Duyuru

***maturidi*** · 16 July 2012, 16:51

Enginar, Artischocke, Cynara scolymus L.

**igokcek** · 16 July 2012, 17:27

Cynara scolymus L. yaprak ekstraktının sıçanlarda karbon tetraklorür kaynaklı oksidatif stres ve karaciğer hasarı üzerindeki hepatoküratif etkileri

Emine Çolak ,Mehmet Cengiz Üstüner , Neslihan Tekin , Ertuğrul Çolak , Dilek Burukoğlu , İrfan Değirmenci ,ve Hasan Veysi Güneş
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı, Tıp Fakültesi, Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, 26480 Eskişehir, Türkiye ESKİŞEHİR ORHAN GAZİ ÜNİVERSİTESİ
Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır .
Git: Soyut

Cynara scolymus , fenolik asitler ve flavonoidler içeren farmakolojik açıdan önemli bir tıbbi bitkidir. Deneysel çalışmalar C. scolymus'un antioksidan ve hepatoprotektif etkilerini göstermektedir ancak karaciğer hastalıklarının tedavi edici etkileri ile ilgili henüz bir çalışma bulunmamaktadır. Bu çalışmada, C. scolymus yaprak ekstraktının sıçanlarda karbon tetraklorür (CCl ₄ ) ile indüklenen oksidatif stres ve karaciğer hasarı üzerine hepatoküratif etkileri serum karaciğer enzim düzeyleri, oksidatif stres göstergesi (malondialdehit-MDA), endojen antioksidanlar, DNA ile araştırıldı. parçalanma, p53, kaspaz 3 ve histopatoloji. Hayvanlar altı gruba ayrıldı: kontrol, zeytinyağı, CCl ₄ , C. scolymusyaprak özü, kurtarma ve iyileştirici. CCl _{4 , CCl}₄ , iyileşme ve iyileştirici gruplara günde iki kez 0.2 mL/kg dozunda uygulandı . Cynara scolymus özütü, küratif gruba CCl ₄ uygulamasından sonra 2 hafta süreyle 1.5 g/kg dozunda oral yoldan verildi . Küratif grupta serum alanin-aminotransferaz (ALT) ve aspartat-aminotransferaz (AST) düzeylerinde anlamlı düşüş tespit edildi. MDA düzeyleri küratif grupta anlamlı olarak daha düşüktü. Küratif grupta süperoksit dismutaz (SOD) ve katalaz (CAT) aktivitesinde önemli artış tespit edildi. İyileştirici grupta C. scolymusyaprak ekstresi uygulaması karaciğer dokularının % DNA fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyelerinin normal aralığa yakın olmasına neden olmuştur. Sonuçlarımız, C. scolymus yaprak ekstraktının, lipid peroksidasyonunu azaltarak, etkilenen antioksidan sistemleri normal aralığa doğru sağlayarak CCl _4'ün neden olduğu oksidatif stres ve karaciğer hasarı üzerinde hepatoküratif etkilere sahip olduğunu göstermiştir . Ayrıca CCl _4'ün neden olduğu hepatotoksisite üzerindeki DNA hasarının onarılmasına izin veren düzenleyici mekanizmanın yolu üzerinde de olumlu etkileri olmuştur.

Anahtar Kelimeler: Cynara scolymus , CCl ₄ , Hepatoküratif etki, DNA fragmantasyonu, p53, Kaspaz 3
Git: Arka fon

Vücuttaki en büyük ve metabolik olarak en karmaşık organ olan karaciğer, depolama ve biyosentez metabolizmasında yer alır (Hodgson ve Levi 2004 ). Detoksifikasyon ve metabolik homeostazdan da sorumludur (Shin ve ark. 2013 ). Karaciğer metabolik olarak aktif olduğundan ve biyotransformasyonun ve metabolizmanın temel organı olduğundan, normal metabolizma ve detoksifikasyon reaksiyonlarının yan ürünleri olarak karaciğer hücrelerinde üretilen reaktif oksijen türlerinden (ROS) etkilenir. Buna göre karaciğer, hücreleri ROS'a karşı korumak için kapsamlı antioksidan mekanizmalara sahiptir (Ellah 2011 ).). Bununla birlikte, endojen antioksidan mekanizmalardaki dengesizlikler ile birlikte sürekli ve aşırı ROS üretimi oksidatif strese neden olur. Bu stres lipidler, proteinler ve DNA dahil olmak üzere çeşitli biyomoleküllere zarar verir ve zamanla karaciğer hasarına katkıda bulunur. Bu yaralanma genellikle akut ve kronik olarak ayrılır. Kronik karaciğer hastalığı, steatozdan kronik hepatit, fibroz, siroz ve hepatoselüler karsinoma kadar sürekli bir oluşuma sahiptir (Coballase-Urrutia ve ark. 2011 ; Loguercio ve Federico 2003 ; Vitaglione ve ark. 2005 ). Sürekli siroz gelişiminin bir sonucu olarak, karaciğerin karaciğer fonksiyonları inhibe edilir.

Cynara scolymus L. bitkisi (küre enginar), Asteraceae familyasına ait farmakolojik açıdan önemli bir tıbbi bitkidir (Lattanzio ve ark. 2009 ; Mehmetçik ve ark. 2008 ); Akdeniz ülkelerinde yaygın olarak yetiştirilmektedir (Wang ve ark. 2003 ). Enginar yaprakları fenolik asitler, seskiterpen laktonlar, flavonoidler, fitosteroller (taraxasterol), şekerler, inülin, enzimler ve uçucu yağlar içerir (Lattanzio ve diğerleri 2009 ; Wang ve diğerleri 2003 ; ESCOP 2003 )). Yaprağın farmakolojik olarak temel bileşenleri fenolik asitler ve flavonoidlerdir. Fenolik asit türevleri, 3-kafeoilkinik asit, sinarin ve kafeik asitler gibi kafeoilkinik asitleri içerir. Yaprağın flavonoid bileşikleri, luteolin-7-β-D-glukozit, luteolin-4-β-D-glukozit ve luteolin-7-β-rutinosittir (Lattanzio ve diğerleri , 2009 ; ESCOP 2003 ).

C. scolymus'un yaprağı yüzyıllardır antimikrobiyal, antiinflamatuar, kolleretik, hepatoprotektif, kolesterol düşürücü, lipid düşürücü ve glikoz düşürücü olarak Türkiye, Güney Avrupa ve Akdeniz ülkelerinde kullanılmaktadır (Lattanzio ve ark. 2009 ; Jimenez-Escrig ve diğerleri 2003 ). C. scolymus yapraklarının uygulamalarını incelemek için çeşitli in vivo ve in vitro çalışmalar yapılmıştır . Bu çalışmalar sonucunda -geleneksel kullanıma ek olarak- anti-kanserojen, anti-apoptotik ve anti-HIV özellikleri de belirlenmiştir (Miccadei ve ark. 2008 ; Robinson ve ark. 1996 ; Yang ve ark. 2001 ).). C. scolymus'un yaprağının yaygın olarak kullanılmasının nedeni, yapısındaki çeşitli bileşiklerin katkı ve sinerjistik etkilerinden kaynaklandığı belirtilmektedir.

Karaciğer patolojisi ve C. scolymus yaprağı ekstresi ile ilgili birkaç çalışma yapılmıştır . Gebhardt ( 1997 ) , birincil kültürlenmiş sıçan hepatositlerinde C. scolymus yaprak ekstraktının antioksidan ve hepatoprotektif etkilerini göstermiştir (Gebhardt 1997 ). Ek olarak, insan lökosit kültürleri ile yapılan bir çalışmada, kafeik asit-, klorojenik asit-, sinarin- ve lutein içeren C. scolymus yaprak ekstraktlarının antioksidan etkileri olduğu, C. scolymus yaprak ekstraktının ise antioksidan etkilerini ifade ettiği bildirilmiştir. radikal süpürücü ve PMA ile indüklenen bir radikal oluşum inhibitörü (Pérez-García ve ark. 2000). Ayrıca, sıçanlarda yapılan in vivo çalışmalar sonucunda, C. scolymus yaprak ekstraktının lipid peroksidasyonunu (Speroni ve ark. 2003 ) ve protein oksidasyonunu azalttığı ve ayrıca glutatyon peroksidaz aktivitesini arttırdığı (Jimenez-Escrig ve ark. 2003 ) önerilmiştir. ). C. scolymus yaprak ekstraktının hepatoprotektif etkileriyle ilgili birkaç in vivo ve in vitro çalışma olmasına rağmen, çalışmaların hiçbiri hepatoküratif etkilerini açıklamamaktadır. Bu çalışma, sıçanlarda CCl _{4'ün neden olduğu oksidatif stres ve karaciğer hasarına karşı}C. scolymus yaprak ekstraktının iyileştirici rollerini araştırmak için yapılmıştır . CCl uygulamasından sonra oksidatif stresi belirlemek ve sergilemek_{4 ve}C. scolymus yaprağı ekstresinin terapötik etkisini değerlendirmek için ; Karaciğer hasarının biyokimyasal belirteçleri olan ALT ve AST ölçüldü. _{CCl 4} toksisitesinin neden olduğu ciddi karaciğer hasarı belirlendi ve ayrıca oksidatif stres göstergesi MDA'nın seviyesi, endojen antioksidanlar süperoksit dismutaz (SOD) ve katalazın (CAT) aktiviteleri ölçülerek C. scolymus yaprak ekstraktının terapötik etkileri değerlendirildi. ). C. scolymus ekstraktının CCl ₄ toksisitesinin neden olduğu hücre proliferasyonu, apoptoz, DNA hasarı ve homeostaz değişiklikleri üzerindeki terapötik etkilerini belirlemek için DNA fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyeleri belirlendi .

Git: Sonuçlar

Cynara scolymus yaprağı ekstresinin serum hepatik enzim seviyeleri üzerindeki etkileri

Tabloda gösterildiği gibi 1_{, CCl 4 uygulamasından sonra 0.2 mL/kg CCl}₄ grubunda serum AST ve ALT seviyeleri anlamlı olarak daha yüksekti (P < 0.001) ve serum AST ve ALT seviyelerinde anlamlı düşüşler (P < 0.001) elde edildi (P < 0.001). Küratif grupta C. scolymus yaprak ekstresi (1.5 g/kg/gün) uygulamasından sonra 0.2 mL/kg CCl _{4 grubu.}_{AST ve ALT seviyeleri, 0.2 mL/kg CCl 4} grubuna kıyasla iyileşme grubunda %37 ve %49 azalmıştır . Aynı süre içinde AST ve ALT serum seviyeleri küratif grupta 0.2 mL/kg CCl ₄ grubuna kıyasla sırasıyla %40 ve %52 oranında azalmıştır. tablo 1

AST ve ALT serum seviyeleri

Kontrol	184,14 ± 5,78 ⁺⁺⁺	70,71 ± 6,24 ⁺⁺⁺
Zeytin yağı	284.00 ± 32.10*** ^{, +++}	117,71 ± 26,56*** ^{, +++}
Cynara özü	248.42 ± 19.68*** ^{, +++}	78,86 ± 16,23 ⁺⁺⁺
0,2 ml/kg CCl ₄	342,14 ± 21,42***	201.00 ± 9.74***
Kurtarma	213,57 ± 10,45* ^{, +++}	101.00 ± 8.92*** ^{, +++}
İyileştirici	202,42 ± 21,57 ⁺⁺⁺	96,43 ± 7,28*** ^{, +++}

Ayrı bir pencerede aç
* P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.001 değerleri kontrol grubu ile karşılaştırılmıştır.

⁺ P < 0.05, ⁺⁺ P < 0.01, ⁺⁺⁺ P < 0.001 değerleri CCl ₄ grubu ile karşılaştırılır. Cynara scolymus yaprağı ekstresinin karaciğer dokusunun MDA seviyeleri, SOD ve CAT aktivitesi üzerine etkileri

C. scolymus yaprak ekstraktlarının karaciğer dokusunun MDA seviyeleri, SOD ve CAT aktivitesi üzerindeki hepatoküratif etkileri Tablo'da gösterilmektedir.2. _{CCl 4} uygulamasından sonra MDA seviyeleri önemli ölçüde arttı (P < 0.001). İyileştirici grupta C. scolymus yaprak özütünün uygulanmasından sonra MDA seviyeleri önemli ölçüde düşüktü (P < 0.001). Ayrıca, iyileşme grubuna kıyasla küratif grupta bulunan MDA'da önemli bir düşüş vardı (P < 0.01). CCl _4'ün uygulanması, kontrol grubu seviyelerine kıyasla SOD aktivitesini (P < 0.001) önemli ölçüde azalttı. _{Hem kontrol hem de 0.2 mL/kg CCl 4} grupları ile karşılaştırıldığında, iyileşme ve küratif grupların SOD aktivitesinde de önemli azalma tespit edildi . İyileşme grubunun SOD aktivitesi, iyileştirici gruba kıyasla önemli ölçüde azaldı (P < 0.001). Cynara'da SOD aktivitesi azaldıCCl ₄ uygulaması olmayan özüt grubu. Bu beklenmedik bir sonuçtu ancak bu grupta MDA seviyesi de kontrol grubuna göre önemli ölçüde artmış ve bu da SOD'un antioksidan aktivitesini azaltabilecek lipid peroksidasyonunu göstermiştir. Bu nedenle, sonuçların daha fazla araştırmaya ihtiyacı var. CCl _4'ün uygulanması ayrıca CAT aktivitesini (P < 0.001) kontrol grubununkinden önemli ölçüde azalttı. C. scolymus yaprak özütünün uygulanmasından sonra, hem iyileşme (P < 0.001) hem de 0.2 mL/kg CCl ₄ (P < 0.001) gruplarına kıyasla küratif grupta önemli bir artış (P < 0.001) gözlendi . Bu anlamlı artış, C. scolymus'un CAT düzeyinde de belirlendi.yaprak özü grubu. Tablo 2

Karaciğer dokularının MDA, SOD ve CAT seviyeleri

Kontrol	0,36 ± 0,02 ⁺⁺⁺	57.57 ± 1.13	2,89 ± 0,40 ⁺⁺⁺
Zeytin yağı	0,75 ± 0,04*** ^{, +++}	55,43 ± 6,07*** ^{, +++}	2,75 ± 0,19 ⁺⁺⁺
Cynara özü	0,66 ± 0,02*** ^{, +++}	33.57 ± 3.73*** ^{, +++}	4,10 ± 0,70** ^{, +++}
0,2 ml/kg CCl ₄	1,04 ± 0,22***	46,57 ± 2,69***	1,43 ± 0,30***
Kurtarma	0,81 ± 0,16*** ^{, +++}	31.00 ± 2.64*** ^{, +++}	1,51 ± 0,49***
İyileştirici	0,60 ± 0,08*** ^{, +++, bir}	38,57 ± 3,21*** ^{, +++, b}	3,94 ± 0,37*** ^{, +++, b}

Ayrı bir pencerede aç
* P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.001 değerleri kontrol grubu ile karşılaştırılmıştır.

⁺ P < 0.05, ⁺⁺ P < 0.01, ⁺⁺⁺ P < 0.001 değerleri CCl ₄ grubu ile karşılaştırılır.

^a P < 0.01, ^b P < 0.001 değerleri iyileşme ve küratif grup arasında karşılaştırıldı Cynara scolymus yaprağı ekstresinin karaciğer dokusunun DNA % fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyeleri üzerindeki etkileri

C. scolymus yaprak ekstraktlarının karaciğer dokusunun % DNA fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyeleri üzerindeki hepatoküratif etkileri Tablo'da gösterilmektedir.3. Karaciğer dokusunun % DNA fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyeleri, CCl ₄ uygulamasından sonra kontrol grubuna göre önemli ölçüde arttı (P < 0.001). _{CCl 4} hepatotoksisitesinin C. scolymus yaprağı ekstresi ile tedavisi DNA % fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyelerini önemli ölçüde azalttı (P < 0.001). İyileşme grubu ile karşılaştırıldığında, küratif grupta karaciğer dokularının % DNA fragmantasyonu (P < 0.01), p53 (P < 0.05) ve kaspaz 3 (P < 0.001) düzeylerinde önemli düşüşler elde edildi. Sonuçlarımız ayrıca CCl _{4 olmadan tek başına}C. scolymus yaprak ekstresi uygulamasının DNA hasarı, p53 ve kaspaz 3 seviyelerinde önemli bir değişiklik göstermediğini gösterdi. Tablo 3

DNA fragmantasyonu, p53 ve kaspaz 3 seviyeleri karaciğer dokuları

Kontrol	20.11 ± 2.69 ⁺⁺⁺	55,53 ± 0,93 ⁺⁺⁺	5.03 ± 0.73 ⁺⁺⁺
Zeytin yağı	20.21 ± 0.82 ⁺⁺⁺	53,34 ± 0,84 ⁺⁺⁺	5,11 ± 0,85 ⁺⁺⁺
Cynara özü	20.07 ± 1.83 ⁺⁺⁺	55,90 ± 7,94 ⁺⁺⁺	4,67 ± 0,29 ⁺⁺⁺
0,2 ml/kg CCl ₄	33,96 ± 0,35***	112,39 ± 0,20***	7,42 ± 0,12***
Kurtarma	29.18 ± 2.61*** ^{, +++}	71.74 ± 10.39*** ^{, +++}	6,75 ± 0,29***
İyileştirici	25.66 ± 2.15*** ^{, +++, b}	61,96 ± 5,96 ^{+++, bir}	5.04 ± 0.13 ^{+++, c}

Ayrı bir pencerede aç
* P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.001 değerleri kontrol grubu ile karşılaştırılmıştır.

⁺ P < 0.05, ⁺⁺ P < 0.01, ⁺⁺⁺ P < 0.001 değerleri CCl ₄ grubu ile karşılaştırılır.

^a P < 0.05, ^b P < 0.01, ^c P < 0.001 değerleri derlenme ve küratif grup arasında karşılaştırıldı Cynara scolymus yaprağı ekstresinin karaciğer dokularının histolojik değişiklikleri üzerindeki etkileri

C. scolymus yaprak ekstraktlarının karaciğer dokularının histolojik değişiklikleri üzerindeki hepatoküratif etkileri Şekil 2'de gösterilmiştir.1. 0.2 mL/kg CCl4 grubunun karaciğer doku örnekleri _dikkate değer bir hasar sergiledi. Parankimal yapıda düzensizlikler gözlendi ve klasik lobüler yapı ayırt edilemedi. Ayrıca sinüzoidal genişleme (++), tıkanıklık (+), iltihaplanma (++), yoğun dejenerasyon (++++), vakuolizasyon, nodüler hücre hasarı (+++), eozinofilik sitoplazmalı nekrotik hücrelerin piknotik çekirdekleri (+++) ve hipertrofik hücre yapıları (+++) gözlendi. İyileşme grubunda sinüzoidal genişleme (+), iltihaplanma (+), tıkanıklık (+) ve hücresel hasar (+) gözlendi. Küratif grupta sinüzoidal dilatasyon (+) ve konjesyon (+) incelendi.

1
Karaciğer dokularının histolojik incelemeleri. a , b Kontrol grubunun (v vena sentralis, a X10, b X20) Hemotoksilen ve eozinle boyanmış karaciğer bölümü. c , d Cynara scolymus yaprağı ekstresi grubu ( c , d X10). e – h CCl ₄ grubu; vakuolizasyon ( e ince ok , X20) sinüzoidal genişleme ( f ok ), yoğun dejenerasyon, nodüler hücre hasarı türleri ( g *) eozinofilik sitoplazmalı nekrotik hücrelerin nekrotik hücreleri ve piknotik çekirdekleri ( h ok başı ) hipertrofik hücre yapıları ( h siyah ok , X40,100). i, j: Kurtarma grubu ( i X20, j X40). k , l İyileştirici grup; kısmi dejenerasyon ( ok başı ) ve sinüzoidal genişleme ( ok ) incelendi ( k X10, l X20)

Git: Tartışma

Karaciğer, plazma proteinlerinin biyosentezi, glukoneogenez ve detoksifikasyon dahil olmak üzere metabolizmada birçok önemli rol oynar. Karaciğerin güçlü yenilenme kapasitesi olmasına rağmen, belirli bir miktarda doku kaybı, yenilenme yeteneğini engeller ve karaciğer hastalığı ortaya çıkar (Xu ve ark. 2011 ).

Karbon tetraklorür (CCl ₄ ), indüklenmiş karaciğer hasarı çalışmaları için iyi bilinen ve yaygın olarak kullanılan bir modeldir (Mir ve ark. 2010 ). CCl ₄ , kimyasal olarak üretilen biyolojik olarak aktif olmayan ve stabil bir maddedir (Khan ve diğerleri 2012 ; Köse ve diğerleri 2005 ).). Karaciğerde sitokrom P-450 sistemi tarafından reaktif toksik metabolitlere dönüştürülür. Bu işlem sırasında önce sitokrom P-450 sistemi tarafından triklorometile dönüştürülür. Daha sonra, oksijen varlığında hızla hidrojen atomlarını kaybetmiş kimyasal konfigürasyonlar olan triklorometil peroksit ve kloroforma dönüştürülür. Bu serbest radikal üretimi, karaciğerin antioksidan savunmasının üstesinden gelir ve hücre zarlarının oksidatif yıkımına neden olarak ciddi karaciğer dokusu hasarına neden olur (Ajiboye 2010 ; Lima ve ark. 2007 ; Recknagel 1967 ) ve CCl ₄ hepatotoksisitesinin temel nedenlerinden biri , zarların lipid peroksidatif bozunması (Srivastava ve ark. 1990 )). Hasarlı karaciğer hücreleri, karaciğere özgü enzimleri kan dolaşımına salgılar. AST ve ALT gibi salgılanan bu enzimler, sıklıkla karaciğer hasarının biyokimyasal göstergeleri olarak kullanılır ve ayrıca terapötik ajanların etkilerinin araştırılmasında önemli bir rol oynar (Wallace ve Meyer 2010 ; Mir ve ark. 2010 ; Lima ve ark. 2007 ). Bu çalışmada AST ve ALT seviyeleri 0.2 mL/kg CCl ₄ grubunda daha yüksekti. _{CCl 4} ile karaciğer hasarı indüklendikten sonra C. scolymus yaprak ekstresi (1.5 g/kg/gün ) uygulamasıAST ve ALT düzeylerinde azalma ile sonuçlanmıştır, ancak iyileşme ve iyileştirici gruplar arasında anlamlı bir fark bulunmamıştır. İstatistiksel anlam elde edilememekle birlikte, aynı süre içerisinde küratif gruptaki daha düşük AST ve ALT seviyeleri, C. scolymus yaprağı ekstraktının karaciğerin yenilenme mekanizmasını hızlandırdığını göstermiştir. Tüm bu sonuçlar, C. scolymus'un in vivo antioksidan özelliklerinden dolayı oksidatif strese karşı daha hızlı toparlanmanın bir sonucu olarak karaciğer dokusunda hücre zarlarında ve onarım mekanizmalarında yeniden stabilizasyon olduğunu göstermiştir.yaprak özü. Bu sonuçlar, mevcut çalışmada MDA seviyeleri ve histopatolojik değerlendirmeler ile de doğrulanmıştır. Lipid peroksidasyonunun son ürünü olan MDA, oksidatif stres göstergesi olarak kullanılır. Bu çalışmada, hepatosellüler hasarın indüklenmesinden sonra 0.2 mL/kg CCl _{4 grubunda karaciğer dokusu MDA seviyeleri daha yüksekti ve}C. scolymus yaprağı ekstraktının karaciğer dokusu MDA seviyelerini iyileşmenin kendisinden daha fazla azalttığı bulundu, muhtemelen hücre zarı onarımı nedeniyle.

Biyolojik sistemler oksidatif strese cevap verebilmek için karaciğerde katalaz (CAT), glutatyon (GSH), paraoksonaz-1 (PON1) ve arilesteraz gibi endojen antioksidanlarla kendilerini korurlar (Özbayer ve ark. 2011 ; El-Sayed ve ark. 2011 ; diğerleri 2015 ). Bu antioksidanlar, çeşitli toksik kimyasallar ve ksenobiyotiklerin maruz kalmasıyla sonuçlanan serbest radikallerin ve ROS'un detoksifikasyonunda önemli rollere sahiptir (Ajiboye 2010 ). Antioksidan GSH, ROS'u ve serbest radikalleri doğrudan temizler ve biyolojik sistemleri oksidatif stresten koruyan GSH redoks sisteminin bir parçası olarak (El-Sayed ve ark. 2015 )). Endojen antioksidan enzim olan SOD, süperoksit radikalinin moleküler oksijen ve hidrojen peroksite dismutasyonunu katalize eder. Hücrelerin ROS'un neden olduğu oksidatif hasardan korunması için önemli bir antioksidan enzim olan CAT, hidrojen peroksitin su ve moleküler oksijene reaksiyonunu katalize eder (Hsiao ve diğerleri 2001 ). Antioksidan enzimler lipid peroksitler veya reaktif oksijen türleri tarafından kolayca inaktive edilir (Coballase-Urrutia ve ark. 2011 ) ve bu antioksidan enzimlerin hücrelerde azalması savunmada başarısızlığa ve karaciğer hasarına neden olur (Ajiboye 2010 ; El-Sayed ve ark. .2015 ) . _{Ayrıca CCl 4} uygulaması sonrası karaciğer dokularının GSH, SOD ve CAT aktivitesinde azalmalardaha önce tarif edilmiştir (El-Sayed ve diğerleri 2015 ; Ajiboye 2010 ; Coballase-Urrutia ve diğerleri. 2011 ; Cuciureanu ve diğerleri. 2009 ). Bu çalışmada CCl 4'ün SOD aktivitesinde önemli bir azalmaya neden olduğunu gösterdik ve CCl ₄_verildikten sonra tedavi almayan iyileşme grubunda da bu azalmanın devam ettiği belirlendi . C. scolymus yaprağı ekstresi ile tedavi, hem 0.2 mL/kg CCl _4'e kıyasla, azalan SOD aktivitesi seviyelerini yükseltti ve CCl 4'ün hepatotoksisitesini önemli ölçüde azalttı _.ve kurtarma grubu. Bu çalışmada, C. scolymus yaprak özütünün uygulanmasından sonra 0.2 mL/kg CCl ₄ grubunda CAT seviyesinin önemli ölçüde azaldığı ve küratif grupta CAT aktivitesinin önemli ölçüde arttığı da gösterilmiştir. C. scolymus yaprak özütünün uygulanması , iyileştirici grupta karaciğer dokusundaki CAT aktivitesini normal aralığa doğru artırdı. Bu sonuçlar, karaciğerin kendi kendini iyileştirme mekanizmasına sahip olmasına ve C. scolymus yaprak ekstresinin CCl 4'ü zayıflatmasına _{rağmen dışarıdan takviye sağlanmadığı durumlarda CCl}₄ hepatotoksisitesi sonucunda endojen antioksidan SOD ve CAT aktivitelerinin azalacağını düşündürmektedir.-indüklenen hepatotoksisite.

CCl ₄ uygulaması, oksidatif DNA hasarı üretebilen ROS ve serbest radikaller üretti. _{CCl 4'ün} transformasyonundan kaynaklanan reaktif ara maddeler DNA'ya kovalent olarak bağlanır ve DNA'nın oksidasyonu ile sonuçlanır (Lavanya ve diğerleri 2009 ). Bu oksidatif hasar, DNA eklentilerinin oluşumuna, genetik mutasyonlara, zincir kırılmasına ve kromozomal değişikliklere neden olur (Mir ve ark. 2010 ; Khan ve ark. 2012 ). DNA hasarlarının oluşumu, hücrelerin homeostazını ve apoptoz ve hücre proliferasyonu ile bağlantılı indüklenen sinyal transdüksiyonlarını etkiler. _{DNA hasarına yanıt olarak tümör baskılayıcı gen p53 ekspresyonunu tetikler ve p53'ün} protein ürünü G1'deki hücre döngüsünü bloke eder.DNA'nın onarılması için faz (van Gijssel ve diğerleri 1997 ). Hasar şiddetli olduğunda apoptozu tetikler. Sadece DNA hasarı değil, aynı zamanda oksidatif hasar sonucunda mitokondriden sitokrom c salınır ve bu yol da p53 ve kaspazları aktive eder (Campo ve ark. 2008 ). Sonuçlarımız, CCl4'ün _yüksek düzeyde DNA parçalanmasını indüklediğini gösterdi; sıçan karaciğerinde p53 ve kaspaz 3 ve tedavi olarak C. scolymus yaprağı ekstresinin uygulanması, iyileşme grubuna göre iyileştirici grupta onları daha fazla azalttı.

Birkaç çalışma, CCl ₄ uygulamasının karaciğer dokusunda sinüzoid dilatasyonu, tıkanıklık, iltihaplanma, yoğun dejenerasyon, vakuolizasyon, nodüler hücre hasarı türleri, eozinofilik sitoplazmalı nekrotik hücrelerin piknotik çekirdekleri ve hipertrofik gibi çeşitli yapısal değişikliklere yol açtığını bildirmiştir. hücre yapıları (Mehmetçik ve diğerleri 2008 ; Hsiao ve diğerleri 2001 ; Cuciureanu ve diğerleri 2009 ). _{Bu çalışmada, CCl 4'te} benzer histomorfolojik değişiklikler gözlemledik.grup. Parankimal yapıda düzensizlikler gözlendi ve klasik lobüler yapı ayırt edilemedi. Bu grupta şiddetli sinüzoidal genişleme, tıkanıklık, inflamasyon, yoğun dejenerasyon, vakuolizasyon, nodüler tipte hücresel hasar, eozinofilik sitoplazmalı nekrotik hücrelerin piknotik çekirdekleri ve hipertrofik hücre yapıları gözlendi. CCl _4'ün neden olduğu karaciğer hasarının ardından C. scolymus yaprağı ekstresi uygulaması, iyileşme grubuna göre bu hasarların daha fazla azalmasına neden oldu ve küratif grupta hafif sinüzoidal genişleme ve tıkanıklık tespit edildi.

Elde edilen tüm sonuçlar, CCl _{4'ün neden olduğu karaciğer hasarına karşı kullanılan}C. scolymus yaprağı ekstresinin antioksidan ve anti-apoptotik özelliklere sahip olduğunu göstermiştir. Yaprak ekstraktının karaciğer hastalıklarına karşı etkinliği fenolik asitler ve flavonoidlerden kaynaklanmaktadır. Fenolik asitler, peroksil ve hidroksil radikallerine karşı iyi bir antioksidan aktiviteye sahipken, flavonoidler, hidrojen donörleri ve metal iyon şelatörleri olarak işlev görür (Lattanzio ve ark. 2009 ).

Git: Sonuçlar

Bu çalışma, C. scolymus yaprak ekstraktının lipid peroksidasyonunu azalttığını, etkilenen antioksidan sistemlerin normal aralığa yaklaşmasını sağladığını ve CCl ₄ kaynaklı hepatotoksisite üzerinde DNA hasarının onarılmasına izin veren düzenleyici mekanizma yolunda olumlu etkilere sahip olduğunu göstermiştir . Bu sonuçlar, C. scolymus yaprak ekstraktının karaciğer hastalıklarının tedavisinde farmasötik bir fito-tıp olarak kullanılabileceğini düşündürmektedir.

Git: yöntemler

Bitki materyali

%75 etanol ile ekstrakte edilmiş % 5 sinarin içeren, piyasada bulunan C. scolymus yaprak ekstresi tozu, Kale Naturel Herbal Products Company, Ltd., Balıkesir, Türkiye'den satın alınmıştır. kimyasallar ve tepkimeler

CCl4 , %30 hidrojen peroksit (H202 ₎_, 1,1,3,3 tetraetoksi propan, ₂ -merkaptoetanol, amonyum molibdat ve n-butanol, Sigma Chemical Co.'dan (St. Louis, MO, ABD) satın alındı. ). Fosforik asit (H _2P04₎ , hidroklorik asit (HCl), potasyum klorür (KCl), potasyum fosfat (KH 2P04 ₎_, ksilen , potasyum fosfat monobazik (Na _{2 HPO 4} ) _, sodyum _karbonat (Na _2C03 )) ve tiyobarbitürik asit (TBA) Merck KGaA'dan (Almanya) satın alındı. Polietilen glikol tert-oktilfenil eter (Triton X-100), Electron Microscopy Sciences'tan (USA-Hatfield, PA) satın alındı. SOD belirleme kiti (19160; Fluka, Hannover, Almanya) ve Total Protein Liquicolor (10570; Human GmbH, Almanya) kullanıldı. Kullanılan kimyasalların geri kalanı oldukça saf bir kalitedeydi. deney hayvanları

Çalışma için 267.83 ± 25.81 g ağırlığındaki kırk iki Sprague-Dawley erkek sıçan kullanıldı. Tüm hayvanlar, sıcaklık (22 ± 2 °C) ve aydınlatma (12:12 saat ışık: karanlık döngü) dahil olmak üzere aynı laboratuvar koşullarında tutuldu. Ratlar standart laboratuvar yemi ve musluk suyu ile ad libitum beslendi. Tüm sıçanların deneyden bir hafta önce iklime alışmalarına izin verildi. Çalışma Eskişehir Osmangazi Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Deneysel tasarım

İklimlendirmeden sonra, hayvanlar rastgele kontrol, zeytinyağı, 0.2 mL/kg CCl4, C. scolymus yaprağı ekstresi, geri kazanım ve iyileştirici gruplar dahil olmak üzere altı deney grubuna (grup başına n = 7 _sıçan ) ayrıldı . Normal bir kontrol sağlamak için kontrol grubu sıçanlarına 10 gün boyunca sadece tuzlu su (0.2 mL/kg ip) ve 2 hafta boyunca ağızdan musluk suyu verildi. Araç kontrolü için, zeytinyağı grubu sıçanlara 2 hafta boyunca sadece zeytinyağı (0,2 mL/kg) verildi. Çalışmanın ilk 10 günü boyunca, 0.2 mL/kg CCl4 _{, iyileşme ve iyileştirici grup sıçanlarına, karaciğer hasarını indüklemek için günde iki kez %}₅₀ zeytinyağı çözeltisi içinde 0.2 mL/kg'lık bir dozda CCl4 intraperitoneal olarak enjekte edildi . daha önce açıklanan (Hülyam ve ark. 2005 ); Rikans et al. 1994 ). CCl4 uygulamasından sonra, 0.2 mL/kg CCl4 _grubu_sıçanlar , karaciğer hasarının boyutunu belirlemek için öldürüldü. Küratif grup sıçanlara C. scolymus yaprak özütü C. scolymus yaprak özütü, CCl4 uygulamasından sonra çeşme suyunda çözülmüş 1.5 g/kg dozunda ₂ hafta süreyle ağızdan verildi . CCl _{4 uygulamasından sonra, CCl}_4'ün uzun vadeli etkilerini araştırmak ve karaciğerin kendi kendini iyileştirme mekanizmasını değerlendirmek için iyileşme grubundaki sıçanlara 2 hafta boyunca herhangi bir ilaç veya tedavi uygulanmadı. C. scolymus yaprak özütü (1.5 g/kg) musluk suyunda çözündürüldü ve oral olarak C. scolymus'a uygulandı._{yaprak ekstresi grubu sıçanlarına herhangi bir CCl 4} uygulaması yapılmadan 2 hafta süreyle . Mevcut çalışmada, C. scolymus yaprak özütü dozunun esas alınarak, 1.5 g /kg dozunda belirlenmesi, hepatoprotektif etkilerle ilgili belirtilen çalışmalara bağlı olarak rapor edilmiştir . (Mehmetçik ve ark. 2008 ; Küskü-Kiraz ve ark. 2010 ; Afifi ve ark. 2014 ). Sıçanlar, son tedavilerden 24 saat sonra eter ile anesteziye tabi tutuldu. Kan ve doku toplama ve tahliller için hazırlık

Son tedavilerden 24 saat sonra sıçanlardan eter anestezisi altında kan alındı. İnferior vena kavadan uygun tüplere kan örnekleri alındı. Kan, 2063 x g'de 4 °C'de 15 dakika santrifüjlendi ve karaciğer fonksiyonunu belirlemek için serum elde edildi.

Sıçanlar kanayarak kurban edildikten sonra karaciğerleri dikkatli bir şekilde diseke edilerek yabancı dokulardan temizlendi ve örnekler ayrı kullanımlar için iki parçaya ayrıldı. Karaciğer dokusunun bir kısmı histopatolojik inceleme için hemen %10 formalin içine transfer edildi. Diğer parçalar, SOD, CAT, MDA, DNA fragmantasyonu ve protein tayini için homojenatlar elde etmek üzere hemen -80 °C'de saklandı. Bu numuneler, bir ultrasonik homojenleştirici kullanılarak potasyum klorür (% 1) içinde homojenleştirildi. Karaciğer dokusu homojenatı 3 667 x g'de 15 dakika 4 °C'de santrifüjlendi . Elde edilen süpernatan, çalışmalar başlayana kadar -80 °C'de saklandı. Sıçan serumunda ALT ve AST ölçümleri

ALT ve AST'nin serum seviyeleri, bir Roche Modular P kimya analizörü (Roche Diagnostics, 9115 Hague Road, Indianapolis, IN 46250) ile belirlendi. Ürün test kitleri Roche (Roche Diagnostics, 9115 Hague Road, Indianapolis, IN 46250) tarafından sağlandı. Protein tayini

Karaciğer dokusundaki toplam protein miktarı Biuret Protein Assay yöntemine göre tasarlanmış bir total protein kiti (Total Protein Liquicolor 10 570, Wiesbaden, Almanya) ile spektrofotometrik olarak belirlendi ve elde edilen değerler MDA ve MDA seviyeleri için kullanıldı. Karaciğer dokusu homojenatlarındaki CAT aktivitesi. Lipid peroksidasyonunun tahmini

MDA üretimi (tiobarbitürik asit-reaktif türler) açısından lipid peroksidasyonu, daha önce tarif edildiği gibi belirlendi (Uchiyama ve Mihara 1978 ). Kısaca 0.1 mL karaciğer homojenat numuneleri, 3 mL %1 fosforik asit ve 1 mL %0.6 2-tiobarbitürik asit kullanıldı. Kör için 0.1 mL distile su kullanıldı. Karışım bir su banyosunda 45 dakika kaynatıldı, ardından buz içinde soğutuldu ve soğuk tiyobarbitürik asit reaktanlarını çıkarmak için 4 mL n-butanol ilave edildi. Soğutulduktan sonra 4 mL n-bütanol ilave edildi ve numuneler çalkalandı. Bütanol tabakası, 2 808 x g'de santrifüjleme ile ayrıldı5 dk. n-bütanol tabakasının optik yoğunluğu, bir spektrofotometre (Shimadzu UV-1601 dijital spektrofotometre, Schimadzu Corp., Kyoto, Japonya) üzerinde 532 nm'de belirlendi. 10, 8, 6, 4, 2 ve 1 nmol'lük konsantrasyonlar kullanılarak standart bir MDA eğrisi oluşturulmuştur. Lipid peroksidasyon aktiviteleri, karaciğer dokusu homojenatları için nmol/g ıslak doku olarak ifade edilir. Karaciğer dokusunun süperoksit dismutaz (SOD) ve katalaz (CAT) aktivitesinin tahmini

Karaciğer doku numunelerindeki SOD enzim aktivitesi, bir SOD belirleme kiti (FLUKA, St. Louis, MO, Kat. No: 19160) kullanılarak ölçüldü. Kit, suda oldukça çözünür bir tetrazolyum tuzu, WST-1 (2-(4-lodofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-disülfofenil)-2H-tetrazolyum, monosodyum tuzu) kullanır. süperoksit anyonları tarafından indirgendikten sonra suda çözünür bir formazan boyası üretir. Kısaca, 96 kuyulu bir mikroplakanın her bir kuyucuğuna 20 μL numune solüsyonu, 200 μL WST-1 çalışma solüsyonu ve 20 μL enzim çalışma solüsyonu eklendi ve suda çözünür bir formazan üretmek için 37 °C'de 20 dakika inkübe edildi. boya. 450 nm'de absorbans, enzime bağlı bir immünosorbent deney plakası okuyucusu (Labsystems Multiskan EX; Thermo Labsystems, Finlandiya, Vartaa, Finlandiya) kullanılarak ölçüldü.

Numunelerin CAT aktivitesi, daha önce açıklanan yönteme göre belirlendi (Goth 1991 ). _{Kısaca, süpernatan H202}₍ 50 mmol/L fosfat tamponu içinde mL başına 65 µmol, pH 7.0) içeren substrat solüsyonunda 37 °C'de 60 saniye süreyle inkübe edildi. Enzimatik reaksiyon, amonyum molibdat ilavesiyle bloke edildi ve sarı bir hidrojen peroksit kompleksi elde edildi. Bu sarı kompleksin absorbansı, spektrofotometre kullanılarak 405 nm'de ölçülmüştür. Karaciğer dokusunda DNA parçalanmasının belirlenmesi

DNA fragmantasyonu, deoksiriboza bağlanan difenilamin (DPA) reaksiyonuna dayalı bir spektrofotometrik deney yöntemi kullanılarak belirlendi (Hickey ve diğerleri 2001 ). Spektrofotometri ile karaciğer DNA fragmantasyonunu ölçmek için, 0,3 g donmuş karaciğer, soğutulmuş bir lizis tamponu (5 mmol/L Tris–HCl, 20 mmol/L EDTA, %0.5 Triton X-100, pH 8) içinde homojenleştirildi. Peletteki bozulmamış DNA'yı süpernatandaki parçalanmış DNA'dan ayırmak için homojenatlar 26 000 x g'de 25 dakika santrifüjlendi . Peletler, 0,5 mol/L perklorik asit içinde yeniden süspanse edildi. 0.5 mol/L'lik bir nihai konsantrasyona ulaşmak için, 1917 uL süpernatan, 86 uL konsantre perklorik asit ile işlendi. Tüm numuneler 90 °C'de 15 dakika inkübe edildi ve 750 x g'de santrifüjlendi.süpernatanları elde etmek için 10 dakika. Çeşitli konsantrasyonlardaki süpernatanlar ve DNA standartları, difenilamin ile işlendi ve 18 saat oda sıcaklığında inkübe edildi. Örneklerin ve standartların absorbansı 600 nm'de ölçüldü. DNA parçalanma yüzdesi, parçalanmış DNA/(parçalanmış DNA + bozulmamış DNA) formülü kullanılarak hesaplandı. karaciğer dokusunda p53 seviyeleri

p53 pan ELISA kiti, p53 protein seviyelerini belirlemek için kullanıldı (Roche Molecular Biochemicals, Almanya, Kat. No: 11828789001). p53 pan ELISA testi, sıçan p53'e karşı yönlendirilen iki monoklonal antikor kullanan kantitatif "sandviç enzim-immünoanaliz" ilkesine dayanmaktadır. Kısaca, 1 g tartılmış karaciğer dokusu numunesi, 20 mmol/L Tris, 0.5 mmol/L EDTA, %1 Nonidet P40, %0.5 sodyum deoksikolat, %0.05 sodyum dodesil sülfat, 1 mmol/L fenilmetilsülfonilflorür, 1 µg/mL aprotinin ve 2 µg/mL leupeptin. Homojenat, 10 000 x g'de santrifüjlendi4 °C'de 10 dakika Elde edilen süpernatanlar toplandı ve numuneleri hazırlamak için numune seyreltici ile 1:5 oranında seyreltildi. Numuneler, bir anti-rat-p53 poliklonal antikoru ile streptavidin kaplı bir mikrotitre plakasına aktarıldı. Numuneden gelen p53, plaka yüzeyine bağlanır ve peroksidaz (POD)-konjuge saptama antikoru, hareketsizleştirilmiş p53 ile etkileşime girer. Bir yıkama adımını takiben, "sandviç" kompleksi içinde bağlanan POD, kolorimetrik substrat tetrametilbenzidin ile saptanır ve seviyeler, bir mikroplaka okuyucu ile 450 nm'de spektrofotometrik olarak belirlenir. Numune konsantrasyonları, kalibrasyon eğrisinden belirlendi ve doku p53 konsantrasyonları, pg/mL olarak ifade edildi. Karaciğer dokusunda kaspaz 3 seviyeleri

USCN Life Science Inc. kaspaz 3 ELISA kiti (Kat. No: SEA626Ra) karaciğer dokularındaki kaspaz 3 konsantrasyonlarını ölçmek için kullanıldı. Kısaca, karaciğer dokuları (1 g) buz gibi soğuk PBS (0.02 mol/L, pH 7.0) içinde homojenleştirildi ve ardından 5 000 x g'de santrifüjlendi.4 °C'de 5 dakika. Standartlar ve numuneler, kaspaz 3'e özgü biotin-konjuge antikor ile uygun mikrotitre plaka kuyularına ilave edildi. Horseradish Peroxidase'e (HRP) konjuge Avidin, her mikroplaka kuyusuna ilave edildi ve inkübe edildi. TMB substrat solüsyonu eklendikten sonra, biotin-konjuge antikor ve enzim-konjuge Avidin renkte bir değişiklik gösterdi. Enzim-substrat reaksiyonu, sülfürik asit çözeltisi ilave edilerek sonlandırıldı ve renk değişimi 450 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak ölçüldü. Numunelerdeki kaspaz 3 konsantrasyonları daha sonra numunelerin OD'si standart eğriyle karşılaştırılarak belirlendi. Seviyeler ng/mL olarak ifade edildi. Histopatolojik değerlendirme

Karaciğerler rutin olarak %10 formalin solüsyonunda işlendi ve parafine gömüldü. Doku Bölümleri (5 µm) elde edildi ve hematoksilen ve eozin (H&E) ile boyandı. Histopatolojik incelemeler ışık mikroskobu (NIKON, Japonya) altında yapıldı. Tüm histopatolojik incelemeler, doku örneklerinin tümüne kör olan bir histolog tarafından yapıldı. Örnekler (+) az hasarlı, (++) orta derecede hasarlı, (+++) ağır hasarlı olarak değerlendirilmiştir. istatistiksel analiz

Sürekli değişkenlerin normalliği Kolmogorov-Smirnov testi ile test edildi. Normal dağılan değişkenler, Tukey testi ile tek yönlü bir varyans analizi (ANOVA) kullanılarak gruplar arasında karşılaştırıldı. Tüm sonuçlar ortalama ± SD (standart sapma) olarak ifade edilir. 0.05'ten küçük P değerleri anlamlı kabul edildi. Veri analizleri SPSS 15.0 versiyonu kullanılarak yapıldı.

Git: Yazar katkıları

EC, MCU ve ERC (Ertuğrul Çolak) deneysel tasarımı oluşturmuş ve çalışma aşamalarını gerçekleştirmiştir. EC ve MCU, serum hepatik enzim düzeyleri, oksidatif stres göstergesi (MDA) ve endojen antioksidan düzeylerinin ölçümlerini yaptı. EC ve NT, DNA fragmantasyonu, p53, kaspaz 3'ün laboratuvar analizini gerçekleştirdi. ERC, verilerin tüm istatistiksel analizlerini gerçekleştirdi ve sonuçları yorumladı. DB histopatolojik analiz yaptı. HVG ve ID, deneyleri denetledi ve geri bildirim sağladı. Tüm yazarlar son makaleyi okudu ve onayladı. Teşekkür

Yazarlar, Cynara scolymus yaprak özütünü sağladığı için Kale Naturel Bitkisel Ürünler Şirketi Ltd., Balıkesir, Türkiye'ye teşekkür eder . rekabet eden çıkarlar

Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını beyan eder.

Git: Kısaltmalar

CCl ₄	karbon tetraklorür
MDA	malondialdehit
ALT	alanin-aminotransferaz
AST	aspartat-aminotransferaz
SOD	süperoksit dismutaz
KEDİ	katalaz
ROS	Reaktif oksijen türleri

Git: Katılımcı Bilgileri

Emine Çolak, Telefon: +90-222-2392979, E-posta: moc.liamg@62kaloce .

Mehmet Cengiz Üstüner, E-posta: moc.liamg@renutsucm .

Neslihan Tekin, E-posta: moc.liamtoh@niket_nahilsen .

Ertuğrul Çolak, Email: rt.ude.ugo@kaloce .

Dilek Burukoğlu, E-posta: moc.oohay@ulgokurubd .

İrfan Değirmenci, E-posta: rt.ude.ugo@dnafri .

Hasan Veysi Güneş, E-posta: rt.ude.ugo@senugh .

Git: Referanslar

Afifi N, Ramazan A, Yassin NZ, Fayed HM, Abdel-Rahman RF. Enginar ekstraktının hepatoprotektif etkisinin altında yatan moleküler mekanizmalar: nükleer transkripsiyon faktörünün (NF-KAPPA ẞ) tnf ile indüklenen aktivasyonunu ve oksidatif patlama inhibisyonunu modüle eder. Dünya J Eczacılık Bilimi. 2014; 4 (1):1546–1562. [ Google Akademik ]
Ajiboye TO. Piliostigma thonningii (Schum) yapraklarının in vivo antioksidan potansiyelleri : hepatik markör enzim, antioksidan sistem, ilaç detoksifiye edici enzim ve lipid peroksidasyonu üzerine çalışmalar. Hum Exp Toksikol. 2010; 30 (1):55–62. doi: 10.1177/0960327110366785. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Campo G, Avenoso A, Campo S, Nastasi G, Traina P, D'ascola A, Rugolo C, Calatroni A. Farelerde karbon tetraklorür kaynaklı akut hepatitte kondroitin-4-sülfatın antioksidan aktivitesi, NF-κB'yi içerir. ve kaspaz aktivasyonu. Br J Pharmacol. 2008; 155 (6):945–956. doi: 10.1038/bjp.2008.338. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Coballase-Urrutia E, Pedraza-Chaverri J, Cárdenas-Rodriguez N, Huerta-Gertrudis B, García-Cruz ME, Ramírez-Morales A, Sanchez-Gonzalez DJ, Martínez-Martínez CM, Camacho-Carranza R, Espinosa-. Heterotheca inuloides'in asetonik ve metanolik ekstraktlarının sıçanlarda CCl 4-indüklenen toksisiteye karşı hepatoprotektif etkisi. Exp Toksikol Patol. 2011; 63 (4):363–370. doi: 10.1016/j.etp.2010.02.012. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Cuciureanu M, Căruntu ID, Păduraru O, Stoica B, Jerca L, Crauciuc E, Nechifor M. Montelukast sodyumun sıçanda karbon tetraklorür kaynaklı hepatopati üzerindeki koruyucu etkisi. Prostaglandinler Diğer Lipid Mediat. 2009; 88 (3):82-88. doi: 10.1016/j.prostaglandins.2008.10.004. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Ellah MRA. Hepatik oksidatif stres: karaciğer biyopsisinin rolü. İçinde: Mizuguchi Y, editör. Modern tıpta karaciğer biyopsisi. Hırvatistan: INTECH Açık Erişim Yayıncısı; 2011. s. 76–88. [ Google Akademik ]
El-Sayed YS, Lebda MA, Hassinin M, Neoman SA. Hindiba ( Cichorium intybus L.) kök ekstresi, ccl4 kaynaklı hepatotoksisitede oksidatif durumu ve antioksidan gen transkriptlerini düzenler. PLoS Bir. 2015; 10 (3):e0121549. doi: 10.1371/journal.pone.0121549. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ] Geri çekildi
ESCOP. ESCOP monografları: bitkisel tıbbi ürünler için bilimsel temel. 2. New York: Thieme; 2003. Cynarea folium enginar yaprağı; s. 118–125. [ Google Akademik ]
Gebhardt R. Enginar ( Cynara scolymus L.) yapraklarından elde edilen ekstraktların, kültürlenmiş sıçan hepatositlerinde hidroperoksit kaynaklı oksidatif strese karşı antioksidan ve koruyucu özellikleri. Toxicol Appl Pharmacol. 1997; 144 (2):279–286. doi: 10.1006/taap.1997.8130. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Goth L. Serum katalaz aktivitesinin belirlenmesi ve referans aralığının revizyonu için basit bir yöntem. Clin Chim Acta. 1991; 196 (2):143–151. doi: 10.1016/0009-8981(91)90067-M. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Hickey E, Raje R, Reid V, Gross S, Ray S. Diklofenak kaynaklı in vivo nefrotoksisite, oksidatif stres aracılı büyük genomik DNA parçalanmasını ve apoptotik hücre ölümünü içerebilir. Serbest Radic Biol Med. 2001; 31 (2):139–152. doi: 10.1016/S0891-5849(01)00560-3. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Hodgson E, Levi PE (2004) Hepatotoksisite. In: Hodgson E (ed) Modern toksikoloji ders kitabı. 3. baskı Wiley, New Jersey, s. 261-272. doi:10.1002/0471646776.ch14
Hsiao G, Lin YH, Lin CH, Chou DS, Lin WC, Sheu JR. PMC'nin in vivo kronik karbon tetraklorür kaynaklı hepatotoksisiteye karşı koruyucu etkileri. Biol Ecz Boğa. 2001; 24 (11):1271–1276. doi: 10.1248/bpb.24.1271. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Hülyam K, Başaran A, Erinç A. Sıçanlarda karbon tetraklorür kaynaklı oksidatif stresin likopen ile önlenmesi. Türk J Med Sci. 2005; 25 (2):167. [ Google Akademik ]
Jimenez-Escrig A, Dragsted LO, Daneshvar B, Pulido R, Saura-Calixto F. Yenilebilir enginarın in vitro antioksidan aktiviteleri ( Cynara scolymus L.) ve sıçanlarda antioksidanların biyolojik belirteçleri üzerindeki etkisi. J Tarım Gıda Kimya. 2003; 51 (18):5540-5545. doi: 10.1021/jf030047e. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Khan RA, Khan MR, Sahreen S. CCl4 kaynaklı hepatotoksisite: rutinin p53, CYP2E1 üzerindeki koruyucu etkisi ve sıçandaki antioksidatif durum. BMC Tamamlayıcı Alter Med. 2012; 12 (1):178. doi: 10.1186/1472-6882-12-178. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Kose N, Yamamoto K, Sai Y, Isawa M, Suwa T, Nakashima E. PKCYP testi ile değerlendirilen in vivo CYP1A2 ve CYP3A2 içerikleri kullanılarak CCl4 ile tedavi edilen sıçanlarda teofilin klirensinin tahmini. İlaç Metab Farmakokineti. 2005; 20 (3):168–176. doi: 10.2133/dmpk.20.168. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Küskü-Kiraz Z, Mehmetçik G, Doǧru-Abbasoǧlu S, Uysal M. Enginar yaprağı ekstresi, yüksek kolesterol diyeti ile beslenen ratlarda oksidatif stresi ve lipoprotein dishomeostazisini azaltır. Fitoter Araş. 2010; 24 (4):565–570. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Lattanzio V, Kroon PA, Linsalata V, Cardinali A. Globe enginar: fonksiyonel bir gıda ve nutrasötik içerik kaynağı. J Fonksiyonlu Gıdalar. 2009; 1 (2):131–144. doi: 10.1016/j.jff.2009.01.002. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Lavanya G, Sivajyothi R, Manjunath M, Parthasarathy P. Karbon tetraklorür kaynaklı oksidatif stres ve Amonyak bakterisi Linn'in koruyucu doğası sırasında biyomoleküllerin kaderi . Doğal bir antioksidan. Int J Yeşil Ecz. 2009; 3 (4):300. doi: 10.4103/0973-8258.59736. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Lima CF, Fernandes-Ferreira M, Pereira-Wilson C. Ada çayı officinalis çayının içilmesi farelerde CCl 4-indüklenen hepatotoksisiteyi arttırır. Gıda Kimyasal Toksikol. 2007; 45 (3):456-464. doi: 10.1016/j.fct.2006.09.09. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Loguercio C, Federico A. Viral ve alkolik hepatitte oksidatif stres. Serbest Radic Biol Med. 2003; 34 (1):1–10. doi: 10.1016/S0891-5849(02)01167-X. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Mehmetçik G, Özdemirler G, Koçak-Toker N, Çevikbaş U, Uysal M. Enginar özü ile ön işlemin karbon tetraklorür kaynaklı karaciğer hasarı ve oksidatif stres üzerine etkisi. Exp Toksikol Patol. 2008; 60 (6):475–480. doi: 10.1016/j.etp.2008.04.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Miccadei S, Di Venere D, Cardinali A, Romano F, Durazzo A, Foddai MS, Fraioli R, Mobarhan S, Maiani G. Kültürlenmiş sıçan hepatositleri üzerinde enginarın yenilebilir kısmından ( Cynara scolymus L.) elde edilen polifenolik ekstraktların antioksidan ve apoptotik özellikleri ve insan hepatom hücreleri üzerinde. Nutr Kanser. 2008; 60 (2):276–283. doi: 10.1080/01635580801891583. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Mir A, Anjum F, Riaz N, Iqbal H, Wahedi HM, Zaman J, Khattak K, Khan MA, Malik S. Sıçanlarda karbon tetraklorür (CCl4) ile indüklenen hepatotoksisite: Solanum nigrum'un iyileştirici rolü . J Med Tesis Arş. 2010; 4 (23):2525–2532. [ Google Akademik ]
Özbayer C, Değirmenci İ, Hülyam K, Özden H, Kısmet Ç, Başaran A, Güneş HV. Streptozotosin-nikotinamid ile indüklenen diyabetik sıçan karaciğerinde Stevia rebaudiana (Bertoni) özlerinin ve L-NNA'nın antioksidan ve serbest radikal süpürücü özellikleri. Türk J Med Sci. 2011; 31 (1):51–60. [ Google Akademik ]
Pérez-García F, Adzet T, Cañigueral S. Enginar yaprağı ekstresinin insan lökositlerindeki reaktif oksijen türleri üzerindeki etkinliği. Serbest Radic Res. 2000; 33 (5):661–665. doi: 10.1080/10715560000301171. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Recknagel RO. Karbon tetraklorür hepatotoksisitesi. Pharmacol Rev. 1967; 19 (2):145–208. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Rikans LE, Hornbrook KR, Cai Y. Dişi Fischer 344 sıçanlarında yaşın bir fonksiyonu olarak karbon tetraklorür hepatotoksisitesi. Makine Yaşlandırma Dev. 1994; 76 (2):89–99. doi: 10.1016/0047-6374(94)91584-9. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Robinson WE, Reinecke MG, Abdel-Malek S, Jia Q, Chow SA. HIV entegrasyonunu engelleyen HIV-1 replikasyonunun inhibitörleri. Proc Natl Acad Sci ABD. 1996; 93 (13):6326-6331. doi: 10.1073/pnas.93.13.6326. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Shin SM, Yang JH, Ki SH. Karaciğer hastalıklarında Nrf2-ARE yolunun rolü. Oksit Med Hücre Longev. 2013; 2013 :9. doi: 10.1155/2013/763257. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Speroni E, Cervellati R, Govoni P, Guizzardi S, Renzulli C, Guerra M. Karaciğer şikayetleri üzerine farklı Cynara scolymus preparatlarının etkinliği. J Etnofarmakol. 2003; 86 (2):203–211. doi: 10.1016/S0378-8741(03)00076-X. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Srivastava SP, Chen N, Holtzman J. Erkek sıçanlardan alınan hepatik mikrozomların ATP'ye bağlı kalsiyum alımının CCl4 tarafından in vitro NADPH'ye bağlı inhibisyonu. CCl3.radical tarafından hepatik mikrozomal kalsiyum pompasının inaktivasyonu mekanizması üzerine çalışmalar. J Biol Chem. 1990; 265 (15):8392-8399. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Uchiyama M, Mihara M. Dokularda malonaldehit öncüsünün tiyobarbitürik asit testi ile belirlenmesi. Anal Biyokimya. 1978; 86 (1):271–278. doi: 10.1016/0003-2697(78)90342-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
van Gijssel HE, Maassen C, Mulder GJ, Meerman J. sıçan karaciğerinde hepatokarsinojenler tarafından p53 protein ekspresyonu ve hepatik tümör gelişiminin bir mekanizması olarak normal hepatositlerin mitoinhibisyonundaki potansiyel rolü. Karsinojenez. 1997; 18 (5):1027–1033. doi: 10.1093/karsin/18.5.1027. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Vitaglione P, Morisco F, Caporaso N, Fogliano V. Diyet antioksidan bileşikleri ve karaciğer sağlığı. Crit Rev Gıda Bilimi Nutr. 2005; 44 (7–8):575–586. doi: 10.1080/10408690490911701. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Wallace AD, Meyer SA. Hepatotoksisite. İçinde: Smart RC, Hodgson E, editörler. Moleküler ve biyokimyasal toksikoloji. 4. Hoboken: Wiley; 2010. s. 671-692. [ Google Akademik ]
Wang M, Simon JE, Aviles IF, He K, Zheng QY, Tadmor Y. Enginarda antioksidan fenolik bileşiklerin analizi ( Cynara scolymus L.) J Agric Food Chem. 2003; 51 (3):601–608. doi: 10.1021/jf020792b. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Xu L, Gao J, Wang Y, et al. Myrica rubra özleri, karaciğeri CCl4'ün neden olduğu hasardan korur. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med. 2011; 2011 :518302. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Yang SS, Cragg GM, Newman DJ, Bader JP. NCI gelişimsel terapötik program tarafından kolaylaştırılan doğal ürün bazlı anti-HIV ilaç keşfi ve geliştirme. J Nat Prod. 2001; 64 (2):265–277. doi: 10.1021/np0003995. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]

Karaciğer Enzim Yükselmesine Ne İyi Gelir Karaciğer Enzim Yükselmesi

ITP Hastalığı Nedir Nasıl Tedavi Edilir Trombosit Hastalıkları Nasıl Tedavi EdilirTP Hastalığı Nedir Nasıl Tedavi Edilir Trombosit Hastalıkları Nasıl Tedavi Edilir

Alıç Damar Tıkanıklıklarını Açar, Hafıza İçin Ormus Gold, Karaciğer Yağlanmasına Enginar

Enginar ile Kaşıntılara Son, Karaciğer Yağlanması Ne İyi Gelir, Karaciğer Yağlanmasına Enginar

Enginarı Özelikleri, Karaciğer Yağlanması Ne İyi Gelir, karaciğer yağlanması bitkisel tedavi,

Fevzi Can- Enginar ve Spirulina

ENGİNAR İle Kolesterol Ve Karaciğer Yağlanması

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması Ve Karaciğer Zehirlenmesi

**igokcek** · 16 July 2012, 17:29

Karaciğer Yağlanması ve Karaciğer Rahatsızlıklarının Enginar ile Tedavisi

KARACİĞER Yağlanmasının Enginar ile Tedavisi, Enginar ile Karaciğer Enzimleri Normale Döner

ENGİNAR İle Klinik Araştırmalar Ve Kolesterol

ENGİNAR İle Karaciğer, Siroz, Kolesterol, Lipid Ve Trigliserid

Enginar Yaprağı Ekstraktının Farmakolojik Çalışmaları ve Sağlığa Faydaları

Meryem Ben Selim¹, Hanen Affes^{2 3}, Kamilia Ksouda¹, Raouia Dhouibi¹, Züheyr Sahnun¹, Serria Hamamı¹, Halid Münir Zeghal¹
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Laboratoire de farmakologie, Faculté de Medecine Sfax, Sfax, Tunus.
²Laboratoire de farmakologie, Faculté de Medecine Sfax, Sfax, Tunus. affeshanen13@yahoo.fr.
³Farmakoloji Laboratuvarı, Sfax Tıp Fakültesi, Avenue Majida Boulila, 3029, Sfax, Tunus. affeshanen13@yahoo.fr.

PMID: 26310198
DOI: 10.1007/s11130-015-0503-8

Soyut

Enginar (Cynara scolymus) yaprağı ekstresi, klinik ve deneysel çalışmaların birbirini tamamladığı birkaç bitkisel ilaçtan biriydi. Hem deneysel hem de klinik etkiler, kapsamlı biyomedikal bitkisel ilaç araştırmalarıyla doğrulanmıştır. Spesifik olarak, tarihsel kullanımına karşılık gelen antioksidan, koleretik, hepatoprotektif, safra artırıcı ve lipid düşürücü etkiler gösterilmiştir. Devam eden araştırmalar, enginarın gerçekten de tıbbi niteliklere sahip olduğunu gösteriyor gibi görünüyor. En önemlisi, karaciğer üzerindeki yararlı etkisi gibi görünmektedir. Hayvanlar üzerinde yapılan çalışmalarda, enginarın köklerinden ve yapraklarından elde edilen sıvı ekstraktların karaciğeri koruma, hatta muhtemelen karaciğer hücrelerinin yenilenmesine yardımcı olma yeteneği olduğu kanıtlanmıştır. Araştırmalar henüz kesin olmasa da, bilim adamları, insanlarda sindirim ve bağırsak sorunları için uzun süredir kullanılmasının gerçekten haklı olduğu konusunda iyimserdi. Ayrıca kolesterolü düşürmede rol oynayabilir ve böylece kalp hastalıklarını önlemeye yardımcı olabilir. Haşlanmış yabani enginar, normal deneklerde yemek sonrası glisemik ve insülinemik yanıtları azaltmış, ancak metabolik sendromlu hastalarda hiçbir etkisi olmamıştır. Bu makale, enginar yaprağı ekstraktının geniş kapsamlı farmakolojik etkilerini gözden geçirmeyi amaçlamaktadır.

Anahtar Kelimeler: Antioksidan; Enginar yaprağı ekstresi; Kardiyovasküler bozukluklar; Hepato-koruyucu.

**igokcek** · 17 July 2012, 11:02

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması

ENGİNAR İle Saç Derisindeki Yaralar

Enginarın ( cynara scolymus ) HFD kaynaklı obezite dokusunda kardiyak belirteçler, lipid profili ve antioksidan seviyeleri üzerindeki etkisi

Meryem Ben Selim¹, Hanen Affes¹, Raouia Dhouibi¹, İnce Charfi², Mouna Turki³, Serria Hamamı¹, Fatma Ayedi³, Züheyr Sahnun¹, Halid Münir Zeghal¹, Kamilia Ksouda¹
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Farmakoloji Laboratuvarı, Tıp Fakültesi, Sfax Üniversitesi, Sfax, Tunus.
²Anatomopatoloji Laboratuvarı, MUB Habib Bourguiba, Sfax Üniversitesi, Sfax, Tunus.
³Biyokimya Laboratuvarı, MUB Habib Bourguiba, Sfax Üniversitesi, Sfax, Tunus.

PMID: 31564131
DOI: 10.1080/13813455.2019.1670213

Soyut

Obezite, hipertansiyon, hiperlipidemi, tip 2 diabetes mellitus ve artmış kardiyovasküler hastalık riski ile ilişkili olan insülin direnci hastalığında çok önemli bir rol oynar. Bu çalışmanın amacı, Wistar sıçanlarında yüksek yağlı diyet (HFD) ile indüklenen hücresel obezite ve kalp hasarında enginar yaprağı ekstraktının (ALE) etkisini değerlendirmek için yapıldı. Vücut ve organ ağırlıkları, serum lipid profili, kardiyak belirteçler ve antioksidan enzimler ölçüldü. 60 günlük bir süre boyunca 200 ve 400 mg/kg olmak üzere iki dozda oral ALE uygulaması, oksidatif stres biyobelirteçlerinde (MDA ve AOPP) azalma ile birlikte vücut ve organ ağırlıkları, serum toplam kolesterolü, trigliseritler, LDH, ALT'de önemli bir düşüş göstermiştir. ) ve HFD gruplarına kıyasla artan antioksidan enzimler (SOD, CAT ve GPx) seviyeleri. Histolojik bulgular, ALE'nin kalbi koruyucu bir etkisi olduğunu göstermiştir. Bu bulgular, ALE'nin HFD'nin neden olduğu obez sıçanlarda antioksidan kardiyak etkiler gösterdiğini düşündürmektedir.

Anahtar Kelimeler: Enginar; HFD; antioksidan; kardiyak; yapraklar.

**igokcek** · 17 July 2012, 11:07

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması Ve Asidoz

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması, Kolesterol, Lipid Ve Trigliserid

Cynara scolymus, albino sıçanlarda testis fonksiyonunda ve sperm kalitesinde nandrolone dekanoat kaynaklı değişiklikleri hafifletir.

Eman Taha Muhammed¹, Abir M Radi², Lütfi Aleya³, Mohamed M Abdel-Daim^{4 5}
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Biyokimya Anabilim Dalı, Veteriner Fakültesi, Beni-Suef Üniversitesi, Beni-Suef, 62515, Mısır. eman.ibrahim@vet.bsu.edu.eg.
²Farmakoloji Bölümü, Veteriner Fakültesi, Beni-Suef Üniversitesi, Beni-Suef, 62515, Mısır.
³Krono-Çevre Laboratuvarı, UMR CNRS 6249, Bourgogne Franche-Comté Üniversitesi, Besançon Cedex, Fransa.
⁴Zooloji Bölümü, Fen Fakültesi, King Saud Üniversitesi, PO Box 2455, Riyad, 11451, Suudi Arabistan.
⁵Süveyş Kanalı Üniversitesi Veteriner Fakültesi Farmakoloji Anabilim Dalı, İsmailiye, 41522, Mısır.

PMID: 31845274
DOI: 10.1007/s11356-019-07302-4

Soyut

Nandrolone dekanoat (ND), yaygın olarak kullanılan bir anabolik-androjenik steroiddir. Bu ilaçlar, spor performanslarını artırmak için sporcular tarafından yasa dışı bir şekilde kendi kendine uygulanır. Bununla birlikte, bunların kötüye kullanılması testis fonksiyonunu ve doğurganlığı etkileyebilir. Bu çalışmanın ana amacı, Cynara scolymus yaprak ekstraktının (CLE) sıçanlarda ND ile indüklenen testis disfonksiyonu üzerindeki olası koruyucu etkilerini değerlendirmektir. Beş yetişkin erkek sıçan grubu (her biri 10 sıçan) kullanıldı. Grup I sıçanları sadece salin aldı ve kontrol olarak görev yaptı. Grup II sıçanlarına haftada bir araç enjekte edilirken, grup III sıçanlarına intramüsküler ND enjeksiyonları (60 gün boyunca 20 mg/kg/hafta) verildi. Grup IV sıçanlara oral olarak 1 g/kg/gün CLE verildi ve grup V sıçanlara yukarıda belirtilen dozlarda ND ve CLE verildi. Sonuçlar, ND'nin testiküler malondialdehit konsantrasyonundaki ve serum prostatik olmayan asit fosfataz aktivitesindeki önemli artışların (p ≤ 0.05) yanı sıra serum testosteron seviyelerindeki ve testis ağırlığındaki önemli düşüşlerle kanıtlandığı üzere testis fonksiyonu üzerinde olumsuz bir etkiye sahip olduğunu ortaya koydu. , glutatyon konsantrasyonu, katalaz enzim aktivitesi ve toplam antioksidan kapasitesi. Bu sonuçlara, sperm karakterlerinde önemli değişiklikler ve testis dokusunun histopatolojik çalışmaları eşlik etti. Bununla birlikte, CLE ekstraktı ile birlikte tedavi, neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikleri önemli ölçüde hafifletti (p ≤ 0.05). Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir. 05) testiküler malondialdehit konsantrasyonunda ve serum prostatik olmayan asit fosfataz aktivitesinde ve ayrıca serum testosteron seviyelerinde, testis ağırlığında, glutatyon konsantrasyonunda, katalaz enzim aktivitesinde ve toplam antioksidan kapasitede önemli düşüşler. Bu sonuçlara, sperm karakterlerinde önemli değişiklikler ve testis dokusunun histopatolojik çalışmaları eşlik etti. Bununla birlikte, CLE ekstraktı ile birlikte tedavi, neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikleri önemli ölçüde hafifletti (p ≤ 0.05). Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir. 05) testiküler malondialdehit konsantrasyonunda ve serum prostatik olmayan asit fosfataz aktivitesinde ve ayrıca serum testosteron seviyelerinde, testis ağırlığında, glutatyon konsantrasyonunda, katalaz enzim aktivitesinde ve toplam antioksidan kapasitede önemli düşüşler. Bu sonuçlara, sperm karakterlerinde önemli değişiklikler ve testis dokusunun histopatolojik çalışmaları eşlik etti. Bununla birlikte, CLE ekstraktı ile birlikte tedavi, neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikleri önemli ölçüde hafifletti (p ≤ 0.05). Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir. testis ağırlığı, glutatyon konsantrasyonu, katalaz enzim aktivitesi ve toplam antioksidan kapasitesi. Bu sonuçlara, sperm karakterlerinde önemli değişiklikler ve testis dokusunun histopatolojik çalışmaları eşlik etti. Bununla birlikte, CLE ekstraktı ile birlikte tedavi, neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikleri önemli ölçüde hafifletti (p ≤ 0.05). Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir. testis ağırlığı, glutatyon konsantrasyonu, katalaz enzim aktivitesi ve toplam antioksidan kapasitesi. Bu sonuçlara, sperm karakterlerinde önemli değişiklikler ve testis dokusunun histopatolojik çalışmaları eşlik etti. Bununla birlikte, CLE ekstraktı ile birlikte tedavi, neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikleri önemli ölçüde hafifletti (p ≤ 0.05). Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir. 05) neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikler. Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir. 05) neredeyse tüm ND kaynaklı patolojik değişiklikler. Sonuç olarak, ND ile zehirlenmiş sıçanların CLE ile birlikte tedavisi, ND'nin testis yapısı ve işlevi üzerindeki toksik etkilerini, muhtemelen antioksidan aktivitesi nedeniyle iyileştirmiştir.

Anahtar Kelimeler: Anabolik steroidler; antioksidanlar; Enginar; sinarin; Doğurganlık; silimarin; Sperm anormallikleri; Testis.

**igokcek** · 17 July 2012, 11:08

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması, Kolesterol, Lipid, Trigliserid Ve Hazımsızlık

ENGİNAR İle Damar İltihabı, Vaskülit, Behçet Ve Burger Sendromu

Cynara scolymus L. takviyesinin karaciğer enzimleri üzerindeki etkileri: Sistematik bir inceleme ve meta-analiz

Sajjad Moradi¹, Nafiseh Shokri-Mashhadi¹, Sahar Saraf-Banka², Hamed Muhammedi³, Mehdi Zübeyri⁴, Cain CT Clark⁵, Muhammed Hüseyin Ruhani²
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Klinik Beslenme Bölümü, Beslenme ve Gıda Bilimleri Okulu, İsfahan Tıp Bilimleri Üniversitesi, İsfahan, İran.
²Gıda Güvenliği Araştırma Merkezi ve Toplum Beslenmesi Bölümü, Beslenme ve Gıda Bilimi Okulu, İsfahan Tıp Bilimleri Üniversitesi, İsfahan, İran.
³Klinik Beslenme Bölümü, Beslenme Bilimleri ve Diyetetik Okulu, Tahran Tıp Bilimleri Üniversitesi, Tahran, İran.
⁴Kermanshah Tıp Bilimleri Üniversitesi Tıp Fakültesi Dahiliye Anabilim Dalı, Kermanshah, İran.
⁵Akıllı Sağlık Merkezi, Coventry Üniversitesi, Coventry, BK.

PMID: 34383355
DOI: 10.1111/ijcp.14726

Soyut

Amaç: Enginar takviyesinin karaciğer enzimleri üzerine etkileri üzerine yapılan çalışmaları özetlemek için sistematik bir derleme ve meta-analiz yapılmıştır.

Yöntemler: 05 Haziran 2021 tarihine kadar Medline, Embase, Cochrane Library ve Scopus veritabanları dahil olmak üzere çevrimiçi veritabanları taranarak uygun çalışmalar tespit edildi. Karaciğer enzimleri farklı birimlerde rapor edildiğinden, standartlaştırılmış ortalama farklar (SMD) kullanıldı ve veriler kullanılarak veriler havuzlandı. rastgele etkiler modeli. Heterojenite, yayın yanlılığı ve duyarlılık analizi de değerlendirildi.

Sonuçlar: Sekiz klinik çalışmanın birleştirilmiş analizi, enginar takviyesinin plaseboya kıyasla aspartat aminotransferaz (AST) (P = .001) ve alanin transaminaz (ALT) (P = .016) konsantrasyonunu önemli ölçüde azalttığını ortaya koydu. Alt grup analizi, enginar uygulamasının, alkolik olmayan yağlı karaciğer hastalığı olan hastalarda (AST için P = .003 ve ALT için P < .001) ve fazla kilolu/obez kişilerde ALT'yi (P = .025) önemli ölçüde azalttığını göstermiştir.

Sonuçlar: Enginar takviyesi, özellikle alkolik olmayan yağlı karaciğer hastalığı olan hastalarda, karaciğer enzimlerinde önemli düşüşler ortaya çıkardı.

© 2021 John Wiley & Sons Ltd.

**igokcek** · 29 August 2012, 14:59

ENGİNAR İle Kolesterol Ve Et

Cynara scolymus'un Hipertansif Hastalarda Kan Basıncı ve VKİ Üzerine Etkisi: Randomize, Çift Kör, Plasebo Kontrollü, Klinik Bir Çalışma

Hamid Rıza Ardalani^{1 2}, Parisa Jandaghi³, Aramsadat Meraji⁴, Maryam Hassanpour Moghadam⁵
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Bahçıvanlık Bilimleri Bölümü, Bilim ve Araştırma Şubesi, İslami Azad Üniversitesi, Tahran, İran, hrardalani@gmail.com.
²İlaç Tasarımı ve Farmakoloji Bölümü, Kopenhag Üniversitesi, Kopenhag, Danimarka, hrardalani@gmail.com.
³Çocuk Gelişimi Araştırma Merkezi, Qazvin Tıp Bilimleri Üniversitesi, Qazvin, Iran.
⁴Tıp Fakültesi, Kermanshah Tıp Bilimleri Üniversitesi, Kermanshah, Iran.
⁵Farmasötik Araştırma Merkezi, Eczacılık Okulu, Meşhed Tıp Bilimleri Üniversitesi, Meşhed, İran.

PMID: 31484191
DOI: 10.1159/000502280

Soyut

İngilizce , Almanca
Arka plan: Son araştırmalar, enginarın (Cynara scolymus L.) bazı biyokimyasal kan faktörlerini azaltabileceğini öne sürdü, ancak bu bitkinin kan basıncı (BP) üzerindeki etkinliği henüz araştırılmadı. Bu çalışmada, C. scolymuson BP'nin ve vücut kitle indeksinin (VKİ) hipertansif hastalarda kaptopril'e ek olarak klinik etkinliğini ilk kez belirledik.

Yöntemler: C. scolymus'un yapraklarındaki toplam fenolik içerik ve gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi metabolit profili değerlendirildi. Daha sonra, hipertansif hastalarda C. scolymus'un BP ve BMI üzerindeki etkisini belirlemek için 40 hasta üzerinde bir klinik çalışma gerçekleştirildi. Tedavi grubu, C. scolymus (günde iki kez 500 mg) içeren kapsüller aldı ve plasebo grubu, 8 hafta boyunca nişasta tozu aldı. Çalışmadan önce ve sonra sistolik kan basıncı (SBP), diyastolik kan basıncı ve VKİ belirlendi.

Bulgular: C. scolymus grubunda, plasebo grubuyla karşılaştırıldığında BKİ'de anlamlı bir iyileşme görüldü (p = 0.04).

Sonuçlar: Bulgularımız, zengin bir fenolik ve antioksidan bileşik kaynağı olarak C. scolymus tozu tüketiminin hipertansif hastalarda BMI ve SBP'yi potansiyel olarak iyileştirebileceğini göstermiştir. Bu nedenle, enginarın antihipertansif etkisini doğrulamak veya reddetmek için daha fazla denemeye ihtiyaç vardır.

Anahtar Kelimeler: Enginar; Tansiyon; Vücut kitle indeksi; Cynara scolymus L.; Hipertansiyon; Kilolu.

© 2019 S. Karger AG, Basel.

**igokcek** · 26 September 2012, 12:12

ENGİNAR İle Kolesterol

Kolesterol, Karaciğer, Safra Taşı, Sarılık, Hepatit, KAN Sulandırıcı

Enginar yaprağı suyu hafif hipertansiyonu olan hastalarda antihipertansif etki içerir.

Farshad Roghani-Dehkordi¹, Amir-Farhad Kamkhah
üyelikler yıkılmak üyelik

¹İç Hastalıkları ve Kardiyoloji Anabilim Dalı, Tıp Fakültesi, İsfahan Tıp Bilimleri Üniversitesi, İsfahan, İran. frdehkordi@gmail.com

PMID: 22435514
DOI: 10.3109/19390210903280207

Soyut

Yaşam tarzı değişiklikleri, hipertansiyonun yönetimi ve önlenmesi için etkilidir. Hafif hipertansiyonu (sistolik kan basıncı [SBP]/diyastolik kan basıncı [DBP], 140) olan hastalarda oral konsantre enginar yaprağı suyunun (Cynara scolymus L.; CS) etkinliğini değerlendirmek için randomize, plasebo kontrollü bir çalışma yürüttük. -159/90-99 mmHg). Denekler, 50 ve 100 mg enginar suyu konsantresi alan bir plasebo ve iki ilaç grubuna randomize edildi. 12 hafta sonra, SBP, vaka gruplarında temel verilerle karşılaştırıldığında önemli ölçüde azaldı ve DBP, plasebo grubuyla karşılaştırıldığında başlangıca göre önemli ölçüde daha düşüktü. Hafif hipertansiyonda enginar suyu konsantresi kullanımının kan basıncını düşürücü etkisinin olabileceği kanısına varıldı.

**igokcek** · 15 December 2012, 16:17

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması Ve Kalp Zafiyeti

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması

Cynara scolymus, apoptozu teşvik ederek ve invazyonu sınırlayarak malign plevral mezotelyoma etkiler.

Claudio Pulito , ¹Federica Mori , ¹Andrea Sacconi , ²Luca Casadei , ³Maria Ferraiuolo , ²Maria Cristina Valerio , ³Raffaela Santoro , ¹Frauke Goeman , ²Anna Maidecchi , ⁴Luisa Mattoli , ⁴Cesare Manetti , ³Silvia Di Agostino , ²Paola Muti , ⁵Giovanni Blandino , ^2,⁵ ve Sabrina Strano ^1,⁵
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
¹ Moleküler Kemoprevensiyon Birimi, Moleküler Tıp Alanı, Regina Elena Ulusal Kanser Enstitüsü, Roma, İtalya
² Translasyonel Onkogenomik Birim, Moleküler Tıp Alanı, Regina Elena Ulusal Kanser Enstitüsü, Roma, İtalya
³ Kimya Bölümü, Roma Üniversitesi “La Sapienza”, Roma, İtalya
⁴ Aboca SpA Società Agricola, Sansepolcro, İtalya
⁵ Onkoloji Bölümü, Juravinski Kanser Merkezi, McMaster Üniversitesi, Hamilton, Ontario, Kanada
Yazışma adresi: Sabrina Strano, ti.ofi@onarts İlişkili Veriler

Tamamlayıcı Malzemeler
Git: Soyut

Malign plevral mezotelyoma, plevral mezotelyal astardan kaynaklanan kötü tedavi edilmiş bir neoplazidir. Burada, Cynara scolymus'un yaprak ekstraktının , mezotelyoma hücre hatları üzerinde hem in vitro hem de in vivo olarak geniş antitümör etkiler uyguladığını belgeliyoruz . Cynara scolymus tedavisinin, mezotelyoma hücre dizilerinin hücre büyümesini, göçünü ve tümör aşılanmasını güçlü bir şekilde etkilediğini bulduk . Çarpıcı bir şekilde, Cynara scolymus yaprak ekstresi ile diyetle besleme, mezotelyoma tedavisinde yaygın olarak kullanılan bir ilaç olan pemetrexed'e benzer şekilde mezotelyoma ksenogreftli tümörlerin büyümesini azaltır. Toplu olarak bulgularımız, Cynara scolymus'un yaprak özününmezotelyoma tedavisi için terapötik potansiyele sahiptir.

Anahtar Kelimeler: mezotelyoma, tümör oluşumu, invazyon, yol, apoptoz
Git: GİRİİŞ

Malign plevral mezotelyoma (MPM), plevranın mezotelyal astarından kaynaklanan ve hastalık seyrinin çoğu için bölümlere ayrılmış halde kalan agresif bir tümördür [ 1 ] [ 2 ]. Güncel terapötik yaklaşımlar cerrahi, radyoterapi ve kemoterapiyi içerir. Sisplatin (CDDP) tek başına veya pemetreksed (PMTX) ile birlikte halen mevcut bakım standardını temsil etmektedir [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]. Çoğu katı tümöre benzer şekilde, kazanılan direnç, terapötik yanıtın başarısını engeller. Genel olarak hastanın hayatta kalma süresi 8 ila 18 ay arasında değişmektedir. Ayrıca hastalığın erken saptanmasını sağlayan herhangi bir tanı aracı da yoktur [ 2 ] [ 6]. Asbestin mezotelyoma etiyolojisinde oynadığı rol göz önüne alındığında, bu tümör hala bir meslek hastalığı olarak kabul edilmektedir [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ]. Mezotelyoma, özellikle asbestin hala ihraç edildiği ve yasaklanmadığı gelişmekte olan ülkelerde dünya çapında artan insidansı olan yetim bir hastalıktır [ 9 ] [ 10 ]. İnhalasyondan sonra asbest lifleri plevral boşluklara sızar ve siyah noktalarda birikir. Bu, kanser dönüşümü ile sonuçlanabilecek plevral fibrozun indüklenmesine yol açar [ 11 ] [ 12 ]. Son 50 yılda, doğal ürünler sürekli olarak ilaç keşfi ve geliştirme sürecine katkıda bulunmuştur [ 13].] [ 14 ] [ 15 ] Artan kanıtlar, özütler ve izole edilmiş kimyasallar dahil olmak üzere doğal ürünlerin çok hedefli olduğunu ve kanser gibi kronik hastalıklara yaklaşmak için bir model olarak kabul edilebileceğini göstermiştir. Aslında çoğu doğal ajan, yüksek düzeyde toksisiteye neden olmaz ve aynı anda hücre büyümesi, apoptoz, invazyon, anjiyogenez ve metastaz ile ilgili çoklu sinyal yollarını hedefler [ 16 ] [ 17 ]. Kanser, çoklu sinyal yolaklarının serbestleştirilmesinin bir sonucu olduğundan ve doğal ürünler çok hedefli aktiviteler ortaya çıkardığından, ikincisi insan tümörlerini tedavi etmek için büyük bir potansiyele sahip olabilir [18 ] [ 6]. Asbeste maruz kalma ile hastalığın gelişimi arasındaki uzun süre, kemoprevensiyon veya diyet müdahaleleri için bir fırsat penceresi olabilir. Kahve, resveratrol, kurkumin ve bütein gibi bazı doğal ajanların mezotelyoma hücresel sistemlerinde antikanser aktivite gösterdiği gösterilmiştir [ 2 ] [ 10 ] [ 19 ] [ 19 ] [ 20 ]. Gözlemsel çalışmalar, meyveler, sebzeler, taze ürünler, balık ve deniz ürünleri, fındık, baklagiller/baklagiller ve zeytinyağı gibi karakteristik gıdaların bir kombinasyonunu kapsayan bir Akdeniz diyetine yüksek bağlılığın olduğunu göstermiştir [ 21], genel kanser mortalitesi (%10), kolorektal kanser (%14), prostat kanseri (%4) ve aero sindirim kanseri (%56) riskinde önemli bir azalma ile ilişkilidir [22 ] . Doğada en yaygın fitokimyasallar polifenol sınıflarıdır. Uzun zamandır polifenoller sadece antioksidan özellikleri nedeniyle değerlendirilmiştir. Son veriler, polifenollerin farklı hücre sinyal yollarını etkilediğini ortaya koymuştur. Bu aynı zamanda mikroRNA'ların modülasyonu yoluyla gerçekleşir ve böylece kodlanmış proteinleri farklı yolların kritik bileşenleri olan mRNA hedeflerinin ekspresyonunu etkiler [ 23 ] [ 23 ]. Globe enginarı ( Cynara scolymus ), Akdeniz diyetinin temel bir bileşenidir [ 24]. Enginarların yenilebilir kısımlarının (iç ve ara brakteli kaplar) ve yapraklarının güçlü bir polifenol fraksiyonları kaynağı olduğu bildirilmiştir. Son veriler, polifenollerin farklı hücre sinyal yolaklarını etkilediğini ve antikanser etkilerini karsinojenezin farklı aşamaları boyunca sergilediğini ortaya koymuştur [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ]. Ayrıca, Cynara scolymus'un ana bileşenleri, kafeoilkinik asit türevleri (sinarin ve klorojenik asit), flavonoidler (luteolin ve apigenin) ve acılardır (sinaropikrin) [ 28 ] [ 29 ] [ 28 ]. Çeşitli in vitro ve in vivo deneyler göstermiştir kiCynara scolymus , koleretik, hepatoprotektif, antibakteriyel, antienflamatuar, antitrombotik ve hipokolesterolemik özellikler sergiler [ 30 ] [ 31 ] [ 32 ] [ 33 ]. Enginar ekstraktlarının kanser hücrelerinde apoptozu ve sitotoksik etkileri indüklediği rapor edilmiştir [ 34 ] [ 35 ] [ 36]. Bu raporda, enginar yaprağı ekstraktının anti-kanser aktivitesini doğrudan deneysel testler yoluyla, ekstraktın kanser metabolik değişiklikleri üzerindeki normalleştirici etkisi ve sinyal yolları üzerindeki etkisi nedeniyle ekstraktın antitümöral aktivitesinin kanıtı yoluyla göstermeyi amaçladık. onkojenik öneme sahiptir. Enginar yaprağı ekstraktlarının (ABOCA şirketi http://www.aboca.com tarafından yöntemler bölümünde belirtildiği gibi hazırlanan dondurularak kurutulmuş ekstrakt ) in vitro ve in vivo olarak ciddi şekilde etkilediğini bulduk.mezotelyoma tümör oluşumu. Aslında, enginar yaprağı ekstresi, çeşitli mezotelyoma hücre dizilerinin hücre çoğalmasını ve koloni oluşumunu önemli ölçüde azaltır. Ayrıca apoptozu teşvik eder ve mezotelyoma hücre göçünü ve istilasını kısıtlar. Ayrıca aşılamayı bozar ve ksenogreft mezotelyomaların tümör hacmini azaltır. Bu etkiler, pemetrexed tarafından indüklenenlere benzerdir. Protein dizisi analizleri, enginar yaprağı ekstraktının, antitümör aktivitelerinin kritik aracıları olabilecek pemetrexed veya cisplatin proteinlerine göre farklı protein setlerini aktive ettiğini ortaya koymaktadır.

Git: SONUÇLAR

Enginar yaprağı ekstresi, MPM hücre büyümesini ve çoğalmasını engeller

Öncelikle enginar ekstraktının mezotelyoma hücre büyümesi ve çoğalması üzerindeki etkilerini test etmeyi amaçladık. Bu amaçla, MSTO-211H, MPP-89 ve NCI-H28 mezotelyoma hücre dizilerini ve dönüştürülmemiş mezotel hücrelerini, HMC'yi tedavi ettik (Şekil1A–1C) 72 saat boyunca artan konsantrasyonlarda (3 ila 200 μg/ml aralığında) enginar yaprağı ekstresi ile. MPM hücrelerinde ekstrakt fitokompleksi için yarı maksimum büyüme inhibisyonu konsantrasyonunu (IC50) belirledik (Şekil1A–1C, Ek Tablo 1 ). Enginar ekstraktının hücre canlılığını doza bağlı bir şekilde inhibe ettiğini bulduk (Şekil1A–1C). Ayrıca, enginar özü ile muamele edilen MSTO-211H hücreleri, Ek Şekil 1'de gösterildiği gibi hem kısa vadeli bir analizde hem de uzun vadede hücresel morfolojide bir değişiklik gösterdi . Buna karşılık, HMC hücreleri, enginar ekstraktının büyümeyi inhibe edici etkisine karşı daha dirençliydi (Şekil1A–1C). Daha sonra, özütün çıkarılmasından sonra mezotelyoma hücrelerinin koloni oluşturma yeteneğini değerlendirmek için bir koloni oluşturma testi gerçekleştirdik. Enginar yaprağı ekstraktının MSTO-211H, MPP-89 ve NCI-H28 hücrelerinin koloni oluşturma yeteneğini inhibe ettiğini bulduk (Şekil1D–1F). Toplamda bu bulgular, enginar yaprağı ekstresi tedavisinin, mezotelyoma hücre hatlarının hücre proliferasyonu ve koloni oluşturma yeteneği üzerinde oldukça etkili olduğunu göstermiştir.

Şekil 1
Enginar yaprağı ekstresi, MPM hücrelerinin büyümesini doza bağlı bir şekilde güçlü bir şekilde etkiler.
A, B, C. MPM hücrelerinin canlılığı (MSTO-211H, MPP89, NCI-H28) ve normal dönüştürülmemiş mezotelyal hücre hattı (HMC) 72 saat boyunca Cynara scolymus yaprak özleri ile işlendi. IC-50 değeri, her panelde noktalı bir çizgi ile gösterildi. Veriler, ortalama +/− SD olarak temsil edilir. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. D, E, F. Koloni oluşturma deneyi. Yinelenen deneylerden elde edilen ortalama koloni sayımlarını gösteren histogramlar. Çubuklar, üç bağımsız deneyin ortalamasını gösterir. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. Enginar yaprağı ekstresi, MPM hücre hatlarının apoptozunu indükler

Apoptozun uyarılması, doğal ajanlar tarafından başarılı kanser tedavisi için çok önemli bir olaydır. Bu amaçla, farklı yaklaşımlar kullanarak enginar yaprağı ekstraktının mezotelyoma hücre dizilerinin apoptozunu indükleyip indüklemediğini değerlendirdik. Sitoflorimetrik analiz, enginar ekstraktının MSTO-211H ve MPP-89 hücrelerinde bir subG1 zirvesinin görünümünü indüklediğini ortaya çıkardı. Bu etki doza bağımlıydı (Şekil2A–2D). Ayrıca, 24 saat boyunca enginar yaprağı ekstresi ile muamele edilen hücreler, doza bağlı bir şekilde Annexin V-pozitif hale geldi (Şekil2E–2F). Ayrıca ekstrakt işleminin kaspaz 3, kaspaz7 ve Parp'ın bölünmesinin artmasına yol açtığını da bulduk (Şekil(Şekil2G).2G). MSTO-211H ve HMC hücrelerinde gerçekleştirilen kuyruklu yıldız tahlili, Cisplatin (20 saat için 7, 5 ug/ml) işleminin her iki hücre hattında da DNA hasarını indüklediğini ortaya çıkardı (Ek Şekil 2A, 2B ) . İlginç bir şekilde, apoptotik olmayan konsantrasyonda, 3 μg veya 6 μg/ml kullanılan enginar yaprağı ekstraktına maruz kalma, DNA hasarına neden olmadı ( Ek Şekil 2A, 2B ) ve HMC hücrelerinde CDDP tarafından indükleneni azalttı ( Ek Şekil 2A ) . Genel olarak, bu sonuçlar enginar yaprağı ekstraktının apoptozu indükleyerek MPM hücre hatlarının hücre yaşayabilirliğini etkilediğini açıkça göstermektedir.

şekil 2
Enginar yaprağı ekstresi, MPM hücrelerinin apoptozunu indükler
A, B, C, D. 48 veya 72 saat boyunca belirtilen enginar özü dozlarıyla tedavi edilen MPM hücrelerinin (MSTO-211H ve MPP-89) subG1 hücre popülasyonunun yüzdesi. Hata çubukları, ortalama +/− SD'yi temsil eder. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. E, F. Annexin V+/PI−'nin araç üzerindeki yüzdesini gösteren histogramlar. MPM hücreleri (MSTO-211H, MPP-89), 24 için belirtilen enginar özü dozlarında tedavi edildi. Hata çubukları, ortalama +/− SD'yi temsil eder. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. G.MSTO-211H ve MPP-89 hücre hatlarından elde edilen tam hücre lizatlarının temsili protein jel lekesi, 24 saat boyunca 100 μg/ml enginar yaprağı ekstresi ile muamele edilmiş ve anti-bölünmüş parp, anti-kaspaz-3 ve anti-kaspaz- ile boyanmıştır. 7 antikor. Aktin boyama, yükleme kontrolü olarak kullanıldı. Enginar yaprağı ekstresi, mezotelyoma hücre hatlarının göçünü ve istilasını ciddi şekilde bozar

Diyet fenolik asitlerinin, monofenollerin ve polifenollerin, farklı kanser hücre dizilerinin istilacı ve metastatik davranışlarına karşı önleyici özelliklere sahip olduğu daha önce bildirilmişti.

Bu amaçla, enginar yaprağı ekstraktının MPM hücre dizilerinin göçünü ve istilasını bozup bozmadığını araştırdık. İlk olarak, çizik yara kapama testi yaptık (Şekil3A, 3B) ekstraktın farklı, apoptotik olmayan konsantrasyonları ile işlenmiş MPM hücre hatlarında. Enginar ekstraktının, MSTO-211H ve MPP89'un migrasyonunu zamana bağlı bir şekilde inhibe ettiğini bulduk, çünkü yara kapanması kontrol hücrelerininkinden daha yavaş gerçekleşti (Şekil3A–3B). Nitekim 6 μg/ml ve 12 μg/ml konsantrasyonundaki enginar yaprağı ekstraktı MSTO-211H hücre migrasyonunu sırasıyla %50 ve %35 oranında ve ayrıca MPP89 hücre hattında inhibe etmiştir (Şekil3A–3B). İkinci olarak, farklı konsantrasyonlarda ekstrakt (6 μg ve 12 μg/ml) varlığında kaplanmamış 8 mm gözenek boyutu filtreli 24 oyuklu bir oda kullanarak MSTO-211H hücrelerinde invazyon testi gerçekleştirdik. Şekilde gösterildiği gibiŞekil3C,3C, enginar yaprağı ekstresi, MSTO-211H hücrelerinin istilasını önemli ölçüde azalttı. Toplamda bu sonuçlar, enginar ekstraktının mezotelyoma hücre dizilerinin göçünü ve istilasını engellediğini gösterdi.

Figür 3
Enginar yaprağı ekstresi, MPM hücrelerinin göçünü ve istilasını bozar
A, B. Sol taraf: 36 saat boyunca 12,5 μg/ml enginar yaprağı ekstresi ile işlenen MSTO-211H ve MPP-89 hücrelerinden yara iyileşmesi kapatma deneylerinin temsili mikrografları. Sağ taraf: farklı tedavi sürelerinden (0, 12, 24 ve 36 saat) sonra araç veya enginar özü (6 μg ve 12 μg) ile tedavi edilen hücrelerin iyileşme kapatma etkinliğini gösteren histogram. Çubuklar, üç bağımsız deneyin ortalamasını gösterir. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. C. İstilacı hücrelerin araç üzerindeki yüzdesi. MSTO-211H hücreleri, belirtilen ekstrakt dozlarında işlendi. Hata çubukları, ortalama +/− SD'yi temsil eder. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. Enginar yaprağı ekstresi, in vivo tümör büyümesini etkiler

Ekstraktın antitümör etkilerini in vivo olarak değerlendirmeyi amaçladık . İlk olarak, enginar yaprağı ekstraktının MSTO-211H hücrelerinin aşılanmasını etkileyip etkilemediğini değerlendirdik. Bu amaçla, MSTO-211H hücreleri, 24 saat boyunca 50 ug/ml'de araç veya enginar özü ile muamele edildi. Hücre süspansiyonları, CD1 farelerine deri altından enjekte edildi. Şekilde gösterildiği gibiŞekil4A,4A, CD1 farelerine aşılandığında, aşılanmış ekstraktla ön işleme tabi tutulmuş hücreler, araçla tedavi edilmiş hücrelerden daha az etkili bir şekilde aşılanmıştır. Daha sonra, CD1 çıplak farelere deri altından implante edilen ksenogreftli mezotelyomaların büyümesini inhibe etmek için özütün etkinliğini değerlendirdik. ^{Bu amaçla, CD1 farelerine deri altından MSTO-211H (2 x 106} ) nakledildi . Tümör ilerlemesinin kanıtında, fareler rastgele beş farklı gruba ( n = 6) ayrıldı ve içme suyunda farklı konsantrasyonlarda (25, 50 ve 75 mg/ml) araç veya enginar yaprağı ekstresi ile içecek verildi (Tablo(Tablo 2).2). Enginar yaprağı ekstraktının 3 hafta boyunca diyetle beslenmesi, ksenogreft mezotelyoma tümörlerinin büyümesini önemli ölçüde ve doza bağlı olarak azalttı (Şekil(Şekil4B).4B). Bu etki, mezotelyoma tedavisinde yaygın olarak kullanılan bir ilaç olan PMTX tarafından indüklenene benzerdi (Şekil(Şekil4B).4B). Proliferasyon indeksini değerlendirmek için ksenograflanmış tümörler Ki67 ekspresyonu için boyandı. Çarpıcı bir şekilde, ekstraktla tedavi edilen farelerden türetilen ksenogreftli tümörlerin, araçla tedavi edilenlere göre önemli ölçüde daha düşük Ki67 ekspresyonu sergilediğini bulduk (Şekil4C, 4D). Ayrıca enginar yaprağı ekstraktlarının MSTO-211H ve NCI-H28 mezotelyoma hücre hatlarını pemetrexed kaynaklı hücre öldürmeye duyarlı hale getirdiğini de bulduk ( Ek Şekil 3A-B ). Benzer şekilde, 75 mg/ml'de enginar yaprağı ekstresi, ksenogreftlenmiş tümörlerin tümör hacmi üzerinde pemetrexed'in antitümör etkisini artırdı ( Ek Şekil 3C ). Toplamda bu bulgular, enginar yaprağı ekstraktının mezotelyoma hücre dizilerinin in vivo büyümesini etkileyebileceğini göstermektedir .

Şekil 4
Enginar yaprağı ekstresi, in vivo mezotelyoma tümör büyümesini inhibe eder
A. Enginar özü, MSTO-211H hücrelerinin aşılanmasını engeller. ^{2 x 106} MSTO-211H hücrelerinin süspansiyonları , araç veya enginar yaprağı ekstresi (50 ug/ml) ile 24 saat ön işleme tabi tutuldu ve Malzeme ve Yöntemler bölümünde açıklandığı gibi CD1 farelerine deri altından enjekte edildi. Farelere başka bir tedavi uygulanmadı. Yatay çubuklar aracın ortalama tümör hacmini ( n = 6) ve enginar ekstraktı ( n = 6) ile işlenmiş aşılanmış tümörleri temsil eder. Tümörler, MSTO-211H hücrelerinin enjeksiyonundan 24 gün sonra toplandı. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. B. Enginar yaprağı ekstresi içeceği, in vivo mezotelyoma tümörü ilerlemesini inhibe eder. Farelerin tümör hacimleri (n = 6) içme suyunda araç, pemetrexed veya enginar özü ile işlendiği rapor edilmiştir. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. C. Eksize edilen tümörlerin anti-Ki-67 antikoru ile boyanmış temsili mikrografları. Ölçek çubuğu, 100 mikron. D. Her tümör için rastgele seçilen yedi alanda skorlanan Ki-67 pozitif çekirdeklerin yüzdesini gösteren histogramlar. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. Tablo 2

tedavi şeması

Grup 1

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

-

Grup 2

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

-

Enginar (20 ug/ml)

işletim sistemi

içilebilir su

Grup 3

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

-

Enginar (50 ug/ml)

işletim sistemi

içilebilir su

Grup 4

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

-

Enginar (75 ug/ml)

işletim sistemi

içilebilir su

Grup 5

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

Pemetrexed (100 mg/kg)

IP

5 ardışık gün

Grup 6

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

Pemetrexed (100 mg/kg)

IP

5 ardışık gün

Enginar (20 ug/ml)

işletim sistemi

içilebilir su

Grup 7

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

Pemetrexed (100 mg/kg)

IP

5 ardışık gün

Enginar (50 ug/ml)

işletim sistemi

içilebilir su

Grup 8

6

MSTO

2*10^6

SC

0,2 ml (Matrijel)

Tümör görünümünden sonra

Pemetrexed (100 mg/kg)

IP

5 ardışık gün

Enginar (75 ug/ml)

işletim sistemi

içilebilir su

Ayrı bir pencerede aç
^{CD1 fareleri, MSTO-211H (2 x 106} ) ile deri altından nakledildi . Tümör ilerlemesinin kanıtlanmasında (tümör hacmi 60 mm3'e ulaştığında ⁾ , fareler, tabloda açıklandığı gibi plaseboya ve enginar yaprağı ekstresi ile tedavi edilen gruplara rastgele ayrıldı. Bir kontrol grubu fareye pemetrexed 100 mg/kg dozunda art arda beş gün intraperitoneal olarak enjekte edildi. Enginar yaprağı ekstresi, MSTO-211H hücrelerinin metabolik profillerinde değişikliklere neden olur

Metabolik değişiklikler bir kanser hücresinin ayırt edici özellikleri arasında olduğundan, enginar yaprağı ekstraktının MSTO-211H hücrelerinin metabolizmasını etkileyip etkilemediğini değerlendirmeyi amaçlıyoruz. ^{MSTO-211H hücre kültürü ortamının 1H} -NMR metabolomik profilleri, enginarla tedavi edilen ve araçla tedavi edilen hücreler arasında önemli farklılıklar gösterdi. Başlangıçta NMR verilerini, işlenmiş ve işlenmemiş ortam numunelerinden oluşan bir veri kümesi üzerinde gerçekleştirilen Temel Bileşen Analizi (PCA) gibi denetimsiz bir yaklaşımla araştırdık. Şekilde bildirilen sonuçlarŞekil5A5APC1'de iki grup arasındaki önemli farklılıkları vurguladı ( p = 0.013). Daha sonra, numuneler arasındaki ayrımda önemli bir katkısı olan değişkenleri (metabolitler) belirlemek için, O-PLS-DA'dan gelen yükleme değerlerini 0,8'lik bir eşik ile analiz ettik (Şekil5B, 5C). LV1, en yüksek korelasyon seviyelerine sahip şu değişkenleri içeriyordu: pozitif yüklü 3-metil-2-oksovalerat, asetat, N-asetil grupları, glutamax ve süksinat ve negatif yüklü arginin, piruvat, tirozin ve fenilalanin. Bu nedenle, bu metabolitlerin net dengesi dikkate alındığında LV1, enginar ekstraktının daha yüksek arginin, piruvat, tirozin ve fenilalanin tüketimini ve daha düşük glutamax ve süksinat tüketimini indüklediğini gösterdi. Ayrıca, enginar özü ile muamele edilmiş hücreler, araç sırtlı olanlara göre daha yüksek 3-metil-2-oksovalerat, asetat ve N-asetil grupları üretimi sergiledi. Bu, enginar yaprağı ekstraktına maruz kalmanın esas olarak sitrat döngüsünü (TCA döngüsü), arginin ve prolin metabolizmasını, glutamin ve glutamat metabolizmasını, alanini,(Tablo 33).

Şekil 5
MSTO-211H hücre dizilerinin enginar yaprağı tedavisine metabolik tepkisi
PCA A. ve O-PLS-DA B. modelleri, enginar özü ile işlenmiş ve araçla işlenmiş MSTO-211H hücre kültürlerinden alınan ortam örneklerinin 1H-NMR veri kümesi üzerine kurulmuştur. Puan grafikleri, iki hücre grubu arasındaki metabolik farklılıkları gösterir. Panel C , O-PLS-DA modelinden iki grup arasındaki en ayırt edici metabolitlerin araçla işlenmiş numunelere göre kat değişikliklerini gösterir (üç bağımsız deney için +/− SD anlamına gelir; ( t -testi): p < 0,05) . 3-MOV, 3-Metil-2-oksovalerat (p); Arg, arginin (c); Ac, asetat; N-Asetil, N-asetil grubu; Glutamaks, glutamaks (c); Pir, piruvat (c); Suc, süksinat; Tyr, tirozin (c); Phe, fenilalanin (c). Her bir metabolit için “c” ve “p” sırasıyla tüketimi veya üretimi gösterir. Tablo 3

OPLS-DA yüklemelerinin analizi ile belirlendiği üzere MSTO-211H hücrelerinde enginar yaprağı ekstresi tarafından bozulan metabolik yollar

3-Metil-2-oksovalerat	daha yüksek üretim	Valin, lösin ve izolösin bozunması
arginin	daha yüksek tüketim	Arginin ve Prolin metabolizması
Alanin, aspartat ve glutamat metabolizması
Glisin, serin ve treonin metabolizması
Sitrat döngüsü (TCA döngüsü)
N-asetil grubu	daha yüksek üretim	Arginin ve prolin metabolizması
Amino şeker ve nükleotid şeker metabolizması
Alanin, aspartat ve glutamat metabolizması
Asetat	daha yüksek üretim	Glikoliz/Glukoneogenez
piruvat metabolizması
Yağ asidi metabolizması
Glutamax	daha düşük tüketim	D-Glutamin ve D-glutamat metabolizması
Pürin metabolizması
Pirimidin metabolizması
Alanin, aspartat ve glutamat metabolizması
Arginin ve Prolin metabolizması
piruvat	daha yüksek tüketim	piruvat metabolizması
Sitrat döngüsü (TCA döngüsü)
Glikoliz
Pentoz fosfat yolu
süksinat	daha düşük tüketim	Sitrat döngüsü (TCA döngüsü)
Oksidatif fosforilasyon
Alanin, aspartat ve glutamat metabolizması
tirozin metabolizması
fenilalanin metabolizması
Karbon metabolizması
tirozin	daha yüksek tüketim	tirozin metabolizması
fenilalanin	daha yüksek tüketim	fenilalanin metabolizması

Ayrı bir pencerede aç
^* Metabolitler, Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi'nde (Sürüm 69.0, 1 Ocak 2014; KEGG, http://www.genome.jp/kegg ) belirtildiği gibi ilgili biyokimyasal yolaklarıyla eşlenmiştir. Enginar yaprağı ekstresi antitümöral aktivite, farklı sinyal yollarına etki eder

Enginar ekstresi mezotelyoma hücre dizileri üzerinde geniş anti-tümör etkiler sergiliyor gibi göründüğünden, hangi sinyal yollarının dahil olabileceğini değerlendirmeyi amaçladık. Bu amaçla, aralarında proliferasyon, apoptoz, istila, göç, metabolizma ve anjiyogenez bulunan kanserde değiştirilmiş 30'dan fazla sinyal yolunda yer alan anahtar proteinleri temsil eden 1318 antikor içeren bir fosfo-antikor dizisi gerçekleştirdik. MSTO-211H hücreleri, 24 saat boyunca enginar özü (50 ug/ml) veya araç ile muamele edildi ve türetilen protein lizatları, antikor dizisini araştırmak için kullanıldı. Şekilde gösterilen ısı haritasıŞekil6A6Aifade veya fosforilasyon seviyeleri enginar yaprağı özü muamelesi üzerine değişen proteinlerin sinyal yoğunluklarını temsil ediyordu. Bunların arasında, p70S6k (fosfo-Ser 418), NMDAR1 (Ab-897), CAMK1-a (Ab-177), HDAC6 (fosfo-Ser22), ACK1 (fosfoTyr284), p38 MAPK'yı içeren bir grup protein bulduk. (fosfor Tyr-182), araçla karşılaştırıldığında ekstrakt işlemi üzerine yukarı regüle edilmiş ve fosforile edilmiştir (Şekil(Şekil6C).6C). Çarpıcı bir şekilde, enginar yaprağı ekstresi tedavisi, p53, BAX p38 ve Caspase 3 gibi anahtar proteinleri aktive ederek apoptoza ve aşağı regüle sağkalıma ve aralarında c-Abl, STAT1, AKT ve VEGFR2'nin de bulunduğu pro-tümörijenik faktöre yol açtı (Şekil(Şekil6C)6C) [ 37 ] [ 38 ]. Pemetrexed veya Cisplatin ile tedavi edilen MSTO-211H hücrelerindeki modüle edilmiş proteinlerin modelini karşılaştırarak, sırasıyla iki ilaca kıyasla enginar ekstraktının farklı ve ortak protein setlerini modüle ettiğini bulduk (Şekil(Şekil6B6Bve TabloTablo4).4). Enginar tedavisi ile yukarı regüle edilen proteinler arasında, GSK 3a-β (Ab-216/279), PI3K/PTEN/AKT/mTORC1, Ras/Raf/MEK/ERK, Hedgehog, Notch ve WNT. WNT sinyal yolunun anormal aktivasyonu, mezotelyoma tümörijenezinde rol oynadığından, MPM hücre hatlarının enginar özü ile yapılan tedavinin, bu yolun çeşitli bileşenlerinin ekspresyonunu modüle edip etmediğini araştırdık. Enginar yaprağı ekstraktının iki mezotelyoma hücre hattında β-katenin nükleer boyanmasını azalttığını bulduk (Şekil7A–7B). Bu, LEF1, FGF8, COX2, MMP2 ve VEGF transkriptleri (Şekil(Şekil7C)7C) [ 39 ]. Toplamda bu bulgular, enginar yaprağı ekstraktının mezotelyoma hücre hatları üzerindeki geniş antitümör aktivitelerinin, insan kanserlerinde yaygın olarak değiştirilen çeşitli sinyal yollarının modülasyonu yoluyla meydana gelebileceği olasılığını vurgulamaktadır.

Şekil 6
Enginar yaprağı ekstresi ile muamele edilmiş MSTO-211H hücrelerinin fosfoprotein analizi
A. Taşıt veya enginar özü (50 μg/ml) ile 24 saat muameleden sonra, lekeli 1318 proteinlerinin protein ve fosfo-protein seviyesinin ısı haritası genel yoğunlukları. Kırmızı ve mavi gölgeler, sırasıyla yüksek ve düşük veya tespit edilemeyen protein seviyelerini gösterir. B. Enginar özü (50 μg/ml), sisplatin (CDDP, 8 μM) veya pemetrexed (PMTX, 30 μM) ile 24 saatlik tedaviden sonra sonuçları düzensizleşen proteinlerin ve fosfo-proteinlerin sayısını gösteren Venn diyagramı. C. 24 saat enginar özü muamelesinden sonra serbest bırakılan tüm proteinlerin ve fosfo-proteinlerin listesi. Kırmızı ve mavi renkler sırasıyla yukarı ve aşağı düzenlemeyi gösterir. Tablo 4

CDDP, PMTX veya enginar yaprağı ekstresi tedavisi üzerine düzensizleştirilmiş veya fosforile edilmiş proteinlerin listesi

-PKC teta (Ab-538)
-NFkB-p105/p50 (Phospho-Ser337)
-LYN (Ab-507)
-MAPKAPK2 (Ab-334)
-FGFR1 (Ab-654) -Abl1
(Ab-204)
-DAXX ( Ab-668)
-IKK-a/b (Ab-176/177)
-RAD52 (Ab-104)
-Merlin (Ab-10)
-Rb (Phospho-Ser780)
-MAPKAPK2 (Phospho-Thr334)
-Ephrin B1/B2 /B3 (Phospho-Tyr324)
-HCK (Ab-410)
-DAXX (Phospho-Ser668)
-AKT1 (Ab-129)
-CD32 (FcgammaRIIb) (Ab-292)
-NFkB-p65 (Phospho-Ser468)
-NFkB- p100 (Phospho-Ser872)
-RapGEF1 (Phospho-Tyr504)
-FLT3 (Phospho-Tyr969)
-BAX (Ab-167)
-HDAC1 (Ab-421)
-Kaspaz-3 (Ab-150)
-Mst1/Mst2 (Ab- 183)
-p53 (Phospho-Ser9)
-SREBP-1 (Phospho-Ser439)
-PFKFB2 (Phospho-Ser483)
-CASP1 (Ab-376)
-GRB10 (Ab-67)
-Tirosin Hidroksilaz (Phospho-Ser31)
-PAK2 (Ab-192)

-Ezrin (Phospho-Tyr478)
-EPB41 (Ab-418/660)
-Dok-1 (Phospho-Tyr362)

-HDAC6 (Phospho-Ser22)
-ACK1 (Phospho-Tyr284)
-P38 MAPK (Phospho-Tyr182)
-P70S6K (Phospho-Ser418)
-GSK3a-b (Ab-216/279)
-CaMK1-a (Ab-177)
- NMDAR1 (Ab-897)
-Trk A (Phospho-Tyr791)
-eNOS (Phospho-Ser1177)
-BAX (Ab-167)
-P38 MAPK (Ab-322)
-Kaspaz-3 (Ab-150)
-CD19 (Ab- 531)
-Mst1/Mst2 (Ab-183)
-p53 (Phospho-Ser9)
-SREBP-1 (Phospho-Ser439)
-MAP3K7/TAK1 (Ab-439)
-PFKFB2 (Phospho-Ser483)
-CASP1 (Ab-376)
-GRB10 (Ab-67)
-'Tirozin Hidroksilaz (Fosfo-Ser31)
-IkB-alfa (Fosfo-Ser32/36)
-PAK2 (Ab-192)

-Histone H3.1 (Phospho-Ser10)
-HSL (Phospho-Ser552/563)
-Hsp90 yardımcı refakatçi Cdc37 (Phospho-Ser13)
-AKT (Phospho-Ser473)
-PKA CAT (Phospho-Thr197)
-DAB1 (Fosfo- Tyr220)
-VEGFR2 (Phospho-Tyr1059)
-AKT1 (Ab-308)
-EPHB1/2 (Ab-594/604)
-Opioid Reseptörü (Ab-375)
-Amiloid beta A4 (Phospho-Thr743/668)
-c-Abl (Phospho-Tyr412)
-COT (Phospho-Thr290)
-KSR (Phospho-Ser392)
-Zap-70 (Phospho-Tyr493)
-STAT1 (Phospho-Ser727)
-ACC1 (Phospho-Ser79)
-CDC25B (Phospho-Ser353)
- BTK (Phospho-Tyr550)
-NFkB-p65 (Phospho-Ser468)
-Dok-1 (Phospho-Tyr362)
-ATP-Sitrat Liyaz (Phospho-Ser454)

-VEGFR2 (Phospho-Tyr1054)
-HER2 (Ab-877)
-P38 MAPK (Ab-180)
-Ras-GRF1 (Phospho-Ser916)
-Smad2 (Ab-245)
-RapGEF1 (Phospho-Tyr504)
-FLT3 (Fosfo- Tyr969)
-BAX (Ab-167)
-P38 MAPK (Ab-322)
-Kaspaz-3 (Ab-150)
-CD19 (Ab-531)
-Mst1/Mst2 (Ab-183)
-p53 (Phospho-Ser9)
- SREBP-1 (Phospho-Ser439)
-MAP3K7/TAK1 (Ab-439)
-PFKFB2 (Phospho-Ser483)
-CASP1 (Ab-376)
-GRB10 (Ab-67)
-Tirozin Hidroksilaz (Phospho-Ser31)
-IkB-alfa (Phospho-Ser32/36)
-PAK2 (Ab-192)

-Smad1 (Ab-465)
-Sitokeratin 18 (Ab-52)
-HER2 (Phospho-Tyr877)
-EGFR (Phospho-Tyr1092)
-G3BP-1 (Phospho-Ser232)
-MEK1 (Phospho-Ser298)
-Smad3 (Ab- 213)
-Tau (Phospho-Ser356)
-Tau (Phospho-Thr205)
-Androjen Reseptörü (Phospho-Ser213)
-NMDAR1 (Phospho-Ser897)
-PLCG1 (Phospho-Tyr1253)
-Rb (Phospho-Ser807)
-Synaptotagmin (Phospho- Ser309)
-p21Cip1 (Ab-145)
-Smad1 (Phospho-Ser465)
-VAV2 (Ab-142)
-Dok-1 (Phospho-Tyr362)
-ATP-Sitrat Liyaz (Phospho-Ser454)

Ayrı bir pencerede aç
Sonuçları Cisplatin, Pemetrexed veya enginar özü muamelesi tarafından araçla karşılaştırıldığında indüklenen veya azaltılan proteinlerin listesi gösterilmektedir. İtalik olarak, birden fazla işlemde modüle edilen proteinler rapor edilmiştir.

Şekil 7
Enginar yaprağı ekstresi, Wnt/β-katenin sinyalini azaltır
AB. MSTO-211H A ve MPP-89 hücreleri B'nin β-katenin pozitif çekirdeklerinin/toplam çekirdeklerinin yüzdesini gösteren histogramlar, araç veya enginar ekstraktı (50 ug/ml) ile 24 saat süreyle işlendi. Çubuklar, üç bağımsız deneyin ortalamasını gösterir. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05. C. Araç veya enginar yaprağı ekstraktı ile işlenmiş MSTO 211H hücrelerinden (50 μg/ml, 24 saat) belirtilen Wnt/β-katenin hedef genlerinin ifadesi için Q-PCR. Çubuklar, üç bağımsız deneyin ortalamasını gösterir. İstatistikler ( t -testi): p < 0.05.

Git: TARTIŞMA

Malign plevral mezotelyoma son derece nadir, oldukça ölümcül bir tümördür: mezotelyoma mevcut kemoterapötik ajanlara karşı oldukça dirençlidir, bu nedenle tedavi edilen hastaların hastalıksız hayatta kalma oranı çok zayıftır. Burada Enginar yaprağı ekstrelerinden elde edilen bir fitokompleksin plevral mezotelyoma malignitesini etkileyip etkilemediğini araştırdık. Enginar fenol ekstraktlarının apoptozu destekleyebileceği ve farklı kanser hücre dizilerinin invazivliğini bozabileceği daha önce bildirilmişti [ 34-36 ]. Enginar ekstraktının in vitro ve in vivo etkili olduğunu bulduk.MPM büyümesini, göçünü ve istilasını güçlü bir şekilde etkileyerek geniş bir anti-tümör etkisi. Yeni nesil sekans teknolojileri, tümör manzarasının deşifre edilmesine ve tümör heterojenliğinin incelenmesine muazzam bir şekilde katkıda bulunmuştur. Bu ayrıca, kanserin çok çeşitli genetik ve epigenetik değişikliklerin bir sonucu olduğunu ortaya koymuştur. Tek kimyasal maddeler biçimindeki modern ilaçlar, bulaşıcı hastalıklar gibi akut durumların tedavisinde başarılı olmuştur. İlaç eylemi hızlı ve öngörülebilir olup, kritik bir durumun kısa sürede olumlu bir şekilde çözülmesine yol açar. Kanser, tip 2 diyabet ve kardiyovasküler hastalıklar gibi karmaşık kronik durumların tedavisinde durum belirgin şekilde farklıdır. Özellikle kanser gelişimi göz önüne alındığında, karsinojenez süreci çok adımlıdır (yani, biriken genetik ve epigenetik değişikliklerden kaynaklanır), çok yollu (yani, büyüme sinyallerinde kendi kendine yeterlilik, büyüme karşıtı sinyallere karşı duyarsızlık, apoptozdan kaçınma, sınırsız replikasyon potansiyeli, doku invazyonu ve metastaz ve süreklilik gibi çoklu fonksiyonel yollar söz konusudur) anjiyogenez) ve multifokal (hem multiklonal - örneğin alan kanserleşmesi - hem de intraepitelyal yayılmaya yol açan klonal genişleme). Vaka kontrol ve kohort çalışmaları da dahil olmak üzere 250'den fazla nüfusa dayalı çalışma, günde yaklaşık beş porsiyon meyve ve sebze yiyen kişilerin kansere, özellikle sindirim ve solunum yolu kanserlerine yakalanma riskinin yaklaşık yarısının olduğunu göstermektedir. iki porsiyondan az yiyin. NCI, kanseri önleyici özelliklere sahip yaklaşık 35 bitki bazlı gıda tanımlamıştır. Bunlara sarımsak, soya fasulyesi, zencefil, soğan, zerdeçal, domates ve turpgiller (örneğin brokoli, lahana, karnabahar ve Brüksel lahanası) dahildir. Bu nedenle, bitkiler, bazıları farmakolojik olarak aktif, diğerleri atıl, ancak antikanser ajanları olarak etkinliği güçlendirmek için aktif maddelerle hala potansiyel olarak etkileşime giren çok sayıda madde içerir. Belirli bir bitkinin antikanser ajanı olarak etkililiği, çoklu hedefleme aktivitesi ile birlikte karmaşıklığına (bileşen maddelerin sayısı) bağlanabilir. Toplamda bu, çeşitli kanser yollarının birlikte çözülmesine izin verebilir. Uyumlu bir şekilde, MPM hücrelerinin hem metabolomik hem de antikor dizisi analizi, enginar yaprağı ekstraktının aynı anda farklı sinyal yollarını etkilediğini ortaya çıkardı. Ekstraktın, LEF-1, FGF18, COX-2, MMP2 ve VEGF gibi hedef genlerinin ekspresyonunun aşağı regülasyonu ile eşleşen β-katenin nükleer ekspresyonunu etkilediğini bulduk. β-katenin'in doğrudan hedeflenmesinin, mezotelyoma hücre dizilerini sitotoksik ilaçlarla tedaviye duyarlı hale getirdiği daha önce gösterilmiştir.40 ]. WNT, mezotelyomalarda en çok değişime uğrayan yolaklardan RAS, PI3K, Hippo ve BCL ile birliktedir [ 41 ]. Ayrıca enginar ekstraktının tümör baskılayıcı protein p53'ün Ser9'da fosforilasyonunu indüklediğini de bulduk. Saito ve diğerleri , p53'ün Ser 46 ve ayrıca Ser 9 üzerindeki fosforilasyonunun, iyonlaştırıcı radyasyona yanıt olarak ATM protein kinazlarına bağlı olduğunu göstermiştir [ 42 ]. Bu, p53 stabilizasyonuna, transkripsiyonel aktivasyona ve apoptozun indüklenmesine yol açtı. Ser 15'te ve Ser 6 ve Ser 9 dahil olmak üzere yakın kalıntılarda ATM aracılı fosforilasyon, gelişmiş p53 apoptotik aktiviteleri. Piccolo'nun grubu, Ser 9 üzerindeki p53 fosforilasyonunun, TGF-β sitostatik programının aktivasyonu için araçsal olduğunu göstermiştir [ 43]. AKT/PKB sıklıkla tümörlerde aktive edilir ve büyüme ile sağkalımı düzenleyen sinyal yollarında önemli bir oyuncudur. Tamamen aktif AKT/PKB, metabolizma, anjiyogenez, büyüme, proliferasyon, hayatta kalma, protein sentezi, transkripsiyon ve apoptoz dahil olmak üzere çok sayıda hücresel fonksiyona aracılık eder. Enginar yaprağı ekstraktının hem AKT1 protein seviyelerini hem de insülin reseptörü, IRS ve PI3 kinazı içeren sinyalleme ekseninin tamamen aktivasyonunu sağlayan Ser473'teki fosforilasyonunu azalttığını bulduk. Bu, enginar yaprağı ekstraktının sitrat döngüsünü (TCA döngüsü), arginin ve prolin metabolizmasını, glutamin ve glutamat metabolizmasını, alanin, aspartat ve glutamat metabolizmasını, tirozin metabolizmasını ve fenilalanin metabolizmasını etkilediğini gösteren metabolomik verilerimizle eşleşir (Tablo(Tablo 3).3). Bu nedenle, enginar yaprağı ekstresi, insan kanserlerinde anormal şekilde aktive olan önemli metabolik yolları etkileyebilir. Toplamda bu kanıtlar, enginar yaprağı ekstraktının malign plevral mezotelyoma üzerinde geniş antitümör aktiviteye sahip doğal bir ürün olarak sınıflandırılmasına katkıda bulunur. Mezotelyomada değişen ve enginar yaprağı ekstraktlarından etkilenen sinyal yollarının diğer insan malignitelerinde ortak olduğuna dair kanıtlar nedeniyle, cynara scolymus'un diğer insan kanseri türleri üzerinde antitümör etkiler gösterebileceğini bekleyebiliriz (Ek Şekil 5 ) . Şekilde gösterilen veriler1A-Fve Ek Şekiller 2A-B ve 3A-C, in vitro ve in vivo sağlarenginar yaprağı ekstraktlarının cisplatin veya pemetrexed ile birlikte işlenmesine dair kanıt. Gerçekten de, hem mezotelyal (HMC) hem de mezotelyoma hücre hatlarında DNA hasarını tetikleyen sisplatinden farklı olarak enginar yaprağı ekstresi, MPM hücre hatlarında HMC'den daha belirgin bir apoptotik etki göstermiştir. İlginç bir şekilde enginar yaprağı özleri, sisplatin tedavisi üzerine HMC hücrelerinin DNA hasarını azalttı, bu nedenle, sisplatin veya pemetrexed ile birlikte işlenmesinin, yalnızca antitümör etkilerini güçlendirmekle kalmayıp, aynı zamanda tümör hücrelerine karşı seçicilik de sağlayabileceğini öne sürdü. Doğal ürünler ayrıca kemopreventif stratejiler için önde gelen bileşiklerdir. Bu, temel olarak, iyi tolere edilen ve kemoprevensiyon denemelerine kayıtlı denekler üzerinde hiç yan etkisi olmayan veya çok az yan etkiye sahip olan kanıtlara dayanmaktadır. MPM, kemopreventif bir yaklaşım için olağanüstü bir zaman penceresini temsil eden, 40-50 yıla kadar gecikme süresi olan bir meslek hastalığıdır. Gerçekten de, bir Faz II klinik denemesi (Asbeste maruz kalan bir popülasyonda enginar yaprağı ekstraktının anti-kanser aktivitesini araştırmayı amaçlayan NCT02076672 ) şu anda Ontario'daki katılımcıları kaydediyor.

Git: MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Hücre hatları

İnsan MPM hücre hatları MSTO-211H, NCI-H28, MPP89, ATCC'den (Rockville, MD) satın alınmıştır. İnsan mezotelyal hücreleri olan HMC, Tebu-Bio'dan (Le Perray en-Yvelines, Fransa) satın alınmıştır. Tüm MPM hücre hatları, %10 ısıyla inaktive edilmemiş FBS (Gibco, Life Technologies, ABD) ve 0,0,0 ile takviye edilmiş DMEM/F12 + GLUTAMAX (InVitrogen, Carlsbad, CA) içinde 37°C ve %5 CO2'de tek tabakalar halinde kültürlendi. 5 Ünite/ml insülin (Humulin, Eli Lilly and Company, Indiana, ABD), HMC ise Mezotelyal hücre bazal ortamında (Zen-Bio, Research Triangle Park, NC) kültürlendi. Ekstraksiyon prosedürü ve fitokimyasal karakterizasyon

Dondurulmuş enginar yaprağı numuneleri, hidro-alkolik prosedürle (ETOH %50) özümlendi (DER 5'ten 6:1'e). Fitokompleks, kafeoilkinik asitler, klorojenik asit ve sinaropikrin açısından zenginleştirilmiş enginardan (Cynara scolymus L.) ekstrakte edilen polifenolik bileşikler ve terpenlerin kısmen saflaştırılmış bir karışımından oluşur. Bu, beklemede olan bir Aboca patentidir (RM2014A000685). Metabolomik analiz (LC-ESI/MS) yoluyla (daha önce tarif edildiği gibi [ 28] bileşimin tam karakterizasyonuna tabi tutulmuştur.] ve kafeoilkinik asitler (SFM), klorojenik asit (HPLC-UV) ve sinaropikrin (HPLC-UV) kantitatif analizi ile. Bağımlılık açısından analiz edilen ve fitokomplekste bulunan bileşiklerin (fenoller, terpenler, yağlar, proteinler, amino asitler, mineraller, polisakkaritler, vb.) tam kimyasal sınıfları Tablo'da listelenmiştir.Tablo 11. tablo 1

Enginar yaprağı ekstresi bileşenleri

Polifenoller (%)	toplam hangi ligninler toplam hangi tanenler toplam hangi Caffeoylquinic asit türevleri toplam hangi Klorojenik asit hangi fenipropanoid türevler toplam hangi fenoller ve fenolik asitler toplam hangi flavonoidler toplam hangi salisilatlar toplam	34,251 1,98 5,96 10,33 4,07 7,01 0,703 8,27 0,001
terpenler (%)	toplam hangi Cynaropicrin	1,5 1,5
Organik Asitler (%)	Toplam	6.3
Protein (%)	suda çözünen proteinlerin toplamı	5.6 5.6
Amino Asitler fre (%)	Toplam	0,53
Polisakkaritler (%)	toplam hangi çözünür diyet lifi hangi çözünmez diyet lifi	1,7 0,8 0,9
Sakaritler (%)	monosakkaritler Fruktoz Glikoz hangi disakkaritler Sükroz hangi frukto-oligosakkaritler	24,69 2,58 8,02 8,89 5,2
Yağlar (%)	Toplam	0,087
Fitik asit (%)	Toplam	0.45
Mineraller ( Oligo, mikro ve makro elementler ) (%)	Toplam	9.5

Ayrı bir pencerede aç
Enginarın bütün fitokompleksinde bulunan farklı bileşik sınıfları rapor edilmiştir. Fitokompleks enginarlardan ( Cynara scolymus ) elde edilir. Kimyasallar ve antikorlar

Enginar kapsülleri (Aboca, Sansepolcro, İtalya); Pemetrexed (ALIMTA, Eli Lilly and Company, Indiana, ABD) ve Cisplatin (Pfizer Pharmaceuticals Group, New York, ABD) üreticinin talimatlarına göre çözüldü. Aşağıdaki birincil antikorlar kullanıldı: anti-bölünmüş PARP (Asp214) (Hücre Sinyali, # 9541); anti-kaspaz 7 (Hücre Sinyali, #9492); anti-kaspaz 3 (Enzo life Science, #31A1067); anti-beta aktin (A-2228, SIGMA); β-katenin antikoru (klon CAT-5H10, # 18–0226. Zymed). İkincil yaban turpu peroksidaz konjuge Santa Cruz'dan satın alındı; immünofloresan için ikincil antikor Alexa Fluor 594 (fare) konjuge Molecular Probes'ten (Inc, Eugene, OR, ABD) elde edildi. Kemo-lüminesans tespiti için ECL reaktifi (Amersham, GE Healthcare, Piscataway, NJ, ABD) kullanıldı. Annexin V FITC (0, 2 μg/ml) (Abcam, ab-63556); Nükleer tespit için DAPI boyaması (Sigma) kullanıldı. RNA işleme ve qRT-PCR

Mezotelyoma hücre dizilerinden toplam RNA, üreticinin talimatları (InVitrogen) izlenerek Trizol Reaktifi kullanılarak ekstre edildi.

Birinci sarmal cDNA, üreticinin talimatlarına göre sentezlendi (M-MLV RT kiti, Invitrogen). Gen ekspresyonu, bir 7900HT cihazında (Applied Biosystems) FastStart SYBR Green Master Mix (Applied Biosytems) kullanılarak gerçek zamanlı PCR ile ölçülmüştür. qPCR primer dizileri LEF-1 Fw: 5'-AGCGAATGTCGTTGCTGAGTGTA-3', Rv 5'-CT CTTGCAGACCAGCCTGGATAA-3' şeklindedir. FGF18 Fw: 5'-CT CTACACCCGGACCAGTG-3', Rv: 5'-CCGAAGGTGTC TGTCTCCAC-3'. ACTIN Fw: 5'-GGCATGGGTCAGA AGGATT-3', Rv: 5'-CACACGCCAGCTCATT GTAGA AG-3'. C-MYC Fw: 5'-CTCCTGGCAAAAGG TCAGA G-3', Rv: 5-TCGGTTGTTGCTGATCTGTC-3'. COX2 Fw: 5'-GAATGTTCCACCCGCAGTACA-3', Rv: 5'-GCATAAAGCGTTTGCGGTAC-3'. VEGF Fw 5'-CGA GGGCCTGGAGTGTGT-3', Rv: 5'-CGCATAATCTGCAT GGTGATG-3'. CyclinD1 Fw: 5'-GCCTCCGGTGTCC TACTTC-3', Rv: 5'-AGGAAGCGGTCCAGGTAGTT-3'. MMP2 Fw: 5'-AAGTCTGGAGCGATGTGACC-3', Rw: Hücre canlılığı deneyi

Muamele edilen hücrelerin hücre yaşayabilirliği, üreticinin talimatlarına göre ATPlite tahlili (Perkin Elmer, Massachusset, ABD) kullanılarak değerlendirildi. Cynara scolymus konsantrasyonlarının etkinliğini belirlemek için farklı bitki fraksiyonları ve lot numaraları kullanılarak hücre canlılığı testleri gerçekleştirilmiştir . Hücreler (8 x 102 ^hücre ) 96 oyuklu plakalara ekildi ve 24 saat kültürlendi ve 72 saat Cynara scolymus yaprak özleri ile işlendi. Her plaka hemen bir mikroplaka okuyucusunda (Expire Technology, Perkin Elmer) değerlendirildi. Klonojenik deneyler

MPM hücre çizgileri, %70 birleşmede büyütüldü ve Cynara scolymus yaprak özleri veya araçla işlendi. On altı saat sonra, hücreler ayrıldı ve ilaçsız ortamda altı kuyucuklu kaplara (Corning-Costar, Tewksbury, MA, ABD) 6 kuyu başına 600 hücre olacak şekilde tohumlandı. Her üç günde bir taze ortam (%25) eklendi. 15-21 gün sonra koloniler kristal viyole ile boyandı ve koloniler sayıldı. Apoptoz tespiti

Enginar yaprağı ekstraktlarının hücre döngüsü üzerindeki etkisini belirlemek için FACS analizi yapılmıştır. ^{Propidyum iyodür (PI) boyaması için hücreler, 104} yoğunlukta 6 oyuklu plakalara ekilmiştir.hücre/ml. 24 saat sonra hücreler, farklı zaman aralıkları için belirtilen bitki özü konsantrasyonları ile muamele edildi. Yüzen ve bağlı hücreler toplandı, PBS içinde yıkandı, buz gibi etanolde (%70 v/v) sabitlendi ve -20°C'de saklandı. Analiz için hücreler PBS içinde yıkandı ve RNaz A (1 mg/ml) ile inkübe edildi ve PI (40 ug/ml) eklendi. PI/Annexin V için çift boyama ile muamele edilmiş hücreler toplandı ve bağlama tamponunda (HEPES pH 7.4, CaCl2 2.5 mM, NaCl 140 mM) süspanse edildi. Hücre alikuotları Annexin V FITC (0, 2 ug/ml) (Abcam, ab-63556) ve PI (5 mg/ml) (Invitrogen) ile 15 dakika süreyle inkübe edildi. Her FACS analizi için, her numune için 3 x 103 ^olay analiz edildi. Akış sitometri analizleri, Easycyte 8HT (Guava, Millipore) ile yapıldı, ardından InCyte yazılımı (Millipore) kullanılarak analiz yapıldı. Transwell istila deneyi

Yerleştirme tahlili, yerleştirme bölmesinde (BD Falcon, Franklin Lakes, NJ, ABD) kaplanmamış 8 mm gözenek boyutunda bir filtreye sahip 24 oyuklu bir Boyden odası kullanılarak yapıldı. Hücreler, FBS içermeyen 0.5 ml DMEM/F12 ortamında süspanse edildi ve yerleştirme bölmesine tohumlandı. Hücrelerin 24 saat boyunca %5 C02 içinde 37°C'de nemlendirilmiş bir inkübatörde %10 FBS içeren 0.5 ml DMEM/F12 ortamı içeren alt bölmeye göç etmesine izin verildi. Filtrenin dışına yapışan göç eden hücreler, DAPI ile boyanarak görselleştirildi ve sayıldı. Alan başına ortalama hücre sayısı, hücre sayısı için normalleştirmeden sonra kontrolün yüzdesi olarak ifade edildi. Yara iyileştirici migrasyon testi

MPM hücreleri, 6 oyuklu doku kültürü plakalarında birleşmenin %80'ine büyütüldü ve hücreleri çıkarmak için steril bir 10 mL'lik pipet ucu ile yaralandı. Gevşek bir şekilde bağlanmış hücreleri çıkarmak için PBS yıkama kullanıldı. Göçün ilerlemesi, bir ışık mikroskobu altında farklı zamanlarda fotoğraflanmıştır. Çizilen alana göç eden hücre sayısı hesaplandı. kuyruklu yıldız deneyleri

Hücreler, 3 μg veya 6 μg/ul Cynara scolymus ile veya onsuz ön işleme tabi tutuldu16 saat boyunca Bundan sonra hücreler, 20 saat boyunca 7.5 ug/ml CDDP ile muamele edildi veya edilmedi. İşlemden sonra hücreler, tripsin ile ayrıldı ve fosfat tamponlu salin içindeki %1 düşük erime noktalı agaroza (Sigma) gömüldü ve daha önce %1 agaroz (Bio-Rad) ile kaplanmış mikroskopi lamlarına yayıldı. Hücreler lizis çözeltisinde (2.5 M NaCl, 100 mM etilendiamintetraasetik asit, 10 mM Tris bazı, 8 g/l NaOH, %1 Triton X-100, %10 dimetil sülfoksit) oda sıcaklığında 1 saat parçalandı ve ardından akan çözelti içinde çalıştırıldı (300mM NaOH, 1mM etilendiamintetraasetik asit, pH 13.0) 25V ve 250mA'da 30 dakika. DNA, 0.4M Tris (pH 8.0) ile dengelendi ve slaytlar, metanol ile kurutuldu. DNA, propidyum iyodür (Sigma) ile boyandı ve bir Axiovert 200 M mikroskopta ve Axiovision edinim programında (Zeiss) 63 x büyütme kullanılarak resimler çekildi. Western blot analizi

Hücre lizisi, proteaz ve fosfataz inhibitörleri (5 mM PMSF) ile desteklenmiş NP40 lizis tamponunda (50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, %1 NP-40, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA) içinde 30 dakika süreyle buz üzerinde gerçekleştirildi. , 3 mM NaF, 1 mM DTT, 1 mM NaVO4). Eşit miktarlarda toplam protein ekstraktları (30 ug), %8 denatüre edici SDS poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile çözüldü ve 2 saat süreyle poliviniliden diflorid membrana aktarıldı. Membranlar, %5 süt-TBS-%0.05 Tween 20 içinde 1 saat süreyle bloke edildi ve gece boyunca spesifik birincil antikorlarla inkübe edildi (kimyasallar ve antikorlar bölümüne bakın). immünofloresan mikroskopi

Kısaca MSTO-211H hücreleri, sekiz bölmeli kültür slaytlarına (BD Falcon) ekildi. Ertesi gün, hücreler buz gibi soğuk PBS tamponu ile durulandı ve oda sıcaklığında 10' için %4 paraformaldehit ile sabitlendi ve daha sonra %1 Triton X-100 ile geçirgenleştirildi. Hücreler, belirtilen antikorla gece boyunca inkübe edildi. Ertesi gün, hücreler her biri 3 dakika boyunca üç kez soğuk PBS ile yıkandı ve 2 saat boyunca ikincil bir antikor Alexa 488-konjuge keçi anti-fare IgG (Molecular Probes Cells) ile boyandı ve DAPI (40, 6-diamidino- 2-fenilindol, dihidroklorür). Hücreler, bir Zeiss LSM 510 lazer taramalı floresan konfokal mikroskobu (Zeiss, Wetzlar, Almanya) altında incelendi. NMR spektroskopisi için örnek hazırlama

Her ortam numunesi (2 mi) liyofilize edildi, ardından 700 ul 1 mM TSP [3-(trimetilsilil) propionik-2, 2, 3, 3-d 4 asidin sodyum tuzu], 10 mM sodyum _azid D20 içinde _çözüldü fosfat tampon çözeltisi (pH = 7.4) ve son olarak 1 dakika vorteksle karıştırılarak homojenleştirildi. Santrifüjlemeden sonra (22°C'de 10 dakika, 10.000 RCF), elde edilen her süpernatandan 600 ul, 5 mm'lik bir NMR tüpüne aktarıldı ve NMR analizi için kullanıldı. ¹ H-NMR spektroskopisi

2D1HJ - çözülmüş (JRES) NMR spektrumları, toplam 32 artış için artış başına 4 geçişli bir çift dönüşlü eko sekansı kullanılarak bir ⁵⁰⁰ MHz Varian/Agilent spektrometre (Agilent, Santa Clara, CA) üzerinde elde edildi. Bunlar, F2'de 6 kHz ve F1'de 40 Hz'lik spektral genişlikler kullanılarak 16 k veri noktasında toplandı. 2.0 saniyelik bir gevşeme gecikmesi vardı. Her bir FID, F2 boyutunda sinüs-bell/üstel fonksiyon ve F1 boyutunda bir sinüs-zil fonksiyonu ile çarpma işleminden sonra Fourier dönüşümüne tabi tutuldu. JRES spektrumları 45° eğilmiş, F1 etrafında simetrikleştirilmiş, dH'de TSP'ye atıfta bulunulmuştur _.= 0,0 ppm ve Agilent VNMRJ 3.2 yazılımı kullanılarak dışa aktarılan proton-ayrık ufuk çizgisi projeksiyonları (p-JRES). İşlenmiş ve işlenmemiş numuneler arasındaki ayrımdan sorumlu olan metabolitler, şirket içi bir NMR veri tabanı ve Chenomx NMR paketi v. 7.7 (Chenomx Inc., Alberta, Kanada) kullanılarak tanımlandı. NMR spektrumları ön işleme işlemi

Dışa aktarılan 1B ufuk çizgisi projeksiyonları hizalandı ve ardından ACD akıllı gruplama yöntemi (1D NMR Manager yazılımı (ACD/Labs, Toronto, Kanada) kullanılarak 0,01 ila 0,02 ppm arasında değişen spektral kutulara indirgendi. Spektrumu karşılaştırmak için türetilen integraller artık su tepe noktasını (4,33–5,17 ppm) ve TSP tepe noktasını (0,5–0,5 ppm) temsil eden kutuların çıkarılmasının ardından gruplama prosedüründen toplam integral bölgeye normalleştirildi.

Ortaya çıkan veriler, çok değişkenli analiz için girdi olarak kullanıldı: Temel Bileşen Analizi (PCA ve gizli yapılara Ortogonal projeksiyonlar ayrım analizi (OPLS-DA), SIMCA-P + sürüm 12 (Umetrics, Umea, İsveç) kullanılarak yapıldı. Fosfo kaşif antikor mikrodizisi ile fosfo-protein profili oluşturma

Full Moon Biosystems, Inc. (Sunnyvale, CA) tarafından tasarlanan ve üretilen Phospho Explorer antikor mikrodizisi, 1318 antikor içerir [ 44 ]. Antikorların her biri, çoklu pozitif ve negatif kontrollerle birlikte kaplanmış bir cam mikroskop lamı üzerine basılmış iki kopyaya sahiptir ( Ek Şekil 4). Antikor dizisi deneyi, yerleşik protokollerine göre Full Moon Biosystems kullanılarak yapıldı. Kısaca, MSTO-211H'den elde edilen hücre lizatları, 24 saat boyunca 50 μg/ml'de enginar ekstresi veya 8 μM'de Cisplatin veya 30 μM konsantrasyonda Pemetrexed ile işleme tabi tutuldu, antikor dizisi tahlil kiti (Full Moon Biosystems, A.Ş.) Antikor mikroarray slaytları ilk olarak oda sıcaklığında 30 dakika süreyle bloke edici bir solüsyonla (Full Moon Biosystems, Inc.) bloke edildi, Milli-Q dereceli suyla 3-5 dakika süreyle durulandı. Slaytlar daha sonra 2 saat boyunca oda sıcaklığında birleştirme solüsyonunda (Full Moon Biosystems, Inc.) biyotin etiketli hücre lizatları ile inkübe edildi. Dizi slaytları, 1x Wash Solution (Full Moon Biosystems, Inc.) ile 4 ila 5 kez yıkandı. ) ve Cy3-konjuge streptavidin kullanılarak bağlı biyotinlenmiş proteinlerin saptanmasından önce Milli-Q dereceli su ile iyice durulandı. Her bir slayt (altı tekrar içerir) hibridize edildi ve 10 mm'lik bir tarama çözünürlüğüyle (Agilent Technologies) mikrodizi tarayıcı tarafından elde edilen Cy3 floresansı. Görüntüler, Agilent Feature Extraction (AFE) yazılımı (Agilent Technologies) kullanılarak ölçüldü. Her bir antikorun floresan sinyali, boş sinyalin (antikor yokluğunda nokta) çıkarılmasından sonra bu antikor noktasının floresan yoğunluğundan elde edildi. Görüntüler, Agilent Feature Extraction (AFE) yazılımı (Agilent Technologies) kullanılarak ölçüldü. Her bir antikorun floresan sinyali, boş sinyalin (antikor yokluğunda nokta) çıkarılmasından sonra bu antikor noktasının floresan yoğunluğundan elde edildi. Görüntüler, Agilent Feature Extraction (AFE) yazılımı (Agilent Technologies) kullanılarak ölçüldü. Her bir antikorun floresan sinyali, boş sinyalin (antikor yokluğunda nokta) çıkarılmasından sonra bu antikor noktasının floresan yoğunluğundan elde edildi. istatistiksel analiz

Biyoformatik analiz Matlab (The MathWorks Inc.) ile yapıldı. Z skoru dönüşümü, normalleştirilmiş sıfır ortalamasından standart sapmanın birimi olarak arka plan düzeltilmiş nokta yoğunluğu değerlerini ifade etmek için kullanıldı [ 45 ]. Özellikler, gözlenen protein Z puanlarının ortalamaları arasındaki fark alınarak ve söz konusu karşılaştırma için tüm farkların standart sapmasına bölünerek hesaplanan Z oranlarına göre seçildi. 1.96'dan yüksek bir Z oranı, anlamlı olarak kabul edildi. Denetimsiz Hiyerarşik Kümeleme, örnek kümelerini araştırmak için kullanıldı. Yol analizi, DAVID programı [ 46 ] [ 47 ] tarafından gerçekleştirilmiştir . EnSpire ^® hücresel etiketsiz platform

MSTO-211H hücreleri, hücrenin tek tabakası içindeki dinamik kütle yeniden dağılımından (DMR) kaynaklanan ışık kırılmasındaki değişiklikleri ölçebilen yüksek düzeyde hassas optik sensörlere sahip özel olarak tasarlanmış 384 oyuklu plakaya ekildi. Işık kırılmasındaki değişiklik, dalga boyundaki bir kayma ile gösterildi. Deney hayvanları ve etik bildirimi

Ksenogreft nakli

MSTO-211H hücreleri, 24 saat boyunca enginar özü (50 ug/ml) ile ön işleme tabi tutuldu. ^{2 x 106} MSTO-211H hücresi x fare ( n = 6) süspansiyonları, 6 haftalık dişi CD1 farelerine (Charles River, Milan) PBS 1x/Matrigel (BD Biosciences San Jose, CA, ABD) içinde deri altından enjekte edildi . . Tümör hacmi şu formül kullanılarak hesaplandı: V 1/2 x uzunluk x genişlik ² (elektronik kumpas ile).

Hayvan çalışmaları

^{CD1 fareleri, MSTO-211H (2 x 106} ) ile deri altından nakledildi . Tümör ilerlemesinin kanıtlanmasında (tümör hacmi 60 mm3'e ulaştığında ⁾ hayvanlar rastgele beş gruba ayrıldı. İçme suyu ve tam bir pelet diyeti (GLP 4RF21, Mucedola) ad libitum olarak sağlandı. Üç grup fareye ( n = 6) içme suyunda şu konsantrasyonlarda enginar özü verildi: 25, 50 ve 75 mg/ml, oysa kontrol grubu farelerine ( n= 6) musluk verildi. Son gruba pemetreksed intraperitoneal olarak 100 mg/kg dozunda beş gün süreyle enjekte edildi. Farelerin vücut ağırlıkları ve klinik belirtileri 3 günde bir kontrol edildi. Tüm tümörijenisite deneyleri, dahili etik kurul tarafından belirlenen yönergelere göre yapıldı. Deneyin sonunda tümör kütleleri toplandı ve %10 tamponlu formalin içinde sabitlendi.

İmmünoistokimyasal analiz

Formalinle sabitlenmiş ve parafine gömülmüş 5 um'lik fare tümör bölümleri kesitleri, hematoksilen ve eozin ile boyandı veya anti-ki67 antikoru (ab15580, Abcam) ile boyandı. Her örnekten rastgele seçilen yedi alan puanlandı.

Git: EK ŞEKİLLER VE TABLO

Görmek için buraya tıkla. ^{(2,2 milyon, pdf)}
Git: REFERANSLAR

1. Robinson BM. Malign plevral mezotelyoma: epidemiyolojik bir bakış açısı. Kardiyotorasik cerrahi yıllıkları. 2012; 1 :491–496. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
2. Carbone M, Ly BH, Dodson RF, Pagano I, Morris PT, Doğan UA, Gazdar AF, Pass HI, Yang H. Malign mezotelyoma: gerçekler, mitler ve hipotezler. Hücre fizyolojisi dergisi. 2012; 227 :44–58. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
3. van Zandwijk N, Clarke C, Henderson D, Musk AW, Fong K, Nowak A, Loneragan R, McCaughan B, Boyer M, Feigen M, Currow D, Schofield P, Nick Pavlakis BI, McLean J, Marshall H, Leong S, et al. Malign plevral mezotelyoma tanı ve tedavisi için kılavuzlar. Göğüs hastalıkları dergisi. 2013; 5 :E254–307. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
4. Jakobsen JN, Sorensen JB. Malign mezotelyomada hedefe yönelik tedavilerin klinik deneylerini gözden geçirin. Kanser kemoterapisi ve farmakolojisi. 2011; 68 :1–15. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
5. Favoni RE, Florio T. İnsan habis plevral mezotelyoma tedavisi için sitotoksik ve hedeflenmiş bileşiklerle kombine kemoterapi. Farmakolojik bilimlerdeki eğilimler. 2011; 32 :463–479. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
6. Cioce M, Ganci F, Canu V, Sacconi A, Mori F, Canino C, Korita E, Casini B, Alessandrini G, Cambria A, Carosi MA, Blandino R, Panebianco V, Facciolo F, Visca P, Volinia S, et al. Malign plevral mezotelyomada mir-145 kaybının protumorijenik etkileri. onkojen. 2014; 33 :5319–5331. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
7. Stayner L, Welch LS, Lemen R. Dünya çapında asbeste bağlı hastalık pandemisi. Halk sağlığının yıllık gözden geçirilmesi. 2013; 34 :205–216. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
8. Straif K, Benbrahim-Tallaa L, Baan R, Grosse Y, Secretan B, El Ghissassi F, Bouvard V, Guha N, Freeman C, Galichet L, Cogliano V. A review of human carcinogens—part C: metals, arsenic , tozlar ve lifler. Lancet Onkolojisi. 2009; 10 :453–454. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
9. Bianchi C, Bianchi T. Malign mezotelyoma: küresel insidans ve asbest ile ilişki. Endüstriyel sağlık. 2007; 45 :379–387. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
10. Chen M, Tse LA, Au RK, Yu IT, Wang XR, Lao XQ, Au JS. Mezotelyoma ve akciğer kanseri mortalitesi: Hong Kong'daki asbestoz işçileri arasında tarihsel bir kohort çalışması. Akciğer kanseri. 2012; 76 :165–170. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
11. Sekido Y. Malign mezotelyoma moleküler patogenezi. Karsinojenez. 2013; 34 :1413–1419. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
12. Opitz I. Malign plevral mezotelyoma tedavisi-Avrupa deneyimi. Göğüs hastalıkları dergisi. 2014; 2 :S238–252. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
13. Newman DJ, Cragg GM. 1981'den 2010'a 30 yılda yeni ilaçların kaynağı olarak doğal ürünler. Doğal ürünler dergisi. 2012; 75 :311–335. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
14. Wang JL, Gold KA, Lippman SM. Doğal ajan mekanizmaları ve erken faz klinik geliştirme. Güncel kimyadaki konular. 2013; 329 :241–252. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
15. Danishefsky S. İlaçların keşfinde doğal ürünlerin potansiyeli üzerine: yeniden değerlendirme için bir durum. Doğal ürün raporları. 2010; 27 :1114–1116. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
16. Surh YJ. Diyet fitokimyasalları ile kanser kemoprevensiyonu. Doğa, Yengeç'i gözden geçirir. 2003; 3 :768–780. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
17. Aggarwal BB, Shishodia S. Kanserin önlenmesi ve tedavisi için diyet maddelerinin moleküler hedefleri. Biyokimyasal farmakoloji. 2006; 71 :1397–1421. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
18. Park EJ, Pezzuto JM. Kanser kemoprevensiyonunda botanikler. Kanser metastazı incelemeleri. 2002; 21 :231–255. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
19. Lee KA, Chae JI, Shim JH. Kahve, kafestol ve kahweolden elde edilen doğal diterpenler, insan malign plevral mezotelyomasında özgüllük proteini 1 ekspresyonunun düzenlenmesi yoluyla apoptozu indükler. Biyomedikal bilim dergisi. 2012; 19:60 . [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
20. Canino C, Mori F, Cambria A, Diamantini A, Germoni S, Alessandrini G, Borsellino G, Galati R, Battistini L, Blandino R, Facciolo F, Citro G, Strano S, Muti P, Blandino G, Cioce M. SASP, mezotelyoma hücrelerinin kemorezistansına ve tümör başlatma aktivitesine aracılık eder. onkojen. 2012; 31 :3148–3163. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
21. Estruch R, Ros E, Martinez-Gonzalez MA. Kardiyovasküler hastalıkların birincil önlenmesi için Akdeniz diyeti. New England tıp dergisi. 2013; 369 :676–677. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
22. Schwingshackl L, Hoffmann G. Akdeniz diyetine bağlılık ve kanser riski: gözlemsel çalışmaların sistematik bir incelemesi ve meta-analizi. Uluslararası kanser dergisi Journal International du Cancer. 2014; 135 :1884–1897. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
23. Milenkovic D, Jude B, Morand C. Biyolojik etkilerinin altında yatan polifenollerin moleküler hedefi olarak miRNA. Serbest radikal biyoloji ve tıp. 2013; 64 :40–51. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
24. Lattanzio V, Kroon PA, Linsalata V, Cardinali A. Globe enginar: Fonksiyonel bir gıda ve nutrasötik içerik kaynağı. Fonksiyonel gıda J. 2009; 1 :131–144. [ Google Akademik ]
25. Yang CS, Landau JM, Huang MT, Newmark HL. Diyet polifenolik bileşikler tarafından karsinojenezin inhibisyonu. Beslenmenin yıllık gözden geçirilmesi. 2001; 21 :381–406. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
26. Huang W, Cai Y, Zhang Y. Beslenme ve Kanser. Lawrence Erlbaum Associates, Inc; 2010. Şifalı bitkilerden ve diyet bitkilerinden elde edilen doğal fenolik bileşikler: Kanser önleme için potansiyel kullanım; s. 1–20. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
27. Weng CJ, Yen GC. Diyet fitokimyasallarının kanser istilasına ve metastaza karşı kemopreventif etkileri: fenolik asitler, monofenol, polifenol ve bunların türevleri. Kanser tedavisi yorumları. 2012; 38 :76–87. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
28. Fodaroni G, Burico M, Gaetano A, Maidecchi A, Pagiotti R, Mattoli L, Traldi P, Ragazzi E. Bir fitokompleks için metabolomik parmak izinin değerlendirilmesine entegre bir yaklaşım. Enginar [Cynara cardunculus subsp. skolymus] yaprağı. Doğal ürün iletişimi. 2014; 9 :565–568. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
29. Hausler M, Ganzera M, Abel G, Popp M, Stuppner H. Cynara scolymus L.'de kafeoilkinik asitlerin ve flavonoidlerin yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile belirlenmesi. kromatografi. 2002; 56 :407–411. [ Google Akademik ]
30. Wider B, Pittler MH, Thompson-Coon J, Ernst E. Hiperkolesterolemi tedavisi için enginar yaprağı ekstresi. Sistematik incelemelerin Cochrane veri tabanı. Sistematik incelemelerin Cochrane veri tabanı. 2013; 3 :CD003335. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
31. Gebhardt R. Enginar (Cynara scolymus L.) özleri ile birincil kültürlenmiş sıçan hepatositlerinde kolesterol biyosentezinin inhibisyonu. Farmakoloji ve Deneysel Terapötikler Dergisi. 1998; 286 :1122–1128. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
32. Saenz Rodriguez T, Garcia Gimenez D, de la Puerta Vazquez R. Sıçanlarda bir enginar yaprağı ekstraktının neden olduğu lipitlerin ve safra asitlerinin koleretik aktivitesi ve biliyer eliminasyonu. Phytomedicine: uluslararası fitoterapi ve fitofarmakoloji dergisi. 2002; 9 :687–693. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
33. Samochowiec L, Habczynska D, Wazna-Bogunska C. [Aterojenik diyet ve Cynara scolymus L ve Cynara cardunculus L.'nin sıçanlarda koroner damarların ve miyokardiyumun histopatolojik resmi üzerindeki etkisi] Patologia polska . 1962; 13 :337–348. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
34. Miccadei S, Di Venere D, Cardinali A, Romano F, Durazzo A, Foddai MS, Fraioli R, Mobarhan S, Maiani G. Kültürlenmiş enginarın (Cynara scolymus L.) yenilebilir kısmından elde edilen polifenolik ekstraktların antioksidan ve apoptotik özellikleri sıçan hepatositleri ve insan hepatoma hücreleri üzerinde. Beslenme ve kanser. 2008; 60 :276–283. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
35. Mileo AM, Di Venere D, Linsalata V, Fraioli R, Miccadei S. Enginar polifenolleri apoptozu indükler ve insan meme kanseri hücre dizisi MDA-MB231'in istilacı potansiyelini azaltır. Hücre fizyolojisi dergisi. 2012; 227 :3301–3309. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
36. Şimşek EN, Uysal T. Cynara L. türlerinin kolorektal kanser hücrelerinde sitotoksik ve apoptotik etkilerinin in vitro araştırılması. Asya Pasifik kanseri önleme dergisi: APJCP. 2013; 14 :6791–6795. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
37. Menges CW, Chen Y, Mossman BT, Chernoff J, Yeung AT, Testa JR. Bir Fosfotirozin Proteomik Ekranı, Malign Mezotelyomada Anormal Şekilde Aktive Edilmiş Çoklu Tirozin Kinaz Sinyal Yollarını Tanımlar. Genler ve kanser. 2010; 1 :493–505. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
38. Zhou S, Liu L, Li H, Eilers G, Kuang Y, Shi S, Yan Z, Li X, Corson JM, Meng F, Zhou H, Sheng Q, Fletcher JA, Ou WB. Mezotelyomada PI3K/mTOR yolunun çok noktalı hedeflemesi. İngiliz kanser dergisi. 2014; 110 :2479–2488. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
39. Herbst A, Jurinovic V, Krebs S, Thieme SE, Blum H, Goke B, Kolligs FT. Serbest bırakılmış Wnt/beta-katenin sinyali ile kolorektal karsinom hücre hatlarında beta-katenin hedef genlerinin kapsamlı analizi. BMC genomikleri. 2014; 15:74 . [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
40. Fox SA, Richards AK, Kusumah I, Perumal V, Bolitho EM, Mutsaers SE, Dharmarajan AM. Malign mezotelyoma hücrelerinde Wnt sinyal mekanizmalarının ekspresyon profili ve işlevi. Biyokimyasal ve biyofiziksel araştırma iletişimi. 2013; 440 :82–87. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
41. de Assis LV, Locatelli J, Isoldi MC. Malign Mezotelyoma'nın tümörijenezinde yer alan anahtar genlerin ve yolakların rolü. Biochimica ve biophysica acta. 2014; 1845 :232–247. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
42. Saito S, Goodarzi AA, Higashimoto Y, Noda Y, Lees-Miller SP, Appella E, Anderson CW. ATM, iyonlaştırıcı radyasyona yanıt olarak Ser(46) dahil olmak üzere birçok p53 bölgesinde fosforilasyona aracılık eder. Biyolojik kimya Dergisi. 2002; 277 :12491–12494. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
43. Cordenonsi M, Montagner M, Adorno M, Zacchigna L, Martello G, Mamidi A, Soligo S, Dupont S, Piccolo S. P53 fosforilasyonu yoluyla TGF-beta ve Ras/MAPK sinyalinin entegrasyonu. Bilim. 2007; 315 :840–843. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
44. Mitchell SJ, Martin-Montalvo A, Mercken EM, Palacios HH, Ward TM, Abulwerdi G, Minor RK, Vlasuk GP, Ellis JL, Sinclair DA, Dawson J, Allison DB, Zhang Y, Becker KG, Bernier M, de Cabo R. SIRT1 aktivatörü SRT1720, standart bir diyetle beslenen farelerin ömrünü uzatır ve sağlığını iyileştirir. Hücre raporları. 2014; 6 :836–843. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
45. Cheadle C, Vawter MP, Freed WJ, Becker KG. Z puanı dönüşümü kullanılarak mikrodizi verilerinin analizi. Moleküler teşhis Dergisi: JMD. 2003; 5 :73–81. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
46. Huang da W, Sherman BT, Lempicki RA. DAVID biyoinformatik kaynakları kullanılarak büyük gen listelerinin sistematik ve bütünleştirici analizi. Doğa protokolleri. 2009; 4 :44–57. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
47. Huang da W, Sherman BT, Lempicki RA. Biyoinformatik zenginleştirme araçları: büyük gen listelerinin kapsamlı fonksiyonel analizine giden yollar. Nükleik asit araştırması. 2009; 37 :1–13. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

**igokcek** · 19 December 2012, 16:17

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması, Kolesterol, Lipid, Trigliserid Ve Enzimler

SAÇ BAKIMI

**igokcek** · 22 February 2013, 13:16

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması, Akne, Uçuk Ve Herpes

ENGİNAR İle Alkol, Karaciğer Yağlanması Ve Kalp Yetmezliği

**igokcek** · 22 February 2013, 16:16

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması, Bağırsak Mantarı Ve Bağ Dokusu

**igokcek** · 27 March 2013, 14:40

ENGİNAR İle Statinler, Kolesterol, Lipid, Trigliserid LDL Ve HDL Kolesterolu, Homosistein

Reçetesiz İlaçlar, İlaç Dolabı, Karaciğer Yağlanması, Barsak Florası, İlaç Depoları

İşlenmiş Gıdalar, Zehirli Gıdalar, Sağlıklı Beslenme, Kimyasal İlaçlar, Abur Cubur, NBŞ

**igokcek** · 24 April 2013, 11:22

ENGİNAR İle Karaciğer Yağlanması

Duyuru

Enginar Forte

Enginar Forte

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap