Duyuru

**igokcek** · 29 October 2012, 13:05

Afrika Sardunyası Forte, Itır Forte, Itır, Umkaloabo, Pelargonium sidoides

**igokcek** · 12 November 2012, 16:22

SİNÜZİT, Farenjit, Öksürük, Orta Kulak Ağrısı ve Bronşitin Afrika Sardunyası ile Tedavisi.

Bademcik İltihaplanması İçin Çay

gözden geçirmek Sağlığı Geliştirme Bağlamında Pelargonium sidoidlerin (EPs ^® 7630) Antimikrobiyal, Antiviral ve İmmünomodülatör Aktivite Çalışmaları
ile Herbert Kolodziej Eczacılık Enstitüsü, Farmasötik Biyoloji, Freie Universität Berlin, Koenigin-Luise-Str. 2 + 4, Berlin 14195, Almanya
Geliş tarihi: 30 Ağustos 2011; revize edilmiş formda: 20 Eylül 2011 / Kabul Tarihi: 29 Eylül 2011 / Yayın tarihi: 10 Ekim 2011

Öz
Sardunya türleri, geleneksel şifa uygulamalarıyla yakından bağlantılı olan uzun süredir devam eden bir tıbbi sistemin bir parçası olarak Güney Afrika bölgesindeki büyük bir nüfusun sağlık hizmetlerine önemli ölçüde katkıda bulunmaktadır. En önemlisi, P. sidoides köklerinin ekstraktları dizanteri ve ishalin tedavisi için yaygın olarak uygulanmıştır, ancak sadece zaman zaman solunumsal şikayetler için. Klinik çalışmalar, modern bir sulu-etanolik formülasyon göstermiştir P. sidoides özleri (EP ^® 7630), örneğin bronşit ve sinüzit için solunum sistemi bozukluklarının için etkili bir tedavidir. Unutulmamalıdır ki EP'ler ^®7630 en çok araştırılan ekstrakttır ve bu nedenle bu incelemenin odağıdır. Terapötik aktivitesi için bir gerekçe sağlamak amacıyla ekstraktlar antibakteriyel aktivite ve bunların spesifik olmayan bağışıklık fonksiyonları üzerindeki etkileri açısından değerlendirilmiştir. Mycobacteria suşları dahil olmak üzere bir bakteri spektrumuna karşı sadece orta derecede doğrudan antibakteriyel yetenekler kaydedilmiştir. Buna karşılık, in vitro büyük bir gövdeçalışmalar, spesifik olmayan bağışıklık sisteminin aktivasyonu ile ilişkili anti-enfektif bir prensip için ikna edici kanıtlar sağlamıştır. İlginç bir şekilde, son çalışmalardan solunum yolu enfeksiyonlarının patogenezinin anahtarı olan bakteriler ve konakçı hücreler arasındaki etkileşimin önemli ölçüde inhibisyonu ortaya çıkmıştır. Ek olarak, solunum virüslerinin ve hemaglutinin ve nöraminidaz enzimlerinin replikasyonunun inhibisyonu dahil antiviral etkiler gösterilmiştir. Ayrıca, solunum hücrelerinin siliyer atım sıklığının artması, P. sidoides ekstraktlarının faydalı etkilerine katkıda bulunabilir . Bu örnek, terapötik olarak faydalı bitkisel ilaçların kaynağı olarak Doğanın ve geleneksel tıbbi sistemlerin keşfini sürdürmek için zorlayıcı bir argüman sunmaktadır. Anahtar Kelimeler:
Pelargonium sidoides ; antibakteriyel; antiviral; immünmodülas

1. Giriş
Bulaşıcı hastalıklar insanlık için sürekli mevcut bir tehdit olmuştur ve olmaya devam etmektedir. Tıbbi ilerlemelere rağmen, bulaşıcı hastalıklar hala dünya çapında milyonlarca insanın ölüm nedenidir. Dünya genelinde her yıl meydana gelen tahmini 57 milyon ölümden yüzde 25'inden fazlasına doğrudan bulaşıcı hastalıklar neden olmaktadır [ 1 ]. Bulaşıcı hastalıklardan kaynaklanan dünya ölümlerinin yüzde 90'ından fazlası, alt solunum yolu enfeksiyonları, HIV / AIDS, ishalli hastalıklar, tüberküloz, sıtma ve kızamık gibi sadece bir avuç hastalıktan kaynaklanmaktadır ( Şekil 1 ) [ 1 ]. Özellikle ilaca dirençli suşların ortaya çıkması ışığında, yeni anti-enfektif ilaçlar için yeni hedefler tanımlanmalıdır.

Şekil 1. Küresel ölümler ve bulaşıcı hastalıklar.
Birçok bitkisel ilaç, solunum rahatsızlıkları gibi bulaşıcı durumların tedavisi için etnomedikal kullanımlara sahiptir. Bununla birlikte, bitki materyallerinin güvenliği ve kalitesi için kanıt sağlayan geleneksel programları doğrulamak için araştırma programları önemlidir. Geleneksel olarak kullanılan bitkisel ilaçların, kanıta dayalı bir terapi için uluslararası olarak gerekli kalite, güvenlik ve etkinlik kriterlerini karşılayan modern ve yüksek derecede başarılı bir fitoparmasötik geliştirilmesine temel oluşturabilir Pelargonium sidoidleri için örnek olarak gösterilmiştir . Pelargonium cinsinin üyeleri, geleneksel şifacılar ve Güney Afrika yerli nüfusu tarafından gastrointestinal bozuklukların tedavisinde iyileştirici ve hafifletici etkileri nedeniyle oldukça değerlidir.P. sidoides , tüberküloz ve ilgili hastalıklar gibi solunum yollarının bulaşıcı durumlarındaki terapötik faydaların raporları ile artırılmıştır. Bu tıbbi bitkinin ilginç etnobotanik ve ticari geçmişi ve fitokimyasal profili, başka yerlerde ayrıntılı olarak gözden geçirilmiştir ve bu nedenle tekrarlanmamıştır ( vide infra ). Bu rapor, P. sidoides ve bununla ilişkili bitkisel ilaç preparasyonu EPs ^® 7630'un altında yatan faydalı etkilerinin mekanizmaları hakkındaki mevcut bilgileri gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu özel ekstrakt, 9.000'den fazla hastayı içeren 20 klinik çalışmaya konu olmuştur. defalarca başka yerlerde gözden 1 yıl kadar genç olarak 3,900 çocuklar dahil ( aşağı bakınız). Bu derlemenin amacı, patojenlere karşı savunma ve çeşitli seviyelerde bağışıklık fonksiyonlarının iyileştirilmesi için geleneksel bir bitkinin, P. sidoides'in potansiyelini ve böylece doğal ürünlerin ilaç keşfinde oynamaya devam ettiği paha biçilemez rolü göstermektir. bulaşıcı ve diğer hastalıklar alanlarında süreç.

2. Tartışma

2.1. Pelargonium Sidoideslerin Geleneksel ve Terapötik Kullanımları
Tarihsel olarak, P. sidoides'in güney Afrika'nın geleneksel tıbbi sistemlerinde etnomedikal kullanımı esas olarak gastrointestinal bozukluklarla (ishal ve dizanteri) ilişkiliyken, solunum rahatsızlıklarının (tüberküloz, öksürük, soğuk algınlığı, boğaz ağrısı) sadece bazı kayıtları vardır. ve bu bilgilerin kaynakları her zaman sağlanmaz [ 2 - 5 ]. Bu bağlamda Pelargonium'un taksonomik sınıflandırmasını çevreleyen genel sorunların not edilmesi önemlidir.geçmişte çok sayıda revizyonla yansıtılan türler. Güney Afrika'da tüberküloz en sık bildirilen hastalıklardan biridir. Daha önceki günlerde etkili bir kemoterapi olmadığında, geleneksel şifacılarla geniş çapta istişare edildi ve tüberkülozla ilişkili semptomları hafifletmek için birçok yerel bitki kullanıldı. Gelince P. sidoides , Avrupa'daki modern fitoterapiyi derin geleneksel bir bitkisel ilaç başarılı sunumu önemli bir rol o köklerinden hazırlanan bir demlemek alarak tedavi ve sonradan “tanıtılmaya çalışılmıştır inanıyordu Charles Henry Stevens, bağlı olduğu Stevens 'Tüketim Kürü ”İngiltere'deki piyasada [ 5 - 8 ].

Bu bitkisel tedavi, sadece Güney Afrika'da değil, Avrupa ülkelerinde, Bağımsız Devletler Topluluğu, Baltık Devletleri ve Meksika'da da popülerliğin arttığını görüyor [ 4 , 9 ]. Solunum yolu, köklerinin modern formülasyonun enfeksiyon koşullarında iyi belgelenmiş terapötik yararları izlenerek P. sidoides EP, ^® 7630 (özel olarak Umckaloabo içerdiği ^® Spitzner Arzneimittel, Ettlingen, Almanya tarafından pazarlanan), den ayrıntılandırılmıştır bu geleneksel bitkisel ilaç. EP'ler ^®7630 özel bir sulu etanolik ekstrakttır. Birkaç randomize, çift-kör, plasebo-kontrollü çalışmada dahil olmak üzere klinik çalışmalarda bir dizi elde edilen sonuçlar, Umckaloabo kullanımını destekler ^® bronşit, sinüzit ve bademcik iltihabı gibi solunum yolu enfeksiyonları içerir. Ticareti yapılan ürünün güvenliğini ve tolere edilebilirliğini gösteren çeşitli pazarlama sonrası sürveyans çalışmaları mevcuttur [ 10 - 18 ]. Umckaloabo ^® Almanya'da akut bronşit tedavisi için bir ilaç olarak onaylandı. Bu hastalık, tıbbi uygulamada ve çoğunlukla RNA virüslerinin neden olduğu en sık teşhislerden biridir. Viral olmayan ajanların sadece% 10'undan azında etiyolojisinde rol oynar [ 19]. Şaşırtıcı bir şekilde, viral kaynaklı enfeksiyonlar için antibiyotik reçetesi, etkinliği bakteriyel enfeksiyonlarla sınırlı olmasına rağmen hala yaygındır [ 20 ]. Bir amaç, grup A hem-hemolitik streptokoklarla sekonder bakteriyel süperenfeksiyondan kaçınmak olabilir. Dirençli bakterilerin gelişimi, belirtilmemiş antibiyotik tedavisinin bir dezavantajıdır. Klinik çalışmalara dayanarak, Pelargonium bazlı preparat, aksi belirtilmedikçe antibiyotik tedavisine alternatif bir terapötik ajan sunar.

2.2. Antimikobakteriyel ve Solunum Yolu ile İlişkili Antibakteriyel Aktivite
P. sidoides'in antimikobakteriyel etkinliğinin önceki iddialarının ardından , köklerin metanol ekstreleri ve karakteristik fenol ve kumarin bileşenlerinin bazıları bu biyolojik aktivite için test edildi. Radyorespirometrik BACTEC yöntemini kullanarak, ekstraktlar Mycobacterium tuberculosis'e (12.5 ug / mL'de% 96) karşı antimikobakteriyel aktivite gösterdi , test edilen saflaştırılmış bileşiklerin hiçbiri bu deneysel koşullar altında herhangi bir antimikobakteriyel aktivite sergilemedi. Aynı ekstrakt M. tuberculosis'e karşı zayıf aktiviteler sergiledi(100 ug / mL MIC), bir et suyu mikrodilüsyon alamar mavisi analizinde değerlendirildi. Referans olarak kullanılan rifampisin, kullanılan deney koşulları altında 0.06 μg / mL'lik bir MIC göstermiştir. P. sidoides'in zayıf antimikobakteriyel aktivitesinin bağımsız desteği, test organizmaları olarak M. tuberculosis ve M. smegmatis kullanılarak yapılan aseton ve etanol kök ekstraktlarının benzer çalışmaları ile sağlanırken , bu bitki kaynağından izole edilen kumarinler ve flavonoidlerin yine inaktif olduğu kanıtlanmıştır [ 4 ]. > 1.024 μg / mL MIC ile, P. sidoides'in sulu aseton özütü, bir et suyu mikrodilüsyon tahlilinde hızla büyüyen avirulent M. smegmatis'e karşı ihmal edilebilir antimikobakteri aktiviteleri gösterdi [ 21]. Benzer sonuçlar , karşılaştırılabilir ilaç duyarlılık profilleri nedeniyle M. tuberculosis'e karşı aktiviteyi öngördüğü bildirilen bir tür olan M. aurum'a karşı test edilerek elde edilmiştir . Bu bulgu, doğrudan antimikobakteriyel aktivitenin görünüşe göre sadece mikobakteri suşuna değil, aynı zamanda güçlü bir şekilde ekstre hazırlama ve kompozisyonuna da bağlı olduğunu göstermektedir.

Antimikobakteriyel bileşenlerin araştırılması sırasında, hızla büyüyen mikobakteriler paneline karşı etkinliği olan n -heksan kök ekstraktlarında bulunan bazı düz zincirli yağ asitleri tanımlanmıştır [ 22 , 23 ]. İlginç bir şekilde, laurik asit hariç tüm doymuş yağ asitleri herhangi bir antimikobakteriyel aktiviteden yoksundur, oysa oleik asit ve linoleik asit dahil doymamış analoglar aktifti, ikincisi en güçlü olanıdır ( M. aurum'a karşı 2 μg / mL MIC) ). Bununla birlikte, bu veriler P. sidoides'in antimikobakteriyel bir prensibi için ikna edici kanıt sağlamaz.. Geleneksel tıpta kaynatma ve infüzyonlar kullanılır, böylece sulu preparatlarda etkili lipofilik bileşen seviyelerinin varlığı sorgulanır. Ayrıca, mikobakterilerin hücre içinde yerleşik patojenlere sahip oldukları, ayrıca in vitro protokollerin bu patojenler üzerinde doğrudan bir hareketi yansıttığı belirtilmelidir. Bu P. sidoides kök ekstreler görünüşte, bu deney koşulları altında antimikobakteriyel aktivitesi sınırlı göstermektedir ileri çalışmalar [yansıtılır 24 , 25 ]. Şimdiye kadar yapılan deneylerde genel ılımlı antimikobakteriyel aktivite dikkate alındığında, P. sidoides'in iddia edilen etkili kullanımının olması muhtemeldir.tüberküloz tedavisinde Mycobacteria patojenleri üzerindeki herhangi bir doğrudan etki yerine spesifik olmayan bağışıklık sisteminin uyarılmasına bağlı olabilir . Bu popüler Pelargonium türlerinin antimikobakteriyel prensibi henüz tanımlanmamıştır.

Paralel çalışma, P. sidoides'in bir mikroorganizmalar paneline karşı antibakteriyel aktivitesinin değerlendirilmesine odaklanmıştır ( Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, ß-hemolitik Streptococcus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aerugemogrep, influenza ile ilgili, respiratuar hastalıklarla birlikte) [ 26 ]. Bununla birlikte, sulu bir aseton özütünün in vitro antibakteriyel etkileri, su ve organik çözücüler (etil asetat, n-butanol, 600-7.500 μg / mL'lik MIC'ler) ve birbirini izleyen çeşitli bileşikler (MIC'ler) birbirini takip eden bölümlerden elde edilen fraksiyonlar 200–1,000 μg / mL) klasik antibiyotiklere kıyasla sadece ılımlı olduğu gösterilmiştir. Standart kök ekstresi EP'lerinin ^®7630 şimdiye kadar benzer antibakteriyel çalışmalara maruz kalmamıştır, ancak ılımlı aktiviteler yaygın olarak belirtilmiştir. Sıvı preparat Umca ^® ve izolatları ( Streptococcus pneumonia, S. pyogenes, S. viridans, Staphylococcus aureus, S. epidermis, Neisseria spp., Moraxella catarrhalis, Haemophilus influenza ) kullanılarak yapılan çalışmalardan bağımsız olarak zayıf doğrudan antibakteriyel aktivitelerin desteklenmesi . hastaların boğaz kültürleri [ 27 ]. Bir mikrodilüsyon suyu yöntemi kullanılarak, MIC değerleri, test edilen bakterilerin çoğu için> 800 μg / mL MİK değeri ile 200-1.600 μg / mL aralığındaydı.

Bu hayal kırıklığı yaratan bulgular, P. sidoides- bazlı bitkisel ilaçların anti-enfektif özelliklerine bir ipucu sağlayabilecek dolaylı antibakteriyel mekanizmalar sergilemeye çalışan bir dizi çalışmaya yol açmıştır [ 28 ]. Patojenik bakterilerin konak hücre yüzeyine yapışması, kolonizasyon ve enfeksiyonda çok önemli bir olaydır. Mikrobiyal yerleştirme işleminin epitel hücrelerine erken bir aşamada inhibisyonu, konakçı hücrelerin enfeksiyondan korunmasında etkili olacaktır. Bir model olarak florasan etiketli grubu A-streptokoklar ve canlı insan laringeal hücreleri (Hep-2) kullanılarak, ( 'ye kadar sitometrik ölçümler belirgin gösterdi akış yaklaşık EP anti-yapışkan ve anti-invasif yetenekleri muamele edilmemiş hücreler ile karşılaştırıldığında% 45) ^®7630 konsantrasyona bağlı bir şekilde (<30 ug / mL). Özellikle, konakçı hücrelere streptokok yapışma inhibisyonu bakteri EP ile ön-muamele edildiği zaman, sadece açıktı ^® , anti-yapışkan maddenin etkileşimi sadece bakteriyel dış membane yüzeyi ile ve epitel yanlar bağlanma meydana geldiğini gösteren, 7630 yüzey.

Son deneyler, proantosiyanidinlerin ( Şekil 2 ) fenolik içermeyen ekstraktların görünür 'eksik' aktivitesinden sonuçlandığı gibi, grup A-streptokok kenetleme işleminin HEp-2 hücrelerine gözlenen inhibisyonunda belirleyici bir rol oynadığını ortaya koymuştur [ 29 ]. Homojen epikateşin ve kateşin bazlı poliflavans, bir 'karışık' prosiyanidin numunesi, bir prodelphinidin test maddesi ve bir A tipi proantosiyanidin içeren bu anti-yapışkan çalışmalardan ortaya çıkan resim, EP tipi ^{® '} nin anti-streptokokal aktivitesinin kanıtı7630 polifenollerin prodelphinidin tipi alt yapıya (epigallokateşin ve gallokatekin genişletme birimleri) bağlı olduğu görülmüştür. Tedavi öncesi deneyler, anti-yapışkan proantosiyanidinlerin etkileşiminin sadece bakteri yüzeyi üzerindeki bağlayıcı faktörlerle meydana geldiğini göstermiştir. Bloke edilmiş moleküller, örneğin fibronektin ve kollajen bağlayıcı adezyonlar [ 30 ] tanımlanmaya devam etmektedir.

Şekil 2. Epigallocatechin ve gallocatechin genişletici birimlerinin yanı sıra çift bağlı A tipi elemanlara sahip Pelargonium sidoidlerin proantosiyanidinlerinin temsili yapısı . İlginç bir şekilde, bakteriyel bağlanma ca. Gözle görülür şekilde çoğunlukla ölü olan bukkal epitel hücreleri kullanıldığında EPs ^{® '} in etkisi altında 7 kat [ 28 ]. Kapana kısılmış mikroorganizmaların inaktivasyonu, çürüyen bukkal hücrelerin fizyolojik olarak parçalanması ve tükürük ile yutulmasıyla açıklanabilir. Bu şekilde, ele geçirilen patojenler bozulmamış hücrelere yapışma için mevcut değildir. Canlı epitel hücrelerine bakteriyel yapışmanın oldukça yüksek inhibisyonu göz önüne alındığında, bu dolaylı antibakteriyel aktivitelerin bulaşıcı durumlar üzerinde yararlı etkileri vardır. EPs ^® 7630'un mikrobiyal yapışma üzerindeki etkisi Helicobacter pylori ile yapılan çalışmalarda da gösterilmiştir [31 , 32 ]. Yine, floresan etiketli H. pylori'nin P. sidoides özütü ile ön muamelesi, insan mide mukozası hücrelerine doza bağlı bir şekilde yapışmayı inhibe etti. Bununla birlikte, altta yatan biyolojik olarak aktif ilkenin tanımlanması gerekmektedir. Birlikte ele alındığında, gösterdi anti-yapışkan bir mekanizma da EP anti-enfektif etkinliğine katkıda bulunabilir ^® bir bakteriyel enfeksiyonun erken zaman noktasında 7630.

Ayrıca, P. sidoides ekstraktının, streptokok istilasını HEp-2 hücrelerine önemli ölçüde inhibe etme potansiyelinden bahsetmeye değer . Anti-yapışma aktivitesine benzer şekilde, polifenoller, istilacılığı kolaylaştırmak için bakteriler tarafından üretilen hücre dışı proteinlere müdahale edebilir. Açıkçası bakterilerin hücrelerimizi istila etmek için kullandığı temel prensibi anlamak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. Daha tıbbi bir bakış açısından, epitel hücrelerinin bakteriyel istilasının inhibisyonu, konağı, konakçı savunmaları ve antibiyotik tedavisinden kaçan patojenlerden korur. Konakçı hücrelerin içine girdikten sonra tekrarlayan streptokok enfeksiyonları iyi ortaya çıkabilir. Streptokok istilasının gösterilen inhibisyonu böylece tekrarlayan enfeksiyonları önler.

Yukarıdaki bulgular P. sidoides'in hem doğrudan hem de dolaylı antibakteriyel özellikleri için kanıt sağlamasına rağmen, bu bitkisel ilacın belirgin anti-enfektif yetenekleri sadece gözlenen antibakteriyel aktiviteler temelinde yeterince açıklanamaz.

2.3. Solunum Hücrelerinin Mukosiliyer Sistemine Etkisi
Mukosiliyer sistem, bakteri ve yabancı partiküllerin havasını temizlemek için burun boşluğunun ve bronş ağacının bir savunma mekanizmasını temsil eder; siliyer atım frekansı (CBF), etkinliğini belirlemek için önemli bir parametredir. EP ^® önemli ölçüde 7630 ve konsantrasyona bağımlı olarak, insan nazal epitelyum hücrelerinin bir yapışkan tek tabakalı kültürü CBF artmıştır. 30 ug / mL'de artış ca. Denge fazına göre% 125 [ 33 ]. Yıkama prosedürlerinden sonra CBF, dengeleme periyoduna geri döndü. Bununla birlikte, sonraki muayeneler mukosiliyer klerensi vurgulayarak in vivo koşullar altında etkisini kanıtlamak zorundadır .

2.4. Antiviral Etkiler
Solunum yolu enfeksiyonları sık (> vakaların% 90): [virüslerin neden olduğu için 19 ], bu EP çekicidir ^® deneylerde, bir dizi 7630 sergilenen antivirütik etkiler. Örneğin, bir fibroblast virüsü koruma analizinde belirgin sitoprotektif etkiler gözlenmiştir [ 34 ]. Bu test modelinde, aktif makrofajların süpernatanları, EMCV süspansiyonlarına maruz bırakılmadan önce bir ensefalomiyokardit virüsü (EMCV) ve IFN'ye duyarlı murin L 929 fibroblastlarının (ML929F) bir tek tabakasına transfer edildi. IFN aktivitesi, EM92 ile enfeksiyonun neden olduğu sitopatik etkiye (CPE) karşı ML929F'nin korunması gözlenerek değerlendirildi. Canlı hücrelerin nispi sayısı, korunan hücreler için boyama reaktifi olarak kristal viyole kullanılarak spektrofotometrik olarak belirlendi [35 ]. Antiviral koruma, ML929F'de EMCV tarafından indüklenen CPE'nin% 50'sini inhibe edecek olan süpernatant seyreltinin karşılıklı değeri olarak tanımlanan U / mL olarak ifade edildi. Bu değerler, tahlil duyarlılığındaki herhangi bir dalgalanmayı hesaba katmak için IFN standardı (100 U / mL) ile korele edilmiştir. Tanınmış sito-koruyucu etkiler ( yaklaşık % 60) EP gözlenmiştir ^® 1.4 ug / mL'lik bir numune konsantrasyonu [CPE tamamen inhibe ile oldukça düşük dozlarda (0.8 ug / mL), en 7630 34 ]. Son rafine çalışma kemik iliğinden türetilmiş makrofaj süpernatant (BMMΦ) EP 10 ug / mL olan uyardığını göstermiştir ^® 7630 bir antiviral aktivitesi üretmiştir ca. 80 U / mL, LPS (1 ng / mL) yanıtına benzer [36 ]. Bilinen antiviral faktörler, reseptör spesifisitesi ve sekans homolojisine göre tip I ve tip II interferonlarda sınıflandırılan IFN ailesinin üyeleridir [ 37 , 38 ]. Fonksiyonel tahlil IFN-a, IFN-y ve IFN-y arasında ayrım yapmadığından, yazarların ilgisi ELISA kullanılarak tespit edilmesine odaklanmıştır. Herhangi bir potansiyel antiviral bileşiği tanımlamaya yönelik tüm girişimler başarısız olmuştur, bu da ya etkili IFN seviyelerinin üretiminin testlerin tespit sınırlarının altında olduğunu, sinerjistik etkilerin güçlü genel eyleme veya bağışıklık sisteminin tip III IFN gibi diğer elementlerine katkıda bulunabileceğini düşündürmektedir. [ 39 ] sorumlu etkili ajanlardır. Eikosanoidlerin viral enfeksiyonun kontrolünde rol oynayabileceği dışlanabilir. EP'ler^® 7630'un kalsiyum-iyonofor ile uyarılan insan granülositlerinde üretimini baskıladığı gösterilmiştir [ 40 ]. Çeşitli proantosiyanidinlerle yapılan önceki çalışmalar, bu bileşik sınıfının üyelerinin belirgin IFN benzeri aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir [ 41 ]. Ekstrakttaki varlıkları da bir indükleyici faktör olabilir. Bahsedilmesi gereken, ekstraktın doğrudan ML929F'ye maruz kaldığında herhangi bir sitoprotektif etki yaratmadığı ve dolaylı bir etki modunu açıkça belirtmesidir.

Belirtildiği gibi, bilinen antiviral faktörler IFN ailesinin üyeleridir. EP belirgin modülatör gücü ^® 7630, IFN düzeyde, güçlü antivirütik etkilere sahiptir ve doğal öldürücü hücreler fonksiyonel aktivitesine aracılık [ 42 , viral çift ile superinduced zaman], insan MG-63 osteosarkoma hücrelerinde artmış IFN-B sentez ile gösterilmiştir bağlı RNA analog poliinosinik asit: polisitidilik asit [ 35 ]. Etki sadece enfeksiyöz bileşenin varlığında belirgindi, 3 μg / mL uygulandıktan sonra maksimum% 200 büyütme. Bu olağanüstü seçicilik, spesifik olmayan bağışıklık sisteminin aktivasyonunun sadece patojenler tarafından istila edilmesinden sonra yürürlüğe girmesi bakımından önemlidir.

P. sidoides sulu ekstraktının doğrudan antiviral aktivitesi ilk önce bir plak indirgeme deneyi kullanılarak RC-37 hücreleri üzerinde herpes simpleks virüsü tip 1 (HSV-1) ve tip 2'ye (HSV-2) karşı in vitro olarak değerlendirildi [ 43 ]. Her iki virüs de tekrarlayan orofasiyal (HSV-1) ve genital lezyonlarla (HSV-2) yaygın enfeksiyonlara neden olur. Sadece konsantrasyon-bağımlı bir şekilde belirgin antiviral etkileri IC ile RC-37 hücre özütü ve müteakip enfeksiyonu ile virüslerin ortaya tedavi öncesi ₅₀ 0.6 ug / mL değerleri ve 0.05 ug / mL için, HSV-1 ve HSV-2 sırasıyla . Dikkate IC oranı olarak tanımlanan mükemmel seçicilik endeksi alarak ₅₀RC-37 hücreleri üzerindeki sitotoksisite (0.04 mg / mL) ve antiherpes aktivitesi arasındaki değerler, antiviral etki muhtemelen, tanımlanmaya devam eden virüs ve ekstrakt bileşenleri arasındaki etkileşimlerden kaynaklanmaktadır. Özellikle, 10 ug / mL'lik maksimum sitotoksik olmayan numune konsantrasyonunda, plak oluşumu ca. HSV-1 ve HSV-2 için% 99,9. Etki şekli, virüsün adsorpsiyonu veya replikasyon süresi boyunca inkübasyon ile yapılan bir dizi deneyle araştırıldı. Sonuçlar, HSV'nin adsorpsiyon döneminde sadece özütün eklenmesinin enfektiviteyi önemli ölçüde azalttığını gösterdi. Yine, polifenoller, spesifik olmayan bir şekilde seçici bir şekilde hareket ederek altta yatan aktif prensibi temsil edebilir.

EPs ^® 7630'un üst solunum yolu enfeksiyonlarının tedavisi için modern fitomedinde terapötik kullanımını takiben, bu ekstraktın mevsimsel influenza A virüs suşları (H1N1, H3N2), solunum sinsityal virüsü, insan koronavirüsü gibi bir virüs paneline karşı antiviral etkileri gösterilmiştir. , parainfluenza virüsü ve coxsackie virüsü akut bronşit ve ilişkili bulaşıcı hastalıklardan muzdarip hastalarda uygulanabilir yararlı etkilere dair kanıt sağlamıştır [ 44 ]. Coxsackie hariç olmak üzere, tüm hassas virüslerin bu çökelticilerini düşündüren zarflı ^® 7630 inhibe eder, bu kategorinin virüslerin tercihen çoğaltma. Bu, zarflı uçuk virüsleri üzerindeki potansiyel antiviral etkilerle uyumluydu [ 43 ]. Aslında, EP'ler^® 7630, zarfsız rino ve adenovirüslerin neden olduğu sitopatojenik etkiler üzerinde herhangi bir etki göstermemiştir. EP için gözlenen değiştirilmesi, duyarlılıkları ^® 7630 influenza A (H1N1, H3N1, H5N1) bireysel influenza virüsleri yüzeyi üzerinde mevcut mutant hemaglutininlerin ile açıklanabilir. Virüsün konakçı hücreye bağlanmasından sorumlu olan bu yapısal olarak tadil edilmiş glikoproteinler bu nedenle ekstrakttan farklı şekilde etkilenebilir. EP etkisini değerlendirmek deneyler ^® hücre hatları, bir dizi virüs kaynaklı sitopatojenik etkilerinin üzerine 7630 IC gösterilen ₅₀ değerleri> 100 ug / mL.

Yüksek oranda korunmuş aktif bölgesi ile nöraminidaz (sialidaz) enzimi, sadece enfekte olmuş konakçı hücrelerden virionların salınmasında değil, aynı zamanda üst solunum yolu boyunca hareketlerinde de önemli bir rol oynar [ 45 ]. İnfluenza enfeksiyonlarının tedavisi ve önlenmesi için terapötik seçenekler arasında, nöraminidaz inhibitörleri, adayların viral enfeksiyonların yayılmasını önlemeleri için umut vaat etmektedir. Soğuk algınlığının ilişkin talep edilen anti-viral potansiyeli göz önüne alındığında, EP ^® 7630 orjinal olarak test edilmiştir , in vitro bir florometrik-esaslı bir analiz [kullanılarak nöraminidaz inhibe edici aktivitesi 46 ]. Zanamivir (IC _{50 ile karşılaştırıldığında)}71 ug / mL), ekstre bakteriyel nöraminidaz inhibe edici aktiviteye belirgin arzeden Vibrio kolera , IC ile, ₅₀ 0.9 ug / mL [değerinin 47 ]. Kanıtlar, ancak, EP ^® 7630, bu viral nöraminidaz benzer inhibe edici aktiviteye sahip olan bir in vitro modeli daha fazla araştırma gerektirir. Daha da ilginç olanı, tanenlerin uzaklaştırılması için ekstraktın cilt tozu ile işlenmesi, inaktif bir numune üretti. Polifenol içermeyen ekstraktın aktivite kaybı, proantosiyanidinlerin görünüşte altta yatan aktif prensibi temsil ettiğini açıkça göstermiştir. EP'lerin özgüllüğü ^®Bu biyolojik aktivite için 7630 polifenol EP aktivitesini inhibe nöraminidaz yapar.Otel veriler ortaya konan değişik flavanyl oluşturucu birimlerinin müteşekkil örnekleri proantosiyanidin (prosiyanidler prodelphinidins, A-tipi proantosiyanidinler) bir dizi test ile gösterilmiştir ^® 7630 prodelphinidin genişletme ile ilişkili olabilir oligoflavanoidlerde birimler.

EP antiviral aktivitesi bağımsız destek ^® 7630, influenza A suşu H1N1, bir oseltamivire dirençli H1N1 alt tipi ve H3N2 [kullanarak bir çalışmada kökenli 48 ]. Veriler, influenza virüsünün yüzeyinde bulunan ana proteinlerin, hemaglutinin ve nöraminidazın inhibisyonunu önermektedir. Bu potens H1N1 virüsü ile yapılan in vivo deneylerde de belirgindi . EPs ^® 7630 bileşenlerinin, enfeksiyonun erken ve son aşamasında viral replikasyon yaşam döngüsü için önemli olan iki yüzey glikoproteinleri ile etkileşimi düşünüldüğünde, ekstraktın terapötik yararı, bir enfeksiyon profilaksisi ve iyileşmesi ışığında görülebilir. bulaşıcı durum.

2.5. Spesifik Olmayan Bağışıklık Sisteminin Rolü
P. sidoides'in spesifik olmayan bağışıklık sistemi üzerindeki birçok etkisini ve patojenlere karşı konakçı yanıtındaki potansiyel rolünü anlamak için mikrobiyal ajanların temizlenmesinde rol oynayan önemli bileşenleri göstermek uygun görünmektedir. Birkaç immünolojik faktör anti-enfektif tepkiler ile ilişkili olduğundan, sadece esas olarak spesifik olmayan bağışıklık sisteminin uyarılmasını ima eden ve P. sidoides bazlı ilaçlarda tespit edilen şimdiye kadar bilinen anti-enfektif prensiple yakından ilişkili olan bu parametreler kısaca açıklanmaktadır . İndüklenmiş sitotoksik savunma mekanizmalarına basitleştirilmiş bir genel bakış Şekil 3'te gösterilmektedir .

Şekil 3. P. sidoides'in kök ekstraktının neden olduğu aktif makrofajların sitotoksik savunma mekanizmalarının basitleştirilmiş gösterimi .
Makrofajlar, bağışıklık tepkilerinde bir dizi karmaşık işlemde yer alan son derece çok yönlü hücrelerdir. Aktif hale getirildiklerinde mikrobisidal efektör fonksiyonları edinir ve sitokinleri salgılarlar, bu da bağışıklık hücrelerinin toplanmasına ve daha sonra fagositoz veya reaktif oksijen ve azot türlerinin salınmasıyla patojenin ortadan kaldırılmasına neden olur. Reaktif oksijen türlerinin üretimi NADPH oksidaz ile başlatılır. Birincil ürün H dönüştürülebilir süperoksit olduğu ₂ O ₂ hidroksil radikalleri ve anyonları sonra süperoksit dismutaz ve.

Nitrik oksit ve birçok konjeni (NO) üretimi bir başka önemli makrofaj antimikrobiyal tepkisidir. NO, makrofaj aracılı sitotoksisite dahil olmak üzere çoklu biyolojik fonksiyonlara sahip önemli hücre içi ve hücreler arası düzenleyici moleküllerdir [ 49 - 52 ]. Endojen olarak türetilen NO, farklı hücre tiplerinde bulunan ve cNOS'un etkisi altında sürekli fizyolojik seviyelerde salınan konstitütif (c) veya indüklenebilir (i) nitrik oksit sentazlar (NOS) tarafından enzimatik olarak L-arginin'den üretilir [ 53]. Tüm NO sentazlar L-arginin ve moleküler oksijeni L-sitrulin ve NO'ya dönüştürür. Bununla birlikte, immünolojik uyaranlara yanıt olarak aktif makrofajlarda iNOS'un ekspresyonu, uzun süreler boyunca büyük miktarlarda NO salımını indükler. NO türleri, bakterilere, parazitlere ve virüslere karşı bağışıklık korumasında antimikrobiyal efektör moleküller olarak yararlı bir şekilde işlev görmesine ve hücre sağkalımını düzenlemesine rağmen, bağışıklık yanıtı sırasında üretilen nispeten yüksek ve sürekli indüklenebilir NO seviyesi septik şokta dramatik şekilde gösterildiği gibi zararlı olabilir. Buna göre, NO üretiminin düzenlenmesi insan sağlığı için önemlidir. Süperoksit anyonunun varlığında, konakçı savunma mekanizmasında da yer alan bir dizi NO efektör molekülü geçerli olabilir.

Reaktif oksijen ve azot türlerinin üretimi enfeksiyöz patojenlerin öldürülmesine önemli ölçüde katkıda bulunmasına rağmen, aktif makrofajlardan ve ilgili hücrelerden sitokinlerin salgılanması, aynı zamanda, viral veya bakteriyel bir enfeksiyona karşı etkili bir bağışıklık tepkisinin ayrılmaz bir bileşenidir. bu sitotoksik efektör türlerinin üretimi. Bağışıklık tepkisinin tüm seviyelerinde hareket ederler ve karmaşık bir molekül ağı oluştururlar. Makrofaj ile ilişkili sitokinler arasında, tümör nekroz faktörü (TNF) -α'nın salınması, antimikrobiyal NO üretimine yol açan bir sinyalleme kaskadının önemli bir erken adımıdır [ 54 , 55]. Ayrıca TNF-a'nın makrofajlar ile iNOS ve NO üretiminin indüklenmesinde IFN-y ile sinerjikleşmesine rağmen, tek başına IFN-y'nin iNOS transkripsiyonunu ve NO salımını bağımsız olarak arttırabildiği gösterilmiştir [ 56 , 57 ]. Bu sitokinlerin , TNF'nin serbest bırakılması için bir fibroblast-liz testi ve bir sitopatik etki inhibisyon testi gibi makrofaj fonksiyonları üzerindeki Pelargonium kaynaklı bağışıklık modülatör etkilerinin başlangıçta araştırılmasında yol açan mikrobiyal patojenlerin NO aracılı yıkımında oynadığı rol. IFN benzeri özellikler ( vide infra ). Önemli olarak, virüslerin kontrolü konakçı hücreler tarafından üretilen IFN-y ve IFN-ß yoluyla sağlanırken, IFN-y makrofaj aktivasyonuna aracılık eder.

2.6. İmmünomodülatör Faaliyetler
Viral bir enfeksiyondan kaynaklanan dengesiz savunma mekanizmaları, ikincil bir bakteriyel enfeksiyonun yolunu temizleyebilir. Tüberküloz tedavisinde P. sidoides köklerinin etnomedikal kullanımını hatırlatarak, patojenik mikobakterilerin makrofaj sitotoksik savunma mekanizmalarının aktivasyonuna bağlı olmayan makrofajlara girmek için çoklu mekanizmalar geliştirdiğini vurgulamak uygundur. kendi hayatta kalmalarını sağlamak için [ 58 ]. Mikobakterilerin hücreler içinde bulunması ve daha az etkili doğrudan antibakteriyel güçlerin ( vide supra ) spesifik olmayan bağışıklık sisteminin uyarılmasının P. sidoides'in anti-enfektif aktivitesine katkıda bulunabileceğini düşündürmektedir.ekstreler. Bu nedenle acil soru, mikrobiyal patojenlerin ve muhtemelen solunum yolu enfeksiyonlarıyla ilişkili virüslerin bağışıklık kontrolüne katkıda bulunan faktörlerle ilgilidir.

2.6.1. Fagositik Aktivite ve Oksidatif Patlama
Fagositoz ve fagositlerin ilgili aktivitesi, konakçı savunmasının bakteri ve virüsler de dahil olmak üzere istilacı patojenlere karşı doğal bağışıklığında önemli bir rol oynar. Dolaşımdaki kan fagositleri hızla enfeksiyon bölgelerine alınır. Bağlı patojene bağlı moleküler modellerle aktive edilen mikroorganizmalar, fagositler (fagositoz) tarafından yutulur ve bunu patojenlerin yok edilmesine (hücre içi öldürme) katkıda bulunan reaktif oksijen türlerinin (oksidatif patlama) üretimi ve salınması izler. Hedef organizma olarak Candida albicans ile tam kan bazlı, akış sitometrik bir tahlil kullanarak , EPs ^®7630, konsantrasyona bağlı bir şekilde fagositoz hücrelerinin sayısını (30 ug / mL ekstrakt örneği ilave edildikten sonra 2 dakika sonra maksimum% 56 artırıldı) önemli ölçüde arttırdı. Hedef: efektör hücre oranı 1: 1 olduğunda, tüm maya hücreleri 30 dakika sonra yutuldu [ 59 ].

Oksidatif patlamaya gelince, 30 μg / mL ekstraktın uygulanması, benzer şekilde, kontrollerle karşılaştırıldığında 4 dakikada maksimum% 120'lik bir artışla, 2 dakikadan fazla gözlemlenen tüm zaman noktaları için patlama aktif kan fagositlerinde belirgin bir artışa yol açtı. Patlama aktivitesinin uyarılması, tüm Candida organizmaları zaten yutulmuş olsa bile hala saptanabilmiştir . Fagositik aktivite güçlü bir şekilde mikroorganizma türüne bağlı olsa da, bu bulgu Pelargonium ekstraktının fagositik aktiviteyi etkili bir şekilde geliştirdiğini açıkça göstermiştir . Ayrıca, mikrobiyolojik bir hücre içi öldürme tahlilinden elde edilen sonuçlar, hayatta kalan maya hücrelerinin sayısının ca.Kontrollerle karşılaştırıldığında 120 dakikada% 30. Oral uygulamanın yararı, enfeksiyon bölgesinde hem yerleşik hem de istilacı fagositler üzerindeki lokal etkilerde görülebilir.

2.6.2. Patojenlerin Hücre İçi Öldürülmesi ve Nitrik Oksitlerin Serbest Bırakılması
Makrofajların deneysel enfeksiyonu, geleneksel tıpta P. sidoides'in önceki antitüberküloz kullanımı ile tutarlı bir hücre içi patojene hücre aracılı bir yanıt sırasında meydana gelen immünoregülasyonu değerlendirmek için özellikle çok yönlü bir model oluşturur . Güvenlik nedenleri ve rahatlığı için, sıçangil makrofajlarının patojenik Mikobakteri suşlarından ziyade zorunlu hücre içi Leishmania parazitleri ile enfekte edildiği, bulaşıcı hastalıklar için yerleşik bir in vitro model seçilmiştir [ 60 ]. Süspansiyon kültüründe makrofajların enfeksiyonuna, makrofajınPelargonium özütü ve konakçı hücrelerin sodyum dodesil sülfat (SDS) ile parçalanması [ 61 ]. Hayatta kalan Leishmania organizmaları daha sonra sarı 3- (4,5-dimetiltiyazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolium bromürün (MTT) mavi bir formazan ürününe dönüştürülmesiyle nicelendirildi. Birlikte Pelargonium üst sulu aseton ve metanol ekstreleri yanı sıra organik fraksiyonlar (petrol eter, etil asetat, aşağıdakileri içeren ekstraktlar , n -bütanol), hücre dışı promastigot formlarına karşı etkisiz olduğu kanıtlanmıştır Layişmanya türleri, Kesin anti layişmanya etkileri olan hücre içi amastigotların karşı gözlendi EC ₅₀ ile klinik ve farmakolojik önemiug / mL <0.1 3.3 arasında değişen değerler İlacın 7.9 ug / mL ile karşılaştırıldığında, ^® pozitif kontrol [olarak 60 ]. Yakın zamanda kanıtlar, yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden transgenik L. majör kullanılarak floresanla aktive edilmiş hücre taraması (FACS) analizi ile sağlanmıştır [ 62 ]. Bu yöntemin mikroskobik preparatlarda ve SDS liziz / MTT protokolünde parazit saymayı içerenlere göre önemli avantajları vardır. Enfekte BMMΦ'nin EPs ^® 7630 ile tedavisi, doza bağlı bir şekilde hücre içi GFP sinyalinde önemli bir azalmayla sonuçlandı ve bağışıklık savunma mekanizmalarının ancak tek hücre seviyelerinde aktivasyonu ile ilgili önceki sonuçları teyit etti ( Şekil 4)). Parazit yükünün azalması, ölü hücrelerin (tüm deneylerde PI pozitif hücreler ® IFN-y ile kombinasyon halinde 7630 ölçüde etkilerini arttırdığını. Örneğin, EPs ^® 7630 (10 μg / mL) artı IFN-γ (100 U / mL) kombinasyonu, hücre içi öldürmede IFN-γ (100 U / mL) artı LPS (10 ng / mL) kadar etkili olmuştur. parazitler [ 36 ].

Şekil 4. bağışıklık tepkisi L. majör EP ile muamele GFP enfekte makrofajlar ^® 7630: NO üretimi (Griess deneyi), GFP pozitif olaylar (göreceli hayatta kalma parazit oranları; FAS analizi), ve propidyum iyodür pozitif olaylar (ölü konakçı hücreler; FACS analizi).
NO'nun sitotoksik efektör molekül ( vide supra ) olarak hayati rolü göz önüne alındığında, Pelargonium özütlerinin ve bileşenlerinin NO indükleme potansiyeli , nicel olarak işlenmiş örneklenmiş makrofaj (BMMΦ, RAW 264.7) kültürlerinin süpernatanları kullanılarak belirlendi. Griess deneyi kullanılarak nitrit konsantrasyonunu belirleyerek. Bağışıklık tepkisinin enfekte olmuş hücrelerde önemli ölçüde daha fazla ifade edilmesi, gerektiğinde spesifik olmayan bağışıklık sisteminin etkili bir şekilde uyarılmasını önermektedir. Pozitif kontrol (100 U / mL IFN-γ + 10 ng / mL LPS) ile karşılaştırıldığında, hidrofilik Pelargonium'un NO indükleme potansiyeliözler önemli ölçüde daha az belirgindi. Bununla birlikte, indüklenen NO üretiminin, deneysel modellerde kullanılan makrofajların türüne (BMMΦ; RAW 264.7) bağlı olduğuna dikkat edilmelidir [ 63 ]. L-NMMA ilavesiyle iNOS'un inhibisyonu, önemli ölçüde daha düşük NO seviyeleri üretti ve eşzamanlı olarak GFP sinyalini arttırdı, bu da mikrobiyal enfeksiyonlara ve EP'lerin belirgin NO-indükleme yeteneklerine karşı konakçı savunmasında NO'nun toksik efektör molekülü olarak kritik rolü için güçlü kanıtlar sağladı. ^® 7630. NO üretimi ile parazit öldürme arasında güçlü bir ters korelasyon gözlenmesine rağmen, NO'dan bağımsız ilave savunma mekanizmalarının katılımı göz ardı edilemez.

Yukarıdaki ümit verici sonuçlar, hücre içi Listeria monositogen bakterileri kullanan ek bir enfeksiyon modeli ile çalışmalara yol açmış ve hücresel ve moleküler düzeyde daha ilgili çalışmaların yapılmasını motive etmiştir [ 64 ]. Bu deneysel enfeksiyon modeli yaygın olarak antimikrobiyal savunmayı incelemek için de kullanılmaktadır [ 65 ]. Tutarlı Layişmanya modeli, EPS enfekte hücrelerin maruz ^® , konsantrasyon bağımlı bir tarzda 7630 önemli ölçüde geliştirilmiş NO üretiminin sadece enfekte olmuş hücreleri ile karşılaştırıldığında. Dikkat çekici bir şekilde, NO üretimi enfeksiyondan sonra erken bir zamanda artmıştır (6 saat). Her ne kadar bu FACS bazlı analizde hayatta kalma oranı ölçülmemesine rağmen, etiketli bulunmaması nedeniyleL. monocytogenes organizmaları, istilacı patojenlerin etkili bir şekilde ortadan kaldırılması beklenebilir. Veriler EPs ^® 7630'un geniş bir bulaşıcı hastalık spektrumunda ve daha da önemlisi terapötik olarak ilgili dozlarda (≤ 30 μg / mL) NO salınımını indüklediğini göstermektedir . Buna göre, spesifik olmayan bağışıklık sisteminin uyarılması, hücre içi yerleşik mikobakteriler için öngörülebilir. Her ne kadar bu hala kanıtlanmasına rağmen, mevcut veriler tüberküloz ve geleneksel tıpta ilgili hastalıkların daha önceki tedavisinde bu bitkisel ilacın iddia edilen etkinliği için bir ipucu sunmaktadır. İlginç bir şekilde, bir memeli konakçı hücre kontrolü olarak makrofajlara karşı test edildiğinde, tüm numuneler hiç veya sadece orta sitotoksisite gösterdi.

2.6.3. Tümör Nekroz Faktörü, IL-1 ve IL-12 Salımının İndüksiyonu
Makrofaj aktivasyonu genellikle enfeksiyona erken cevap sırasında TNF salınımı olan bir polifenotipik olaydır [ 54 ]. Bu nedenle , yukarıda bahsedilen Pelargonium ekstreleri tarafından indüklenen TNF-aktivitesinin ölçülmesi, bu bitkisel ilacın anti-enfektif potansiyelinin değerlendirilmesinde bir başka önemli immünolojik parametredir. Başlangıçta TNF salımı, örnekle aktive edilen BMMy'nin süpernatanları ile muamele edilmiş TNF'ye duyarlı ML929F'nin mevcudiyetinde hızla parçalandığı fonksiyonel bir deneyde [ 66 ] değerlendirildi . Hayatta kalan hücreler kristal menekşe boyası içerir ve nispi sayıları spektrofotometrik olarak belirlenmiştir. ≤ 25 μg / mL konsantrasyonunda, etil asetat ( yaklaşık 20 U / mL) ve n -butanol fazı (CA. 19 U / mL) orta derecede TNF indükleme potansiyeline sahip bulundu. Geri kalan tüm örnekler, pozitif kontrol olarak LPS uyaranına (10 ng / mL; 184 U / mL) kıyasla sadece ihmal edilebilir bir etki (<5 U / mL) gösterdi [ 60 ]. Sistemik TNF'nin ölümcül olabileceğini akılda tutarak enfekte olmamış hücrelerde Pelargonium ekstraktlarının orta TNF indükleme kabiliyeti faydalı olabilir. Bu fonksiyonel biyo-tahlil şimdiye kadar enfekte makrofajlara kadar genişletilmedi. Bununla birlikte, gen ekspresyon analizi, enfekte hücrelerdeki ( vide supra ) TNF-a transkriptlerinin arttırılmış ve uzun süreli yukarı regülasyonunu açıkça göstermiştir . EP neden olduğu artan hücre içi TNF-a α seviyeleri teyit kanıt ^®Enfeksiyöz hücrelerle karşılaştırıldığında enfeksiyöz koşullarda 7630, son zamanlarda tek hücre seviyelerinde FACS analizinden elde edilmiştir [ 64 ]. Dikkat çekici bir şekilde, bu membrana bağlı sitokinin uyarılmış enfekte hücrelerde ( yaklaşık % 35) birikmesi, işlenmemiş kültürlerden ( yaklaşık % 45 ) daha az belirgindi . Bu fenomen, bitkisel ekstraktın aracılık ettiği TNF-a dönüştürücü enzimin arttırılmış aktivitesi ile açıklanabilir. Bu saptama, EPS ile muamele edilmiş enfekte olmuş hücrelerin yüzer ELISA ile tespit artan çözünür TNF-α protein seviyeleri ile destek buldu ^® 7630. TNF-α titreler ( yaklaşık 10-16 ng / ml; EP ^®7630 test konsantrasyonları 1-30 μg / mL), hem pozitif LPS kontrolünün hem de enfekte olmuş hücrelerin ( her durumda yaklaşık 10 ng / mL ) göze çarpacak kadar yüksekti .

TNF-a'nın yanı sıra, erken makrofaj ile ilişkili sitokin üretimi interlökin (IL) -1 ve IL-12'yi içerir. Hücre içi / zar-bağlı sitokinlerin Analizleri tekrar olmaması ve EP varlığında olmayan enfekte edilmiş ve enfekte olmuş hücrelerin paralel olarak gerçekleştirilmiştir ^® akış sitometri kullanılarak tek bir hücre seviyelerinde, sırasıyla 7630,. ELISA, hücre süpernatanlarında salgılanan sitokinleri izlemek için kullanıldı. BMMΦ deneysel ile enfekte kullanma L. monocytogenes , EP ile inkübasyon ^® -olmayan enfekte edilmiş ve sadece enfekte olan hücrelerin [ile karşılaştırıldığında 7630 içi ve hücre-dışı, IL-1 ve IL-12 üretimini artırdı 64 ].

IL-1, IL-12 ve TNF-a'nın göstermiştir artar üretim kez daha EP potansiyelini teyit ^® tek hücre düzeyinde enfeksiyon kontrol edici maddeler için konak savunma mekanizmaları indükleme 7630. IL-1'in, hem NK hücrelerinden hem de T hücrelerinden IFN-y salımını indükleyen IL-12 üretiminin indüksiyonunda TNF-a ile sinerjik olduğu bilinmektedir. IFN-γ, NO üretimini tetikleyerek korumaya aracılık eder. Ayrıca, IL-12'nin Thl olgunlaşmasındaki önemi gösterilmiş, böylece doğal ve uyarlanabilir bağışıklık arasında bir bağlantı sağlanmıştır.

2.7. Gen İfadesi Deneyleri
Leishmania enfeksiyonu ve diğer patojenik ajanlara karşı koruyucu bağışıklığın uyarılması , sitokinlerin üretimi ile yakından bağlantılıdır. Densitometrik ölçümlerden elde edilen verilerin analizi, enfekte olmuş RAW 264.7'nin iNOS ve sitokinin (IL-1, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-a, IFN-y ve TNF-a) mRNA seviyelerinin olduğunu ortaya koydu. hücreler, enfekte olmayan hücrelerinkine kıyasla LPS artı IFN-y'ye yanıt olarak önemli ölçüde artmıştır. Özellikle, EPS ^® önemli ölçüde artmıştır ve uzun süreli yukarı düzenlemelere 7630 üretilen benzer transkript profilleri belirgin enfeksiyöz şartlar altında (ifade Şekil 5 ) [ 67 - 69 ].

Şekil 5. iNOS ve sitokin transkriptlerinin sentezlenmesi enfekte olmayan ve L. majör 264.7 hücreleri EP 50 ug / mL ile 4 saat boyunca uyarılmış RAW enfekte ^® 7630 ve pozitif kontrol (ctr) ve LPS / IFN-y. Sonuçlar,% 100 olarak tanımlanan hipoksantin-guanin-fosforibosil transferaz mRNA'ya göre gösterilmiştir.
Aşağı regüle edici işlevlerle ilişkili bir sitokin olan IL-10 transkriptleri [ 70 ] daha sonra açıkça ifade edilmiştir. Bu bulgu , fonksiyonel seviyelerde ( vide supra ) gözlenen P. sidoideslerin anti-enfektif potansiyelini bağımsız olarak destekledi . İlginç bir şekilde, bu bitkisel ilaç ayrıca enfekte olmuş hücreleri IFN-y transkriptleri üretmeleri için uyardı. IFN-y'nin monositik soy hücrelerinde ekspresyonu sadece belirli fizyolojik ve patolojik koşullar altında kaydedilmiştir [ 71 , 72 ]. Ayrıca, her iki sitokinin çeşitli patojenlere karşı savunma için kritik öneme sahip olması ve IFN-production üretiminde yer alması açısından IL-12 ve IL-18 mRNA seviyelerinin yukarı regülasyonundan bahsetmeye değerdir [ 73 ,74 ]. Sonraki çalışmalar IFN-y mRNA ekspresyonunun bitkisel özler arasında P. sidoides'in eşsiz bir özelliği gibi göründüğünü öne sürmektedir [ 75 ]. Gen ekspresyon deneyleri böylece transkripsiyonel seviyede makrofaj aktivasyonu için kanıt sağladı.

2.8. Yüzey İşaretlerinin İfadesi
Son zamanlarda, bazı yüzey belirteçleri araştırma ilgisinin odağı haline gelmiştir [ 64 ]. CD40, öncelikle makrofajlar dahil antijen sunan hücreler üzerinde eksprese edilen TNF reseptör süper ailesinin bir üyesidir. Bu yüzey markerinin IFN-γ bağımlı ve bağımsız konak savunma mekanizmaları [ 76 , 77 ] için önemli bir düzenleyici reseptör olduğu ve bir CD4 ⁺ T hücresi aracılı bağışıklık tepkisinin geliştirilmesi için gerekli olduğu bulunmuştur [ 78 ]. Enfekte olmamış ve Listeria -enfekte olmuş BMMΦ'nin EPs ^® 7630 ile uyarılması , CD40'ın ekspresyonunu kısmen arttırmıştır [ 63]. Bununla birlikte, bu bitkisel ilacın 1 ug / mL'lik çok düşük konsantrasyonda belirgin ifadelerden yola çıkarak enfekte koşullarda yukarı regüle edilmiş CD40 ekspresyonunu sürdürebileceği öne sürülmüştür.

BMMy'nin LPS + IFN-y veya EPs ^® 7630 (30 ug / mL) ile uyarılması, reseptörün içselleştirilmesiyle rasyonelleştirilebilen IFN-y alıcı alt birimi CD119'un dramatik bir şekilde aşağı regülasyonu ile sonuçlandı. Enfeksiyöz koşullar altında bu reseptörün aşağı regülasyonu, BMMy ile enfekte olmuş L. monocytogenes'teki benzer etkilerle tutarlıdır [ 79 ]. CD119 ekspresyonundaki değişikliklerin, hücrenin IFN-y'ye yanıt verme hassasiyetini etkilediği ileri sürülmektedir [ 80 ]. Bu sınırlı moleküler çalışmalar kesin ifadelere izin vermez, ancak en azından, P. sidoides ekstraktının anti-enfektif testlerde etki tarzının daha fazla çalışması için teşvik sağlar .

2.9. Antimikrobiyal Peptitlerin Salımı
Polimorfonükleer nötrofiller (PMN'ler) patojenlere karşı ön hat savunmasında kilit rol oynar. Diğer bağışıklık hücrelerini toplamaya ve aktive etmeye ek olarak, PMN'lerin, bakterisidal / geçirgenliği arttırıcı protein (BPI) ve defensinler, insan nötrofil peptitleri (HNP) 1-3 gibi geniş spektrumlu antimikrobiyal aktiviteye sahip çözünür peptitleri salgıladıkları gösterilmiştir. En son EP ^® 7630, konsantrasyona bağımlı bir şekilde [bu antimikrobiyal peptitlerin serbest kalmasını geliştirdiği de gösterilmiştir 81 ]. 30 μg / mL EP'de ^®7630, HNP 1-3 ve BPI düzeylerini sırasıyla% 150 ve% 127 artırdı. Ekstraktın salınması için LPS'den (% 82, 10 ng / mL) çok daha iyi bir indükleyici olduğu, LPS'nin BPI (% 356) için daha etkili olduğu kanıtlanmalıdır. İlginç bir şekilde, her iki uyaranın kombinasyonu, incelenen antimikrobiyal peptitlerin orantısız olarak salınmasını arttırdı (BPI ve HNP 1-3 için sırasıyla% 531 ve% 294). Bu bulgu daha fazla kanıt sağladığını bağışıklık sistemi tepki verir daha hızlı ve büyük olasılıkla daha etkili patojenlere karşı EP'lerinin tedavi altında ^® 7630 bu bitkisel ilaç yokluğunda daha. 3. Sonuçlar

Solunum yolu hastalıklarının ampirik tedavisinde yüzyıllardır kullanılan geleneksel Güney Afrika bitkisel ilaçları Avrupa laboratuvarlarına girmiştir. EPs ^® 7630 olarak adlandırılan ve bu geleneksel tıptan geliştirilen özel bir ekstrenin son kimyasal, farmakolojik ve klinik çalışmaları, bu koşullarda etkinliğini kanıtlamıştır. P. sidoides gibi bitkilerin incelenmesispesifik olmayan bağışıklık sistemi üzerindeki etkiler, daha yeni terapötik ajanların türetilebileceği yeni kimyasal yapıların tanımlanmasına yol açabilir ve moleküler düzeyde etki tarzına ek bakış açısı sağlayabilir. Bu örnek, kanıta dayalı bir terapi için mevcut kalite, güvenlik ve etkililik kriterlerini karşılayan terapötik olarak faydalı bitkisel ilaçların kaynağı olarak Doğa ve geleneksel tıbbi sistemlerin keşfini sürdürmek için zorlayıcı bir argüman sunmaktadır.

Teşekkür
Son 20 yılda projenin yayınlarında listelenen çalışma arkadaşlarının yanıltıcı çabalarının ilham kaynağı olduğu kanıtlandı ve yazar herkese minnettar.

Çıkar çatışması
Yazarın çalışmaları kısmen ilaç şirketi Willmar Schwabe GmbH & Co, Karlsruhe, Almanya tarafından desteklendi.

Referanslar

WHO. Sağlık istatistikleri ve sağlık bilgi sistemleri , Çevrimiçi olarak bulunabilir: http://www.who.int/healthinfo/statistics (erişim tarihi 22 Haziran 2011).
Watt, JM; Breyer-Brandwyk, MG Güney ve Doğu Afrika'nın Tıbbi ve Zehirli Bitkileri ; Livingstone: Edinburgh / Londra, İngiltere, 1962; sayfa 449-455. [ Google Akademik ]
Hutchings, A. Zulu Şifalı Bitkiler ; Natal University Press: Pietermaritzburg, Güney Afrika; s. 1996 =.
Kolodziej, H .; Kiderlen AF in vitro antibakteriyel ve bağışıklık düzenleyici faaliyetlerinin değerlendirilmesi Pelargonium reniforme , Pelargonium sidoides ve ilgili bitkisel ilaç hazırlama EP ^® 7630. Phytomedicine 2007 , 14 , 18-26. [ Google Akademik ]
Brendler, T .; van Wyk, BE Pelargonium sidoides (Geraniaceae) 'nin tıbbi kullanımına tarihsel, bilimsel ve ticari bir bakış açısı . J. Ethnopharmacol. 2008 , 119 , 420-433'te açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Helmstädter, A. Umckaloabo - Gizli bir çözümün geç onaylanması. Pharm. Tarihçi 1996 , 26 , 2-4. [ Google Akademik ]
Taylor, PW; Maalim, S .; Coleman, S. Umckaloabo'nun garip hikayesi. Pharmac. J. 2005 , 275 , 790-792. [ Google Akademik ]
Kolodziej, H. Pelargonium sidoides köklerinin sulu etanolik ekstresi - Eski bir anti-enfektif fitoparmasötik için yeni bilimsel kanıt. Planta Med. 2008 , 74 , 661-666'da açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Kolodziej, H. Bitkisel ilaç Umckaloabo ^{® '} nun geleneksel ve bitki kökenli kaynakları olan Pelargonium sidoides ve Pelargonium reniforme'nin büyüleyici metabolik havuzları . Phytomedicine 2007 , 14 , 9-17. [ Google Akademik ]
Chuchalin, AG; Berman, B .; Lehmacher, W. Yetişkinlerde akut bronşitin Pelargonium sidoides preparatı (EPs ^® 7630) ile tedavisi : Randomize, çift kör, plasebo kontrollü bir çalışma. 2005 , 1 , 437-445'i keşfedin . [ Google Akademik ]
Haidvogl, M .; Heger, M. Çocukluk çağında akut bronşitte EPs ^® 7630-çözeltisinin tedavi etkisi ve güvenliği : Çok merkezli gözlemsel bir çalışmanın raporu. Phytomedicine 2007 , 14 , 60-64. [ Google Akademik ]
Matthys, H .; Heger, M. Akut bronşitin Pelargonium sidoides (EPs ^® 7630) ' dan sıvı bir bitkisel ilaç preparasyonu ile tedavisi : Randomize, çift kör, plasebo kontrollü çok merkezli bir çalışma. Curr. Med. Res. Opin. 2007 , 23 , 323-331. [ Google Akademik ]
Lizogub, VG; Riley, DS; Heger, M. Soğuk algınlığı olan hastalarda bir Pelargonium sidoides preparatının etkinliği : Randomize, çift kör, plasebo kontrollü bir klinik çalışma. 2007 , 3 , 573-584'ü keşfedin . [ Google Akademik ]
Matthys, H .; Funk, P. EPs ^® 7630 akut bronşit semptomlarını iyileştirir ve remisyon süresini kısaltır. Randomize, çift kör, plasebo kontrollü, çok merkezli bir çalışmanın sonuçları. Planta Med. 2008 , 7 , 686-692'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Agbabiaka, TB; Guo, R .; Ernst, E. Akut bronşit için sardunya sidoidleri : Sistematik bir gözden geçirme ve meta-analiz. Phytomedicine 2008 , 15 , 378-385. [ Google Akademik ]
Bachert, C .; Schapowal, A .; Funk, P .; Kieser, M. Akut rinosinüzitin Pelargonium sidoides EPs 7630 preparasyonu ile tedavisi: Randomize, çift kör, plasebo kontrollü bir çalışma. Rinoloji 2009 , 47 , 51-55. [ Google Akademik ]
Kamin, W .; Maydannik, VG; Malek, FA; Kieser, M. Akut bronşiti olan çocuklarda ve ergenlerde EP 7630'un etkinliği ve tolere edilebilirliği: Pelargonium sidoides köklerinden bitkisel ilaç preparasyonu ile randomize, çift kör, plasebo kontrollü çok merkezli bir çalışma. Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. 2010 , 48 , 184–191. [ Google Akademik ]
Kirk, KM; Garbes Netto, PG Muhtemelen viral akut toplumun kazandığı tonsillofarenjit tedavisi için Pelargonium sidoidlerin pazarlama sonrası gözetimi . Rev. Panam. Infectol. 2007 , 9 , 15-24. [ Google Akademik ]
Gonzales, R .; Sande, AM Komplike olmayan akut bronşit. Ann. Stajyer. Med. 2000 , 133 , 981-991'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Gonzales, R .; Bartlett, JG; Besser, RE; Cooper, RJ; Hickner, JM; Hoffmann, JR; Sande, AM Komplike olmayan akut bronşit tedavisi için uygun antibiyotik kullanım prensipleri: Ann. Emerg. Med. 2001 , 37 , 720-727. [ Google Akademik ]
Gödecke, T. Phytochemische und Pharmakologische Bir Pelargonium sidoides DC'yi Untersuchungen. Doktora. Tez, Freie Universität, Berlin: Berlin, Almanya, 2005. [ Google Akademik ]
Taylor, PW Yerli Güney Afrika bitkilerinin antimikobakteriyel aktivitesi. S. Afr. Med. J. 2003 , 93 , 904-907'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Seidel, V .; Taylor, PW Pelargonium ekstrelerinin ve bileşenlerinin hızla büyüyen mikobakterilere karşı in vitro aktivitesi . Int. J. Antimicrob. Ajanlar 2004 , 23 , 613-619. [ Google Akademik ]
Mativandlela, SNP; Lall, N .; Meyer, JJM Pelargonium reniforme Curtis ve Pelargonium sidoides DC'nin antibakteriyel, antifungal ve antitüberkülar aktivitesi . (Geraniaceae) kök ekstreleri. S. Afr. J. Bot. 2006 , 72 , 232-237. [ Google Akademik ]
Mativandlela, SNP; Meyer, JJM; Hüseyin, AA; Lall, N. Pelargonium sidoideslerden izole edilen bileşiklerin antitüberküloz aktivitesi . Pharm. Biol. 2007 , 45 , 645-650. [ Google Akademik ]
Kayser, O .; Kolodziej, H. Pelargonium sidoides ve Pelargonium reniforme ekstrelerinin ve bileşenlerinin antibakteriyel aktivitesi . Planta Med. 1997 , 63 , 508-510'da açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Uslu, H .; Yoruk, O .; Ayyıldız, A .; Aktan, B. Umckaloabo'nun ( Pelargonium sidoides ) üst solunum yolu enfeksiyon ajanları üzerindeki antibakteriyel spektrumu . Avro. J. Gen. Med. 2009 , 6 , 245-248'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Conrad, A .; Jung, I .; Tioua, D .; Lallemand, C .; Carrapatoso, F .; Engels, I .; Daschner, FD; Frank, U. Özü Pelargonium sidoides (EP ^® 7630) Grup A-streptokoklar ve ana epitelyumun etkileşimlerini inhibe vivo . Phytomedicine 2007 , 14 , 52-59. [ Google Akademik ]
Janecki, A .; Conrad, A .; Engels, I .; Frank, U .; Kolodziej, bir sulu etanolle ekstrakte H. Değerlendirme Pelargonium sidoides (EP ^® insan HEp-2 hücreleri için grup A-streptokoklar yapışma karşı aktivitesi için 7630). J. Ethnopharmacol. 2011 , 133 , 147–152. [ Google Akademik ]
Podbielski, A .; Kreikemeyer, B. Streptococcus pyogenes'in doku özgüllüğünün arka planı . Bioforum 2009 , 29 , 32-34. [ Google Akademik ]
Beil, W .; Kilian, P. EP'ler ^® 7630, bir özü Pelargonium sidoides Köklerin inhibe eder bağlılık Helicobacter pylori mide epitel hücrelerine. Phytomedicine 2007 , 14 , 5-8. [ Google Akademik ]
Wittschier, N .; Faller, G .; Hensel, A. özüt Pelargonium sidoides (EPS ^® in situ yapışmasında 7630) inhibe eder Helicobacter pylori insan mide. Phytomedicine 2007 , 14 , 285-288. [ Google Akademik ]
Neugebauer, P .; Mickenhagen, A .; Siefer, O .; Walger, M. Hücre kültürlerinde siliyer atım sıklığı üzerindeki farmakolojik etkilere yeni bir yaklaşım - Pelargonium sidoides ekstraktı altında örnek ölçümler . Phytomedicine 2005 , 12 , 47-52. [ Google Akademik ]
Marcucci, F .; Klein, B .; Kirchner, M .; Zawatzky, R. Önceden stimüle edilmiş dalak hücreleri tarafından yüksek interferon gama titrelerinin üretilmesi. Avro. J. Immunol. 1982 , 12 , 787-790'da açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Kolodziej, H .; Kayser, O .; Radtke, OA; Kiderlen, AF; Koch, E. Pelargonium sidoidlerin ekstraktlarının ve bileşenlerinin farmakolojik profili . Phytomedicine 2003 , 10 , 18-24. [ Google Akademik ]
Thäle, C .; Kiderlen, AF; Kolodziej, H. Anti-infektif aktiviteleri Pelargonium sidoides (EP ^® 7630) üzerinde oluşan NO üretimi etkileri Leismania majör enfekte makrofajlar ve antiviral etkileri bir fibroblast-virüs koruma analizinde değerlendirilen. Planta Med 2011 , 77 , 718-725. [ Google Akademik ]
Schroder, K .; Hertzog, PJ; Ravani, T .; Hume, DA Interferon-γ: Sinyaller, mekanizmalar ve fonksiyonlara genel bakış. J. Leukoc. Biol. 2004 , 75 , 163-189. [ Google Akademik ]
Pestka, S .; Krause, CD; Walter, MR İnterferonlar, interferon benzeri sitokinler ve reseptörleri. Immunol. Rev. 2004 , 202 , 8-32. [ Google Akademik ]
Ank, N .; Iversen, MB; Bartholdy, C .; Staeheli, P .; Hartmann, R .; Jensen, UB; Dagnaes-Hansen, F .; Thomsen, AR; Chen, Z .; Haugen, H .; vd . TLR'nin neden olduğu antiviral aktivitede tip III interferon (IFN-lamba / IL-2) için önemli bir rol. J. Immunol. 2008 , 180 , 2474–2485. [ Google Akademik ]
Koch, E .; Augustin, R .; Wohn, C .; Erdelmeier, CAJ Pelargonium sidoides kök ekstresi EPs ^® 7630 tarafından RBL-2H3 hücreleri ve insan granülositlerinden aracı salımının inhibisyonu. Planta Med. 2010 , 76 , 1291. [ Google Akademik ]
Kolodziej, H .; Kayser, O .; Kiderlen, AF; Ito, H .; Hatano, T .; Yoshida, T .; Foo, LY Proantosiyanidinler ve ilgili bileşikler: Kemirgen makrofaj benzeri hücre hattında RAW 264.7'nin nitrik oksit ve tümör nekroz faktörü a salımı üzerinde antileishmanial aktivite ve modülatör etkiler. Biol. Pharm. Boğa. 2001 , 24 , 1016-1021. [ Google Akademik ]
Bağışıklık regülatörleri olarak Biron, CA Interferons α ve ß - Yeni bir görünüm. Bağışıklık 2001 , 41 , 661-664. [ Google Akademik ]
Schnitzler, P .; Schneider, S .; Stintzing, FC; Carle, R .; Reichling, J. Herpes virüsüne karşı sulu bir Pelargonium sidoides ekstraktının etkinliği . Phytomedicine 2008 , 15 , 1108–1116. [ Google Akademik ]
Michaelis, M .; Doerr, HW; Cinatl, J., EP etkisi Jr. incelenmesi ^® 7630, elde edilen bir bitkisel ilaç hazırlama Pelargonium sidoides solunum yolu virüslerinin geniş bir panelin çoğaltma. Phytomedicine 2011 , 18 , 384-386. [ Google Akademik ]
von Itzstein, M. İnfluenzaya karşı savaş: Sialidaz inhibitörlerinin keşfi ve gelişimi. Nat. Rev. Uyuşturucu Keşfi. 2007 , 6 , 967–974. [ Google Akademik ]
Potier, M .; Mameli, L .; Belisle, M .; Dallaire, L .; Melanon, SB Bir sodyum (4-metilumbelliferil-a-DN-asetilnöraminat) substratı ile nöraminidazın florometrik deneyi. Anal. Biochem. 1979 , 94 , 287-296. [ Google Akademik ]
Janecki, AJ; Kiderlen, AF; Kolodziej, H. in vitro EP değerlendirilmesi ^® alt tabaka olarak, sodyum (4-metil-umbelliferyl) -α-DN-acetylneuraminate kullanarak inhibe nöraminidazını kabiliyeti için 7630. Planta Med. 2009 , 75 , 989. [ Google Akademik ]
Muller, CP İmmünoloji Enstitüsü, Centre de Recherche Public-Santé / Laboratoire Ulusal de Santè: Lüksemburg; Kişisel iletişim ; 2011. [ Google Akademik ]
Moncada, S .; Palmer, RMJ; Higgs, EA Nitrik oksit: Fizyoloji, patofizyoloji ve farmakoloji. Pharmacol. Rev. 1991 , 43 , 109-142. [ Google Akademik ]
Nathan, CF; Hibbs, J. Makrofaj antimikrobiyal aktivitesinde nitrik oksit sentezinin rolü. Curr. Opin. Immunol. 1991 , 3 , 65-70. [ Google Akademik ]
Liew, FY; Wei, XQ; Proudfoot, L. Parazit enfeksiyonlarına karşı efektör molekül olarak sitokinler ve nitrik oksit. Phil. Trans. Kraliyet Soc. Lond. B 1997 , 352 , 1311-1315. [ Google Akademik ]
Bogdan, C .; Röllinghoff, M .; Diefenbach, A. Doğuştan ve spesifik bağışıklıkta reaktif oksijen ve reaktif azot ara maddeleri. Curr. Opin. Immunol. 2000 , 12 , 64-76. [ Google Akademik ]
Bredt, DS Endojen nitrik oksit sentezi: Biyolojik fonksiyonlar ve patofizyoloji. Serbest Radik. Res. 1999 , 31 , 577-596. [ Google Akademik ]
Reiner, SL; Locksley, RM Leishmania majörüne karşı bağışıklığın düzenlenmesi . Annu. Rev. Immunol. 1995 , 13 , 151-177. [ Google Akademik ]
Roach, TI; Kiderlen, AF; Blackwell, geçirmeye inorganik azot oksitler ve tümör nekroz faktörü alfa JM Rolü Leishmania donovani amastigotlar gamma interferon-lipopolisakarit ile aktive LSH makrofajlar ^s ve LSH ^r konjenik fare türleri. Infect. Immun. 1991 , 59 , 3935-3944'te açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Deng, W .; Thiel, B .; Tannenbau, CS; Hamilton, TA; Stuehr, DJ Kemirgen peritoneal makrofajlarında nitrik oksit sentaz geninin indüksiyonu için T hücresi lenfokinleri arasındaki sinerjistik işbirliği. J. Immunol. 1993 , 151 , 322-329'da açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Ding, AH; Nathan, CF; Stuehr, DJ Fare peritoneal makrofajlarından reaktif azot ara maddelerin ve reaktif oksijen ara maddelerin salınımı. Aktive edici sitokinlerin ve bağımsız üretim kanıtlarının karşılaştırılması. J. Immunol. 1988 , 141 , 2407-2412'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Ernst, Mycobacterium tuberculosis için JD Makrofaj reseptörleri . Infect. Immun. 1998 , 66 , 1277-1281'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Conrad, A .; Hansmann, C .; Engels, I .; Daschner, FD; Frank, U. Özü Pelargonium sidoides (EP ^® 7630) fagositozunu, oksidatif patlama, ve insan periferik kan, fagositlerin hücre öldürme geliştirir in vitro . Phytomedicine 2007 , 14 , 46-51. [ Google Akademik ]
Kayser, O .; Kolodziej, H .; Kiderlen, AF Pelargonium sidoideslerin immünomodülatör prensipleri . Phytother. Res. 2001 , 15 , 122-126. [ Google Akademik ]
Kiderlen, AF; Kaye, PM Leishmania parazitlerine karşı hücre içi sitotoksisite için makrofaj aktivasyonunun modifiye edilmiş kolorimetrik analizi . J. Immunol. Yöntem 1990 , 127 , 11-18. [ Google Akademik ]
Kram, D .; Thäle, C .; Kolodziej, H .; Kiderlen, AF Hücre içi parazit öldürmesi: Akış sitometrisi ve anti-lizmanyal aktivite ile makrofaj aktivasyonu arasında hızlı ayrımcılık için NO tespiti. J. Immunol. Yöntemler 2008 , 333 , 79-88. [ Google Akademik ]
Kiderlen, AF; Kayser, O .; Ferreira, D .; Kolodziej, H. Tanenler ve ilgili bileşikler: Leishmania donovani'nin amastigotlarının öldürülmesi ve makrofajlarda in vitro nitrik oksit ve tümör nekroz faktörü α salımı . Z. Naturforsch. 2001 , 56c , 444-454. [ Google Akademik ]
Thäle, C .; Kiderlen, A .; Kolodziej, H. EPs ^® 7630'un moleküler düzeyde anti-enfektif etki şekli . Planta Med. 2008 , 74 , 675-681. [ Google Akademik ]
Kuzey, RJ; Dunn, PL; Conlan, antimikrobiyal savunma için bir model olarak JW Murine listeriosis. Immunol. Rev. 1997 , 158 , 27-36. [ Google Akademik ]
Wagner, H .; Jurcic, K. Bitki Biyokimyasında Yöntemler ; Dey, PM, Harborne, JB, Eds .; Akademik Basın: Londra, İngiltere, 1991; Cilt 6, s. 195-217. [ Google Akademik ]
Radtke, OA; Kiderlen, AF; Kayser, O .; Kolodziej, H. Galya asidi ile muamele edilmiş Leishmania major ile enfekte makrofaj benzeri RAW 264.7 hücrelerinde indüklenebilir nitrik oksit sentaz ve sitokinlerin gen ekspresyon profilleri . Planta Med. 2004 , 70 , 924-928'de açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Kolodziej, H .; Burmeister, A .; Trun, W .; Radtke, OA; Kiderlen, AF; Ito, H .; Hatano, T .; Yoshida, T .; Foo, LY Tanenler ve ilgili bileşikler, Leishmania major ile enfekte makrofaj benzeri RAW 264.7 hücrelerinde nitrik oksit sentaz ve sitokin gen ifadelerini indükler . Bioorg. Med. Chem. 2005 , 13 , 6470-6476'da açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Trun, W .; Kiderlen, AF; İçerisinde Kolodziej, H. Nitrik oksit sintazı, ve sitokinler, gen ekspresyon analizi Layişmanya Ham bir ekstraktın ile muamele 264.7 hücreleri enfekte Pelargonium sidoides (EP ^® 7630). Phytomedicine 2006 , 13 , 570-575. [ Google Akademik ]
Mocellin, S .; Panelli, MC; Wang, E .; Nagorsen, D .; Marincola, FM IL-10'un ikili rolü. Trendler Immunol. 2003 , 24 , 36-38. [ Google Akademik ]
Mogensen, SC; Virelizier, JL İnterferon-makrofaj ittifakı. Interferon 1987 , 8 , 55-84. [ Google Akademik ]
Gessani, S .; Belardelli, F. Makrofajlarda IFN-y ekspresyonu ve olası biyolojik önemi. Sitokin Büyüme Faktörü Rev. 1998 , 9 , 117-123. [ Google Akademik ]
Trinchieri, G. Interleukin-12: Doğal direnci ve antijene spesifik adaptif bağışıklığı köprüleyen immünoregülatör fonksiyonlara sahip proinflamatuar bir sitokin. Annu. Rev. Immunol. 1995 , 13 , 251-276. [ Google Akademik ]
Sugawara, I. İnterlökin-18 (IL-18) ve bulaşıcı hastalıklar, hücre içi patojenlerin neden olduğu hastalıklara özel vurgu. Mikroplar Bulaşıcı. 2000 , 2 , 1257-1263'te açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Kolodziej, H .; Kiderlen, AF Tanenlerin ve ilgili bileşiklerin Leishmania parazitlenmiş RAW 264.7 hücreleri üzerindeki antilishmanial aktivitesi ve bağışıklık modülatör etkileri . Fitokimya 2005 , 66 , 2056-2071. [ Google Akademik ]
Andrade, RM; Portillo, JA; Wessendarp, M .; Subauste, makrofajlarda CS CD40 sinyali, gama interferon ve reaktif azot ara maddelerinden bağımsız olarak hücre içi bir patojene karşı aktivite indükler. Infect. Immun. 2005 , 73 , 3115-3123. [ Google Akademik ]
Andrade, RM; Wessendar, M .; Subauste, CS CD154, TNF-alfa bağımlı bir mekanizma yoluyla IFN-gama olmadan makrofaj antimikrobiyal aktivitesini aktive eder. J. Immunol. 2003 , 171 , 6750–6756. [ Google Akademik ]
van Kooten, C .; Banchereau, J. CD40-CD40 ligandı. J. Leukoc. Biol. 2000 , 67 , 2-17. [ Google Akademik ]
Demuth, A .; Goebel, W .; Beuscher, HU; Kuhn, M. Kemik iliği kaynaklı makrofajların Listeria monositogenleri ile enfeksiyonu üzerine sitokin ve sitokin reseptörü mRNA ekspresyonunun diferansiyel düzenlemesi. Infect. Immun. 1996 , 64 , 3475-3483'te açıklanmaktadır. [ Google Akademik ]
Tau, G .; Rothman, P. IFN-gama reseptörlerinin biyolojik fonksiyonları. Alerji 1999 , 54 , 1233–1251. [ Google Akademik ]
Koch, E .; Wohn, C Pelargonium sidoides kök ekstresi EP ^® 7630 uyarır, insan tam kan nötrofil granülositler gelen antimikrobiyal peptitlerin bırakın. Planta Med. 2007 , 73 . [ Google Akademik ] [ CrossRef ]

© 2011 yazarlar tarafından; lisans sahibi MDPI, Basel, İsviçre. Bu makale, Creative Commons Atıf lisansının ( http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/ ) hüküm ve koşulları altında dağıtılan açık erişimli bir makaledir .

**igokcek** · 14 November 2012, 13:36

UMKALOABO (Her Derde Deva) ile Üşütme, Grip ve Nezlenin Tedavisi, Dünyanın En Doğal Antibiyotiği

Afrika Sardunyası ile Sinüzit, Bronşit, Faranjit ve Astım Çözümü. Kemikleşen İltihabı Söker.

Sinüzit Tedavisi Nasıl Olur Sinüslerdeki Mikroplar İçin Ne Kullanmalı Sinüzit Nasıl Geçer

Öksürük Nasıl Geçer Öksürük Nedenleri Nedir Öksürüğe Ne İyi Gelir Öksürük İçin Ne Yapabilirim

Grip Nedir Faranjit Nedir Sinüzit Nedir Bronşit Nedir Grip Tedavisi Nedir

Bademciklere Ne İyi Gelir Bademcik İltihabı Nasıl Geçer

Alerjik Rinit Nasıl Geçer Sinüzite Ne İyi Gelir Solunum Hastalıklarına Ne İyi Gelir

Ağız İçi Ve Diş Eti İltihabı Çayı

Pelargonium sidoides Kök Ekstresi: Seçilmiş Biyomoleküllerin Eşzamanlı HPLC Ayırma, Belirleme ve Validasyonu ve SARS-CoV-2 İnhibitör Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Manal A. Alossaimi , ¹Mayıs A. Alzeer , ²Fatma M. Abdel Bar , ^2,^3,^* ve Mai H. ElNaggar ⁴
Jan Oszmianski, Akademik Editör ve Sabina Lachowicz-Wiśniewska, Akademik Editör
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
¹ Farmasötik Kimya Bölümü, Eczacılık Fakültesi, Prince Sattam Bin Abdulaziz University, Al-Kharj 11942, Suudi Arabistan
² Farmakognozi Bölümü, Eczacılık Fakültesi, Prince Sattam Bin Abdulaziz University, Al-Kharj 11942, Suudi Arabistan
³ Farmakognozi Anabilim Dalı, Eczacılık Fakültesi, Mansoura Üniversitesi, Mansoura 35516, Mısır
⁴ Eczacılık Fakültesi, Farmakognozi Anabilim Dalı, Kafrelsheikh University, Kafrelsheikh 33516, Mısır
^* Yazışma: as.ude.uasp@rabledba.f ; Tel.: +96-65-4540-3617 İlişkili Veriler

Tamamlayıcı Malzemeler Veri Kullanılabilirliği Bildirimi
Git: Soyut

Bu çalışma, P. sidoides içeren fitoformülasyonlarda gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin tayini için doğrulanmış bir HPLC-UV analitik yöntemi oluşturmayı amaçladı . Ayrıca, P. sidoides'in ve bu biyomoleküllerin anti-SARS-CoV-2 etkisini in vitro olarak değerlendirmek için. Bir HPLC-UV yöntemi geliştirildi ve ticari formlar olan Kalobin ^® ve Umca ^® test edilerek doğrulandı . Düşük tespit edilebilir skopoletin ve yüksek umckalin seviyeleri ortaya çıkardı. Pelargonium sidoides, Vero E6 hücrelerinde (IC _{50) SARS-CoV-2 kaynaklı sitopatik etkide önemli bir azalma sergiledi.}13,79 μg/mL ve seçicilik indeksi, SI 6,3), skopoletin ise daha iyi seçicilikle (IC _{50) dikkate değer bir anti-SARS-CoV-2 aktivitesi gösterdi.}17,79 μg/mL ve SI 14,22). İlaçlanabilirliğin in-silico tahmini, çalışılan biyomoleküllerin Lipinski kuralının kabul edilebilir normları altında olduğunu, suda çözündüğünü ve yüksek GIT absorpsiyonu ve biyoyararlanım gösterdiğini gösterdi. SARS-CoV-2'nin viral replikasyonu ve girişi için temel moleküler hedeflere yönelik yerleştirme çalışması, skopoletin'in SARS-CoV-2 başak proteini RBD ile ACE2 yüzey reseptörü arasındaki arayüz bölgesine doğru iyi bağlanma afinitesi (-6,4 Kcal/mol) gösterdi insan hücrelerine viral giriş ile girişim olasılığını gösterir ve yüksek antiviral aktivitesini açıklayabilecek ana proteazın aktif bölgesinde His-41 ile H-bağı gösterir.

Anahtar Kelimeler: COVID-19, HPLC-UV, Umckaloabo kalite kontrolü, Pelargonium sidoides kök ekstresi, umckalin
Git: 1. Giriş

Şifalı bitkiler binlerce yıldır insanlar tarafından kullanılmaktadır ve günümüzün gelişmiş ilaçlarının temelini oluşturmaktadır. Güney Afrika'ya özgü yaygın olarak kullanılan şifalı bitkilerden biri de Pelargonium sidoides DC'dir. (Geraniaceae), Umckaloabo olarak da bilinir. Çok yıllık çiçekli bitkinin (EP _S 7630) kök ekstresi, yerel halk tarafından çok uzun bir süredir dizanteri, ishal, karaciğer şikayetleri, yaralar, soğuk algınlığı ve çeşitli enfeksiyonlar gibi çeşitli semptomları tedavi etmek için kullanılmaktadır. tüberküloz dahil olmak üzere solunum yolu [ 1 ]. P. sidoides'in (Umckaloabo) ana bileşenlerinin ve/veya ekstraktlarının, çeşitli bakteri ve solunum virüslerine karşı antibakteriyel ve antiviral aktiviteler sergiledikleri bildirilmiştir.2 , 3 ]. Umckaloabo yakın zamanda pandemik hastalık COVID-19 için umut verici bir adjuvan tedavi olarak önerildi [ 4 ]. Bununla birlikte, bu bitkinin SARS-CoV-2'ye ve bu aktiviteden sorumlu olabilecek bileşik(ler)e karşı etkinliğini tam olarak araştırmak için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.

Çeşitli çalışmalar bitkinin bileşimini incelemiş ve çok sayıda kumarin ve fenolik metabolit bulmuştur [ 1 ]. Daha önce bildirildiği gibi, yüksek oranda oksijen içeren bazı kumarinler, P. sidoides bitkisinin farmakolojik etkinliğini yöneten faktörler arasındadır [ 5 ]. Bunlar, gallik asit ve flavonoidlere ek olarak 7-hidroksi-5,6-di-metoksikumarin (umckalin), 6-hidroksi-7-metoksikumarin (skopoletin) ve 6,8-dihidroksi-5,7-dimetoksikumarini içerir ( kateşin gibi) [ 5 , 6 ]. Son zamanlarda, P. sidoides'in kimyasal profilikök, fenolik asitler, kumarinler, flavonoidler, polifenoller, vitaminler ve nükleotitler dahil olmak üzere 33 bileşiğin tanımlanmasıyla yüksek çözünürlüklü MS ile karakterize edilmiştir [7 ] .

Bitkisel ilaçların farmakolojik aktiviteleri, ilaç içindeki tek bir bileşiğe değil, çok sayıda bileşiğe atfedilebilir [ 8 ]. Bu nedenle, üretilen bitkisel ilaçların hedeflenen eyleme ulaşmada hem güvenli hem de verimli olmasını sağlamak için sistematik kalite kontrol sistemlerinin ve doğrulama yöntemlerinin geliştirilmesi esastır [ 9 ]. P. sidoides DC dahil olmak üzere Pelargonium türlerinin kullanımı . ve/veya P. reniforme Curt. spesifik farklılaşma parametrelerini tanımlamadan Avrupa Farmakopesi tarafından kabul edilmiştir [ 10 ]. Umckalin'in P. reniforme'den ziyade sadece P. sidoides'te rapor edildiğini belirtmek gerekir.[ 11 , 12 ]. P. sidoides kökünün ve bunun farmasötik preparasyonlarının kontrolü genellikle bitkisel ilaçların ve ilgili formülasyonların kalite kontrolü için tatmin edici olmayan tanenlerin [ 10 , 13 ] belirlenmesine dayalı bir farmakope yöntemiyle gerçekleştirilir .

Bu çalışmada, HPLC analizi ve biyolojik değerlendirme için bir fenolik asit (yani gallik asit), bir flavan türevi (yani kateşin) ve iki kumarin (yani skopoletin ve umckalin) dahil olmak üzere dört ana temsili biyomolekül seçilmiştir bu bitkinin fitopreparasyonu. Bu biyomoleküllerin kimyasal yapıları , aşağıda gösterildiği gibi kumarinler ve fenolik bileşikler olan P. sidoides'in ana fitokimyasal sınıflarını temsil eder.Şekil 1. Bu biyomoleküllerin diğer bitkilerden ayrılması ve belirlenmesi literatürde kapsamlı bir şekilde incelenmiştir. Gallik asit [ 14 , 15 ], kateşin [ 16 , 17 ] ve skopoletin [ 18 , 19 ] için çok sayıda analitik yöntem kullanılmıştır . Bununla birlikte, yazarların bildiği kadarıyla, asetonitril-su izokratik bir çözücü sistemi olan bir C18 kolonu kullanan bir HPLC-RP yöntemi aracılığıyla umckalin tayini için yalnızca bir analitik yöntem rapor edilmiştir (45:55, v / v ) 0,75 mL/dk hızında ve 330 nm'de UV tespitiyle [ 20]. Umckalinin kantitatif ve kalitatif tayini için uygun olan diğer analitik prosedürler [ 7 , 21 ] 'de bulunabilir . Bugüne kadar, bu dört önemli biyomolekülün HPLC ile aynı anda ayrılması veya saptanması için hiçbir analitik yöntem önerilmemiştir. Ek olarak, literatürde bildirilen analitik yöntemler için ne doğrulama ne de optimizasyon açıklanmamıştır.

Şekil 1
Fitopreparasyonlarda incelenen dört Pelargonium sidoides biyomolekülünün kimyasal yapıları .

Bu nedenle, bu çalışmanın amacı, P. sidoides (Umckaloabo ) içeren ticari solüsyonlarda ve tablet formülasyonlarında önerilen dört biyomolekülün ( yani , gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin) tayini için yeni, doğrulanmış bir HPLC yöntemi geliştirmektir. ) özler. Ayrıca, incelenen biyomoleküllerin ekstrakte edilmesinde farklı numune hazırlama prosedürlerinin etkinliğini değerlendirmek ve karşılaştırmak. P. sidoides'in antiviral aktivitesini araştırmanın yanı sırakök ekstresi ve SARS-CoV-2'ye karşı araştırılan biyomoleküller. Çalışılan biyomoleküllerin fizikokimyasal ve farmakokinetik özellikleri, potansiyel ilaçlanabilirliklerini ve etkililiklerini tahmin etmek için in silico olarak incelenmiştir. Ayrıca, bu biyomoleküllerin SARS-CoV-2'nin viral replikasyonu ve girişi için temel moleküler hedeflere karşı bağlanma etkileşimleri hakkında fikir edinmek için hesaplamalı bir yerleştirme çalışması gerçekleştirildi. Yerleştirme çalışması, viral replikasyon için gerekli olan papain benzeri proteaz (PLpro), ana proteaz (Mpro), RNA helikaz (nsp13) ve RNA'ya bağımlı RNA polimeraz (RdRp, nsp12) dahil olmak üzere birkaç hedefi içeriyordu [ 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27]. Ayrıca, bu bileşiklerin SARS-CoV-2 başak proteini ile insan anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2) reseptörleri arasındaki etkileşime müdahale ederek insan hücrelerine viral girişi engelleme yeteneği, yerleştirme çalışması kullanılarak sanal olarak incelenmiştir [ 28 , 29 ].

Git: 2. Sonuçlar ve Tartışma

Bitkisel ilaçların kalite güvencesi, ham maddelerin doğru ve güvenilir bir şekilde tanımlanmasından başlar. Uygun tanımlama ve tespit prosedürleri, çoklu aktif bileşikler ve ilgili türler arasında ayrım yapabilmelidir. İşleri daha da karmaşık hale getirmek için, bu tür bir ilaçla uğraşırken karşılaşılan en büyük zorluk, aynı bitki türlerinin farklı örnekleri arasında aktif bileşiklerin konsantrasyonlarında göze çarpan farklılıklardır. Bu varyasyon, toprak tipi, coğrafi konum, iklim, yaş, hasat zamanı, depolama koşulları vb. gibi birçok önemli faktöre atfedilir. Kromatografi ve spektroskopi gibi analitik yöntemler, uygun kalite kontrolünü (KK) elde etmek için kullanılabilir. bitkisel ilaçlar.11 ]. 2.1. HPLC Yöntemi Geliştirme ve Optimizasyon

Çalıştığımız dört biyomolekül, gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin ile ilgili kapsamlı bir literatür araştırması, bu bileşiklerin bilinen fiziksel ve kimyasal özelliklerini belirlemek için yapılmıştır [ 30 , 31 , 32 , 33]. Kalan parametreleri sabit tutarken her seferinde bir parametreyi değiştirerek, algılama dalga boyu, mobil faz, sabit faz ve numune hazırlama prosedürü dahil olmak üzere eş zamanlı kromatografik ayırma koşullarının bir optimizasyonu devam etti. Asetonitrilin suya oranının farklı değerleri ve 3, 8 ve 9 pH değerleri ve iki kolon markası (Hypersil BDS kolonu (250 x 4,6 mm, 5 µm partikül boyutu) (Thermo Scientific) ile bir dizi deneme gerçekleştirildi. Inc., Bremen, Almanya) ve Waters XBridge ^® C18 kolonu (200 mm x 4,6 mm, 5 µm parçacık boyutu, Milford, MA, ABD) Bu çalışma için en uygun kromatografik koşulların asetonitril:su oranı 20 olduğu bulunmuştur. : 80 v / v(pH 3), 1 mL/dk akış hızı, 20 µL enjeksiyon hacmi, 25 dk çalışma süresi, Waters XBridge ^® C18 kolonu (200 mm × 4,6 mm, 5 µm partikül boyutu, Milford, MA, ABD) kullanılarak 30 °C ve 210 nm algılama dalga boyu. Çalışma kapsamındaki dört bileşik eş zamanlı olarak ayrıştırıldığında, kromatogram minimum analiz süresi içinde simetrik tepe noktaları gösterdi. Gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalinin tutulma süreleri sırasıyla 3.3, 4.0, 8.4 ve 19.2 dakika bulundu. Sonuçlar şu şekilde tasvir edilmiştir:şekil 2A. 2,5 dakikada ek bir tepe noktası belirir. Bu pik, boş çalıştırmada gösterildiği gibi referans standartlarını (metanol) çözmek için kullanılan çözücüden gelen çözücü cephesidir.şekil 2B.

şekil 2
HPLC-RP kromatogramları (210 nm'de): ( a ) 0,16 µg/mL standartlar (1) gallik asit, (2) kateşin, (3) skopoletin ve (4) umckalin karışımı, 3,3, 3,96 tutma sürelerinde elde edilmiştir , sırasıyla 8.4 ve 19.2 dakika; ( b ) Kör (metanol); ( c ) etil asetat ile ekstre edilmiş Kalobin® solüsyonu ^;( d ) metanol ile ekstre edilmiş Kalobin® solüsyonu ^;( e ) etil asetat ile ekstre edilmiş Umca® çözeltileri ^;( f ) metanol ile ekstre edilmiş Umca® çözeltileri ^;( g ) etil asetat ile ekstre edilmiş Umca® tabletleri ^;ve ( h ) ^Umca®metanol ile ekstrakte edilmiş tabletler. 2.2. Yöntem geçerliliği

Önerilen ayırma ve tespit yöntemi, Uluslararası Uyum Konseyi'nin (ICH) yönergelerine göre malzeme ve yöntemler bölümünde belirtildiği gibi özgüllük, doğrusallık, saptama ve niceleme limitleri, kesinlik ve sağlamlık dahil olmak üzere doğrulama parametreleri kullanılarak doğrulanmıştır [ 34 ].

2.2.1. özgüllük

Tentür numuneleri, potansiyel bozunma ürünleri üretmek için asit veya alkali hidrolize maruz bırakıldı. Biyomoleküllerin spektral saflığı daha sonra karşılaştırıldı ve yöntemin özgüllüğünü ve seçiciliğini değerlendirmek için kullanıldı [ 35 ]. Yöntemin özgül ve seçici olduğu görüldü.

2.2.2. doğrusallık

Elde edilen kalibrasyon eğrileri ( Şekil S1 ), en küçük kareler lineer regresyon (LSLR) yöntemi [ 36 ] aracılığıyla enterpole edildi . Önerilen yöntemin doğrusallığını test etmek için, her standart için ayrıntılı olarak açıklandığı gibi beş veya altı farklı konsantrasyon dikkate alınmıştır.tablo 1. Gallik asit ve kateşin konsantrasyonları 0,2–1 µg/mL aralığında alınırken, skopoletin ve umckalin konsantrasyonları 0,1–1 µg/mL aralığında ayarlandı. Her konsantrasyon için üç farklı numune enjekte edildi. Ortaya çıkan tepe alanlarının cebirsel ortalaması hesaplandı ve kaydedildi. Regresyon işleminin doğruluğu, belirleme katsayısı (R2), gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin için sırasıyla 0.9995, 0.9999, 0.9998 ve 0.9995 değerlerine sahipti. Tüm değerler 1'e oldukça yakın olduğundan, önerilen yöntemin iyi bir doğrusallığa sahip olduğu kabul edilir. Gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin biyomolekülleri için elde edilen regresyon çizgisi denklemleriy= 129747 x + 1655,6,y= 164167 x + 2039.8,y= 162562 x + 2223,7, Vey= 188550 x + 3047, sırasıyla. tablo 1

İncelenen bileşiklerin önerilen yöntemle belirlenmesi için analitik performans verileri.

Konsantrasyon aralığı (µg/mL)	0,2–1	0,2–1	0,1–1	0,1–1
Korelasyon katsayısı (R)	0,9995	0,9999	0,9998	0,9995
Eğim	129.746.6	164.166.5	162.561.9	188.550.2
Tutmak	1655.6	2039.8	2223.6	3046.9
Sy/ x, artıkların SD'si	1059.3	670.3	827.0	1456.5
SA, kesişmenin SD'si	943,78	597.28	589,57	1038.3
SB, eğimin SD'si	1700.6	1076.2	1159.9	2042.8
SD	1.95	1.08	1.87	2.12
%RSD ^bir	1.95	1.08	1.86	2.11
%Hata ^b	0,873	0,484	0,762	0,866
LODc ⁽ µg/mL)	0,024	0,012	0,012	0,018
LOQ ^d (µg/mL)	0,073	0,036	0,036	0,055

Ayrı bir pencerede aç
* Tüm belirlemeler 210 nm'de yapılmıştır. ^a Yüzde bağıl standart sapma. ^b Yüzde göreli hata. ^c Tespit sınırı. ^d Kantitasyon limiti.

2.2.3. Tespit ve Kantitasyon Limitleri

Herhangi bir yöntemin hassasiyetini değerlendirirken, tespit limitini (LOD) ve kantitasyon limitini (LOQ) ölçmek önemlidir. LOD, çalışılan yöntemle belirli bir yüksek güvenilirlikte tespit edilebilen, ölçülen bileşiğin en küçük konsantrasyonunu ifade eder. LOQ, makul düzeyde kesinlik ve doğrulukla belirlenebilen en küçük konsantrasyondur [ 36 ]. Her iki limit de gösterilen regresyon denklemlerinden hesaplanmıştır.tablo 1ve nihai LOD ve LOQ şuydu: gallik asit için 0.024 ve 0.073 ug/mL; kateşin için 0,012 ve 0,036 µg/mL; skopoletin için 0,012 ve 0,036 µg/mL; ve umckalin için sırasıyla 0,018 ve 0,055 µg/mL. Bu değerleri hesaplamak için kullanılan denklem aşağıda gösterilmiştir:
LOD = 3,3 S/b

LOQ = 10 S/b

S = Yanıtın standart sapması
b = Kalibrasyon eğrisinin eğimi

2.2.4. Hassasiyet ve doğruluk

Önerilen analitik prosedürün doğruluğunu ve kesinliğini belirlemek için, beş kalibratörle birlikte her bir KK numune konsantrasyonunun üç kopyası dikkate alındı. QC numunelerinin konsantrasyonlarının 0,2, 0,3 ve 0,5 µg/mL (düşük, orta ve yüksek) olarak seçildiğini hatırlayın. Da gösterildiği gibiTablo 2önerilen yöntemin gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin için doğrulukları sırasıyla %100.89, %99.57, %100.03 ve %100.51 olarak bulunmuştur.Tablo 2dört biyomolekül için yöntemin kesinliğini gösterir. Tüm örnekler için bağıl standart sapma %1'in altındaydı. Tablo 2

Biyomoleküllerin saf formlarında önerilen yöntemle analizi için kesinlik ve doğruluğun istatistiksel değerlendirmesi.

0,2 µg/mL'de yanıt	Konsantrasyon: 0,2 µg/mL
28.551	34.214	34.084	40.077
28.740	34.350	34.079	40.223
28.340	34.153	34.090	40.122
X	28.543,67	34.239,00	34.084,33	40.140,67
SD	200.10	100.85	5.51	74.77
%RSD	0.70	0.29	0.02	0.19
Kons. Bulunan * (µg/mL)	0,204	0,196	0,196	0,196
% Kurmak	102.10	98.20	98.00	98.40
0,3 µg/mL'de yanıt	Konsantrasyon: 0,3 µg/mL
40.552	51.184	51.610	60.560
41.019	51.435	51.633	60.443
40.391	51.099	51.621	60.492
X	40.654,00	51.239,33	51.621,33	60.498,33
SD	326.19	174.70	11.50	58.76
%RSD	0.80	0,34	0.02	0.10
Kons. Bulunan * (µg/mL)	0,307	0,298	0,304	0,304
% Kurmak	102.33	99.53	101.30	101.57
0,5 µg/mL'de yanıt	Konsantrasyon: 0,5 µg/mL
65.527	75.560	72.072	83.973
65.256	75.118	72.253	84.031
64.322	75.233	72.165	83.992
X	65.035,00	75.303,67	72.163,33	83.998,67
SD	632.17	229.32	90.51	29.57
%RSD	0.97	0.30	0.13	0.04
Kons. Bulunan * (µg/mL)	0,491	0,505	0,504	0,507
% Kurmak	98.24	101.00	100.80	101.56
X¯¯¯ ± SD	100,89 ± 2,2	99,57 ± 1,4	100,03 ± 1,7	100,51 ± 1,8

Ayrı bir pencerede aç
* Her sonuç, üç ayrı tespitin ortalamasıdır. X = ortalama SD = standart sapma %RSD = Yüzde bağıl standart sapma Kons. Bulunan = bulunan konsantrasyon % Bulunan = Bulunan yüzde.X¯¯¯= Ortalama Doğruluk.

Bizim yöntemimiz gallik asit [ 14 , 15 ], kateşin [ 16 ], skopoletin [ 7 , 18 ] için diğer saptama yöntemlerine kıyasla daha düşük LOD ve LOQ gösterdi. Ancak, kateşin [ 17 ] ve skopoletin [ 19 ] için oldukça hassas detektörler (yani, sırasıyla UHPLC-MS/MS ve floresan detektörler) nedeniyle daha iyi hassasiyetler bildirilmiştir . Panara ve ark. gallik, kateşin ve skopoletin LOD'sini hesapladı, umckalin için hiçbir değer hesaplanmadı [ 7 ]. Bizim çalışmamızda umckalin, bir DAD detektörü kullanan daha önce bildirilen yöntemle neredeyse karşılaştırılabilir LOD gösterdi [ 20 ].

2.2.5. sağlamlık

Önerilen yöntemin sağlamlığı incelenmiştir. Sıcaklık değişimlerinin analitik sonuçlar üzerinde bir etkisinin olmadığı bulundu. Bununla birlikte, kolonun markası, mobil fazın akış hızı ve bileşimi de dahil olmak üzere geri kalan koşulların tümü, nicelemeler üzerinde önemli bir etkiye sahipti. Bu, tespit edilen piklerin tutulma sürelerinde bazı küçük değişikliklere neden oldu ve sonuç olarak entegrasyon etkilendi. Ayrıca hazırlanan örnekler 4 °C sıcaklıkta tutulduğunda en az 4 gün stabil kalmıştır. Standartların stabilitesini daha fazla araştırmak için, 4 °C'de saklandıktan sonra 30 günlük aralıklarla HPLC sistemine kalibrasyon solüsyonları enjekte edildi. Elde edilen pikler neredeyse aynıydı ve üst üste bindirilebilirdi. 2.3. ^{Kalobin ®} , Umca ^® Solüsyonları ve Umca ^® Tabletlerindeki Dört Biyomolekülün Tayini

^{Kalobin ®} ve Umca ^® solüsyonları ve Umca ^® tabletleri gibi farklı dozaj formlarındaki dört biyomolekülün ölçülen ortalama konsantrasyon yüzdeleri,Tablo 3. Elde edilen sonuçlar tatmin ediciydi ve herhangi bir girişim gözlenmedi.şekil 2^{c–f, Kalobin ®} ve Umca ^® solüsyonlarına karşılık gelen kromatogramları gösterirken ,şekil 2g,h, Umca ^® tabletlerininkini gösterir. Bu şekillerde iki ekstraksiyon solventi gösterilmektedir: etil asetat,şekil 2c,e,g ve metanol,şekil 2d,f,h. Etil asetatın tüm biyomolekülleri ekstrakte etmede etkili olduğu, oysa metanolün sadece gallik asit, kateşin ve umckalin ekstraksiyonu için uygun olduğu ve skopoletin'i zayıf şekilde tespit ettiği gözlemlenebilir. Bu nedenle, uygun ekstraksiyon solventi seçimi ile dört biyomolekülün tümü, tahlil için önerilen analitik yöntem kullanılarak Kalobin ^® , Umca ^® solüsyonları ve Umca ^® tabletlerde verimli bir şekilde tespit edilebilir . Numune hazırlamada etil asetat ekstraksiyonu kullanan önerilen HPLC analitik yöntemi, yüksek miktarda gallik asit ve umckalin gösterdi. ^{Bununla birlikte, Umca ®} tabletlerinde 27.19 μg/mL'lik son maksimum konsantrasyonla birlikte daha düşük saptanabilir kateşin ve skopoletin seviyeleri ortaya çıkardı .Tablo 3Veşekil 2. Tablo 3

Normal Vero E6 hücrelerinde %50 sitotoksik konsantrasyon (CC _{50 ),}P. sidoides kök ekstresi ± SEM ile Vero E6 hücrelerinde SARS-CoV-2 kaynaklı sitopatik etkiye karşı %50 inhibe edici konsantrasyon (IC50 ) _{ve tahlil Kalobin}^® , Umca ^® solüsyonları (S) ve Umca ^® tabletlerinde (T) gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin içeriğinin sonuçları .

gallik asit	439,7 ± 0,065	96,41 ± 0,030	4.6	89,54	22.00	188.71	98.91	146.66	23.72
kateşin	52,76 ± 0,079	58,55 ± 0,088	0.9	14.05	10.96	39.09	0	11.26	0
Scopoletin	253,1 ± 0,45	17,79 ± 0,91	14.1	14.86	0	6.31	0	27.19	0
umckalin	164,1 ± 0,54	311,6 ± 0,043	0,5	121.07	3.09	79.46	2,86	126.33	4.54
P. sidoides kök ekstresi	87,25 ± 0,093 ^c	13,79 ± 0,034 ^c	6.3
klorokin *	377,7	22.7	16.64
hidroksiklorokin *	356	32.8	10.85

Ayrı bir pencerede aç
^a Sitotoksisite, bir MTT testi kullanılarak belirlendi ve değerler, GraphPad Prism yazılımı sürüm 8 (San Diego, CA, ABD) kullanılarak doğrusal olmayan regresyon analizi ile hesaplandı. ^b Değerler, GraphPad Prism yazılımı sürüm 8 (San Diego, CA, ABD) kullanılarak inhibitör konsantrasyonlarının normalleştirilmiş cevaba (değişken eğim) karşı logunun çizilmesiyle hesaplanmıştır. ^c Değerler, ham ekstrakt için μg/mL cinsinden ölçülür. * Antiviral pozitif kontrollerin (klorokin ve hidroksiklorokin) IC50 ve CC50 _{değerleri aynı}_{laboratuvar tarafından rapor edilmiştir [}38 ]. ** Konsantrasyonlar, önerilen HPLC yöntemiyle üçlü enjeksiyonun ortalaması olarak ifade edilmiştir. 2.4. SARS-CoV-2'ye Karşı İn Vitro İnhibitör Aktivite

İn vitro antiviral tarama testi, P. sidoides kök ekstraktının (Kalobin) SARS-CoV-2'ye karşı ümit verici antiviral aktiviteye sahip olduğunu gösterdi (Tablo 3VeFigür 3) ve viral kaynaklı sitopatik etkide (IC50) %50 düşüşe neden olmak için gereken konsantrasyon _13,79 μg/mL olarak bulundu. Öte yandan, normal Vero E6 hücrelerinin (CC50) %50 büyüme inhibisyonuna neden olmak için gerekli konsantrasyon _87,25 μg/mL olarak bulundu. Bu nedenle, P. sidoides kök ekstresi, hücresel toksisiteye göre antiviral aktivite için 6.3'e eşit bir seçicilik indeksi (SI) gösterdi. Elde edilen sonuçlar, rinovirüs 16 (RV16) hakkında daha önce yayınlanan sonuçlarla uyumluydu; bu, P. sidoides'in enfeksiyonu azalttığını ve konakçı insan bronşiyal epitel hücrelerinin (hBEC) hayatta kalma oranını iyileştirdiğini gösterdi [ 37]. Scopoletin , standart referanslar olan klorokin ve hidroksiklorokin ( sırasıyla 22,7 μM ve 32,8 μM IC50) _{' den daha düşük}_IC50 (17,79 μM) ile test edilen biyomoleküller arasında en yüksek antiviral aktiviteyi gösterdi [ 38 ]. Ayrıca, klorokin ve hidroksiklorokininkiyle karşılaştırılabilir olan 14.22'lik bir SI gösterdi (sırasıyla SI 16.64 ve 10.85) [ 38 ]. Scopoletin daha önce ana viral proteaz (Mpro) ile siliko-içi bağlanma etkileşimlerine dayanarak SARS-CoV-2'ye karşı potansiyel bir antiviral ajan olarak önerilmişti [ 39 ]. Her ne kadar birçok çalışma, P. sidoides kök ekstraktının terapötik uygulamalarını ana biyomolekülüne (umckalin) bağlasa da [ 40] bununla birlikte umckalin, 311,6 μM _IC50 değeriyle SARS-CoV-2'ye karşı zayıf bir antiviral etki gösterdi . Bu sonuçlar, Trun ve ark. (2006) RAW 264.7 hücrelerinde Leishmania kaynaklı sitopatik etkiye karşı, umckalin antimikrobiyal bir ilaç olarak inaktif gibi göründüğü için bulgularımızı destekler [ 41 ]. SARS-CoV-2'ye karşı antiviral aktivitenin skopoletin'e atfedilebileceği sonucuna varılabilir. Ek olarak, P. sidoides bitkisinin immünolojik ve antimikrobiyal aktivitelerinden sorumlu diğer fitokimyasalları belirlemek için daha ileri farmakolojik çalışmalara ihtiyaç vardır .

Figür 3
Test edilen bileşiklerin doz-yanıt eğrileri: ( a ) Kateşin, ( b ) Gallik asit, ( c ) Umckalin, ( d ) Scopoletin ve ( e ) Vero E6 hücrelerinde (CC ₅₀ ) %50 Sitotoksik konsantrasyonlarını gösteren Kalobin özütü ve Vero E6 hücrelerinde SARS-CoV-2'ye karşı %50 İnhibitör konsantrasyonları (IC50 _{) .} 2.5. Fizikokimyasal ve Farmakokinetik Özelliklerin SwissADME Çevrimiçi Platformu Kullanılarak In Silico İncelenmesi

Absorpsiyon, dağılım, metabolizma ve atılımı etkileyen fizikokimyasal ve farmakokinetik özellikler, test edilen bileşiklerin in vivo antiviral aktivitesinin anlaşılmasını sağlamak için hesaplamalı olarak değerlendirildi. Sonuçlar ( Tablo S2 ), çalışılan dört biyomolekülün Lipinski kuralının kabul edilebilir normları altında olduğunu ifade etti. Suda çözünür oldukları ve yüksek gastrointestinal absorpsiyon ve biyoyararlanıma sahip oldukları tahmin edilmektedir.

Scopoletin ve umckalin, kateşin ve gallik asitten daha yüksek lipofiliklik gösterdi ve beyin sarısındaki mevcudiyetleri veya bağırsak tahmini geçirgenliği (BOILED-Egg) modelinde gösterildiği gibi kan-beyin bariyerini geçme yeteneği gösterdi (Şekil S2 ) [ 42 ]. Sadece kateşinin P-glikoprotein tarafından merkezi sinir sisteminden atıldığı tahmin edilmektedir. 2.6. Yerleştirme Çalışması

Hesaplamalı yöntemler, ilaç keşfinde giderek daha fazla kullanılan araçlardır. Birkaç önemli ilacın taranmasında ve geliştirilmesinde potansiyel bir rol gösterdiler [ 43 ]. Bu çalışmada, seçilen dört P. sidoides biyomolekülü, SARS-CoV-2 viral replikasyonu ve çoğalması için çeşitli temel hedeflere karşı hesaplamalı bir yerleştirme çalışmasına tabi tutuldu. Bu hedefler arasında viral proteazlar; papain benzeri proteaz (PLpro) ve viral RNA'dan çevrilen poliproteinlerin proteolitik işlenmesinden sorumlu ana proteaz (Mpro) [ 22 ]. Bu proteolitik süreç, viral replikasyondan sorumlu fonksiyonel proteinlerin üretimi için gereklidir [ 23 , 24] .]. Viral proteazlara ek olarak SARS-CoV-2 RNA helikaz (nsp13), dubleks oligonükleotitleri tek sarmallara çözerek viral replikasyonda önemli bir rol oynar. Bununla birlikte, RNA-bağımlı RNA polimeraz (RdRp, nsp12) viral RNA genomunun replikasyonundan sorumludur [ 25 ]. Bu nedenle, viral replikasyonu inhibe etmek için kullanılabilecek en önemli terapötik hedefler arasındadırlar [ 26 , 27 ]. P. sidoides biyomoleküllerinin, insan hücresine viral girişte yer alan SARS-CoV-2 başak proteini ile insan anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2) reseptörleri arasındaki etkileşime müdahale etme yeteneği de [ 28 , 29 ] araştırıldı.

Genel olarak, elde edilen sonuçlar, üzerinde çalışılan P. sidoides biyomoleküllerinin antiviral aktivitesi ile in-silico docking hesaplamaları arasında güçlü bir ilişkinin varlığını doğrulamıştır . Docking çalışması, skopoletin'in test edilen SARS-CoV-2 hedeflerine, çoğu durumda birlikte kristalize ligandların veya standart inhibitörlerinkinden daha yüksek veya bunlarla karşılaştırılabilir iyi bir bağlanma afinitesi sergilediğini gösterdi (Tablo 4). Tablo 4

PyRx 0.8'de AutoDock Vina kullanılarak SARS-CoV-2 ana terapötik hedeflere karşı Pelargonium sidoides biyomoleküllerinin yerleştirme puanları .

kateşin	-7.2	-6.1	-7.2	-6.4	-7.7
gallik asit	-5.1	-4.5	-5.7	-5.4	-6.4
umckalin	-5.3	-4.8	-6.6	-5.4	-6.3
Scopoletin	-5.2	-4.9	-6.5	-5.8	-6.4
referans inhibitörü	-4.9	-6.7	-5.7	-8.9	-6.6

Ayrı bir pencerede aç
Kumarin türevi, skopoletin, RNA helikazına, nsp13'e (-6,5 Kcal/mol) karşı iyi bağlanma afinitesi gösterdi; bu, ko-kristalize ligandınkinden (-5,7 Kcal/mol) daha yüksekti. Ayrıca, SARS-CoV-2 başak proteininin reseptör bağlama alanı (RBD) ile insan hücresi anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2) yüzey reseptörü arasındaki arayüz bölgesine doğru iyi bağlanma afinitesi (-6,4 Kcal/mol) gösterdi. insan hücrelerine virüs girişine müdahale etme olasılığı. Ek olarak, Mpro ile birlikte kristalize ligandınkiyle (-4,9 Kcal/mol) karşılaştırılabilir makul bağlanma serbest enerjisi (-5,2 Kcal/mol) gösterdi,Tablo 4.

Umckalin, skopoletin ile yakın bağlanma puanları gösterse de, yerleştirme sonuçlarının görselleştirilmesi, skopoletin'in protein aktivitesi için önemli olan amino asitlerle daha iyi etkileşime sahip olduğunu gösterdi. Bu, skopoletin'in umckalin'e kıyasla daha yüksek in vitro antiviral aktivitesini açıklayabilir. Scopoletin, His-41 amino asit kalıntısı ile hidrojen bağı oluşturdu (Şekil 4a) Mpro'nun proteolitik aktivitesi için elzem olan Cys/His katalitik ikilide yer aldığı bildirilen ana proteazın (Mpro) aktif cebinde [44 ] . Ayrıca SARS-CoV-2 başak proteini RBD (Gly-496) ve ACE2 yüzey reseptörü (Lys-353 ve Glu-37) arasındaki etkileşim için gerekli olan bazı amino asitlerle hidrojen bağı gösterdi.Şekil 4b [ 29 ]. Dikkat çekici bir şekilde, RNA helikazının NTPaz aktivitesi için önemli olan Ser-289, Lys-288 ve Arg-567 dahil olmak üzere birkaç amino asitle hidrojen bağı gösterdi [45 ] ,Şekil 4C.

Şekil 4
( a ) ana proteazın (Mpro, PDB: 5R82) aktif bölgesi içindeki skopoletin moleküler bağlanma modeli ; ( b ) spike RBD (cam göbeği renkli) ve insan ACE2 (yeşil renkli) arasındaki arayüz bölgesi içinde (PDB kodu: 6M0j); ( c ) AutoDock Vina tarafından PyRx 0.8'de (Scripps Research, La Jolla, CA, ABD) elde edilen RNA helikazının aktif bölgesi, nsp13 (PDB kodu: 5RL9) içinde.

Kateşin, içinde gösterildiği gibi araştırılan protein hedeflerine karşı yüksek yerleştirme puanları göstermesine rağmenTablo 4, skopoletin'den (IC50 17.79 uM) daha düşük in vitro antiviral aktivite (IC50 58.55 _uM₎ gösterdi . Bu, P-glikoprotein tarafından öngörülen aktif akışına ve skopoletin ile karşılaştırıldığında daha düşük lipofilikliğe bağlanabilir.

Git: 3. Malzemeler ve Yöntemler

3.1. Kromatografik Prosedürler

3.1.1. Solventler ve Mobil Fazlar

Çalışmada kullanılan tüm reaktifler bir HPLC sınıfındaydı. HPLC ≥ %99.9 için asetonitril, SIGMA-ALDRICH®'den ⁽ Saint Louis, MO, ABD) elde edildi. Metanol, HPLC sınıfındaydı ve Fisher Chemical'dan (Waltham, MA, ABD) satın alındı. Etil asetat, SIGMA-ALDRICH®'den ⁽ Saint Louis, MO, ABD) elde edildi. Ek olarak, bir Milli-Q ultra saf su sisteminden HPLC dereceli su elde edildi. pH'ı ayarlamak için HPLC %85–90 (Honeywell Fluka ^TM , Seelze, Almanya) için ortofosforik asit kullandık . ^{Son olarak, MERCK MILLIPORE ®} Ltd.'den (Billerica, MA, ABD) bir 0,45 um Naylon membran HNWP filtresi satın alınmıştır .

3.1.2. Örnekler

Bu deneysel çalışmada Kalobin ^® (Marcyrl Pharmaceutical Industries, Kahire, Mısır) Parti No: 1944426, Son kullanma tarihi: Kasım 2022 ve Umca ® ⁽ ABDIBRAHIM, İstanbul, Turki) Parti No: 2220420, Son kullanma tarihi: Mart 2022, bir marka film kaplı tablete ek olarak (Umca ^® , ABDİBRAHİM, İstanbul, Turki) Parti No: 2480520, Son kullanma tarihi: Şubat 2025.

3.1.3. Enstrümantasyon ve Kromatografik Koşullar

Bu çalışmada, numunelerin kromatografik analizini yapmak için UFLC-SHIMADZU 1200 serisi sistem (Shimadzu Corporation, Santa Clara, CA, ABD) kullanıldı. Sistem bir ikili pompaya, bir çevrimiçi gaz gidericiye ve otomatik numune alıcıya (SIL-20 A) bağlandı. Nihai ayırma , Waters, İrlanda tarafından temin edilen 200 mm x 4.6 mm boyutlarında 5 um parçacık boyutlu bir XBridge® C18 kolonu (Milford, MA, ABD) ^{kullanılarak} gerçekleştirildi . Elüsyon, mobil fazlı bir asetonitril-su sistemi (20:80, v / v) ile 1 mL/dak'da izokratikti.) %10 ortofosforik asit damla damla eklenerek pH 3'e ayarlandı. Son olarak mobil faz, 0.45 um membran filtrelerden süzüldü ve kullanımdan önce 15 dakika süreyle sonikasyon yoluyla gazı alındı. Enjeksiyon hacmi 20 uL idi ve akış hızı, 30 °C'de toplam 25 dakikalık çalışma süresiyle 1 mL/dk'da tutuldu. Sıvı kromatografik analiz sistemi ayrıca 210 nm spektral ayar noktasına sahip bir fotodiyot dizisi detektörü (SPD—20 A) ile donatıldı. Sistem, Microsoft Windows 7 işletim platformunda LabSolutions yazılımını çalıştıran bir bilgisayara bağlandı.

3.1.4. Analitik Standartlar

Bu çalışma için gereken dört biyomolekülün tümü, umckalin (7-hidroksi-5,6-dimetoksikumarin) dahil olmak üzere SIGMA-ALDRICH ®'den (Taufkirchen, Almanya) satın alınmıştır, HPLC tarafından belirlenen saflık ≥ %95,0, CAS Numarası: ^43053-62-9 , skopoletin (7-hidroksi-6-metoksikumarin), HPLC tarafından belirlenen saflık ≥ %97,0, CAS Numarası: 92-61-5, (+)−catechin (syn. cianidanol), HPLC tarafından belirlenen saflık ≥ %99,0, CAS Numarası: 154- 23-4 ve gallik asit (3,4,5-trihidroksibenzoik asit), HPLC tarafından belirlenen saflık ≥ %99,0, CAS Numarası: 149-91-7.

3.1.5. Test Çözeltilerinin Hazırlanması

Bu çalışmanın amaçlanan analizini gerçekleştirmek için solüsyon ve tablet dozaj formları olmak üzere iki farklı form dikkate alınmıştır. Solüsyon formu olarak Kalobin ^® ve Umca ^® 20 mL'lik ambalaj kullanıldı. İki çözümün her biri iki farklı yöntemle işlendi:

(A)
10 mL hacimli bir şişede kabaca 100 mg kuru kök P. sidoides özü içeren 1,1 mL çözeltinin seyreltilmesi. Seyreltme, metanol kullanılarak gerçekleştirildi ve çözelti, 10 mg/mL'lik bir çözelti elde etmek için sonikasyona ve süzmeye tabi tutuldu.
(B)
Kabaca 2000 mg kuru kök P. sidoides içeren 20 mL tentür örneğinin sıvı-sıvı ekstraksiyonu (LLE) 3 × 20 mL etil asetat ile özütleyin. Daha sonra birleştirilmiş etil asetat özlerini 45 °C'de kuruyana kadar buharlaştırmak için bir döner buharlaştırıcı kullanıldı. Son olarak, 190.9 mg ağırlığındaki nihai kalıntı, metanol içerisinde çözündürüldü ve hacim, 5 mL'lik hacimsel bir şişe içinde ayarlandı.

Bitki ekstraktının tablet dozaj formu için ortalama ağırlığı 0,403 g olan 20 mg kuru P. sidoides kök ekstraktı içeren 10 adet ^Umca® tablet cam havanda ezildi. Elde edilen toz, iki farklı yöntemle işlenen iki kısma eşit olarak bölündü:

(A)
Birinci kısım (2.015 g), 10 mL'lik bir metanol solüsyonu kullanılarak özümlendi, 5 dakika ultrasonik banyoya tabi tutuldu ve süzüldü. Son olarak, çözeltinin hacmi, 10 mg/mL'lik bir konsantrasyon elde etmek için 10 mL'lik hacimsel bir şişe kullanılarak ayarlanır.
(B)
İkinci kısım (2.015 g), 10 mL su içinde süspanse edildi, sonike edildi ve 3 x 20 mL etil asetat kullanılarak özü çıkarıldı. Daha sonra, birleştirilmiş ekstraktları 45 °C'de kuruyana kadar buharlaştırmak için bir döner buharlaştırıcı kullanıldı. Üretilen tortu, metanol içinde sulandırıldı ve hacim, 5 mL'lik hacimsel bir şişede ayarlandı.

Her prosedürden elde edilen nihai çözelti, 0.45 um'lik bir zardan süzüldü ve süzüntünün önde gelen birkaç mL'si atıldı. Bu prosedür üç kez tekrarlandı ve üç kopya halinde enjekte edildi. Her seferinde pik alanı hesaplandı ve kaydedildi. Dört biyomolekül içeriği, ortalama kullanılarak hesaplandı ve standartlarla karşılaştırıldı.

3.1.6. Yöntem Geliştirme ve Validasyon

Standart Çözelti ve Kalite Kontrol Numunelerinin Hazırlanması

Dört biyomolekülün referans çözeltilerinin her biri, yani gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin, 10 mg 10 mL metanol içinde çözülerek 1 mg/mL'lik bir konsantrasyona seyreltildi. Ortaya çıkan solüsyon, 100 ug/mL'lik bir konsantrasyona sahip standart bir stok solüsyonu üretmek için tekrar metanol ile seyreltildi. Daha sonra bu, 0.1-1 µg/mL aralığında konsantrasyonlar elde etmek için metanol ile farklı seviyelere bir kez daha seyreltildi. Son olarak, aynı solventle dört 100 µg/mL stok solüsyonunun daha fazla seyreltilmesi, şu konsantrasyonlara sahip üç kalite kontrol numunesi üretmek için kullanıldı: 0,2 µg/mL (düşük kalite kontrol, LQC), 0,3 µg/mL (orta kalite kontrol, MQC) ve 0,5 µg/mL (yüksek kalite kontrol, HQC).

özgüllük

P. sidoides çözeltilerinin ve tabletlerinin HPLC kromatogramı, çalışma kapsamındaki dört biyomolekülün UV spektrumlarını karşılaştırmak için kullanıldı. Bu prosedür, P. sidoides tentürü [ 16 ] örneklerinin asit (0.1 M HCI) ve baz (0.1 M NaOH) işleminden sonra üretilen çözelti örnekleriyle iki kez tekrarlandı . Solüsyon (2 mL), sulu asit veya baza (2 mL) ilave edildi ve karışım, 25°C'de bir saat çalkalandı. Karışım daha sonra nötralize edildi ve enjekte edildi.

doğrusallık

Standart kalibrasyon eğrilerini hazırlamak için gallik asit ve kateşin için 0,2–1 µg/mL ve skopoletin ve umckalin için 0,1–1 µg/mL konsantrasyon aralığında beş kalibratör kullanıldı. Doruk alanını ilaç konsantrasyonu eğrilerine göre enterpolasyon yapmak için doğrusal en küçük kareler (LLS) regresyon kullanıldı. Dört biyomolekül için regresyonun doğruluğu, belirleme katsayısı kullanılarak ölçüldü (R2) ve sonuçlar sırasıyla gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin için 0.9995, 0.9999, 0.9998 ve 0.9995 idi.

Doğruluk ve hassasiyet

Deneysel prosedürün doğruluğunu ve kesinliğini değerlendirmek için, 0,2, 0,3 ve 0,5 µg/mL (düşük, orta ve yüksek) konsantrasyonlara sahip üç QC numunesi, dört standardın beş kalibratörü ile birlikte üç farklı zaman örneğinde çoğaltılmıştır. . Kesinlik yüzde bağıl standart sapma (% RSD) ile ölçülürken, doğruluk yüzdesi Denklem (1)'den hesaplandı:
% Doğruluk =hesaplanan konsantrasyon nominal konsantrasyon × 100
(1)

sağlamlık

Deneysel kromatografik prosedürün sağlamlığı, farklı parametre değerleri için belirlendi. Bu çalışmada yapılan tüm deneyler üç kez tekrarlandı. Prosedürün stabilitesini değerlendirmek için 0,16 µg/mL konsantrasyonlu solüsyonlar kullanıldı. Üretilen çözeltiler dört kez analiz edildi: hazırlığın hemen ardından, 7 gün sonra, 14 gün sonra ve 30 gün sonra. Son üçü için solüsyonlar 4 °C sıcaklıkta saklandı. Dört deneyden elde edilen yanıtlar çizildi ve karşılaştırıldı. Diğer taraftan numunelerin stabilitesi, hazırlandıktan hemen sonra ve 25 °C'de 24 saat saklandıktan sonra kromatografik analiz dikkate alınarak incelenmiştir. 3.2. Kalobin, Umca Solüsyonları ve Umca Tabletlerindeki Dört Biyomolekülün Belirlenmesi İçin Tahlil Prosedürü

Doğru tartılmış 10 mg'lık gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin referans standartları kısımları, 10 mL'lik ölçülü şişelere yerleştirildi ve 10 mL metanol ile seyreltilerek 1 mg/mL standart çözeltiler üretildi. Daha sonra 200 ug/mL'lik bir konsantrasyona sahip daha seyreltilmiş solüsyonlar, her bir referans standarttan 5 mL'nin 25 mL'lik hacimsel bir şişede metanol ile karıştırılmasıyla elde edildi. Daha sonra her çözeltiden 8,75 mL 25 mL hacimli bir balona konularak hacmi asetonitril-metanol (1:1 v/v) ile tamamlanarak 70 µg/mL çalışma standardı çözeltileri elde edildi .). Son olarak, çalışma solüsyonlarından 20 uL'lik kısımlar enjekte edildi ve her seferinde pik alanı hesaplandı. Standart ve test çözeltileri için karşılık gelen kromatogramlar kaydedildi. Pik alanlarının yanıtları, parsellerden elde edildi ve standartla karşılaştırılarak konsantrasyon hesaplandı. 3.3. SARS-CoV-2'ye Karşı İn Vitro İnhibitör Aktivitenin Değerlendirilmesi

3.3.1. Kullanılan Hücreler ve Viral Suş

Vero E6 hücreleri, American Type Culture Collection'dan (ATCC No. CRL-1586) elde edildi. Kullanılan SARS-CoV-2 suşu, hCoV-19/Egypt/NRC-03/2020 (GSAID'de Erişim Numarası: EPI_ISL_430820), 18 Mart 2020'de 34 yaşındaki Mısırlı bir kadından alınan bir orofaringeal sürüntü örneğinden izole edilmiştir [ 46 ]. Tüm deneyler, Ulusal Araştırma Merkezi (NRC), Giza, Mısır etik kurulu tarafından onaylanan protokole göre yapıldı (Onay numarası: NRC-20074).

3.3.2. Normal Hücre Hattına Karşı MTT Sitotoksisite Testi (Vero E6)

Test bileşiklerinin yarı-maksimum sitotoksik konsantrasyonu (CC50 _{) , hafif modifikasyonlarla [}47 ] ve göre daha önce yayınlanan prosedüre [ 48 ]. Sitotoksisite yüzdesi, Denklem (2)'deki işlenmemiş hücrelere kıyasla ölçüldü:
% sitotoksisite =Tedavisiz absorbans - Tedavili absorbans _ _ Tedavisiz absorbans _ × 100
(2)

Hücre yaşayabilirliğini %50 azaltmak için gerekli olan test bileşiğinin konsantrasyonunu hesaplamak için numune konsantrasyonlarına karşı % sitotoksisite grafiği kullanıldı (CC50 ₎ .

3.3.3. Sitopatik Etki (CPE) İnhibisyon Testi

_{Vero E6 hücreleri üzerindeki SARS-CoV-2 kaynaklı sitopatik etkiyi virüs kontrolüne göre % 50} azaltmak için gereken test bileşiklerinin inhibe edici konsantrasyonu50 (ICso ) ölçüldü. Viral proliferasyon, daha önce yayınlanan prosedüre göre kristal viyole boyama kullanılarak enfekte Vero E6 hücreleri üzerindeki sitopatik etkilerin görselleştirilmesiyle değerlendirildi [ 48 ]. Üretilen rengin optik yoğunluğu, bir Anthos Zenyth plaka okuyucu (Model: 200rt, Anthos Labtec Instruments, Heerhugowaard, Hollanda) kullanılarak 570 nm'de ölçülmüştür.

3.3.4. İstatistiksel analiz

Elde edilen veriler, GraphPad Prism Software versiyon 8 (San Diego, CA, ABD) kullanılarak analiz edildi. Veriler ortalama ± standart sapma (SD) olarak gösterilmiştir. Verilerin analizinde One-Way ANOVA ve ardından Dunnett testi kullanıldı. Test edilen örneklerin tüm konsantrasyonları, test edilen en düşük umckalin konsantrasyonu dışında, işlenmemiş sitopatik hücrelerden istatistiksel anlamlılık ( p < 0.05) gösterdi. 3.4. Silico Çalışmalarında

3.4.1. Moleküler ve Farmakokinetik Özelliklerin Değerlendirilmesi

Fizikokimyasal ve farmakokinetik özellikler, SwissADME çevrimiçi platformu [ 49 ] kullanılarak incelenmiştir .

3.4.2. Yerleştirme Çalışmaları

Moleküler yerleştirme hesaplamaları , PyRx 0.8 yazılımına (Scripps Research, La Jolla, CA, ABD) gömülü AutoDock Vina [ 50 ] ile yapıldı . Yerleştirme, Tablo S1'de gösterilen PDB kodları ile RCSB-Protein Veri Bankasından alınan çalışılan enzim hedefleri için kristal yapılar kullanılarak Ek Malzemelerde açıklandığı gibi gerçekleştirildi . Yerleştirme sonuçları, kenetlenmiş protein-ligand etkileşimlerini görüntülemek için Pymol Molecular Graphics System (Schrödinger, LLC, NY, ABD) kullanılarak görselleştirildi.

Git: 4. Sonuçlar

P. sidoides kök ekstraktının farklı ticari dozaj formlarında seçilen dört biyomolekülünün (yani, gallik asit, kateşin, skopoletin ve umckalin) ayrılması ve saptanması için yeni bir HPLC-UV analitik yöntemi geliştirilmiş ve doğrulanmıştır. Önerilen yöntemin etkinliği, ticari formlar dikkate alınarak bir tahlil test prosedürü ile doğrulandı: Kalobin ^® ve Umca ^® solüsyonları ve Umca ^® tabletleri. Geliştirilen yöntem doğru, kesin, hızlı ve P. sidoides analizinin daha önce bildirilen diğer yöntemlerine göre birçok açıdan üstündü.biyomoleküller. Mevcut yöntemlerden farklı olarak geliştirilen yöntem, araştırılan tüm biyomolekülleri eş zamanlı olarak saf hallerinde ve farklı dozaj formlarında ayırabilmektedir. Bu sonuçlar, önerilen yöntemin, bu bitki özünü içeren toplu ve ticari formülasyonlarda araştırılan dört biyomolekülün rutin analizi için başarılı bir şekilde kullanılabileceğini gösterdi. Test edilen dört biyomolekülden skopoletin, P. sidoides DC'ye ek olarak. kök ekstresi, Vero E6 hücreleri üzerinde sitopatik etki (CPE) inhibisyon testi kullanılarak SARS-CoV-2'ye karşı olağanüstü in vitro antiviral aktivite gösterdi. Bununla birlikte, kemotaksonomik belirteç "umckalin", SARS-CoV-2'ye karşı zayıf antiviral aktivite sergiledi.

Git: teşekkürler

Prince Sattam bin Abdulaziz Üniversitesi'ndeki Lisansüstü Çalışmalar ve Bilimsel Araştırma Dekanlıkları, bu araştırmayı destekledikleri için kabul edilmektedir. İn vitro SARS-CoV-2 antiviral testini gerçekleştirdikleri için Aşı Geliştirme ve Virolojik Testler Birimi, İnfluenza Virüsleri için Bilimsel Mükemmellik Merkezi, Ulusal Araştırma Merkezi, 12622, Giza, Mısır'a teşekkür ederiz.

Git: Tamamlayıcı Malzemeler

Aşağıdaki destekleyici bilgiler şu adresten indirilebilir: https://www.mdpi.com/article/10.3390/ph15101184/s1 , Tablo S1. Yerleştirme çalışmasında kullanılan enzimler için kristal yapıların PDB kodları ve ızgara kutusu koordinatları; Tablo S2. In-silico, Pelargonium sidoides biyobelirteçlerinin fizikokimyasal ve ADME özelliklerini tahmin etti; Şekil S1. (a) gallik asit, (b) kateşin, (c) skopoletin ve (d) umckalin'in kalibrasyon eğrisi; Şekil S2. Pelargonium sidoides biyobelirteçlerinin lipofilikliği ve polaritesinin BOILED-Egg gösterimi .
Ek veri dosyası için buraya tıklayın. ^{(444K, zip)}
Git: Finansman Tablosu

Bu araştırma herhangi bir dış finansman almamıştır.

Git: Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma, FMAB; metodoloji, MAA (Manal A. Alossaimi), FMAB ve MHE; yazılım, MHE; doğrulama, MAA (Manal A. Alossaimi) ve MAA (May A. Alzeer); resmi analiz; MAA (Manal A. Alossaimi) ve MAA (May A. Alzeer); soruşturma, MAA (May A. Alzeer); kaynaklar, FMAB; veri iyileştirme, MAA (Manal A. Alossaimi) ve MHE; yazma—orijinal taslak hazırlama, MAA (Manal A. Alossaimi) ve MHE; yazma—inceleme ve düzenleme, FMAB; görselleştirme, MAA (Manal A. Alossaimi) ve MAA (May A. Alzeer); süpervizyon, FMAB Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okumuş ve kabul etmiştir.

Git: Kurumsal İnceleme Kurulu Beyanı

Uygulanamaz.

Git: Bilgilendirilmiş Onam Beyanı

Uygulanamaz.

Git: Veri Kullanılabilirliği Bildirimi

Veriler makale ve Ek Malzemeler içinde yer almaktadır .

Git: Çıkar çatışmaları

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Git: Dipnotlar

Yayıncının Notu: MDPI, yayınlanan haritalardaki ve kurumsal bağlantılardaki yetki iddiaları konusunda tarafsız kalır.

Git: Referanslar

1. Kolodziej H. Geleneksel olarak kullanılan Pelargonium türleri: Umckaloabo ekstraktlarının ve bileşenlerinin kimyası ve biyolojik aktivitesi. Curr. Tepe. fitokimya 2000; 3 :77–93. [ Google Akademik ]
2. Kayser O., Kolodziej H. Pelargonium sidoides ve Pelargonium reniforme ekstrelerinin ve bileşenlerinin antibakteriyel aktivitesi . Bitki Med. 1997; 63 :508–510. doi: 10.1055/s-2006-957752. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
3. Careddu D., Pettenazzo A. Pelargonium sidoides EPs 7630'u özütleyin: Çocuklarda akut solunum yolu enfeksiyonlarını tedavi etmek için klinik etkinliğinin ve güvenliğinin gözden geçirilmesi. Int. J. Gen. Med. 2018; 11 :91–98. doi: 10.2147/IJGM.S154198. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
4. Ahmad A., Rehman M., Alkharfy K. Koronavirüs (COVID-19) ve benzeri enfeksiyon riskini en aza indirmek için alternatif bir yaklaşım. Avro. Rahip Med. Eczane. bilim 2020; 24 :4030–4034. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
5. Colling J., Groenewald JH, Makunga NP Artan kumarin üretimine yönelik genetik değişiklikler, tıbbi açıdan önemli Pelargonium sidoides DC (Geraniaceae) Metab'da metabolik değişikliklere yol açar. Müh. 2010; 12 :561–572. doi: 10.1016/j.ymben.2010.08.001. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
6. Latté KP, Kayser O., Tan N., Kaloga M., Kolodziej H. Geleneksel bitkisel ilaç Umckaloabo'nun kaynağını oluşturan Pelargonium Türlerinin Olağandışı kumarin desenleri . Z. Nat. C. 2000; 55 :528–533. doi: 10.1515/znc-2000-7-809. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
7. Panara A., Aalizadeh R., Thomaidis NS Pelargonium sidoides kökünün LC-QToF-MS hedef dışı tarama stratejilerine dayalı kimyasal karakterizasyonu. fitokimya Anal. 2022; 33 :40–56. doi: 10.1002/pca.3059. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
8. Kolodziej H., Kiderlen AF Pelargonium reniforme, Pelargonium sidoides ve ilgili bitkisel ilaç preparasyonu EPs 7630'un antibakteriyel ve immünomodülatör aktivitelerinin in vitro değerlendirmesi . Phytomedicine. 2007; 14 ((Ek 6)):18–26. doi: 10.1016/j.phymed.2006.11.020. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Luypaert J., Zhang M., Massart DL Yeşil çayın kalitatif ve kantitatif analizinde yakın kızılötesi spektroskopinin kullanımı için fizibilite çalışması, Camellia Sinensis (L.) Anal. Chim. Açta. 2003; 478 :303–312. doi: 10.1016/S0003-2670(02)01509-X. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
10. HMPC-Bitkisel-Tıbbi-Ürünler Komitesi . Pelargonium sidoides DC ve/veya Pelargonium reniforme Curt., radix hakkında Değerlendirme Raporu. Avrupa İlaç Ajansı; Londra, Birleşik Krallık: 2018. EMA/HMPC/444251/2015. [ Google Akademik ]
11. Maree JE, Viljoen AM Pelargonium sidoides ve Pelargonium reniforme arasındaki fitokimyasal ayrım — Bir kalite kontrol perspektifi. Afr. J.Bot. 2012; 82 :83–91. doi: 10.1016/j.sajb.2012.07.007. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Kolodziej H. Bitkisel ilaç Umckaloabo'nun geleneksel ve bitkisel tıbbi kaynakları olan Pelargonium sidoides ve Pelargonium reniforme'nin büyüleyici metabolik havuzları . Bitki ilacı. 2007; 14 ((Ek 6)):9–17. doi: 10.1016/j.phymed.2006.11.021. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
13. Avrupa Farmakopesi . Avrupa Farmakopesi. 9. baskı Avrupa Konseyi; Strasbourg, Fransa: 2016. [ Google Scholar ]
14. Canas S., Trindade C., Sun B., Naves P. Çam solgunluğu hastalığında yer alan fenolik bileşikler: HPLC tabanlı yöntem geliştirme ve miktar tayini için doğrulama. J. Bitki Biyokimyası. Biyoteknoloji 2020; 30 :343–353. doi: 10.1007/s13562-020-00599-0. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Dhanani T., Shah S., Kumar S. Hindistan'dan dört Terminalia türünde tanenle ilgili işaretleyici bileşenler olan gallik asit, korilagin, chebulagic asit, ellagic asit ve chebulinik Asitin belirlenmesi için doğrulanmış yüksek performanslı bir sıvı kromatografi yöntemi. J. Kromatr. bilim 2015; 53 :625–632. doi: 10.1093/chromsci/bmu096. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Fiori J., Pasquini B., Caprini C., Orlandini S., Furlanetto S., Gotti R. Yeşil çayın siklodekstrin ile modifiye edilmiş misel elektrokinetik kromatografisi ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile karakterizasyonunda teanin ve kateşinin kiral analizi. J. Kromatr. A.2018 ; 1562 :115–122. doi: 10.1016/j.chroma.2018.05.063. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
17. Svoboda P., Vlčková H., Nováková L. Çeşitli çay numunelerinde doğal olarak oluşan sekiz kateşin türevinin ve matris etkilerinin rolünün belirlenmesi için UHPLC–MS/MS yönteminin geliştirilmesi ve doğrulanması. J. Ecz. Biyomed. Anal. 2015; 114 :62–70. doi: 10.1016/j.jpba.2015.04.026. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
18. Choi S.-I., Kwon H.-Y., La I.-J., Jo Y.-H., Han X., Men X., Lee S.-J., Kim Y.-D ., Seong G.-S., Lee O.-H. Fermente edilmiş Morinda citrifolia L. (Noni) Separasyonlarında deacetylasperulosidic asit, asperulosidic asit, skopolin, asperulosid ve skopoletin için bir analitik yöntemin geliştirilmesi ve doğrulanması . 2021; 8:80 . doi: 10.3390/separations8060080. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Wang L., Wu HL, Yin XL, Hu Y., Gu HW, Yu RQ Tibet tıbbı Saussurea laniceps ve geleneksel Çin tıbbı Radix Angelicae pubescentis'te umbelliferon ve skopoletin'in ikinci dereceden birleştirilmiş eksitasyon-emisyon matrisi floresansı kullanılarak eş zamanlı tayini kalibrasyon yöntemi. Spektrokim. Acta Part A Mol. Biyomol. Spectrosc. 2017; 170 :104–110. doi: 10.1016/j.saa.2016.07.018. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
20. Franco L., de Oliveira BH Pelargonium sidoides içeren ticari tentür ve fitopreparasyonlarda umckalinin HPLC ile belirlenmesi: Numune hazırlama prosedürlerinin karşılaştırılması. Talanta. 2010; 81 :1368–1372. doi: 10.1016/j.talanta.2010.02.036. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
21. Masondo NA, Makunga NP Güney Afrika'da ticarileştirilmiş bazı şifalı bitkilerde analitik tekniklerin geliştirilmesi: Mevcut ve gelecekteki perspektifler. Afr. J.Bot. 2019; 126 :40–57. doi: 10.1016/j.sajb.2019.06.037. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
22. Dömling A., Gao L. SARS-CoV-2'nin Kimyası ve Biyolojisi. kimya 2020; 6 :1283–1295. doi: 10.1016/j.chempr.2020.04.023. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
23. Zhang L., Lin D., Sun X., Curth U., Drosten C., Sauerhering L., Becker S., Rox K., Hilgenfeld R. SARS-CoV-2 ana proteazının kristal yapısı bir temel sağlar geliştirilmiş a-ketoamid inhibitörlerinin tasarımı için. Bilim. 2020; 368 :409–412. doi: 10.1126/science.abb3405. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
24. Liu C., Zhou Q., Li Y., Garner LV, Watkins SP, Carter LJ, Smoot J., Gregg AC, Daniels AD, Jervey S. COVID-19 ve ilgili terapötik ajanlar ve aşılar üzerine araştırma ve geliştirme insan koronavirüs hastalıkları. ACS Cent. bilim 2020; 6 :315–331. doi: 10.1021/acscentsci.0c00272. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
25. Jia Z., Yan L., Ren Z., Wu L., Wang J., Guo J., Zheng L., Ming Z., Zhang L., Lou Z. Şiddetli Akut Solunum Sendromunun hassas yapısal koordinasyonu ATP hidrolizi üzerine koronavirüs Nsp13. Nükleik Asitler Res. 2019; 47 :6538–6550. doi: 10.1093/nar/gkz409. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
26. Liu W., Morse JS, Lalonde T., Xu S. Geçmişten ders almak: 2019-nCoV'nin neden olduğu ciddi akut solunum yolu enfeksiyonları için olası acil önleme ve tedavi seçenekleri. Kembiyokimya. 2020; 21 :730–738. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
27. Lung J., Lin YS, Yang YH, Chou YL, Shu LH, Cheng YC, Liu HT, Wu CY Anti-SARS-CoV-2 RNA'ya bağımlı RNA polimerazın potansiyel kimyasal yapısı. J.Med. Virol. 2020; 92 :693–697. doi: 10.1002/jmv.25761. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
28. Wu C., Liu Y., Yang Y., Zhang P., Zhong W., Wang Y., Wang Q., Xu Y., Li M., Li X. SARS-CoV- için terapötik hedeflerin analizi 2 ve hesaplamalı yöntemlerle potansiyel ilaçların keşfi. Açta Ecz. Günah. B.2020 ; 10 :766–788. doi: 10.1016/j.apsb.2020.02.008. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
29. Gurung AB, Ali MA, Lee J., Farah MA, Al-Anazi KM Spike RBD ve insan ACE2 arasındaki arayüz bölgesini hedefleyerek potansiyel SARS-CoV-2 giriş inhibitörlerinin tanımlanması. J. Bulaş. Halk Sağlığı. 2021; 14 :227–237. doi: 10.1016/j.jiph.2020.12.014. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
30. NCBI . CID 5316862 için PubChem Bileşik Özeti, Umckalin. Ulusal Biyoteknoloji Bilgi Merkezi; Bethesda, MD, ABD: 2022. [ Google Scholar ]
31. NCBI . CID 370, Gallik Asit için PubChem Bileşik Özeti. Ulusal Biyoteknoloji Bilgi Merkezi; Bethesda, MD, ABD: 2022. [ Google Scholar ]
32. NCBI . CID 9064, Cianidanol için PubChem Bileşik Özeti. Ulusal Biyoteknoloji Bilgi Merkezi; Bethesda, MD, ABD: 2022. [ Google Scholar ]
33. NCBI . CID 5280460 için PubChem Bileşik Özeti, Scopoletin. Ulusal Biyoteknoloji Bilgi Merkezi; Bethesda, MD, ABD: 2022. [ Google Scholar ]
34. ICH kılavuzu . Analitik Prosedürlerin Validasyonu: Metin ve Metodoloji. Uluslararası Uyum Konseyi; Cenevre, İsviçre: 1995. [ Google Scholar ]
35. Shabir GA Farmasötik analiz için yüksek performanslı sıvı kromatografi yöntemlerinin doğrulanması. ABD Gıda ve İlaç İdaresi, ABD Farmakopesi ve Uluslararası Uyumlaştırma Konferansı'nın doğrulama gereklilikleri arasındaki farkları ve benzerlikleri anlamak. J. Kromatr. A.2003 ; 987 :57–66. doi: 10.1016/s0021-9673(02)01536-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
36. Miller JN Analitik kimya için temel istatistiksel yöntemler Bölüm 2: Kalibrasyon ve regresyon yöntemleri. Bir inceleme. Analist. 1991; 116 :3–14. doi: 10.1039/an9911600003. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
37. Roth M., Fang L., Stolz D., Tamm M. Pelargonium sidoides kök ekstresi EPs 7630, insan bronşiyal epitel hücreleri üzerindeki viral bağlayıcı proteinlerin modülasyonu yoluyla rinovirüs enfeksiyonunu azaltır. PLoS BİR. 2019; 14 :e0210702. doi: 10.1371/journal.pone.0210702. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
38. Selim IA, Panda SS, Girgis AS, Moatasim Y., Kandeil A., Mostafa A., Ali MA, Nossier ES, Rasslan F., Srour AM Yeni kinolin-triazol konjugatları: Sentez, ve SARS-CoV'ye karşı antiviral özellikler -2. Biorg. kimya 2021; 114 :105117. doi: 10.1016/j.bioorg.2021.105117. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
39. Ikanovic T., Sehercehajic E., Saric B., Tomic N., Hadziselimovic R. Potansiyel SARS-CoV-2 hedefiyle skopoletin etkileşiminin in silico analizi. İçinde: Karabegović I., editör. Yeni Teknolojiler, Geliştirme ve Uygulama IV. Cilt 233 Springer; Berlin/Heidelberg, Almanya: 2021. [ Google Akademik ]
40. White AG, Davies-Coleman MT, Ripley BS Yabani hasat edilmiş ve ekili Pelargonium sidoides (Geraniaceae) S. Afr'da umckalin konsantrasyonunun ölçülmesi ve optimize edilmesi. J.Bot. 2008; 74 :260–267. doi: 10.1016/j.sajb.2007.11.015. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
41. Trun W., Kiderlen AF, Kolodziej H. Pelargonium sidoides (Eps 7630) Phytomedicine ekstraktı ile işlenmiş Leishmania ile enfekte RAW 264.7 hücrelerinde nitrik oksit sentaz ve sitokinler gen ekspresyonu analizleri. 2006; 13 :570–575. doi: 10.1016/j.phymed.2005.07.004. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
42. Daina A., Zoete V. Küçük moleküllerin mide-bağırsak emilimini ve beyin penetrasyonunu tahmin etmek için haşlanmış yumurta. ChemMedChem. 2016; 11 :1117. doi: 10.1002/cmdc.201600182. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
43. Sliwoski G., Kothiwale S., Meiler J., Lowe EW İlaç keşfinde hesaplama yöntemleri. Eczane. Rev. 2014; 66 :334–395. doi: 10.1124/pr.112.007336. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
44. Ton AT, Gentile F., Hsing M., Ban F., Cherkasov A. 1,3 milyar bileşiğin derin yerleşimiyle potansiyel SARS-CoV-2 ana proteaz inhibitörlerinin hızlı tanımlanması. Mol. Bilgi vermek. 2020; 39 :2000028. doi: 10.1002/minf.202000028. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
45. Gurung AB SARS-CoV-2 Nsp13 helikaz ve Nsp14'ün siliko yapı modellemesi ve FDA onaylı antiviral ilaçların ikili inhibitörler olarak yeniden kullanılması. Gen Temsilcisi 2020; 21 :100860. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
46. Kandeil A., Mostafa A., Hegazy RR, El-Shesheny R., El Taweel A., Gomaa MR, Shehata M., Elbaset MA, Kayed AE, Mahmoud SH, et al. İnaktif SARS-CoV-2 Aşısının İmmünojenliği ve Güvenliği: Preklinik Çalışmalar. Aşılar. 2021; 9 :214. doi: 10.3390/vaccines9030214. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
47. Mosmann T. Hücresel büyüme ve hayatta kalma için hızlı kolorimetrik deney: Proliferasyon ve sitotoksisite deneylerine uygulama. J. Immunol. Yöntemler. 1983; 65 :55–63. doi: 10.1016/0022-1759(83)90303-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
48. Mostafa A., Kandeil A., Elshaier YAMM, Kutkat O., Moatasim Y., Rashad AA, Shehata M., Gomaa MR, Mahrous N., Mahmoud SH, et al. Şiddetli Akut Solunum Sendromu Coronavirüs'e Karşı Güçlü İn Vitro Antiviral Aktiviteye Sahip FDA Onaylı İlaçlar 2. İlaçlar. 2020; 13 :443. doi: 10.3390/ph13120443. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
49. Daina A., Michielin O., Zoete V. SwissADME: Küçük moleküllerin farmakokinetiğini, ilaca benzerliğini ve tıbbi kimya dostluğunu değerlendirmek için ücretsiz bir web aracı. bilim 2017 ; 7 :42717. doi: 10.1038/srep42717. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
50. Trott O., Olson AJ AutoDock Vina: Yeni puanlama işlevi, verimli optimizasyon ve çoklu kullanım ile yerleştirme hızını ve doğruluğunu artırma. J. Bilgisayar. kimya 2010; 31 :455–461. doi: 10.1002/jcc.21334. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]

**igokcek** · 14 November 2012, 13:36

KOKU ve TAT Alma Organı Burun Soğanı Sinirleri Kireçlenir ise Koku ve Tat Alamamaya Afrika Sardunya

ALERJİK Rinit, Alerjik Astım, Aşırı Terleme, Geniz Eti ve Hapşurmanın Afrika Sardunya ile Tedavisi

ZATÜRRE, Pseudokrupp, Bronşit, Astım, Öksürük, Balgam ve Boğmacanın Afrika Sardunyası ile Tedavi

SİNÜZİT, Farenjit (Boğaz Ağrısı), Tonsillit ve Orta Kulak ağrısını Afrika Sardunyası ile Tedavisi

KOAH Nedir, KOAH Hastalığına Ne İyi Gelir, Afrika Sardunyası İle KOAH'a Bitkisel Çözüm

Afrika Sardunya Klinik Araştırma, Afrika Sardunyasının Faydaları

Pelargonium sidoides Bileşiklerinin Laktoferrin ve SARS-CoV-2 ile Etkileşimi : Moleküler Simülasyonlardan İçgörüler

Federico Iacovelli¹, Gaetana Costanza², Alice Romeo¹, Terenzio Cosio^{3 4}, Caterina Lanna⁴, Antonino Bagnulo⁵, Umberto Di Maio⁵, Alice Sbardella⁴, Roberta Gaziano³, Sandro Greli², Ettore Squillaci⁶, Alessandro Miani⁷, Prisco Piscitelli⁸, luca bianchi⁴, Mattia Falconi¹, Elena Campione⁴
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Yapısal Biyoinformatik Grubu, Biyoloji Bölümü, Roma Üniversitesi "Tor Vergata", 00133 Roma, İtalya.
²Viroloji Birimi, Deneysel Tıp Bölümü, Tor Vergata Üniversite Hastanesi, 00133 Roma, İtalya.
³Mikrobiyoloji, İmmünoloji, Bulaşıcı Hastalıklar ve Transplantlarda Doktora Kursu (MIMIT), Deneysel Tıp Bölümü, Roma Üniversitesi Tor Vergata, 00133 Roma, İtalya.
⁴Dermatoloji Birimi, Sistem Tıbbı Bölümü, Tor Vergata Üniversite Hastanesi, 00133 Roma, İtalya.
⁵NEILOS SRL, 80063 Piano di Sorrento, İtalya.
⁶Biyotıp ve Önleme Bölümü, Roma Üniversitesi "Tor Vergata", 00133 Roma, İtalya.
⁷Çevre Bilimleri ve Politikası Bölümü, Milano Üniversitesi, 20133 Milano, İtalya.
⁸Sağlık Eğitimi ve Sürdürülebilir Kalkınma, Napoli Federico II Üniversitesi, 80125 Napoli, İtalya.

PMID: 35564648
PMCID: PMC9101775
DOI: 10.3390/ijerph19095254

Ücretsiz PMC makalesi Soyut

(1) Arka plan: Pelargonium sidoides özleri ve laktoferrin, SARS-CoV-2 enfeksiyonunun erken evrelerine müdahale edebilen iki önemli doğal, anti-enflamatuar ve antiviral ajandır. Pelargonium sidoides bileşiklerinin laktoferrin ve SARS-CoV-2 bileşenleri ile etkileşimlerinin oluşumunu kontrol etmek için moleküler yerleştirme ve moleküler dinamik simülasyon yaklaşımları uygulanmıştır . (2) Yöntemler: PEL bileşikleri ile laktoferrin proteini ve Pelargonium sidoides arasındaki doğrudan etkileşim hipotezini doğrulamak için hesaplama yöntemleri uygulanmıştır.bileşikler ve SARS-CoV-2 Spike, 3CLPro, RdRp proteinleri ve membran. Seçilen yüksek skorlu kompleksler, klasik moleküler dinamik simülasyon yoluyla yapısal olarak incelenirken, etkileşim enerjileri, genelleştirilmiş Born ve yüzey alanı sürekli çözme yöntemiyle birleştirilmiş moleküler mekanik enerjiler kullanılarak değerlendirildi. (3) Sonuçlar: Hesaplamalı analizler, Pelargonium sidoides özlerinin yapısal ve dinamik özelliklerini değiştirmeden laktoferrin ile etkileşime girebileceğini gösterdi. Ayrıca Pelargonium sidoides bileşikleri, Spike glikoproteini, 3CLPro ve lipit membrana müdahale etme yeteneğine sahip olmalı ve muhtemelen çift katmana eklenen proteinlerin fonksiyonel özelliklerini etkilemelidir. (4) Sonuç: Bulgularımız şunu gösteriyor:Pelargonium sidoides , özellikle erken aşamalarda SARS-CoV-2'nin enfeksiyon mekanizmasına müdahale edebilir.

Anahtar Kelimeler: MM/GBSA; Pelargonium sidoides; SARS-CoV-2; laktoferrin; moleküler yerleştirme; moleküler dinamikler.

**igokcek** · 14 November 2012, 13:36

AFRİKA SARDUNYASI İle Bahar Alerjisi

AFRİKA SARDUNYASI İle Astım

Bitkisel ürünlerin COVID-19'un önlenmesi ve tedavisindeki potansiyeli. Literatür incelemesi

Aleksander Gajewski , ^a,^⁎Anna Kośmider , ^aAleksandra Nowacka , ^bOskar Puk , ^b ve Michał Wiciński ^b
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
^a Botanik Bölümü, Eczacılık Fakültesi, Collegium Medicum, Bydgoszcz, Nicolaus Copernicus University, M. Curie 9, 85-090 Bydgoszcz, Polonya
^b Bydgoszcz'de Tıp Fakültesi, Collegium Medicum, Farmakoloji ve Tedavi Bilimleri Bölümü, Nicolaus Copernicus University, M. Curie 9, 85-090 Bydgoszcz, Polonya
^⁎ İlgili yazar.
Git: Soyut

COVID-19 salgını, yüksek morbidite ve mortalite ile insanlığın onlarca yıldır yaşadığı en büyük pandemidir. Aşıların yakın zamanda geliştirilmesine rağmen hala birçok ciddi COVID-19 vakası var. Ne yazık ki hala standart tedaviler yoktur ve ciddi vakaların tedavisi çok zordur. Bu çalışmanın amacı, tek başına veya tamamlayıcı bir terapi olarak uygulanan bitkilerin SARS-CoV-2 enfeksiyonunun profilaksisi veya tedavisi olarak kullanılıp kullanılamayacağını göstermektir. Çin'de COVID-19 hastalarının %85'inden fazlası Geleneksel Çin Tıbbı (TCM) kullandı ve en yaygın bitki, koronavirüsler de dahil olmak üzere farklı zarflı virüslerin replikasyonunu in vitro olarak inhibe eden Glycyrrhiza glabra'dır. Glycyrrhizin in vitro SARS-CoV-2'nin konakçı hücrelere penetrasyonu için hayati önem taşıyan ACE2 reseptörlerine bağlanır ve bunların yapısını değiştirir. Pelargonium sidoides, klinik ve in vitro çalışmalarda immünomodülatör ve antiviral özellikler gösterir ve HCo-229E koronavirüsün replikasyonunu inhibe eder. Glycyrrhiza glabra, standart tedavilerle kombinasyon halinde hastaneye yatış oranını ve COVID-19 semptomlarının ortaya çıkışını önemli ölçüde azaltır. Tamamlayıcı tedaviler olarak lianhuaqingwen kapsülleri ve jinhua qinggan granülleri hastaneye yatış oranlarını, semptomların iyileşme süresini azaltır ve hastanın psikolojik konforunu artırır. SARS-CoV-2 göz önüne alındığında, diğer bitkiler etkili değildir, örneğin maxingshigan-yinqiaosan veya terapötik konsantrasyona ulaşmak imkansızdır, örneğin efedra bitkisi veya uygun veri yoktur. Bu nedenle Meyankökü ve Pelargonium sidoides, koronavirüslere karşı etkilidir ve muhtemelen COVID-19'un profilaksisi ve tedavisi olarak kullanılabilir,

Anahtar Kelimeler: COVID-19, Coronavirüs, Geleneksel Çin Tıbbı, Glycyrrhiza glabra, Pelargonium sidoides, Glycyrrhizin
Git: Grafik Özeti

Git: 1. Giriş

COVID-19 salgını, insanlığın onlarca yıldır yaşadığı en büyük salgındır. DSÖ'ye göre 21 Haziran 2021'e kadar dünya çapında 178.118.597 doğrulanmış COVID-19 vakası ve bu hastalık nedeniyle 3.864.180 ölüm meydana geldi [1] . Hu ve diğerleri tarafından gerçekleştirilen meta-analiz. COVID-19 vakalarının %12,6-23,5'inin ciddi olduğunu ve ölüm oranlarının %2 ila %4,4 arasında değiştiğini gösteriyor ve bu sorunun ciddiyetini doğruluyor. Salgın, SARS-CoV-2'nin ilk kez 8 Aralık 2019'da izole edildiği Çin'in Wuhan kentinde başlamış ve o tarihten itibaren tüm dünyaya yayılmıştır [2].. SARS-CoV-2'nin ilk ortaya çıkışıyla ilgili olarak, pandeminin başlangıcında çoğu hastanın Çinli olması şaşırtıcı değil. İlginç bir şekilde, Çin'de COVID-19 hastalarının %85'inden fazlası, geleneksel tedavilerin başında Geleneksel Çin Tıbbı (TCM) tedavisi aldı [3] . Ayrıca, bazı illerin SARS-CoV-2 enfeksiyonunun TCM ile önlenmesi ve tedavisi için kendi kılavuzları vardı ve önerilen ilaçlar hastanın yaşına ve enfeksiyonun şiddetine göre farklılık gösteriyor [4] , [5]. Luo ve diğerleri tarafından gerçekleştirilen meta-analiz. geleneksel Çin bitkisel tıbbının, plaseboya kıyasla H1N1 enfeksiyonu riskini 0,36 bağıl risk (%95 GA 0,24–0,52) ile azalttığını göstermektedir. Ayrıca, hastanelerde SARS'lı hastaları tedavi eden 16.437 sağlık çalışanı arasında, TCM grubunun hiçbiri SARS'a yakalanmazken, bitkisel olmayan grupta enfeksiyon oranı %0.4 (p = 0.035) idi [6 ] . Bununla birlikte, tipik TCM ilaçları sadece bir bitki değil, hatta düzinelerce farklı bitkinin, özütün vb. Bu, Ang ve ark. TCM bitkisel karışımlarını araştırmak ve bileşenlerini tasvir etmek [5]. Bu çalışmaya göre Çinli hastalar en sık Glycyrrhiza glabra kökü, daha az sıklıkla da armeniacae semen amarum, efedra otu ve jips fibrosumu kullanmışlardır [5] . Bir koronavirüs pandemisi yeni ve anlaşılmaz bir şey gibi görünse de, geçmişte benzer salgınlar meydana geldi, örneğin 2003'te. Bu nedenle, sadece Glycyrrhiza glabra ve Pelargonium sidoides kökleri gibi bitkisel ilaçlar, koronavirüs enfeksiyonunun potansiyel bir tedavisi olarak araştırıldı. . Bu çalışmanın amacı, bu tür tedavilerin SARS-CoV-2 enfeksiyonlarını iyileştirme veya geleneksel tedaviyi kolaylaştırma potansiyeline sahip olup olmadığını belirlemek için koronavirüs enfeksiyonları açısından bitkisel ilaçlarla ilgili mevcut literatürü gözden geçirmektir.

Git: 2. Sonuçlar

Bu makalede alıntılanan en önemli çalışmalar şu şekilde toplanmıştır: tablo 1. tablo 1

Seçilen gözden geçirilmiş çalışmaların özeti.

Cinatl, J., Morgenstern, B., Bauer, G., Chandra, P., Rabenau, H., & Doerr, H. (2003), [ 9]	SARS izolatlı Vero hücre dizileri (2)		Glycyrrhizin veya antiviral ilaçlarla inkübasyon	Glisirizin, viral replikasyonun hangi aşamasında uygulanırsa uygulansın (> 33–> 67) en yüksek seçicilik indeksine sahipti ve SARS virüs replikasyonunu en güçlü şekilde inhibe etti. Glisirizin, adsorpsiyon periyodu sırasında ve sonrasında verildiğinde en etkili olmuştur (EC50 300 mg/L).
Chen, F.(2004), [10]	SARS izolatları ile fRhK-4 ve Vero E-6 hücre hatları (10)		Glycyrrhizin ve diğer antiviral ilaçlar	Glisirizin için fRhK-4 hücre hattında inhibe edici aktivite yok. Vero E-6 hücre hattındaki inhibitör aktivite (EC50 = 100 µg/ml)
Zhao, H., Zhao, M., Wang, Y., Li, F., & Zhang, Z. (2015), [12]	Sıçanlar. Sham ameliyat grubu(6), glisiretinik asit (GA) grubu (6), sepsis grubu (6), sepsis artı GA grubu (6), sepsis artı GA grubu – farklı GA dozları (6)		25 mg/kg,50 mg/kg Glisirizik asit	GA, sepsisli sıçanların sağkalımını 50 mg/kg grubunda %60 ve 25 mg/kg grubunda %40 arttırır. GA, protein BALF içeriğini geri döndürür (25 mg/kg-0,6,p < 0,05; 50 mg/kg-0,4, p < 0001). GA, akciğerin Islak-kuru oranını azaltır. GA, çok çekirdekli hücrelerin büyümesini önler ve in vitro olarak lökosit apoptozu azaltır. GA, NO ve iNO ifadesini inhibe eder. GA, MDA üretimini %50 inhibe eder, nitrotirozin konsantrasyonlarını %50 azaltır, Bcl-2/Bax oranını ve p38MAPK aktivasyonunu artırır.
Herbert Kolodziej, Oliver Kayser, Oliver A. Radtke, Albrecht F. Kiderlen ve Egon Koch (2003), [15]	murin L929 fibroblastları		EMCV süspansiyonuna maruz bırakılmış, test bileşikleri (EPs® 7630, kök ekstresi) (50 μg/ml) veya tek başına ortam ile 48 saat inkübe edilmiş murin kemik iliği kaynaklı makrofajlar.	Sadece 1,6 μg/ml'de CPE'nin tam inhibisyonu ile değil, aynı zamanda biraz daha yüksek konsantrasyonlarda fibroblastların önemli ölçüde çoğalmasıyla da kanıtlandığı gibi, kök ekstraktı için belirgin sitoprotektif etkiler gözlendi. Sonraki biyoanaliz kılavuzluğunda fraksiyonlama, potansiyel olarak aktif bir bileşen olarak gallik asidin saptanmasına yol açtı ve bu da doza bağlı bir şekilde L929 hücreleri üzerindeki EMCV'nin CPE'sini dolaylı olarak önemli ölçüde azalttı. 100 μg/ml'de, sitotoksik etkiler olmadan tam sitoproteksiyon fark edildi. Kumarinler arasında umckalin, IFN standardına göre %30 etkinlikle 25 ila 50 μg/ml aralığında nispeten en güçlü inhibitör etkileri gösterdi.
Herbert Kolodziej, Albrecht F. Kiderlenb (2007), [16]	Agar seyreltme yöntemi kullanılarak gram pozitif bakteriler (Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae ve β-hemolitik Streptokok) Gram negatif bakteriler (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae)		Dört Sardunya kökü ekstresi: Metanolik, etil asetat, n-bütanol ve su	Ham metanollü Pelargonium kök ekstraktlarının test edilen bakterilere karşı 5 7,5 mg/ml MIC'ler ile orta derecede aktif olduğu, etil asetat, n-butanol ve su fazlarının, 0,6-1,2 mg/ MIC'lerden açıkça görüldüğü gibi oldukça yüksek antibakteriyel etkiler sergilediği bulunmuştur. ml. Bu özel biyolojik aktivite ile ilgili olarak P. sidoides ve P. reniforme özleri arasında önemli bir fark bulunmadı.
Martin Michaelis, Hans Wilhelm Doerr, Jindrich Cinatl Jr. (2011), [19]	Virüs H1N1 H3N3 H5N1 RSV HCo-229E Adeno 3 Adeno 7 Parainfluenza 3 Coxsackie A9 Rhino 16	Hücre dizisi MDCK MDCK Vero Vero Caco-2 Caco-2 Caco-2 LLC-MK2 HFF Mel-Ho	Artan EPs® 7630 konsantrasyonları ile inkübasyon	EPs® 7630, 100 g/ml'ye kadar olan konsantrasyonlarda araştırılan tüm hücre tiplerinin yaşayabilirliğini azaltmadı. EPs® 7630, 100 µg/ml'ye kadar incelenen konsantrasyonlarda H5N1, adeno 3, adeno 7 veya rhino 16 tarafından indüklenen CPE oluşumunu etkilemedi. EPs® 7630, H1N1, H3N2, RSV, HCo-229E, parainfluenza 3 veya coxsackie A9'un neden olduğu CPE oluşumuna müdahale etti. 100 µg/ml'lik bir konsantrasyonda EPs® 7630, H1N1, H3N2 ve RSV'nin replikasyonunu tamamen bastırdı. Coxsackie A9 virüs titreleri yaklaşık 10.000 kat, parainfluenza 3 yaklaşık 150 kat ve HCo-229E yaklaşık 10 kat azaltıldı.
Hu K., Guan W., Bi W., Zhang W., Li L., Zhang B. (2020), [21]	284 COVID-19 hastası: Lianhuaqingwen (LH) kapsül grubu (142) ve kontroller (142)		Deney grubu: 14 gün boyunca günde üç kez 4 LH kapsülü + Yeni Coronarvirüs Pnömonisinin Teşhis ve Tedavi Protokolünün 4. versiyonuna dayanan konvansiyonel tedavi . Kontrol grubu: Tek başına geleneksel tedavi.	Tedaviye karşı kontroller: iyileşme oranı %91,5'e karşı %82,4 (p = 0,022), CT'ye göre akciğer gelişimi %83,8'e karşı %64,1 (p < 0,001), klinik iyileşme %78,9'a karşı %66,2 (p = 0,017), semptomlar hafifleme 7'ye karşı 10 gün, p < 0,001), ateşin iyileşme süresi (2'ye karşı 3 gün) (p < 0,001), yorgunluk (3'e karşı 6 gün) (p < 0,001) ve öksürük (7'ye karşı 10) gün) (p < 0.001). Şiddetli vakalara dönüşme oranı ve viral tahlil bulguları her iki grupta da benzerdi (her ikisi de p > 0.05).
Duan C., Xia WG, Zheng CJ, Sun GB, Li ZL, Li QL (2020), [22]	123 COVID-19 hastası; Tedavi grubu (82); kontrol grubu (41)		Tedavi grubu: Jinhua Qinggan granülleri + geleneksel tedavi (antibiyotikler, antiviral ilaçlar ve mekanik ventilasyon); Kontrol grubu: sadece konvansiyonel tedavi	Hastaneye yatış oranı diş eti grubunda kontrol grubuna göre anlamlı olarak daha düşüktü (%10,98'e karşı %24,39) (p < 0,05). Ginggan grubunda ateş insidansı %53,1'e karşı %80,3 (p < 0,05), öksürük %42,9'a karşı %66,1 (p < 0,05) ve yorgunluk %53,8'e karşı %77,6 daha düşüktü ( p < 0.05). Yan etki oranı deney grubunda kontrol grubuna göre daha yüksekti (%32,93'e karşı %0).

Ayrı bir pencerede aç 2.1. Glycyrrhiza glabra

2.1.1. Genel bilgi

Meyankökü (Glycyrrhiza glabra L.), Güney-Batı Asya, Avrasya ve Akdeniz'de yaygın olarak bulunan Fabaceae familyasının çok yıllık bir bitkisidir [7] , [8] . Hammadde, taze kökler de kullanılsa da, sonbaharda veya ilkbaharın başlarında hasat edilen 3-4 yaşındaki bitkilerin sığ soyulmuş ve kurutulmuş köklerinden ve yolluklarından yapılır [7] , [8] . Meyan kökü aşağıdaki aktif maddeleri içerir: Antiviral özelliklere sahip bir madde olan glisirizik asit (glisirizin) ve tuzları, diğer triterpen saponosit, flavonoidler, kumarinler ve karbonhidratlar [8] .

2.1.2. Potansiyel bir COVID-19 tedavisi olarak meyan kökü ekstresi

Glisirizinin virüsler açısından farmakodinamiği hala bilinmemekle birlikte araştırmalar bu maddenin protein kinaz C, kazein kinaz, AP-1 (aktivatör protein 1), MAPK-p38 ve nükleer faktör-κB aracılığıyla DNA onarımını etkilediğini ve gen ifadesi ( Şekil 1) [9] , [10] , [11] , [12] . Ayrıca, glisirizinik asit ve metaboliti glisirretinik asit, makrofajlarda indüklenmiş nitrik oksit sentaz (iNOS) ekspresyonunu inhibe ederek, akut akciğer hasarının patogenezinde önemli bir aracı olan NO üretimini azaltır [12 ] . Ciddi akut solunum sıkıntısı sendromuna (SARS) neden olan yeni bir koronavirüsün (SARS-CV) saptanmasına yanıt olarak Cinatl ve ark. çeşitli maddelerin sitopatojenitesi üzerindeki etkilerini araştırdı [9]. Bu amaçla Frankfurt Üniversitesi klinik merkezine başvuran iki hastadan virüs izole ettiler ve izolatları Vero hücre kültürlerine uyguladılar. _{72-96 saat sonra araştırmacılar, SARS-CV %50 virülans inhibisyonunun (EC 50} ) etkinliğini ve Vero hücrelerinin %50'sine zarar verecek ilacın toksik dozunu değerlendirmek için virüsün sitopatojenitesini ve canlı hücrelerin sayısını değerlendirdi. (CC ₅₀ ). 1000 μg/ml konsantrasyondaki ribavirin virüs gelişimini etkilememiştir. Buna karşılık, glisirizin için EC ₅₀ = 300 μg/ml, CC ₅₀ > 20.000 μg/ml ve dolayısıyla terapötik indeks (TI) > 67 idi (konsantrasyon, virüs adezyonu sırasında ve sonrasında korunmuştur) [9]. Benzer bir çalışma Chen ve ark. [10] . 39849 SARS koronavirüs suşunu kullanan araştırmacılar, glisirizinin fRhK-4 hücre kültürlerinde virüsün virülansını ve çoğalmasını etkilemediğini gösterdi. Ancak, Vero E6 hücre hattı üzerinde testin tekrarı glisirizinin EC50 = 100 μg/ml ile SARS-CV virülansını ve replikasyonunu inhibe ettiğini göstermiştir _[ 10 ] . Bu çalışmaların sonuçları COVID-19 açısından umut verici olsa da, Cinatl ve ark. ve her iki çalışmada da araştırmacıların SARS-CoV-2 değil SARS-CV izolatları kullandığı, bu nedenle virüslerin yüksek mutajenitesi göz önüne alındığında, sonuçlar SARS-CoV-2 için geçerli olmayabilir.

Şekil 1
SARS-CoV-2 enfeksiyonunda glisirizinin potansiyel moleküler yolu. ACE2 – anjiyotensin dönüştürücü enzim 2; PKC – protein kinaz C; MAPK – p38 mitojenle aktive olan protein kinaz; NF-κB – nükleer faktör kappa B; NLRP3 - NOD benzeri reseptör ailesi, pirin alanı içeren protein 3 iltihabı; IL'ler – interlökinler; TNF – tümör nekroz faktörü; iNOS – indüklenebilir NO sentaz.

Bu yeni tip koronavirüs, bağlandığı ACE 2 reseptörleri aracılığıyla akciğer hücrelerine nüfuz eder. Yakın zamanda yayınlanan çalışmalarında Chen ve Du, glisirizinin, ΔG = -9 kcal/mol [11] ile ARG-559, GLN-388, ARG-393, ASP-30 bölgelerinde ACE 2'ye bağlanma yeteneğine sahip olduğunu gösterdi . Bu özelliği nedeniyle glisirizin, virüsün hücrelere girişini ve hastalığın gelişimini engelleme potansiyeline sahiptir, ancak bunu doğrulamak için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.

Daha da önemlisi, Zhao ve meslektaşları glisirizinin akciğerleri koruduğunu ve sıçan sepsis modelinde mortaliteyi azalttığını göstermiştir. Sprague-Dawley bireylerine 25 mg/kg glisirizin ve 50 mg/kg'da %60'a kadar doz uygulandıktan sonra hayatta kalma oranları %0'dan %40'a yükseldi. Araştırmacılar, glisirizinin iltihabı ve akciğerlere lökosit göçünü azalttığını, iNOS ekspresyonunu inhibe ettiğini, oksidatif strese karşı hücre hassasiyetini azalttığını ve MAPK-p38 gibi transkripsiyon faktörleri ve nükleer faktör κB aktivitesinin azalması yoluyla apoptozu inhibe ettiğini bulmuşlardır. Bu etki glisirizin dozu ile doğru orantılıydı [12] . Bu, LRE ve glycyrrhizin'in sadece enfeksiyonu önleyemeyeceğini, aynı zamanda seyrini hafifletebileceğini ve mortaliteyi azaltabileceğini gösterir.

Bu çalışmalar, glisirizinik asidin SARS-CoV-2 dahil olmak üzere koronavirüslerin neden olduğu solunum yolu enfeksiyonlarına karşı mücadelede etkili bir ilaç olabileceğini göstermektedir, ancak bunun için insan denemelerine ve en önemlisi SARS-CoV-2 ile denemelere ihtiyaç vardır. glisirizinik asidin etkinliğini değerlendirmek için.

2.1.3. Farmakokinetik

Meyan kökü ekstraktının (LRE) antiviral özellikleri için yukarıda açıklanan ümit verici çalışmalara rağmen, meyan kökü farmakokinetiği nedeniyle tedavide kullanımı sorgulanabilir.

Chen ve ark. 100 mg glycyrrhizin'in sağlıklı deneklere oral olarak uygulanmasından sonra, deneklerin kanında tespit edilmediğini, ayrıca 200 mg glycyrrhizin'in intravenöz uygulamasının 80 μg / ml'lik maksimum serum konsantrasyonuna ulaşıldığını bildirdikleri makalelerinde, ki bu da etkin dozdan daha azdır [10] . Yazarlara göre bu, glisirizinik asidin bağırsak bakterileri tarafından glisiretinik aside metabolizması ve glisirizinin safra ve idrarda hızlı atılımı ile ilişkili olabilir. Bununla birlikte, glisiretinik asidin de antiviral özelliklere sahip olduğunu ve konsantrasyonunun ölçülmediğini belirtmekte fayda var [9] . Bu nedenle, Chen ve ark. meyan kökü tedavisinin etkinliğini sorgulamıştır [10] .

Jiang ve ark. balda diğerlerinin yanı sıra bulunan karbonhidratlardan nasıl etkilendiğini belirlemek için fare modellerinde glisirizinin farmakokinetiğini araştırdı. Glisirizin konsantrasyonu 638 μg/ml olan 30 ± 2 g su kütlesine sahip 8 Kunming faresine uygulandıktan sonra, maksimum plazma konsantrasyonu 143.81 ± 19.34 μg/ml olmuştur ve 45 ± 25.20 dakika içinde elde edilmiştir [13 ] .

Yukarıda belirtilen verilerle ilgili olarak, 100 μg/ml'lik maksimum kan glisirizin konsantrasyonu elde etmek için yaklaşık 15 mg/kg glisirizin uygulanması gerektiği görülmektedir. Bu bilgilerden yola çıkarak, 70 kg ağırlığındaki bir erkek tarafından 1.05 g glisirizinin oral tüketiminin geçici olarak terapötik konsantrasyona ulaşmasını sağlayacağı varsayılabilir. Bu doz, minimum %4 oranında glisirizinik asit içermesi gereken 26.25 g bitkisel ham maddeye karşılık gelmektedir. Ancak bu doz, Avrupa Komisyonu tarafından tavsiye edilen günlük ortalama alımı aşıyor, ulaşılması imkansız veya tehlikeli görünmüyor. 2.2. Pelargonium sidoides

2.2.1. Genel bilgi

Pelargonium sidoides, Güney Afrika ve Lesotho dağlık bölgelerinde yaygın olarak bulunan Geraniaceae familyasının çok yıllık bir bitkisidir ve genellikle Afrika sardunyası olarak adlandırılır [14] . Pelargonium sidoides, yüzyıllardır Afrika'nın yerli sakinleri tarafından ishal, gastrit, soğuk algınlığı, üst solunum yolu enfeksiyonları, cilt enfeksiyonları ve tüberküloz gibi her türlü duruma çare olarak kullanılmıştır. Afrika sardunyası, tüberküloza karşı etkinliği nedeniyle tuhaf bir şekilde 19. yüzyılın sonunda Avrupa'ya getirildi. Afrika sardunya kökü ekstraktı ile ilerlemiş tüberkülozu tedavi ettiği kanıtlanmış vakaların açıklanmasından sonra, bu ajan deneysel bir tüberküloz tedavisi olarak Avrupa'da geniş çapta tanıtıldı [14] . P. sidoides'in ham maddesi taze veya kurutulmuş köklerden yapılır.[14] . P. sidoides şu aktif maddeleri içerir: antosiyaninler, kumarinler, gallik asit türevleri, flavonoidler, tanenler, fenoller ve hidroksisinamik asit türevleri [14] .

2.2.2. Pelargonium sidoides kök ekstraktının antiviral özellikleri

P. sidoides kök ekstraktının tam farmakodinamiği bilinmemekle birlikte, bilim adamları Afrika sardunyalarının antibakteriyel, antiparazitik ve antiviral etkilerine ışık tutabilmiştir. Kolodziej ve ark. in vitro çalışmalarında, P. sidoides kök ekstraktının (EPs 7630) makrofajlar üzerindeki etkisini araştırdılar [15] , [16] . Araştırmacılar, Eps 7630'un interferonlar, tümör nekroz faktörü (TNF), IL-1, IL-18 ve nitrik oksit (NO) üretimini indüklediğini, diğerlerinin yanı sıra NLRP3 enflamatuar aktivasyonunun bir sonucu olabileceğini ortaya çıkardı [16 ]. Ayrıca EP'ler 7630, makrofajların aktivasyonunu ve mobilizasyonunu artırma eğilimindedir. Bu çalışmanın bazı sınırlamaları vardır, örneğin yalnızca murin makrofajları kullanılmıştır ve SARS-CoV-2'ye değil ensefalomyokardit virüsüne veya hatta başka bir koronavirüs türüne maruz kalmışlardır. Bununla birlikte, bu veriler, Afrika sardunya kökü ekstraktının, insanlarda patojen tanınmasını ve yok edilmesini kolaylaştıran spesifik olmayan bir bağışıklık tepkisini indükleyebileceğini ve bu etkileri doğrulamak için daha ileri çalışmalara ihtiyaç olduğunu göstermektedir [15], [ 16 ] . İlginç bir şekilde Leishmania ile enfekte RAW 264.7 hücreleriyle yapılan çalışmalar, IL-1, IL-12, IL-18, TNF, IFN-a, IFN-y ve iNOS ekspresyonunun enfekte olmayan hücrelerde minimum düzeyde ve enfekte hücrelerde anlamlı olduğunu gösterdi. [16]. Bu, EP'ler 7630'un sitokinlerin genel değil, patojen yönelimli yukarı regülasyonunu teşvik ettiğini gösterir. Daha da önemlisi, şiddetli COVID-19 vakaları çoğunlukla aşırı immünolojik yanıtın bir sonucudur, bu nedenle, örneğin NLRP3'ün daha fazla uyarılması, hastaların durumunun kötüleşmesine yol açabilir. Bununla birlikte, NLRP3 aracılı enflamasyon, çeşitli enflamasyon indükleyicilerinin salınmasını sınırlayan nekroza değil apoptoza yol açtığı için daha kontrollüdür. Bu nedenle, bu enflamatuar süreç büyük olasılıkla daha patojen odaklıdır ve kendi kendini sınırlar, bu nedenle hastalar için çok faydalıdır. Bununla birlikte, görünüşe göre P. sidoideskök özleri, aşırı inflamatuar yanıt durumlarında değil, COVID-19'un erken aşamasında en etkili olacaktır. Bu yönün klinik çalışmalarda daha fazla araştırılması gerekmektedir. Glisirizinin enfekte olmuş hücreler üzerindeki etkisinin olası moleküler yolu, İncir. 2Ancak, bu süreçte birçok bilinmeyen vardır ve tam olarak anlaşılması için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.

İncir. 2
SARS-CoV-2 enfeksiyonunda P. sidoides kök ekstraktının potansiyel moleküler yolu. NF-κB – nükleer faktör kappa B; NLRP3 - NOD benzeri reseptör ailesi, pirin alanı içeren protein 3 iltihabı; IL'ler – interlökinler; TNF – tümör nekroz faktörü; iNOS – indüklenebilir NO sentaz.

Schapowal ve diğerleri tarafından yapılan bir meta-analiz. P. sidoides kök ekstresi (EPs 7630) kullandıktan sonra soğuk algınlığı olan hastaların refahında önemli bir iyileşme gösterdi. Hastalar, plaseboya kıyasla 5 ve 10 günlük tedaviden sonra semptomlarda önemli ölçüde azalma gösterdi ve rölatif risk şu şekildeydi: RR ₍₅₎ = 1.73 (p < 0.05), RR ₍₁₀₎ = 1.06 (p < 0.05). Ayrıca, tam semptom remisyonu için göreceli risk sırasıyla 5 ve 10 gün sonra RR = 2.52 (p < 0.05), RR = 2.13 (p < 0.05) idi [17 ] . Timmer ve meslektaşları tarafından benzer sonuçlar elde edildi ve Kolodziej ve Kiderlen, EP'ler 7630'un, tüberküloz veya stafilokok dahil olmak üzere in vitro bakteri üremesi üzerinde inhibe edici etkilerini gösterdi [ 16] , [18]. Yukarıda belirtilen umut verici sonuçlar, Michaelis ve ark. EP'ler 7630'un üst solunum yolu enfeksiyonlarına en sık neden olan virüslerin virülansı ve replikasyonu üzerindeki etkisini incelemek [19] . Pelargonium sidoides kök ekstresi, virüs sayısını ve konakçı hücrelere nüfuz etme yeteneklerini önemli ölçüde azaltmıştır. Bununla birlikte EP'ler 7630, yalnızca zarflı virüsleri, yani HCo-229E koronavirüs, H1N1, H3N2, RSV, parainfluenza 3 ve coxsackie A9 virüslerini etkiledi. HCo-229E söz konusu olduğunda, %50 virülans inhibisyon oranı, 44,50 ± 15,84 μg/ml konsantrasyonda ve terapötik indeks (TI) > 2,3 ile elde edildi (EPs 7630'un düşük toksisitesi nedeniyle, araştırmacılar toksik dozu belirlemek) [19]. Bu klinik ve in vitro çalışmaların sonuçlarına göre, EPs 7630 etkili bir antiviral ajandır.

2.2.3. Farmakokinetik

Yukarıda açıklanan çalışmalar, Afrika sardunya kökü ekstraktının dozajını belirlemeyi zorlaştıran hücre hatları üzerinde gerçekleştirilmiştir, ancak klinik çalışmalarda günde 30 damla sulu çözelti veya 20 mg'lık bir tablet kullanılmıştır ve elde edilmesine izin verdiği görülmektedir. etkili plazma konsantrasyonları [17] . Ne yazık ki P. sidoides'in farmakokinetiğini açıklayan hiçbir araştırma yoktur.

2.2.4. Potansiyel bir COVID-19 tedavisi olarak Pelargonium sidoides kök ekstresi

Daha önce de bahsedildiği gibi, makrofajların aktivasyonunu ve mobilizasyonunu arttırdığı ve interferon, TNF, IL-1, IL-18 ve nitrik oksit (NO ), özellikle enfekte hücrelerde. Ayrıca, P. sidoides kök ekstresi klinik ve in vitro çalışmalarda diğerlerinin yanı sıra HCo-229E koronavirüsüne karşı antiviral özellikler göstermektedir [15] , [16] , [17]. SARS-CoV-2'nin aynı zamanda bir RNA sarmalına sahip olan ve bir lipid zarf oluşturan diğer koronavirüslere yüksek benzerliği göz önüne alındığında, EP 7630'un SARS-CoV-2 üzerinde etki edeceğinden ve virülansını azaltacağından şüphelenilebilir. Bu virüsün son zamanlarda ortaya çıkışı, bu tarihe kadar bu hipotez için hala sağlam bilimsel kanıtlardan yoksundur [20] . 2.3. COVID-19 tedavisinde geleneksel terapi ile kombinasyon halinde şifalı bitkiler

Geleneksel Çin tıbbı ile batı tıbbının birleşimi üzerine birçok çalışma bulunmaktadır. Ne yazık ki sadece birkaçı randomize kontrollü çalışmadır.

Bunlardan biri, Lianhuaqingwen (LH) kapsüllerinin (Radix et Rhizoma Glycyrrhizae, Gancao içeren ) etkinliğini ve güvenliğini araştıran çok merkezli, prospektif, randomize, kontrollü bir çalışmadır [21] . Hu ve ark. çalışmaya 284 semptomatik COVID-19 hastası (her biri tedavi ve kontrol grubunda 142) dahil edildi ve tek başına geleneksel tedavi (kontrol grubu) veya LH kapsülleri ile kombinasyon halinde geleneksel tedavi, 14 gün boyunca günde üç kez dört kapsül (tedavi grubu) aldı [ 21] . Tanı ve konvansiyonel tedavi , Yeni Coronarvirüs Pnömonisinin Tanı ve Tedavi Protokolünün 4. versiyonuna dayanıyordu .

Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında tedavi grubunda iyileşme oranı, bilgisayarlı toraks tomografisi bulgularındaki iyileşme oranı ve klinik iyileşme oranı %91,5'e karşı %82,4 (p = 0,022), %83,8'e karşı %64,1 (p < 0,001) ve 78,9'dur. sırasıyla %66.2'ye karşılık %66.2 (p = 0.017) [21] . Semptomların iyileşmesine kadar geçen medyan süre, tedavi grubunda belirgin şekilde daha kısaydı (medyan: 7'ye karşı 10 gün, p < 0.001). Ateşin (2'ye karşı 3 gün), yorgunluğun (3'e karşı 6 gün) ve öksürüğün (7'ye karşı 10 gün) iyileşme süresi de tedavi grubunda önemli ölçüde daha kısaydı (tümü p < 0.001) [21 ] . Şiddetli vakalara dönüşme oranı ve viral test bulguları her iki grupta da benzerdi (her ikisi de p > 0.05) [21] .

Bununla birlikte, bu çalışmanın, yazarların plasebo kontrollü çalışmanın etik olmayacağı ve "zamanında tedavi gerektiren salgının aciliyeti nedeniyle" açıkladığı, körleme şansı ve plasebo grubu olmaması gibi bazı sınırlamaları vardır [21] . . Çalışmanın süresi çok kısaydı, diğerlerinin yanı sıra ölüm oranlarının olmamasıyla ilişkilendirildi, bu nedenle daha uzun bir takip süresi bulguların anlamlılığını önemli ölçüde artıracaktır.

Bir başka ilginç çalışma da Duan ve ark. [22] . Bu randomize çalışmada araştırmacılar, Jinhua qinggan granüllerinin standart tedavi ile kombinasyon halinde COVID-19 pnömoni tedavisinde (Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) etkinliğini değerlendirdiler [22] . COVID-19'lu 123 hasta, tedavi grubuna (Jinhua Qinggan granülleri artı geleneksel tedavi: antibiyotikler, antiviral ilaçlar ve mekanik ventilasyon) - 82 ve kontrol grubu (yalnızca geleneksel tedavi) - 41'e randomize edildi.

Kontrollerle karşılaştırıldığında, ginggan grubundaki hastalarda ateş insidansı %80,3'e karşı %53,1, öksürük %66,1'e karşı %42,9, yorgunluk %77,6'ya karşı %53,8, p < 0,05 tüm parametreler için [22] . Hamilton anksiyete ölçeğindeki tedavi grubu puanı da tedavi grubunda daha düşüktü. Vücut ağrısı, baş ağrısı, mide bulantısı ve kusma, burun akıntısı, boğaz ağrısı, boğaz kaşıntısının iyileşmesinde kombinasyon tedavisinin üstünlüğü kaydedilmemiştir. Son olarak ve en önemlisi, hastaneye yatış oranı diş eti grubunda kontrol grubuna göre anlamlı olarak daha düşüktü (%10,98'e karşı %24,39) [22] .

Bu sonuçlar, Jinhua qinggan granüllerinin bazı COVID-19 pnömoni semptomlarını hafifletebileceğini ve hastaların psikolojik konforunu iyileştirebileceğini düşündürmektedir. Ancak, yan etki oranının deney grubunda kontrol grubuna göre daha yüksek olduğunu belirtmekte fayda vardır (%32,93'e karşı %0) [22] . Bu nedenle, ginggan granülleri ile diğer ilaçlar arasında, bildirilen yan etkilerin çoğundan değilse de bir kısmından sorumlu olan bazı etkileşimler olduğu varsayılabilir. Çalışma süresinin kısa olması (5 gün), hasta grubunun az olması ve mortalite oranlarının olmaması çalışmanın dezavantajıdır. Hastalık süresi göz önüne alındığında, COVID-19 daha uzun bir takip süresi gerektirir.

DSÖ'ye göre, COVID-19 için spesifik bir antiviral tedavi yoktur, bu nedenle etkili bir anti-COVID-19 tedavisi (TCM'ler dahil) arayan Xiao ve diğerleri tarafından yapılan çalışma gibi yeni denemeler hala kaydedilmektedir. [23] .

Bu perspektif, açık etiketli, randomize, kontrollü çalışma, geleneksel Çin tıbbının COVID-19 enfeksiyonunu tedavi etmek için güvenli ve etkili olup olmadığını değerlendirir. Tahmini kayıt 150'dir, 1:1 oranında randomize edilecektir. Deney grubu, 14 gün boyunca konvansiyonel ilaçlar (oksijen tedavisi, antiviral tedavi - aerosol inhalasyonu yoluyla alfa interferon ve lopinavir/ritonavir) ve TCM granülleri ile tedavi edilecektir. Kontrol grubu – sadece geleneksel ilaçlarla (14 gün boyunca). TCM'lerin türleri hakkında belirli bir bilgi yoktur. ARDS gelişiminin insidans oranı, ateşin düzelme oranı ve akciğer hasarının iyileşme süresi (göğüs radyografik kanıtları) ve daha fazlası ölçülecektir. Şu anda, deneme hala işe alım aşamasındadır ve tahmini birincil tamamlanma tarihi 22 Ocak 2021'dir, ancak yine de yayınlanan bir veri yoktur.

Git: 3. Tartışma

Bitkisel ürünler yüzyıllardır çeşitli enfeksiyonların tedavisinde başarıyla kullanılmış ve günümüzde de kullanılmaktadır. Üstelik bitkisel ürünler 21. yüzyılda giderek daha popüler hale geliyor. Ne yazık ki, birçok durumda, belirli bir bitkinin etkinliğini kanıtlamak veya farmakodinamiğini tasvir etmek için yeterli bilimsel veri yoktur, ancak yukarıda açıklandığı gibi preklinik çalışmalar genellikle umut vericidir. Glycyrrhiza glabra ve Pelargonium sidoides, Glycyrrhiza glabra ve Pelargonium sidoides karışımlarının tüm bitkisel ürünleri ve bileşenleri arasında en iyi araştırılanlardır ve etkili görünmektedir, ancak diğer bitkiler veya maddeler de analiz edilmiştir. Wang ve ark. Ephedra bitkisi de dahil olmak üzere 12 bitkiden oluşan geleneksel bir TCM bitkisel karışımı olan maxingshigan-Yinqiaosan'ın antiviral etkisini araştırdı [24]. Maxingshigan–Yinqiaosan (günde dört kez 200 ml), H1N1 ile enfekte hastalarda ateşin düzelme süresini %37 (%95 GA, %23–49), oseltamivir (75 mg günde iki kez) %34 (%95 GA 20–) azalttı %46) ve oseltamivir artı maxingshigan–yinqiaosan %47 (%95 GA %35–56). Bu nedenle, maxingshigan-yinqiaosan, etkinliğini arttırdığı ve muhtemelen antiviral özelliklere sahip olduğu için oseltamivir ile birlikte kullanılabilir [24] . Ancak Tan ve ark. oseltamivir'in SARS koronavirüsüne karşı etkili olmadığını göstermektedir [25] . Mantani ve ark. TCM'de yaygın olarak kullanılan, diğerlerinin yanı sıra Ephedra bitkisinde bol miktarda bulunan bir flavonoid olan kateşinin antiviral özelliklerini inceledi [26]. Araştırmacılar in vitro kateşinin H1N1 virüs replikasyonunu doza bağımlı bir şekilde inhibe ettiğini keşfettiler [24] . Ancak Cai ve ark. yeşil çay yapraklarında bulunan kateşinin farmakokinetiğini araştırmış, bunun çok düşük biyoyararlanımı olduğunu, bu nedenle etkili bir antiviral tedavi olarak kullanılmasının olası olmadığını ve Wang ve ark. farklı bir aktif bileşiğin etkisi olabilir [27] .

Yukarıda açıklandığı gibi Glicyrrhiza glabra ve Pelargonium sidoides, araştırılan diğer birçok bitkinin aksine SARS-CoV-2 enfeksiyonunun tedavisinde etkili olma potansiyeline sahiptir. Ancak bazı bitkisel ürünler COVID-19 tedavisinde tek başına ana bileşen olarak yeterli olmasa da tamamlayıcı tedavi olarak başarılı bir şekilde sunulabilir. Bu amaçla, geleneksel bir tedaviye eklendiklerinde COVID-19 semptomlarının iyileşme süresini kısalttıkları için jinhua qinggan granülleri ve LH kapsülleri kullanılabilir. Ayrıca, jinhua qinggan granülleri hastaneye yatış oranını önemli ölçüde azaltır. COVID-19'un tedavisi halk sağlığı hizmetleri için büyük bir yüktür, bu nedenle uygun bir tamamlayıcı tedavi ile elde edilen daha hızlı iyileşme, hastaneleri ve ayakta tedavi kliniklerini rahatlatmaya yardımcı olacağından çok önemlidir. Üstelik,

Özellikle SARS-CoV-2 açısından, diğer bitkilerin veya bitki karışımlarının antiviral özelliklere sahip olabileceğine veya sahip olamayacağına dair hiçbir kanıt yoktur. Ancak, Li ve ark. geleneksel Çin bitkisel tıbbının COVID-19 tedavisindeki rolünü analiz edecekleri ve açıklayacakları bir meta-analiz kaydettiler [28] . Bu ümit verici çalışma, umarız sağlık çalışanlarının büyük bir değere sahip olan pandemi sırasında toplanan klinik deneyimlerini özetleyecektir.

Git: 4. Sonuçlar

Tüm bitkisel ürünler arasında Glicyrrhiza glabra ve Pelargonium sidoides, hem klinik hem de in vitro çalışmalarda doğrulanmış antiviral özelliklere sahip geniş çapta araştırılan bitkilerdir. Önemli olan, her iki bitkinin de belirli koronavirüs suşlarının replikasyonunu ve sitopatojenitesini azaltmasıdır ve farmakokinetiği dikkate alındığında, oral uygulamadan sonra terapötik plazma konsantrasyonlarına ulaşmak mümkündür. Standart tedavilerle karşılaştırıldığında, Glycyrrhiza glabra bazlı ürünlerin standart tedavilerle kombinasyonları, COVID-19 hastalarında hastaneye yatış oranını ve ateş, titreme, öksürük vb. semptomların ortaya çıkışını önemli ölçüde azaltır. Görünüşe göre P. sidoideskök özleri, aşırı inflamatuar yanıt durumlarında değil, COVID-19'un erken aşamasında en etkili olacaktır. Geleneksel tıpta kullanılan diğer bitkisel ürünlerle ilgili olarak, çoğu durumda bunların COVID-19 tedavisinde etkili olduğuna dair kanıt bulunmazken, umut verici in vitro çalışmalara rağmen bazılarının klinik bir değere sahip olma olasılığı çok düşüktür. Örneğin, düşük biyoyararlanımı nedeniyle terapötik bir kateşin konsantrasyonu elde etmek pek mümkün değildir. Maxingshigan-yinqiaosan söz konusu olduğunda, yalnızca SARS koronavirüslerine karşı nafile olan oseltamivir'in etkinliğini artırdığından, COVID-19 tedavisinde yardımcı olması pek olası değildir. Bununla birlikte, lianhuaqingwen kapsülleri ve jinhua qinggan granülleri gibi bazı bitkisel karışımların, geleneksel COVID-19 tedavisinde tamamlayıcı bir tedavi olarak yararlı olduğu görülmektedir. Bu bitkisel karışımlar hastaneye yatış oranlarını, semptomların iyileşme süresini azaltır ve hastanın psikolojik konforunu artırır. Bununla birlikte, şifalı bitkiler diğer ilaçlarla etkileşime girerek yan etkilerin ortaya çıkma riskini önemli ölçüde artırabilir. Bu nedenle, meyan kökü özütü ve P. sidoides kökü özütü potansiyel olarak COVID-19'un önlenmesinde ve tedavisinde kullanılabilirken, lianhuaqingwen kapsülleri ve jinhua qinggan granülleri geleneksel tedaviye tamamlayıcı bir terapi olarak yararlı olabilir.

Git: CRediT yazarlık katkı beyanı

Aleksander Gajewski: Kavramsallaştırma, Yazma - orijinal taslak, Metodoloji. Anna Kośmider: Yazma - orijinal taslak, literatür taraması. Aleksandra Nowacka: Yazma - orijinal taslak, literatür taraması. Oskar Puk: Yazma – orijinal taslak. Michał Wiciński: Proje yönetimi, Doğrulama.

Git: Referanslar

1. Dünya Sağlık Örgütü, DSÖ Koronavirüs Hastalığı (COVID-19) Panosu, 21 Haziran 2021. 〈https://covid19.who.int/〉 .
2. Hu Y., Sun J., Dai Z., Deng H., Li X., Huang Q., Xu Y. Corona virüsü hastalığının prevalansı ve şiddeti 2019 (COVID-19): sistematik bir inceleme ve meta-analiz . J. Clin. Virol. 2020; 127 doi: 10.1016/j.jcv.2020.104371. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
3. Yang Y., Islam MS, Wang J., Li Y., Chen X. 2019-new coronavirus (SARS-CoV-2) ile enfekte hastaların tedavisinde geleneksel Çin tıbbı: bir inceleme ve bakış açısı. Int. J. Biol. bilim 2020; 16 (10):1708–1717. doi: 10.7150/ijbs.45538. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
4. Ang L., Lee HW, Kim A., Lee JA, Zhang J., Lee MS Bitkisel ilaç tedavisi için COVID-19 teşhisi konan çocukların: kılavuzların gözden geçirilmesi. Tamamlayıcı. orada. klinik Pratik 2020; 39 doi: 10.1016/j.ctcp.2020.101174. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
5. Ang Lin ve ark. COVID-19'u tedavi etmek için bitkisel ilaç ve örüntü tanımlama: kılavuzların hızlı bir incelemesi. bütünleşik Med. Res. 2020; cilt 9 (2) doi: 10.1016/j.imr.2020.100407. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
6. Luo Hui ve ark. Çin tıbbı, korona virüs hastalığı 2019'un (COVID-19) önlenmesi için kullanılabilir mi? Tarihsel klasiklerin, araştırma kanıtlarının ve mevcut önleme programlarının gözden geçirilmesi. Çene. J. Entegre Med. 2020; cilt 26 (4):243–250. doi: 10.1007/s11655-020-3192-6. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
7. Lim TK Yenilebilir Tıbbi ve Tıbbi Olmayan Bitkiler. 2016. Glycyrrhiza glabra; sayfa 354–457. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Matławska, I. Farmakognozja: Farmacji, Poznań, Wydawnictwo Naukowe Uniwersytetu Medycznego im. Karola Marcinkowskiego, 2008, ISBN: 978-83-7597-004-3.
9. Cinatl J., Morgenstern B., Bauer G., Chandra P., Rabenau H., Doerr H. Glycyrrhizin, a active component of meyankökü kökleri ve replikasyon SARS ile ilişkili koronavirüs. Lancet. 2003; 361 (9374):2045–2046. doi: 10.1016/s0140-6736(03)13615-x. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
10. Chen F. SARS koronavirüsünün 10 klinik izolatının seçilen antiviral bileşiklere in vitro duyarlılığı. J. Clin. Virol. 2004 doi: 10.1016/s1386-6532(04)00055-1. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
11. Chen H., Du Q. SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Enfeksiyonunu önlemeye yönelik potansiyel doğal bileşikler. 2020 doi: 10.20944/preprints202001.0358.v3. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Zhao H., Zhao M., Wang Y., Li F., Zhang Z. Glisirizik Asit, sıçanlarda sepsis kaynaklı akut akciğer hasarını ve ölümleri önler. J. Histochem. Sitokimya. 2015; 64 (2):125–137. doi: 10.1369/0022155415610168. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
13. Jiang B., Qu H., Kong H., Zhang Y., Liu S., Cheng J., Zhao Y. Tatlı gıdaların icELISA ile glisirizik asidin farmakokinetiği üzerindeki etkileri. moleküller. 2017; 22 (3):498. doi: 10.3390/moleküller22030498. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Moyo M., Staden JV Pelargonium sidoides DC'nin tıbbi özellikleri ve korunması. J. Ethnopharmacol. 2014; 152 (2):243–255. doi: 10.1016/j.jep.2014.01.009. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
15. Kolodziej H., Kayser O., Radtke OA, Kiderlen AF, Koch E. Pelargonium sidoides ekstrelerinin ve bileşenlerinin farmakolojik profili. Bitki ilacı. 2003; 10 :18–24. doi: 10.1078/1433-187x-00307. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
16. Kolodziej H., Kiderlen AF Pelargonium reniforme, Pelargonium sidoides ve ilgili bitkisel ilaç preparasyonu EPs® 7630'un antibakteriyel ve immünomodülatör aktivitelerinin in vitro değerlendirmesi. Phytomedicine. 2007; 14 :18–26. doi: 10.1016/j.phymed.2006.11.020. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
17. Schapowal A., Dobos G., Cramer H., Ong KC, Adler M., Zimmermann A., Lehmacher W. Soğuk algınlığı belirti ve semptomlarının EPs 7630 kullanılarak tedavisi – bir meta-analizin sonuçları. Heliyon. 2019; 5 (11) doi: 10.1016/j.heliyon.2019.e02904. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
18. Timmer A., Günther J., Motschall E., Rücker G., Antes G., Kern WV Pelargonium sidoides, akut solunum yolu enfeksiyonlarını tedavi etmek için özütler. Cochrane Veritabanı Sist. Rev. 2013 doi: 10.1002/14651858.cd006323.pub3. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
19. Michaelis M., Doerr HW, Cinatl J. Pelargonium sidoides'ten bitkisel bir ilaç preparatı olan EPs® 7630'un geniş bir solunum yolu virüsleri panelinin replikasyonu üzerindeki etkisinin araştırılması. Bitki ilacı. 2011; 18 (5):384–386. doi: 10.1016/j.phymed.2010.09.008. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
20. Lai C.-C., Shih T.-P., Ko W.-C., Tang H.-J., Hsueh P.-R. Şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs 2 (SARS-CoV-2) ve koronavirüs hastalığı-2019 (COVID-19): salgın ve zorluklar. Int. J. Antimikrob. Ajanlar. 2020; 55 (3) doi: 10.1016/j.ijantimicag.2020.105924. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
21. Hu K., Guan W., Bi W., Zhang W., Li L., Zhang B. Yenilenmiş bir Çin bitkisi olan Lianhuaqingwen Kapsüllerinin koronavirüs hastalığı olan hastalarda etkinliği ve güvenliği 2019: çok merkezli, prospektif, randomize kontrollü deneme Bitki ilacı. 2020 doi: 10.1016/j.phymed.2020.153242. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
22. Duan C., Xia WG, Zheng CJ, Sun GB, Li ZL, Li QL Clinical gözlem on Jinhua qinggan granülleri için COVID-19. J. Gelenek. Çene. Med. 2020 [ Google Akademik ]
23. Xiao-he Xiao, Geleneksel Çin ilaçlarının (TCM'ler) COVID-19 enfeksiyonu üzerinde tedavisi ve önlenmesi, NCT04251871.
24. Wang C., Cao B., Liu Q., Zou Z., Liang Z., Gu L., Jiang L. Oseltamivir, H1N1 influenza tedavisinde Çin geleneksel tedavisi Maxingshigan-Yinqiaosan ile karşılaştırıldı. Ann. Stajyer. Med. 2011; 155 (4):217. doi: 10.7326/0003-4819-155-4-201108160-00005. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
25. Tan E., Ooi E., Lin C., Tan H., Ling A., Lim B., Stanton L. Klinik olarak onaylanmış antiviral ilaçlarla in vitro SARS koronavirüs enfeksiyonunun inhibisyonu. ortaya. bulaştırmak. Dis. 2004; 10 (4):581–586. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
26. Mantani N., Imanishi N., Kawamata H., Terasawa K., Ochiai H. (+)-catechin'in MDCK hücrelerinde influenza A/PR/8 virüsünün büyümesi üzerinde inhibe edici etkisi. Bitki Med. 2001; 67 (3):240–243. doi: 10.1055/s-2001-12009. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
27. Cai Z., Li X., Liang J., Xiang L., Wang K., Shi Y., Liang Y. Çay kateşinlerinin biyoyararlanımı ve iyileştirilmesi. moleküller. 2018; 23 (9):2346. doi: 10.3390/moleküller23092346. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
28. Li Y., Liu X., Guo L., Li J., Zhong D., Zhang Y., Jin R. Yeni koronavirüs (COVID-19) pnömonisini tedavi etmek için geleneksel Çin bitkisel ilacı: sistematik bir inceleme protokolü ve meta-analiz. Sist. Rev. 2020; 9 (1) doi: 10.1186/s13643-020-01343-4. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]

**igokcek** · 19 December 2012, 09:26

UMKALOABO ile Sinüzit, Pseudokrupp Öksürük Balgam Bronşit Zatürre Astım Koah ve Orta Kulak Tedavisi

ZATÜRRE (Pnömoni) Hastalığı, Üşütme, Grip ve Nezlenin Afrika Sardunyası (Umckaloabo) ile Tedavisi

AFRİKA SARDUNYASI İle Larenjit

Afrika Sardunyası Larenjit Tedavisi, Gırtlak Kapağı İltihaplanmasına Afrika Sardunyası,

**igokcek** · 19 December 2012, 09:55

Afrika Sardunyası Larenjit Tedavisi, İksir ile Kalp Damar Tıkanıklığı Tedavisi,

Afrika Sardunyası Faydaları Nedir, Astıma Ne İyi Gelir, Sinüzite Ne İyi Gelir

**igokcek** · 19 December 2012, 10:35

AFRİKA SARDUNYASI İle Bronşit

**igokcek** · 26 December 2012, 18:29

AFRİKA SARDUNYASI İle Sinüzit Ve Klinik Araştırmalar

**igokcek** · 27 December 2012, 10:10

VERTİGO, SİNÜZİT ve BAYILMA HASTALIĞINDAN AFRİKA SARDUNYASI SETİ - O İle KURTULDU

**igokcek** · 12 February 2013, 14:03

AFRİKA SARDUNYASI İle Sinüzit

**igokcek** · 12 February 2013, 14:15

AFRİKA SARDUNYASI İle Sinüzit

**igokcek** · 22 February 2013, 11:18

AFRİKA SARDUNYASI İle Sinüzit

**igokcek** · 25 February 2013, 11:23

AFRİKA SARDUNYASI İle Geniz Akıntısı

Duyuru

Afrika Sardunyasi Forte, Itir, Umkaloabo, Pelargonium sidoides

Afrika Sardunyasi Forte, Itir, Umkaloabo, Pelargonium sidoides

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap