Üç Zeytin Çeşitinin Tohum Fitokimyasal Profili, Antioksidan Kapasitesi, Enzimatik İnhibisyon ve İnsan Nöroblastoma Hücreleri (SH-SY5Y) Üzerindeki Etkileri
Irene Gouvinhas , 1, † Juliana Garcia , 1, 2, † Daniel Granato , 3 ve Ana Barros 1, *
Ana Belén Martín Diana, Akademik Editör
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
1 Tarımsal-Çevre ve Biyolojik Bilimler Araştırma ve Teknoloji Merkezi (CITAB)/Yenilikçilik, Kapasite Geliştirme ve Tarımsal Gıda Üretiminin Sürdürülebilirliği Enstitüsü (Inov4Agro), Trás-os-Montes Üniversitesi ve Alto Douro, 5001-801 Vila Gerçek, Portekiz
2 AquaValor-Centro de Valorização e Transferência de Tecnologia da Água-Associação, Rua Júlio Martins n° 1, 5400-342 Chaves, Portekiz
3 Biyoaktivite ve Uygulamalar Laboratuvarı, Biyolojik Bilimler Bölümü, Fen ve Mühendislik Fakültesi, Limerick Üniversitesi, V94 T9PX Limerick, İrlanda
* Yazışma: tp.datu@sorraba
† Bu yazarlar bu çalışmaya eşit katkıda bulunmuştur. İlişkili Veriler
Veri Kullanılabilirliği Bildirimi
Git: Soyut
Bu çalışma, farklı çeşitlerden ('Cobrançosa', 'Galega' ve 'Picual') zeytin çekirdeği özlerinin fitokimyasal bileşimini ve antioksidan kapasitelerini değerlendirdi. Ek olarak, nörodejeneratif hastalıklarla ilişkili enzimleri inhibe etme yetenekleri temelinde potansiyel antinörodejeneratif özelliklerini de değerlendirdi: asetilkolinesteraz (AChE), butirilkolinesteraz (BChE) ve tirozinaz (TYR). Bu amaca ulaşmak için, ekstraktların fenolik bileşimi, fotodiyot dizisi tespiti ve elektrosprey iyonizasyon/iyon tuzağı kütle spektrometrisi (HPLC-DAD-ESI/MSn) ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi yoluyla belirlendi . Antioksidan kapasite iki farklı yöntemle değerlendirildi (ABTS •+ ve DPPH •) ve bu ekstrelerin yukarıda belirtilen ilgili enzimleri inhibe etme kapasitesi ile antinörodejeneratif potansiyel. Sonuçlar, tohum ekstraktlarının yüksek bir fenolik bileşik içeriği ve ABTS •+ ve DPPH • 'yi temizlemek için dikkate değer bir yetenek sergilediğini gösterdi . Tirosol, rutin, luteolin-7-glucoside, nüzhenide, oleuropein ve ligstroside ekstraktlarda tanımlanan ana fenolik bileşiklerdi. 'Galega', yüksek fenolik bileşik konsantrasyonu, yüksek antioksidan kapasitesi ve dikkate değer AChE, BChE ve TYR inhibisyonu nedeniyle en umut verici çeşitti. Zeytin çekirdeği ekstraktlarının tıbbi ve endüstriyel uygulamalar için sürdürülebilir bir biyoaktif bileşik kaynağı sağlayabileceği sonucuna varılabilir.
Anahtar Kelimeler: döngüsel ekonomi, tarımsal-endüstriyel yan akımlar, fenolik bileşikler, antioksidan ajanlar
Git: 1. Giriş
Zeytinyağı üretimi, güney Avrupa ve Akdeniz bölgesinde tarımsal gıda endüstrisinin en kritik sektörlerinden biridir. Bu ülkelerin ekonomisinde önemli bir sosyal etki ile de önemli bir rol oynamaktadır. “Sıfır atığa” ulaşma ihtiyacına dair artan farkındalık, dikkatleri yan ürünlerin değerine yöneltti. Bu nedenle zeytinyağı yan ürünlerinden elde edilen biyoaktif bileşiklerin kozmetik, ilaç, beslenme ve teknolojik gıda endüstrilerinde yenilikçi uygulamaların geliştirilmesinde kullanımına yönelik araştırmalar günümüzde daha da önem kazanmaktadır. Böylece, daha önce atık olarak kabul edilen yan ürünlerden biyoaktif bileşiklere, kullanımlarının etkinliğini iyileştirerek değer katmak, maliyet düşürmeye ve daha düşük çevresel etkiye yol açmak mümkündür [ 1 ,2 ].
Bütün zeytin ( Olea europaea L.) çekirdeği (yani, çekirdeği içeren odunsu endokarp), hem çekirdeksiz sofralık zeytin endüstrisinin hem de zeytinyağı endüstrisinin bir yan ürününü temsil eder ve zeytinlerin öğütülmeden önce çekirdeklerinin çıkarılmasına dayanır. petrol kalitesi, Akdeniz Havzasında bu kadar yaygın bir uygulama olmasa bile [ 3 ]. Yanma, fraksiyonlama, aktif karbon, biyo-yağ, furfural ve reçinelerin üretimi ve fenoliklerin ve diğer fitokimyasalların ekstraksiyonu dahil olmak üzere bu yan ürünü değerlendirmek amacıyla çeşitli teknikler incelenmiştir [4 , 5 ] . Bununla birlikte, bildiğimiz kadarıyla, zeytin tohumlarının antinörodejeneratif bileşiklerin kaynağı olarak kullanımı henüz araştırılmamıştır.
Antioksidanlar, proteinlerin, DNA'nın ve lipitlerin oksidasyonuna karşı koyan kimyasal bileşiklerdir ve hem bilim camiasının hem de genel kamuoyunun ilgisini çekmiştir [ 6 ]. Oksidatif hasar, metabolik sendrom, ateroskleroz, kanser, kardiyovasküler hastalık ve beyin yaşlanması gibi çeşitli hastalıkların fizyopatolojisi ile ilişkilidir [ 7 ]. Bu bağlamda, oksidatif stresin nörodejeneratif bozuklukların her yerde bulunan bir özelliği olduğu iyi bilinmektedir. Ayrıca, merkezi sinir sisteminde (CNS) asetilkolinin konsantrasyonu ve aktivitesindeki belirli farklılıklar da gözlemlenmiştir [ 8]. Bu nedenle, asetilkolinin parçalanmasında kritik enzimler olan asetilkolinesteraz (AChE) ve butirilkolinesterazın (BChE) inhibisyonu yoluyla asetilkolin konsantrasyonunu artırmaya dayalı spesifik bir tedavinin umut verici bir seçenek olduğu düşünülmektedir. Tirozinaz (TYR), L-tirozini l-DOPA'ya (3,4-Dihidroksi- l -fenilalanin) dönüştürür ve L-DOPA'yı dopakrom oluşturmak üzere okside ederek hiperpigmentasyon ve nörodejeneratif bozukluklarla ilişkili bir pigment olan melanin üretimini indükler. Parkinson hastalığı olarak [ 9 ].
Sağlık ve biyosirküler perspektiflerden bakıldığında, atık akımlarından geri kazanılan fenolik bileşiklerin antioksidan, antikolinesteraz ve anti-tirozinaz özelliklerine sahip olduğu ortaya çıkmıştır. Ek olarak, bu bileşiklerin nöronal hücre disfonksiyonuna ve hücre ölümüne karşı koruma sağladığı öne sürülmüştür [ 10 ]. Çeşitli nörolojik bozuklukların önlenmesi ve tedavisi için doğal bileşikler olarak önemleri artmıştır. Bu nedenle, zeytinyağı ve yan ürünleri, biyolojik öneme sahip fenolik bileşiklerin geri kazanımı ve endüstriyel uygulamalar için umut verici bir alternatif kaynak olabilir [ 11 , 12] .]. Bildiğimiz kadarıyla, bu biyoaktivite zeytinyağı için iyi bilinmesine rağmen, zeytin tohumlarının nörolojik koruma yetenekleri hiçbir zaman araştırılmamıştır [ 11 , 12]. Aslında, flavonoidler, stilbenler ve fenolik asitler dahil olmak üzere birçok polifenolik bileşiğin nörodejeneratif bozuklukları önlemesi ve/veya bunlarla mücadele etmesi tanınmıştır ve bu sonuncusu en az çalışılan sınıftır. Zeytin yağında ve ayrıca zeytin çekirdeklerinde bulunan bazı fenoliklerin, çoğunlukla insan diyetinde zeytinyağı ile sağlanan oleuropein gibi tirozol ve türevleri dahil olmak üzere nörodejeneratif hastalıklara karşı potansiyel etkilere sahip olduğu ortaya çıkarılmıştır. Örneğin, tirozolün bir glikozit türevi olan salidrosidin, normoksik ve hipoksik koşullar altında sıçan beyninde hafıza geri alımını, hafıza edinimini iyileştirdiği ve mitokondriyal biyogenezi arttırdığı ortaya çıkarılmıştır [ 13]. Ayrıca tirozol, in vitro olarak AβO nörotoksisitesine (Amiloid-β oligomer (AβO) hipotezi 1998'de tanıtıldı. Alzheimer hastalığına (AD) yol açan beyin hasarının çözünür, ligand benzeri AβO'lar tarafından tetiklendiğini öne sürdü) karşı nöronları koruma potansiyeli göstermiştir ve in vivo olarak sinaptik bozukluğu, oksidatif stres tepkisini ve kognitif bozukluğu iyileştirmektedir [ 14 ]. Luccarini ve ark. (2014) ayrıca, oleuropein aglikonun sıçan beyninde Aβ42 toksisitesini önlediğini, anti-agregasyon, nöroprotektif ve anti-inflamatuar aktivitelere işaret ettiğini göstermiştir [ 15 ].
Ek olarak, zeytin tohumlarının fito bileşenleri hakkında az sayıda rapor geliştirilmiştir ve yürütülenler, bunların çeşitlerin ayrımı için gerekli olan fenolik bileşiklerin kaynağı olduğunu göstermiştir [13] .]. Ek olarak, zeytin çekirdeğinden elde edilen fenolik bileşiklerin kullanımı, sentetik antinörodejeneratif bileşiklere uygun maliyetli bir alternatif olabilir ve aynı anda zeytinyağı endüstrisinin sürdürülebilirliğine ve yan ürün yönetiminin geliştirilmesine katkıda bulunur. Öte yandan, yaşam süresinin uzaması nedeniyle, doğal antinörodejeneratif bileşiklerin araştırılmasını teşvik edecek olan nörodejeneratif hastalıklar da öngörülmektedir. Bu nedenle ve diğer geleneksel ve geleneksel olmayan yöntemlere göre çeşitli avantajları nedeniyle ultrason yardımlı ekstraksiyon (UAE) kullanımının geniş kabul gördüğü gerçeği dikkate alındığında [ 16], bu çalışma aynı zamanda fenolik bileşikleri çıkarmak için Cobrançosa, 'Galega' ve 'Picual' çeşitlerinden zeytin tohumlarında BAE'yi ilk kez uygulamayı ve aynı zamanda bunların antiradikal süpürme potansiyellerini ve antinörodejeneratif özelliklerini incelemeyi amaçlamaktadır. Bu nedenle, bu çalışma şu hipotezi ele almaktadır: zeytin tohumları, asetilkolinesteraz, butirilkolinesteraz ve tirozinaz enzimlerini inhibe ederek, ilk kez bilişsel gerilemenin önlenmesinde veya iyileştirilmesinde terapötik ajanlar olarak kullanım potansiyellerini göstermektedir.
Git: 2. Sonuçlar ve Tartışma
2.1. Zeytin Çekirdeğinin Fenolik İçeriği
'Cobrançosa', 'Galega' ve 'Picual' çeşitlerinden elde edilen zeytin tohumlarının fenolik içeriği, aşağıda sunulduğu gibi değerlendirildi.tablo 1. 11.90 ± 1.56 ve 14.71 ± 1.37 mg GA (Gallik Asit) g -1 arasında değişen toplam fenol içeriği açısından çeşitler arasında önemli bir fark bulunmadı ( p > 0.05) . Bununla birlikte, orto -difenoller ve flavonoid içeriği ile ilgili olarak, 'Galega' tohum ekstraktlarının, 7,05 ± 0,44 mg GA g -1 ve 2,40 ± 0,18 mg CAT g -1 ile 'Cobrançosa' ve 'Picual' numunelerinden önemli ölçüde daha yüksek konsantrasyonlara sahip olduğu ortaya çıktı. , sırasıyla. tablo 1
Toplam fenol (mg GA (Gallik Asit) g −1 DW (Kuru Ağırlık)), orto -difenol (mg GA g −1 DW) ve flavonoid (mg CAT g −1 DW) içeriği ve antioksidan kapasitesi (µmol Trolox g − 1 DW) farklı çeşitlerden zeytin tohumları.
| 'Kobrançosa' | 11,90 ± 1,56 bir | 4,69 ± 0,16 bir | 1,50 ± 0,20 bir | 54,03 ± 3,30 bir | 3,64 ± 0,18 bir |
| "GalegaVulgar" | 14,71 ± 1,37 bir | 7,05 ± 0,44 b | 2,40 ± 0,18 b | 64,73 ± 3,58 b | 15,93 ± 1,50 b |
| "resim" | 13,03 ± 0,10 bir | 4,00 ± 0,28 bir | 1,40 ± 0,05 bir | 57,42 ± 1,56 ab | 6,10 ± 0,55 bir |
| p değeri | NS Y | *** | ** | * | *** |
Değerlendirilen aynı parametre için ortalama ( n = 3) ± SD değerleri ve ardından farklı üst simge küçük harfler olarak sunulan veriler , Tukey testine göre p < 0.001'de önemli ölçüde farklıdır . Y Anlamlılık düzeyi: NS: anlamlı değil ( p > 0.05); * p < 0.05'te anlamlı ; ** p < 0.01'de anlamlı ; *** p < 0.001'de anlamlı .
Zeytin tohumlarındaki toplam fenolik içerik, Alu'datt ve diğerleri gibi diğer çalışmalarda bildirilenlerle karşılaştırıldığında daha yüksek konsantrasyonlara sahipti. (2011), 1,03 ve 2,23 mg GA g -1 arasındaki konsantrasyonların belirlendiği [ 17 ]. Ek olarak, az sayıda çalışma zeytin tohumlarının toplam fenolik içeriğini araştırmıştır ve hiçbiri toplam orto -difenol ve flavonoid içeriğini ele almamıştır. Örneğin, Falcinelli ve ark. (2018), Moraiolo, Leccino ve Arbequina çeşitlerinden zeytin tohumlarındaki toplam fenolik içeriği yaklaşık 4 mg GAE g- 1 elde ederek belirlemiştir . Bu sonuçlar, bu çalışmada elde edilenlerden önemli ölçüde daha düşüktü [ 18]. Flores ve ark. (2018) ayrıca Manzanilla çeşidi absisik asitle işlenmemiş zeytin tohumlarında 0,09 mg GA g- 1 [ 19 ] civarında değerlerle daha düşük toplam fenolik içerikler belirlemiştir. Bu, çalışmamızda kullanılan ekstraksiyon yönteminin (UAE) yüksek verimliliği ile açıklanabilir; bu, ekstraksiyon süresinde azalma, daha düşük sıcaklıklar ve daha düşük miktarda solvent gibi bazı avantajlar sunar. Ancak, Silva ve ark. [ 20 _ _]. Diğer yazarlar, bu içerikleri, toplam fenol değerlerinin 4,80 ila 54,48 mg GAE (Gallik Asit Eşdeğerleri) g −1 ve 0,01 ila 32,18 mg QE arasında olduğu kullanılmış kahve telvesi gibi tarımsal gıda endüstrisinden kaynaklanan atıklarda da araştırdılar. (Quersetin Eşdeğerleri) toplam flavonoidler için g -1 , benzer metodolojiler kullanılarak elde edilmiştir [ 21 ]. Bu değerler çalışmamızın değerleri aralığındaydı. Benzer şekilde, Ibourki ve ark . (2019) [ 22]. Araştırma grubumuz ayrıca bu parametreleri, yapraklar da dahil olmak üzere çeşitli gıda ve tıbbi bitkilerde belirlemiş ve 6.94 ile 199.26 mg GA g- 1 , 26.40 ile 391.76 mg GA g- 1 ve 0.76 ile 70.14 mg CAT g -1 arasında değerler elde etmiştir . sırasıyla toplam fenol, orto -difenol ve flavonoid içerikleri için [ 23 ]. Şarap imalathanesi yan ürünlerinde, yani üzüm saplarında da benzer değerler bulunmuştur [ 24 ].
İncelenen üç zeytin çekirdeği çeşidinin HPLC-DAD-ESI/MS n taraması benzer kromatogramlar gösterdi. Böylece,Şekil 1'Galega' çeşidinin temsili bir kromatogramını gösterir. Altı fenolik bileşik tanımlandı ve 280 nm'de kaydedildi: bir fenil alkol (tepe noktası 1), iki flavonoid (tepe noktası 2 ve 4) ve üç secoiridoid (tepe noktası 3, 5 ve 6). MS parça iyonlarını elde etmek için standart çözeltiler ayrıca kütle spektrometresine ayrı ayrı aşılanmıştır. Tam taramalı kütle spektrumunda, tirozol, rutin, nüzhenid, luteolin-7-glukozit, oleuropein ve ligostrosidin protonu giderilmiş moleküler iyonları [MH] kararlıydı ve daha yüksek değerler sergiledi (Tablo 2). Fenolik bileşik tanımlaması, bu iyonların aranmasına, çarpışma kaynaklı ayrışma fragmanlarının yorumlanmasına, tutma verilerine ve literatürde bulunan verilerle karşılaştırılmasına dayanıyordu [20 , 25 , 26 , 27 ] .
Şekil 1
'Galega' çeşidinden zeytin tohumlarının HPLC-DAD kromatogramı (280 nm): ( 1 ) tirosol; ( 2 ) rutin; ( 3 ) nüzhenide; ( 4 ) luteolin-7-glukozit; ( 5 ) oleuropein; ( 6 ) ligstrosid. Tablo 2
Farklı çeşitlerden zeytin tohumlarındaki fenolik bileşiklerin HPLC-DAD-MS n ile negatif modda tanımlanması.
| (1) | Tirosol | 14.77 | 234; 275 | 137 | 119, 106 |
| (2) | Rutin | 24.00 | 252; 355 | 609 | 301, 179 |
| (3) | Nüzhenide | 25.16 | 248; 275 | 685 | 1371, 731, 523 |
| (4) | Luteolin- 7 -glucoside | 25.45 | 256; 350 | 447 | 285 |
| (5) | Oleuropein | 26.43 | 245; 280 | 539 | 377, 307, 275, 223 |
| (6) | ligstrosid | 26.89 | 249 | 523 | 361, 291, 259 |
Bileşik 1, m / z 137'de protonu giderilmiş bir moleküler iyon gösterdi ve sırasıyla , moleküler iyonundan bir radikal metoksi kaybı ( m/z 106) ve bir su molekülü kaybı ( m/z 119) sergiledi. Bu, zeytin tohumlarında açıklanan fenolik alkol profili ile uyumlu olan tirozol olarak tanımlanmasına izin verdi [ 20 ].
m / z 609'da [MH] - iyonu saptandı ve m / z 301 ve 179'da parçalanma taban tepe noktaları sağladı. İlk parçalanma, 308 kütle biriminin nötr kaybı yoluyla m / z 301'de rhamnosil-glikozit parçasını verdi. Bu m / z iyonu 301'in C halkasını bölerek ayrışması, ikinci parça olan m / z 179'un oluşumuna yol açtı ve bu , önceki raporlarla [ 28 ] uyumlu olan rutin ile uyumunu gösteriyor .
Bileşik 3, m / z 685'te negatif iyonize bir molekül sunmuş , m / z 1371, m / z 731 ve m / z 523'te moleküler iyonlara diğer fragmanları göstererek , önceki raporlarla tutarlı olan nüzhenide olarak tanımlanmasına izin vermiştir [ 20 , 29 ]. Görüntülenen ilk parça nüzhenide'nin [2M-H] 'sini gösterdi. m / z 731'deki parçalanma baz tepe noktası, bunun formik asit eklentisine [M-HCOO] karşılık gelir. m / z'deki parça iyonu523, glukozit parçasının kaybını ve bunun aglikonunun ilgili verimini gösterir.
tepe numarası 4, m / z 447'de protonu giderilmiş bir moleküler iyon gösterdi , bu da 162 amu'luk bir kayıpla sonuçlandı; bu, m / z 285'teki aglikonunun verimiyle tutarlıdır; daha önce bildirildiği gibi, luteolin-7glikozit için rapor edilen parçalanmaya karşılık gelir [ 20 ] . Bir glikoz kısmı ile bir elenolik aside bağlı bir hidroksitirosol esteri olan oleuropein, 539'daki m / z sinyali ve 377, 307, 275 ve 223 (bileşik 5 ) dahil fragman iyonları ile birlikte MS verilerinde bulundu . Bu tanımlama, aynı öncü iyon ve fragman iyonlarının zeytin ürünlerinde de bulunduğu literatüre dayanmaktadır [ 25]. 26.89 dakikalık bir alıkonma süresinde, m / z 523'teki deprotone moleküler iyon, m / z 361, 291 ve 259'da fragman iyonları sağlayarak 162, 494 ve 264 amu'luk kayıplar gösterdi , böylece ligstrosid olarak tanımlanmasına izin verdi [ 20 ] .
Daha önce tanımlanmış olan fenolik bileşiklerin miktar tayini, ilgili standart çözeltileri aracılığıyla RP-HPLC-DAD ile değerlendirildi. Buna göreTablo 3, en bol bulunan bileşikler nüzhenide ( ortalama olarak 32,45 mg g -1 ), ligstrosid ( ortalama olarak 4,52 mg g -1 ) ve rutin ( ortalama olarak 3,08 mg g -1 ) idi. Bulunan diğer üç fenolik bileşik - tirozol, luteolin-7-glucoside ve oleuropein - 2,84 ± 0,02 ve 2,90 ± 0,04 mg g -1 , 2,10 ± 0,00 ve 2,21 ± 0,00 mg g -1 ve 2,35 arasında değişen değerler sundu . Sırasıyla ± 0.01 ve 2.57 ± 0.02 mg g -1 . Tablo 3
Farklı çeşitlerden zeytin tohumlarının bireysel fenolik içeriği (mg g −1 DW).
| (1) Tirosol | 2,84 ± 0,02 bir | 2,90 ± 0,04 bir | 2,88 ± 0,02 bir | NS Y |
| (2) Rutin | 2,76 ± 0,04 bir | 3,35 ± 0,04 c | 3,12 ± 0,02 b | *** |
| (3) Nüzhenide | 27,75 ± 0,58 bir | 34,02 ± 1,23 b | 35,58 ± 0,21 b | ** |
| (4) Luteolin- 7 -glukozit | 2,10 ± 0,00 bir | 2,21 ± 0,00 c | 2,13 ± 0,01 b | *** |
| (5) Oleuropein | 2,41 ± 0,04 b | 2,35 ± 0,01 bir | 2,57 ± 0,02 c | *** |
| (6) Ligstrosid | 3,10 ± 0,05 bir | 5,45 ± 0,17 c | 5,00 ± 0,09 b | *** |
Aynı satırda ortalama ( n = 3) ± SD değerleri ve ardından farklı üst simge küçük harfler olarak sunulan veriler , Tukey testine göre p < 0.001'de önemli ölçüde farklıdır . Y Anlamlılık düzeyi: NS: anlamlı değil ( p > 0.05); ** p < 0.01'de anlamlı ; *** p < 0.001'de anlamlı .
Bildiğimiz kadarıyla, Ryan ve ark. (2003), HPLC analizi temelinde zeytin tohumlarının fenolik bileşiklerini ölçen tek yazardır. Bu yazarlar, tirozol, hidroksitirosol, oleuropein-aglikon di-aldehit (3,4-DHPEA-DEDA), oleuropein, verbascoside ve nüzhenide'nin varlığını tanımlamıştır. Tirosol (5–40 mg g -1 ), oleuropein (1–64 mg g -1 ) ve nüzhenide (1–76 mg g -1 ) konsantrasyonu bu çalışmada belirlenen konsantrasyon aralıkları içindeydi. Bu farklılıklar, Ryan ve ark. (2003), farklı ekstraksiyon koşulları ve solventlerin yanı sıra çeşitli diğer ekstraksiyon teknikleri ve fenolik niceleme için farklı standartlar kullanmıştır [ 27]. Ayrıca bu araştırmada çalışılan çeşit bizim çalışmamızla aynı değildi çünkü cv. Bu ülkede yetiştirilen bir Avustralya çeşidi olan Hardy's Mammoth. Bu nedenle, çevresel koşullar bu varyasyonları etkileyebilecek ve açıklayabilecek bir diğer önemli faktördür.
Diğer çalışmalar, bu bileşiklerin bazılarının zeytin çekirdeklerinde varlığını, kütle spektrometrisi kullanılarak tanımlama yoluyla ortaya çıkarmıştır. Nüzhenide ve nüzhenide oleoside zeytin çekirdeklerinde ilk defa Servili ve ark. (1999) ve Maestro-Durán ve diğerleri. (1994), sırasıyla [ 30 , 31 ]. Silva ve ark. (2006, 2010) 'Cobrançosa' çeşidinden zeytin tohumlarında nüzhenide, nüzhenide 11-metil oleoside, tyrosol, luteolin, lisgostroside ve rutin gibi birkaç fenolik bileşik tanımlamıştır [20 , 26 ] . Alu'datt ve ark. (2011) dokuz fenolik asit tanımlamıştır (protokatekuik asit, hidroksibenzoik asit, vanilik asit, kafeik asit, şırınga asidi, sinapik asit, ferulik asit, p-kumarik asit ve sinnamik asit) ve üç flavonoid (rutin, hesperidin ve quercetin), HPLC pik alanlarına dayalı olarak toplam fenolik içeriklerin yüzdesi olarak ölçüldü.
2.2. Zeytin Çekirdeği Ekstrelerinin Antioksidan Kapasitesi
Fenolik zeytin çekirdeği ekstraktlarının antiradikal süpürme kapasitesi ABTS (2,2'-Azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit) diamonyum tuzu) ve DPPH (2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil) yöntemleri kullanılarak belirlendi. ve sonuçlar şu şekilde sunulur:tablo 1. Beklendiği gibi, ABTS ve DPPH kullanılarak elde edilen sırasıyla 64,73 ± 3,58 ve 15,93 ± 1,50 µmol Trolox g -1 ile 'Galega' çeşidi numuneleri incelenen diğer çeşitlere kıyasla daha yüksek aktivite gösterdi . Bildiğimiz kadarıyla, Falcinelli ve ark. (2018), aynı yöntemleri kullanarak zeytin tohumlarının antioksidan kapasitesini belirleyen tek yazardır. Bu yazarlar ABTS ve DPPH yöntemlerini kullanarak sırasıyla 8.00 ve 12.00 µmol Trolox g -1 ve 0.1 ve 12.00 µmol Trolox g -1 arasında aktiviteler elde ettiler ve çalışmamızda elde edilenlerden daha düşük değerler ortaya koydular [ 18]. Ancak, Alu'datt ve ark. (2011) ayrıca zaman, sıcaklık, çözücü türü, çözücülerin sıralı ekstraksiyonu gibi değişken ekstraksiyon parametrelerini ve çok adımlı ekstraksiyonun zeytin tohumlarının antioksidan potansiyelinin değerlendirilmesi üzerindeki etkilerini araştırdı [17 ] . Bijla ve ark. (2021), ABTS yöntemini (2,11–2,22 mmol TE (Trolox Equivalents) g −1 ) [ 21 ] kullanarak kullanılmış kahve telvelerinin antioksidan kapasitesini de belirleyerek çalışmamızda sunulanlardan daha yüksek değerler ortaya koydu. Buna karşılık, bulgularımız Yu ve diğerleri tarafından geliştirilen diğer çalışmalarla uyumluydu. (2021) [ 23]. Araştırma grubumuz tarafından araştırılan şaraphane yan ürünleri ile ilgili olarak, hem ABTS hem de DPPH yaklaşımları, zeytin tohumlarında bulunanlardan daha yüksek değerler ortaya koydu (sırasıyla 0,38-0,73 ve 0,24-0,76 mmol Trolox g- 1 ) [ 24 ].
2.3. Zeytin Çekirdeği Ekstraktlarının Antinörodejeneratif Özellikleri
Zeytin çekirdeği ekstraktlarının antinörodejeneratif aktivitesi, AChE, BChE ve TYR enzimlerinin aktivitesini inhibe etme yetenekleri temelinde belirlendi. Tohum ekstraktının bu enzimlere karşı inhibe edici aktiviteleri,Tablo 4. 'Galega' zeytin çekirdeği ekstresi, AChE ( IC50 = 30.68 ± 12.20 µg mL -1 ), BChE (IC50 = 51.54 ± 11.81 µg mL -1 ) ve TYR'nin (IC50 = 27.42 ± 8.23 µg ) en güçlü inhibitörüydü. mL -1 ). 'Cobrançosa' ve 'Picual' çeşitlerinin özleri de kolinesterazları ve tirozinazı inhibe edebildi, ancak 'Galega' çeşidinden elde edilenlerden önemli ölçüde daha düşük bir ölçüde ( p < 0.05) (Tablo 4). Tablo 4
Zeytin çekirdeği ekstraktlarının asetilkolinesteraz (AChE), butirilkolinesteraz (BChE) ve tirozinaz (TYR) (IC50 , µg mL -1 )'a karşı inhibe edici aktivitesi .
| 'Kobrançosa' | 105,82 ± 17,84 b | 158,87 ± 13,55 b | 152,61 ± 14,33 b |
| "Galega Kaba" | 30,68 ± 12,20 bir | 51,54 ± 11,81 bir | 27,42 ± 8,23 bir |
| "resim" | 186,37 ± 18,61 c | 162,11 ± 15,22 b | 129,99 ± 16,82 b |
| Galantamin | 25,03 ± 3,01 | 21,64 ± 1,22 | |
| kojik asit | 23,45 ± 1,06 | ||
| p değeri | *** Y | *** | *** |
Değerlendirilen aynı parametre için ortalama ( n = 3) ± SD değerleri ve ardından farklı üst simge küçük harfler olarak sunulan veriler , Tukey testine göre p < 0.001'de önemli ölçüde farklıdır . Y Anlamlılık düzeyi: *** p < 0.001'de anlamlı. Standart inhibitör AChE, BChE için galantamin ve TYR için Kojik asittir.
Bildiğimiz kadarıyla, anti-kolinesteraz ve anti-tirozinaz daha önce hiç rapor edilmemiştir. 'Galega' çeşidinin ortaya koyduğu güçlü inhibisyon kapasiteleri, yüksek fenolik bileşik içeriği ile açıklanabilir. Aslında ve daha önce belirtildiği gibi, zeytinyağında da bulunan rutin, luteolin-7-glucoside veya ligostroside gibi fenolik bileşiklerin, birkaç antinörodejenatatif özellikten sorumlu olduğu görülmektedir. Bu anlamda 'Galega' örnekleri zeytin çekirdeklerinde bulunan fenolik bileşik konsantrasyonu en yüksek çeşidi temsil ettiğinden, bu parametreler arasında anlamlı bir korelasyon katsayısının elde edilmesi beklenmiştir. Fenolik bileşiklerin daha önce diğer gıda/yan ürün matrislerinde bu aktivitelere ana katkı maddesi olduğu rapor edilmişti,32 ]. Yine de, [ 33 ]'te, antinörodejeneratif aktivite ile fenolik bileşikler arasında hiçbir korelasyon bulunamadı, bu da sinerjistik bir etkiyi veya bu aktiviteden sorumlu diğer biyoaktif bileşiklerin varlığını düşündürür [ 33 ]. En yaygın nörodejeneratif hastalıkların, Alzheimer hastalığının (AD) ve Parkinson hastalığının (PD) tedavisinde bu spesifik fenolik bileşiklerin kullanımına ilişkin kapsamlı araştırmaların olmamasına rağmen, bu çalışma zeytin tohumlarından elde edilen biyoaktif atık bileşiklerin endüstriyel uygulamalar için potansiyel kullanımını ortaya koymaktadır. .
Ek olarak, zeytin meyvesinin çekirdeği, kabuğu ve özellikle posası dahil olmak üzere farklı kısımları oleuropein, demetiloleuropein ve verbascoside içerir ve nüzhenide sadece çekirdekte tespit edilir. Bazı fenolik bileşikler, diğer zeytinyağı yan ürünlerinde daha yüksek konsantrasyonlarda bulunur. Bununla birlikte, zeytin çekirdeği ekstraktlarının biyolojik özellikleri üzerine çok az çalışma vardır ve nüzhenide bileşiğine de atfedilebilecek antinörodejeneratif aktiviteleri üzerine hiç çalışma yoktur. Ayrıca, nüzhenid son zamanlarda diyabet ve obezite gibi metabolik hastalıklar üzerindeki olumlu sağlık etkileri ile ilişkilendirilmiştir [ 34 ].
2.4. Metanolik Tohum Ekstrelerinin SH-SY5Y Canlılığı Üzerindeki Etkileri
Seçilen zeytin çekirdeği çeşitleri, kolinesteraz ve tirozinazı inhibe etmek için yüksek kapasite ortaya koydu. Bu nedenle, SH-SY5Y hücre canlılığındaki etkinin, yani mitokondriyal fonksiyona (MTT azalması) göre değerlendirilmesinin de gerekli olduğu düşünüldü (şekil 2).
şekil 2
Zeytin çekirdeği metanol özlerinin SH-SY5Y hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisi. Değerlendirilen aynı parametre için ortalama ( n = 3) ± SD değerleri ve ardından farklı üst simge küçük harfler olarak sunulan veriler , Tukey testine göre p < 0.001'de önemli ölçüde farklıdır . NS: önemli değil.
Test edilen konsantrasyonlarda (62,50–1000 µg/mL), zeytin çekirdeği özleri mitokondriyal işlevi etkilememiştir. Gerçekte, bazı araştırmalar, AD için potansiyel tedaviler veya önleyiciler olarak zeytin fenollerinin ve zeytinlerin koruyucu ve karşılaştırmalı faydalarını göstermiştir. SH-SY5Y hücrelerinde, zeytin fenollerinin, yani oleuropein, verbascoside ve rutin'in, fibrilleri parçalayarak ve senil plakların amiloid beta (Aβ) adlı bir proteinin toplanmasını önleyerek Alzheimer hastalığını önleyebileceği iddia edildi [35 ] . Ek olarak araştırma, çalışmamızda bulunan bileşikler olan rutin ve luteolin-7-glukozitin SH-SY5Y hücreleri üzerindeki nöroprotektif özelliklerini destekleyerek, insan klinik deneyleri için prospektif bir terapötik seçenek haline getirmektedir [36 , 37 ] .
Elde edilen sonuçlarla ilgili olarak, zeytin çekirdeği özlerinin nöroprotektif özelliklerini keşfetmeye değer olacaktır, çünkü bunlar, yeni doğal matrislere dayalı olarak Alzheimer ve Parkinson hastalıklarının önlenmesi ve tedavisine yönelik gelecekteki araştırmalara yönelik daha fazla bilgi sağlayabilir.
2.5. Zeytin Çekirdeği Ekstraktlarının Kimyasal Bileşimi ve Biyoaktivitesi Arasındaki Korelasyonlar
ABTS ve DPPH verileri ile ilgili olarak, toplam fenolik içerik, orto -difenoller ve toplam flavonoidler, antioksidan kapasite ile önemli ölçüde ( p < 0.05) ilişkiliydi (Tablo 5). Daha spesifik olarak, tirozol (r ABTS = 0,750; r DPPH = 0,680), rutin (r ABTS = 0,839; r DPPH = 0,883), luteolin-7-glikozit (r ABTS = 0,839; r DPPH = 0,973) ve ligostrosid (r ABTS = 0.765; r DPPH = 0.790), zeytin çekirdeği ekstraktlarının antioksidan kapasitesine ana katkı yapanlardır. Tablo 5
Zeytin çekirdeği ekstraktlarının kimyasal bileşimi, antioksidan kapasitesi ve asetilkolinesteraz (AChE), butirilkolinesteraz (BChE) ve tirozinaz (TYR) inhibisyonu arasındaki korelasyon analizleri.
| Toplam fenoller | 1.000 | ||||||||||||||
| p = --- | |||||||||||||||
| orto -difenoller | 0,669 | 1.000 | |||||||||||||
| p = 0.049 | p = --- | ||||||||||||||
| flavonoidler | 0,652 | 0,952 | 1.000 | ||||||||||||
| p = 0,057 | p = 0.000 | p = --- | |||||||||||||
| ABTS | 0,724 | 0,696 | 0,706 | 1.000 | |||||||||||
| p = 0.027 | p = 0.037 | p = 0.034 | p = --- | ||||||||||||
| DPPH | 0,856 | 0,863 | 0,905 | 0,878 | 1.000 | ||||||||||
| p = 0.003 | p = 0.003 | p = 0.001 | p = 0.002 | p = --- | |||||||||||
| Tirosol | 0,767 | 0,384 | 0,440 | 0,750 | 0,680 | 1.000 | |||||||||
| p = 0.016 | p = 0.308 | p = 0,236 | p = 0.020 | p = 0.044 | p = --- | ||||||||||
| Rutin | 0,796 | 0,627 | 0,697 | 0,839 | 0,883 | 0,788 | 1.000 | ||||||||
| p = 0.010 | p = 0,071 | p = 0.037 | p = 0.005 | p = 0.002 | p = 0.012 | p = --- | |||||||||
| Nüzhenide | 0,560 | 0,098 | 0,205 | 0,563 | 0,500 | 0,750 | 0,827 | 1.000 | |||||||
| p = 0.117 | p = 0.801 | p = 0,597 | p = 0.114 | p = 0.170 | p = 0.020 | p = 0.006 | p = --- | ||||||||
| Luteolin-7-glukozit | 0,808 | 0,853 | 0,912 | 0,839 | 0,973 | 0,672 | 0,925 | 0,576 | 1.000 | ||||||
| p = 0.008 | p = 0.003 | p = 0.001 | p = 0.005 | p = 0.000 | p = 0.047 | p = 0.000 | p = 0.104 | p = --- | |||||||
| Oleuropein | -0,385 | -0,797 | -0,695 | -0,419 | -0,559 | -0,006 | -0,141 | 0,418 | -0,441 | 1.000 | |||||
| p = 0.306 | p =. 010 | p = 0.038 | p = 0,262 | p = 0.118 | p = 0,988 | p = 0,717 | p = 0,262 | p = 0,235 | p = --- | ||||||
| ligostrosid | 0,654 | 0,564 | 0,659 | 0,765 | 0,790 | 0,719 | 0,770 | 0,500 | 0.743 | −0.360 | 1.000 | ||||
| p = 0.056 | p = 0.114 | p = 0.053 | p = 0.016 | p = 0.011 | p = 0.029 | p = 0.015 | p = 0.171 | p = 0.022 | p = 0.342 | p = --- | |||||
| AChE | −0.508 | −0.919 | −0.878 | −0.611 | −0.748 | −0.194 | −0.383 | 0.185 | −0.674 | 0.943 | −0.507 | 1.000 | |||
| p = 0.162 | p = 0.000 | p = 0.002 | p =.080 | p = 0.020 | p = 0.618 | p = 0.308 | p = 0.634 | p = 0.047 | p = 0.000 | p = 0.164 | p = --- | ||||
| BChE | −0.752 | −0.956 | −0.963 | −0.846 | −0.962 | −0.541 | −0.776 | −0.298 | −0.940 | 0.712 | −0.730 | 0.879 | 1.000 | ||
| p = 0.019 | p = 0.000 | p = 0.000 | p = 0.004 | p = 0.000 | p = 0.132 | p = 0.014 | p = 0.435 | p = 0.000 | p = 0.032 | p = 0.026 | p = 0.002 | p = --- | |||
| TRY | −0.796 | −0.905 | −0.939 | −0.871 | −0.984 | −0.635 | −0.883 | −0.475 | −0.986 | 0.563 | −0.771 | 0.769 | 0.980 | 1.000 | |
| p = 0.010 | p = 0.001 | p = 0.000 | p = 0.002 | p = 0.000 | p = 0.066 | p = 0.002 | p = 0.196 | p = 0.000 | p = 0.115 | p = 0.015 | p = 0.015 | p = 0.000 | p = --- | ||
| Cell viability | 0.366 | 0.640 | 0.766 | 0.524 | 0.670 | 0.399 | 0.409 | 0.001 | 0.604 | −0.624 | 0.708 | −0.728 | −0.705 | −0.653 | 1.000 |
| p = 0.332 | p = 0.064 | p = 0.016 | p = 0.148 | p = 0.048 | p = 0.288 | p = 0.274 | p = 0,997 | p = 0.085 | p = 0,073 | p = 0.033 | p = 0.026 | p = 0.034 | p = 0,056 | p = --- |
Antinörodejeneratif aktivite ile ilgili olarak, toplam fenolik içerik, orto -difenol içeriği ve toplam flavonoid içeriği de BChE ve TYR'nin inhibisyonu ile önemli ölçüde ilişkiliydi.Tablo 5). Rutin (r BchE = −0.776; r TYR = −0.883), luteolin-7-glikozit (r BchE = −0.939; r TYR = −0.986) ve ligostrosid (r BchE = −0.730; r TYR = −0.771) enzimlerin inhibisyonu ile ilişkili ana fenolik bileşikler. Öte yandan, AChE'nin inhibisyonu, orto -difenoller ve flavonoidler, özellikle luteolin-7-glukozit (r = -0.674) tarafından etkilenmiştir.
SH-SY5Y hücrelerinin canlılığı, toplam flavonoid içeriği (r = 0.766), DPPH testiyle ölçülen antioksidan kapasitesi (r = 0.670) ve ligostosid (r = 0.708) ile arttırıldı ( p < 0.05). Bununla birlikte, luteolin-7-glukozit (r = 0.604, p = 0.085) ve orto -difenollerin (r = 0.640, p = 0.064) içerikleri de daha yüksek hücre canlılığı ile marjinal olarak ilişkilendirilmiştir. Bu sonuçlar, zeytin çekirdeği ekstrelerindeki fenolik bileşiklerin, test edilen konsantrasyonlarda SH-SY5Y hücrelerinde toksik olmayan bir profile sahip olduğunu göstermiştir.
Zeytin çekirdeği ekstraktlarının biyoaktivitesindeki kimyasal bileşimin çok değişkenli etkilerini araştırmak için PCA uygulandı (Figür 3).
Figür 3
Zeytin çeşidinin kimyasal bileşim ve biyoaktivite üzerindeki etkilerini açıklamak için zeytin çeşitlerinin iki boyutlu projeksiyonu. ( A ) Zeytin çeşitleri için grafik ve ( B ) yanıtlar için grafik.
İki boyutlu projeksiyonda, çeşitler arasında net bir farklılaşma gözlemlemek mümkündür: 'Galega' çeşidi, yüksek düzeyde biyoaktif bileşikler (örneğin, toplam flavonoidler/fenolikler, luteolin-7-glukozit ve ligostrosid) ile karakterize edilmiştir. artan antioksidan kapasite ve BChE ve TYR inhibisyonu. Öte yandan, 'Picual' ve 'Cobrançosa' çeşitlerinin oleuropein içeriği daha yüksek olmasına rağmen, enzim inhibisyonu ve antioksidan kapasiteleri daha düşüktü. Sonuç olarak, 'Galega' çeşidinden elde edilen tohumlar, oksidatif stresin hafifletilmesi ve nörolojik hastalıklarla ilişkili inhibe edici enzimler için zengin bir biyoaktif bileşik kaynağı gibi görünmektedir.https://www.sciencedirect.com/scienc...08814622014868 , erişim tarihi: 16 Haziran 2022). Bu nedenle çalışmamız, gıda bileşiminin farklı protokollerle ölçülen biyoaktivitelerle nasıl ilişkili olduğunu açıklamak için iki değişkenli ve çok değişkenli istatistiksel yöntemlerin birleşik kullanımını desteklemektedir.
Buna göre, AChE ile zeytin polifenolleri yani oleuropein, ligstroside, verbascoside, oleoside, dimetil-oleuropein, hidroksitirosol ve luteolin 7-glucoside arasındaki etkileşimin analiz edildiği yakın tarihli bir çalışmada, moleküler docking analizi dimetil-oleuropein olduğunu ortaya koymuştur. AChE [ 38 ] ile güçlü bir şekilde etkileşime girer . Ek olarak, 2018'de Figueiredo-González ve ark. iki zeytinyağından elde edilen fenol açısından zengin ekstraktların AChE ve BChE inhibe edici potansiyelini inceledi ve her iki numunenin de bu enzimlere karşı inhibe edici aktivite gösterdiğini ortaya çıkardı [ 39 ]. Edziri ve ark. (2019), antikolinesteraz aktivitesinin IC 50 değerleri ile bazı Tunus zeytin yapraklarının fenolik ekstraktları arasında pozitif bir korelasyon gözlemlemiştir [ 40].
Antioksidan aktivite ile ilgili olarak, araştırma çalışmalarının çoğu fenolik bileşiklerin Olea europaea L. ekstraktlarının antioksidan aktivitesi üzerindeki etkisini göstermiştir. Bununla birlikte, çok azı bu korelasyonu tek tek fenolik bileşiklerle araştırdı ve bu da zeytin meyvesinde ve yan ürünlerinde bulunan doğal bileşiklere yönelik bilimsel araştırmalara duyulan ihtiyacın altını çizdi.
Git: 3. Malzemeler ve Yöntemler
3.1. Örnekleme
Mevcut çalışma, Ulusal Tarım ve Veterinerlik Araştırmaları Enstitüsü'nde (INIAV) sertifikalı bir zeytinlikten üç farklı zeytin çeşidinden ('Galega Vulgar', 'Cobrançosa' ve 'Picual') elde edilen zeytin tohumları ile gerçekleştirilmiştir. Elvas, Portekiz (38º54'53.35” K ve 7º19'11.06” O) 2019 hasat sezonunda. Tarımsal uygulamalar, coğrafi konumlar ve hava koşullarındaki farklılıkları önlemek için aynı yetiştirme alanı ve meyve bahçesi sırası içinde, karşılaştırılabilir yaş ve güçte ve aralarında eşit boşluk bulunan her çeşitten beş ağaç seçildi. Herhangi bir enfeksiyon veya fiziksel hasar olmaksızın sadece sağlıklı zeytin meyveleri ticari olgunlukta hasat edilmiştir. Her çeşit için, ağaç başına yaklaşık 300 g, toplam 1,5 kg zeytin toplandı. Zeytinler daha sonra homojenize edilerek hemen laboratuvara nakledilmiştir, işlendiği yer Posa çıkarıldıktan sonra bozulmamış zeytin çekirdekleri taş kırma işlemi ile çıkarıldı. Tohum daha sonra dondurularak kurutuldu (VirTis BenchTop Pro, SP Scientific, Warminster, PA, ABD) ve bir blender ile ince bir toz halinde öğütüldü, ardından analize kadar karanlıkta oda sıcaklığında hermetik olarak saklandı.
3.2. Zeytin Tohumlarından Biyoaktif Bileşiklerin Ultrason Yardımlı Ekstraksiyonu (BAE)
Daha önce Lameirão ve diğerleri tarafından açıklanan fenolik bileşik ekstraksiyon protokolü. [ 16 ] bazı değişikliklerle kullanıldı. Fenolik bileşiklerin ekstraksiyonu, genlik, zaman ve sıcaklık kontrolörlü 13 mm çapında bir uç kullanılarak bir ultrasonik aparat (VCX 500 Vibra-Cell™, Newtown, CT, ABD) kullanılarak gerçekleştirildi. %50 genlik kullanıldı. Toz numuneler (2.5 g) için 50 mL metanol:su (70:30, v / v ) ile ultrasonik aparatta 70 °C'de 40 dakika ekstraksiyon yapılmıştır . Daha sonra metanolik ekstraktlar 15,493x g'de santrifüjlendi., 4 °C'de 15 dakika (Sigma Santrifüjler 2–16 K, Almanya) ve süzüldü. Ekstraksiyon işleminin ardından ekstraksiyon çözücüsü buharlaştırıldı. Tüm numuneler analize kadar 4 °C'de saklandı.
3.3. Fenolik Bileşim
Fenollerin, flavonoidlerin ve orto -difenollerin toplam içeriği daha önce bildirilen spektrofotometrik metodolojilere göre belirlendi [ 41 ].
Zeytin çekirdeği ekstraktlarındaki toplam fenolik içeriği, standart olarak gallik asit (GA) kullanılarak Folin-Ciocalteu spektrofotometrik yöntemi kullanılarak değerlendirildi. İçerik, gallik asit standardı veya numunesi, Folin-Ciocalteu ve sodyum karbonat eklenerek belirlendi. Absorbans okumaları 750 nm'de alındı ve sonuçlar kuru ağırlığın gramı başına mg gallik asit (mg GA g- 1 DW) cinsinden ifade edildi.
Zeytin çekirdeklerindeki orto -difenol içeriği, sodyum molibdat ve gallik asit veya numune eklenerek belirlendi ve absorbans 375 nm'de okundu. Kantifikasyon için, standart olarak gallik asit kullanıldı. Orto -difenollerin içeriği, kuru ağırlığın gramı başına mg gallik asit cinsinden ifade edildi (mg GA g -1 DW).
Zeytin çekirdeklerindeki toplam flavonoid içeriği, standart olarak kateşin kullanılarak alüminyum kompleks yöntemiyle belirlendi. Sonuçlar kuru ağırlığın gramı başına mg kateşin cinsinden ifade edilir (mg CAT g -1 DW). Tüm analizler için, 96 oyuklu mikroplakalarda (Nunc, Roskilde, Danimarka) üç kopya ( n = 3) gerçekleştirildi ve soğurma ölçümleri, bir mikroplaka okuyucu Infinite M200 (Tecan, Grödig, Avusturya) kullanılarak yapıldı.
Zeytin çekirdeği örneklerinin polifenolik profili, daha önce açıklanan [ 15 ] yönteme göre Ters Faz-Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi-Diyot Dizi Dedektörü (RP-HPLC-DAD) ile değerlendirildi . Bunun için bir fotodiyot dizi dedektörü ve seri halinde bir kütle dedektörü (Agilent Technologies, Waldbronn, Almanya) ile donatılmış bir Agilent HPLC 1100 serisi kullanıldı. Ekipmanda bir fotodiyot dizisi dedektörü (model G1315B), bir otomatik örnekleyici (model G1313A), bir ikili pompa (model G1312A) ve bir gaz giderici (model G1322A) bulunur. HPLC sistemi, Xcalibur yazılımı (Agilent, sürüm 08.03) kullanılarak kontrol edildi. Kromatografik analizler, bir C 18 ile gerçekleştirilmiştir.kolon (250 mm × 4,6 mm, 5 µm parçacık boyutu; ACE, Aberdeen, İskoçya), solvent A: H20 /HCOOH (99.9:0.1, v / v ) tarafından oluşturulan polar mobil faza dayalı ters fazlı HPLC yöntemi ve çözücü B: CH3CN / HCOOH (99.9:0.1, v / v). Aşağıdaki lineer gradyan şeması kullanılmıştır (dk cinsinden t; %B): (0; %5), (15; %15), (30; %30), (40; %50), (45; %95) , (50; %95) ve (55; %5). Son kez (55 dakika) ile, kolonu bir sonraki numune için stabilize etmek ve hazırlamak için B'nin %5'e dönmesi gerekir. Analiz, 25 °C'de, 1,0 mL/dk akış hızı ve 20 uL numune enjeksiyon hacmi ile gerçekleştirildi. Tüm numuneler üç kopya halinde enjekte edildi. Tirosol, rutin, nüzhenide, luteolin-7-glucoside, oleuropein ve ligstroside miktarının belirlenmesi için 280 nm'de ilgili standartlar kullanıldı. Tirosol (%98), rutin (≥%94), luteolin-7-glucoside (≥%98), oleuropein (≥%98) ve ligstroside (≥%95) kromatografik derecedeydi ve Merck'ten (Merck, Merck, Darmstadt, Almanya). Nüzhenide (%98) ChemDirect'ten (CH, ABD) temin edildi.
Konsantrasyonlar, mg g -1 kuru ağırlık (mg g -1 DW) olarak ifade edildi . HPLC sistemi, elektrosprey iyonizasyon (ESI) ile donatılmış bir iyon tuzağı kütle spektrometresine (ultra HCT Bruker, Bremen, Almanya) bağlandı ve negatif iyon modunda çalıştırıldı. Veri toplama ve işleme, daha önce açıklandığı gibi Agilent Technologies'den (Waldbronn, Almanya) bir LC-3D sistemi için ChemStation için B.01.03-SR2 yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi [ 18 ]. Kılcal damar ve voltaj sırasıyla 350 °C ve 4 kV'da tutuldu. Kütle taraması ve kızı spektrumları m / z'den ölçüldü100 ila 1500. Çarpışma kaynaklı parçalanma deneyleri, çarpışma gazı olarak helyum kullanılarak ve çarpışma enerjisi %50 olarak ayarlanarak bir iyon tuzağında yürütüldü [28 ] .
3.4. Antioksidan Kapasite Testleri
[ 42 ]' ye göre , serbest radikal yakalama kapasitesi ABTS ve DPPH spektrofotometrik yöntemler kullanılarak belirlendi. ABTS tahlili, ABTS •+ ve numune veya standardın reaksiyonuyla gerçekleştirilmiştir ; absorbans okumaları 734 nm'de alınmıştır. DPPH yöntemi için DPPH •+ solüsyonu ve Trolox standardı veya numunesi eklenmiş ve 520 nm'de absorbans okumaları alınmıştır. Bu analizler ayrıca 96 oyuklu mikroplakalar (Nunc, Roskilde, Danimarka) ve bir Infinite M200 mikroplaka okuyucu (Tecan, Grödig, Avusturya) kullanılarak yapıldı. Sonuçlar, kurutulmuş numunenin gramı başına mmol Trolox cinsinden ifade edilir (mmol Trolox g -1 DW). Tüm analizler, her numune [ 43 ] için üçlü ( n = 3) olarak yapıldı .
3.5. Zeytin Çekirdeğinin Antinörodejeneratif Özellikleri
3.5.1. Kolinesteraz (AChE ve BChE) İnhibisyonu
AChE ve BChE'nin inhibisyon aktivitesi, Ellman ve arkadaşlarına göre ölçüldü. (1961) [ 44 ]. Aşağıdaki bileşenler, 96 oyuklu bir mikroplakanın oyuklarında karıştırıldı: 3 mM DTNB (5,5-ditiol-bis-(2-nitrobenzoik asit), 15 mM substrat asetiltiyokolin iyodür (ATCI) veya butiriltiokolin iyodür (BTCI) , 100 mM fosfat tamponu (pH 8.0) ve farklı konsantrasyonlarda zeytin çekirdeği ekstreleri Pozitif kontrol olarak galantamin (standart inhibitör) ve negatif kontrol olarak ekstraktsız tampon kullanıldı AChE (elektrikli yılan balığı (EC 3.1.1.7, tip VS) veya BChE (at serumundan (EC 3.1.1.8)) (0.28 U mL -1 ) eklendi ve absorbans 405 nm'de 5 dakika süreyle ölçüldü İnhibitör aktivite IC50 olarak ifade edildideğerler (AChE veya BChE aktivitesini %50 inhibe etmek için gereken konsantrasyon).
3.5.2. Tirozinaz (TYR) İnhibisyonu
TYR inhibisyonu, modifiye edilmiş dopakrom yöntemi [ 45 ] kullanılarak belirlendi . Aşağıdaki bileşenler, 96 oyuklu bir mikroplakanın oyuklarında özlerle karıştırıldı: 80 uL fosfat tamponu (pH 6.8), 40 uL TYR (mantar TYR (EC 1.14.18.1) ve 40 uL L-DOPA. Absorbans, 475 nm'de ölçüldü ve inhibe edici aktivite IC50 değerleri olarak ifade edildi , standart olarak kojik asit kullanıldı.
3.5.3. Zeytin Çekirdeğinin İnsan Nöroblastoma Hücrelerinin Canlılığı Üzerindeki Etkileri
Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonundan (LGC Standards SLU, İspanya) insan nöroblastom hücreleri (SH-SY5Y) muhafaza edildi ve kültür plastik şişelerinde (75 cm2) bir tek tabaka olarak büyütüldü . Kültür ortamı , %10 Fetal sığır serumu (FBS), %2 penisilin/streptomisin ve %1 esansiyel olmayan amino asitler (NEAA) içeren Dulbecco Modifiye Eagle Ortamı (DMEM) idi. Hücreler, %95 hava ve %5 C02'den oluşan nemli bir atmosfere sahip 37 °C'de bir inkübatörde tutuldu . Hücreler, Hanks' Dengeli Tuz çözeltisi (HBS) ile yıkandı, tripsinize edildi ve 25.000 hücre/ cm2'de 96 oyuklu plakalarda alt kültürlendi . Tüm tahliller birleşmeden sonra yapıldı. Kurutulmuş özler, %0.1 ( v) içeren bir ortamda çözüldü ve seyreltildi./ v ) Dimetil sülfoksit (DMSO). DMSO'nun son konsantrasyonu, hücresel canlılığı etkilemedi. Ekstraktların etkisini belirlemek için hücre canlılığı, maruz kaldıktan 24 saat sonra MTT indirgemesi ile değerlendirildi. Mitokondriyal fonksiyon, Sousa ve arkadaşlarına göre değerlendirildi. (2009) [ 46]. Kısaca, 24 saat boyunca metanolik zeytin çekirdeği özleri (5.0-1000 µg/mL) ile hücre muamelesinden sonra, ortam çıkarıldı ve hücreler, 0.5 mg/mL MTT içeren bir kültür ortamı ile 37 °C'de 30 dakika süreyle inkübe edildi. Çözelti çıkarıldı ve formazan kristalleri, 200 uL DMSO ile çözündürüldü. Nihai mor çözelti, 570 nm'de spektrofotometrik olarak ölçüldü. Veriler, kontrole kıyasla tedavi edilen hücrelerin MTT azalma yüzdesi olarak sunulur. Her biri üç kopya halinde dört bağımsız analiz gerçekleştirildi.
3.6. İstatistiksel analiz
Mevcut çalışmanın sonuçları ortalama ( n = 3) ± standart sapma (SD) olarak sunulmuştur. Veriler ayrıca IBM SPSS istatistikleri 21.0 yazılımı (SPSS Inc., Chicago, IL, ABD) kullanılarak p değeri < 0.05 için varyans analizine (ANOVA) ve çoklu aralık testine (Tukey testi) tabi tutuldu . Kimyasal bileşimin zeytin çekirdeği ekstraktlarının biyoaktivitesi üzerindeki etkisini anlamak için korelasyon analizi (Pearson katsayısı, r-değeri) yapıldı. Ek olarak, özütlerin kimyasal bileşimindeki ve biyoaktivitesindeki içsel farklılıkları ve benzerlikleri vurgulamak için temel bileşen analizi (PCA) kullanıldı. Korelasyon ve PCA için, yöntemler ve prosedürler önceki bir raporda açıklananları takip etti [ 47 ].
Git: 4. Sonuçlar
Mevcut çalışma, zeytin tohumlarından elde edilen ultrason destekli ekstraktların güçlü bir antioksidan kapasiteye sahip olduğunu ve ayrıca AChE, BChE ve TYR'yi inhibe etme kabiliyetine sahip olduğunu göstermiştir. 'Galega' çeşidin bu faaliyetler üzerindeki etkisini gösteren en iyi sonuçları verdi. Fenolik bileşim ile her iki biyolojik aktivite arasındaki pozitif ilişki, fenolik bileşiklerin varlığının ekstraktların biyolojik etkilerini açıklayabileceğini düşündürmektedir. Daha da önemlisi, test edilen konsantrasyonlar için ekstreler, deneysel koşullar altında insan nöroblastoma hücrelerinde (SH-SY5Y) önemli sitotoksisite göstermedi. Bu nedenle, sonuçlarımız, zeytin tohumlarının nörodejeneratif ve metabolik hastalıklar gibi küresel sağlık sorunlarının tedavisinde temel bir bileşik kaynağı olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Yine de,
Git: teşekkürler
Ayrıca Müh. Numuneleri nazikçe sağlayan INIAV'dan Teresa Carvalho.
Git: Finansman Tablosu
Bu çalışma, UIDB/04033/2020 projesi kapsamında FCT—Portekiz Bilim ve Teknoloji Vakfı Ulusal Fonları tarafından desteklenmektedir.
Git: Yazar Katkıları
IG: Kavramsallaştırma; metodoloji; yazılım; soruşturma; yazı-orijinal taslak hazırlama; veri iyileştirme; proje Yönetimi; JG: Kavramsallaştırma; metodoloji; yazılım; soruşturma; yazma—orijinal taslak hazırlama; veri iyileştirme; proje Yönetimi; DG: yazılım; metodoloji; doğrulama; veri iyileştirme; yazma—inceleme ve düzenleme; finansman edinimi; AB: Kavramsallaştırma; kaynaklar; yazma—inceleme ve düzenleme; proje Yönetimi; fon alımı. Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okudu ve kabul etti.
Git: Kurumsal İnceleme Kurulu Beyanı
Uygulanamaz.
Git: Bilgilendirilmiş Onam Beyanı
Uygulanamaz.
Git: Veri Kullanılabilirliği Bildirimi
Uygulanamaz.
Git: Çıkar çatışmaları
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
Git: Örnek Durumu
'Galega', 'Cobrançosa' ve 'Picual' tohumlarının örnekleri yazarlardan temin edilebilir.
Git: Dipnotlar
Yayıncının Notu: MDPI, yayınlanan haritalardaki ve kurumsal bağlantılardaki yetki iddiaları konusunda tarafsız kalır.
Git: Referanslar
1. Roselló-Soto E., Koubaa M., Moubarik A., Lopes RP, Saraiva JA, Boussetta N., Grimi N., Barba FJ Zeytinyağı üretim sürecinde oluşan atıkların ve yan ürünlerin etkili bir şekilde değerlendirilmesi için ortaya çıkan fırsatlar : Yüksek katma değerli bileşiklerin geri kazanımı için geleneksel olmayan yöntemler. Trendler Gıda Bilimi Teknoloji 2015; 45 :296–310. doi: 10.1016/j.tifs.2015.07.003. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Teixeira A., Baenas N., Dominguez-Perles R., Barros A., Rosa E., Moreno DA, Garcia-Viguera C. Sağlığı geliştiriciler olarak şaraphane yan ürünlerinden elde edilen doğal biyoaktif bileşikler: Bir gözden geçirme. Int. J. Mol. bilim 2014; 15 :15638–15678. doi: 10.3390/ijms150915638. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
3. Ranalli A., Marchegiani D., Pardi D., Contento S., Pardi D., Girardi F., Kotti F. Destoned Sızma Zeytinyağında Fonksiyonel Fitokimyasalların Değerlendirilmesi. Gıda Biyoproses Teknolojisi 2009; 2 :322–327. doi: 10.1007/s11947-008-0128-0. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Rodríguez G., Lama A., Rodríguez R., Jiménez A., Guillén R., Fernández-Bolaños J. Zeytin taşı çekici bir biyoaktif ve değerli bileşik kaynağıdır. biyolojik kaynak. Teknoloji 2008; 99 :5261–5269. doi: 10.1016/j.biortech.2007.11.027. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
5. Nunes MA, Pimentel FB, Costa ASG, Alves RC, Oliveira MBPP Fonksiyonel uygulamalar ve gıda uygulamaları için zeytin yan ürünleri: Çevresel kısıtlamalarla yüzleşmek için zorlu fırsatlar. Yenilik Gıda Bilimi ortaya. Teknoloji 2016; 35 :139–148. doi: 10.1016/j.ifset.2016.04.016. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Pandey KB, Rizvi SI İnsan sağlığı ve hastalığında diyet antioksidanları olarak bitki polifenolleri. Oksit. Med. Hücre. Longev. 2009; 2 :270–278. doi: 10.4161/oxim.2.5.9498. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
7. Liguori I., Russo G., Curcio F., Bulli G., Aran L., Della-Morte D., Gargiulo G., Testa G., Cacciatore F., Bonaduce D., et al. Oksidatif stres, yaşlanma ve hastalıklar. klinik Interv. Yaşlanma 2018; 13 :757–772. doi: 10.2147/CIA.S158513. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
8. Chen X., Guo C., Kong L. Nörodejeneratif hastalıklarda oksidatif stres. Nöral Regen. Res. 2012; 7 :376–385. doi: 10.3969/j.issn.1673-5374.2012.05.009. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Gonçalves S., Medronho J., Moreira E., Grosso C., Andrade PB, Valentão P., Romano A. Chamaerops humilis L.'nin biyoaktif özellikleri: Yapraklardan, tohumlardan, hamurdan ve bitki özünden elde edilen özlerin antioksidan ve enzim inhibe edici aktiviteleri soymak. 3 Biyoteknoloji. 2018; 8:88 . doi: 10.1007/s13205-018-1110-9. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
10. Deveci E., Tel-çayan G., Duru ME Ferula elaeochytris ve sideritisstricta'nın çeşitli ekstraktlarının fenolik profili, antioksidan, antikolinesteraz ve anti-tirozinaz aktiviteleri. Int. J. Gıda Ürünleri 2018; 21 :771–783. doi: 10.1080/10942912.2018.1431660. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Angeloni C., Malaguti M., Barbalace MC, Hrelia S. Nöroproteksiyonda zeytinyağı fenollerinin biyoaktivitesi. Int. J. Mol. bilim 2017; 18 :2230. doi: 10.3390/ijms18112230. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
12. Rodríguez-Morató J., Xicota L., Fitó M., Farré M., Dierssen M., De La Torre R. Nörodejeneratif hastalıkların önlenmesinde zeytinyağı fenolik bileşiklerinin potansiyel rolü. moleküller. 2015; 20 :4655–4680. doi: 10.3390/molecules20034655. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
13. Barhwal K., Das SK, Kumar A., Hota SK, Srivastava RB İnsülin reseptörü A ve Sirtuin 1, hipoksi sırasında kronik salidrosid tedavisinin ardından öğrenmeyi ve uzamsal belleği sinerjik olarak geliştirir. J. Neurochem. 2015; 135 :332–346. doi: 10.1111/jnc.13225. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Taniguchi K., Yamamoto F., Arai T., Yang J., Sakai Y., Itoh M., Mamada N., Sekiguchi M., Yamada D., Saitoh A., et al. Tirosol, Alzheimer Hastalığı Modeli Farelerde Amiloid-β Oligomer Nörotoksisitesini Azaltır ve Sinaptik, Oksidatif ve Bilişsel Bozuklukları Hafifletir. J. Alzheimer Dis. 2019; 70 :937–952. doi: 10.3233/JAD-190098. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
15. Luccarini I., Ed Dami T., Grossi C., Rigacci S., Stefani M., Casamenti F. Oleuropein aglycone, sıçan beyninde Aβ42 toksisitesine karşı koyar. Nörobilim. Letonya 2014; 558 :67–72. doi: 10.1016/j.neulet.2013.10.062. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Lameirão F., Pinto D., Vieira EF, Peixoto AF, Freire C., Sut S., Dall'Acqua S., Costa P., Delerue-Matos C., Rodrigues F. Green-Sustainable Recovery of Phenolic and Ultrason Destekli Ekstraksiyon Kullanan Endüstriyel Kestane Kabuklarından Antioksidan Bileşikler: İn Vitro Biyolojik Aktivitelerin Optimizasyonu ve Değerlendirilmesi. antioksidanlar. 2020; 9 :267. doi: 10.3390/antiox9030267. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
17. Alu'datt MH, Alli I., Ereifej K., Alhamad MN, Alsaad A., Rababeh T. Zeytin tohumlarında fenolik bileşiklerin ve antioksidan aktivitenin çeşitli ekstraksiyon koşullarının optimizasyonu ve karakterizasyonu. Nat. Üretim Res. 2011; 25 :876–889. doi: 10.1080/14786419.2010.489048. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
18. Falcinelli B., Maranghi S., Paoletti A., Marconi O., Rosati A., Famiani F., Benincasa P. Artık bütün taşlardan bir antioksidan kaynağı olarak filizlenen zeytin ( Olea europaea L.) tohumları. bilim Hortik. 2018; 240 :558–560. doi: 10.1016/j.scienta.2018.06.066. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Flores G., Blanch GP, Ruiz del Castillo ML Absisik asitle işlenmiş zeytin tohumları, doğal bir biyoaktif bileşik kaynağı olarak. LWT. 2018; 90 :556–561. doi: 10.1016/j.lwt.2018.01.009. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Silva S., Gomes L., Leitão F., Coelho AV, Boas LV Phenolic Compounds and Antioxidant Activity of Olea europaea L. Fruits and Leafs. Gıda Bilimi Teknoloji Int. 2006; 12 :385–395. doi: 10.1177/1082013206070166. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Bijla L., Ibourki M., Bouzid HA, Sakar EH, Aissa R., Laknifli A., Gharby S. Fas'ta Toplanan Kullanılmış Kahve Telvelerinin Proximate Bileşimi, Antioksidan Aktivitesi, Mineral ve Lipit Profili Ortaya Çıkarıyor Büyük Bir Valorizasyon Potansiyeli . Atık Biyokütle Değerlendirmesi. 2022:1–16. doi: 10.1007/s12649-022-01808-8. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
22. Ibourki M., Azouguigh F., Jadouali SM, Sakar EH, Bijla L., Majourhat K., Gharby S., Laknifli A. Ana Hurma Ağacında Fiziksel Meyve Özellikleri, Beslenme Kompozisyonu ve Tohum Yağı Yağ Asitleri Profili ( Phoenix dactylifera L.) Fas'ta Yetiştirilen Çeşitleri. J. Gıda Kal. 2021; 2021 :5138043. doi: 10.1155/2021/5138043. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Yu M., Gouvinhas I., Rocha J., Barros AIRNA Tıbbi ve gıda bitkilerinin biyoaktif gıda ve ilaç kaynaklarına yönelik fitokimyasal ve antioksidan analizi. bilim 2021 ; 11 :10041. doi: 10.1038/s41598-021-89437-4. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
24. Gouvinhas I., Pinto R., Santos R., Saavedra MJ, Barros AI Üzümün ( Vitis vinifera L.) gelişmiş fitokimyasal bileşimi ve biyolojik aktiviteleri Alçak rakımlı bölgelerde büyüyen saplar. bilim Hortik. 2020; 265 :109248. doi: 10.1016/j.scienta.2020.109248. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Araújo M., Pimentel FB, Alves RC, Oliveira MBPP Zeytin değirmeni atıklarından elde edilen fenolik bileşikler: Sağlık etkileri, analitik yaklaşım ve gıda antioksidanları olarak uygulama. Trendler Gıda Bilimi Teknoloji 2015; 45 :200–211. doi: 10.1016/j.tifs.2015.06.010. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
26. Silva S., Gomes L., Leitão F., Bronze M., Coelho AV, Boas LV Zeytin çekirdeğinde Secoiridoids: Diyot dizisi ve kütle spektrometrisi ile sıvı kromatografisi ile nüzhenide ve 11-metil oleosidlerin karakterizasyonu. Grasas ve Asitler. 2010; 61 :157–164. doi: 10.3989/gya.087309. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Ryan D., Prenzler PD, Lavee S., Antolovich M., Robards K. Zeytin ( Olea europaea ) çeşidi Hardy's Mammoth'un fizyolojik gelişimi sırasında fenolik içerikte kantitatif değişiklikler. J. Agric. Gıda Kimyası 2003; 51 :2532–2538. doi: 10.1021/jf0261351. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
28. Barros A., Gironés-Vilaplana A., Teixeira A., Collado-González J., Moreno DA, Gil-Izquierdo A., Rosa E., Domínguez-Perles R. Üzüm ( Vitis vinifera L.) saplarının değerlendirilmesi (poli)fenolik bileşiklerin kaynağı olarak Portekiz çeşitlerinden: Karşılaştırmalı bir çalışma. Gıda Res. Int. 2014; 65 :375–384. doi: 10.1016/j.foodres.2014.07.021. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Elbir M., Es-Safi NE, Amhoud A., Mbarki M. Üç Fas çeşidinin zeytin çekirdeklerinde fenolik bileşiklerin karakterizasyonu. Maderalar. bilim y Teknol. 2015; 17 :479–492. doi: 10.4067/s0718-221x2015005000043. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
30. Servili M., Baldioli M., Selvaggini R., Macchioni A., Montedoro G. Zeytin Meyvesinin Fenolik Bileşikleri: Nüzhenide'nin Bir ve İki Boyutlu Nükleer Manyetik Rezonans Karakterizasyonu ve Meyvenin Yapıcı Kısımlarındaki Dağılımı. J. Agric. Gıda Kimyası 1999; 47 :12–18. doi: 10.1021/jf9806210. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
31. Maestro-Durán R., León Cabello R., Ruíz-Gutiérrez V., Fiestas P., Vázquez-Roncero A. Glucósidos fenólicos amargos de las semillas del olivo ( Olea avrupa ) Grasas y Aceites. 1994; 45 :332–335. doi: 10.3989/gya.1994.v45.i5.1028. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Šavikin K., Živković J., Alimpić A., Zdunić G., Janković T., Duletić-Laušević S., Menković N. Nar ekstraktının ve antioksidan, antidiyabetik ve antinörodejeneratif özelliklerinin Activity kılavuzlu fraksiyonlanması. End. Bitkileri Prod. 2018; 113 :142–149. doi: 10.1016/j.indcrop.2018.01.031. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
33. Zdunić G., Aradski AA, Gođevac D., Živković J., Laušević SD, Milošević DK, Šavikin K. Chokeberry (Aronia melanocarpa) yapraklarının in vitro hipoglisemik, antioksidan ve antinörodejeneratif aktivitesi. End. Bitkileri Prod. 2020; 148 :112328. doi: 10.1016/j.indcrop.2020.112328. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
34. Ben Saad A., Tiss M., Keskes H., Chaari A., Sakavitsi ME, Hamden K., Halabalaki M., Allouche N. Olea europaea var. Meski Taşı ve Tohum Ekstreleri: LC-ESI-HRMS Tabanlı Kompozisyon Analizi. J. Diyabet Res. 2021; 2021 :6659415. doi: 10.1155/2021/6659415. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
35. Omar SH, Scott CJ, Hamlin AS, Obied HK Zeytin biyofenolleri, SH-SY5Y hücrelerinde ve APPswe farelerinde alzheimer patolojisini azaltır. Int. J. Mol. bilim 2019; 20 :125. doi: 10.3390/ijms20010125. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
36. Rehfeldt SCH, Silva J., Alves C., Pinteus S., Pedrosa R., Laufer S., Goettert MI Luteolin-7-O-Glucoside'ın Farklılaşmamış ve RA-Farklılaşmışta 6-OHDA-İndüklenmiş Hasara Karşı Nöroprotektif Etkisi SH-SY5Y Hücreleri. Int. J. Mol. bilim 2022; 23 :2941. doi: 10.3390/ijms23062914. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
37. Enogieru AB, Haylett W., Hiss DC, Ekpo OE MPP+ Metab'a maruz kalan Rutin ile önceden işlenmiş SH-SY5Y hücrelerinde AKT/AMPK sinyalinin düzenlenmesi, otofaji ve apoptozun hafifletilmesi . Beyin Dis. 2021; 36 :315–326. doi: 10.1007/s11011-020-00641-z. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
38. Mubarakati NJ, Puspitarini OR, Rahayu T., Maulidiyah A. Alzheimer hastalığı tedavisi için asetilkolinesteraz enzimi (AChE) inhibitörü olarak zeytin yapraklarının fenolik bileşiğinin in silico keşfi. Berk. Penelit. Hayati. 2019; 24 :84–89. doi: 10.23869/bphjbr.24.1.20194. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
39. Figueiredo-González M., Reboredo-Rodriguez P., González-Barreiro C., Simal-Gándara J., Valentão P., Carrasco-Pancorbo A., Andrade PB, Cancho-Grande B. Nöroprotektif ve antidiyabetik değerlendirmesi in vitro analizlerle sızma zeytinyağından elde edilen fenol açısından zengin ekstraktların potansiyeli. Gıda Res. Int. 2018; 106 :558–567. doi: 10.1016/j.foodres.2018.01.026. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
40. Edziri H., Jaziri R., Chehab H., Verschaeve L., Flamini G., Boujnah D., Hammami M., Aouni M., Mastouri M. Yaprakların kimyasal bileşimi, antibiyofilm ve biyolojik aktiviteleri üzerine karşılaştırmalı bir çalışma dört Tunus zeytin çeşidinin özleri. Heliyon. 2019; 5 :e01604. doi: 10.1016/j.heliyon.2019.e01604. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
41. Martins RB, Gouvinhas I., Nunes MC, Peres JA, Raymundo A., Barros AIRNA Glutensiz ekmekte biyoaktif bileşiklerin kaynağı olarak palamut unu. moleküller. 2020; 25 :3568. doi: 10.3390/moleküller25163568. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
42. Monteiro M., Santos RA, Iglesias P., Couto A., Serra CR, Gouvinhas I., Barros A., Oliva-Teles A., Enes P., Díaz-Rosales P. Effect of Extraction method and solvent system seçilen makro ve mikroalg özlerinin fenolik içeriği ve antioksidan aktivitesi üzerine. J. Uygulama Phycol. 2020; 32 :349–362. doi: 10.1007/s10811-019-01927-1. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
43. Queiroz M., Oppolzer D., Gouvinhas I., Silva AM, Barros AIRNA, Domínguez-Perles R. Yeni üzüm saplarının izole edilmiş fenolik bileşikleri, in vitro olarak reaktif oksijen türlerini, glutatyonu ve lipid peroksidasyonu modüle eder: C vitaminleri ile kombine formülasyonlar ve E. Fitoterapia. 2017; 120 :146–157. doi: 10.1016/j.fitote.2017.06.010. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
44. Ellman GL, Courtney KD, Andres V., Jr., Featherstone RM A New and Rapid Colorimetric of Acetylcholinesterase Determination. biyokimya Eczane. 1961; 7 :88–95. doi: 10.1016/0006-2952(61)90145-9. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
45. Masuda T., Yamashita D., Takeda Y., Yonemori S. Sahil bitkileri özleri arasında tirozinaz inhibitörlerinin taranması ve Garcinia subelliptica kaynaklı güçlü inhibitörlerin tanımlanması. Biyosci. Biyoteknoloji biyokimya 2005; 69 :197–201. doi: 10.1271/bbb.69.197. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
46. Sousa C., Pontes H., Carmo H., Dinis-Oliveira RJ, Valentão P., Andrade PB, Remião F., Bastos ML, Carvalho F. Brassica oleracea var. costata, sıçan hepatositlerine in vitro olarak parakuat toksisitesini güçlendirir. Toksikol. vitrin 2009; 23 :1131–1138. doi: 10.1016/j.tiv.2009.05.012. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
47. Santos JS, Escher GB, Vieira do Carmo M., Azevedo L., Boscacci Marques M., Daguer H., Molognoni L., Inés Genovese M., Wen M., Zhang L., et al. Bitki özleri analizi için kimya ve toksikolojiye dayalı yeni bir analitik konsept: Fenolik bileşimden biyoaktiviteye. Gıda Res. Int. 2020; 132 :109090. doi: 10.1016/j.foodres.2020.109090. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Yorum yap