Duyuru

***maturidi*** · 24 October 2022, 14:39

İnsan idrarındaki Vaccinium macrocarpon bileşenlerinin ve metabolitlerinin ve idrarın Candida albicans yapışması ve biyofilm oluşumu üzerindeki ex-vivo etkisinin profilinin çıkarılması

Yazar bağlantıları bindirme panelini açarGiovanna Baron ^ve Alessandra Altomare ^ve Luca Regazzoni ^ve Laura Fumagalli ^ve Angelica Artasensi ^ve Elisa Borghi ve ^Emerenziana Ottaviano ve Cristian Del Bo ^c Patrizia Riso ^ve Pietro Allegrini ^d Giovanna Petrangolini ^d Paolo Morazzoni ve Antonella Riva ^d Lolita ^MarinaRiva ^d Lolita ^_

Farmasötik Bilimler Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Luigi Mangiagalli 25, 20133 Milano, İtalya
Sağlık Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Di Rudinì 8, 20142 Milano, İtalya
Gıda, Çevre ve Beslenme Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Luigi Mangiagalli 25, 20133 Milano, İtalya
Indena SpA, Viale Ortles 12, 20139 Milano, İtalya

https://doi.org/10.1016/j.bcp.2019.113726 Hakları ve içeriği alın
Creative Commons lisansı altında
Açık Erişim

Kısaltmalar

İYE'ler
İdrar yolu enfeksiyonları
PAC'ler
proantosiyanidinler
CFM-Kimliği
metabolit tanımlaması için rekabetçi parçalanma modellemesi

anahtar kelimeler
Kütle spektrometrisi
Kızılcık
Vaccinium macrocarpon
Candida albicans
idrar metabolitleri
İYE'ler

1 . giriiş
Candida albicans , insanlarda hastalığa neden olan en yaygın mantarlardan biridir ve hastane üriner sistem enfeksiyonlarında (İYE) en sık izole edilen fungal patojendir [1] , [2] . Ürolojik cihazlar, ürolojik prosedürler, diyabet ve kadın olmak kandidüri ile bağlantılı ana faktörlerdir [3] . Hastanede yatan deneklerin %20'ye kadarında kullanılan kateterler [4] , plastik veya silikon yüzeyler üzerinde kolaylıkla biyofilm oluşturabilen mikroorganizmalar için bir yapışma substratı temsil eder. Mikrobiyal biyofilmlerin en önemli özelliği antimikrobiyal tedavilere tolerans göstermeleridir [5], tekrarlayan veya kalıcı enfeksiyonlara yol açar. Bu nedenle, geleneksel antifungal tedaviye alternatif yaklaşımlar arzu edilir ve bunlar arasında botanik ürünlerin araştırılması yeni terapötik yaklaşımlar için fırsatlar sunar.

Kızılcık ( Vaccinium macrocarpon ), idrar yolu enfeksiyonları (İYE), diş çürükleri ve mide ülserleri dahil olmak üzere patojenik enfeksiyonlara karşı faydalı özelliklere sahip olan zengin bir polifenol kaynağıdır [6] . Ayrıca, dut fenolikleri antioksidan, antiinflamatuar ve antikanser özellikler gösterdi [7] , [8] . Tüm fitokimyasalların bir sinerjisi, in vitro çalışmalarda bildirilen kızılcıkların sağlık üzerindeki büyük faydalarını açıklayabilir [9] , [10] , [11] . Tüm bu potansiyel uygulamalara rağmen, şimdiye kadar İYE'lerin önlenmesi, kızılcık bazlı ürünler için ana uygulama olmaya devam etmektedir [12] .. Kızılcık ana bileşenleri flavonoller , antosiyaninler , proantosiyanidinler (PAC'ler), flavan-3-oller ve fenolik asitler ve türevleridir[13]. Birkaçin vitroçalışma, kızılcıkların yapışma önleyici özelliklerinin PAC'lere ve özellikle A tipine bağlı olduğu hipotezini desteklemiştir[14]. Bununla birlikte, insan idrarındaki varlığına ilişkin tartışmalı sonuçlar bildirilmektedir: birçokin vivoçalışma, bunların kızılcık alımından sonra tespit edilmediğini göstermiştir[15],[16],[17],[18],[19], ancak iki çalışma idrarda çok düşük bir konsantrasyonda varlığını göstermiştir [20] , [21] . Farklı dozajların ve standardize edilmemiş kızılcık ürünlerinin kullanılması bu tartışmalı sonuçları açıklayabilir. Bu çalışmanın amacı, insan çalışmalarında etkili olduğu bulunan yüksek düzeyde standardize edilmiş bir kızılcık özütünün (Anthocran®, Indena SpA) alınmasından sonra insan idrarındaki bileşenlerin ve metabolitlerin profilini çıkarmaktır [22] , [23] , [24] . Ayrıca idrar fraksiyonlarının C. albicans üzerindeki etkinliğinin değerlendirilmesikızılcık alımını takiben farklı zamanlarda toplanan yapıştırma işlemi gerçekleştirilmiştir. C. albicans yapışması üzerindeki idrar aktivitesi ile birlikte her idrar fraksiyonunda tanımlanan metabolitlerin kantitatif analizi, mantar yapışmasını önlemekten sorumlu bir dizi bileşiğin tanımlanmasına izin vermiştir. Son olarak, lipit matrisinin ekstraktın biyoyararlanımını ve biyoaktivitesini iyileştirip iyileştiremeyeceğini değerlendirmek için standartlaştırılmış kızılcık özütünün lesitin formülasyonu olan Anthocran™ Phytosome™' nin ex-vivo etkinliği test edildi.

2 . Malzemeler ve yöntemler
2.1 . reaktifler
Formik asit, etil gallat , protocatechuic asit , p-kumarik asit, gallik asit, sinapinik asit, 2-hidroksibenzoik asit, 3-hidroksibenzoik asit, 4-hidroksibenzoik asit, 2,3-dihidroksibenzoik asit, 2,5-dihidroksibenzoik asit, 2 ,4-dihidroksibenzoik asit, 3-(4-hidroksifenil)-propiyonik asit, 3,4-dihidroksifenilasetik asit, hippurik asit , 3,4-dihidroksihidrosinnamik asit, 2-hidroksihippurik asit, kinik asit , 2-metilhippurik asit, YPD ortamı, Roswell Park Memorial Institute 1640 ortamı (RPMI), fosfat tamponlu salin (PBS), kristal mor , metanol ve LC-MS dereceli çözücüler, Merck KGaA, Darmstadt, Almanya'dan satın alındı. Kaempferol , kersetin, şırıngatin, quercetin-3-O-rhamnoside, quercetin-3-O-galaktozid Extrasynthese'dendi (Genay Cedex, Fransa). Quercetin-3-O-arabinofuranoside, 3-hidroksihippurik asit ve 4-hidroksihippurik asit, Carbosynth'ten (Compton Berkshire, UK) alındı. LC dereceli H20 ₍ 18 MΩ cm), bir Milli-Q H20 saflaştırma sistemi ₍Millipore, Bedford, MA, ABD) ile hazırlandı. SPE Hypersep C18 kolonu (100 mg/mL), Thermo Scientific'ten (Milan, İtalya) alındı. Standardize kızılcık özütü ( V. macrocarpon ) ve 36 mg PAC/kapsül (Anthocran®), 12 mg PAC/kapsül Anthocran™ Phytosome™ ve plasebo kapsül içeren kapsüller, Indena S.p. A (Milano, İtalya).

2.2 . 5-(3',4'-dihidroksifenil)-γ-valerolakton sentezi ( I )
^1H NMR spektrumları 300 MHz'de çalışırken ^13C NMR 75.43 MHz'de kaydedildi. Kimyasal kaymalar, dahili standart olarak kalıntı çözücüye (CHCl3 veya DMSO) _göre ppm cinsinden rapor edilir . Sinyal çokluğu aşağıdaki kısaltmalara göre tasarlanmıştır: s = tekli, d = ikili, dd = ikili ikili, t = üçlü, m = çoklu, br s = geniş tekli, br t = geniş üçlü. Saflaştırmalar , IsoleraTM (Biotage, Uppsala, İsveç) cihazında silika jel (parçacık boyutu 40-63 um, Merck) kullanılarak flaş kromatografisiyle gerçekleştirildi .

Karbon üzerinde palladyum , 3,4-bis(benziloksi)benzaldehit, 2(5H)-furanon, tert -butildimetilsilil triflorometansülfonat (TBDMSOTf), 1,8-Diazabisiklo[5.4.0]undek-7-en (DBU), sodyum bisülfit , %37 HC1, sikloheksan , etil asetat , tetrahidrofuran , etanol ve metanol, Merck KGaA, Darmstadt, Almanya'dan satın alındı.

Bileşik I , tert -butildimetilsilil triflorometansülfonat ve DBU mevcudiyetinde 3,4-bis(benziloksi)benzaldehit ( 1 ) ve 2(5H)-furanon ( 2 ) arasına Mukaiyama aldol eklenmesiyle elde edildi ( Şekil 1 ). 5-(3',4'-bis(benziloksi)benziliden)furan-2(5H)-on ( 3 ), Z/E izomerlerinin (70:30) bir karışımı olarak elde edildi. 3'ün H2Pd/C ile _indirgenmesi , rasemik karışım olarak nihai bileşik 5-(3',4'-dihidroksifenil) -y - valerolakton ( I ) sağladı.

Şekil 1 . Bileşik I'in sentezi – a) DBU, TBDMSOTf , THF kuru, -10 °C; b) H2 , Pd/C, CH30H _,_RT .
5-(3',4'-Bis(benziloksi)benziliden)furan-2(5H)-on ( 3 ). Azot atmosferi altında , kuru THF (16 mL) içindeki bir 2 (158 mg, 1.88 mmol) solüsyonuna damla damla DBU (0.28 mL, 1.88 mmol) ilave edildi . Karışım, oda sıcaklığında 30 dakika karıştırıldı. -10 °C'ye soğutulduktan sonra tert -butildimetilsilil triflorometansülfonat (0.48 mL, 2.07 mmol) ve 1(600 mg, 1.88 mmol) damla damla eklendi ve karışım -10 °C'de 1 saat karıştırıldı, ardından damla damla DBU (0.56 mL, 3.76 mmol) eklendi. Reaksiyon karışımı, oda sıcaklığında gece boyunca karıştırıldı, daha sonra solvent, vakum altında çıkarıldı. Ham tortuya etil asetat (20 mL), EtOH (5 mL) ve doymuş sodyum bisülfit (5 mL) solüsyonu ilave edildi ve gece boyunca 40°C'de karıştırıldı. Fazlar ayrıldı ve organik katman, etil asetat (15 mL) ile seyreltildi, 2.9 N HC1 (3 x 20 mL) ile işlendi, tuzlu su (20 mL) ile yıkandı, kurutuldu ve yapışkan siyah bir yağ verecek şekilde konsantre edildi. Ham ürün, turuncu/kahverengi bir yağ (137 mg, 0.36 mmol, %19 verim) halinde başlık bileşiği verecek şekilde silis jel (75:25 sikloheksan/etil asetat) üzerinde arıtıldı.

^' H NMR (300 MHz, CDCI3 ) Z izomeri: ₈ = 7.53 (d, J = 7.0 Hz, 4H), 7.49 – 7.24 (m, 9H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.15 ( d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,22 (s, 2H), 5,20 (s, 2H).

^' H NMR (300 MHz, CDCI3 ) E izomeri: ₈ = 7.53 (d, J = 7.0 Hz, 4H), 7.49 – 7.24 (m, 9H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.21 ( d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,18 (s, 2H)), 5,14 (s, 2H).

5-(3',4'-dihidroksifenil)-y-valerolakton ( I ). 3 (275 mg, 0.72 mmol), CH30H (16.50 mL) içinde çözündürüldü _ve %3 Pd/C (40 mg) eklendi. Reaksiyon karışımı, oda sıcaklığında hidrojen atmosferi altında gece boyunca karıştırıldı, ardından katalizör süzülerek çıkarıldı. Süzüntü, portakal rengi bir yağ (125 mg, 0.60 mmol, %83 verim) halinde istenen ürünü verecek şekilde vakumla konsantre edildi.

^1HNMR (300 MHz, CD30D) ₈ = 6.71 – 6.67 (m, 2H), 6.56 (dd, J = 7.9, 2.2 Hz, 1H), 4.77 – 4.66 (m, 1H), 2.87 (dd, J = 14.1, 6.1 Hz, 1H), 2.78 (dd, J = 14.0, 6.1 Hz, 1H), 2.52 – 2.41 (m, 1H), 2.35 (dd, J = 9.4, 4.7 Hz, 1H), 2.29–2.17 ( m, 1H), 2.03 – 1.88 (m, 1H).

^13C NMR (75 MHz, CD30D) _{8 =}173.17 , 144.88, 143.80, 127.60, 120.45, 116.20, 114.90, 81.86, 40.03, 28.14, 26.44.

2.3 . Konu seçimi
Milano Üniversitesi öğrencilerinden ve personelinden toplam on üç gönüllü (ortalama yaş 25 ± 4 yıl ve BMI 20.6 ± 2.0 kg m ^-2 ) aşağıdaki dahil etme kriterlerine göre alındı: kadınlar, 18-40 yaş, normal boy için ağırlık (18–25 kg m ^-2), sigara içmeyen, kardiyovasküler, diyabet, karaciğer, böbrek veya gastrointestinal hastalık öyküsü yok. Kızılcık ve/veya kızılcık ürünlerine alerjisi ve/veya isteksizliği olan denekler çalışma dışı bırakıldı. Diğer dışlama kriterleri şunlardı: Çalışmanın başlamasından en az bir ay önce herhangi bir diyet takviyesi, ilaç veya ilaç tüketimi. Çalışma, 2013 Helsinki Deklarasyonu'nda belirlenen ve Milano Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylanan etik standartlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir (18 Aralık 2018, ref. 57/18). Çalışma, www.isrctn.org adresinde ISRCTN32556347 olarak kaydedildi. Tüm katılımcılar bilgilendirilmiş onam formu imzaladı.

2.4 . Sağlıklı gönüllüler üzerinde çalışma tasarımı
Deneklere deneyden en az 72 saat önce ve deneme sırasında polifenol tüketimini sınırlamaları talimatı verildi. Gönüllülere kaçınılması gereken yiyeceklerin bir listesi verildi. Liste şunları içeriyordu: polifenoller açısından zengin meyve ve sebzeler (örneğin, çilek, kırmızı/mor meyveler/sebzeler), çikolata ve kahve, çay, şarap ve meyve suyu gibi bazı içecekler. Çalışma, randomize, çift kör, 2 kollu tekrarlı ölçüm çaprazlama tasarımından oluşuyordu. Bir grup denek günde 2 kapsül Anthocran® tüketirken, diğer grup 2 günde bir Anthocran™ Phytosome™ kapsülü tüketmiştir. Deney 7 gün sürdü. İdrar örnekleri, takviyeye başlamadan önce (1. gün, saat 0) ve son dozdan sonra (7. gün) şu zaman noktalarında toplanmıştır: 1, 2, 4, 6, 10, 12, 24 saat. Bir haftalık arınmanın ardından gruplar tedaviyi tersine çevirdi. Her denek, deney sırasında tüketilecek kapsül sayısını içeren bir kutu aldı. Kapsüller kör bir durumda sağlandı. Deneklere, ilkini sabah kahvaltıdan önce ve ikincisini akşam yemeğinden önce bir bardak su ile olmak üzere günde iki kapsül yutmaları söylendi. Üç gönüllü aynı şekil, boyut, renk, tat veTest edilen ürünlerin yardımcı maddeleri . İdrar örnekleri daha önce bildirildiği gibi aynı zaman noktalarında toplandı ve diyet ve sirkadiyen ritmin C. albicans aktivitesi üzerindeki etkisini doğrulamak için kontrol olarak kullanıldı . MS analizi için kullanılan numuneye dahili standart olarak etil gallat 10 µM eklendi ve tüm numuneler analize kadar -80 °C'de saklandı.

2.5 . örnek hazırlama
10 deneğin her birinin idrarından bir kısım (1 mL) 10000 x g'de 5 dakika santrifüjlendi ve süpernatant, 1 mL/dk'da çalışarak SPE kolonunda özümlendi. Tuzlar su ile çıkarıldı ve daha sonra tutulan tüm bileşikler, 1 mL %100 asetonitril ile yıkandı . Toplanan fraksiyonlar, vakum altında kurutuldu ve daha sonra 100 uL H20-CH30H -HCOOH _{( 90:}₁₀ :0.1, v/v) içinde çözündürüldü. Kantitatif analiz için, standartların stok çözeltileri metanol içinde hazırlandı ve daha sonra her bir kalibrasyon eğrisi için nihai konsantrasyonları elde etmek üzere ön işlem idrar numuneleri havuzunda seyreltildi. Numuneler daha sonra dahili standart olarak 10 uM etil galat ile ilave edildi ve tarif edildiği gibi işlendi.

2.6 . kromatografik koşullar
Kızılcık bileşenleri ve idrar metabolit ayrımı, bir Agilent Zorbax koruma sütunu tarafından korunan, 40 °C'de tutulan bir ters fazlı Agilent Zorbax SB-C18 kolonu (150 x 2.1 mm, id 3.5 um, CPS analitica, Milan, İtalya) üzerinde gerçekleştirildi. , sabit bir akış hızında (200 µL/dk) çalışan 4 °C'de tutulan bir otomatik örnekleyici ile donatılmış bir UltiMate 3000 sistemi (Dionex) tarafından. Her numune (10 uL) kolona enjekte edildi ve hem kızılcık bileşenleri hem de idrar metabolitleri, 80 dakikalık çok aşamalı bir faz AH20-HCOOH ₍ 100:0.1, v/v) ve faz B _CH3CN -HCOOH ile ayrıştırıldı . (100:0.1, v/v): 0-45 dakika, %10 B'den %20 B'ye; 45-65 dakika, %20 B'den %60 B'ye; 65-66 dakika, %60 B'den %90 B'ye; 66-70 dakika, izokratik %90 B; 70-71 dakika, %90 B'den %10 B'ye ve ardından 71-80 dakika izokratik %10 B.

2.7 . HPLC-UV analizi ile polifenol sınıfı tanımlaması
Polifenol sınıflarının tanımlanması, dörtlü bir pompa, UV-VIS dedektörü (PDA) ve bir otomatik örnekleyici ile donatılmış bir HPLC Surveyor LC sistemi (Thermo Fisher Scientific, Milan, İtalya) üzerinde HPLC-UV analizi ile gerçekleştirilmiştir. Tarama aralığı 200 nm'den 600 nm'ye ayarlandı. Analiz için H20/CH30H _/_HCOOH (90/10/0.1% v/v) içinde 4 mg/mL kızılcık özütü çözeltisi kullanıldı.

2.8 . Yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile kızılcık bileşen profili ve idrar metabolit karakterizasyonu
Her numune (10 uL), daha önce tarif edildiği gibi RP kolonuna enjekte edildi: kızılcık özü, H20-CH30H -HCOOH _{( 90:}₁₀ :0.1, v/v) içinde 4 mg/mL'lik bir konsantrasyonda analiz edildi. idrar örnekleri ise bölüm 2.3'te açıklanan tedaviden sonra analiz edildi . Analizler, bir ESI kaynağı kullanılarak bir LTQ-Orbitrap XL kütle spektrometresi üzerinde gerçekleştirilmiştir. Kütle spektrumları, pozitif ve negatif iyon modlarında elde edildi. Gerçek zamanlı kütle kalibrasyonu için kilit kütle değerleri olarak 20 arka plan iyonunun bir listesi benimsenmiştir [25]. Pozitif mod için kullanılan kaynak parametreleri şunlardır: püskürtme voltajı 4 kV, kılcal sıcaklık 300 °C, kılcal voltaj 30 V, tüp lens ofseti 90 V; negatif iyon modu için: sprey voltajı 4 kV, kılcal sıcaklık 300 °C, kılcal voltaj −23 V, tüp lens ofseti −140 V. Cihaz, hem tam MS hem de MS/MS spektrumları. Tam MS spektrumları, FT analizörü tarafından m / z 100-1200 tarama aralığında, AGC tarama hedefi 5 × 105 ve ^m / z 400'de 30.000 FWHM çözünürlük kullanılarak profil modunda elde edildi . Tandem kütle spektrumları lineer tarafından elde edildi. 1 × 10 ^4'ü aşan en yoğun 3 iyonu parçalamak için kurulan iyon tuzağı (LTQ)sayar. Kütle edinme ayarları şunlardı: merkez modu, AGC tarama hedefi 5 × 104 , m / ^z3 öncül iyon izolasyon genişliği ve 35 eV çarpışma enerjisi (CID). Yedekli spektrum alımını azaltmak için dinamik dışlama etkinleştirildi: 2 tekrar sayısı, 20 saniye tekrar süresi, 30 saniye dışlama süresi. Ayrıca, yalnızca tek başına ve atanmamış yüklü iyonlar parçalanmıştır. Cihaz kontrolü ve spektrum analizi, Xcalibur 2.0.7 ve Chromeleon Xpress 6.80 yazılımı tarafından sağlandı.

2.9 . İnsan idrarındaki kızılcık bileşenleri ve metabolitlerinin hedefli ve hedefsiz analizleri
Tanımlanan tüm kızılcık özü bileşenlerinin yanı sıra diğer çalışmalarda tanımlanan bilinen kızılcık metabolitleri ve incelenen özütte bulunmasa bile diğer kızılcık kaynaklarından türetilen kızılcık bileşenleri eklenerek hedeflenen analiz için bir kurum içi veri tabanı oluşturulmuştur. Tanımlama, doğru kütle ve izotopik ve parçalanma kalıpları kullanılarak Xcalibur 2.0.7'nin QualBrowser aracında gerçekleştirilmiştir.

Hedeflenmemiş analiz, kızılcık tüketiminden sonra toplanan idrar numunelerinde mevcut olan ve ön arıtma numunesinde gürültüye göre yoğunlukta (<5*102 sayı) ^{mevcut olmayan veya mevcut olan tüm iyonların aranmasını içermektedir.}Spektrum analizleri, Xcalibur 2.0.7'nin QualBrowser aracında, negatif iyon modunda elde edilen tam MS spektrumlarının m / z kütle aralıklarında taranmasıyla gerçekleştirilmiştir.5, her numune için toplama süresi olarak 10 dakika. Bu filtrelerle saptanan her iyon, varsa, ilgili MS/MS spektrumu ile dışa aktarıldı. Tanımlama, doğru kütle ve izotop ve parçalanma paternlerine dayalı olarak iki farklı yaklaşım izlenerek gerçekleştirilmiştir. İlk yaklaşım, öncü iyon için 10 ppm ve fragmanlar için 0.3 Da kütle tolerans hatası olarak CFM-ID'nin Bileşik Tanımlama aracında girdiler olarak öncü iyon ve MS/MS spektrum listesini vermekten ibarettir . CFM-ID, doğru kütleye dayalı olarak mevcut veri tabanlarında (HMDB ve KEGG) adaylar için bir arama yapar, ardından tüm adayların in-siliko MS/MS spektrumlarını oluşturur ve ardından deneysel verileri in-siliko elde edilenlerle karşılaştırır.. En iyi adaylar, ne kadar yakından eşleştiklerine göre sıralandı (Jaccard Skoru) ve bir listeye geri döndü. İkinci yaklaşım, başlangıçta, aşağıdaki parametreler kullanılarak Xcalibur 2.0.7'nin Elemental Kompozisyon sayfasında gerçekleştirilen element kompozisyonunun hesaplanmasına odaklandı: kütle toleransı 10 ppm, yük -1, C, H, O, N, P, S kullanılan elemanlar olarak. İlk 5 formül, PubChem gibi mevcut veritabanlarında arandı. METLIN, MassBank ve literatürdeki adayların listesini almak için. Bunu takiben, varsayılan tanımlanmış bileşiklerin MS/MS spektrumlarını tahmin etmek ve elde edilen in-siliko spektrumları deneysel spektrumlarla karşılaştırmak için CFM-ID'nin Tepe Atama aracı kullanıldı.

2.10 . kantitatif analiz
Mevcut her metabolit için kalibrasyon eğrileri, metabolit/etil gallatın pik alan oranlarına karşı metabolitin nominal konsantrasyonlarına karşı ağırlıklı (1/x2) en küçük kareler lineer regresyon grafiği çizilerek oluşturulmuştur. Tablo 1 , elde edilen tüm lineer eğrileri ve göreceli niceleme limitini (LOQ) göstermektedir. Tüm numuneler ve kalibrasyon çözeltileri üç kopya halinde analiz edildi. Tanımlanan her bir metabolitin ekstrakte edilmiş iyon kromatogramının eğrisinin altındaki alanlar, Xcalibur 2.0.7'nin Qual Browser aracının Genesis tepe algoritması kullanılarak entegre edildi.

Tablo 1 . Mevcut metabolitler için kalibrasyon eğrisi parametreleri.

protokateşik asit	153.0189	0.1529	-0.04789	0.991	0.25
p-kumarik asit	163.0408	0.2786	-0.03032	0.995	0.01
gallik asit	169.0146	0.0253	-0,00585	0.991	1
sinapinik asit	223.0608	0.0452	−0,00523	0.990	0.005
kaempferol	285.0407	1.0160	0.07999	0.991	0.001
kuersetin	301.0353	1.1520	−0,05015	0,999	0.005
şırınga	345.0618	0.6626	0.00924	0.981	0.005
Quercetin-3-O-arabinofuranoside	433.0731	0.7625	−0.01439	0,997	0.0025
Quercetin 3-O-rhamnoside	447.0920	0.9010	-0.02547	0,997	0.001
Quercetin-3-O-galaktozid	463.0884	0.5151	-0.02053	0.996	0.0025
2-hidroksibenzoik asit	137.0243	1.1470	-0.13480	0.998	0.25
3-hidroksibenzoik asit	137.0231	0.1113	−0.01402	0.996	0.05
4-hidroksibenzoik asit	137.0232	0.1204	-0.04054	0,999	1
2,3-dihidroksibenzoik asit	153.0201	1.2380	-1.89800	0.984	1.5
2,5-dihidroksibenzoik asit	153.0194	0.2438	0.67780	0.998	5
2,4-dihidroksibenzoik asit	153.0175	0.3176	-0,33540	0.989	1.5
3-(4-hidroksifenil)-propionik asit	165.0561	0.0048	0.00106	0,999	0.25
3,4-dihidroksifenilasetik asit	167.0349	0.0228	0.05486	0.981	1.5
hippurik asit	178.0509	0.3032	120.80000	0,993	1
3,4-dihidroksihidrosinnamik asit	181.0506	0.2474	0.37710	0,997	0.25
p-Hidroksihippurik asit	194.0450	0.2756	10.42000	0.995	1
m-Hidroksihippurik asit	194.0446	0.3605	-2.94400	0.991	1
o-Hidroksihippurik asit	194.0461	0.6801	-4.23000	0.996	1
2-metilhippurik asit	192.0670	0.7954	3.60500	0,999	1
kinik asit	191.0554	0.01012	0.0097	0,999	0.05
5-(3',4'-dihidroksifenil)-y-valerolakton	207.0666	0.2411	-0.47450	0,999	0.1

2.11 . Candida albicans biyofilm oluşumu testi
C. albicans'ın çeşitli koşullar altında biyofilm oluşturma kabiliyeti (yani kızılcık özü veya idrar fraksiyonları ile ortam takviyesi), referans suşu C. albicans SC5314 [27] kullanılarak polistiren 96 oyuklu plakalar üzerinde değerlendirildi . Deneylerden önce, C. albicans , maya özütü, pepton , dekstroz (%1 a/h maya özü, %2 a/h pepton, %2 a/h dekstroz) et suyu (YPD) içinde 30 °C'de bir gecede büyütüldü . Yörünge çubuğu. Hücreler daha sonra toplandı ve soğuk fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkandı ve hemositometre ile sayıldı. 5 × 10 ^{5 standart bir aşı}maya hücreleri/mL, Roswell Park Memorial Institute 1640 ortamında (RPMI) hazırlandı ve idrar fraksiyonlarının varlığında ve yokluğunda ve ayrıca Anthocran™ 0.1 mg/mL varlığında inkübe edildi. 100 uL/kuyu aşı ilk olarak yapışmayı desteklemek için 37 °C'de 1 saat inkübe edildi. Yapışmayan hücreler çıkarıldı ve oyuklar PBS ile yıkandı; ortam değiştirildi ve plaka 24 saat daha inkübe edildi. Biyofilm oluşturma yeteneği, toplam biyokütle ölçümü için kristal viyole (CV) boyama ile ölçülmüştür [28] . Her koşul için altı kopya ile iki bağımsız deney yapıldı. İstatistiksel analiz, Windows için GraphPad Prism 6.02, GraphPad Software, La Jolla California USA (www.graphpad.com) tarafından Dunnet'in çoklu karşılaştırma testi ile tek yönlü ANOVA kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

3 . sonuçlar ve tartışma
3.1 . uyma
Gönüllüler, kapsüllerin tüketimini doğruladı ve uygunluk, iade edilen kutulardaki kapsülleri sayarak da doğrulandı. Tüm katılımcılar %100 uyum sağladı ve müdahalenin ardından herhangi bir olumsuz etki bildirmedi.

3.2 . Anthocran® bileşenlerinin karakterizasyonu
Kızılcık özütünün polifenol sınıfları, tipik dalga boyunda HPLC-UV analizi ile karakterize edildi: fenolik asitler için 310-320 nm, flavonoller için 350-370 nm, antosiyaninler için 520 nm , benzoik asitler , flavanoller ve PAC'ler için 278 nm . Ekstrakttaki her bir bileşiğin tanımlanması, daha sonra, pozitif ve negatif iyon modunda kütle spektrumları elde edilerek, doğru kütle ve izotop ve parçalanma modelleri temelinde elde edildi. Tanımlanan tüm bileşikler Tablo 2 , Tablo 3 ve 4'te rapor edilmiştir .

Tablo 2 . Anthocran® içindeki antosiyaninler bileşimi.

*antosiyaninler*
siyanidin	19	287.0556	259 + 255 + 251 + 245 + 242 + 125
peonidin	24	301.0712	268 + 258 + 230 + 177 + 151
Siyanidin-3-O-arabinosid	6.2	419.0978	287
Peonidin-3-O-arabinosid	10	433.1135	301
Siyanidin-3-O-galaktozit	4.2	449.1084	287
Siyanidin-3-O-glukozit	4.6	449.1084	287
Petunidin-3-O-arabinosid	5	449.1084	317
Peonidin-3-O-galaktozit	7.3	463.1240	301
Peonidin 3-O-glukozit	7.6	463.1240	301
Malvidin-3-O-galaktozit	8	493.1346	331
Malvidin-3-O-glukozit	8.4	493.1346	331

Tablo 3 . Anthocran® içindeki fenolik asitler .

*fenolik asitler*
Benzoik asit	8.3	121.0290	77
protokateşik asit	4	153.0188	109
p -kumarik asit	13.6	163.0395	119
gallik asit	2.5	169.0137	125
kafeik asit	7.9	179.0344	135
Ferulik asit	4.9	193.0501	149 + 134
sinapinik asit	6.2	223.0607	179 + 164 + 149 + 135
kafeoil glikoz	5	341.0873	179 + 135
Klorojenik asit	6	353.0873	191 + 179 + 161

Tablo 4 . Anthocran® içindeki Flavonoller, Flavanoller ve PAC'ler.

*Flavonoller, Flavanoller, PAC'ler*
kumarin	14	147.0446	119 + 91	145.0289	-
skopoletin	17.8	193.0501	165 + 152 + 133 + 119 + 105	191.0344	-
kaempferol	55	287.0556	259 + 251 + 241 + 231 + 213 + 165 + 153 + 137 + 121	285.0399	-
epikateşin	5.7	291.0869	169 + 165 + 151 + 147 + 139 + 123	289.0712	245 + 205 + 179 + 161 + 151 + 137 + 125 + 109
kateşin	9	291.0869	169 + 165 + 151 + 147 + 139 + 123	289.0712	245 + 205 + 179 + 161 + 151 + 137 + 125 + 109
kuersetin	48.5	303.0505	257 + 247 + 229 + 165 + 153 + 149 + 137 + 121	301.0348	273 + 257 + 229 + 179 + 151 + 121 + 107
epigallokateşin	4.4	307.0818	-	305.0661	261 + 221 + 219 + 179 + 137 + 125
Gallocatechin	3.1	307.0818	-	305.0661	261 + 221 + 219 + 179 + 137 + 125
isorhamnetin	55.8	317.0661	299 + 285 + 281 + 274 + 257 + 165 + 153 + 139	315.0505	287 + 271 + 259 + 243 + 203 + 163 + 151
mirisetin	32	319.0454	290 + 273 + 255 + 245 + 165 + 153 + 137	317.0298	255 + 227 + 193 + 179 + 151 + 137 + 107
3'-O-metilmiretin	50	333.0610	301 + 287 + 277 + 273 + 245 + 193 + 165 + 153 + 139	331.0454	287 + 271 + 263 + 179 + 151
şırınga	55.8	347.0677	315 + 291 + 287 + 269 + 181 + 165 + 153 + 139	345.0610	315
Quercetin-3-O-arabinofuranoside	25.2	435.0927	303	433.0771	301
Quercetin-3-O-arabinopyranoside	28.4	435.0927	303	433.0771	301
Quercetin-3-O-ksilopiranozid	26.6	435.0927	303	433.0771	301
Kateşin-3-O-gallat	16.6	443.0978	291 + 273 + 151 + 139	441.0822	315 + 297 + 289 + 161 + 153
Epikateşin-3-O-gallat	20	443.0978	291 + 273 + 151 + 139	441.0822	330 + 305 + 289 + 161 + 139
Kaempferol-7-O-glukozit	27.2	449.1084	287	447.0927	284
Isorhamnetin-3-O-arabinofuranozid	37	449.1084	317	447.0927	314
İzorhamnetin-3-O-ksilopiranozit	38,5	449.1084	317	447,0927	314
Isorhamnetin-3-O-arabinopiranozit	41	449.1084	317	447,0927	314
Quercetin-3-O-rhamnoside	30,5	449.1084	303	447,0928	301
Myricetin-3-O-arabinofuranozid	16,6	451.0877	319	449,0720	317
Myricetin-3-O-arabinopiranozit	19,6	451.0877	319	449,0720	317
Myricetin-3-O-ksilopiranozit	19	451.0877	319	449,0720	317
Quercetin 3-O-glukozit	22,4	465.1033	303	463,0877	301
Quercetin-3-O-galaktozid	21,5	465.1033	303	463,0877	301
İzorhamnetin-3-O-glukopiranozit	34,5	479.1189	317	477,1033	315
Isorhamnetin-3-O-glukofuranosid	32,8	479.1189	317	477,1033	315
İzorhamnetin-3-O-galaktozit	31,1	479.1189	317	477,1033	315
Şırınganın-3-O-arabinofuranozid	38,8	479.1189	347	477,1033	345
Şırınganın-3-O-ksilopiranozit	39,8	479.1189	347	477,1033	345
Şırınganın-3-O-arabinopiranosid	43,5	479.1189	347	477,1033	345
Myricetin-3-O-glukozit	15,1	481.0982	319	479,0826	317
Myricetin-3-O-galaktozit	14,5	481.0982	319	479,0826	317
Şırınga-3-O-ramnozit	43,8	493.1346	347	491.1189	-
Proantosiyanidin A tipi dimer	17/23	577.1346	437 + 425 + 397 + 287	575,1189	425 + 289 + 287
Proantosiyanidin B tipi dimer	22,6	579.1502	453 + 439 + 427 + 409 + 301 + 291	577,1346	425 + 407 + 289
Proantosiyanidin A tipi trimer	16/25/27.3	865.1980	713 + 577 + 425 + 287	863,1823	575 + 423 + 289
Proantosiyanidin B tipi trimer	11,5/14.3/24	867.2136	579 + 427 + 409 + 291	865,1979	577 + 425 + 407 + 287

3.3 . Kızılcık özü alımından sonra insan idrarının hedefli analizi
Hedeflenen analiz, bölüm 3.2'de bildirildiği gibi karakterize edilen kızılcık özü bileşenlerini ve başka bir yerde bildirildiği üzere kızılcık bileşikleri ve metabolitleri içeren kurum içi bir veri tabanında listelenen bileşiklerin ( toplam bileşik sayısı = 138) idrar numunelerinde aranmasını içermiştir. 15] , [16] , [17] , [18] , [19] , [20] , [21] , [29] , [30]. Tanımlama, şu parametreler dikkate alınarak gerçekleştirilmiştir: doğru kütle, izotopik model, MS/MS fragmanları ve alıkonma süresi. Veritabanında listelenen bileşiklerin her biri için daha ayrıntılı olarak, SIC, hedef bileşik için hesaplanan m / z'yi filtre iyonu olarak ayarlayarak yeniden oluşturuldu; hedeflenen bileşiğin aynı RT'sine sahip bir tepe bulunduğunda, ana iyonun m / z'si , izotop modeli ve MS/MS verileri alındı ve standardınkiyle karşılaştırıldı. Bazı kızılcık bileşenleri için (gallik asit, kaempferol, kersetin, şırıngatin, kersetin-3-O-arabinofuranozid, kersetin 3-O-rhamnoside ve kersetin-3-O-galaktozit) ana bileşiğin yoğunluğu, CID deneylerini gerçekleştirmek için yeterince yoğun değildi ve kimlikleri, Orijinal standartlarla RT ve izotop modeli.

Tablo 5 , Tablo 6 , böyle bir yaklaşım kullanılarak ve iyon kaynağının negatif iyon moduna ayarlanmasıyla tanımlanan bileşikleri ve metabolitleri bildirir. Spesifik olarak, Tablo 5'te rapor edilen metabolitlerin tanımlanması saf standartlarla teyit edilirken, Tablo 6'da listelenen metabolitler doğru kütle, izotop modeli ve mevcut olduğunda parçalanma modeli temelinde varsayılan olarak tanımlandı. Analizler ayrıca pozitif iyon modunda gerçekleştirildi ancak hiçbir ek bileşen tespit edilmedi ve böyle bir polarite modunda yüksek bir tepki ile karakterize edilen antosiyaninler tespit edilmedi. Antosiyaninlerin saptanamaması, kolonik mikrofloranın aracılık ettiği biyotransformasyonları dikkate alınarak açıklanabilir.bazıları idrarda tespit edilen protokateşik asit , floroglusinaldehit, ferulik asit , siringik asit , gallik asit , kafeik asit ve vanilik asit [31],[32],[33] gibi küçük fenolik bileşiklere dönüştürülür .

Tablo 5 . Hedeflenen analiz kullanılarak tanımlanan kızılcık bileşenleri ve metabolitleri.

protokateşik asit	4.1	153.0188	153.0189	109	-0.588
p -kumarik asit	14.1	163.0395	163.0408	119	-8.035
gallik asit	2.5	169.0137	169.0146	-	-5.325
sinapinik asit	19.4	223.0607	223.0608	179 + 164 + 149	-0.717
kaempferol	55	285.0399	285.0407	-	-2.877
kuersetin	48.9	301.0348	301.0353	-	-1.395
şırınga	55.8	345.0610	345.0618	-	-2.289
Quercetin-3-O-arabinofuranoside	28,5	433.0771	433.0731	-	9.306
Quercetin 3-O-rhamnoside	30.6	447.0928	447.0920	-	1.789
Quercetin-3-O-galaktozid	21.6	463.0877	463.0884	-	-1.684
2-hidroksibenzoik asit	24.2	137.0239	137.0243	93	-3.065
3-hidroksibenzoik asit	8.9	137.0239	137.0231	-	5.984
4-hidroksibenzoik asit	6.6	137.0239	137.0232	93	4.671
2,3-dihidroksibenzoik asit	9.1	153.0187	153.0201	109	-8.561
2,5-dihidroksibenzoik asit	6.8	153.0187	153.0194	109	-3.856
2,4-dihidroksibenzoik asit	8.6	153.0187	153.0175	109	8.169
3-(4-hidroksifenil)-propionik asit	12.1	165.0552	165.0561	-	-5.816
3,4-dihidroksifenilasetik asit	4.5	167.0344	167.0349	-	-2.574
hippurik asit	8.2	178.0504	178.0509	134	-2.640
3,4-dihidroksihidrosinnamik asit	7.1	181.0499	181.0506	137 + 121	-3.811
p -Hidroksihippurik asit	3.6	194.0456	194.0450	150 + 100 + 93	3.401
m -Hidroksihippurik asit	4.5	194.0456	194.0446	150 + 100 + 93	5.256
o -Hidroksihippurik asit (salisilürik asit)	14.1	194.0456	194.0461	150 + 100 + 93	-2.628
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton	12	207.0657	207.0659	163 + 122 + 109	-0.821

Tablo 6 . Hedeflenen analiz kullanılarak varsayılan olarak tanımlanan metabolitler.

Isorhamnetin-3-O-arabinopiranozit	41	447.0927	447.0954	-	-5.882
4-metilkatekol-O-sülfat	9.7	203.0014	203.0021	123	-3.300
Pirogallol-O-2-sülfat	3.9	204.9807	204.9814	125	-3.269
Vanillik asit-4-O-sülfat	4.2	246.9912	246.9918	167	-2.105
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton-4'-O-sülfat	9.5	287.0225	287.0236	207	-3.658
Dihidroksihidrosinnamik asit-3-O-glukuronid	9.5	357.0821	357.0827	181 + 137	-1.484

Bazı flavonollerin yanı sıra kaempferol, kersetin ve eser miktarda glikozitleri (quercetin-3-O-arabinofuranozid, quercetin-3-O-rhamnoside ve quercetin-3-O-galaktozid), şırıngatin ve isorhamnetin-3-O-arabinopyranoside izleri. Glikosile formların düşük bolluğu, hücresel ve bakteriyel β-glukosidazların aracılık ettiği ve bağırsakta meydana gelen karşılık gelen aglikonlara enzimatik hidroliz düşünülerek açıklanabilir [34] . Aglikonlar , bağırsak yolundaki mikrobiyota tarafından C-halka bölünmesi ile fenolik asitlere dönüştürülebilir ve/veya faz II metabolizmasına (yani glukuronidasyon) veya metilasyona uğrayabilir [35]. Bağırsakta kuersetin (en temsili flavonol) ve ilgili glikozit üzerinde gerçekleştirilen metabolik çalışmalar , ana metabolitlerin hidroksifenilasetik asit katabolitleri tarafından temsil edildiğini göstermiştir [36] , [37] . Aslında, 3,4-dihidroksifenilasetik asit, bağırsak mikrobiyota metabolizmasından kaynaklanan flavonollerin olası metaboliti olarak idrarda bulundu.

Ekstraktta bulunan proantosiyanidinler (prosiyanidinler A-tipi ve B-tipi) bu çalışmada idrarda tespit edilmemiştir. Bu polifenol sınıfına ilişkin önceki çalışmalardan elde edilen sonuçlar, özellikle çeşitli çalışmaların UTI'nin önlenmesinde kızılcık ürünlerinin aktivitesini atfettiği prosiyanidin A2 ile ilgili olarak oldukça tartışmalıdır. Çoğu vakada [15] , [16] , [17] , [18] , [19] , bu çalışmada olduğu gibi, insan idrarında PAC tespit edilmedi, iki çalışmada insan idrarında PAC rapor edildi: tek doz 237 mL kızılcık suyu alan 50-70 yaşındaki erkekler ve postmenopozal kadınlar (meyve suyundaki PAC içeriği bildirilmemiştir) [20]; aynı araştırma grubu tarafından gerçekleştirilen ikinci çalışmada, beş genç kadın (20-30 yaş), 7 hafta boyunca haftalık bir programa göre 237 mL/gün kızılcık suyu (140 mg PAC) tüketmiştir [21] . Elde ettikleri sonuçlar, insan idrarında ölçülen çok düşük PAC-A2 seviyelerini gösterdi (C _MAX = 24 ng/mg kreatinin) ve PAC-A2'nin kızılcık alımının biyolojik belirteci olarak kullanılamayacağı sonucuna vardılar, çünkü miktarla bir korelasyon yoktu. tüketilen meyve suyu. Tüm bu sonuçlar göz önüne alındığında, PAC'lerin polimerizasyon derecesi arttıkça azalan çok düşük bir biyoyararlanıma sahip olduğu genel olarak kabul edilmektedir [38] . Ayrıca, insan mikrobiyotasının kolondaki PAC'leri fenolik bileşiklere indirgediği bildirilmektedir:prosiyanidinler A2, B2, kateşin ve epikateşinin metabolitleri olarak fenilasetik asitler ve fenilpropiyonik asitler ; prosiyanidin B2, kateşin ve epikateşin için valerolaktonlar ve valerik asit türevleri de bildirilmiştir[39],[40]. Bu yazıda valerolaktonların kökeni araştırılmamış olsa da, bunların kızılcık kateşin/epikateşin/PAC'lerin mikrobiyota bazlı dönüşümünden geldiklerini söyleyebiliriz. Bu varsayım, kateşin/epikateşin/PAC'lerin valerolaktonlara biyotransformasyonunun bağırsak mikrobiyotası tarafından yönlendirildiğini gösteren bağımsız araştırmacılar tarafından desteklenmektedir. Özellikle [2-¹⁴İnsanlarda C] (-)-epikateşin, epikateşin metabolitleri olarak valerolaktonları göstermiştir [41] . Ayrıca, Eggerthella lenta ve Flavonifractor plautii bakterileri , kateşin/epikateşin'in valerolakton türevlerine parçalanmasından sorumlu olarak M. Kutschera ve ark. [42] . Li ve ark. fenil-valerolaktonları, bağırsak mikroorganizmaları tarafından üretilen ve insan idrarında ve kanında saptanan ana çay kateşin metabolitleri olarak tanımladı [43] . Appeldoorn MM ve arkadaşları tarafından bir gama valerolakton tanımlanmıştır. insan mikrobiyotası tarafından metabolize edilen prosiyanidin dimerinin ana metaboliti olarak [44]. Ottaviani ve arkadaşları tarafından insan idrarında valerolaktonlar da tespit edilmiştir. flavanol ve PAC tüketiminden sonra [45] .

Bu çalışmada, fenilpropiyonik asitlerden türetilen aşağıdaki metabolitler [46] tespit edilmiştir: 3,4-dihidroksifenilasetik asit, 3-(4-hidroksifenil)-propiyonik asit, dihidroksibenzoik asitler, hidroksibenzoik asit ve hidroksihippurik asitler, bunların varlığı ilişkili olabilir. PAC metabolizmasına.

Fenolik asitler, tanımlanan polifenollerin ana sınıfını temsil eder: protokateşik asit, p -kumarik asit, gallik asit ve sinapinik asidin özütte zaten mevcut olduğu bulunmuştur, ancak bunlar, yukarıda bahsedildiği gibi diğer polifenollerin metabolizmasından da türetilebilirler; 3,4-dihidroksihidrosinnamik asit, dihidroksihidrosinamik asit-3-0-glukuronid ve 3-(4-hidroksifenil)-propiyonik asit, PAC'lerin, klorojenik asit veya antosiyaninlerin metabolizmasından türetilebilir [17] , [39] , [46] , hidroksibenzoik asit, dihidroksibenzoik asitler, hippurik asit ve hidroksihippurik asitler diğer tüm flavonoid bileşenlerin metabolizmasından türetilebilir [46]. Tanımladığımız 4-metilkatekol-O-sülfat ve pirogallol-O-2-sülfat gibi katekol ve pirogallol türevleri fenolik asitlerden veya antosiyaninlerden üretilebilir [46] .

3.4 . Kızılcık özü alımından sonra insan idrarının hedeflenmemiş analizi
Yöntem oturumunda açıklandığı gibi, hedeflenmemiş yaklaşım, kızılcık tüketiminden sonra toplanan idrar örneklerinde mevcut olan ve ön tedavi örneğinde 5*10 ² sayımdan daha az gürültüye göre yoğunlukta mevcut olmayan veya mevcut olan tüm iyonların aranmasını içerir. . Analiz, negatif iyon modu kullanılarak yapıldı çünkü hedeflenen analiz kullanılarak tanımlanan tüm bileşikler esas olarak bu polarite modunda tespit edildi. Tanımlanamayan bileşikler veya insan bazal metabolizmasından geldiği kabul edilenler (örneğin amino asitler) listeye dahil edilmedi. İyonların araştırılması, m / z kütle aralıkları kullanılarak negatif iyon modunda elde edilen tam MS spektrumlarının taranmasıyla gerçekleştirildi.Her numune için 5 ve 10 dakika toplama süresi. Örnek olarak, Şekil 2 A , m / z 220 ve 225 arasında bir MS aralığı ayarlayarak ve 0 ila 10 dakika arasında bir zaman aralığı göz önünde bulundurarak ve 10 saat önce (üst panel) ve 10 saat sonra toplanan idrarla ilgili olarak elde edilen MS spektrumlarını bildirir ( alt panel) kızılcık alımı; Şekil 2 B , m / z 205 ve 210 arasında bir MS aralığı ayarlayarak ve 10 ila 20 dakika arasında bir zaman aralığını dikkate alarak ve testten önce (üst panel) ve 12 saat sonra (alt panel) toplanan idrara göre MS spektrumlarını bildirir . kızılcık alımı. m / z 223.0606 ve m / 'deki iyonlarz 207.0665, yalnızca kızılcık uygulamasından sonra toplanan idrar örneklerinde iyi bir şekilde belirgindir, ancak daha önce değil. Bilinmeyen bileşiklerin tanımlanması, CFM-ID'nin Bileşik Tanımlama aracında girdiler olarak öncü iyon ve MS/MS fragman iyonlarının ayarlanmasıyla gerçekleştirilmiştir. Şekil 3 C ve Şekil 3 F , sinapinik asit ve 5'-(3',4'-dihidroksifenil)- y - valerolakton veren CFM-ID'nin Bileşik Tanımlama aracı için girdi olarak kullanılan deneysel MS/MS spektrumlarını bildirir. en iyi eşleşen sonuçlar. Nihai ilişkilendirme, RT, MS izotop modeli ve MS/MS fragmantasyonunu saf standartlarınkilerle (ticari olarak mevcut olduğunda) karşılaştırarak elde edildi. Şek. 3maksimum konsantrasyonlarına (10 saat) ulaştıkları idrar fraksiyonundaki sinapinik asit ( Şekil 3 B ) ve 5'-(3',4'-dihidroksifenil)- γ - valerolaktonun ( Şekil 3 E ) SIC kromatogramlarını gösterir. sinapinik asit için ve 5'-(3',4'-dihidroksifenil)- y - valerolakton için 12 saat), kontrol numunesinde ise ( sırasıyla Şekil 3 A ve 3 D ) bunlar mevcut değildi.

Şekil 2 . Hedeflenmemiş analizde iyonların aranması - Kızılcık alımından önce idrarda bulunmayan (üst paneller), ancak tedaviden sonra idrar numunelerinde bulunan iyon örnekleri (alt paneller): m / z 223.0606 ve m / z 207.0665'teki iyonlar yalnızca muamele edilmiş ve sırasıyla sinapinik asit (A) ve 5'-(3',4'-

dihidroksifenil)- y - valerolakton (B) olarak tanımlanmıştır.

Şekil 3 . Hedeflenmemiş analizde bileşiklerin tanımlanması - Kızılcık alımından önce (sırasıyla A ve D panelleri) ve 10'dan sonra idrar örneğinde sinapinik asit ve 5'-(3',4'-hidroksifenil)- γ -valerolakton (D) ile ilgili tek iyon kromatogramları kızılcık alımından itibaren saat ve 12 saat (sırasıyla B ve E panelleri). Orijinal standartların aynı RT'sine sahip pikler, yalnızca kızılcık alımından sonra tespit edilir. Kimliklerin nihai teyidi, tandem MS analizleri ile sağlandı. Sinapinik asit (C) ve 5'-(3',4'-hidroksifenil)- y - valerolaktonun (F) MS/MS spektrumları, CFM-ID'nin Bileşik Tanımlama aracı tarafından atanan her parça için öngörülen yapıya sahiptir.
Tablo 7'de bildirildiği gibi, hedeflenmemiş analizde birkaç metabolit tanımlandı . 3,4-dihidroksihidrosinamik asit, dihidroksihidrosinamik asit-3-O-glukuronid, sinapinik asit, üç hidroksihippurik asit izomeri, 5-(3',4'-dihidroksifenil) gibi bazıları hedeflenen analiz kullanılarak zaten tanımlanmıştı. -y-valerolakton ve 5-(3',4'-dihidroksifenil)-y-valerolakton-4'-O-sülfat. Şekil 4 , hedeflenen (mavi daire) ve hedeflenmeyen (sarı daire) analizlerle bu çalışmada tanımlanmış olan 42 bileşiğin tümüne genel bir bakışı göstermektedir.

Tablo 7 . Hedeflenmemiş analiz kullanılarak tanımlanan metabolitler. * saf standart tarafından onaylanan kimlik.

3,4-dihidroksihidrosinnamik asit*	7.1	181.0499	181.0506	137 + 121	-3.811	HMDB
kinik asit*	1.72	191.0556	191.0554	173 + 129	1.047	HMDB
2-metilhippurik asit*	11.1	192.0661	192.0670	74	-4.894	HMDB
p -Hidroksihippurik asit*	3.6	194.0456	194.0450	150 + 100 + 93	3.401	HMDB
m -Hidroksihippurik asit*	4.5	194.0456	194.0446	150 + 100 + 93	5.256	HMDB
o -Hidroksihippurik asit (salisilürik asit)*	14.1	194.0456	194.0461	150 + 100 + 93	-2.628	HMDB
sinapinik asit*	19.4	223.0607	223.0608	179 + 164 + 149	-0.717	HMDB
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton*	12	207.0657	207.0659	163 + 122 + 109	-0.821	HMDB
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton-3'-O-sülfat	9.5	287.0225	287.0236	207	-3.658	HMDB
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton-4'-O-sülfat	10.2	287.0225	287.0233	207	-2.474	HMDB
5-(3',4',5'-trihidroksifenil)- γ -valerolakton-3'-O-sülfat	6.6	303.0175	303.0167	223	2.442	HMDB
4-Hidroksi-5-(dihidroksifenil)-valerik asit-O-sülfat	6.4	305.0331	305.0341	225	-3.213	HMDB
Dihidroksihidrosinnamik asit-3-O-glukuronid	9.5	357.0821	357.0826	181 + 137	-1.484	HMDB
salisilürik glukuronid	9.2	370.0774	370.0783	194 + 150	-2.513	PubChem
3-O-Metilkateşin-sülfat	12.3	383.0437	383.0442	303 + 285 + 259 + 244 + 217 + 137	-1.279	PubChem
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton-3'-O-glukuronid	8.1	383.0978	383.0981	207	-0,783	HMDB
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton-4'-O-glukuronid	9.4	383.0978	383.0982	207	-1.044	HMDB
sinapinik glukuronid	6.8	399.0928	399.0931	223	-0.877	HMDB
5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ -valerolakton sülfoglukuronid	4.6	463.0546	463.0548	383/287/207	-0,302	[47]

Şekil 4 . Hedeflenen ve hedeflenmeyen tanımlamalar – Hedeflenen (mavi daire) ve hedeflenmeyen (sarı daire) analizlerle tanımlanan 42 bileşiğin tümünü bildiren Venn şeması.
Klorojenik asitten türetilebilen kinik asit ve 2-metilhippurik asitin yanı sıra hippurik asidin bir metil türevi, farklı valerolaktonlar ve bir valerik asit türevi tanımlandı ve Tablo 7'de listelendi . Bu metabolitler arasında 5-(3′-hidroksifenil)- γ -valerolakton-4′-O-sülfat önceki çalışmalarda tanımlanmıştı [17] , [18] . Ayrıca 5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ - valerolakton kızılcık metaboliti olarak rapor edilmiştir [19] . Burada açıklanan diğer valerolaktonların hiçbiri, PAC metabolitleri olarak bilinmesine rağmen, kızılcık alımından sonra idrarda daha önce tanımlanmamıştı [39], [47] .

Tablo 8 , bu çalışmada bildirilenlerle karşılaştırıldığında, insan çalışmalarında şimdiye kadar tanımlanan PAC'ler ve bunların metabolitleri dahil olmak üzere genel kızılcık bileşenlerini ve metabolitlerini özetlemektedir. Tedaviye ilişkin bilgiler (verilen yaban mersininin dozu ve PAC içeriği) de özetlenmiştir. Yukarıda zaten tartışıldığı gibi, PAC'ler yalnızca iki çalışmada [20] , [21] tespit edildi ve bunlardan birinde [20] kızılcık suyundaki PAC miktarı rapor edilmedi. Bu iki çalışmada, fenolik asitler PAC metabolitleri olarak rapor edilmiş ve Valentova ve ark. [15] . Feliciano et al. [17] , [18]standartlar kullanarak birkaç PAC metaboliti tanımladı ve bunlar arasında sadece bir valerolakton türevi tanımlanırken, Peron ve ark. [19] daha düşük miktarda metabolit ancak daha yüksek sayıda valerolakton/valerik asit türevi bildirmiştir, bunlardan biri de bu çalışmada tespit edilmiştir. Bu nedenle, burada bildirilen hedefsiz yaklaşım, kızılcık tüketiminden sonra idrarda varlığı daha önce hiç tarif edilmemiş olan altı valerolakton/valerik asidin tanımlanmasına izin vermiştir.

Tablo 8 . Kızılcık ürünleri alımından sonra metabolit karakterizasyonu üzerine bilinen çalışmaların sonuçları. Karşılaştırma ile ilgili olarak: kızılcık tedavisi, kullanılan kızılcık ürünündeki PAC içeriği, tedavi süresi, tanımlanan kızılcık metabolitlerinin sayısı, PAC'lerin nihai varlığı ve fenolik asit ve valerolakton türevleri dahil olmak üzere bilinen PAC metabolitlerinin sayısı. NA: mevcut değil.

boş hücre
2 kapsül/gün standardize kızılcık özü	1200 mg/gün kurutulmuş kızılcık suyu	237 mL kızılcık suyu kokteyli	237 mL/gün kızılcık suyu kokteyli	0.6 mL/kg kızılcık şurubu	450 mL tek güçlü kızılcık suyu içeceği	360 mg kızılcık özü
36 mg/kapsül	14,4 mg	NA	140 mg	%0.71 (a/h)	710 mg	%42.6 w/w PAC-A/a/a %14,6 PAC-B
7 gün	8 hafta	Tek doz (24 saat)	7 hafta	Tek doz (24 saat)	Tek doz (24 saat)	Tek doz (24 saat)
42	NA	26	19	32	67	14
hayır	hayır	evet	evet	hayır	hayır	hayır
15 (8)	NA	8 (0)	7 (0)	3 (0)	17 (1)	12 (6)

3.5 . İdrar fraksiyonları ile Candida albicans biyofilm oluşumunun ex-vivo inhibisyonu

Anthocran® (0,1 mg/mL), Anthocran®, Anthocran™ Phytosome™ veya plasebo uygulanmadan önce toplanan idrar ve her biri 1 saat, 2 saat, 4 saat, 6 saat, 10 saat, 12 saat ve 24 saat sonra toplanan idrar fraksiyonları muamele, polistiren 96 oyuklu plakalar üzerinde C. albicans yapışmasını ve biyofilm oluşumunu azaltma potansiyel yeteneklerini araştırmak için test edildi . Anthocran® 0.1 mg/mL, biyofilm üreten SC5314 suşunun (veriler gösterilmemiştir) yapışmasını ve biyofilm oluşumunu (p < 0.0001) güçlü bir şekilde azaltabilmiştir. İdrar fraksiyonlarının ortalama ± SD'si olarak ifade edilen sonuçlar Şekil 5'te rapor edilmektedir . Her tedaviden önce (U-Pre) idrar örnekleri inaktifken, test edilen yedi fraksiyondan 12 saat sonra Anthocran® tüketiminden sonra toplananlar ( Şekil 5 A )) yanı sıra Anthocran™ Phytosome™ ( Şekil 5 B )'nin kontrol ile karşılaştırıldığında yapışmayı önemli ölçüde engellediği gösterildi (sırasıyla Anthocran® ve Anthocran™ Phytosome™ için p < 0.05 ve p < 0.01). Plasebo alımından sonraki idrar fraksiyonları hiçbir aktivite göstermedi, yani diyet ve sirkadiyen ritmi aktiviteyi etkilemez. Anthocran™ Phytosome™'nin 12 saatte etkisinin, kapsül başına Anthocran® dozunun fitozomal preparasyonda 1/3 olmasına rağmen (12 mg PAC/kapsül Anthocran™ Phytosome™ vs 36 mg) Anthocran®'ınkiyle örtüştüğüne dikkat edilmelidir. PAC'ler/kapsül Anthocran®). Fitozomlar, hem klinik öncesi hem de klinik seviyelerde botanik bileşenlerin oral biyoyararlanımını arttırdığı gösterilen lesitin formülasyonlarıdır [48] ,[49] , [50] , [51] . Azaltılmış kızılcık ekstresi dozuna rağmen C. albicans yapışmasını ve biyofilmini azaltmadaki benzer yetenek, sonuç olarak, Phytosome teknolojisinin izin verdiği aktif ilkelerin artan bir absorpsiyonunun dikkate alınmasıyla açıklanabilir. Bu rakam, klinik dozaj ve pozolojinin daha rasyonel ve uygun bir

modülasyonuna olumlu katkıda bulunabilir.

Şekil 5 Candida albicans biyofilm oluşumunun inhibisyonu – Biyofilm biyokütlesi, C. albicans SC5314 suşu tedavilerle/olmadan RPMI 1640'ta 24 saat kültürlendikten sonra kristal mor testi kullanılarak değerlendirildi. A) Anthocran® alımından önce idrar aktivitesi (U-Pre) ve tedavi sonrası idrar fraksiyonları (U-1 saat – U-24 saat). İşlenmemiş C. albicans biyofilminin biyokütlesi kontrol olarak kullanıldı ( C. albicans ). B) Anthocran™ Phytosome™ oral alımından sonra idrar fraksiyonlarının (U-1 h – U-24 h) ve Anthocran™ Phytosome™ alımından (U-Pre) önce idrarın aktivitesi. İşlem görmemiş C. albicans biyofilmi ( C.albicans) kontrol olarak kullanılmıştır. C) Plasebo oral alımından sonra idrar fraksiyonlarının aktivitesi (U-1 saat – U-24 saat) (U-1 saat – U-24 saat). B) için açıklandığı gibi kontrol edin. Değerler, üç bağımsız deneyin ve en az üç örnek kopyanın ortalamasını temsil eder. Önemli farklılıklar *p < 0.05, **p < 0.01, ANOVA testi ile gösterilir.

3.6 . İdrar örneklerinde metabolit konsantrasyonu
Biyoaktif fraksiyonların karakteristik özelliği olan ve dolayısıyla büyük olasılıkla C. albicans yapışmasını ve biyofilm oluşumunu azaltma yeteneğinden sorumlu olan kızılcık bileşenlerini/metabolitlerini belirlemek için, her idrar fraksiyonu için mevcut metabolitlerin konsantrasyonu, aşağıda açıklanan kantitatif analiz yoluyla elde edilmiştir. yöntem bölümü. Karışımların saf bileşikler kullanılarak yeniden birleştirilmesine izin vermek ve etkinliklerini doğrulamak için idrar bileşenlerinin konsantrasyonları µM olarak rapor edilir (aşağıya bakınız). Örnek olarak, Şekil 6 , aktif fraksiyonda maksimum bolluğuna ulaşan iki bileşiği ve diğer idrar fraksiyonlarında bu değere ulaşan iki bileşiği göstermektedir: Şekil 6 A ve B_{T MAX'ı} 12 saat olan sırasıyla 5-(3',4'-dihidroksifenil)- y -valerolakton ve kersetin ile ilgilidir; Şekil 6C, 4 saat sonra ulaşılan bir T_MAX ile p -kumarik aside göredir ; Şekil 6 D , 3,4-dihidroksifenilasetik asidin (T _MAX = 10 saat) boşaltım profilini gösterir. Tablo 9 , kızılcık alımından sonra kontroldeki ve idrar fraksiyonlarındaki ortalama kızılcık metabolit konsantrasyonlarını (uM) gösterir.

Şekil 6 . Bazı metabolitlerin idrar profili – 5-(3′,4′-dihidroksifenil)-γ-valerolakton (A), kersetin (B), p -kumarik asit (C) ve 3,4-dihidroksifenilasetik asit (D) atılım profilleri .
Tablo 9 . Kızılcık bileşenleri ve metabolitleri, idrar fraksiyonlarında ortalama (±SD) konsantrasyon (µM). ND: algılanmadı.

protokateşik asit	1.20 ± 1.00	7,24 ± 3,31	4,97 ± 1,52	10.81 ± 4.45	2.12 ± 1.33	3,78 ± 1,47	2.03 ± 0.82	2.51 ± 0.94
p-kumarik asit	0,39 ± 0,24	13.11 ± 8.30	16.63 ± 10.27	17.81 ± 8.43	3,13 ± 1,62	5,40 ± 1,43	1.60 ± 0.31	0,55 ± 0,28
gallik asit	<LOQ	2.28 ± 1.34	<LOQ	1.45 ± 1.06	<LOQ	3.02 ± 1.56	2,18 ± 0,91	1,22 ± 0,53
sinapinik asit	0.29 ± 0.19	47.02 ± 46.73	25,36 ± 24,52	68,25 ± 67,50	118,75 ± 117,77	255,90 ± 247,79	84,29 ± 80,26	111,53 ± 109,32
kaempferol	ND	0.083 ± 0.033	0.04 ± 0.03	ND	ND	0,02 ± 0,01	0.04 ± 0.03	ND
kuersetin	<LOQ	0.108 ± 0.036	0.14 ± 0.04	0.15 ± 0.01	0.15 ± 0.01	0,63 ± 0,19	0,63 ± 0,27	0.18 ± 0.01
şırınga	ND	0.15 ± 0.14	0,02 ± 0,02	ND	ND	0.15 ± 0.14	0.03 ± 0.02	ND
Quercetin-3-O-arabinofuranoside	ND	0,01 ± 0,01	0,03 ± 0,01	0,01 ± 0,01	0,01 ± 0,01	0,02 ± 0,01	0,01 ± 0,01	ND
Quercetin 3-O-rhamnoside	ND	0.04 ± 0.02	0,03 ± 0,01	0,02 ± 0,01	ND	ND	ND	ND
Quercetin-3-O-galaktozid	ND	ND	0.02 ± 0.12	0,08 ± 0,06	ND	ND	0,01 ± 0,01	ND
2-hidroksibenzoik asit	<LOQ	0.26 ± 0.11	<LOQ	<LOQ	<LOQ	0,85 ± 0,44	0,36 ± 0,15	0.38 ± 0.18
3-hidroksibenzoik asit	ND	ND	ND	1.19 ± 1.07	1.31 ± 1.15	ND	ND	ND
4-hidroksibenzoik asit	4,58 ± 2,73	23.84 ± 14.69	18.10 ± 9.90	13,91 ± 8,35	2.51 ± 1.44	7,74 ± 4,65	3,71 ± 2,07	4,29 ± 3,75
2,3-dihidroksibenzoik asit	<LOQ	2,44 ± 0,53	2.20 ± 1.16	2.50 ± 0.80	1,62 ± 0,69	2,99 ± 1,23	1,62 ± 0,64	<LOQ
2,5-dihidroksibenzoik asit	<LOQ	10.48 ± 4.20	<LOQ	<LOQ	<LOQ	14,56 ± 5,40	5.07 ± 1.37	6,04 ± 2,03
2,4-dihidroksibenzoik asit	<LOQ	1.51 ± 1.18	3.58 ± 2.40	4,61 ± 3,44	<LOQ	3,40 ± 3,04	1.55 ± 1.22	2,88 ± 2,57
3-(4-hidroksifenil)-propionik asit	0,58 ± 0,55	25,79 ± 19,77	4,22 ± 2,85	20.23 ± 7.92	17,74 ± 16,76	4,10 ± 1,91	1.18 ± 0.64	ND
3,4-dihidroksifenilasetik asit	ND	ND	ND	1.49 ± 1.24	3,10 ± 2,06	9,36 ± 6,36	3.85 ± 2.70	4.06 ± 2.85
hippurik asit	666.15 ± 29.07	230.12 ± 19.82	557,72 ± 26,45	409,82 ± 17,03	656.46 ± 24.06	531.84 ± 68.23	192.91 ± 31.13	648.52 ± 27.88
3,4-dihidroksihidrosinnamik asit	0.45 ± 0.40	4,39 ± 4,03	2,99 ± 2,69	3,24 ± 2,43	2.50 ± 2.45	7,15 ± 4,89	4,46 ± 2,05	5.08 ± 2.12
p-Hidroksihippurik asit	47.16 ± 12.68	1.48 ± 0.49	14.14 ± 3.15	30,64 ± 4,53	59,89 ± 14,55	9,04 ± 4,13	<LOQ	46.19 ± 4.34
m-Hidroksihippurik asit	24.80 ± 13.21	21,91 ± 3,37	37,88 ± 12,61	25,57 ± 8,15	43.60 ± 10.17	32.36 ± 3.54	29.03 ± 13.24	24,89 ± 3,74
o-Hidroksihippurik asit	36,65 ± 8,21	10.84 ± 1.14	8,44 ± 3,31	7,86 ± 2,68	17.99 ± 3.42	19,79 ± 1,20	13,32 ± 2,78	27,48 ± 3,30
2-metilhippurik asit	ND	2.070 ± 1.11	4,85 ± 0,97	<LOQ	ND	ND	ND	ND
kinik asit	5,49 ± 3,80	12.71 ± 8.02	6,42 ± 4,38	10,15 ± 8,29	9,23 ± 2,26	17,36 ± 9,82	14,74 ± 7,32	8,50 ± 4,92
5-(3',4'-dihidroksifenil)-y-valerolakton	ND	88.34 ± 61.63	41,51 ± 15,10	26,40 ± 14,03	13,83 ± 11,89	238,22 ± 129,46	245,24 ± 143,59	3,83 ± 2,08

Aktif idrar fraksiyonlarının (12 saat) ve iki aktif olmayan fraksiyonun (1 saat ve 6 saat) karışımı daha sonra RPMI içinde çözülmüş mevcut standartlar kullanılarak yeniden birleştirildi ve C. albicans üzerinde test edildi . 12 saatlik karışımın adezyonu önemli ölçüde azalttığı, diğer iki karışımın ise inaktif olduğu ve böylece ex-vivo idrar numunelerinin sonuçlarını doğruladığı bulundu ( Şekil 7).). 12 saatlik sulandırılmış karışımın, valerolakton standartlarının ticari olarak bulunamaması nedeniyle tanımlanan 8 valerolakton türevinden (yani, 5-(3',4'-dihidroksifenil)-y-valerolakton) yalnızca birini içerdiğinin altını çizmek önemlidir ( sentezleri laboratuvarlarımızda devam etmektedir). Bu nedenle, biyoaktivite beklendiği gibi bu bileşik sınıfıyla ilgiliyse, sulandırılmış karışımı diğer yedi valerolaktonla entegre ederek daha büyük bir aktivite elde edilebilir.

Şekil 7 Candida albicans biyofilm oluşumunun sahte karışımlarla inhibisyonu - RPMI ortamında mevcut standartlar kullanılarak hazırlanan karışımların aktivitesi, aktif olmayan fraksiyonları (1 saat ve 6 saat) ve aktif fraksiyonu (12 saat, *p < 0.05) temsil eder. .
Kızılcıkların hem in vitro hem de in vivo yapışma önleyici özellikleri , uzun süredir özellikle İYE'lere neden olan başlıca üropatojen olan E. coli ile ilgili olarak bildirilmiştir [52] , [53] , [54] , [55] . Bir in vitro çalışma, kızılcık PAC'lerinin yapay idrarda C. albicans biyofilm oluşumunu önlediğini gösterdi [56] . Bu çalışmada, bir haftalık kızılcık uygulamasından sonra toplanan bazı idrar fraksiyonlarının yanı sıra kızılcık özütünün hem C. albicans'ı azalttığını ilk kez gösterdik.yapışma ve biyofilm biyokütlesi. 12 saatlik idrar fraksiyonları en aktif olduğu için, dikkatimizi bu zaman noktasında en yüksek konsantrasyona ulaşan bileşenlere odakladık. Bu idrar fraksiyonunda en yüksek konsantrasyona sahip olduğu bulunan bileşenler, kuersetin ve 5-(3',4'-dihidroksifenil)- γ - valerolaktondur. Yakın tarihli bir in vitro çalışma [57] valerolakton türevlerinin E. coli'ye karşı yapışma önleyici aktivite sergilediğini göstererek in vivo aktivitenin bozulmamış PAC'lerden ziyade PAC'lerin metabolitlerinden kaynaklandığını doğrular . Ayrıca, quercetin'in E. coli üzerinde in vitro yapışma önleyici özelliklere sahip olduğu bildirilmiştir [58] . Bununla birlikte, aktivite sadece tek bir bileşenden değil, bu karışımda bulunan tüm metabolitlerin bir sinerjisinden de türetilebilir, böylece kızılcıkların bir fitokompleks olarak olası aktivitesini açıklayabilir. Aslında, karışımda bulunan birçok bileşen, biyofilm oluşumuna karşı bir aktivite veya protokateşik asit, 3,4-dihidroksifenilasetik asit ve 2-hidroksibenzoik asit gibi E. coli'ye karşı yapışma önleyici özellikler göstermiştir [59] , [60] , [61 ] ] .

Sonuç olarak, geliştirilen HR-MS yöntemi, insan çalışmalarında etkili olduğu tespit edilen yüksek oranda standartlaştırılmış kızılcık özü tüketiminden sonra insan idrarındaki çeşitli kızılcık bileşenlerinin ve metabolitlerinin tanımlanmasına izin verdi. PAC'ler önceki çalışmalarda bildirildiği gibi saptanmadı, ancak muhtemelen bağırsak mikroflorası tarafından çalıştırılan ve burada in vivo olarak bulunmayan katabolizmalarından türetilen birkaç metabolit tanımlandı. Kızılcık alımından 12 saat sonra toplanan ham ekstrakt ve idrar fraksiyonunun, ex-vivo C. albicans yapışmasına karşı aktif olduğu bulundu . PAC'lerin bilinen metaboliti, 5-(3',4'-dihidroksifenil)- y-valerolakton, biyoaktif idrar fraksiyonunda en bol bulunan metabolit (245 uM) olarak tanımlandı. Bildiğimiz kadarıyla bu, kızılcık alımından sonra insan idrarı tarafından C. albicans yapışmasının ex-vivo inhibisyonunu gösteren ilk çalışmadır . Gelecekteki bir perspektif olarak, 12 saatte pik yapan tüm tanımlanmış bileşikler mevcut olur olmaz (valerolakton türevlerinin sentezi devam etmektedir) C. albicans'a karşı aktiviteleri değerlendirilecek ve özellikle aşağıdakileri temsil eden valerolakton türevlerine odaklanılacaktır. kızılcık alımından sonra idrarda en bol metabolitler. Ayrıca sinerjik bir etkinin olup olmadığını anlamak için bileşikler saf halde mi yoksa karışım halinde mi test edilecektir.

Çalışmamızın bir başka ilginç sonucu, kızılcık aktif ilkelerinin oral biyoyararlanımını ve organ hedef erişilebilirliğini belirgin şekilde arttırdığı gösterilen kızılcık özütünün lesitin formülasyonunun kullanılmasından kaynaklanmaktadır. Anthocran™ Phytosome™'ın etkinliğini doğrulamak için kateterize edilmiş deneklerde yapılan bir klinik çalışma devam etmektedir.Yazar Katkıları

GB ve GA, deneysel kısımdan ve makaleyi yazmaktan sorumluydu. PA, GP, PM AR, MC, GB ve GA çalışmayı tasarladı ve tasarladı. LF ve A. Artasensi, valerolakton türevinin sentezine katkıda bulunmuştur. EB ve EO mikrobiyolojik çalışmalara katkıda bulunmuştur. CDB ve PR, insan gönüllüleri çalışmasının tasarımına katkıda bulundu. GB, AA, LC, LA analizleri gerçekleştirdi. Tüm yazarlar makalenin hazırlanmasına yardımcı olmuştur.

Teşekkür
Gerard Davy'ye makalenin İngiliz stilini gözden geçirmedeki yardımlarından dolayı müteşekkiriz.

Çıkar çatışması ve sponsorluk
Yardımcı yazarlar olarak listelenen akademik araştırmacıların hiçbiri Indena için danışman olarak hizmet etmedi veya herhangi bir kişisel tazminat almadı. Araştırma, 2015 yılında UNIMI ve Indena (PI olarak GA) arasında imzalanan “Sıvı kromatografi yöntemlerinin geliştirilmesi ile birleştirilmiş sıvı kromatografi yöntemlerinin standartlaştırılmış vaccinium macrocarpon ve vaccinium myrtillius özütlerinin biyoyararlanımını değerlendirmek” başlıklı bir araştırma sözleşmesi ile kısmen desteklenmiştir. AR, PA, GP, PM, Indena SpA'nın çalışanlarıdır.

Referanslar
[1] JM Achkar , M.Ö. _
Genitoüriner sistemin Candida enfeksiyonları
Klinik. Mikrobiyol. Rev. , 23 ( 2 ) ( 2010 ) , s. 253 - 273
Görünüm PDF
Bu makaleye erişim ücretsizdir.

Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [2] CJ Nobile , AD Johnson
Candida albicans Biyofilmleri ve İnsan Hastalığı
Annu. Rev. Mikrobiyol. , 69 ( 2015 ) , s. 71 - 92
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [3] CA Kauffman
Mantar idrar yolu enfeksiyonu tanı ve tedavisi
Bulaş. Dis. Klinik. Kuzey Am. , 28 ( 1 ) ( 2014 ) , s. 61 - 74
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [4] S. Saint , J. Wiese , JK Amory , ML Bernstein , UD Patel , JK Zemencuk , SJ Bernstein , BA Lipsky , TP Hofer
Doktorlar hangi hastalarında kalıcı idrar sondası olduğunun farkında mı?
Ben. J. Med. , 109 ( 6 ) ( 2000 ) , s. 476 - 480
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [5] S. Tobudic , C. Kratzer , A. Lassnigg , E. Presterl
Biyofilmlerde Candida albicans'ın antifungal duyarlılığı
Mikozlar , 55 ( 3 ) ( 2012 ) , s. 199 - 204
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [6] M. Heinonen
Berry fenoliklerinin antioksidan aktivitesi ve antimikrobiyal etkisi – bir Fin bakış açısı
Mol. Nutr. Gıda Araş. , 51 ( 6 ) ( 2007 ) , s. 684 - 691
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [7] SH Nil , GB Parkı
Yenilebilir meyveler: biyoaktif bileşenler ve insan sağlığı üzerindeki etkileri
Beslenme , 30 ( 2 ) ( 2014 ) , s. 134 - 144
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [8] S. Skrovankova , D. Sumczynski , J. Mlcek , T. Jurikova , J. Sochor
Farklı meyve türlerinde biyoaktif bileşikler ve antioksidan aktivite
Int. J. Mol. bilim , 16 ( 10 ) ( 2015 ) , s. 24673 - 24706
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [9] C. Bodet , F. Chandad , D. Grenier
Kızılcık bileşenleri, lipopolisakkarit ile aktive olan dişeti fibroblastları tarafından interlökin-6, interlökin-8 ve prostaglandin E üretimini inhibe eder
Avro. J. Oral Sci. , 115 ( 1 ) ( 2007 ) , s. 64 - 70
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [10] NP Seeram , LS Adams , ML Hardy , D. Heber
Fitokimyasal bileşenlerine karşı toplam kızılcık özü: insan tümör hücre hatlarına karşı antiproliferatif ve sinerjik etkiler
J. Agric. Gıda Kimyası , 52 ( 9 ) ( 2004 ) , s. 2512 - 2517
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [11] X. Yan , BT Murphy , GB Hammond , JA Vinson , CC Neto
Kızılcık meyvesinden (Vaccinium macrocarpon) elde edilen ekstraktların antioksidan aktiviteleri ve antitümör taraması
J. Agric. Gıda Kimyası , 50 ( 21 ) ( 2002 ) , s. 5844 - 5849
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [12] I. Vasileiou , A. Katsargyris , S. Theocharis , C. Giaginis
Kızılcık tüketiminin idrar yolu enfeksiyonlarına karşı koruyucu etkileri üzerine güncel klinik durum
Nutr. Araş. , 33 ( 8 ) ( 2013 ) , s. 595 - 607
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [13] E. Pappas , KM Schaich
Kızılcık ve kızılcık ürünlerinin fitokimyasalları: karakterizasyon, potansiyel sağlık etkileri ve işleme kararlılığı
Krit. Rev. Gıda Bilimi. Nutr. , 49 ( 9 ) ( 2009 ) , s. 741 - 781
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [14] AB Howell , JD Reed , CG Krueger , R. Winterbottom , DG Cunningham , M. Leahy
A tipi kızılcık proantosiyanidinleri ve üropatojenik bakteriyel yapışma önleyici aktivite
Fitokimya , 66 ( 18 ) ( 2005 ) , s. 2281 - 2291
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [15] K. Valentova , D. Stejskal , P. Bednar , J. Vostalova , C. Cíhalík , R. Vecerova , D. Koukalova , M. Kolar , R. Reichenbach , L. Sknouril , J. Ulrichova , V. Simanek
Sağlıklı kadınlarda kurutulmuş kızılcık suyu tüketiminden sonra idrarda biyogüvenlik, antioksidan durum ve metabolitler: çift kör, plasebo kontrollü bir pilot çalışma
J. Agric. Gıda Kimyası , 55 ( 8 ) ( 2007 ) , s. 3217 - 3224
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [16] I. Iswaldi , D. Arráez-Román , AM Gómez-Caravaca , MEM Contreras , J. Uberos , A. Segura-Carretero , A. Fernández-Gutiérrez
Kızılcık şurubu tüketiminden sonra insan idrarında polifenollerin ve metabolitlerinin tanımlanması
Gıda Kimyası Toksikol. , 55 ( 2013 ) , s. 484 - 492
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [17] RP Feliciano , A. Boeres , L. Massacessi , G. Istas , MR Ventura , C. Nunes Dos Santos , C. Heiss , A. Rodriguez-Mateos
Yeni kızılcık türevli plazma ve idrar (poli)fenollerin tanımlanması ve miktar tayini
Kemer Biyokimya. Biyofiz. , 599 ( 2016 ) , s. 31 - 41
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [18] RP Feliciano , E. Mecha , MR Bronze , A. Rodriguez-Mateos
İnsan plazması ve idrarındaki fenolik metabolitlerin hızlı tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi-dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometrisi ile birleştirilmiş yüksek verimli bir mikro katı faz ekstraksiyon yönteminin geliştirilmesi ve doğrulanması
J. Kromatogr. A , 1464 ( 2016 ) , s. 21 - 31
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [19] G. Peron , S. Sut , A. Pellizzaro , P. Brun , D. Voinovich , I. Castagliuolo , S. Dall'Acqua
Metabolomikler tarafından incelenen kızılcık fitokompleksinin yapışma önleyici aktivitesi: bağırsak PAC-A metabolitleri, ancak bozulmamış PAC-A, üropatojenik Escherichia coli'ye karşı aktif idrarlarda belirteçler olarak tanımlanır.
Fitoterapia , 122 ( 2017 ) , s. 67 - 75
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [20] DL McKay , CY Chen , CA Zampariello , JB Blumberg
Kızılcık suyundan elde edilen flavonoidler ve fenolik asitler, sağlıklı yaşlı yetişkinlerde biyolojik olarak kullanılabilir ve biyolojik olarak aktiftir.
Gıda Kimyası , 168 ( 2015 ) , s. 233 - 240
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [21] JM Walsh , X. Ren , C. Zampariello , DA Polasky , DL McKay , JB Blumberg , CY Chen
İdrar proantosiyanin A2 dimerinin tandem kütle spektrometrisi ile sıvı kromatografisi ve kızılcık alımının bir biyobelirteç olarak potansiyel kullanımı
J. Eylül Sci. , 39 ( 2 ) ( 2016 ) , s. 342 - 349
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [22] A. Ledda , A. Bottari , R. Luzzi , G. Belcaro , S. Hu , M. Dugall , M. Hosoi , E. Ippolito , M. Corsi , G. Gizzi , P. Morazzoni , A. Riva , L. Giacomelli , S. Togni
Şiddetli olmayan alt idrar yolu enfeksiyonlarının önlenmesinde kızılcık takviyesi: bir pilot çalışma
Avro. Rev. Med. farmakol. bilim , 19 ( 1 ) ( 2015 ) , s. 77 - 80
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [23] A. Ledda , G. Belcaro , M. Dugall , B. Feragalli , A. Riva , S. Togni , L. Giacomelli
Orta derecede prostat hiperplazisi olan yaşlı erkeklerde tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonlarının önlenmesi için yüksek titreli kızılcık özü (Anthocran®) takviyesi: bir pilot çalışma
Avro. Rev. Med. farmakol. bilim , 20 ( 24 ) ( 2016 ) , s. 5205 - 5209
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [24] A. Ledda , G. Belcaro , M. Dugall , A. Riva , S. Togni , R. Eggenhoffner , L. Giacomelli
Tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonları olan genç sağlıklı deneklerde profilaksi olarak yüksek düzeyde standardize kızılcık özü takviyesi (Anthocran®)
Avro. Rev. Med. farmakol. bilim , 21 ( 2 ) ( 2017 ) , s. 389 - 393
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [25] BO Keller , J. Sui , AB Young , RM Whittal
Modern kütle spektrometrisinde karşılaşılan enterferanslar ve kirleticiler
Anal. Chim. Açta , 627 ( 1 ) ( 2008 ) , s. 71 - 81
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [26] F. Allen , A. Pon , M. Wilson , R. Greiner , D. Wishart
CFM-ID: tandem kütle spektrumlarından açıklama, spektrum tahmini ve metabolit tanımlaması için bir web sunucusu
Nucl.Asitler Res. , 42 ( Web Sunucusu sorunu ) ( 2014 ) , s. W94 - W99
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [27] D. Cirasola , R. Sciota , L. Vizzini , V. Ricucci , G. Morace , E. Borghi
Deneysel biyofilm ile ilişkili Candida enfeksiyonları
Gelecek Mikrobiyol. , 8 ( 6 ) ( 2013 ) , s. 799 - 805
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [28] CG Pierce , P. Uppuluri , AR Tristan , FL Wormley , E. Mowat , G. Ramage , JL Lopez-Ribot
Mantar biyofilmlerinin oluşumu ve bunun antifungal duyarlılık testine uygulanması için basit ve tekrarlanabilir 96 oyuklu plaka tabanlı bir yöntem
Nat. Protokol , 3 ( 9 ) ( 2008 ) , s. 1494 - 1500
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [29] R. Ohnishi , H. Ito , N. Kasajima , M. Kaneda , R. Kariyama , H. Kumon , T. Hatano , T. Yoshida
Kızılcık suyu alımından sonra insanlarda antosiyaninlerin idrarla atılımı
Biosci. Biyoteknoloji. Biyokimya. , 70 ( 7 ) ( 2006 ) , s. 1681 - 1687
Görünüm PDF
Bu makaleye erişim ücretsizdir.

Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [30] R. Rajbhandari , N. Peng , R. Moore , A. Arabshahi , JM Wyss , S. Barnes , JK Prasain
Sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometrisi ile sıçanlarda kızılcık fenolik metabolitlerinin belirlenmesi
J. Agric. Gıda Kimyası , 59 ( 12 ) ( 2011 ) , s. 6682 - 6688
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [31] RM de Ferrars , C. Czank , Q. Zhang , NP Botting , PA Kroon , A. Cassidy , CD Kay
İnsanlarda antosiyaninlerin ve metabolitlerinin farmakokinetiği
Br. J. Pharmacol. , 171 ( 13 ) ( 2014 ) , s. 3268 - 3282
Görünüm PDF
Bu makaleye erişim ücretsizdir.

Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [32] SC Forester , AL Waterhouse
Cabernet Sauvignon antosiyanin bağırsak mikroflora metabolitlerinin tanımlanması
J. Agric. Gıda Kimyası , 56 ( 19 ) ( 2008 ) , s. 9299 - 9304
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [33] A. Rodriguez-Mateos , D. Vauzour , CG Krueger , D. Shanmuganayagam , J. Reed , L. Calani , P. Mena , D. Del Rio , A. Crozier
Diyet flavonoidlerinin ve ilgili bileşiklerin biyoyararlanımı, biyoaktivitesi ve sağlığı üzerindeki etkisi: bir güncelleme
Kemer Toksikol. , 88 ( 10 ) ( 2014 ) , s. 1803 - 1853
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [34] A. Scalbert , G. Williamson
Polifenollerin diyet alımı ve biyoyararlanımı
J. Nutr. , 130 ( 8S Ek ) ( 2000 ) , s. 2073S - 2085S
Görünüm PDF
Çapraz Referans Google Akademik [35] K. Kawabata , R. Mukai , A. Ishisaka
Quercetin ve ilgili polifenoller: biyoaktiviteleri ve biyoyararlanımları için yeni anlayışlar ve çıkarımlar
Gıda Fonksiyonu. , 6 ( 5 ) ( 2015 ) , s. 1399 - 1417
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [36] IB Jaganath , W. Mullen , CA Edwards , A. Crozier
İnsanda rutinin emilimine ve metabolizmasına ince ve kalın bağırsağın nispi katkısı
Free Radic Res , 40 ( 10 ) ( 2006 ) , s. 1035 - 1046
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [37] H. Schneider , A. Schwiertz , MD Collins , M. Blaut
Quercetin-3-glukozitin insan bağırsak yolundan bakteriler tarafından anaerobik dönüşümü
Kemer Mikrobiyol. , 171 ( 2 ) ( 1999 ) , s. 81 - 91
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [38] RP Feliciano , CG Krueger , JD Reed
Kızılcık proantosiyanidinlerinin ekstraintestinal enfeksiyonlar üzerindeki etkilerini belirleme yöntemleri: İdrar yolu sağlığı ile ilgisi
Mol. Nutr. Gıda Araş. , 59 ( 7 ) ( 2015 ) , s. 1292 - 1306
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [39] M. Monagas , M. Urpi-Sarda , F. Sánchez-Patán , R. Llorach , I. Garrido , C. Gómez-Cordovés , C. Andres-Lacueva , B. Bartolomé
Diyet flavan-3-ollerin metabolizması ve mikrobiyal biyotransformasyonu ve metabolitlerinin biyoaktivitesi hakkında bilgiler
Gıda Fonksiyonu. , 1 ( 3 ) ( 2010 ) , s. 233 - 253
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [40] K. Ou , P. Sarnoski , KR Schneider , K. Song , C. Khoo , L. Gu
Prosiyanidinlerin insan bağırsağı mikrobiyotası tarafından mikrobiyal katabolizması
Mol. Nutr. Gıda Araş. , 58 ( 11 ) ( 2014 ) , s. 2196 - 2205
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [41] JI Ottaviani , G. Borges , TY Momma , JP Spencer , CL Keen , A. Crozier , H. Schroeter
İnsanlarda [2-(14)C](-)-epikateşin metabolomu: polifenolik biyoaktif maddelerin etkinlik, güvenlik ve etki mekanizmalarının değerlendirilmesi için çıkarımlar
bilim Tem. , 6 ( 2016 ) , s. 29034
Google Akademik [42] M. Kutschera , W. Engst , M. Blaut , A. Braune
Kateşin dönüştürücü insan bağırsak bakterilerinin izolasyonu
J. Uygulama Mikrobiyol. , 111 ( 1 ) ( 2011 ) , s. 165 - 175
Görünüm PDF
Bu makaleye erişim ücretsizdir.

Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [43] C. Li , MJ Lee , S. Sheng , X. Meng , S. Prabhu , B. Winnik , B. Huang , JY Chung , S. Yan , CT Ho , CS Yang
Çay alımından sonra insan idrarında ve kanında iki kateşin metabolitinin ve bunların kinetiğinin yapısal olarak tanımlanması
Kimya Araş. Toksikol. , 13 ( 3 ) ( 2000 ) , s. 177 - 184
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [44] MM Appeldoorn , JP Vincken , AM Aura , PC Hollman , H. Gruppen
Prosiyanidin dimerleri, ana metabolitler olarak 2-(3,4-dihidroksifenil)asetik asit ve 5-(3,4-dihidroksifenil)-gama-valerolakton ile insan mikrobiyotası tarafından metabolize edilir.
J. Agric. Gıda Kimyası , 57 ( 3 ) ( 2009 ) , s. 1084 - 1092
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [45] JI Ottaviani , C. Kwik-Uribe , CL Keen , H. Schroeter
Diyet prosiyanidinlerinin alımı, insanlarda dolaşan flavanol havuzuna katkıda bulunmaz.
Ben. J. Clin. Nutr. , 95 ( 4 ) ( 2012 ) , s. 851 - 858
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [46] D. Del Rio , A. Rodriguez-Mateos , JP Spencer , M. Tognolini , G. Borges , A. Crozier
İnsan sağlığında diyet (poli)fenolikler: yapılar, biyoyararlanım ve kronik hastalıklara karşı koruyucu etkilerin kanıtı
Antioksit. Redoks Sinyali. , 18 ( 14 ) ( 2013 ) , s. 1818 - 1892
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [47] R. Llorach , I. Garrido , M. Monagas , M. Urpi-Sarda , S. Tulipani , B. Bartolome , C. Andres-Lacueva
Badem (Prunus dulcis (Mill.) DA Webb) deri polifenollerinin alımından sonra insan üriner metabolom modifikasyonlarının metabolomik çalışması
J. Proteom Araş. , 9 ( 11 ) ( 2010 ) , s. 5859 - 5867
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [48] J. Hüsch , J. Bohnet , G. Fricker , C. Skarke , C. Artaria , G. Appendino , M. Schubert-Zsilavecz , M. Abdel-Tawab
Boswellia özütünün bir lesitin verme formu (Phytosome(®)) ile boswellik asitlerin gelişmiş emilimi
Fitoterapia , 84 ( 2013 ) , s. 89 - 98
Madde PDF İndir Google Akademik [49] A. Babazadeh , M. Zeinali , H. Hamishehkar
Nano-fitozom: kanser tedavisinde bitkisel anti-kanser ajanları için gelişen bir platform
Kör. İlaç Hedefleri , 19 ( 2 ) ( 2018 ) , s. 170 - 180
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [50] A. Riva , M. Ronchi , G. Petrangolini , S. Bosisio , P. Allegrini
Quercetin Phytosome®, Gıda Sınıfı Lesitine Dayalı Yeni Bir Dağıtım Sisteminden İyileştirilmiş Quercetin Oral Emilimi
Avro. J. İlaç Metab. Farmakokinet. , 44 ( 2 ) ( 2019 ) , s. 169 - 177
Görünüm PDF
Bu makaleye erişim ücretsizdir.

Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [51] GS Ravi , RN Charyulu , A. Dubey , P. Prabhu , S. Hebbar , AC Mathias
Rutin Nano-lipid Kompleksi: Sıçanlarda Hepatoprotektif, Antioksidan Aktivite ve Biyoyararlanım Çalışmasının Gelişimi, Karakterizasyonu ve İn Vivo Araştırılması
AAPS PharmSciTech , 19 ( 8 ) ( 2018 ) , s. 3631 - 3649
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [52] G. Ermel , S. Georgeault , C. İnisan , M. Besnard
Kızılcık özütleri ile üropatojenik Escherichia coli bakterilerinin üroepitelyal hücrelere yapışmasının engellenmesi
J. Med. Yemek , 15 ( 2 ) ( 2012 ) , s. 126 - 134
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [53] JP Lavigne , G. Bourg , C. Combescure , H. Botto , A. Sotto
Ticari Vaccinium macrocarpon (kızılcık) kapsüllerinin tüketilmesinden sonra üropatojenik Escherichia coli virülansında doza bağlı azalmanın in vitro ve in vivo kanıtı
Klinik. Mikrobiyol. Bulaş. , 14 ( 4 ) ( 2008 ) , s. 350 - 355
Madde PDF İndir Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [54] K. Gupta , MY Chou , A. Howell , C. Wobbe , R. Grady , AE Stapleton
Kızılcık ürünleri, p-fimbriated Escherichia coli'nin primer kültürlenmiş mesane ve vajinal epitel hücrelerine yapışmasını engeller
J. Urol. , 177 ( 6 ) ( 2007 ) , s. 2357 - 2360
Madde PDF İndir Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [55] A. Turner , SN Chen , MK Joike , SL Pendland , GF Pauli , NR Farnsworth
Kızılcık suyu ile üropatojenik Escherichia coli'nin inhibisyonu: yeni bir yapışma önleyici tahlil
J. Agric. Gıda Kimyası , 53 ( 23 ) ( 2005 ) , s. 8940 - 8947
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [56] ML Porter , CG Krueger , DA Wiebe , DG Cunningham , JD Reed
Kızılcık proantosiyanidinleri, düşük yoğunluklu lipoprotein ile birleşir ve in vitro Cu2 + ile indüklenen oksidasyonu inhibe eder
J. Sci. Gıda Tarımı. , 81 ( 2001 ) , s. 1306 - 1313
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [57] P. Mena , D. Gonzalez de Llano , N. Brindani , A. Esteban-Fernandez , C. Curti , MV Moreno-Arribas , D. Del Rio
5-(3',4'-Dihidroksifenil)-γ-valerolakton ve sülfat konjugatları, flavan-3-ols'ün dolaşımdaki metabolitlerini temsil eder, mesane epitel hücrelerinde üropatojenik Escherichia coli'ye karşı yapışma önleyici aktivite sergiler.
J. Fonksiyon. Yemek , 29 ( 2017 ) , s. 275 - 280
Madde PDF İndir Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [58] C. Rodríguez-Pérez , R. Quirantes- Piné , J. Uberos , C. Jiménez-Sánchez , A. Peña , A. Segura-Carretero
Kızılcıktan (Vaccinium macrocarpon) izole edilen fenolik bileşiklerin Escherichia coli'ye karşı antibakteriyel aktivitesi
Gıda Fonksiyonu. , 7 ( 3 ) ( 2016 ) , s. 1564 - 1573
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [59] Bernal -Mercado , FJ Vazquez-Armenta , MR Tapia-Rodriguez , MA Islas-Osuna , V. Mata-Haro , GA Gonzalez-Aguilar , AA Lopez-Zavala , JF Ayala-Zavala
Antioksidan ve antibakteriyel ajanlar olarak kateşin, protokateşik ve vanilik asitlerin tek ve kombine kullanımının üropatojeniklere karşı karşılaştırılması
Moleküller , 23 ( 11 ) ( 2018 )
Google Akademik [60] DG de Llano , A. Esteban-Fernández , F. Sánchez-Patán , PJ Martínlvarez , MV Moreno-Arribas , B. Bartolomé
Kızılcık fenolik bileşiklerinin ve bunların mikrobiyal kaynaklı metabolitlerinin mesane epitel hücre kültürlerinde üropatojenik escherichia coli'ye karşı yapışma önleyici aktivitesi
Int. J. Mol. bilim , 16 ( 6 ) ( 2015 ) , s. 12119 - 12130
Görünüm PDF
Scopus'ta Kaydı Görüntüle Google Akademik [61] C. Cattò , G. Grazioso , S. Dell'Orto , A. Gelain , S. Villa , V. Marzano , A. Vitali , F. Villa , F. Cappitelli , F. Forlani
Escherichia coli biyofilminin salisilik aside tepkisi
Biyolojik kirlilik , 33 ( 3 ) ( 2017 ) , s. 235 - 251
Görünüm PDF
Çapraz Referans Scopus'ta Kaydı Görüntüle

***maturidi*** · 24 October 2022, 14:52

İki Vaccinium macrocarpon (Cranberry) İdrar Metabolitleri ile Candida albicans Biyofilm İnhibisyonu : 5-(3′,4′-DihidroksiFenil)-γ-Valerolakton ve 4-Hidroksibenzoik Asit

Emerenziana Ottaviano , ¹Giovanna Baron , ²Laura Fumagalli , ²Jessica Leite , ²Elisa Adele Colombo , ¹Angelica Artasensi , ²Giancarlo Aldini , ² ve Elisa Borghi ^1,^*
Ute Römling, Akademik Editör
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
¹ Sağlık Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, 20142 Milano, İtalya; ti.iminu@onaivatto.anaiznereme (EO); ti.iminu@obmoloc.eledaasile (EAC)
² Farmasötik Bilimler Bölümü, Università degli Studi di Milano, 20133 Milano, İtalya; ti.iminu@norab.annavoig (GB); ti.iminu@illagamuf.arual (LF); moc.liamg@aicragetielssej (JL); ti.iminu@isnesatra.acilegna (AA); ti.iminu@inidla.olracnaig (GA)
^* Yazışma: ti.iminu@ihgrob.asile ; Tel.: +39-02-50323287 İlişkili Veriler

Veri Kullanılabilirlik Bildirimi
Git: Soyut

Candida spp. çeşitli patolojik süreçlerden sorumlu olan kommensallerden patojenlere geçebildikleri için patobiyontlardır. Yüzeylere yapışma, morfolojik geçiş ve biyofilm oluşturma yeteneği, maya virülansını destekleyen bilinen virülans faktörleridir. Sesil yaşam tarzı ayrıca mantar kalıcılığını ve antifungal toleransı da destekler. Bu çalışmada, iki idrar kızılcık metaboliti olan 5-(3',4'-dihidroksi fenil)-γ-valerolakton (VAL) ve 4-hidroksibenzoik asidin (4-HBA) in vitro etkinliğini araştırdık. c. albicansyapışma ve biyofilm oluşumu. Hem referans suşu SC5314 hem de klinik izolatlar kullanıldı. Konfokal mikroskopi ve kristal menekşe tahlili ile biyokütle azalmasını ve bunların inhibitör etkilerine aracılık eden olası mekanizmaları değerlendirdik. Hem VAL hem de 4-HBA, HWP1 ve ALS3 anahtar genlerinin ekspresyonunu modüle ederek maya yapışmasına müdahale edebildi . Biyofilm biyokütlesinde ve metabolik aktivitede doza bağlı önemli bir azalma da kaydedildi. Verilerimiz, iki kızılcık metaboliti VAL ve 4-HBA'nın, ilaç geliştirme, biyofilm oluşumunun çok erken evrelerini hedefleme ve genitoüriner Candida enfeksiyonlarını önleme yolunu açabileceğini gösterdi.

Anahtar Kelimeler: Candida albicans , kızılcık, biyofilm, HWP1
Git: 1. Giriş

Candida cinsi , yüzeyselden mukozal ve sistemik hastalıklara kadar değişen fırsatçı mantar enfeksiyonlarının en yaygın etiyolojik ajanıdır [ 1 ]. Enfeksiyonlar genellikle kommensal maya ve konakçı arasındaki denge bozukluğundan kaynaklanır [ 2 ]. Candida albicans , diğer Candida türlerinin yükselişte olmasına rağmen, bu tür enfeksiyonlara neden olan en yaygın türdür . C. albicans , çeşitli biyotik ve abiyotik yüzeylerde filament oluşturabilen ve biyofilm oluşturabilen pleomorfik bir mayadır [ 3 , 4]. Mantar hücreleri tarafından salınan biyofilm mimarisi ve hücre dışı matris, mantarın konakçı içinde kalmasına izin vererek tekrarlayan enfeksiyonlara neden olur.

Ayrıca, biyofilm ile organize edilmiş mantar, antifungal tedaviye karşı artan bir spesifik olmayan tolerans gösterir ve bu da enfeksiyon klerensini daha da bozar [ 5 ].

Klinik ortamlarda Candida üriner enfeksiyon, üriner kateterizasyonun oldukça yaygın bir komplikasyonudur [ 6 ]. Etkili bir şekilde tedavi edilmezse, bu tür bir enfeksiyon, kandidemi ile sonuçlanan mantarın kan dolaşımına yayılmasına yol açabilir [ 7 ].

Öte yandan, toplumda Candida hastalığının en sık tekrarlayan formlarından biri vulvovajinal kandidiyazdır [ 8 ]. Filamentasyon ve proteaz üretimi bu bağlamda ortak özelliklerdir ve lokal doku iltihabına katkıda bulunurlar ve bu da mikroorganizmaların kalıcılığını destekler [ 9 ]. Biyofilm oluşumunun ayrıca Candida'nın antifungal lokal ve sistemik tedavilere karşı direncini artırmada rolü olabilir [ 10 ].

Candida büyümesini kontrol etmek ve biyofilm oluşturma eğilimini inhibe etmek için alternatif ve tamamlayıcı stratejiler , mayayı yok etmenin ve vajinal veya idrar mukozasından komşu dokulara veya kan dolaşımına yayılmasını azaltmanın etkili bir yolunu temsil edebilir.

Yakın tarihli bir makalede [ 11 ], kızılcık ( Vaccinium macrocarpon ) ve idrar metabolitlerinin in vitro olarak Candida biyofilm oluşumunu engelleyebildiğini gösterdik ve kızılcık olarak kızılcık alan deneklerin idrarlarında geri kazanılan en aktif bileşikleri belirledik. gözlemlenen antifungal aktiviteden sorumlu diyet takviyesi.

Bu çalışmada, kızılcık üriner metabolitlerinin C. albicans'ın klinik suşları üzerindeki aktivitesini , genellikle referans suşlardan farklı davranarak destekledik ve en umut verici metabolitlerin olası etki mekanizmasını karakterize ettik, 5-(3', 4'-dihidroksifenil)-y-valerolakton (VAL) ve 4-hidroksibenzoik asit (4-HBA).

Git: 2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Kültür Koşulları ve Standardizasyon

Bu çalışmada kullanılan klinik C. albicans izolatları, maya enfeksiyonlarına ilişkin önceki bir ulusal araştırma sırasında toplanan suşlar arasından seçilmiştir [ 12 ]. Özellikle, bu çalışma için seçilen izolatlar genitoüriner sistem enfeksiyonlarından (8 vajinal sürüntüden ve 2 idrardan) alınmıştır. Güçlü bir biyofilm üreticisi olan referans suşu C. albicans SC5314, tüm deneylerde kontrol suşu olarak kullanılmıştır. Tüm izolatlar kullanılıncaya kadar -80 °C'de saklandı.

Biyofilm oluşumunu indüklemek için, suşlar eritildi ve bir orbital çalkalayıcıda 30 °C'de maya özütü pepton dekstroz (%1 a / h maya özü, %2 a / h pepton, %2 a / h dekstroz—YPD) et suyunda gece boyunca büyütüldü. . Hücreler santrifüj ile toplandı, iki kez soğuk fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.4) ile yıkandı ve 2 mL PBS içinde yeniden süspanse edildi. Maya hücreleri daha sonra bir hemasitometre kullanılarak sayıldı ve PBS içinde seyreltme yoluyla istenen nihai konsantrasyona ayarlandı. Nihai konsantrasyon ayrıca maya süspansiyonunun kloramfenikol ile takviye edilmiş Sabouraud dekstroz agar üzerine kaplanması ve koloni oluşturan birim (CFU) sayımı için 24 saat inkübe edilmesiyle kontrol edildi. 2.2. Biyofilm Kantifikasyonu için Kristal Menekşe Testi

C. albicans suşları, Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 ortamında ^{106 maya hücresi/mL'ye standardize edildi.}Kristal menekşe (CV) tahlili, hafif modifikasyonlarla daha önce tarif edildiği gibi [ 13 ] gerçekleştirilmiştir. Kısaca, standartlaştırılmış aşının 100 uL'si polistiren 96 oyuklu plakaların her bir oyuğuna ekildi ve yapışmayı teşvik etmek için 37 °C'de 1 saat inkübe edildi. Yapışmayan hücreler daha sonra çıkarıldı ve oyuklar ılık RPMI-1640 ile yıkandı; sonunda ortam değiştirildi ve plaka 24 saat daha inkübe edildi. 24 saatte toplam biyokütle ölçümü kristal viyole boyama (%0.1 w / v ) ile gerçekleştirilmiştir.) ve absorbans, bir EnSight mikroplaka okuyucusu (PerkinElmer) kullanılarak 540 nm'de ölçülmüştür. Her koşul için beş teknik kopya ile üç bağımsız deney yapıldı. Referans suşu C. albicans SC5314 kontrol olarak kullanıldı. Marcos-Zambrano ve ark.'na göre klinik izolatlar yüksek (+++), orta (++) ve düşük (+/-) biyofilm üreticileri olarak sınıflandırıldı. [ 14 ].

Çeşitli kızılcık metabolitlerinin önleyici etkisini değerlendirmek için, hem kızılcık alımından sonra toplanan idrar fraksiyonlarını hem de saflaştırılmış bileşikleri test ettik.

^{İdrar fraksiyonları, bir hafta boyunca günde 2 kapsül yüksek oranda standardize edilmiş kızılcık özü (Anthocran ®} , Indena SpA, Milan, İtalya) alan sağlıklı gönüllülerden elde edildi [ 11 ]. Son kapsülden 1, 2, 4, 6, 10, 12, 24 saat sonra toplanan idrar, 0.22 um filtreler üzerinde süzüldü, liyofilize edildi ve tahlil gününde RPMI-1640 içinde çözündürüldü. CV tahlilinde her fraksiyonun iki kat seyreltisi kullanıldı.

Hedeflenen yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi (MS) [ 11 ] ile idrar fraksiyonlarında saptanan aşağıdaki metabolitler Merck'ten (KGaA, Darmstadt, Almanya) satın alındı: 2-hidroksibenzoik asit, 4-hidroksibenzoik asit, 2,3-dihidroksibenzoik asit , 2,5-dihidroksibenzoik asit ve 3-(4-hidroksifenil)-propionik asitin yanı sıra Extrasynthese'den (Genay Cedex, Fransa) protokatechuik asit, kaempferol, kersetin, şırıngatin. Valerolakton standartlarının ticari olarak bulunamaması nedeniyle, laboratuvarlarımızda 5-(3',4'-dihidroksifenil)-γ-valerolakton sentezlendi [ 11 , 15]. 4-HBA ve VAL için çeşitli konsantrasyonlar (sırasıyla 3.5–36 µM ve 10–245 µM) değerlendirildi. Diğer bileşikler için 10 uM konsantrasyon kullanıldı. Bileşikler ve idrar fraksiyonları, yapışma fazında (yani tohumlama sırasında) ve daha sonra 1 saatte yıkama adımından sonra tekrar eklendi. 2.3. XTT Azaltma Deneyi

Farklı bileşiklerle muamele edilmiş maya hücrelerinin metabolik aktivitesindeki (yani hücre canlılığı) değişiklikler, 2,3-bis(2-metoksi-4-nitro-5-sülfofenil)-2H-tetrazolyum-5-karboksanilid kullanılarak değerlendirildi. 96 oyuklu bir plakada iç tuz (XTT) indirgeme deneyi [ 16 ]. Kısaca, aşı, 37 °C'de YPD'de gece boyunca biyofilm büyümesini indükleyerek ve CV tahlili için tarif edildiği gibi RPMI-1640'ta maya hücrelerinin (105 maya hücresi/çukur) ^{tohumlanmasıyla yukarıda tarif edildiği gibi hazırlandı.}24 saatte kültür ortamı çıkarıldı, biyofilmler PBS ile dikkatlice yıkandı ve her bir oyuğa 100 uL taze hazırlanmış XTT çözeltisi ilave edildi. Plaka, karanlıkta 37 °C'de 2 saat inkübe edildi. Kolorimetrik değişiklikler, EnSight mikroplaka okuyucu ile 450 nm'de 620 nm'lik bir referans tarama ile okundu. 2.4. Hücre Yüzeyi Hidrofobiklik Testi

^{Anthocran ®} metabolitlerinin C. albicans hücre yüzeyi hidrofobikliği (CSH) üzerindeki etkisini belirlemek için hücrelerin bir hidrokarbon kaynağına (Octane, Sigma-Aldrich, Milan, İtalya) yapışma yeteneği ölçüldü. Kısaca, referans suşu C. albicans SC5314, tek başına RPMI-1640 içinde yörüngesel çalkalama altında YPD'de gece boyunca büyütüldü veya 0.1 mg/mL Anthocran® ile desteklendi ^., 30 uM ve 245 uM VAL ve 4-HBA 35 uM. Hücre süspansiyonları daha sonra PBS içinde 1'lik bir OD600'e seyreltildi ve 1.2 mL bir cam tüpe aktarıldı. Daha sonra 300 µL oktan eklenmiş, numuneler 3 dk vorteks ile karıştırılmış ve fazlar 30 °C'de 10 dk ayrılmaya bırakılmıştır. Sulu faz daha sonra hasat edildi ve optik yoğunluğu spektrofotometrik olarak ölçüldü. Göreceli CSH yüzdesi şu şekilde hesaplandı:
[ ( O D 600 of f c o n t r o l - O D 600 a f t e r o c t a n e ) ÷OD600off o _ _ c o n t r o l ] ×100
(1)
2.5. Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu (CLSM)

Anthocran ^® ve metabolitlerinin hiphal büyüme ve biyofilm üzerinde neden olduğu morfolojik ve yapısal değişiklikleri araştırmak için, 30 µM veya 245 µM VAL ve 0.1 mg/mL Anthocran'a 24 saat maruz kaldıktan sonra CLSM değerlendirmesi için C. albicans referans suşu SC5314 kullanıldı. ^® . Biyofilmler 24 saat boyunca 24 oyuklu bir plakanın altına yerleştirilmiş, %100 metanol ile sabitlenmiş ve %0.05 kalkoflor beyazı (Sigma-Aldrich, Milan, İtalya) ile boyanmış plastik lamellerde (Sarstedt Srl, Verona, İtalya) büyütüldü. Biyofilmlerin kalınlığı CLSM Z-taraması ile ölçülmüştür. 2.6. CaCo-2 Kültürü ve Sitotoksisite Testi

VAL ve 4-HBA sitotoksisitesi, kolorektal adenokarsinom hücre dizisi Caco-2 (ATCC ^® HTB-37™, ATCC, Manassas, VA, ABD). Bileşiklerin stok çözeltileri, dimetil sülfoksit (DMSO) içinde hazırlandı, tam ortam içinde seyreltildi (%10 fetal sığır serumu, 2 mM L-glutamin ve 1 mM sodyum piruvat ile takviye edilmiş Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamı) ve 0.22 um filtrelerde süzüldü. Test edilen konsantrasyonlar, VAL için 245, 100, 30, 10 uM ve 4-HBA için 36, 18, 3.5, 1 uM idi. DMSO %0.1 (seyreltmelerdeki en yüksek konsantrasyon) kontrol olarak ilave edildi. Kısaca 1 × 10 ⁴Caco-2 hücreleri/çukur, 96 oyuklu bir plakaya ekildi ve 24 saat boyunca VAL ve 4-HBA'nın seri dilüsyonları ile işlendi. Daha sonra her kuyucuğa MTT solüsyonu (0.5 mg/mL) eklendi ve 3-4 saat inkübe edildi. Formazan kristalleri 100 uL/kuyu lizis tamponu (DMSO içinde 8 mM HCl ve %0.5 NP-40) ile çözündürüldü ve bir mikroplaka okuyucuda (Power Wave HT, Biotek, Bad Friedrichshall, Almanya) 575 nm'de absorbans ölçüldü. Hücre canlılığı aşağıdaki formülle hesaplandı:
% C e l l v ben a b ben l ben t y = ( a b s o r b a n c es s a m p le ÷ a b s o r b a n c e c o n t r o l ) × 100 _
(2)

Her koşul için dört teknik kopya ile üç bağımsız deney yapıldı. 2.7. Gen İfadesi Analizi

RNA, C. albicans SC5314 kültüründen iki farklı zaman noktasında (RPMI-1640'ta biyofilm indüksiyonundan 4 saat, 24 saat sonra) izole edildi. ^{RNA ekstraksiyonu, 1 mL TRI Reagent ®} ile yapışık maya hücreleri hasat edilerek gerçekleştirildi.(Sigma-Aldrich), tam bir mantar hücre duvarı yırtılmasına izin vermek için birkaç modifikasyon ve artan RNA geri kazanımı ile. Kısaca, her numuneye 200 mg cam boncuk (106 µm, Sigma-Aldrich) ilave edildi, bir doku parçalayıcıda (Qiagen, Hilden, Almanya) maksimum hızda 3 dakika kuvvetlice karıştırıldı ve numuneleri korumak için hemen buza kondu. ısıtmadan. Bu adım üç kez tekrarlandı. Boncuklar santrifüjleme ile çıkarıldı ve mantar hücre duvarının tamamen yırtılmasına izin vermek için 200 μL asit fenol ilave edildi. Her numuneye 200 µL kloroform eklenerek sulu faz elde edildi. 500 μL izopropanol eklendikten ve vorteksle karıştırıldıktan sonra, %95 etanol ile yıkanan ve 30 μL DNase–RNase içermeyen suda çözülen RNA peletlerini elde etmek için örnekler santrifüjlendi. RNA ekstraktlarının saflığı ve konsantrasyonu, bir NanoDrop 2000 spektrofotometresi (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, ABD) ile ölçüldü ve cDNA, yüksek kapasiteli RNA-cDNA kiti (Applied Biosystems, Foster City, CA, ABD) ile yapıldı. , üreticinin talimatlarına göre. Reaksiyon karışımı, TB Green Premix Ex Taq/ROX qPCR ana karışımı (Takara Bio Europe SAS, Saint-Germain-en-Laye, Fransa) ve aşağıdaki primerler kullanılarak hazırlandı: HWP1 (5′-TGCTATGCTTATTACATGTTATC-3' ve 5 '-GAGCTTCTTCTGTTTCACCTTGAC-3'); ALS3 (5'-CAACTTGGGTTATTGAAACAAAAACA-3' ve 5'-AGAAACAGAAACCCAAGAACAACCT-3'); IMH3 (5′-TATTCATATGGCATTATTGGGTGGTA-3′ ve 5′-AACCATTTCTGCTTGTTCTTCCAGA-3). üreticinin talimatlarına göre. Reaksiyon karışımı, TB Green Premix Ex Taq/ROX qPCR ana karışımı (Takara Bio Europe SAS, Saint-Germain-en-Laye, Fransa) ve aşağıdaki primerler kullanılarak hazırlandı: HWP1 (5′-TGCTATGCTTATTACATGTTATC-3' ve 5 '-GAGCTTCTTCTGTTTCACCTTGAC-3'); ALS3 (5'-CAACTTGGGTTATTGAAACAAAAACA-3' ve 5'-AGAAACAGAAACCCAAGAACAACCT-3'); IMH3 (5′-TATTCATATGGCATTATTGGGTGGTA-3′ ve 5′-AACCATTTCTGCTTGTTCTTCCAGA-3). üreticinin talimatlarına göre. Reaksiyon karışımı, TB Green Premix Ex Taq/ROX qPCR ana karışımı (Takara Bio Europe SAS, Saint-Germain-en-Laye, Fransa) ve aşağıdaki primerler kullanılarak hazırlandı: HWP1 (5′-TGCTATGCTTATTACATGTTATC-3' ve 5 '-GAGCTTCTTCTGTTTCACCTTGAC-3'); ALS3 (5'-CAACTTGGGTTATTGAAACAAAAACA-3' ve 5'-AGAAACAGAAACCCAAGAACAACCT-3'); IMH3 (5′-TATTCATATGGCATTATTGGGTGGTA-3′ ve 5′-AACCATTTCTGCTTGTTCTTCCAGA-3).

Reaksiyon, bir StepOne Plus gerçek zamanlı PCR sistem termocycler'ında (Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) gerçekleştirildi. Göreceli ekspresyon seviyeleri, normalizasyon için temizlik geni IMH3 kullanılarak ΔΔCt yöntemi kullanılarak hesaplandı. Numuneler üç kopya halinde çalıştırıldı ve üç bağımsız deney yapıldı. 2.8. İstatistiksel analiz

İstatistiksel analizler GraphPad Prism 7.0e (GraphPad yazılımı, La Jolla, CA, ABD) tarafından yapıldı. Biyofilm ölçümleri için, deney gruplarının karşılaştırılmasında parametrik olmayan Mann-Whitney U testi kullanıldı. Nicel RT-PCR deneyleri için veriler, iki kuyruklu bir t -testi uygulanarak istatistiksel olarak analiz edildi . Tüm analizlerde p < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Git: 3. Sonuçlar

3.1. C. albicans Klinik Suşunun Biyofilm Oluşumunun İdrar Fraksiyonları Tarafından İnhibisyonu

C. albicans'ın yüksek derecede suşa bağımlı biyofilm oluşturma eğilimi nedeniyle , ilk önce seçilen klinik izolatları biyokütle üretimi için CV tahlili ile kontrol ettik. Test edilen izolatlardan beşi güçlü üreticilerle sonuçlanırken, beşi düşük biyofilm üreticileriydi (tablo 1). tablo 1

Çalışmada kullanılan klinik izolatlar ve biyofilm oluşturma yeteneği.

SC5314	c. albicans	referans gerinim	+++
g11	c. albicans	Vajinal sürüntü	+++
g23	c. albicans	Vajinal sürüntü	++
g29	c. albicans	Vajinal sürüntü	+++
g35	c. albicans	Vajinal sürüntü	++
g44	c. albicans	Vajinal sürüntü	+++
g49	c. albicans	Vajinal sürüntü	+/-
g67	c. albicans	Vajinal sürüntü	++
g69	c. albicans	İdrar yolu enfeksiyonu	+++
g14	c. albicans	İdrar yolu enfeksiyonu	+++
g53	c. albicans	İdrar yolu enfeksiyonu	+++

Ayrı bir pencerede aç
* yüksek (+++), orta (++) ve düşük (+) biyofilm üreticileri, 540 nm'de aşağıdaki kristal viyole absorbans değerlerine göre belirlendi: +++ > 1.17; ++ = 0.44 – 1.17; +/− < 0,44 [ 14 ].

^{Anthocran ®} alan sağlıklı donörlerden çeşitli zaman noktalarında toplanan idrar fraksiyonları daha sonra biyofilm oluşumunu engelleme yetenekleri açısından test edildi. Önceki çalışmada gözlemlendiği gibi, referans C. albicans suşu SC5314 [ 11 ] üzerinde, son hap alımından 12 saat sonra toplanan idrar fraksiyonu, daha yüksek biyokütle üretimi inhibisyonu ile sonuçlanmıştır (Şekil 1A), biyofilm içinde maya hücresi canlılığında bir azalma ile birlikte (Şekil 1B). ^{Daha önce rapor edilene benzer şekilde, Anthocran ®} takviyesinden önce toplanan idrar , deney protokolüne göre RPMI ortamında 1:2 seyreltildiğinde klinik izolat biyofilmlerinde önemli bir inhibisyonla sonuçlanmadı [ 11 ].

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g001.jpg

Şekil 1
On C. albicans klinik izolat biyofilmine (siyah çubuk) karşı Anthocran ^® aktivitesi (0.1 mg/mL) ve idrar fraksiyonları . Çubuk grafikler, tüm klinik izolatların ortalama absorbansını gösterir ve hata çubukları standart sapmalardır. ( A ) Biyofilm biyokütle azalmasını değerlendirmek için kristal menekşe tahlili kullanıldı. ( B ) XTT tahlili, biyofilm metabolik aktivitesindeki azalmayı ölçmek için kullanıldı. Üç bağımsız deneyden elde edilen veriler rapor edilir. Önemli farklılıklar * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, **** p < 0.0001, Mann–Whitney U testi ile gösterilir. 3.2. C. albicans Biyofilm Oluşumuna Karşı Kızılcık Metabolitleri Aktivitesi

Hedef bir yaklaşıma dayanan MS kalitatif analizi, aktif idrar fraksiyonlarında birkaç artmış metabolitin altını çizdi [ 11 ]. Bu nedenle, bu metabolitlerin (10 μM) C. albicans SC5314 biyofilmine karşı doğrudan etkisini test ettik . Bunlar arasında 4-HBA, biyofilm biyokütle üretimini engellemede en aktif olarak sonuçlandı.şekil 2). Anthocran ^® oral alımından sonra, 4-HBA'nın in vivo konsantrasyonları 2.51 (± 1.44) μM ile 23.84 (± 14.69) μM arasında değişmiş ve en aktif idrar fraksiyonunda (U-12 saat) 3.71 (± 2.07) μM'ye ulaşmıştır. .

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g002.jpg

şekil 2
C. albicans SC5314 üzerinde hedeflenen MS analizi ile tanımlanan metabolitlerin (10 μM) aktivitesi. Biyofilm biyokütle azalmasını değerlendirmek için kristal menekşe tahlili kullanıldı. Çubuklar, üç bağımsız deneyin ortalama değerlerini (± SD) temsil eder. Önemli farklılıklar * p < 0.05, *** p < 0.001, Mann–Whitney U testi ile gösterilir.

Aktif idrar fraksiyonlarının hedeflenmemiş MS analizi, literatürde daha önce bildirilmemiş bir bulgu olan valerolakton/valerik asit türevlerinde bir zenginleşmeyi ortaya çıkardı [ 11 ]. Özellikle, en aktif fraksiyon (U-12 h), 5-(3',4'-dihidroksifenil)-y-valerolaktonun yüksek konsantrasyonlarının (245.24 ± 143.59 uM) varlığı ile karakterize edildi.

Hem hedeflenen hem de hedeflenmeyen kütle spektrometrisi sonuçlarının ışığında, çeşitli 4-HBA konsantrasyonlarının aktivitesini araştırdık (Figür 3A), hedeflenen MS analizinden en aktif bileşik ve VAL (Figür 3B) C. albicans klinik izolatları üzerinde ve biyofilm oluşumunun doza bağlı inhibisyonunu gösterdik (CV tahlili). Ayrıca 4-HBA, klinik izolatların biyofilm oluşumunu sadece aktif üriner fraksiyonda gözlenenlere eşit (3.5 μM) konsantrasyonlarda önemli ölçüde inhibe etti; gerçekten, 18 μM konsantrasyonu, bazı izolatları inhibe eden ve diğerlerini etkilemeyen iki modlu bir yanıtla sonuçlandı (Figür 3A). VAL aktivitesi, 30 μM'den başlayarak daha belirgin ve doza bağlı bir yanıt gösterdi (Figür 3B), yani aktif olmayan idrar fraksiyonlarında geri kazanılan ortalama VAL konsantrasyonu. Test edilen tüm dozlar, biyoyararlı metabolitlerin aktivitesini doğrulamak için in vivo çalışmada bulunan aralıklarda tutuldu.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g003.jpg

Figür 3
C. albicans'ın klinik inhibisyonu, farklı konsantrasyonlarda ( A ) 4-hidroksibenzoik asit (4-HBA) ve ( B ) 5-(3',4'-dihidroksifenil)-γ-valerolakton (VAL) varlığında biyofilm oluşumunu izole eder. ). Sonuçlar, yatay çubukların ortalama ve dikey çubukların standart sapmayı gösterdiği bir dağılım grafiği olarak gösterilir. Önemli farklılıklar * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, Mann–Whitney U testi ile gösterilir.

VAL ve 4-HBA ile biyofilm modifikasyonu hakkında hücre morfolojisi, biyofilm mimarisi ve kalınlık açısından bilgi edinmek için plastik lamellerde büyütülen biyofilmlerin konfokal mikroskopi görüntülerini analiz ettik (Şekil 4). Hem 4-HBA hem de VAL biyofilm kalınlığını azalttı (sırasıyla yaklaşık %41 ve %63). Test edilen konsantrasyonlar, doza bağımlı bir testin (biyofilm biyokütlesinin inhibe edilmesinde en aktif olan) sonuçlarına göre seçilmiştir.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g004.jpg

Şekil 4
C. albicans SC5314 biyofilmlerinin ( A ) 4-HBA (3.5 μM,) ( B ) VAL (245 μM), ( C ) ve Anthocran ^® (0.1 mg/mL) varlığında kontrole kıyasla görselleştirilmesi. Kalınlık, alet yazılımı kullanılarak z-taraması ile ölçülmüştür. 3.3. 4-HBA ve VAL Bağırsak Hücrelerinde Sitotoksisite

Test edilen konsantrasyonların idrarda tanımlananlara yakın olmasına rağmen, in vitro olarak VAL ve 4-HBA'nın bağırsak hücreleri üzerinde toksik etkiler gösterip gösteremeyeceğini değerlendirdik. Böylece Caco-2 hücrelerini ve MTT tahlilini kullanarak bir sitotoksisite testi uyguladık. Hem 4-HBA hem de VAL'nin dört farklı konsantrasyonuyla tedaviden sonra hücre canlılığını ölçtük. Değerlendirilen konsantrasyonların hiçbiri hücre canlılığında bir azalmaya neden olmadı (Şekil 5).

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g005.jpg

Şekil 5
4-HBA ve VAL sitotoksisite testi. Veriler, tek yönlü ANOVA ile karşılaştırıldığında dört kopya halinde gerçekleştirilen üç farklı deneyin ortalama ± SD'sini temsil eder. Kontrol: işlenmemiş hücreler; araç: DMSO %0.1. 3.4. 4-HBA ve VAL İnhibitör Aktivitesi Candida Yapışması Üzerinde

Kızılcık metabolitlerinin önleyici etkisinin olası mekanizmasını aydınlatmak için hücre yüzeyi hidrofobisitesindeki (CSH) olası değişiklikleri araştırdık. C. albicans SC5314, bütün kızılcık özütü (0.1 mg/mL), VAL ve 4-HBA varlığında/yokluğunda planktonik veya sapsız (biyofilm) formda kültürlendi (Şekil 6). Biyofilm büyümesi, planktonik hücrelere kıyasla CSH'de çarpıcı bir artışla sonuçlandı (sırasıyla %99 ve %35). Bütün kızılcık özütü biyofilm hidrofobikliğini azaltırken ( p = 0.0042) ve tek başına VAL ve 4-HBA, maya yüzeyi hidrofobikliğini önemli ölçüde değiştirmedi.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g006.jpg

Şekil 6
Hücre yüzeyi hidrofobikliği (CSH), yalnızca 4-HBA (3,5 μM) ve VAL (30 ve 245 μM) tarafından değiştirilmezken, Anthocran® ^0,1 mg/mL maya yüzeyi hidrofobikliğini önemli ölçüde etkiler. Veriler, üç bağımsız deneyin ortalama ± SD'sini temsil ediyordu. Veri setleri tek yönlü ANOVA ile karşılaştırıldı, ** p < 0.01.

Daha sonra C. albicans biyofilm oluşumunun ilk aşamalarında yer alan proteinleri kodlayan genlerin ekspresyonunu değerlendirdik . Özellikle, hem yapışma hem de filamentasyon ile ilgili olan HWP1 ve ALS3 genlerinin ekspresyonunu inceledik. Da gösterildiği gibiŞekil 7, biyofilm indüksiyonundan 4 saat sonra, her iki gen , kontrollere kıyasla VAL ve 4-HBA (ayrıca Anthocran® tarafından) ile tedavi edilen C. albicans SC5314'te ^aşağıregüle edildi . 24 saatte, HWP1 ve ALS3 gen ekspresyonunda aşağı regülasyon gözlenmedi; bu, her iki transkriptin biyofilm oluşumunun erken evrelerinde rapor edilen katılımıyla aynı doğrultudadır.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı mikroorganizmalardır-09-01492-g007.jpg

Şekil 7
Kızılcık metabolitleri ile C. albicans gen ekspresyonunun modülasyonu . C. albicans SC5314, iki VAL (30 uM ve 245 uM) ve 4-HBA (3.5 uM) konsantrasyonunun varlığında/yokluğunda biyofilm oluşturmak üzere indüklendi. 4. saatte, hem HWP1 hem de ALS3 genleri, VAL veya 4-HBA tarafından önemli ölçüde aşağı regüle edildi (* p < 0.05; ** p < 0.01). 24 saatte modülatör etki kayboldu ve özellikle VAL 245 uM ile paradoksal bir etki, yani yukarı regülasyon gözlemlendi (# p < 0.05). Veriler, üç kopya halinde gerçekleştirilen üç farklı deneyin ortalama ± SD'sini temsil eder.

Git: 4. Tartışma

Bu çalışmada rapor edilen sonuçlar, insan idrarında proantosiyanidinler (PAC'ler) dışındaki kızılcık metabolitlerini yüksek oranda standardize edilmiş kızılcık özü oral alımı üzerine tanımlayan önceki bir çalışmaya dayanmaktadır [ 11 ]. Kızılcıkların yapışma önleyici özellikleri, esas olarak idrar yolu enfeksiyonlarının (İYE'ler) yaklaşık %80'inden sorumlu olan önde gelen üropatojenik ajanı temsil eden Escherichia coli ile ilgili olarak uzun süredir bildirilmiştir [ 17 , 18 , 19 ] .

Kızılcık ürünlerinin aktivitesi esas olarak PAC'lere atfedilse de, analiz edilen idrar fraksiyonlarında ne A tipi ne de B tipi PAC'leri geri kazanamadık. İdrarda PAC atılımı ile ilgili literatür verileri hala tartışmalıdır. Verilerimiz, insan idrarında bu polifenol sınıfını, özellikle prosiyanidin A2'yi [ 20 , 21 ] tanımlayamayan diğer raporlarla uyumludur, diğer çalışmalar idrarda düşük konsantrasyonlarda PAC'lerin saptanabilir olduğunu gösterse bile [ 22 , 23 ] ].

Abiyotik yüzeylerde (yani polistiren) C. albicans yapışmasını ve biyofilm oluşumunu azaltmada kızılcık, hem ham özü hem de idrar metabolitlerinin oral alım üzerine etkisini değerlendirdik . Gerçekten de Candida spp. hastane ortamında kateterle ilişkili İYE'lerin yüksek bir yüzdesinden sorumludurlar, bu da etkin bir şekilde tedavi edilmezse sonunda kan dolaşımı invazyonuna yol açabilir [ 24 ]. Candida spp. ve özellikle C. albicans , kalıcı cihazlarda biyofilm geliştirmeye eğilimlidir [ 25] bu mantara kolonileşmek ve daha derin alanlara giriş yolu olarak kullanmak için yeni nişler sunuyor. Biyofilmle kolonize tıbbi cihazlardan kaynaklanan enfeksiyon yükünü azaltmak için, biyomateryalleri kaplamak veya işlevselleştirmek için yapışma önleyici özelliklere sahip bileşiklerin kullanımı da araştırılmaktadır [ 26 , 27 ]. Genitoüriner enfeksiyonlar arasında, Candida ayrıca üreme çağındaki kadınların yüksek bir yüzdesini etkileyen vulvovajinitin yaygın bir etiyolojik ajanıdır [ 28 ]. Vulvovajinal kandidiyazis sıklıkla hastanın yaşam kalitesini dramatik olarak etkileyen tekrarlayan bir hastalık şeklinde gelişir [ 28 ].

Candida inatçı enfeksiyonları, bir maya formundan filamentli bir morfolojiye geçebilen, mantarın yapışma ve bağışıklıktan kaçmasına yardımcı olan suşlar ve biyofilm üreticileri tarafından sürdürülür [ 3 ]. Bu virülans faktörlerinin patofizyolojideki ve enfeksiyonun sonucundaki yüksek etkisi nedeniyle, adezyon, filamentasyon ve biyofilm oluşumunu ele alan terapötik bir yaklaşım şiddetle arzu edilir.

Kızılcık özütünün, özellikle PAC'lerin, in vitro Candida yapışmasını, büyümesini ve biyofilm oluşumunu engellediği bildirilmiştir [ 29 , 30 ]; ancak insan idrarındaki varlığı hala bir tartışma konusudur. Bu nedenle, idrar kaynaklı metabolitlerin gözlenen inhibe edici etkileri sürdürüp sürdüremeyeceğini düşündük. Candida'yı inhibe etmede en aktif üriner fraksiyondan başlayarak , yani son kapsül alımından 12 saat sonra, bu fraksiyonlarda zirve yapan metabolitlerin kendi başına anti-biyofilm etkilerini açıklayıp açıklayamayacağını araştırdık.

Tanımlanan birkaç metabolit arasında, aşağıdaki ikisi C. albicans virülans modülasyonunda en umut verici olanı olarak sonuçlandı : 5-(3',4'-dihidroksi fenil)-gama-valerolakton ve 4-hidroksibenzoik asit. Valerolakton türevleri, üriner kızılcık metabolitlerini araştıran yazarlar tarafından zaten rapor edilmiştir [ 31 , 32 ]; ^{bununla birlikte, muhtemelen Anthocran ®} formülasyonundaki yüksek konsantrasyonlu PAC miktarı nedeniyle , 12 saatte idrar fraksiyonları özellikle valerolaktonlarda zenginleştirilmiştir.

Yakın zamanda yapılan bir çalışma, valerolaktonların ve bunların konjugatlarının E. coli [ 32 ] yapışmasını önleyebildiğini göstererek, inhibitör aktivitenin sadece tam PAC'lerden değil, aynı zamanda türetilmiş metabolitlerden de kaynaklandığını doğrulamaktadır.

VAL, idrar fraksiyonlarında bulunan konsantrasyonda , muhtemelen tüm biyofilm yapısının stabilitesini etkileyerek, C. albicans biyofilm biyokütlesini ve kalınlığını azaltmada etkiliydi. Birçok doğal bileşik [ 33 ] anti- Candida etkileri için araştırılmıştır , ancak bunların birçoğu için in vitro belirlenen minimum inhibitör konsantrasyon (MIC) makul değerlerin ötesindedir ve bu nedenle muhtemelen in vivo olarak etkisizdir. Zida ve çalışma arkadaşları [ 33 ] sadece MIC değerleri 1 mg/mL'nin altında olan bileşiklerin ileri analizler için dikkate değer olduğunu öne sürdüler.

Özellikle, değerlendirilen daha yüksek doz sırasıyla 245 μM (0,05 mg/mL) ve 3.5 μM (0,0005 mg/mL) olduğundan, çalışmamızda test edilen hem VAL hem de 4-HBA konsantrasyonları önerilen kesme MİK değerinin çok altındadır. .

Doğal bileşiklerle ilgili diğer bir konu da, tam etki mekanizmasının genellikle bilinmemesidir. Olası mekanizma hakkında bazı bilgiler edinmek için, biyofilm oluşumunda aşağıdaki iki önemli özelliği değerlendirdik: Candida hücre duvarının modifikasyonları, yani hücre yüzeyi hidrofobikliği ve biyofilm oluşumunda doğrudan yer alan genlerin ifadesi. Candida'nın planktonik yaşam tarzından sabit yaşam tarzına geçişinin, hücre duvarındaki önemli değişikliklerin yanında olduğu gösterilmiştir [ 34 ]. Gerçekten de, mantar hücre duvarı mimarisi, sapsız ve planktonik hücreler arasında ve özellikle C. albicans için , filamentli ve maya formları arasında [ 35 ] çarpıcı biçimde değişir .]. Karbonhidrat ve protein bileşimindeki varyasyonlar hücre yüzeyi hidrofobikliğini etkiler, bu da sırayla yüzeylere, özellikle abiyotik substratlara ilk yapışmayı düzenler [ 36 ]. Ayrıca, hidrofobiklik ile biyofilm biyokütlesi arasında pozitif bir korelasyon gözlendi [ 37 ]. Bu nedenle, hücre yüzeyi hidrofobikliği, hücre tutunması için substrat ile spesifik olmayan etkileşimlere aracılık ettiği için biyofilm oluşturmak için bir suş eğilimi için olası bir işaret olarak önerilmiştir [ 37 , 38 ].

Sadece Anthocran®'ın C. albicans hücre duvarı hidrofobikliğini önemli ölçüde azaltabildiğini gösterdik , bu da VAL ve 4- ^HBA'nın gözlemlenen inhibitör etkisinin başka mekanizmalardan kaynaklanabileceğini düşündürdü.

Moleküler bir bakış açısından, yüzey yapışmasına Als1p, Als3p, Ece1p ve Hwp1p gibi çok sayıda yüzey proteini aracılık eder [ 39 ]. Bu nedenle, kızılcık metabolitlerinin, glikozil fosfatidil İnositol (GPI) bağlantılı proteinleri kodlayan iki gen olan ALS3 ve HWP1'in gen ekspresyonunu değiştirip değiştiremeyeceğini araştırdık , birbirleriyle etkileşime girdik ve abiyotik ve biyotik (konak hücre) yüzeylere yapışmayı teşvik ettik [ 40 ]. ]. Biyofilm indüksiyonundan 4 saat sonra, VAL ve 4-HBA varlığında, hem HWP1 hem de ALS3 genlerinde önemli bir aşağı modülasyon gözlemledik. Önceki çalışmalar HWP1'in kritik rolünü gösterdibiyofilm oluşumunun çok erken evrelerinde, HWP1 boş mutant hücre duvarı kıvamında ve kalınlığında dramatik değişiklikler [ 41 ] ve bir in vivo kateter modelinde yapışma kabiliyetinde azalma ile sonuçlandığından [ 40 ].

Hwp1p ayrıca C. albicans filamentasyonunda ve mukozal yüzeylere yapışmada anahtar role sahiptir [ 42 ]. C. glabrata gibi diğer Candida türleri için gösterildiği gibi, biyofilm oluşumu için filamentasyon gerekli olmasa da , psödohifa ve/veya hif varlığından yoksun bir biyofilm ile [ 43 ], C. albicans'ın filamentli formları üç boyutlu görüntüyü stabilize eder. biyofilmin yapısını ve ayrılmaya karşı direncini arttırır [ 44 ]. ALS3 ve HWP1 üzerindeki VAL ve 4-HBA inhibitör aktivitesi , biyofilm oluşum süreci içindeki ekspresyonlarının erken gelişimi ile uyumlu olarak 24 saatte doğrulanmadı.

Sonuçlarımız, kızılcık ve/veya VAL ve 4-HBA'nın biyofilm oluşumunun çok erken evrelerini hedeflemek için önleyici yaklaşımlar arasında kabul edilebileceğini göstermektedir.

VAL ve 4-HBA protein hedefini ve bunların olgun Candida biyofilmlerine karşı olası inhibitör aktivitelerini açıklamayı amaçlayan ileri araştırmalar, mantar enfeksiyonlarını tedavi etmek için VAL ve 4-HBA'nın olası kullanımı hakkında kapsamlı bir resim sağlayacaktır.

Git: Teşekkür

Milano Üniversitesi'nden Raffaella Adami'ye ve eş odaklı lazer mikroskopi yardımı için UNITEC NOLIMITS platformuna ve APC girişiminin yayınını desteklediği için Milano Üniversitesi'ne teşekkür ederiz.

Git: Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma, EB ve GA; metodoloji, EB ve EO; resmi analiz, EO, GB ve EB; VAL, AA ve LF sentezi; soruşturma, EO, EAC, GB ve JL; kaynaklar, EB; veri iyileştirme, EB ve EO; yazma—orijinal taslak hazırlama, EO ve EB; yazma—inceleme ve düzenleme, GA, GB, LF; fon alımı, GA ve EB Tüm yazarlar, makalenin yayınlanan versiyonunu okudu ve kabul etti.

Git: Finansman

Araştırma, UNIMI ve Indena (PI olarak EB) arasında 2017 yılında imzalanan “ Candida albicans'a karşı Vaccinium macrocarpon inhibitör activity ” başlıklı bir araştırma sözleşmesi (CTE_NAZPR17EBORG_01) ve Moleküler ve Çeviri Tıbbı Doktora Üniversitesi tarafından kısmen desteklenmiştir. EA).

Git: Kurumsal İnceleme Kurulu Açıklaması

Çalışma, 2013 Helsinki Deklarasyonu'nda belirlenen ve Milano Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylanan etik standartlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir (18 Aralık 2018, ref. 57/18).

Git: Bilgilendirilmiş Onam Beyanı

Tüm katılımcılar bilgilendirilmiş onam formu imzaladı.

Git: Veri Kullanılabilirlik Bildirimi

Çalışma, www.isrctn.org adresinde ISRCTN32556347 olarak kaydedildi.

Git: Çıkar çatışmaları

Ortak yazarlar olarak listelenen akademik araştırmacıların hiçbiri Indena'ya danışman olarak hizmet etmemiş veya herhangi bir kişisel tazminat almamıştır.

Git: Dipnotlar

Yayıncının Notu: MDPI, yayınlanmış haritalarda ve kurumsal bağlantılarda yargı yetkisi iddiaları konusunda tarafsız kalır.

Git: Referanslar

1. d'Enfert C., Kaune A.-K., Alaban L.-R., Chakraborty S., Cole N., Delavy M., Kosmala D., Marsaux B., Fróis-Martins R., Morelli M ., et al. Mantar-Konak-Mikrobiyota Etkileşiminin Candida Albicans Enfeksiyonları Üzerindeki Etkisi: Güncel Bilgi ve Yeni Perspektifler. FEMS Mikrobiyol. Rev. 2020 doi: 10.1093/femsre/fuaa060. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Romani L. Mantar Enfeksiyonlarına Karşı Bağışıklık. Nat. Rev. İmmünol. 2004; 4 :11–24. doi: 10.1038/nri1255. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
3. Mayer FL, Wilson D., Hube B. Candida Albicans Patojenite Mekanizmaları. Virülans. 2013; 4 :119–128. doi: 10.4161/viru.22913. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Altomare A., Baron G., Brioschi M., Longoni M., Butti R., Valvassori E., Tremoli E., Carini M., Agostoni P., Vistoli G., et al. N-Asetil-Sistein, Bir Tiyol-Disülfid Kırma Mekanizması ile Albümin Cys34'ü Yeniler: Hücre Dışı Antioksidan Aktivitesinin Bir Açıklaması. Antioksidanlar. 2020; 9 :367. doi: 10.3390/antiox9050367. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Calderone RA, Fonzi WA Candida Albicans'ın Virülans Faktörleri. Trendler Mikrobiyol. 2001; 9 :327–335. doi: 10.1016/S0966-842X(01)02094-7. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Fisher JF, Kavanagh K., Sobel JD, Kauffman CA, Newman CA Candida İdrar Yolu Enfeksiyonu: Patogenez. Klinik. Bulaş. Dis. 2011; 52 :S437–S451. doi: 10.1093/cid/cir110. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
7. Raja NS Epidemiyolojisi, Risk Faktörleri, Tedavi ve Sonuçları Candida Albicans ve Candida Non-Albicans Nedeniyle Birleşik Krallık'taki İki Bölge Genel Hastanesinde. Int. J. Clin. Pratik yapın. 2021; 75 :e13655. doi: 10.1111/ijcp.13655. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Gonçalves B., Ferreira C., Alves CT, Henriques M., Azeredo J., Silva S. Vulvovajinal Kandidiyaz: Epidemiyoloji, Mikrobiyoloji ve Risk Faktörleri. Krit. Rev. Mikrobiyol. 2016; 42 :905-927. doi: 10.3109/1040841X.2015.1091805. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
9. Roselletti E., Monari C., Sabbatini S., Perito S., Vecchiarelli A., Sobel JD, Cassone A. A Role for Maya/Pseudohyphal Cells of Candida albicans , Akut Olan Kadınlarda NLRP3 İnflamasom İndükleyicilerinin İlişkili İfadesinde Vulvovajinal Kandidiyaz. Ön. Mikrobiyol. 2019; 10 :2669. doi: 10.3389/fmicb.2019.02669. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
10. Sobel JD Tekrarlayan Vulvovajinal Kandidiyaz. Ben. J. Obstet. Jinekol. 2016; 214 :15-21. doi: 10.1016/j.ajog.2015.06.067. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Baron G., Altomare A., Regazzoni L., Fumagalli L., Artasensi A., Borghi E., Ottaviano E., Del Bo C., Riso P., Allegrini P., et al. İnsan İdrarında Vaccinium Macrocarpon Bileşenlerinin ve Metabolitlerinin Profillenmesi ve Candida albicans Yapışma ve Biyofilm Oluşumu Üzerinde İdrar Ex-Vivo Etkisi. Biyokimya. farmakol. 2020; 173 :113726. doi: 10.1016/j.bcp.2019.113726. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Morace G., Polonelli L. GISIA Grubu. Klinik Maya İzolatlarına Karşı Vorikonazol Aktivitesi: Çok Merkezli Bir İtalyan Çalışması. Int. J. Antimikrobiyal. Ajanlar. 2005; 26 :247–253. doi: 10.1016/j.ijantimicag.2005.06.005. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Sherry L., Rajendran R., Lappin DF, Borghi E., Perdoni F., Falleni M., Tosi D., Smith K., Williams C., Jones B., et al. Candida Albicans Kan Akışı İzolatları Tarafından Oluşturulan Biyofilmler, Direnç ve Patojenite ile İlişkili Fenotipik ve Transkripsiyonel Heterojenlik Gösterir. BMC Mikrobiyol. 2014; 14 :182. doi: 10.1186/1471-2180-14-182. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
14. Marcos-Zambrano LJ, Escribano P., Bouza E., Gine J. Candida ve Candida Olmayan Spp. Tarafından Biyofilm Üretimi. Fungemiye Neden Olan İzolatlar: Biyokütle Üretimi ile Metabolik Aktivitenin Karşılaştırılması ve Kesme Noktalarının Gelişimi. Int. J. Med. Mikrobiyol. 2014; 304 :1192–1198. doi: 10.1016/j.ijmm.2014.08.012. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Artasensi A., Baron G., Vistoli G., Aldini G., Fumagalli L. (Z)-5-(3',4'-Bis(benziloksi)benziliden)furan-2(5H)-Bir. Molbank. 2021; 2021 :M1193. doi: 10.3390/M1193. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
16. Pierce CG, Uppuluri P., Tristan AR, Wormley FL, Jr. Fungal Biyofilmlerin Oluşumu için Basit ve Tekrarlanabilir 96-Kuyucuklu Plaka Tabanlı Bir Yöntem ve Antifungal Duyarlılık Testine Uygulanması. Nat. Protokol 2008; 3 :1494–1500. doi: 10.1038/nprot.2008.141. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Peron G., Sut S., Pellizzaro A., Brun P., Voinovich D., Castagliuolo I., Dall'Acqua S. The Cranberry Phytocomplex'in Yapışma Önleyici Aktivitesi Metabolomikler Tarafından İncelendi: Intestinal PAC-A Metabolites, ancak Intakt PAC Değil -A Aktif İdrarlarda Üropatojenik Escherichia coli'ye karşı Belirteçler Olarak Tanımlanmıştır . Fitoterapi. 2017; 122 :67-75. doi: 10.1016/j.fitote.2017.08.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Ermel G., Georgeault S., Inisan C., Besnard M. Üropatojenik Escherichia Coli Bakterilerinin Üroepitelyal Hücrelere Yapışmasının Kızılcık Ekstraktları ile İnhibisyonu. J. Med. Gıda. 2012; 15 :126-134. doi: 10.1089/jmf.2010.0312. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Gupta K., Chou MY, Howell A., Wobbe C., Grady R., Stapleton AE Kızılcık Ürünleri, P-Fimbriated Escherichia Coli'nin Primer Kültürlü Mesane ve Vajinal Epitel Hücrelerine Yapışmasını Engeller. J. Urol. 2007; 177 :2357–2360. doi: 10.1016/j.juro.2007.01.114. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Feliciano RP, Boeres A., Massacessi L., Istas G., Ventura MR, Nunes Dos Santos C., Heiss C., Rodriguez-Mateos A. Yeni Kızılcık Türevli Plazma ve Üriner (poli)fenollerin Tanımlanması ve Ölçülmesi . Kemer Biyokimya. Biyofiz. 2016; 599 :31-41. doi: 10.1016/j.abb.2016.01.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Iswaldi I., Arráez-Román D., Gómez-Caravaca AM, Contreras MDM, Uberos J., Segura-Carretero A., Fernández-Gutiérrez A. Kızılcık Şurubu Tüketiminden Sonra İnsan İdrarında Polifenollerin ve Metabolitlerinin Tanımlanması. Gıda Kimyası Toksikol. 2013; 55 :484-492. doi: 10.1016/j.fct.2013.01.039. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
22. McKay DL, Chen C.-YO, Zampariello CA, Blumberg JB Kızılcık Suyundaki Flavonoidler ve Fenolik Asitler Sağlıklı Yaşlı Yetişkinlerde Biyoyararlı ve Biyoaktiftir. Gıda Kimyası 2015; 168 :233–240. doi: 10.1016/j.foodchem.2014.07.062. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Walsh JM, Ren X., Zampariello C., Polasky DA, McKay DL, Blumberg JB, Chen C.-YO Tandem Kütle Spektrometrisi ile Sıvı Kromatografisi İdrar Proantosiyanin A2 Dimer Kantifikasyonu ve Kızılcık Alımının Biyobelirteç Olarak Potansiyel Kullanımı. J. Eylül Sci. 2016; 39 :342–349. doi: 10.1002/jssc.201500922. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Phua AI-H., Hon KY, Holt A., O'Callaghan M., Bihari S. Candida Evde Parenteral Beslenme Alan Hastalarda Kateterle İlişkili Kan Dolaşımı Enfeksiyonu—Oranlar, Risk Faktörleri, Sonuçlar ve Yönetim. Klinik. Nutr. ESPEN. 2019; 31 :1–9. doi: 10.1016/j.clnesp.2019.03.007. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Tsui C., Kong EF, Jabra-Rizk MA Candida Albicans Biyofilminin Patogenezi. Patog. Dis. 2016; 74 :ftw018. doi: 10.1093/femspd/ftw018. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
26. Janek T., Łukaszewicz M., Krasowska A. Arctic Bacterium Pseudomonas Fluorescens BD5 Tarafından Salgılanan Biyosurfaktan Pseudofactin II'nin Yapışma Önleyici Aktivitesi. BMC Mikrobiyol. 2012; 12:24 . doi: 10.1186/1471-2180-12-24. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Piktel E., Suprewicz Ł., Depciuch J., Chmielewska S., Skłodowski K., Daniluk T., Król G., Kołat-Brodecka P., Bijak P., Pajor-Świerzy A., et al. Tıbbi Cihazlar için Potansiyel Antimikrobiyal Yüzey Kaplamaları Olarak Nanogram Öldürme Verimliliğine Sahip Değişken Şekilli Altın Nanopartiküller. bilim 2021 ; 11 :1–20. doi: 10.1038/s41598-021-91847-3. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
28. Vicariotto F., Del Piano M., Mogna L., Mogna G. Vulvovajinal Kandidiyazdan Etkilenen Kadınlarda Yavaş Salımlı Vajinal Üründe Formüle Edilmiş 2 Probiyotik Suşlar Birliğinin Etkinliği: Bir Pilot Çalışma. J. Clin. Gastroenterol. 2012; 46 :S73–S80. doi: 10.1097/MCG.0b013e3182684d71. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Feldman M., Tanabe S., Howell A., Grenier D. Kızılcık Proantosiyanidinleri, Oral Epitel Hücreleri Tarafından Candida Albicans ve Sitokin Salgısının Yapışma Özelliklerini Engeller. BMC Tamamlayıcı. Alternatif. Med. 2012; 12 :6. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
30. Sundararajan A., Rane HS, Ramaraj T., Sena J., Howell AB, Bernardo SM, Schilkey FD, Lee SA Kızılcıktan Türetilen Proantosiyanidinler, Candida Albicans Üriner Biyofilmlerinde Farklı Bir Transkriptomik Tepki İndükler. PLoS BİR. 2018; 13 :e0201969. doi: 10.1371/journal.pone.0201969. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Ou K., Sarnoski P., Schneider KR, Song K., Khoo C., Gu L. Human Gut Microbiota tarafından Procyanidins Microbial Catabolism of Procyanidins. Mol. Nutr. Gıda Araş. 2014; 58 :2196–2205. doi: 10.1002/mnfr.201400243. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Mena P., de Llano DG, Brindani N., Esteban-Fernández A., Curti C., Moreno-Arribas MV, Del Rio D., Bartolomé B. 5-(3',4'-Dihidroksifenil)-γ -Valerolakton ve Sülfat Konjugatları, Flavan-3-Ols'un Temsili Dolaşan Metabolitleri, Mesane Epitel Hücrelerinde Üropatojenik Escherichia Coli'ye Karşı Anti-Yapışma Aktivitesi Sergiler. J. Fonksiyon. yiyecekler. 2017; 29 :275-280. doi: 10.1016/j.jff.2016.12.035. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
33. Zida A., Bamba S., Yacouba A., Ouedraogo-Traore R., Guiguemdé RT Maddeler Naturelles Aktiftir Sur Candida Albicans, Sources de Nouveaux İlaçlar Antifongiques: Revue de La Littérature. J. Mycol. Med. 2017; 27 :1–19. doi: 10.1016/j.mycmed.2016.10.002. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
34. Nett J., Lincoln L., Marchillo K., Massey R., Holoyda K., Hoff B., VanHandel M., Andes D. Candida Albicans Biyofilm Direncinde Beta-1,3 Glukanların Varsayılan Rolü. Antimikrobiyal. Ajanlar Chemother. 2007; 51 :510–520. doi: 10.1128/AAC.01056-06. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
35. Garcia-Rubio R., de Oliveira HC, Rivera J., Trevijano-Contador N. Mantar Hücre Duvarı: Candida, Cryptococcus ve Aspergillus Türleri. Ön. Mikrobiyol. 2019; 10 :2993. doi: 10.3389/fmicb.2019.02993. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
36. Yoshijima Y., Murakami K., Kayama S., Liu D., Hirota K., Ichikawa T., Miyake Y. Substrate Surface Hydrophobicity'nin Maya ve Hyphal Candida'nın Yapışması Üzerine Etkisi. Mikozlar. 2010; 53 :221–226. doi: 10.1111/j.1439-0507.2009.01694.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
37. Silva-Dias A., Miranda IM, Branco J., Monteiro-Soares M., Pina-Vaz C., Rodrigues AG Yapışma, Biyofilm Oluşumu, Hücre Yüzeyi Hidrofobikliği ve Antifungal Planktonik Duyarlılık: İlişki Arasındaki Candida Spp. Ön. Mikrobiyol. 2015; 6 :205. doi: 10.3389/fmicb.2015.00205. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
38. Borghi E., Sciota R., Biassoni C., Cirasola D., Cappelletti L., Vizzini L., Boracchi P., Morace G. Cell Surface Hydrophobicity: A Predictor of Biofilm in in Candida Isolates? J. Med. Mikrobiyol. 2011; 60 :689-690. doi: 10.1099/jmm.0.026898-0. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
39. Nobile CJ, Schneider HA, Nett JE, Sheppard DC, Filler SG, Andes DR, Mitchell AP C. albicans Biyofilm Oluşumunda Tamamlayıcı Yapıştırıcı İşlevi . Kör. Biol. 2008; 18 :1017–1024. doi: 10.1016/j.cub.2008.06.034. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
40. Nobile CJ, Nett JE, Andes DR, Mitchell AP Biyofilm Oluşumunda Candida albicans Adhesin Hwp1 Fonksiyonu. ökaryot. Hücre. 2006; 5 :1604-1610. doi: 10.1128/EC.00194-06. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
41. Orsi CF, Borghi E., Colombari B., Neglia RG, Quaglino D., Ardizzoni A., Morace G., Blasi E. Candida Albicans Hyphal Wall Protein 1 (HWP1) Genotipinin Biyofilm Üretimi ve Fungal Duyarlılık Üzerindeki Etkisi Mikrogliyal Hücreler. Mikrop. Patog. 2014; 69-70 :20-27. doi: 10.1016/j.micpath.2014.03.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
42. Staab JF, Datta K., Rhee P. Candida albicans'ın Virülansında Hyphal Wall Protein 1 için Niche-Specific Requirement . PLoS BİR. 2013; 8 :e80842. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
43. Silva S., Henriques M., Martins A., Oliveira R., Williams D., Azeredo J. Candida Olmayan Albicans Candidaspecies'in Biyofilmleri: Niceleme, Yapı ve Matris Bileşimi. Med. mikol. 2009; 47 :681–689. doi: 10.3109/13693780802549594. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
44. McCall AD, Pathirana RU, Prabhakar A., Cullen PJ, Edgerton M. Candida Albicans Biyofilm Geliştirme Kooperatif Ek ve Yapışma Bakım Proteinleri tarafından yönetilir. NPJ Biyofilm Mikrobiyomları. 2019; 5:21 . doi: 10.1038/s41522-019-0094-5. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]

***maturidi*** · 24 October 2022, 16:09

İnsan idrarındaki Vaccinium macrocarpon bileşenleri ve metabolitlerinin profili ve Candida albicans adezyonu ve biyofilm oluşumu üzerindeki ex-vivo idrar etkisi

Giovanna Baron¹, Alessandra Altomare¹, Luca Regazzoni¹, Laura Fumagalli¹, Angelica Artasensi¹, Elisa Borghi², Emerenziana Ottaviano², Cristian Del Bo³, Patrizia Riso³, Pietro Allegrini⁴, Giovanna Petrangolini⁴, paolo morazzoni⁴, antonella riva⁴, lolita arnoldi⁴, Marina Carini¹, Giancarlo Aldini⁵
üyelikler yıkılmak üyelikler

¹Eczacılık Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Luigi Mangiagalli 25, 20133 Milano, İtalya.
²Sağlık Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Di Rudinì 8, 20142 Milano, İtalya.
³Gıda, Çevre ve Beslenme Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Luigi Mangiagalli 25, 20133 Milano, İtalya.
⁴Indena SpA, Viale Ortles 12, 20139 Milano, İtalya.
⁵Eczacılık Bilimleri Bölümü, Università degli Studi di Milano, Via Luigi Mangiagalli 25, 20133 Milano, İtalya. Elektronik adres: giancarlo.aldini@unimi.it.

PMID: 31778647
DOI: 10.1016/j.bcp.2019.113726

Ücretsiz makale Soyut

Bu çalışmanın amacı, bir HPLC-MS/MS yöntemi kullanarak, oldukça standardize edilmiş bir kızılcık özütü (Anthocran®) yutulduktan sonra insan idrarında bulunan kızılcık bileşiklerinin ve metabolitlerinin profilini çıkarmaktı. Veri analizi için iki farklı strateji benimsenmiştir: hedefli ve hedefsiz bir yaklaşım. Bu stratejiler, kızılcık bileşenleri, bilinen metabolitler ve şimdiye kadar literatürde bildirilmemiş metabolitler dahil olmak üzere 42 analitin tanımlanmasına izin verdi; bunlara kızılcık tüketiminden sonra idrarda varlığı daha önce hiç tarif edilmemiş olan altı valerolakton/valerik asit türevi dahildir. 42'den fazla metabolitin 26'sının mutlak konsantrasyonları, mevcut saf standartlar kullanılarak elde edildi. Anthocran®'ın son dozundan sonra farklı zaman noktalarında toplanan idrar, C. albicans SC5314 referans suşu üzerinde test edilmiştir. biyofilm oluşturan bir suş. 12 saat sonra toplanan fraksiyonların, kontrole kıyasla adezyonu ve biyofilm oluşumunu önemli ölçüde azalttığı bulundu (p < 0.05). Daha sonra benzer bir etki, 1/3 standart kızılcık özü içeren ve kızılcık bileşenlerinin emilimini artırmak için formüle edilen Anthocran™ Phytosome™ lesitin formülasyonu kullanılarak elde edildi. Son kapsül alımından 1 saat, 6 saat ve 12 saat sonra toplanan idrar fraksiyonlarındaki kızılcık bileşenlerinin ve metabolitlerinin idrar profili daha sonra idrar fraksiyonunda bulunan konsantrasyon aralıklarında saf standartlar kullanılarak yeniden üretildi ve C üzerinde test edildi. albicans. Yalnızca 12 saatte toplanan idrar fraksiyonunu taklit eden ve ana bileşenler olarak kuersetin ve 5-(3',4') içeren karışım

Anahtar Kelimeler: Candida albicans; Kızılcık; Kütle spektrometrisi; İYE'ler; İdrar metabolitleri; Aşı macrocarpon.

Telif Hakkı © 2019 Yazarlar. Elsevier Inc. tarafından yayınlanmıştır. Tüm hakları saklıdır. benzer makaleler

***maturidi*** · 04 May 2023, 10:41

Kızılcık meyvesinden (Vaccinium macrocarpon Ait.) elde edilen proantosiyanidin açısından zengin özler, insan patojenik mantarları Candida spp.'nin büyümesini seçici olarak inhibe eder. ve Cryptococcus neoformans

Kunal D Patel¹, Frank J Scarano , Miwako Kondo , Robert AR Hurta , Catherine C. Neto
üyelikler yıkılmak üyelik

¹Kimya ve Biyokimya Bölümü, Massachusetts Üniversitesi-Dartmouth, 285 Old Westport Road, North Dartmouth, Massachusetts 02747, Amerika Birleşik Devletleri.

PMID: 22066866
DOI: 10.1021/jf2035466

Soyut

Kızılcık ( Vaccinium macrocarpon ) klinik çalışmalarda Escherichia coli ve diğer bakterilerin neden olduğu enfeksiyonları azalttığı gösterilmiştir ve proantosiyanidinlerin rol oynadığına inanılmaktadır. Kızılcıkların ağız, cilt, solunum ve sistemik enfeksiyonlara neden olan fırsatçı insan mantar patojenlerinin büyümesini engelleme yeteneği iyi çalışılmamıştır. Bütün kızılcık meyvesinden alınan fraksiyonlar, beş Candida türünün ve mantar menenjitine neden olan bir ajan olan Cryptococcus neoformans'ın inhibisyonu açısından tarandı. Candida glabrata , Candida lusitaniae , Candida krusei ve Cryptococcus neoformans, 1 μg/mL kadar düşük minimum inhibe edici konsantrasyonlarla bir sıvı mikrodilüsyon deneyinde kızılcık proantosiyanidin fraksiyonları ile tedaviye önemli derecede duyarlılık gösterdi. Alt fraksiyonların MALDI-TOF MS analizi, 12 dereceye kadar polimerizasyona sahip epikateşin oligomerleri saptadı. Daha büyük oligomerler içerenler en güçlü inhibisyona neden oldu. Bu çalışma, kızılcıkların bir antifungal ajan olarak potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.

kesir	Ağırlık (mg)	elüsyon çözücüsü	Bileşenler	Global PAC miktarı %(w/w) (DMAC testi)
1	732,0	MeOH/su (20 : 80, v/v)	Fenolik asitler, kalan şeker	0.13
2	150.0	MeOH/su (60 : 40, v/v)	antosiyanin, flavonol	1,94
3	46.6	MeOH/su (60 : 40, v/v)	Düşük moleküler ağırlıklı PAC'ler	3.45
4	36.6	MeOH	PAC'ler ve flavonoidler	3.90
5	57.0	MeOH	Flavonoidler ve PAC'ler	2.69
6	30.7	Aseton/su (70 : 30,v/v)	Yüksek moleküler ağırlıklı PAC'ler	3.15

Duyuru

Turna Yemişi, Cranberry, Vaccinium macrocarpon

Turna Yemişi, Cranberry, Vaccinium macrocarpon

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap