23.1	255, 263sh, 353	771	609b, 301	773	627, 611, 465b, 303	3,35 ± 0,10	2,95 ± 0,05	1,50 ± 0,02
9	Quercetin 3-O-ramnoglucosides ⁽ Rutin)	36.9	255, 262sh, 354	609	591, 301b, 179	611	465, 303b	1,08 ± 0,05	2,49 ± 0,03	6,33 ± 0,07
10	Kafeik asit türevi	38.0	254, 299sh, 327	381	207, 191, 179b, 135	383	365, 163b	nq	nq	nq
11	İzorhamnetin 3- O ^- glukorhamnosidler	40.4	259, 260sh, 350	615	609b, 542, 461, 315	617	-	nq	nq	nq
12	3,4- O- dikaffeoilkinik ^asitler	42.9	239, 300, 324	515	353b, 255, 173b	517	499b, 317, 163	nq	nq	nq
13	3,5- O- dikaffeoilkinik ^asitler	43.8	240, 299sh, 324	515	353, 233, 191b, 179	517	499b, 147	0,23 +/− 0,02	0,42 +/− 0,08	2,43 +/− 0,11
14	4,5- O- dikaffeoilkinik ^asitler	47.9	240, 300, 325	515	515, 353b, 299, 255, 203	517	499, 335b, 278	nq	nq	nq

Ayrı bir pencerede aç
s—kimyasal standartla karşılaştırmalar yapılmıştır; b—baz zirvesi (kaydedilen spektrumda en bol bulunan iyon); sh-omuz; t—geçici atama; nq—nicel değil.

Yakl . _ _ _ _ _ _ _ _ _ 300 nm'de bir omuz ile 240 ve 325 nm, kafeik asit türevleri olarak karakterize edildi. Fragmentasyon paternlerinin gözlemlenmesine ve mevcut kimyasal standartlarla karşılaştırılmasının ardından klorojenik asitler (4, 6, 7, m / z'de MH = MS-'de 353) ve dikaffeoilkinik asitler ( m / z'de 12–14 MH ) olarak tanımlandılar. = MS'de 515 ^- ). Bileşik 10sadece %96 EtOH ekstraktında mevcut olan bir kafeik asit türeviydi ancak daha fazla veri olmaması nedeniyle daha fazla tanımlama mümkün değildi. Bileşikler 3, basit bir fenolik asit ( p -hidroksibenzoik asit) olarak tanımlandı .

Bileşikler 8 , 9 ve 11 , ca. 255, 260 ve 350 deniz mili. Bileşik 9, popüler quercetin türevi —rutin olarak kolayca aydınlatıldı ( m / z 609'da MH, negatif iyon modunda 301 amu'ya parçalandı). Bu bileşik daha önce incelenen türlerde ve Galium cinsine ait diğer türlerde tanımlanmıştı [ 19 ]. Bileşik 11, MS ^{- içinde}m / z = 615'te psödomoleküler bir iyonla daha yüksek bir moleküler kütle gösterdi . Fragmentasyon, MH-15 metil grubunun m'de kolayca parçalandığını gösterdi ./ z = 609 ve m / z = 315'te parçalanma spektrumunda aglikon parçasının varlığı. Mevcut kimyasal standartlarla yapılan karşılaştırma, 11'in izorhamnetin 3- O -ramnoglukozit olarak tanımlanmasına yol açtı . Bileşik 8 ayrıca , MS-'de m / z = 301'de aglikon parçası iyonunun mevcudiyetinden dolayı bir kuersetin türevi olarak atanmıştır . 772 amu'luk moleküler kütle ve MS ^- ve MS ^+' daki parçalanma modelleri , bu bileşiğin 2 heksoz ve 1 ramnoz birimine bağlı kersetin içerdiği sonucuna götürdü. Nihai tanımlama, 1H NMR ile izolasyon ve yapı aydınlatması gerektirmiştir.

Bileşikler 1 , 2 ve 5 , ca. 235 nm. MS'ye dayalı olarak, 390 amu'luk spektrum moleküler kütleleri 1 ve 2 için ve 5 için 432 amu doğrulandı . Literatür araştırmasından sonra bileşikler iridoid glikozitler olarak karakterize edildi. Bileşik 1 ve 2 , aynı moleküler kütleleri gösterdi ve bunlar geçici olarak sırasıyla monotropein ve 10-desacetylasperulosidic asit olarak belirlendi. Her iki kimyasal da daha önce G. rakip ve G. mollugo'nun toprak üstü kısımlarında tespit edilmişti . Ek olarak, Bileşik 2, G. albümünden alınmıştır.. Bileşik 5, asperulosidik asit olarak atanmıştır. Bu doğal ürün G. rakip , G. album ve G. mollugo'nun toprak üstü kısımlarında bulunmuştur [ 30 , 31 , 32 ].

Bildiğimiz kadarıyla, monotropein, 10-desacetylasperulosidic asit, asperulosidic asit (1, 2, 5), klorojenik asit (6) ve rutin (9) dışında, geri kalan doğal ürünlerin varlığı G'de rapor edilmiştir . .ilk kez aparin . 2.4. İzole Quercetin Türevinin Yapısının Açıklanması

Gerçekleştirilen analizden elde edilen UHPLC verilerine dayalı olarak Bileşik 8'in kimyasal yapısının tam olarak aydınlatılması mümkün olmadığından, bu flavonoid türevi izole edildi ve kimyasal yapısının NMR analizi kullanılarak doğrulanması gerekiyordu. Ön ^{1H analizi,}8'in büyük olasılıkla bir kuersetin türevi olduğunu gösterdi (parçalanma modelinin gözlemlenmesiyle de doğrulandı,Tablo 2). 13C NMR spektrumu, Ficaria verna'dan [ 33 ] flavonoid glikozitler hakkındaki önceki raporla mutlak uyum içinde olan sinyalleri ^gösterdi . Son olarak Bileşik 8 , kersetin 3- O -ramnoglukozit-7-0 - glukozit olarak tanımlandı . Bileşik 8'in ' ^H ve13C ^NMR verileri aşağıda verilmektedir.

Quercetin 3-O-ramnoglucoside-7-O-glucoside ( 8 )—sarı toz, ^1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ₎ δ 7.56 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,38 (s, 2H), 3,71 (d, J = 9,8 Hz, 2H), 3,14–3,01 (m, 3H), 1,00 (d, J = 6,1 Hz, 2H), ¹³ C NMR ( 75 MHz, DMSO-d ₆) δ 177,54, 162,83, 160,90, 157,18, 156,01, 148,69, 144,81, 133,55, 121,67, 120,97, 116,44, 115,23, 105,62, 101,05, 100. 73, 99,86, 94,52, 77,16, 76,39, 76,00, 74,06, 73,14, 71,83, 70,55, 70.36, 69.57, 68.24, 17.76.

İlk kez G. aparine'de tespit edilmiştir ve diğer Galium türlerinde bulunduğuna dair herhangi bir rapor bulunmamaktadır . 2.5. Lenfosit Blast Dönüşümünün İn Vitro Reaksiyonu

Sunulan araştırma, G. aparin bitkisi etanolik ekstraktlarının immünomodülatör aktivitesine ilişkin bilinen ilk çalışmadır .

Mevcut çalışmada kullanılan tüm numunelerin, periferik kan mononükleer hücrelerinin dönüşümsel aktivitesini önemli ölçüde uyardığı tespit edilmiştir. Kullanılan ekstraktların etkisi altında, mononükleer hücrelerin %32.4-45.2'si proliferasyon sürecine dahil olmuştur, bu da maddelerin T- ve B-lenfositleri üzerindeki uyarıcı etkisini göstermektedir (Tablo 3), PHA (fitohemaglutinin) hazırlama seviyesinden biraz daha düşüktür (Tablo 3). Tablo 3

G. aparinin etanolik ekstraktlarının lenfosit blast transformasyonu (X ± m), n = 5 indeksleri üzerindeki etkisi .

Ekstrakt I (%20 EtOH, v / v )	0.10	32,4 ± 2,3 *
0,74	35,2 ± 2,5 *
1.47	34,7 ± 2,2 *
Ekstrakt II (%60 EtOH, v / v )	0.10	34,6 ± 2,5 *
0,74	38,5 ± 2,7 *
1.47	36,8 ± 2,5 *
Ekstrakt III (%96 EtOH, v / v )	0.10	36,9 ± 2,3 *
0,74	45.2 ± 3,0 #
1.47	45,1 ± 3,1 #
PHA	2.5	48,1 ± 2,1 #
Spontan RLBT	-	8,5 ± 0,7

Ayrı bir pencerede aç
PHA = fitohemaglutinin, RLBT = lenfosit blast dönüşümünün reaksiyonu. *, #— PHA ile karşılaştırıldığında p < 0,05, farklı belirteçler istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar gösterir.

Tablo 3lenfosit blast transformasyon modelinde elde edilen sonuçların özetini gösterir. En yüksek immün sistemi uyarıcı aktivite, 0,74 ve 1,47 mg/mL konsantrasyonlarda %96 EtOH için gözlendi. Araştırılan numunelerin geri kalanı, pozitif kontrol PHA'sından daha zayıf aktivite gösterdi.

Elde edilen veriler, G. aparinden elde edilen etanolik ekstraktların immünomodülatör bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir. İncelenen modelde en yüksek aktivite %96 EtOH preparatında (III) gözlenmiştir. Fitokimyasal analizlere dayanarak, bu çalışmada gözlemlenen sonuçlardan büyük olasılıkla genellikle immün sistemi uyarıcı aktiviteye sahip fitokimyasallar grubu olduğundan şüphelenilen polisakkaritlerin sorumlu olmadığı gösterilmiştir. Polisakkaritler, yalnızca en iyi immün sistemi uyarıcı potansiyeli göstermeyen %20 EtOH ekstraktlarında tespit edildi ve ölçüldü (tablo 1VeTablo 3) beklendiği gibi, bitki polisakkaritlerinin genel biyolojik özellikleri dikkate alındığında. İlginç bir şekilde, tespit edilen en yüksek ana fenolik içeriği, yani flavonoidler ve hidroksisinnamik türevler (tablo 1), %96 etanolik ekstrakt için gözlendi. UHPLC analizi, klorojenik asit ( 6 ) içeriğinin arttığını (Tablo 2, 18.44 ila 40.61 µg/mg kuru ekstrakt), ekstraktın hazırlanması için kullanılan çözücüdeki etanol yüzdesi ile birlikte. Aynı model, Bileşik 13 , yani 3,5-0- dikaffeoilkinik asit (Tablo 2, 0,23 ila 2,43 µg/mg). Aynı zamanda diğer klorojenik asit izomerlerinin ( 4 ve 7 ) içeriği azalıyordu (Tablo 2). Flavonoidler söz konusu olduğunda Bileşik 8'deki içerik, % 20 EtOH özündeki 3.35 ug/mg ile karşılaştırıldığında %96 EtOH özünde (1.50 ug/mg) daha düşüktü. Öte yandan, rutin ( 9 ) içeriği, ekstraksiyon ortamındaki EtOH yüzdesi ile yükseliyordu (tablo 11,08'den 6,33 µg/mg'a). Bu çalışmada miktarı belirlenemeyen iridoid içeriği, 254 nm'de elde edilen kromatogramlarda pik, yükseklik ve alanların gözlemlenmesine bağlı olarak azalıyor gibi görünmektedir (Şekil 1). Araştırılan ekstraktlarda fenoliklerin (kafeik asit türevleri ve flavonoidler) artan içeriği ve %96 ve %60 EtOH'de iridoid içeriğinin %20 EtOH'ye kıyasla daha düşük olması, G. aparin içinde bulunan polifenollerin gözlenen immünomodülatör aktiviteden sorumlu olabileceğini düşündürmektedir . Analiz edilen ekstraktlarda mevcut metodoloji ile tespit edilemeyen diğer daha lipofilik bileşiklerin mevcut olması da mümkündür. Elde edilen sonuçlar , G. verum'dan elde edilen ekstraktlar için daha önce bildirilen sonuçlara kıyasla, immün sistemi uyarıcı ajanlar olarak araştırılan ekstraktların önemli ölçüde daha zayıf aktivitesi olduğunu göstermektedir [ 12 ].

Git: 3. Malzemeler ve Yöntemler

3.1. bitki materyali

G. aparin otu, Kharkiv, Ukrayna'daki Ulusal Eczacılık Üniversitesi'nin botanik bahçesinde tam çiçeklenme aşamasında hasat edilmiştir (coğrafi koordinatlar, enlem: 50°01'08.6" K, boylam: 36°19'12.5" D) içinde Mayıs, 2017. Kupon örnekleri no. 20052017–23052017, Farmakognozi Bölümünde (Ulusal Eczacılık Üniversitesi, Ukrayna) saklanmıştır. Bitkilerin kimliği, T. Gontova, D.Sc.'nin danışmanlık yardımı ile oluşturulmuştur. (Eczacılık), Botanik Anabilim Dalı Başkanı Ulusal Eczacılık Üniversitesi [ 34 ]. 3.2. Teçhizat

Spektrofotometre EvolutionTM 60S UV-Visible (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD), Dionex Ultimate 3000RS sistemi (Dionex, San Jose, CA, ABD), bir Amazon SL spektrometre ile birleştirilmiş, prep-HPLC—UV ile donatılmış Shimadzu LC-20AP -Vis detektörü, örnekleyici SIL-10A ve fraksiyon toplayıcı FRC-10 (tümü, Shimadzu, Kioto, Japonya), Varian VNMRS 300 MHz spektrometre, elektronik analitik terazi AN 100 "Axis" (AXIS, Warszawa, Polonya), elektrikli sıcaklık odası TC80M -3 (Medlabortekhnika, Ukrayna), santrifüj OPN-3 (Phizpribor, Rusya), mikroskop ZEISS Primo Star (ZEISS, Oberkochen, Almanya), pipet Thermo Scientific, Lait series 1–200 μL (Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD), pipet Thermo Scientific, Lait series 1–50 μL (Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD), pipet Thermo Scientific, Lait series 1–1000 μL (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA,ABD), pipet Thermo Scientific, Lait serisi 1–20 μL (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD), CO₂ inkübatör (Binder, Tuttlingen, Almanya), biyoanalizör Agilent 2100 (Agilent, Santa Clara, CA, ABD). 3.3. Kimyasallar

Ekstraksiyon sırasında kullanılan %96 Etanol (POCH, Gliwice, Polonya) ve arıtılmış su (Merck Millipore, Simplicity UV sistemi tarafından üretilmiştir) Ukrayna Devlet Farmakopesi gerekliliklerine uygundur [ 35]; fitokimyasal tarama için kimyasallar: etanol (POCH, Gliwice, Polonya), DMSO, pa (POCH, Gliwice, Polonya), hidroklorik asit, pa (Sobstar, Zaporizhia, Ukrayna), asetik asit, puriss. (PJSC AZOT, Cherkasy, Ukrayna), kurşun (II) asetat, pa (Unikhim Ltd., Novbosibirsk, Rusya), alüminyum klorür, pa, granül çinko, pa (PC Uralskiy zavod khimicheskih reaktivov, Moskova, Rusya), demir (III) ) klorür, puris (Sigma-Aldrich, St. Louise, ABD), gallik asit (Carl Roth, Karlsruhe, Almanya), klorojenik asit ve rutin, analitik derecedeydi (Merck Millipore, Burlington, MA ABD); UHPLC için asetonitril ve formik asit Sigma-Aldrich, St. Louise, ABD'den satın alınmıştır. 3.4. Ekstraktların Hazırlanması

Çözücü olarak çeşitli konsantrasyonlarda (%20, %60 ve %96, v / v ) etanol kullanıldı; ekstraksiyon, geri akış ile ısıtma üzerine 1:10'luk bir bitki materyali çözücü genel oranında gerçekleştirildi. Ekstraksiyon, aynı koşullar altında (her biri 30 dakika) üç kez tekrarlandı. Elde edilen özler birleştirildi ve 45 °C'de kuruyana kadar bir vakumlu döner buharlaştırıcıda konsantre edildi. Tüm biyoanalizler için özütlerin (20 mg/mL) stok çözeltileri DMSO-su 1:1 içinde hazırlandı ve uygun şekilde seyreltildi. 3.5. G. aparin Bitki Etanolik Ekstraktlarının Ön Fitokimyasal Taraması

Ön fitokimyasal tarama fitokimyasal analizin genel kabul görmüş yöntem ve teknikleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir [ 36 , 37 ]. Polisakkaritler, üç hacim %96 etanol ile çökeltildi. G. aparine ekstraktlarında flavonoidlerin glikozitleri ve aglikonları belirlendi.bitki tanımlama reaksiyonlarında: Bryant tarafından siyanidin reaksiyonu (sulu fazın sarı-kırmızı renklenmesi ve sekizli fazın sarı-sıcak renklenmesi), %3 demir (III) klorür çözeltisi ile reaksiyon (flavonollerin koyu yeşil rengi, flavonlar); alkalin bir çözelti ile reaksiyon (parlak sarı renk); %5 alüminyum klorür çözeltisi (sarı-yeşil renklendirme) ile reaksiyon; borik asit reaksiyonu (3- ve 5-hidroksiflavonlar ve 5-hidroksiflavanonların saptanmasında sarı renklenme); amonyak ile reaksiyon (flavonlar, flavonoller, flavanonlar ve flavanonoller ısıtıldığında turuncu veya kahverengi renge dönüşen sarı renk oluşumu ile çözülür).

Tanenleri belirlemek için tortu reaksiyonları, %1'lik jelatin solüsyonu, %1'lik kinin hidroklorür solüsyonu ve %10'luk bazik kurşun asetat solüsyonu ile gerçekleştirildi. Tanen grubu, bir demir amonyum alum çözeltisi ile reaksiyona sokularak tespit edildi. 3.6. Fitokimyasalların Ana Gruplarının Kantifikasyonu

G. aparin bitkisinden elde edilen tüm ekstraktlarda, ekstraktif maddeler gravimetrik olarak belirlendi [ 38 ]; polisakkaritler, kurutma kaybı hesaba katılarak oda sıcaklığında tamamen kurutulduktan sonra gravimetrik olarak ölçüldü; hidroksisinamik asit türevlerinin toplamı, Yezerska ve diğerlerine göre doğrudan spektrofotometri (klorojenik asit olarak, λ = 325 nm) ile belirlendi. [ 39 ], Spagnol ve ark. [ 40 ]; flavonoidler, alüminyum klorür (rutin olarak, λ = 410 nm) [ 41 ] ile diferansiyel spektrofotometri yöntemiyle nicelendirildi ; polifenoller, Koshovyi ve diğerlerine göre doğrudan spektrofotometri (gallik asit olarak, λ = 270 nm) ile ölçüldü. [ 42]. Tüm tahliller üç kopya halinde gerçekleştirildi. 3.7. UHPLC-DAD-MS/MS Analizi

G. aparinin toprak üstü kısımlarından hazırlanan ekstraktlar, 10 mg/mL'lik nihai bir konsantrasyon elde etmek üzere metanol:su veya su içerisinde çözündürüldü. Numuneler, 0,45 um'lik bir şırınga filtresinden süzüldü ve bir Amazon SL spektrometre ile birleştirilmiş bir Dionex Ultimate 3000RS sistemi kullanılarak UHPLC-DAD-MS analizine tabi tutuldu. _{Ayırma bir Kinetex XB-C 18} ile gerçekleştirildikolon (150 mm × 2,1 mm × 1,7 µm, Phenomenex, ABD) 25 °C'de muhafaza edildi. Akış hızı 0.3 mL/dk olarak ayarlandı. Mobil faz A, sulu formik asit (%0.1) çözeltisiydi ve B, asetonitril içinde %0.1 HCOOH idi. Aşağıdaki gradyanlı elüsyon kullanıldı: 0 dakika—%4B, 60 dakika—%26B ve 90 dakika—%95B. UHPLC kolonuna 3 u ekstrakt solüsyonu enjekte edildi. Tespit edilen bileşiklerin UV-Vis spektrumları, 190 ila 450 nm aralığında kaydedildi. Kromatogram 254 nm, 325 nm ve 350 nm'de elde edildi. Kütle spektrumları negatif ve pozitif iyon modunda kaydedildi. Bileşikler, UV-Vis ve MS spektrumlarına göre tanımlandı. Mevcut kimyasal standartlar ve uygun literatür ile karşılaştırmalar yapılmıştır [ 43 , 44 , 45 , 46]]. Bileşikler, ekstraktlarda bulunan tüm kafeik asit türevleri için 325 nm'de klorojenik asit kalibrasyon eğrileri kullanılarak veya tüm flavonoidler için izoquercitrin için kalibrasyon eğrisi kullanılarak ölçüldü. Kalibrasyon eğrileri, UHPLC'ye enjekte edilen bileşiklerin pik alanlarına göre miktarlarına göre oluşturulmuştur. Tüm hesaplamalar için doğrusal bir uyum kullanılmıştır. Klorojenik asit ve izoquesitrin stok solüsyonu etanol içinde hazırlandı (nihai konsantrasyon 50 ug/mL idi. 3.8. %96 EtOH Ekstraktının Ana Bileşenlerinin İzolasyonu (Bileşikler 6, 8 ve 9)

%96 EtOH ekstraktında saptanan ana bileşiklerin izolasyonu, prep-HPLC—UV-Vis detektörü, örnekleyici SIL-10A ve fraksiyon toplayıcı FRC-10 (tümü, Shimadzu, Kioto, Japonya) ile donatılmış Shimadzu LC-20AP kullanılarak gerçekleştirildi. Bir gram %96 EtOH ekstraktı, DMSO içinde çözüldü ve PVDF 5 um şırınga filtresinden süzüldü. _{Bileşikler Kinetex XB-C 18} üzerinde ayrıldı25 °C'de muhafaza edilen kolon (Phenomenex, ABD, 150 mm × 22,1 mm × 5 µm). Akış hızı 20 mL/dk idi. Mobil faz A, sulu formik asit (%0.1) çözeltisiydi ve B, asetonitril içinde %0.1 HCOOH idi. Aşağıdaki gradyanlı elüsyon kullanıldı: 0 dakika—%2B, 60 dakika—%26B ve 90 dakika—%95B. Dört yüz uL çözünmüş ham ekstrakt, HPLC sistemine on kez enjekte edildi. Kromatogram 254 nm'de kaydedildi. Bileşikler 18,6–19,5 dakikada (6), 22,6–22,9 dakikada (8) ve 34,6–35,2 dakikada (9) toplandı. Elde edilen elüatlar, 11 mg 6, 4 mg 8 ve 7 mg 9 elde etmek için dondurularak kurutuldu. NMR spektrumları, DMSO-d6'da Varian VNMRS 300 MHz spektrometre ile kaydedildi. 3.9. İmmünomodülatör Aktivite Çalışması

Elde edilen ekstraktların immünomodülatör aktivitesini değerlendirmek için, yeterli rezolüsyona sahip in vitro RLBT kullanıldı [ 47 , 48 ].

Madde testi için bir numune olarak, venöz heparinize kandan (bağışlanan kan, Kharkiv Bölgesel Kan Banka Merkezi, UA) Ficoll-verographin gradyan yoğunluk santrifüjü (yoğunluk 1,077 g/mL) (Araştırma ve Üretim Şirketi ") ile çıkarılan mononükleer hücreler (lenfositler) PanEco”, Rusya) standart teknikle [ 49 ] kullanıldı (5 Aralık 2018 tarihli SO “Mechnikov Institute of Microbiology and Immunology” No. 8 Biyomedikal Etik Komitesi Protokolü). Çalışma Helsinki Deklarasyonu ilkelerine uygun olarak yapıldı.

Elde edilen hücreler, %10 bovin fetal serum (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) ve 2 mM L-glutamin (Altera Holding, RU), 100 μg/mL gentamisin (LEK (CZ) ilavesiyle ortam 199'da kültürlendi. 1 mL kültür ortamı başına 106'lık bir süspansiyon, maddelerin eklenmesiyle birlikte 37 °C'de bir termostatta, doymuş su buharı ile %5 CO2 atmosferinde 15-18 saat süreyle inkübe edildi _.

Proliferatif reaksiyonun yoğunluğu, numunelerin anti-BrdU (5-bromo-2'-deoksiüridin) Antikor (3H579) monoklonal antikorlar (Santa Cruz Biotechnology, CA, ABD) 100 mg/mL konsantrasyonda. Nihai numune hazırlığının ardından, floresan saptamalı akış sitometrik analizi için toplam hücre sayısına ve numunelerdeki patlama formlarının yüzdesine ilişkin sayısal veriler oluşturulmuştur.

RLBT'den önce, analiz edilen ekstraktların stok çözeltileri 0.20, 1.48 ve 3.48 mg/mL konsantrasyonlarda hazırlandı. 0.10, 0.74 ve 1.74 mg/mL'lik nihai konsantrasyonlar elde etmek için immünokompetan hücrelerin 100 uL birincil kültürlerine yüz uL madde ilave edildi. PHA (Research and Production Enterprise "PanEco", RU) tarafından 2,5 μg/mL konsantrasyonda lenfositlerin mitojenik stimülasyonu kontrol olarak gerçekleştirildi. İncelenen maddeler eklenmeden RLBT (kendiliğinden patlama dönüşümü) de değerlendirildi. 3.10. İstatistiksel analiz

Tüm istatistiksel analizler, Microsoft Office Excel 2007 [ 35 , 50 ] kullanılarak Ukrayna Devlet Farmakopesi gerekliliklerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir . Gruplar arasındaki farklar, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak istatistiksel olarak analiz edildi. Sonuçlar ortalama ± standart sapma (SD) olarak ifade edildi. 0,05'ten küçük p değerleri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Git: 4. Sonuçlar

G. aparin bitkisinden elde edilen farklı etanolik özler, kimyasal bileşimi ve immünomodülatör aktivitesi açısından incelenmiştir. G. aparine bitkisinden elde edilen tüm etanolik ekstraktlar, immüno-yetkin kan hücrelerinin transformasyonel aktivitesini önemli ölçüde uyardı, %96 etanolik ekstrakt en aktif olanıdır. %96 etanolik ekstraktın etkisi altında RLBT'de çoğalan lenfosit yüzdesi, spontan transformasyona kıyasla 4.34-5.32 kat arttı. Sonuçlar, G. aparine ekstraktlarının immünomodülatör ajanlar olarak geleneksel kullanımını doğrulamaktadır.

UHPLC-DAD-MS/MS analizi, araştırılan özütlerin kapsamlı karakterizasyonuna izin verdi. Analiz sırasında polifenoller ve iridoid gruplarından başlıca fitokimyasallar tespit edildi. Bir flavonoid türevi olan quercetin 3- O -rhamnoglucoside-7- O -glucoside şimdiye kadar araştırılan tüm Galium türlerinde ilk kez izole edilmiş ve tanımlanmıştır .

Elde edilen veriler, G. aparin bitkisinden elde edilen ekstraktların immünomodülatör aktivite mekanizmaları hakkında daha fazla araştırma yapılması için zemin sağlar.

Git: teşekkürler

Bu çalışma, Ukrayna Ulusal Bilimler Akademisi Mechnikov Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Enstitüsü İmmunorehabilitoloji Laboratuvarı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, profesyonel dil düzenleme hizmeti için Igor V. Ilyin'e teşekkür eder. Ayrıca Dominika Pilśnik'e G. aparine'den (Varşova Tıp Üniversitesi) flavonoid tanımlamasına yaptığı yardım için teşekkür ederiz .

Git: Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma ve metodoloji, AK ve OK; doğrulama, OG; soruşturma, TI, IS, NK, SG ve AB; yazma—orijinal taslak hazırlama, TI ve SG; yazma—inceleme ve düzenleme, OG

Git: Finansman

Bu proje, 2007–2013 için “Yenilikçi ekonomi” Operasyonel Programı kapsamında Avrupa Bölgesel Kalkınma Kuruluşu tarafından finanse edilen CePT altyapısı kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

Git: Çıkar çatışmaları

Yazarlar, gönderilen eserle ilgisi olabilecek herhangi bir kuruluşla herhangi bir mali ilişki beyan etmemiştir; ne de gönderilen çalışmayı etkilemiş gibi görünebilecek diğer ilişkiler veya faaliyetler.

Git: Referanslar

1. Vorobiov AA Tıpta immünomodülatörlerin kullanımına yönelik sınıflandırma ve strateji ilkeleri. J. Mikrobiyoloji. Biyoteknoloji 2002; 4 :93–98. (Rusça) [ Google Akademik ]
2. Drannik GN Klinik İmmünoloji ve Alerji. 2. baskı MIA; Moskova, Rusya: 2006. sayfa 193–202. (Rusça) [ Google Akademik ]
3. Walaa NA İmmünomodülatör ve doğal immünomodülatörler. J. Alerji İltihabı. 2017; 1 :e101. [ Google Akademik ]
4. Wagner H. Bitki Kökenli İmmün Uyarıcılar. [(13 Temmuz 2019'da erişildi)]; Hırvatistan Chemica Açta. 1995 68 :615–626. Çevrimiçi olarak erişilebilir: https://hrcak.srce.hr/136721 [ Google Scholar ]
5. Baltina LA, Ryzhova SA, Ismailova AF Yeni immünomodülatörler olarak glisirizik asit ve türevleri; 4. Rusya Ulusal Kongresi Tutanakları; Moskova, Rusya. 8–12 Nisan 1997; P. 247. (Rusça) [ Google Akademik ]
6. Sun HX, Xie Y., Ye YP Saponin bazlı adjuvanlarda ilerlemeler. Aşı. 2009; 27 :1787–1796. doi: 10.1016/j.vaccine.2009.01.091. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
7. Sergeev AV, Kabatskaya GI, Karaseva LI, Labourdova EV, Pavlova SI, Prosalkova IR, Shashkina MY “Cascarutol” ve “Meyan Kökü” Rus ilaçlarının immünofarmakolojisi. Biother. J.2004 ; 3 :8–10. (Rusça) [ Google Akademik ]
8. Katayama S., Mine Y. Quillaja saponin, bir kemirgen modelinde Th1/Th2 dengesinin düzenlenmesi yoluyla ovalbumin kaynaklı IgE alerjik tepkilerini modüle edebilir. J. Agric. Gıda Kimyası 2006; 54 :3271–3276. doi: 10.1021/jf060169h. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Deng B., Zhang Z., Wang T. İnsan Bağışıklığını Güçlendirebilen Fonksiyonel Gıda. CN101361568A. Patent. 2009 11 Şubat;
10. Alerji Aracılı Alerjiyi Önlemek ve Tedavi Etmek İçin Ginseng kökünden İzole Edilen Saponin Türevlerini İçeren Sağlık Takviyesi Gıda . KR 20050045980 (A) A23L1/29. Patent. 17 Mayıs 2005;
11. Edelev DA, Kuznetsova TA, Ivanushko LA, Yudina TP, Frolova GM, Cherevach EI, Novak SA Saponaria officinalis L. Tradit köklerinin triterpen glikozitlerinin immünostimülan aktivitesi . Med. 2012; 2 :44–47. (Rusça) [ Google Akademik ]
12. Shinkovenko IL, Kashpur NV, Ilyina TV, Kovalyova AM, Goryacha OV, Koshovyi OM, Kryvoruchko OV, Komissarenko AM Galium verum L. bitkisinden elde edilen etanolik özütlerin immünomodülatör aktivitesi . Ceska Slov. Çiftlik. 2018; 67 :101–106. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
13. Shinkovenko IL, Kashpur NV, Ilyina TV, Kovalyova AM, Goryacha OV, Koshovyi OM, Toryanyk EL, Kryvoruchko OV Galium verum L. otunun biyolojik olarak aktif bileşiklerinin sulu ekstraktının ve komplekslerinin immünomodülatör aktivitesi . Ceska Slov. eczane 2018; 67 :25–29. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
14. Deliorman D., Çalıs İ., Ergun F. Galium aparinden iridoitler . eczane Biol. 2001; 39 :234–235. doi: 10.1076/phbi.39.3.234.5928. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Mitova MI, Anchev ME, Handjieva NV, Popov SS Galium L.'deki iridoid desenler ve bazı filogenetik düşünceler. Z. Nat. C.2002 ; 57 :226–234. doi: 10.1515/znc-2002-3-405. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Şener B., Ergun F. Galium aparine L. Guede J. Fac. eczane Gazi. 1988; 5 :33–40. [ Google Akademik ]
17. Vlase L., Mocan A., Hanganu D., Benedec D., Gheldiu A., Crişan G. Dört Galium türünün (Rubiaceae) Dig. J. Nanomateryal. Biyoyapı. 2014; 9 :1085–1094. [ Google Akademik ]
18. Al-Snafi AE Galium aparinin kimyasal bileşenleri ve tıbbi önemi —Bir inceleme. IAJPS. 2018; 5 :1739–1744. [ Google Akademik ]
19. Shynkovenko IL, Ilyina TV, Goryacha OV, Kovalyova AM, Komissarenko AM, Shemchuk NS, Golembiovska OI Satır bitkisinden ( Galium aparine L.) Visn. Çiftlik. 2018; 3 :19–24. doi: 10.24959/nphj.18.2213. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Moubasher H., El-Ghani MA, Al-Wakeel S., Bahoor A. Libya'dan bazı Galium (Rubiaceae) türlerinde flavonoidlerin kemotaksonomik önemi . Austin J. Plant Biol. 2016; 2 :1014–1021. [ Google Akademik ]
21. Mocan A., Crişan G., Vlase L., Ivănescu B., Bădărău AS, Arsene AL Romanya'dan dört Galium türü (Rubiaceae) üzerinde fitokimyasal araştırmalar . Farmacia. 2016; 64 :95–99. [ Google Akademik ]
22. Aslantürk Ö., Çelik T., Karabey B., Karabey F. Galium aparine L. Br.'nin etil asetat ve metanol ekstraktlarının aktif fitokimyasal tespit edici, antioksidan, sitotoksik, apoptotik aktiviteleri. J. Ecz. Res. 2017; 15 :1–16. doi: 10.9734/BJPR/2017/32762. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Tzakou O., Couladi MM, Philianos S. Galium aparinin ilkbahar ve kış örneklerinde yağ asitleri ve steroller . Fitoterapi. 1990; 61:93 . [ Google Akademik ]
24. Shynkovenko IL, Ilyina TV, Kovalyova AM, Goryacha OV, Golembiovska OI, Koshovyi OM Galium aparin ve Galium verum ekstraktlarının saponinleri . Visn. Çiftlik. 2018; 4 :16–21. doi: 10.24959/nphj.18.2225. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Goryacha OV, Ilyina TV, Kovalyova AM, Kashpur NV Galium aparine L. lipofilik kompleksinin fitokimyasal araştırması ve antibakteriyel etkinliğinin incelenmesi. İlaç İnov. J.2014 ; 3 :7–10. [ Google Akademik ]
26. Galium aparine L. [(13 Temmuz 2019'da erişildi)];Çevrimiçi olarak erişilebilir: http://www.plantsoftheworldonline.or...mes:30007294-2
27. [(13 Temmuz 2019'da erişildi)]; Cliver. Çevrimiçi olarak mevcuttur: https://botanical.com/botanical/mgmh/c/cliver74.html
28. Friščić M., Bağlama M.Š., Milović M., Pilepić KH, Maleš Ž. Galium L. Farm . Cam. 2018; 74 :343–350. [ Google Akademik ]
29. Ilyina TV, Goracha OV, Toryanik EL, Kulish IA, Kovaleva AM Galium L. Pharmacogn cinsinin antimikrobiyal aktivitesi . komün. 2016; 6 :42–47. [ Google Akademik ]
30. de Rosa S., Iodice C., Mitova M., Handjieva N., Popov S., Anchev M. Triterpen saponins and iridoid glucosides from Galium rakip . fitokimya. 2000; 54 :751–756. doi: 10.1016/S0031-9422(00)00149-7. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
31. Handjieva N., Mitova M., Ancev M., Popov S. Galium album ve G. lovcense'den Iridoid glucosides . fitokimya. 1996; 43 :625–628. doi: 10.1016/0031-9422(96)00328-7. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Bianco A., Guiso M., Iavarone C., Marini-Bettolo R., Trogolo C. Rubiaceae'den yeni iridoid glukozitler. Gazz. Chim. italyan 1978; 108 :13–16. [ Google Akademik ]
33. Ficaria verna çiçeklerinden Tomczyk M. Quercetin ve kaempferol glikozitler ve bunların yapısı 2D NMR spektroskopisi ile incelenmiştir. Pol. J. Chem. 2002; 76 :1601–1605. [ Google Akademik ]
34. Dobrochaeva DN, Kotov MI, Prokudin YN, Barbarich AI Key to Higher Plants of Ukraine. 2. baskı Bilim Dumka; Kiev, Ukrayna: 1999. s. 546. (Rusça) [ Google Akademik ]
35. Ukrayna Devlet Farmakopesi/Devlet kuruluşu “Bilimsel ve Uzman Farmakope Merkezi”. 1. baskı RIREG; Kharkiv, Ukrayna: 2011. s. 538. (Ukraynaca) [ Google Scholar ]
36. Korulkin DY, Abilov DA, Muzychkina RA, Tolstikov GA Doğal Flavonoidler. coğrafi; Novosibirsk, Rusya: 2007. [ Google Akademik ]
37. Koshovyi ON, Vovk GV, Akhmedov EY, Komissarenko AN Salvia officinalis'in kimyasal bileşimi ve farmakolojik aktivitesi üzerine yapılan çalışma, karmaşık işlemlerden elde edilen özler bırakır. Azerbaycan Ecz. Eczacı. J.2015 ; 15 :30–34. [ Google Akademik ]
38. Devlet Teşebbüsü Bilimsel ve Uzman Farmakope Merkezi . 3 Cilt/Devlet Teşebbüsü “Bilimsel ve Uzman Farmakope Merkezi”. 2. baskı Cilt 1. Devlet Teşebbüsü “Bilimsel ve Uzman Farmakope Merkezi”; Kharkiv, Ukrayna: 2015. Ukrayna devlet farmakopesi; P. 1128. (Ukraynaca) [ Google Scholar ]
39. Yezerska O., Kalynyuk T., Vronska L. Hindiba kökünde hidroksisinamik asitlerin kantitatif tayini. kimya kimya Teknoloji 2013; 7 :247–250. doi: 10.23939/chcht07.03.247. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
40. Spagnol CM, Oliveira TS, Borges VIL, Corrêa MA, Salgado RHN UV-Spektrofotometrik yöntemle emülsiyonda kafeik asidin doğrulanması. fizik kimya 2015; 5 :16–22. [ Google Akademik ]
41. Ukrayna Devlet Farmakopesi . Devlet Teşebbüsü “Bilimsel ve Uzman Farmakope Merkezi”. 1. baskı RREG; Kharkiv, Ukrayna: 2008. s. 617. (Ukraynaca) [ Google Scholar ]
42. Koshovyi OM, Zagayko AL, Kolychev IO, Akhmedov EY, Komissarenko AN Yaban mersini yapraklarından elde edilen kuru ekstrenin fitokimyasal çalışması. Azerbaycan Ecz. Eczacı. J.2016 ; 16 :18–23. [ Google Akademik ]
43. Clifford MN, Knight S., Johnston KL, Kuhnert N. Klorojenik asitlerin LC-MS(n) tanımlaması için hiyerarşik şema. J. Agric. Gıda Kimyası 2003; 51 :2900–2911. doi: 10.1021/jf026187q. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
44. Clifford MN, Knight S., Kuhnert N. LC–MS(n) J. Agric ile dikaffeoilkinik asidin altı izomeri arasında ayrım yapmak . Gıda Kimyası 2005; 53 :3821–3832. doi: 10.1021/jf050046h. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
45. Granica S., Czerwinska ME, Piwowarski JP, Ziaja M., Kiss AK Tohum ekiminden sonra elde edilen Oenothera biennis L. ve Oenothera paradoxa Hudziok'un toprak üstü kısımlarından hazırlanan özütlerin kimyasal bileşimi, antioksidan ve antienflamatuar aktivitesi. J. Agric. Gıda Kimyası 2013; 61 :801–810. doi: 10.1021/jf304002h. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
46. Granica S., Piwowarski JP, Kiss AK Ellagitannins, ex vivo insan nötrofillerinin inflamatuar yanıtını modüle eder. Bitki ilacı. 2015; 22 :1215–1222. doi: 10.1016/j.phymed.2015.10.004. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
47. Korneeva MN, Novokhatskii AS, Grebenyuk VN, Kerimov SG Hücresel bağışıklığın durumunu değerlendirmek için lenfosit blast transformasyon reaksiyonunun kullanımı. Boğa. Tecrübe. Biol. Med. 1989; 107 :533–535. doi: 10.1007/BF00842400. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
48. Bashirova DK, Kochnev OS, Davletkil'deev FA, Lagutina MV İnsan lenf hücrelerinin immünolojik aktivitesi, lenfosit blast transformasyon reaksiyonu. Boğa. Tecrübe. Biol. Med. 1980; 89 :33–35. doi: 10.1007/BF00835497. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
49. Bulanova EG, Budagyan VM, Yarilin AA, Mazurenko NN Büyüme faktörleri tarafından lenfosit aktivasyonu sırasında protoonkogenlerin ekspresyonu. Biyokimya. 1997; 62 :1021–1025. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
50. Zulfiqar A., Bhaskar SB Araştırma ve veri analizinde temel istatistiksel araçlar. Hint J. Anaesth. 2016; 60 :662–669. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

Duyuru

YOĞURT OTU Galium aparine, Kanser, Lösemi, Tümör, Kitle, Kist, Lipom, Miyom

YOĞURT OTU Galium aparine, Kanser, Lösemi, Tümör, Kitle, Kist, Lipom, Miyom

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap