Duyuru

***maturidi*** · 15 March 2023, 09:05

Anastatica hierochuntica (L.) metanolik ve sulu özler, MCF-7 meme kanseri hücrelerinde apoptozun indüklenmesi yoluyla antiproliferatif etkiler gösterir.

Saranya Rameshbabu , ^aSafia A. Messaoudi , ^bZeyad Ibrahim Alehaideb , ^c,^eMohammed Syed Ali , ^fAnuradha Venktraman , ^aHala Alajmi , ^dHamad Al-Eidi , ^c ve Sabine Matou-Nasri ^c,^e,^⁎

¹Biyokimya Yüksek Lisans ve Araştırma Bölümü, Mohamed Sathak Sanat ve Bilim Koleji, Tamil Nadu, Hindistan.
²Adli Bilimler Bölümü, Ceza Adaleti Koleji, Naif Arap Güvenlik Bilimleri Üniversitesi, Riyad, Suudi Arabistan.
³Hücre ve Gen Tedavisi Grubu, Tıbbi Genomik Araştırma Departmanı, Kral Abdullah Uluslararası Tıbbi Araştırma Merkezi, Ulusal Muhafız-Sağlık İşleri Bakanlığı, Riyad, Suudi Arabistan.
⁴Kral Saud bin Abdulaziz Sağlık Bilimleri Üniversitesi, Riyad, Suudi Arabistan.
⁵Biyoteknoloji Bölümü, Mohamed Sathak Sanat ve Bilim Fakültesi, Tamil Nadu, Hindistan.
⁶Biobank, Kral Abdullah Uluslararası Tıbbi Araştırma Merkezi, Ulusal Muhafız-Sağlık İşleri Bakanlığı, Riyad, Suudi Arabistan.

Git: Soyut

Adjuvan tedavi olarak doğal ürünlerden elde edilen antikanser biyoaktif bileşiklerin kullanıldığı meme kanseri tedavisi, pahalı ve toksik geleneksel kemoterapötik ilaçlar nedeniyle kabul görmüştür. Anastatica hierochuntica (L.) ( A. hierochuntica ) bitkisinin tamamı, farmakolojik açıdan önemli antikanser özellikleri açısından araştırılmıştır, ancak bitki parçalarının biyolojik aktiviteleri kategorize edilmemiştir. A. hierochuntica'nın farklı bölümlerinin (tohumlar, gövdeler ve yapraklar) antikanser potansiyelini değerlendirdik ve insan meme kanseri hücre dizisi MCF-7'yi kullanarak bunların etki mekanizmalarını araştırdık. Şu anda, A. hierochuntica'nın metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) ekstrelerinin çoğalmayı önleyici etkilerini araştırdık.hücre canlılığı deneyleri kullanılarak MCF-7 hücreleri üzerindeki bitki parçaları. Apoptozu ve hücre döngüsü düzenleyici proteinleri değerlendirmek için akış sitometrisi, Western Blot, DNA fragmantasyonu ve gen ekspresyon deneyleri yapıldı. Sonuçlar, metanolik ve sulu özlerin, doza bağlı bir şekilde MCF-7 hücre canlılığını azalttığını göstermektedir. Apoptoz indüksiyonu, tüm metanolik ve sulu işlemden geçirilmiş MCF-7 hücrelerinde gözlendi. Hücre ölüm süreci, DNA parçalanmasının görselleştirilmesi ve intrinsik apoptotik yolakların, kaspaz-9 ve kaspaz-3'ün, apoptoz ayırt edici özelliklerine neden olan anahtar enzimin bölünmesiyle doğrulandı. Ek olarak, en proapoptotik ekstraktlar olan ASD ve ML, proapoptotik Bax, tümör baskılayıcı TP53 genleri ve siklin inhibitörü CDKN1A geninin ekspresyonunu yukarı regüle etti. Sonuç olarak, sulu ve metanolik ekstraktlarınMeme kanserinde apoptozun indüklenmesi yoluyla antiproliferatif etkiler uygulayan A. hierochuntica bitki parçaları MCF-7 hücreleri, ASD ve ML özleri, meme kanseri tedavisi için en umut verici doğal bazlı ilaçlardı.

Anahtar Kelimeler: Anastatica hierochuntica , Apoptoz, P53, Hücre döngüsü, Meme kanseri, Doğal ürünler
Kısaltmalar: AL, A. hierochuntica'nın yaprağının sulu özü , ASD, A. hierochuntica'nın tohumunun sulu özü, AST, A. hierochuntica'nın sapının sulu özü , BC, meme kanseri, CDK, sikline bağımlı kinaz, MCF-7, Michigan Kanseri Foundation-7, ML, A. hierochuntica yaprağının metanolik özü , MSD, A. hierochuntica tohumunun metanolik özü, MST, A. hierochuntica sapının metanolik özü, NP40, Nonidet P-40, STS, Staurosporin, TP53, tümör proteini p53
Git: 1. Giriş

Meme kanseri (MK), yaygın bir kanserdir ve dünya genelinde kadınlarda kansere bağlı ölümlerin birincil nedenidir ( Torre ve ark., 2017 ). Gen terapisi, immünoterapi, adjuvan endokrin ve kemoterapi ile desteklenen cerrahi, radyoterapi dahil olmak üzere BC için antikanser tedavi stratejilerinin sayısına rağmen, antineoplastik ajanlara direnç olasılığı yüksek olmaya devam etmektedir (Tang ve diğerleri, 2016 ) . Bitki krallığından doğal ürünlerde yeni antikanser terapötik ajanların (fitokimyasallar) tanımlanmasıyla BC tedavisine ilişkin araştırma küresel olarak artmıştır ( Shareef ve diğerleri, 2016).). Geleneksel tıp pratiğinin bir parçası olan bitki kaynaklı sekonder metabolitler, kimyasal kaynaklı ilaçlara kıyasla güvenlikleri ve etkinlikleri nedeniyle kabul görmüştür ( Welz ve ark., 2018 ). Ek olarak fitokimyasallar, tümör hücrelerinde apoptoz yoluyla hücre ölümünün indüklenmesinden sonra, mitokondriyal intrinsik veya ölüm reseptörü ekstrinsik yolları yoluyla kemoterapötik benzeri etkiler sergiler. Bu yollar, siklinlerin ve sikline bağımlı kinazların (CDK'ler) eylemlerinin inhibisyonunu takiben ( Bailon-Moscoso ve diğerleri, 2017 , Shahwar ve diğerleri, 2019 ) veya mikrotübül hasarını harekete geçirerek hücre döngüsü durmasını etkinleştiren kaspazları içerir ( Paul ve diğerleri, 2020). Proapoptotik fitokimyasalların keşfi ve moleküler etki mekanizmalarının değerlendirilmesi, toksik geleneksel kemoterapötik ajanların neden olduğu istenmeyen yan etkilerden arındırılmış doğal biyoaktif bileşiklerin geliştirilmesi için antikanser terapötik yaklaşımını geliştirdi (Oronsky ve diğerleri, 2016 ) .

Anastatica hierochuntica (L.) ( A. hierochuntica ), Brassicaceae familyasına ait monotipik bir türdür , yaban otu alışkanlığına sahip bir çöl bitkisidir ve halk arasında Kaff Maryam (Mary'nin eli), True Rose of Jericho veya Genggam Fatimah ( Saleh ve Machado) olarak bilinir. , 2012 ). Bu bitki, Orta Doğu ve Kuzey Afrika'da geniş çapta yayılmıştır ve diriltici doğasıyla tanınmaktadır ( Friedman ve Stein, 1980 ). A. hierochuntica ile ilgili etnomedisinal uygulamaların doğumu kolaylaştırdığı ve rahim kanamasını azalttığı ( Khalifa ve Ahmad, 1980 ) ve ayrıca astım, solunum yolu hastalıkları, dizanteri, soğuk algınlığı, ateş ve baş ağrılarının tedavisinde kullanıldığı belgelenmiştir (Khalifa ve Ahmad, 1980).Mossa ve diğerleri, 1987 ). Ayrıca konjonktivit ve kısırlıkla mücadelede kullanılır ( AlGamdi ve diğerleri, 2011 ). A. hierochuntica'nın kimyasal bileşenleri, antimikrobiyal ( Daoowd, 2013 , Tayel ve El-Tras, 2009 ), anti-enflamatuar ( Abou-Elella ve diğerleri, 2016 , Rizk ve diğerleri, 1985) dahil olmak üzere çeşitli farmakolojik açıdan önemli özellikler açısından araştırılmıştır. ), nitrik oksit inhibe edici etkiler ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003a ), hipolipidemik ( AlAzzawie ve Shaban, 2011 , Salah ve diğerleri, 2011 ), hipoglisemik ( Rahmy ve El-Ridi, 2002 ), hepatoprotektif ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003b)) ve gastroprotektif ( Shah ve diğerleri, 2014 ) aktiviteleri in vitro ve in vivo çalışmalar kullanarak. Ek olarak, A. hierochuntica bitkisinde Anastatin A ve B ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003b ) ve hierochins A, B ve C ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003a ) gibi yeni biyoaktif bileşikler tanımlanmıştır .

A. hierochuntica bitki özlerinin memeli hücre hatları üzerindeki çoğalmayı önleyici aktivitesine ilişkin sınırlı literatür mevcuttur ( Ali ve diğerleri, 2014 , Abou-Elella ve diğerleri, 2016 , Mohammed ve diğerleri, 2015 ). A. hierochuntica'nın antikanser aktivitesi ile ilgili detaylı çalışmalar, tüm bitkinin metanolik ekstraktını kullanarak anti-melanogenezis ( Nakashima ve diğerleri, 2010 ) ve anti-servikal kanser aktiviteleri ( Hajjar ve diğerleri, 2017 ) ile sınırlıdır . BC'ye karşı olası antitümör özelliklere sahip bitki parçaları hakkında şu anda hiçbir bilgi mevcut değildir. Bu çalışma, A. hierochuntica'nın antiproliferatif etkisini değerlendirmek için yapılmıştır.bitki kısmı (gövde, tohum ve yaprak) hormona bağımlı bir insan BC hücre hattı, MCF-7 üzerinde ham özler ve apoptoz da dahil olmak üzere altta yatan hücre ölümü moleküler mekanizmalarını araştırmak için.

Git: 2. Yöntemler

2.1. Bitki materyali toplama ve çıkarma

A. hierochuntica (L), Şubat ve Nisan 2018'de Suudi Arabistan Krallığı'ndaki Mekke şehrinin batı bölgesinden toplandı. Bitki kurutulmuş durumdaydı ve yerel bir bitki uzmanı tarafından doğrulandı. Tüm bitki gövde, tohum ve yapraklar olarak ayrıldı ve mekanik bir öğütücü kullanılarak ince parçacıklara öğütüldü. Numuneler, toz haline getirilmiş bitki materyalinin her bir kısmından 100 g'dan 300 mL metanol ile ekstrakte edildi, bunun sonucunda gövdeden (MST), tohumdan (MSD) ve yapraktan (ML) veya sudan metanolik ekstraktlar elde edildi. gövdeden (AST), tohumdan (ASD) ve yapraktan (AL) elde edilen sulu ekstraktlarda. Ekstraksiyon oda sıcaklığında 3 gün boyunca sürekli çalkalanarak yapılmıştır ( Buss ve Butler, 2010).). Her süzüntü solventi, 0.22 um'lik bir filtreden süzüldü ve azaltılmış basınç ve düşük sıcaklıkta bir RV3V döner buharlaştırıcı (IKA, Staufen, Almanya) kullanılarak konsantre edildi. Her ekstraktın verimi tartıldı ve kullanılana kadar 4 °C'de saklandı. Bir kupon örneği ileride başvurmak üzere laboratuvarda saklanır. 2.2. MCF-7 hücre çizgisi kültürü

Hormon bağımlı insan BC hücre dizisi, Michigan Cancer Foundation (MCF)-7, American Type Culture Collections'dan (Manassas, VA, ABD) elde edildi ve %10 fetal ile takviye edilmiş Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM) içinde kültürlendi. sığır serumu (FBS), 2 mM glutamin ve 100 IU/ml penisilin ve 100 μg/ml streptomisin içeren %1 antibiyotik. Tüm hücre kültürü reaktifleri Gibco®'dan (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) temin edildi. _{Hücre çizgisi, nemlendirilmiş %5 C02} - inkübatöründe 37 °C'de tutuldu . MCF-7 hücreleri, %70-80 birleşmeye ulaştıklarında pasajlandı veya toplandı ve aşağı akış uygulamaları için kullanıldı. 2.3. Hücre canlılığı deneyi

MCF-7 hücreleri , opak beyaz Costar® 96 oyuklu plakalara (Corning, Thermo Fischer Scientific) 5 x 103 hücre/oyuk/100 ul ^yoğunlukta ekildi . 24 saatlik inkübasyonun ardından hücreler, bitki parçalarının çeşitli konsantrasyonlarda (10, 100, 250, 500, 1000 μg/ml) metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özleri ile muamele edildi. Ortamı ve muamele edilmemiş hücreleri içeren oyuklar, sırasıyla boş ve kontrol olarak görev yaptı. Hücre canlılığı, üreticinin talimatlarına göre CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega Corporation, Madison, WI, ABD) kullanılarak 72 saat sonra ölçüldü. Lüminesans, bir EnVision 2105 XCite çok modlu plaka okuyucu (PerkinElmer, Waltham, MA, ABD) kullanılarak ölçüldü ve sonuçlar göreli ışık birimleri (RLU) cinsinden verildi. 2.4. Akış sitometrisi

MCF-7 hücreleri , bir Corning® 24 oyuklu plaka içinde 5 x ¹⁰⁵ hücre/ml yoğunlukta tohumlandı . 24 saatlik inkübasyondan sonra hücreler, hücre canlılığı üzerindeki yarı maksimum inhibitör konsantrasyonla ( _IC50) veya 400 μg/ml metanolik (MSD, MST, ML) veya bitki parçalarının sulu ekstraktları (ASD, AST, AL) 24 saat daha inkübasyon için. 1 uM staurosporine (STS) (Santa Cruz biotechnology, Dallas, TX, ABD) maruz bırakılan hücreler, apoptoz indüksiyonu için pozitif kontrol olmuştur. Muamele edilmemiş hücreler, kontrol ve boyanmamış hücreler de apoptotik durum analizinde kullanıldı. Hücreler, üreticinin FITC-Annexin V Apoptosis Detection Kit I (Becton Disckinson Biosciences, San Diego, CA, ABD). 10.000 hücrenin apoptotik durumu, BD FACSDiva™ 6.0 yazılımı (BD Biosciences) kullanılarak Becton Dickinson (BD) FACSCanto™ akış sitometresi ile analiz edildi ve Annexin V ile karakterize edildi^{Erken apoptoz için +ve} /PI ^−ve ve geç apoptoz için Annexin V ^+ve /PI ^{+ve .}^{Sırasıyla Annexin V -ve} /PI ^-ve ve Annexin V ^-ve / PI ^+ve ile karakterize edilen canlı ve nekrotik hücreler de tespit edildi . 2.5. DNA parçalanma deneyi

^{MCF-7 hücreleri, 1 x 106} yoğunlukta ekilmiştir.Corning® 12 oyuklu plakada hücre/ml. Bağlandıktan sonra hücreler, 24 saatlik inkübasyon için bitki parçalarının 400 ug/ml metanolik (MSD, MST, ML) veya sulu (ASD, AST, AL) özleri ile muamele edildi. STS ile muamele edilmiş hücreler, muamele edilmemiş hücreler olan kontrol ile pozitif kontrol olarak kullanılmıştır. İşlenmiş ve işlenmemiş hücrelerin DNA'sı, üreticinin protokolüne göre ApoTarget™ Quick Apoptotic DNA Ladder Detection (Invitrogen, Carlsbad, CA, ABD) kullanılarak ekstre edildi. DNA, HE 33 Mini Denizaltı Elektroforez Ünitesinde (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) 0,5 ug/ml etidyum bromür ile boyanmış %1,8 agaroz jelde analiz edildi. DNA parçalanması, UVP Masaüstü ultraviyole aydınlatıcı (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) ile görselleştirildi ve fotoğraflandı. 2.6. Protein ekstraksiyonu ve Western blot analizi

MCF-7 hücreleri , 12 oyuklu bir plaka içinde 5 x 105 hücre/ml ^yoğunlukta ekilmiştir . Ertesi gün hücreler, bitkinin farklı kısımlarının 100 ve 400 ug/ml metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özleri ile muamele edildi ve 24 saat inkübe edildi. STS ile muamele edilmiş hücreler, pozitif kontrol olarak kullanıldı. Hücre lizatları, daha önce tarif edildiği gibi ( Matou-Nasri ve diğerleri, 2017 ) 80 ul NP40 lizis tamponu (Invitrogen, Carlsbad, CA, ABD) eklenerek hazırlandı.). Ekstre edilen proteinler, Qubit® Protein tahlil kiti protokolüne (Invitrogen, Carlsbad, CA, ABD) göre tahmin edildi ve numune protein konsantrasyonları, Qubit® florometre (Invitrogen, Carlsbad, CA, ABD) tarafından okundu. Yaklaşık 150 µg tahmin edilen protein, Mini-PROTEAN® Tetra hücresi (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, ABD) kullanılarak %12 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile ayrıldı ve poliviniliden diflorüre aktarıldı ( PVDF) membranlar (Bio-Rad Laboratuvarları). PVDF membranlarının bloke edilmesi, Odyssey® bloke edici tampon (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) ile 1 saat süreyle yapıldı, ardından membranlar bloke edici tamponla seyreltilmiş fare veya tavşan birincil antikorları (1:1000 seyreltme) ile incelendi ) kaspaz-3 ve kaspaz-9'un pro- ve parçalanmış formlarını hedefleme (Hücre Sinyal Teknolojisi, Danvers, MA, ABD) ve sürekli çalkalayarak gece boyunca 4 °C'de GAPDH'yi (Abcam, Cambridge, BK) hedefleme. Birincil antikorlar, seyreltilmiş kızılötesi floresan IRDye® 680RD (kırmızı)-konjuge keçi anti-tavşan veya IRDye® 800RD (yeşil)-konjuge keçi anti-fare ikincil antikorları (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) ile tespit edildi. (1:5000 seyreltme) Odyssey® bloke edici tamponlarda ve sürekli çalkalama ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi. Yıkandıktan sonra lekeler tarandı ve bir LI-COR Odyssey CLx Tarayıcı (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) kullanılarak analiz edildi. Birincil antikorlar, seyreltilmiş kızılötesi floresan IRDye® 680RD (kırmızı)-konjuge keçi anti-tavşan veya IRDye® 800RD (yeşil)-konjuge keçi anti-fare ikincil antikorları (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) ile tespit edildi. (1:5000 seyreltme) Odyssey® bloke edici tamponlarda ve sürekli çalkalama ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi. Yıkandıktan sonra lekeler tarandı ve bir LI-COR Odyssey CLx Tarayıcı (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) kullanılarak analiz edildi. Birincil antikorlar, seyreltilmiş kızılötesi floresan IRDye® 680RD (kırmızı)-konjuge keçi anti-tavşan veya IRDye® 800RD (yeşil)-konjuge keçi anti-fare ikincil antikorları (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) ile tespit edildi. (1:5000 seyreltme) Odyssey® bloke edici tamponlarda ve sürekli çalkalama ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi. Yıkandıktan sonra lekeler tarandı ve bir LI-COR Odyssey CLx Tarayıcı (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE, ABD) kullanılarak analiz edildi. 2.7. RNA ekstraksiyonu ve ters transkriptaz kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR)

MCF-7 hücreleri (1,5 × ¹⁰⁶) bir Corning® 6 oyuklu plakanın her bir oyuğuna ekilmiştir. Ertesi gün hücreler, 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyon için 400 ug/ml ML metanolik ekstrakt ve ASD sulu ekstrakt ile işlendi. Toplam RNA, GeneJET™ RNA Saflaştırma Kiti (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) kullanılarak memeli kültürlü hücrelerden toplam RNA'nın saflaştırılmasına yönelik protokol uygulanarak ekstre edildi ve NanoDrop üzerinde 260/280 nm'de absorbans ölçülerek miktarı belirlendi. ™ 2000 spektrofotometre (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD). GoScript™ Ters Transkripsiyon Sistemi (Promega Corporation) tarafından oligo(dT) primerleri kullanılarak iki adımlı protokolle bir cDNA dönüşümü gerçekleştirildi. Applied Biosystems™ 7500 Real-time PCR sisteminde (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA,Bcl-2 , 5'-AAGATTGATGGGATCGTTGC-3' ( ileri ), 5'-GCGGAACACTTGATTCTGGT-3' ( geri ); tp53, 5'-TGT GGAGTATTTGGATGACA-3' ( ileri ), 5'-GAACATGAGTTTTTTATGGC-3' ( geri ); Bax, 5'-GTGCACCAAGGTGCCGGAAC-3' ( ileri ), 5'-TCAGCCCATCTTCTTCCAGA-3' ( geri ); Bcl-xL , 5'-CCCAGAAAGGATACAGCTGG-3' ( ileri ), 5'-GCGATCCGACTCACCAATAC-3' ( geri ); GAPDH , 5'-AAGGTCGG AGTCAACGGATTTGGT-3' ( ileri ), 5'-ATGGCATGGACTGTGGTCATAGT-3' ( geri ); CDKN1A, 5'-G CGATGGAACTTCGACTTTGT-3' ( ileri ), 5'-GGGCTTCCTCTTGGAGAAGAT-3' ( geri ); Cyclin A , 5'-G TCACCACATACTATGGACATG-3' ( ileri ), 5'-AAGTTTTCCTCTCAGCACTGAC-3' ( geri ); Siklin D1 , 5'-TCCAGAGTGATCAAGTGTGA-3' ( ileri ), 5'-GATGTCCACGTCCCGCACGT-3' ( geri ); Siklin E, 5'-AATAGAGAGGAAGTCTGG-3' ( ileri ), 5'-AGATATGACACCTGCATG-3' ( geri ). İzlenen her gen ifadesi, dahili kontrol GAPDH'ninkiyle ilişkiliydi. Belirtilen genin ifadesindeki göreli değişiklikler 2 ^−ΔΔCt yöntemiyle analiz edildi (Livak ve Schmittgen, 2001 ). 2.8. istatistiksel analiz

Veriler, üç kopya halinde gerçekleştirilen deneylerin ortalama ± standart sapması (SD) veya ortalama ± standart hatası (SE) olarak ifade edildi ve her deney bağımsız olarak en az üç kez tekrarlandı. Sitotoksisite sonuçları, tedavi edilmemiş kontrole kıyasla yüzde hücre sağkalımı olarak ifade edilir. IC50 değerleri, Windows için GraphPad Prism yazılımı, _{sürüm 6 (GraphPad Software, La Jolla, CA, ABD,}http://www.graphpad.com/ ) kullanılarak doğrusal olmayan bir doz/yanıt regresyon modeli ile hesaplandı . İncelenen gen ekspresyonunun istatistiksel analizi, Freidman'ın 2-Yollu ANOVA'sı tarafından dereceler ve ardından post-hoc ikili çoklu karşılaştırma testleri ile değerlendirildi. p < 0 değerleri . 05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Git: 3. Sonuçlar

3.1. A. hierochuntica'nın metanolik ve sulu özleri, BC MCF-7 proliferasyonunu inhibe eder

A. hierochuntica bitki parçalarının (tohum, gövde, yaprak ) metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özleri, BC MCF-7 hücrelerinin çoğalmasını engelleme yeterlilikleri açısından test edildi. Artan metanol konsantrasyonlarına hücre maruziyeti (Şekil 1A) ve sulu (Şekil 1B) ekstraktlar, işlenmemiş hücrelerle karşılaştırıldığında doza bağlı bir şekilde hücre canlılığında bir azalmaya neden oldu, %100 (Şekil 1). _{Her ekstrakt için MCF-7 hücre canlılığının %50 inhibisyonuna} neden olan konsantrasyona karşılık gelen IC50 değeri belirlendi. Sulu ASD ekstraktının en düşük IC50 _değerini (282.50 µg/ml,tablo 1) ardından metanolik ML özütü (293.27 µg/ml,tablo 1). En yüksek IC50 _değerleri metanolik MSD ekstraktlarından elde edilmiştir (458.90 µg/ml,tablo 1) ve metanolik MST (539,62 µg/ml,tablo 1).

Resim, illüstrasyon vb. tutan harici bir dosya. Nesne adı gr1.jpg'dir.

Şekil 1
Metanolik (A) ve sulu (B) özütlerin MCF-7 hücre canlılığı üzerindeki etkileri. MCF-7 hücreleri, 72 saatlik inkübasyon için artan konsantrasyonlarda (10-1000 ug/ml) metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özütlerle işlendi. Hücre canlılığı, CellTiter-glo® kiti kullanılarak belirlendi ve kontrolün yüzdesi, %100'e karşılık gelen işlenmemiş hücre canlılığı olarak ifade edildi. Sonuçlar, üç bağımsız deneyin ortalama ± SD'si olarak sunulur. tablo 1

Anastatica hierochuntica ekstrakt konsantrasyonlarının metanollü (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) IC50 değerleri _, MCF-7 hücre canlılığının %50 azalmasına neden olur.

MSD	458.899
MST	539.619
makine öğrenimi	293.268
OSB	282.501
AST	448.054
AL	375.226

Ayrı bir pencerede aç 3.2. Metanolik ve sulu bitki parçası özleri, MCF-7 hücrelerinde apoptozu indükler

BC MCF-7 hücreleri metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özlerle işlendi, Annexin V-FITC/PI-PE ikilisine dayalı akış sitometrisi kullanılarak apoptotik durumun tespiti için incelendi boyama 400 μg/ml bitki kısmı ekstraktları ile yapılan hücre tedavileri, işlenmemiş hücrelere kıyasla canlı (AnnexinV ^−ve / PI ^−ve ) MCF-7 hücrelerinin yüzdesinde önemli bir düşüş ( p < 0.05) gösterdi, kontrol (İncir. 2). ^{Tedavi edilen gruplarda erken (AnnexinV +ve} / PI ^-ve ) ve geç (AnnexinV ^+ve / PI ^+ve ) apoptotik hücrelerin oranında eşzamanlı artış , nekrotik yüzdesinde yalnızca marjinal farklılıklar ile kontrol grubuna kıyasla gözlendi. (AnnexinV ^−ve / PI ^+ve ) hücreleri (İncir. 2B). Bitki parçalarının metanolik ve sulu özleri, MCF-7 hücrelerinde ortalama olarak yaklaşık %40-50 apoptozu (erken ve geç) indükledi (İncir. 2). Spesifik olarak, bitki yapraklarının hem metanolik hem de sulu özleri ve STS işlemi, MCF-7 hücrelerinde benzer geç apoptoz indüksiyon oranlarına sahipti, %17,8 ( p < 0,005), %18,2 ( p < 0,002) ve %21,8 ( p = 0,0001) ), sırasıyla. Bununla birlikte, STS ile muamele edilmiş hücreler ile bitki parçalarının metanolik ve sulu ekstraktları ile muamele edilmiş hücreler arasında gözlenen apoptoz indüksiyonu açısından önemli bir fark yoktu (İncir. 2B). _IC50 inhibe edici konsantrasyonlarında (Ek Şekil) test edilen bitki parçası özleri ile hücre tedavileri, her biri 400 ug/ml ile tedavi edilen hücrelerin apoptotik durumuna kıyasla canlı hücrelerin yüzdesinde, erken ve geç apoptozda önemli bir fark göstermedi. bitki özütü (İncir. 2). Apoptotik hücrelerde DNA parçalanmasının görselleştirilmesi, 24 saatlik inkübasyon için bitki parçalarının (400 ug/ml) ham ekstraktlarına maruz bırakıldıktan sonra genomik DNA'nın MCF-7 hücrelerinden izole edilmesiyle analiz edildi. Apoptotik hücrelerden ekstrakte edilen bozulmuş DNA jel elektroforezine tabi tutulduğunda bir “DNA merdiveni” oluşumu gözlendi (Şek. 3). Bitki parçalarının (MSD, MST, ML) sulu AL ve metanolik ekstraktları, kromozomal DNA'nın küçük internükleozomal fragmanlara net bir şekilde bozunduğunu gösterdi (Şek. 3). Beklendiği gibi, sağlıklı tedavi edilmemiş hücrelerden bozulmamış genomik DNA gözlemlendi (Şek. 3).

Resim, çizim vb. tutan harici bir dosya. Nesne adı gr2.jpg'dir.

İncir. 2
Hem metanolik hem de sulu ekstraktların MCF-7 hücrelerinde apoptozun indüklenmesi üzerindeki etkileri. MCF-7 hücreleri işlenmedi, 24 saat boyunca 1 uM STS (pozitif kontrol) ile birlikte 400 μg/ml metanolik ve sulu özler ile işlendi, ardından apoptoz analizi için FITC etiketli Annexin V/PE etiketli PI çift boyama kullanıldı. FACS. ^{(A) Dağılım grafikleri içindeki sayılar, canlı (sol alt, Annexin V -} /PI ^- ), erken apoptotik (sağ alt, Annexin V ⁺ /PI ^- ), geç apoptotik (sağ üst, Annexin V ⁺ /PI ⁺⁾ yüzdesini temsil eder. ) ve nekrotik hücreler (sol üst, Annexin V ^- /PI ⁺). (B) Çubuk grafikler, üç bağımsız deneye dayalı olarak, işlenmemiş (kontrol) ve STS ile işlenmiş hücrelerle birlikte her bir ekstraktın çeşitli konsantrasyonlarının varlığında veya yokluğunda MCF-7 hücrelerinin canlı, apoptozu ve nekroz yüzdesini sunar. Sonuçlar, altı bağımsız deneyin ortalama ± SE'si olarak sunulur.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı gr3.jpg'dir.

Şek. 3
Hem metanolik hem de sulu özütlerin MCF-7 hücrelerinde DNA parçalanması üzerindeki etkileri. STS ile işlenmiş MCF ile birlikte 400 μg/ml metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) ekstraktlarla işlenmiş MCF-7 hücrelerinde ApoTarget™ Hızlı Apoptotik DNA Ladder saptama kiti kullanılarak DNA parçalanmasını gösteren temsili jeller -7 hücre, 24 saatlik hücre tedavisinden sonra apoptotik durumlarını doğrular. Genomik DNA, kontrol (C) olan işlenmemiş MCF-7 hücrelerinde bozulmadan kaldı. 3.3. Metanolik ve sulu ekstraktlar, MCF-7 hücrelerinde apoptozu tetikleyen kaspaz-9 ve kaspaz-3 bölünmesini indükledi

MCF-7 hücrelerinin bitki parçalarının 100 ug/ml ve 400 ug/ml metanolik ve sulu özlerine maruz bırakılmasıyla apoptozun indüklenmesi, bir Western blot analizi kullanılarak apoptotik yollarda yer alan proteinlerin ekspresyonunun değerlendirilmesiyle doğrulandı.Şekil 4ekstraktlarla işlenmiş MCF-7 hücre gruplarında sırasıyla procaspase-3 ve bölünmüş-caspase-3'ün azalan ve artan ekspresyonunu gösterir. Bitki ekstraktları setleriyle tedavi edilen hücrelerde bölünmüş kaspaz-9'un artan ekspresyon seviyeleri ve azalan procaspaz-9 ekspresyonu da gözlendi (Şekil 4). Beklendiği gibi, canlı, işlenmemiş MCF-7 hücrelerinde kaspaz-3 ve kaspaz-9 bölünmesi gözlenmedi, kontrol (Şekil 4).

Resim, illüstrasyon vb. tutan harici bir dosya. Nesne adı gr4.jpg'dir.

Şekil 4
Özler aracılı apoptoz, MCF-7 hücrelerinde kaspaz-9 ve kaspaz-3 bölünmesini tetikler. 100 ve 400 μg/ml metanolik (MSD) ile 24 saatlik tedaviden sonra MCF-7 hücrelerinde kaspaz-9'un (bölünmüş kaspaz-9) ve kaspaz-3'ün (bölünmüş kaspaz-3) bölünmesini gösteren temsili Western blot jelleri , MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özler ile birlikte 1 uM STS, pozitif kontrol olarak kullanıldı. Muamele edilmemiş MCF-7 hücrelerinde, kontrolde (C) kaspaz bölünmesi gözlenmedi. 3.4. Metanolik ve sulu özler, pro-apoptotik Bax geninin, tümör baskılayıcı TP53 geninin ve sikline bağımlı kinaz inhibitörü CDKN1A geninin ekspresyonunu yukarı doğru düzenler

ASD ve ML ekstraktlarının MCF-7 hücreleri üzerindeki antiproliferatif etkileri, zaman içinde (24, 48 ve 72 saatlik inkübasyon), apoptoz ve hücre döngüsü ile ilgili genlerin (Bcl-2, Bcl-) ekspresyon seviyeleri izlenerek araştırıldı. xL, Tp53, Bax, CDKN1A, Cyclin A, D1 ve E) RT-qPCR kullanarak. Gen ekspresyonunun bazal seviyesi, farklı zaman aralıklarında toplanan, işlenmemiş MCF-7 hücrelerinin (yani kontrol) her bir grubunda belirlendi. Zaman içinde gen ekspresyonunun her bazal seviyesi arasında önemli bir fark gözlenmedi (veriler gösterilmemiştir). 400 μg/ml ASD ile MCF-7 hücre tedavisi, Bax (1,9 kat, p = 0,000005), TP53 (2,5 kat, p = 0,000005) ve CDKN1A (3,5 kat, P = 0.000005) 48 saatlik inkübasyondan sonra, kontrolde saptanan gen ekspresyonunun bazal seviyesi ile karşılaştırıldığında, tedavi edilmemiş hücreler (Şekil 5A). Bcl2 ve Cyclin E gen ekspresyon seviyeleri sırasıyla 0.2 kat ( p = 0.000005) ve 0.5 kat ( p = 0.010313) aşağı regüle edilmiştir . Bununla birlikte, Bcl-xL ve Cyclin D1 gen ekspresyon seviyeleri, kontrole kıyasla istatistiksel olarak anlamlı değildi (Şekil 5A). MCF-7 hücrelerinin ML ile işlenmesi, Bax (2,9 kat, p = 0,000001 ve 2,5 kat, p = 0,002), TP53 (3,6 kat, p = 0,000005 ve 2,9 kat ) ifadesini önemli ölçüde yukarı doğru düzenledi , p = 0.0056) ve CDKN1A (3.2 kat, p = 0.000005 ve 2.6 kat, p = 0.005602) sırasıyla 48 saat ve 72 saat hücre tedavisinde (Şekil 5B). Bcl-xL (0,1 kat, p = 0,0000005), Bcl2 (0,3 kat, p = 0,002937), Cyclin D1 (0,1 kat, p = 0,005602) ve Cyclin E (0,2 kat) ifade seviyelerinde önemli bir azalma , p = 0.005602) yalnızca ML ile işlenmiş MCF-7 hücrelerinde 48 saatlik inkübasyonda tespit edildi (Şekil 5B). Cyclin A'nın gen ekspresyon seviyesi, tedavi edilmemiş hücrelerde saptanan Cyclin A gen ekspresyonunun bazal seviyesi ile karşılaştırıldığında, tüm inkübasyon dönemlerinde (24, 48 ve 72 saat) hem ASD hem de ML ile tedavi edilmiş MCF-7 hücrelerinde etkilenmeden kalmıştır. , kontrol (Şekil 5B).

Resim, illüstrasyon vb. tutan harici bir dosya. Nesne adı gr5.jpg'dir.

Şekil 5
Hem metanolik hem de sulu ekstraktların apoptoz, tümör baskılayıcı p53 ve MCF-7 hücrelerinde tespit edilen hücre döngüsü ile ilgili gen ekspresyonu üzerindeki etkileri. Çubuk grafikler, gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu analizi ile belirlenen (BAX, BCL2, BC-xL) apoptotik-, tümör baskılayıcı TP53 ve (Siklin A-D1-E, siklin inhibitörü CDKN1A) hücre döngüsü ile ilgili transkriptlerin göreli ifadesini gösterir. 400 μg/ml ASD (A) veya ML (B) ile tedavi edilen MCF-7 hücrelerinde, tedavi edilmemiş MCF-7 hücrelerinde izlenen gen ekspresyonunun bazal seviyesi ile karşılaştırıldığında, kontrol.

Git: 4. Tartışma

Apoptosis indüksiyonu ve hücre büyümesinin durdurulması, enflamasyonu tetikleme riski yüksek ve hasarlı ve nekrotik hücreler nedeniyle yan etkileri olan geleneksel neo-adjuvan antikanser ajanların aksine, kanser tedavisi için en güvenli yaklaşımlardır (Mou ve ark . , 2019 , Pfeffer ve Singh, 2018 , Samadi ve diğerleri, 2015 ). Ekonomik açıdan bakıldığında, geleneksel antikanser ajanlar pahalıdır. Bununla birlikte, potansiyel antikanser aktiviteleri olan doğal bileşikler çoğunlukla ucuzdur ( Chawla ve diğerleri, 2018 , Seca ve Pinto, 2018), yeni tamamlayıcı ve alternatif antikanser ajanların geliştirilmesi için proapoptotik doğal biyoaktif bileşiklerin keşfine olan ilginin altını çiziyor. Apoptotik olayların kalitatif ve/veya kantitatif ölçümü ve ilgili akış aşağı hedef genlerin araştırılması, apoptozu aktive etmek için doğal ürün ekstraktları tarafından kullanılan etki mekanizmalarını oluşturmak ve doğrulamak için çok önemlidir (Tarafhdar ve diğerleri, 2001 ) . Mevcut çalışmada, A. hierochuntica'nın metanolik (MSD, MST, ML) ve sulu (ASD, AST, AL) özlerinin olduğuna dair kanıt sağladık.kök, tohumlar ve yapraklar, içsel bağımlı apoptotik yolu içeren apoptozun indüklenmesi yoluyla hormona bağımlı insan meme kanseri, MCF-7 hücre hattının yaşayabilirliğini inhibe etti. Bax ve p53 dahil olmak üzere proapoptotik hedef genlerin ekspresyonunun, hücre büyümesinin durmasına neden olduğu bilinen sikline bağımlı kinaz inhibitörü CDKN1A (p21 olarak da bilinir) ile yukarı regülasyonu gözlendi.

72 saatlik tedaviden sonra bitki özlerinin doza bağlı bir şekilde MCF-7 hücreleri üzerinde antiproliferatif aktiviteler sergilediği açıktı. _{En düşük IC50} değerine göre hem ASD hem de ML verimliydi (tablo 1). Bu bulgu Ali ve ark. (2014), tüm A. hierochuntica'nın etanolik ekstraktının , MCF-7 hücre proliferasyonunun %30'unu inhibe ettiğini bildirmiştir. A. hierochuntica'nın potansiyel antiproliferatif özellikleri, çeşitli insan ve fare hücre hatlarında kapsamlı bir şekilde incelenmiştir. Abou-Elella ve ark. (2016), bir etil asetat fraksiyonu ile 24 saatlik muameleden sonra, HeLa hücre hattının proliferasyonu üzerinde 3,6 µg/ml'lik bir IC50 gösterdiğini bildirdi ve _Hajjar ve ark. (2017), aynı bitkinin metanolik bir fraksiyonunun, 24 ve 48 saat boyunca 50 ve 25 ug/ml konsantrasyonda işleme tabi tutularak HeLa hücre proliferasyonunun %50'sini inhibe ettiğini gösterdi. Sulu bir ekstrakt100 mg/ml konsantrasyonda test edilen A. hierochuntica , AMN-3 hücrelerinin %70'ini inhibe etti ( Mohammed ve diğerleri, 2015 ). Daha önce, Nakashima ve ark. (2010) , A. hierochuntica'nın etil asetatta çözünür bir fraksiyonundan 44 saf bileşik izole etti ; bunlardan "bileşik 30", B16 melanom 4A5 hücrelerinde 6.9 uM'lik bir _{IC50 ile yüksek sitotoksik etki gösterdi.}Benzer şekilde, metanolik ve etil asetatta çözünür fraksiyon, hepatotoksisiteyi D-galaktozamin kaynaklı bir modelde sırasıyla %68.7 ve %80.9 oranında inhibe etti ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003a ). AlSobeai (2016) , A. hierochuntica'nın≥1000 µg/ml'nin üzerinde test edilen metanolik, etanolik ve sulu özler, bir Vero hücre hattı üzerinde hiçbir sitotoksik etki göstermedi ve bunun yalnızca kanser hücreleri için toksik olduğuna dair kanıt sağladı. A. hierochuntica'nın sulu ve organik ekstraktlarının antiproliferatif aktivitelerini, kanser hücrelerinin tipine ve tedavi süresine bağlı olarak çok çeşitli etkili konsantrasyonları göz önünde bulundurarak incelemek mantıklıydı .

A. hierochuntica'nın metanolik ve sulu özlerinin neden olduğu apoptoz nedeniyle meydana gelen doğal programlanmış hücre ölümütohum, gövde ve yaprak parçaları, bir akış sitometresi ve DNA fragmantasyonu kullanılarak Annexin V-FITC ve PI-PE çift boyamasına göre değerlendirildi. Apoptoz sırasında, plazma zarı bütünlüğünü kaybeder ve Annexin V ile tespit edilebilen dış zara maruz kalan fosfatidilserin (PS) kalıntılarına neden olurken, DNA bağlayıcı bir boya olan PI ölü hücrelerde geçirgendir. Erken ve geç apoptotik hücrelerin tanımlanması için her iki boyanın kombinasyonu önerilir. Bulgularımız, hem AL hem de MST ekstraktlarının, PS'nin hücre zarının içinden dış yaprakçığına translokasyonunu tetiklediğini ve MCF-7 hücrelerinde apoptotik hücre ölümünü tetiklediğini göstermektedir. Parçalanmış DNA'nın merdiven benzeri bir modelinin oluşumu, apoptozun erken morfolojik bir işaretidir ( Zhang ve Xu, 2002).). DNA'nın merdiven benzeri görünümü, yaklaşık 180-200 baz çiftinden (bps) oluşan histonlar arasındaki bağlayıcı bölgede DNA'yı parçalayan endojen bir endonükleazın aktivasyonu yoluyla gerçekleşir; bps'nin katları "apoptotik" olarak adlandırılır. " merdiven. Mevcut bulgulara göre, MSD, MST, ML ve AL ekstraktlarının apoptozu tetikleme potansiyeli, MCF-7 hücrelerinde DNA parçalanmasına neden olmuştur. Metanolik ve sulu ekstraktlarla işlenmiş MCF-7 hücrelerinin DNA parçalanmasının ve apoptotik durumunun doğrulanması, pro/bölünmüş kaspaz ifadesinin değerlendirilmesi ve apoptotik düzenleyicilerin ve yukarı doğru düzenlendiği bilinen tümör baskılayıcı p53'ün gen ifadesinin izlenmesiyle doğrulanır. DNA hasarını takiben ( Williams ve Schumacher, 2016 ).

Protein kaspaz ailesi, çeşitli apoptotik yollarda önemli bir rol oynar. Kaspazlar, aktif olmayan öncüler (prokaspazlar) olarak üretilir ve temel olarak hücre ölümü reseptörü aktivasyonunu takiben, ekstrinsik apoptotik yol olan spesifik proteolitik bölünme ile aktive edilir ( Parrish ve diğerleri, 2013 ). İntrinsik apoptotik yol, Bcl-xL ve Bcl-2'nin anti-apoptotik protein ekspresyonunun negatif regülasyonu yoluyla mitokondriyal Bcl-2 ailesi üyeleri yoluyla da indüklenebilir (Burlacu, 2003, Miyashita ve diğerleri , 1994 ) ve proapoptotik protein Bax'ın pozitif regülasyonu, sitokrom c'nin salınmasına neden olurkaspaz-9'un aktivasyon bölgesine karşılık gelen apoptozomun bir bileşeni olan mitokondriden. Hem dışsal hem de içsel apoptotik yollar, kaspaz-3'ü aktive eden kaspaz-8 ve kaspaz-9 aktivasyon yakınsamasına neden olur, plazma zarının tersine dönmesinden, nükleer ve sitoplazmik protein bozulmasından ve DNA parçalanmasından sorumlu ana enzimdir (Chinnaiyan, 1999, Du ve diğerleri, 2000 ) . , Hill ve diğerleri, 2004). Mevcut çalışmada genel bir gözlem olarak, her ekstrakttan 100 ve 400 μg/ml ile muamele edilen MCF-7 hücrelerinde apoptotik proteinlerin, bölünmüş kaspaz-3 ve bölünmüş kaspaz-9'un artan ekspresyonu gözlendi. Ekstraksiyon yöntemine bağlı olarak, ASD ve ML en yüksek kaspaz-3 bölünmesini indükledi. Sulu ekstraktlardan ziyade bitki parçalarının metanolik ekstraktlarında mitokondriyal bağımlı yol pro- ve bölünmüş kaspaz-9'un azalan ve artan ekspresyonu sırasıyla tespit edildi. Hacer ve ark. (2017)görüntü tabanlı bir yüksek içerik tarama (HSC) tekniği kullanarak floresan yoğunluğunu analiz ederek, tüm bitkinin metanolik fraksiyonu için 50 ug/ml konsantrasyonda HeLa hücrelerinde parçalanmış kaspaz-9 ve TP53'ün protein seviyesi ekspresyonunu hesapladı ve bitki ekstraktının, reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimi yoluyla mitokondriyal süperoksit salınımını uyarma kapasitesini araştırdı. Bu çalışmada kaspaz-9 ve kaspaz-3'ün bölünmüş formlarının dahil edilmesi, A. hierochuntica'nın mitokondriye bağlı içsel yol yoluyla apoptozu başlattığı ifadesini desteklemektedir .

Hücre döngüsü, hücre bölünmesinin kontrolünde (mitoz) yer alan proteinlerin hücre içi lokalizasyonuna yardımcı olan veya fosforile eden siklinlerin ve CDK'lerin heterodimer oluşumundan sonra ilerler. CDK etkileşimli protein/Kinaz inhibitör protein (CIP/KIP), siklin-CDK kompleksinin aktivitelerini ve ayrıca sikline bağımlı kinaz inhibitörleri (CDKN) olarak adlandırılan diğer proteinleri ve enzimleri inhibe eder. CIP/KIP ailesi, aşağıdaki üç proteini, p21 (CDKN1A), p27 (CDKN1B) ve p57'yi (CDKN1C) aktive eder ( Peter, 1997 , Roberts ve diğerleri, 1994 , Sauer ve Lehner, 1995). p21 (CDKN1A), kanserli hücrelerde eksojen kaynakların neden olduğu DNA hasarına yanıt olarak eksprese edilen ve aktive olan ve onarım ve hayatta kalma için hücre döngüsünün durmasına neden olan veya onarım girişimi başarısız olursa apoptozu indükleyen transkripsiyonel faktör p53 tarafından aktive edilir. Levine ve Ören, 2009 ). Artan p21 ekspresyonu, G1 fazında Cyclin D-CDK4,6 kompleksleri, siklin E-CDK2 kompleksi ve S fazında Cyclin A-CDK2 kompleksi için bir inhibitör görevi görür ve bir sonraki faza geçişini engeller. hücre döngüsü ( Malumbres ve Barbacid, 2009 , Satyanarayana ve Kaldis, 2009). Tümör baskılayıcı protein p53, mitokondride anti-apoptotik Bcl-xL ve Bcl-2 ile etkileşerek inhibitör kompleksler oluşturur ve membran geçirgenliğine ve sitokrom c salımına neden olur ( Mihara ve diğerleri, 2003 ) ve sitosolik p53, proapoptotik Bax'ı proteinle aktive eder -protein etkileşimleri ( Ha ve arkadaşları, 2003 ). Sonuç olarak, bu çalışmada, Bcl-2, Bcl-xL, TP53, Bax, CDKN1A, Cyclin A, D1 ve E'nin ifadeleri incelendi ve ASD ve ML ile 48 saatlik MCF-7 hücre tedavisinde etkili oldu. p53 ve p21 genlerinin yukarı regülasyonu, hem ASD hem de ML özütleri ile işlenmiş MCF-7 hücrelerinde saptanan en yüksek ifade düzeyine ulaştı. Önceki bir çalışma, bitkinin sulu ekstraktının antimitotik etkisinin, DNA sentezinin blokajını indüklediğini göstermiştir.Allium cepa kökleri ( Shehab ve Adam, 1983 ). Bu sonuçlar, A. hierochuntica tedavisinin, Cyclin D1 ve E'nin ekspresyonunu aşağı doğru düzenleyerek hücre döngüsü ilerlemesini baskılayabileceğini ve p53 ve p21 yoluyla apoptozu indükleyebileceğini göstermektedir . Bunun nedeni, yaygın olarak siklin inhibitörleri olduğu bildirilen ( Mocanu ve diğerleri, 2015 , Zhang ve diğerleri, 2018 ) ve yakın zamanda A. hierochuntica'nın metanolik yaprak ekstrelerinde tanımlanan ( Saranya ve diğerleri) zengin fenol ve flavonoid kaynağı olabilir. al, 2019 ).

Gelecekteki deneyler , gözlenen biyoaktivitelerden sorumlu sulu ve metanolik A. hierochuntica ekstraktlarındaki fitokimyasal(lar)ı ortaya çıkarmak için tanımlama, ayırma, izolasyon ve saflaştırma tekniklerini içerecektir . Kapsamlı kimyasal analizler hazırlık ve yarı hazırlık sıvı kromatografisini, kristalografiyi, kütle spektrometrisini ve nükleer manyetik rezonansı (NMR) içerecektir. A. hierochuntica bitkisinde bulunan, neolignanlar (hierochins A, B ve C) ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003a ) ve flavonoidler (Anastatin A ve B) ( Yoshikawa ve diğerleri, 2003b) dahil olmak üzere yeni ikincil metabolitler) özellikle ilgi çekici olacaktır. Gelecekteki çalışmalar, meme kanseri için doğal fitokimyasal bazlı antikanser ajan(lar)ı tanımlamanın yolunu açabilir.

Git: 5. Sonuçlar

A. hierochuntica'nın farklı kısımlarının (tohum, gövde ve yaprak) sulu ve metanolik ekstraktlarınıninsan göğüs kanseri MCF-7 hücrelerinde doza bağlı bir şekilde önemli antiproliferatif etkilere sahiptir. Bitki özlerinin antiproliferatif özelliği, apoptozun indüklenmesi yoluyla MCF-7 hücrelerinde hızlı hücre ölümünde ortaya çıktı ve DNA fragmantasyonu ile sonuçlandı. MCF-7 hücrelerinde apoptoz mekanizması, kaspaz-9 ve kaspaz-3'ün parçalanmış formlarının aktivasyonunun yanı sıra Bax, p53 ve CDKN1A'nın yukarı regülasyonu ile kanıtlanan p53'e bağlı mitokondriyal yoldan meydana gelir. genler ve antiapoptotik ve hücre döngüsü genlerinin aşağı regülasyonu. Güçlü biyoaktif fitokimyasalları tanımlamak ve izole etmek ve meme kanseri için potansiyel kemoterapötik veya kemopreventif ajanların gelişimini araştırmak için ek deneyler yapılacaktır.

Git: Rekabetçi Menfaat Beyanı

Yazarlar, bu makalede bildirilen çalışmayı etkileyecek gibi görünebilecek, bilinen hiçbir rakip finansal çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını beyan eder.

Git: teşekkürler

FACS analizi için KAIMRC Çekirdek Tesisinden Bay Thadeo Trivilegio'ya ve hücre tabanlı tahlillerin çoğunda yardımları için Naif Arap Güvenlik Bilimleri Üniversitesi Adli Bilimler Bölümünden Bayan Rehab Mohammad Aldoshan ve Bayan Beshaier Alanzi'ye teşekkür ederiz. Finansman

Bu proje tamamen Kral Abdullah Uluslararası Tıbbi Araştırma Merkezi (KAIMRC) tarafından finanse edildi, hibe numarası RC16/175/R. Yazar katkı beyanı

SR ve SMN çalışmayı tasarladı. SAM, ZIA, MSA, AV, HA, HA-E testleri gerçekleştirdi, verileri topladı ve veri analizini gerçekleştirdi. Makaleyi SMN, SR ve SAM yazdı.

Git: Dipnotlar

King Saud Üniversitesi sorumluluğunda akran değerlendirmesi.

^{Ek A Bu makalenin tamamlayıcı verileri çevrimiçi olarak}https://doi.org/10.1016/j.jsps.2020.06.020 adresinde bulunabilir .

Git: Ek A. Ek malzeme

Aşağıdakiler, bu makaleye ek verilerdir: Ek Şekil 1

Resim, illüstrasyon vb. tutan harici bir dosya. Nesne adı fx1.jpg'dir.

_IC50'de test edilen hem metanolik hem de sulu ekstraktların MCF-7 hücrelerinde apoptozun indüksiyonu üzerindeki etkileri. MCF-7 hücreleri işlenmedi, 24 saat boyunca 1 uM STS (pozitif kontrol) ve ardından FITC etiketli Annexin V/PE etiketli ile birlikte metanolik ve sulu özlerin hücre canlılığı ( _IC50 ) üzerindeki yarı maksimum inhibitör konsantrasyonu ile işlendi FACS kullanılarak apoptoz analizi için PI çift boyama. ^{(A) Dağılım grafikleri içindeki sayılar, canlı (sol alt, Annexin V -} /PI ^- ), erken apoptotik (sağ alt, Annexin V ⁺ /PI ^- ), geç apoptotik (sağ üst, Annexin V ⁺ /PI ⁺⁾ yüzdesini temsil eder. ) ve nekrotik hücreler (sol üst, Annexin V^- /PI ⁺ ). (B) Çubuk grafikler, üç bağımsız deneye dayalı olarak, işlenmemiş (kontrol) ve STS ile işlenmiş hücrelerle birlikte her bir ekstraktın çeşitli konsantrasyonlarının varlığında veya yokluğunda MCF-7 hücrelerinin canlı, apoptozu ve nekroz yüzdesini sunar. Sonuçlar ortalama ± SE olarak sunulur.

Git: Referanslar

Abou-Elella F., Hanafy EA, Gavamukulya Y. HeLa hücre hatlarına karşı Anastatica hierochuntica (Kaff Maryam) ekstraktlarının antioksidan ve antiinflamatuar aktivitelerinin yanı sıra in vitro sitotoksik aktivitelerinin belirlenmesi . J.Med. Bitkiler Arş. 2016; 10 :77–87. http://hdl.handle.net/20.500.12283/107 [ Google Akademik ]
AlAzzawie HF, Shaban F. Alkolik Anastatica hierochuntica ekstraktının alloksan kaynaklı diyabetik sıçanlarda bazı biyokimyasal ve histolojik parametreler üzerindeki etkisi. Irak J. Sci. 2011; 52 :445–455. [ Google Akademik ]
AlGamdi N., Mullen W., Crozier A. Anastatica cheatrochuntica tohumlarından hazırlanan çay, çeşitli antioksidan flavonoidler, klorojenik asitler ve fenolik bileşikler içerir. fitokimya. 2011; 72 :248–254. doi: 10.1016/j.phytochem.2010.11.017. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Ali MA, Abul FM, Al-Hemaid FM, Abou-Tarboush FM Suudi Arabistan'dan yabani bitki özlerinin insan meme adenokarsinom hücreleri üzerinde in vitro sitotoksisite taraması. Genet. Mol. Res. 2014; 13 :3981–3990. doi: 10.4238/2014.mayıs.23.9. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
AlSobeai SM Anastatica hierochuntica'nın sulu, metanolik ve etanolik ekstraktlarının patojenik bakterilere karşı in vitro sitotoksisitesi ve antibakteriyel değerlendirmesi . Int. J. Curr. Res. Biyosci. Bitki Biol. 2016; 3 :14–22. doi: 10.20546/ijcrbp.2016.306.002. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Bailon-Moscoso N., Cevallos-Solorzano G., Carlos Romero-Benavides J., Isabel Ramirez Orellana M. Hücre döngüsü tutuklama modülatörleri olarak doğal bileşikler: antikanser kemoterapileri için uygulama. Curr. Genomik. 2017; 18 :106–131. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
Burlacu A. Bcl-2 ailesi proteinleri tarafından apoptozun düzenlenmesi. J. Hücre Mol. Med. 2003; 7 :249–257. doi: 10.1111/j.1582-4934.2003.tb00225.x. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Buss AD, Butler MS Royal Society of Chemistry; Londra: 2010. İlaç Keşfi için Doğal Ürün Kimyası; sayfa 245–247. [ Google Akademik ]
Chawla A., Janku F., Wheler JJ, Miller VA, Ryan J., Anhorn R., Zhou Z., Signorovitch J. Tek merkezli bir çalışmada kapsamlı genomik profilleme ile yönetilen antikanser tedavisinin tahmini maliyeti. JCO Kesin. Onco. 2018; 2 :1–11. doi: 10.1200/PO.18.00074. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Chinnaiyan AM Apoptozom: hücre ölüm makinesinin kalbi ve ruhu. neoplazi. 1999; 1 :5–15. doi: 10.1038/sj.neo.7900003. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Daoowd WS Anastatica hierochuntica özlerinin in vitro antifungal aktivitesi . Kufa J. Vet. Med. bilim 2013; 4 :142–148. [ Google Akademik ]
Du C., Fang M., Li Y., Li L., Wang X. SMAC, IAP inhibisyonunu ortadan kaldırarak sitokrom c'ye bağlı kaspaz aktivasyonunu destekleyen bir mitokondriyal protein. Hücre. 2000; 102 :33–42. doi: 10.1016/s0092-8674(00)00008-8. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Friedman J., Stein Z. Tohum dağıtma mekanizmalarının Negev Çölü'ndeki Anastatica hierochuntica'nın (Cruciferae) dağılımı üzerindeki etkisi. İsrail. J. Ekol. 1980; 68 :43–50. doi: 10.2307/2259242. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Ha JH, Shin JS, Yoon MK, Lee MS, He F., Bae KH, Yoon HS, Lee CK, Park SG, Muto Y., Chi SW p53 protein transaktivasyon alanının anti-apoptotik Bcl-2 ile ikili bölge etkileşimleri aile proteinleri, farklı p53 yollarının oldukça yakınsak bir mekanizmasını ortaya çıkarır. J. Biol. kimya 2003; 288 :7387–7398. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
Hajjar D., Kremb S., Sioud S., Emwas AH, Voolstra CR, Ravasi T. Suudi Arabistan bitkilerinde bulunan anti-kanser ajanları, otomatik yüksek içerikli görüntüleme ile ortaya çıktı. PLoS BİR. 2017; 12 :e0177316. doi: 10.1371/journal.pone.0177316. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Hill MM, Adrain C., Duriez PJ, Creagh EM, Martin SJ Doğal Apaf-1 apoptozomlarının bileşiminin, montaj kinetiklerinin ve aktivitesinin analizi. EMBO J.2004; 23 :2134–2145. doi: 10.1038/sj.emboj.7600210. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Khalifa TI, Kahire Mısır Ahmad MA Üniversitesi; 1980. Bazı Anastatica Türlerinin Farmakognostik Çalışması . Doktora tezi. [ Google Akademik ]
Levine AJ, Oren M. s53'ün ilk 30 yılı: giderek daha karmaşık hale geliyor. Nat. Rahip Kanser. 2009; 10 :749–758. doi: 10.1038/nrc2723. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Livak Kenneth J., Schmittgen Thomas D. Gerçek zamanlı kantitatif PCR ve 2−ΔΔCT yöntemi kullanılarak göreli gen ekspresyon verilerinin analizi. Yöntemler. 2001; 25 (4):402–408. doi: 10.1006/meth.2001.1262. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Malumbres M., Barbacid M. Hücre döngüsü, CDK'ler ve kanser: değişen bir paradigma. Nat. Rahip Kanser. 2009; 9 :153. doi: 10.1038/nrc2602. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Matou-Nasri S., Sharaf H., Wang Q., Almobadel N., Rhaban Z., Al-Eidi H., Yahya WB, Trivilegio T., Ali R., Ahmed N. Gelişmiş glikasyon son ürünlerinin biyolojik etkisi östrojen reseptörü pozitif MCF-7 meme kanseri hücreleri. Biyokimya. biyografiler. Açta, Mol. Temel Dis. 2017; 1863 :2808–2820. doi: 10.1016/j.bbadis.2017.07.011. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Mihara M., Erster S., Zaika A., Petrenko O., Chittenden T., Pancoska P., Moll UM p53, mitokondride doğrudan apoptojenik bir role sahiptir. Mol. Hücre. 2003; 11 :577–590. doi: 10.1016/s1097-2765(03)00050-9. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Miyashita T., Krajewski S., Krajewska M., Wang HG, Lin HK, Liebermann DA, Hoffman B., Reed JC Tümör baskılayıcı p53, bcl-2 ve bax gen ekspresyonunun in vitro ve in vivo düzenleyicisidir. onkojen. 1994; 9 :1799–1805. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Mocanu MM, Nagy P., Szöllősi J. Diyet polifenolleri ile meme kanserinin kemoprevansiyonu. moleküller. 2015; 20 :22578–22620. doi: 10.3390/molecules201219864. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Mohammed TU, Baker RK, Al-Ameri KAH, Abd-Ulrazzaq SS Anastatica hierochuntica L.'nin sulu ekstraktının AMN-3 hücre hattı üzerinde in vitro sitotoksik etkisi. Grasas Asitler. 2015; 61 :67–75. [ Google Akademik ]
Mossa JS, Al-Yahya MA, Al-Meshal IA King Saud Üniversitesi kütüphaneleri; Riyad: 1987. Suudi Arabistan'ın Şifalı Bitkileri. [ Google Akademik ]
Mou J., Chen D., Deng Y. Antikanser tedavisi için sikline bağımlı kinaz 1/2 inhibitörleri. Med. kimya 2019; 31241436 doi: 10.2174/1573406415666190626113900. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Nakashima S., Matsuda H., Oda Y., Nakamura S., Xu F., Yoshikawa M. B16 melanom hücrelerinde çöl bitkisi Anastatica hierochuntica'dan melanogenez inhibitörleri. Biorg. Med. kimya 2010; 18 :2337–2345. doi: 10.1016/j.bmc.2010.01.046. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Oronsky B., Carter C., Scicinska A., Oronsky A., Oronsky N., Lybeck M., Scicinski J. Tıbbi Makyavelizm: hedefli kemoterapi ile fayda ve zarar arasındaki denge. Oncotarget. 2016; 7 :9041–9045. doi: 10.18632/oncotarget.6984. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Parrish AB, Freel CD, Kornbluth S. Kaspaz aktivasyonunu ve işlevini kontrol eden hücresel mekanizmalar. Soğuk Kaynak Harb Perspective. Biol. 2013:a008672. doi: 10.1101/cshperspect.a008672. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Paul S., Chakrabarty S., Ghosh S., Nag D., Das A., Dastidar DG, Dasgupta M., Dutta N., Kumari M., Pal M., Chakrabarti G. Fitokimyasal aposinin ile hücresel mikrotübülü hedefleme otofaji sergiler akciğer karsinomu ilerlemesini ve tümörijenezi inhibe etmek için aracılı apoptoz. Bitki ilacı. 2020; 67 :153152. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Peter M. Springer; Boston: 1997. Sikline Bağlı Kinaz İnhibitörlerinin (CKI'ler) Düzenlenmesi, Hücre Döngüsü Araştırmasında İlerleme; sayfa 99–108. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Pfeffer CM, Singh ATK Apoptosis: antikanser tedavisi için bir hedef. Int. J. Mol. bilim 2018; 19 :448. doi: 10.3390/ijms19020448. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Rahmy TR, El-Ridi MR Anastatica hierochuntica bitki özütünün normal ve diyabetik farelerde Langerhans Adacıkları üzerindeki etkisi. Mısırlı J. Bio. 2002; 4 :87–94. [ Google Akademik ]
Rizk AM, Williamson EM, Evans FJ Katar'da büyüyen bitkilerin bileşenleri VII anti-inflamatuar aktivite için bazı bitkilerin incelenmesi. Int. J. Ham İlaç Arş. 1985; 23 :1–4. doi: 10.3109/13880208509070677. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Roberts JM, Koff A., Polyak K., Firpo E., Collins S., Ohtsubo M., Massague J. Cyclins, Cdks ve siklin kinaz inhibitörleri. Soğuk Kaynak Harb. Semptom miktar Biol. 1994; 59 :31–38. doi: 10.1101/sqb.1994.059.01.006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Salah SH, Abdou HS, Abd El-Azeem AS, Abdel-Rahim EA Bazı tıbbi bitkilerin hipoglisemik ajanlar olarak erkek yetişkin albino sıçanlarda diyabet stresinin ürettiği kromozomal sapmalar ve anormal nükleik asit metabolizması üzerindeki antioksidan etkileri. J Dia. Mellitus. 2011; 1 :6–14. doi: 10.4236/jdm.2011.11002. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Saleh J., Machado L. Rose of Jericho: Bir uyarı. Umman Med. J.2012 ; 27 :338. doi: 10.5001/omj.2012.86. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Samadi AK, Bilsland A., Georgakilas AG, Amedei A., Amin A., Bishayee A., Azmi AS, Lokeshwar BL, Grue B., Panis C., Boosani CS Tümörü teşvik eden iltihabı baskılamak için çok hedefli bir yaklaşım. Semin. Kanser Biol. 2015; 35 :151–184. doi: 10.1016/j.semcancer.2015.03.006. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Saranya R., Ali MS, Anuradha V., Safia M. Anastatica hierochuntica'nın farklı bitki parçalarının farmakognozisi ve radikal süpürme potansiyeli . J Eczacılık. fitokimya 2019; 8 :1764–1771. [ Google Akademik ]
Satyanarayana A, Kaldis P. Memeli hücre döngüsü düzenlemesi: birkaç Cdk, çok sayıda siklin ve çeşitli telafi edici mekanizmalar. onkojen. 2009; 28 (33):2925–2939. doi: 10.1038/onc.2009.170. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Sauer K., Lehner CF Hücre Döngüsü Araştırmalarında İlerleme. Baharcı; Boston: 1995. S fazına girişin düzenlenmesinde siklin E'nin rolü; s. 125–139. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Seca AML, Pinto DCGA Antikanser ajanlar olarak bitki sekonder metabolitleri: klinik deneylerde ve terapötik uygulamada başarılar. Int. J. Mol. bilim 2018; 19 :263. doi: 10.3390/ijms19010263. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Shah AH, Bhandari MP, Al-Harbi NO, Al-Ashban RM Kaff-E-Maryam ( Anastatica hierochuntica L.): farklı deneysel modellerde gastro-koruyucu aktivite ve toksisitenin değerlendirilmesi. biyo. Med. J.2014 ; 6 :1–10. https://doi.og/10.4172/0974-8369.1000197 [ Google Akademik ]
Shahwar D., Iqbal MJ, Nisa M., Todorovska M., Attar R., Sabitaliyevich UY, Farooqi AA, Ahmad A., Xu B. Natural product aracılı düzenlileştirme of ölüm reseptörleri ve hücre içi makineler: taze boru hattından yaklaşık TRAIL- aracılı sinyalleşme ve doğal TRAIL hassaslaştırıcıları. Int. J. Mol. bilim 2019; 20 :2010. doi: 10.3390/ijms20082010. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Shareef M., Ashraf MA, Sarfraz M. Göğüs kanseri tedavisi için doğal tedaviler. Suudi Eczacılık. J.2016 ; 24 :233–240. doi: 10.1016/j.jsps.2016.04.018. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Shehab AS, Adam ZM Katar III'deki tıbbi bitkilerin sitolojik etkileri. Anastatica hierochuntica L' nin su ekstraktının mitotik etkisi . Allium cepa'da. Sitoloji. 1983; 48 :343–348. doi: 10.1508/cytologia.48.343. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Tang Y., Wang Y., Kiani MF, Wang B. Göğüs kanserinde sınıflandırma, tedavi stratejisi ve ilişkili ilaç direnci. klinik Meme kanseri. 2016; 16 :335–343. doi: 10.1016/j.clbc.2016.05.012. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Taraphdar AK, Roy M., Bhattacharya RK Apoptoz indükleyicileri olarak doğal ürünler: kanser tedavisi ve önlenmesi için çıkarım. Curr. bilim 2001; 10 :1387–1396. https://www.jstor.org/stable/24104955 [ Google Akademik ]
Tayel AA, El-Tras WF Mısır halk şifalı otları ve baharat özleri ile gıda kaynaklı bakterilerle savaşma imkanı. J. Mısır Yayını. Sağlık Doç. 2009; 84 :21–32. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Torre LA, Islami F., Siegel RL, Ward EM, Jemal A. Kadınlarda küresel kanser: yük ve eğilimler. Kanser Salgını. Biyobelirteçler Önceki 2017; 26 :444–457. doi: 10.1158/1055-9965.EPI-16-0858. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Welz AN, Emberger-Klein A., Menrad K. İnsanlar neden bitkisel ilaç kullanıyor: Almanya'daki bir odak grup çalışmasından elde edilen bilgiler. BMC Tamamlayıcı Altern Med. 2018; 18:92 . doi: 10.1186/s12906-018-2160-6. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Williams AB, Schumacher B. DNA-hasar-onarım sürecinde p53. Soğuk Kaynak Harb Perspective. Med. 2016; 6 :a026070. doi: 10.1101/cshperspect.a026070. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Yoshikawa M., Morikawa T., Xu F. (7R, 8S) ve (7S, 8R) Mısır bitkisel ilacı Anastatica hierochuntica'dan 8–5' bağlantılı neolignanlar ve lignanların nitrik oksit üretimi üzerindeki inhibitör aktiviteleri. Heterosikller. 2003; 60 :1787–1792. doi: 10.3987/COM-03-9801. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
Yoshikawa M., Xu F., Morikawa T., Ninomiya K., Matsuda H. Anastatins A ve B, çöl bitkisi Anastatica hierochuntica'dan hepatoprotektif aktivitelere sahip yeni iskelet flavonoidleri . Biorg. Med. kimya Letonya 2003; 13 :1045–1049. doi: 10.1016/s0960-894x(03)00088-x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Zhang J., Xu M. Apoptotik DNA parçalanması ve doku homeostazı. Trendler Hücre Biol. 2002; 12 :84–89. doi: 10.1016/S0962-8924(01)02206-1. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
Zhang J., Zhang L., Xu Y., Jiang S., Shao Y. Flavonoidlerin sikline bağımlı kinaz 6/siklin D kompleksine bağlanma davranışının deşifre edilmesi. PLoS BİR. 2018; 13 :e0196651. doi: 10.1371/journal.pone.0196651. [ Ücretsiz PMC makalesi ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]

Duyuru

Meryem Ana otu, Anastatika Hierochuntica

Meryem Ana otu, Anastatika Hierochuntica

Yorum yap