Geyik Otu,Satureja montana

[maturidi]

Satureja montana L. Uçucu Yağlar: Kimyasal Profiller/Fitokimyasal Tarama, Antimikrobiyal Aktivite ve O/W NanoEmülsiyon Formülasyonları

Alessandro Maccelli , ^{1, †} Luca Vitanza , ^{2, †} Anna Imbriano , ^{1, †} Caterina Fraschetti , ¹ Antonello Filippi , ¹ Paola Goldoni , ² Linda Maurizi , ² Maria Grazia Ammendolia , ³ Maria Elisa Crestoni , ¹ Simonetta Fornarini , ¹ Luigi Menghini , ⁴ Maria Carafa , ¹ Carlotta Marianecci , ¹ Catia Longhi , ^{2, *}ve Federica Rinaldi ^{1, 5}
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır . İlişkili Veriler

Ek Malzemeler
Git: Soyut

Dört farklı Satureja montana'nın kimyasal parmak izleriL. uçucu yağlar (SEO'lar), ya elektrosprey iyonizasyon ya da atmosferik basınçlı kimyasal iyonizasyon iyon kaynakları ile birleştirilmiş Fourier-dönüşümlü iyon siklotron rezonansı (FT-ICR) kütle spektrometrisine (MS) dayanan hedeflenmemiş bir metabolomik yaklaşımla test edildi. Polar olmayan uçucu fraksiyonun analizi ve nispi nicelemesi, MS ile birleştirilmiş gaz kromatografisi (GC) ile gerçekleştirilmiştir. FT-ICR MS, polar metabolit bileşiminde önemli farklılıkları doğrularken, GC-MS analizleri, antimikrobiyal mekanizmalarda önemli bir rol oynadığı bilinen majör terpen ve terpenoidlerin nispi miktarında hafif dalgalanmaları doğruladı. SEO'lar ve Tween 20 veya Tween 80'den oluşan yağ yiyici (O/W) nanoemülsiyonları (NE'ler) hazırlandı ve hidrodinamik çap, ζ-potansiyel ve polidispersite indeksi açısından analiz edildi. Sonuçlar, boyut olarak homojen kararlı NE'lerin oluşumunu doğrulamaktadır. SEO'ların minimum inhibitör ve minimum bakterisidal konsantrasyonları Gram-pozitife doğru belirlendi (Listeria monocytogenes , Staphylococcus aureus , Staphylococcus haemolyticus ) ve Gram negatif klinik izolatlar ( Escherichia coli , Klebsiella pneumoniae , Pseudomonas aeruginosa ve Serratia marcescens ). Ticari SEO en güçlü antibakteriyel aktiviteyi gösterirken, SEO 3'ün laboratuarda yapılan ekstraksiyonlar arasında en aktif olduğu bulundu. MİK ve MBC değerleri 0,39 ila 6,25 mg·mL ^{-1 arasındaydı} . Ayrıca, NEs formülasyonunda yapılandırılmış bir SEO, antimikrobiyal aktiviteyi koruyabildi ve iyileştirebildi.

Anahtar Kelimeler: Satureja montana L., uçucu yağlar, nanoformülasyon, nanoemülsiyonlar, antibakteriyel aktivite, FT-ICR kütle spektrometrisi
Git: 1. Giriş

Şifalı bitkiler, eski çağlardan beri terapötik ajanların ana kaynaklarından biri olarak kullanılmaktadır. Taksonomik sınıflandırılmıştır yaklaşık 300.000 karasal bitkilerin, 10.000'den fazla bitki tıbbi amaçlarla [kullanılır 1]. Sadece 2019'un başlarında yayınlanan çok sayıda araştırma makalesi (3000'den fazla) ve inceleme (>300) (veriler, Temmuz 2019'da Scopus'tan alınmıştır; arama: Şifalı bitkiler) bu alana verilen büyük bilimsel ilgiyi kanıtlamaktadır. Öte yandan, birçok doğal aktif bileşik, düşük hidrofiliklik ve içsel çözünme hızı, düşük absorpsiyon, zayıf farmakokinetik veya fiziksel/kimyasal kararsızlık gösterir. Bu özellikler, yüksek doz ve/veya tekrarlanan uygulama ihtiyacı nedeniyle klinik kullanımlarını sınırlar. Uçucu yağlar (EO'lar) söz konusu olduğunda, yüksek uçuculuk ve kararsızlık ile birlikte karmaşık kimyasal bileşim başka sınırlamalardır.

Daha iyi biyofarmasötik özellikler elde etmek, dozları ve yan etkileri azaltmak için uygun taşıyıcı sistemlerin geliştirilmesi için büyük çaba sarf edilmesi gerekmektedir. Yakın tarihli bir gözden geçirme, ekstrakt ve EO nanoformülasyonlarının, artan çözünürlük ve stabilite, daha yüksek geçirgenlik oranı, daha iyi biyoyararlanım ve sürekli salım gibi geleneksel olanlara göre kayda değer avantajlara sahip bazı uygulamalarını bildirmektedir [ 2 ]. Satureja cinsi , Orta Doğu ve Akdeniz Avrupa bölgelerinde, Batı Asya, Kuzey Afrika ve Güney Amerika'da kendiliğinden yetişen yaklaşık 200 tür aromatik ve şifalı bitki [ 3 ] içerir [ 4 ]. Özellikle Satureja montana ( ö . Lamiaceae, sf.Nepetoidler, t. Mentheae), yaygın olarak kış veya dağ kokulu olarak bilinir, Güney Avrupa'nın Akdeniz bölgesinde ve Kuzey Afrika'da sıcak, kurak, güneşli ve kayalık bölgelere özgü çok yıllık küçük bir bitkidir [ 5 , 6 ]. Şifalı bitki [ 7 ] açısından en zenginlerden biri olarak kabul edilebilecek Lamiaceae türlerinde, Satureja uçucu yağı (SEO), antiseptik, antioksidan, antifungal, gaz giderici ve sindirim sistemi ile çok çeşitli biyolojik ve endüstriyel uygulamalar için temel sağlar. özellikler [ 8 , 9], biyolojik olarak aktif fitokimyasalların içeriği sayesinde. Ayrıca, genellikle Akdeniz yemek pişirme müstahzarlarında ve hatta gıda ambalajlarında doğal antibakteriyel ajan olarak kullanılır [ 10 , 11 ]. Son zamanlarda, uçucu yağlar gibi doğal maddeler, büyük yararlı etkileri nedeniyle araştırmacıların dikkatini çekmiştir [ 12 , 13 ]. Ayrıca, taze bitkiden elde edilen SEO veriminin %5'i [ 3 ] aşabileceği ve bu da yüksek bir biyolojik potansiyel ortaya çıkarabileceği tahmin edilmektedir . Uçucu kısım esas olarak, miktarı antimikrobiyal aktivitenin bir göstergesi olarak kabul edilebilen oksijenli monoterpenler, örneğin timol ve karvakrol ile karakterize edilir [ 14].] ve allelopatik etkiye sahip hem açık zincirli hem de monosiklik monoterpenler [ 15 ]. Özellikle, karvakrol gıda kullanımı için onaylanmış ve GRAS (genel olarak güvenli olarak kabul edilmiştir) olarak sınıflandırılmıştır [ 16 ], linalool ve p- simen gibi oksijensiz monoterpenler ise analjezik etki göstermiştir [ 10 ]. İkincisinin yüksek içeriği, otçullardan bitki korumasında önemli bir rol ile de ilişkilendirilmiştir [ 17 , 18 ]. Uçucu olmayan ve daha polar bileşiklerin tamamlayıcı fraksiyonu, fenolik asitler [ 19 ], fenilpropanoidler, yağ asitleri [ 20 ], tanenler [ 3 ] gibi sekonder metabolitlerin değişken miktarlarını içerir.] ve tokoferoller [ 18 ]. SEO'nun ana bileşenlerinin bir listesi şurada rapor edilmiştir:Şekil 1.

Şekil 1
Satureja montana L. uçucu yağında (SEO) bulunan en çok temsil edilen terpenler ve terpenoidler : Terpenler (y-terpinen ve p- simen), oksijenli monoterpenler (timol ve karvakrol), bisiklik terpenoidler (okaliptol ve borneol) ve siklik monoterpenler (limonen ve limonen oksit).

Bununla birlikte, bu bileşenlerin içeriğinde güçlü bir farklılık rapor edildi, bu da birkaç bitki kemotipinin varlığını doğruladı [ 21 ]. EO'larda kaydedilen geniş fitokimyasal çeşitlilik, coğrafi ve büyüme koşulları gibi çevresel faktörler ve izolasyon teknikleri ve kurutma yöntemleri gibi gelişim aşamaları ile ilgilidir [ 22 , 23 ].

Son zamanlarda, antibiyotik direnç mekanizmalarının ortaya çıkması, bu sorunun üstesinden gelmek için EO'ların etkili bir alternatif olarak önemini vurgulamıştır. Birkaç çalışma, farklı Satureja cinsi türlerinden elde edilen EO'ların , Escherichia coli , Listeria spp. ve Staphylococcus spp. gibi farklı mikroorganizmalara karşı dikkate değer antibakteriyel aktivitelere sahip olduğunu bildirmiştir . [ 19 , 24 , 25]. Bu antimikrobiyal aralık ve aktivite, muhtemelen uçucu yağın bileşimine ve bitkinin kökenine bağlıdır. Ayrıca, hem ilaca dirençli Gram-pozitif hem de Gram-negatif bakteriyel patojenlere karşı hücre duvarındaki fonksiyonel grupları, lipidleri, proteinleri ve nükleik asidi bozan bitkisel bitkisel yağ nanoemülsiyonlarının (NE'ler) geniş bir bakterisidal aktivitesi tanımlanmıştır [ 26 ].

Bu çalışmada, üçü büyüyen vahşi popülasyonlardan (SEO1-3) ve biri ticari kaynaktan (SEOT) olmak üzere, ancak büyüyen bölge ve tarla yüksekliği gibi ekolojik faktörler açısından farklı olan dört farklı Satureja montana L. EO'nun kimyasal profili çıkarılmıştır. araştırıldı. Elektrosprey iyonizasyon ile birleştirilmiş Fourier-dönüşümlü iyon siklotron rezonans kütle spektrometrisinin (FT-ICR MS) yüksek hassasiyeti ve rakipsiz kütle doğruluğu ve çözümleme gücü, burada hedeflenmemiş bir metabolomik yaklaşımda (yarı) polar bileşikleri ortaya çıkarmak için kullanılmıştır. karmaşık biyolojik örneklerde çok sayıda moleküler aile [ 27 , 28]. Bu yaklaşım, moleküler formüllerin güvenilir bir şekilde belirlenmesine izin vererek biyolojik matrislerin karmaşık kimyasını görüntülemek için hızlı bir yöntem sunar. Bununla birlikte, potansiyel iyonizasyon bastırma ve algılama duyarlılığındaki farklılıklar nedeniyle yöntem nicel bilgi elde etmeye uygun değildir. Böylece metabolomik parmak izinin yalnızca genel bir nitel açıklaması toplanabilir. Bu perspektifte, daha az polar uçucu fraksiyon, yapısal izomerlerin ayrılmasına ve tanımlanmasına ve bunların nispi bolluklarının belirlenmesine izin veren gaz kromatografisi (GC) MS ile karakterize edilmiştir. Son olarak, kararlı bir nanotaşıyıcı elde etmek için farklı SEO NE'leri hazırlandı ve karakterize edildi. NE'leri stabilize etmek için iki farklı yüzey aktif madde (Tween 20 ve Tween 80) seçildi. Tween'ler, laurik asit (Tween 20) veya oleik asit (Tween 80) eklenmeden önce sorbitanın etoksilasyonuyla oluşturulan polisorbat tipi iyonik olmayan yüzey aktif maddelerdir. Tween stabilitesi ve göreceli toksik olmama özelliği, bunların bir dizi kozmetik ve farmasötik üründe kullanılmasına olanak tanır. Aynı kutup başını taşıyan ancak farklı kutupsal kuyruğu taşıyan Tween 20 ve Tween 80 (şekil 2), farklı HLB değeri göster. Özelliklerinin NE fiziksel-kimyasal özelliklerini nasıl etkileyebileceğini değerlendirmek için farklı Aralar seçildi. Özellikle, 90 günlük bir süre boyunca farklı sıcaklıklarda boyut ve ζ-potansiyelindeki değişimlerini değerlendirmek için NE'lerin stabilite çalışmaları yapılmıştır. Yağ damlası özellikleri, NE'lerin içine yüklenen floresan probu olarak Pyrene'in kullanıldığı floresan ölçümleriyle araştırıldı. Ayrıca DLS analizleriyle elde edilen boyut değerleri TEM gözlemleriyle elde edilen verilerle karşılaştırılmıştır. Kimyasal bileşimin bakteri büyümesi üzerindeki etkisini belirlemek için, birkaç klinik Gram pozitif ve Gram negatif suş için tek başına veya NE'lerde formüle edilmiş SEO'ların minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) ve minimum bakterisidal konsantrasyonu (MBC) belirlendi. değerlendirildi.

Ayrı bir pencerede aç
şekil 2
Nanoemülsiyonları (NE'ler) stabilize etmek için kullanılan Tween 20 ve Tween 80 sürfaktanları.

Git: 2. Malzemeler ve Yöntemler

Tüm kimyasallar, ticari bir kaynaktan (Sigma Aldrich, Milan, İtalya) sağlanan ve daha fazla saflaştırılmadan kullanılan araştırma sınıfı ürünlerdi. 2.1. Bitki Malzemesi

Bu çalışma dört farklı SEO üzerinde gerçekleştirilmiştir. SOT, bitki materyalini Arnavutluk'tan toplayan ticari bir kaynaktan (Talia, Roma, İtalya, http://www.taliaessenze.com ) satın alındı . SEO1, 2 ve 3 laboratuvarda ham bitkilerden ekstrakte edildi. Tam çiçek açan bitkilerin hava kısımları Ekim 2016'da hasat edildi ve uçucu yağ SEO1 Mart 2017'de elde edildi. Bitkiler, Abruzzo bölgesinde (orta İtalya) iki girişte SE maruziyeti ile deniz seviyesinden (asl) yaklaşık 800-900 m yükseklikte toplandı. : Ernici ve Gran Sasso Dağı. Numune kimliği L. Menghini tarafından belirlendi. SEO2 ve SEO3 yağları, Sarandrea Marco and Co. srl, Collepardo, (FR), İtalya tarafından Collepardo, Lazio bölgesinde (orta İtalya) 500–600 rakımda yetiştirilen bitkiden (yapraklar ve çiçekler) elde edildi;http://www.sarandrea.it : Ekim 2016'da hasat edilen bitkinin toprak üstü kısımlarından Aralık 2016'da SEO2, Eylül 2017'de hasat edilen bitkinin toprak üstü kısımlarından Mart 2018'de SEO3 hazırlanmıştır. deneysel testler için daha büyük miktarda mevcuttur. Taze malzeme (yapraklar ve çiçekler), bir Clevenger tipi aparatta 180 dakika boyunca hidro-damıtma yoluyla özümlendi ve daha sonra döküldü. Süzülen yağ daha sonra susuz sodyum sülfat eklenerek kurutuldu, koyu renkli bir cam şişede saklandı ve foto ve termodegradasyon işlemlerini önlemek için -20 °C'de stoklandı. Uçucu yağ verimi Ernici ve Gran Sasso numuneleri için sırasıyla %0.59 ve %0.66 ( w / v ) olarak ortaya çıkmıştır. 2.2. Elektrosprey İyonizasyon FT-ICR MS Analizi

Her SEO'dan küçük bir miktar (yaklaşık 40 ug), 0.45 um hidrofobik polipropilen Acrodisc filtreden süzüldü, 1.5 mL MeOH:AcN (1:1 v / v ) içinde seyreltildi ve ayrıca MeOH içinde 1.7 ug'lik bir nihai konsantrasyona seyreltildi L- ¹ . SEOT kompozisyonu burada karşılaştırma amacıyla yeniden değerlendirilmiştir [ 23 ]. Deneyler, bir elektrosprey iyonizasyon (ESI) kaynağı ve silindirik bir sonsuzluk hücresi ile donatılmış bir Bruker BioApex 4.7 T FT-ICR kütle spektrometresi üzerinde gerçekleştirildi. MS analizleri, 120 µL h- ¹ akış hızında doğrudan infüzyon yoluyla pozitif (ESI+) veya negatif (ESI−) polarite modunda gerçekleştirilmiştir . Metabolitler, 50 ile 1250 m arasındaki m / z aralığında test edildi./ z , m / z 400'de 60.000'lik bir ortalama kütle çözme gücü, m /Δ m %50 ile . Her analiz için 1 M'lik bir satın alma boyutuna sahip 100-200 tarama eklenmiştir. Ham veriler Xmass Analysis yazılım paketi kullanılarak kaydedildi ve veri işleme DataAnalysis 3.4 (Bruker Daltonics) kullanılarak yapıldı. Negatif mod işleminde,% 2 h / h , NH ₃ iyonizasyon arttırmak için ilave edildi. Her iki iyonizasyon modunda da, karışımlarda mevcut olduğu bilinen metabolitler, aşağıdakiler dahil olmak üzere dahili kütle kalibrantları olarak kullanıldı: (i) deprotonlanmış [M – H] olarak ortaya çıkan karvakrol ^-m / z'de iyon 149.09718, (ii) linalool, sodyumlu [M + Na ⁺ ] ⁺ iyon m / z 177.12500 olarak saptandı; ve (iii) protonlanmış [M + H ⁺ ] ⁺ iyon m / z 137.13248 olarak ortaya çıkan limonen, böylece 1 ppm'nin altında bir kütle doğruluğu elde edilir. Ek doğrulama, metanol içinde standart bir karvakrol, linalool ve limonen karışımının 5 uM'lik standart bir çözeltisi kullanılarak elde edildi. Dahili olarak kalibre edilmiş her bir FT-ICR kütle spektrumu için, yalnızca 4'ten yüksek bir sinyal/gürültü oranına sahip tepeler dikkate alındı. Tüm kütle ölçümleri “monoizotopik” iyona dayalıdır. Böylece elde edilen m / zdeğerler çıkarıldı ve metabolit tayini için MassTRIX'e [ 29 ] sunuldu . ESI+'da protonlanmış, sodyumlu ve potasyumlu eklentiler dikkate alınırken, ESI-'de protonsuz ve klorlu eklentiler, izin verilen maksimum ±3 ppm sapma ile değerlendirildi. Daha az polar bileşikler, 2000 S TRAP (Applied Biosystem) Q ile ticari melez üçlü dört kutuplu bir lineer iyon kapanı kütle spektrometresi bağlanmış bir atmosferik basınçta kimyasal iyonizasyon (APCI) kaynak ile deneye tabi tutuldu ₁ q ₂ S _YANIK konfigürasyonu. Pik atamalarının daha fazla doğrulanması, yapısal bilgi elde etmek için çarpışma kaynaklı ayrışma (CID) deneyleri ve Metlin [ 30 ] dahil çevrimiçi kütüphanelerle çapraz referans yoluyla elde edildi (https://metlin.scripps.edu ) ve ChemCalc [ 31 ] ( http://www.chemcalc.org ). Her EO'dan oluşturulan çok sayıda atanmış moleküler formül (yaklaşık 2000), van Krevelen diyagramlarını [ 32 ] oluşturmak için kullanıldı , burada hidrojen ve karbon atomlarının sayısı (H/C) arasındaki molar oran, mol oksijene karşı çizildi. karbon oranı (O/C). Bu görselleştirme aracı, tanımlanan bileşiklerin, ifade edilen metabolitlerin ana sınıflarında kümelenmesine izin verir. Örnekler arasındaki farklar da Venn diyagramları ile vurgulanırken, SEO'ların elementel bileşimi (CH, CHN, CHNO, CHNOP, CHO, CHOP) histogramlarla tasvir edilmiştir. 2.3. Gaz Kromatografisi/Kütle Spektrometrisi Analizi

SEO1–3'ün uçucu kısmı, bir GC-MS analizi yoluyla araştırılmıştır. Filtrelenmiş yağın yaklaşık 1 μL'si, polar olmayan kapiler kolon HP-5MS (30 m × 0.25 mm × 0.25 µm) ile donatılmış bir Agilent Technologies 5975 kütle spektrometresi ile birleştirilmiş bir Agilent Technologies 6850 gaz kromatografına manuel olarak enjekte edilmiştir. Gaz kromatografik parametreler şu şekilde ayarlandı: giriş sıcaklığı, 250 °C; enjeksiyon modu, bölünmüş (bölünmüş oran 40/1); helyum taşıyıcı gazın akış hızı (%99,995 saflık), 1.0 mL/dak; fırın sıcaklığı 40 °C'den başlayarak, 5 dakika sonra 5 °C/dk'da 200 °C'ye yükseltilir ve bu son sıcaklıkta 60 dakika tutulur. Kütle spektrometrisi parametreleri aşağıdaki gibi ayarlandı: EI enerjisi, 70 eV; çözücü gecikmesi, 6 dak; kaynak sıcaklığı, 230 °C; dört kutuplu sıcaklık, 150 °C; toplu tarama m /z aralığı, 50–350 u.

Elute edilen bileşiklerin tanımlanması, üç kriter uygulanarak gerçekleştirilmiştir: EI spektrumu, Kovats indeksi (KI) ve standart bileşiklerin enjeksiyonu. Daha ayrıntılı olarak, EI spektrumları hem ticari (FFNSC 3) hem de serbest veritabanlarında (NIST 11, Flavor2) toplananlarla karşılaştırıldı ve hiçbir zaman %80'in altında olmayan bir eşleşme kalitesi kabul edildi; KI'ler, n'nin bir karışımı kullanılarak ölçüldü-aynı kromatografik düzeneğe sahip alkanlar (C7–C40) ve ardından FFNSC 3 ve NIST 11 veritabanlarında rapor edilen değerlerle karşılaştırıldı; nihayet birkaç ticari standardın enjeksiyonu, en yüksek atamaları doğruladı. EO uçucu bileşiklerinin kantitatif analizi, GC tepe noktalarının daha fazla düzeltme yapılmadan manuel olarak entegre edilmesiyle gerçekleştirilmiştir. Dahili standart (IS) yöntemi, IS olarak karyofillen oksit kullanılarak SEO3'teki karvakrol ve timolün gerçek kütle yüzdesini belirlemek için özel olarak uygulanmıştır. 2.4. Nanoemülsiyon Hazırlama

Tüm dağıtım sistemleri SEO1, 2, 3 ve T ile hazırlandı ve en fazla terpen ve terpenoid sayısı ve daha fazla miktarda bulunabilirliği nedeniyle seçim örneği olarak SEO3 seçildi. Dört NE (A1, A2 ve B1, B2) farklı miktarlarda Tween 20 (Tw20) veya Tween 80 (Tw80) ve SEO3 (tablo 1) 5 mL Hepes tamponu (10 ^-2 M, pH 7.4) içinde. Seçilen formülasyonlar, farklı Yağ/Sürfaktan oranları ile karakterize edildi: A1 ve B1 için 1:1 ve A2 ve B2 için 1:2. tablo 1

NE kompozisyonları.

A1	50	50
A2	33.3	66.6
B1	50		50
B2	33.3		66.6

[a] % a / a .

Tüm numuneleri elde etmek için hızlı bir hazırlama yöntemi kullanıldı [ 33 ]. Kısaca, SEO, Tw20 veya Tw80 ve Hepes tamponundan (10 ^-2 M, pH 7.4) oluşan karışım , mikro emülsiyon oluşumuna izin verecek şekilde yaklaşık 5 dakika vortekslendi. Mikro ölçekli damlacıklara sahip her emülsiyon, NE'leri elde etmek için %18'lik bir genlikte (Vibracell-VCX 400, Sonics, Taunton, MA, ABD) 20 kHz'de çalışan konik bir mikro uç kullanılarak 50 °C'de 20 dakika boyunca sonikasyona tabi tutuldu. Bu aşamada tüm formülasyonlar Ph. Eur. 2.5. Dinamik Işık Saçılımı Ölçümleri

Damlacık boyutu dağılımı ve NE'lerin ζ potansiyeli, 5 mW HeNe ile donatılmış bir Zetasizer Nano ZS90 (Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, UK) kullanılarak dinamik ışık saçılması (DLS) ile 25 °C sıcaklıkta ölçüldü. lazer (dalga boyu λ = 632,8 nm) ve bir dijital logaritmik korelatör. Boyut dağılımının homojenliğini değerlendirmek için polidispersite indeksi (PDI) değeri de belirlendi, özellikle 0.3'ten düşük bir PDI değeri, monodispers bir popülasyonu gösterir. 2.6. Transmisyon Elektron Mikroskobu (TEM)

Seyreltilmiş NEs numunelerinin bir damlası 1 dakika boyunca karbon kaplı bakır ızgaralar üzerine adsorbe edildi ve pH 7.0'a ayarlanmış %2 filtrelenmiş sulu sodyum fosfotungstat ile 10 s boyunca negatif olarak boyandı. Filtre kağıdı ile ızgara sınırındaki fazla boyama çözeltisinin uzaklaştırılmasından sonra, 80 kV'da Philips 208S transmisyon elektron mikroskobu ile preparatlar gözlendi. 2.7. NEs Kararlılık Değerlendirmesi

Farklı sıcaklıklarda kolloidal stabiliteyi değerlendirmek için seçilen NEs formülasyonları, 90 günlük bir süre boyunca 4 ve 25 °C'de saklandı. Her partiden numuneler belirli zaman aralıklarında (1, 30, 60 ve 90 gün) alındı ve ζ potansiyeli ve hidrodinamik çapın ortalaması daha önce tarif edildiği gibi belirlendi. 2.8. Florometrik Ölçümler

Floresan teknikleri ile yağ damlası özellikleri (mikro viskozite ve polarite) araştırıldı. Piren yüklü NE'ler, NEs bileşenlerine Piren (4 mM) eklenerek hazırlandı (yukarıda açıklanan hazırlama yöntemiyle aynı). Yağ fazı içindeki probun yanal dağılımı ve hareketliliği, floresan ölçümleri ile incelenmiştir. Piren bir floresans sondasıdır ve monomeri, beş emisyon tepe noktası (I1–I5) ile karakterize edilen bir spektrum sergilerken, eksimeri yalnızca bir tepe (IE) gösterir. Piren, uygun konsantrasyonda, prob mikro-ortamının viskozitesine bağlı olarak intramoleküler eksimer oluşturabilir [ 34 ]. Pyrene yüklü NEs süspansiyonu tarafından yayılan floresan sinyalleri , lüminesans spektrometresi (LS5013, PerkinElmer, Waltham, MA, ABD) kullanılarak tarandı ( λ = 350-550 nm).35 ]. 2.9. In Vitro Yayın Çalışması

NE'ler, 0.32 mg·mL ^-1 konsantrasyonunda bir lipofilik prob olan Nil Kırmızısı (NR) ile hazırlandı . NR'nin yanı sıra lipofilik bileşikler yağ içinde çözündürüldü ve ardından tampon çözeltisi ilave edildi. NR salım çalışmasının amacı, dağılmış yağlı fazda tutulan lipofilik bir model ilacın nanoemülsiyonlardan salımını simüle etmektir. Deneyler diyaliz boruları (Moleküler ağırlık 8000 kapalı kesme ve 5.5 cm kullanılarak gerçekleştirilmiştir ² difüzyon bölgesi) ve dış ortam içinde Nil Kırmızısı artışı aşağıdaki gibidir (Hepes 10 tampon ^-2 M, pH 7.4 / etanol 50/50 hacim / v) belirli zaman aralıklarında, 24 saat 37 °C'de. Serbest bırakma ortamı, deney sırasında nazikçe manyetik olarak karıştırıldı. UV analizlerini gerçekleştirmek için çözeltiden numune hacimleri (1 mL) alındı ve daha sonra tekrar harici ortama yerleştirildi. Salınan NR, bir spektrofotometre (Lambda 25, PerkinElmer, Waltham, MA, ABD) vasıtasıyla tespit edildi ve 559 nm'de NR absorbansı değerlendirilerek analizler yapıldı. Alikotlar, numune alındıktan hemen sonra analiz edildi. Tüm salım deneyleri üç kopya halinde gerçekleştirilmiştir [ 36 ]. 2.10. Bakteri soyları

Gram pozitif Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus (SA1 ve SA2), Staphylococcus hemolyticus ve Gram negatif Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa ve Serratia marcescens izolatları, Halk Sağlığı ve Bulaşıcı Hastalıklar Bölümü klinik suşları koleksiyonundan elde edildi. Roma Sapienza Üniversitesi. Bakteriyel suşlar beyin kalp infüzyon suyunda (BHI) (Oxoid) büyütüldü ve -80 °C'de %15 gliserol-BHI içinde stok kültürler olarak tutuldu. VITEK2 sistem cihazı (bioMérieux) kullanılarak antimikrobiyal duyarlılık testleri yapıldı. Sonuçlar, VITEK2 Advanced Expert System (AES) yazılımı tarafından EUCAST kesme noktaları ( http://www.eucast.org/clinical_breakpoints/ ) temelinde analiz edildi . 2.11. Minimum İnhibitör Konsantrasyon (MIC) ve Minimum Bakterisidal Konsantrasyon (MBC) Testleri

SEO'ların ve NE'lerin MIC tayini, CLSI yöntemine ( https://clsi.org ) göre mikrodilüsyon yöntemiyle yapıldı . Yağdan gelen yoğunluk değerleri, Andrade ve diğerleri, 2014 [ 37 ] tarafından tarif edildiği gibi gerçekleştirilmiştir . Üstel olarak büyüyen bakteri kültürleri, 0,5 McFarland hücre yoğunluğuna seyreltildi ve 10 uL bakteri süspansiyonu, Muller Hinton Broth (MHB) (Oxoid) içinde 200 uL'lik kuyucuklara, nihai hacimde aşılandı; 37 °C'de 18-24 saat sonra büyüme değerlendirildi. Yağlar için, konsantrasyonlar, yağ çözünürlüğünü artırmak için MHB plus Tween 80'de (%0,02) ve TTC (2,3,5-trifenil-2H-tetrazolyum klorür) (%0,05) ile 50 ila 0,048 mg·mL ^-1 arasında değişmiştir . bakteri üremesini belirler. NE formülasyonları (A1 ve A2) için iki kat seyreltme 18.4 mg·mL ^−1'den başlamıştır.NE müstahzarları için (B1 ve B2) 19.6 mg·mL ^{-1'den itibaren} . Tüm tahliller üç kopya halinde yapıldı. Plakalar 37 °C'de 24 saat inkübe edildi. Bileşiklerin MIC'si, hücrelerin görünür büyümesini engelleyen en düşük konsantrasyondu. İlk inokulumun %99,9'unu veya daha fazlasını öldüren en düşük antimikrobiyal konsantrasyonu olarak tanımlanan MBC'yi belirlemek için, gözle görülür bir büyümenin gözlemlenmediği (MIC, 2x MIC ve 4x MIC) kuyulardan 10 µL'lik kısımlar Mueller üzerine kaplandı. –Hinton agar besiyeri, daha sonra 37 °C'de 24 saat inkübe edildi. 2.12. SEO'ların ve NE'lerin T24 Hücresine Etkisinin MTT Testi ile Belirlenmesi

T24 insan mesane kanseri hücre çizgisi (ATCC, Rockville, MA, ABD)'den elde edildi. Hücreler, %10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu (FBS; SAFC Biosciences Inc., Lenexa, KS, ABD), 100 U/mL ile desteklenen Minimum Temel Ortam ortamında (HyClone; GE Healthcare, Logan, UT, ABD) kültürlendi. penisilin ve 100 mg/L streptomisin. Çoğalma, 3-(4,5-dimetiltiyazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) tahlili ile değerlendirildi. Kısaca, 96-gözlü plakalar, 1 ile tohumlanmıştır x 10 ⁴ / yuva ve SEO farklı miktarlarda hücrelere ilave edildi, ya ND olarak veya serbest yağ halinde. Hücrelerin farklı müstahzarlara 24 saat maruz kalmasından sonra, 20 μL 5 mg·mL ^-1Her bir oyuğa PBS içindeki MTT solüsyonu ilave edildi ve plakalar 3 saat inkübe edildi. Formazan kristalleri 100 µL dimetil sülfoksit ilavesiyle çözündükten sonra, 570 nm'de optik yoğunluk (OD) bir spektrofotometre/florimetre mikroplaka okuyucusu (PerkinElmer, Hopkinton, MA, ABD) ile belirlendi ve tedavi edilen hücreler için ölçülen değerler karşılaştırıldı. tedavi edilmemiş kontroller için. 2.13. İstatistiksel analiz

Her deney üç kopya halinde yapıldı ve tüm değerler ortalama ± standart sapma (SD) olarak rapor edildi. Veriler, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ile istatistiksel olarak analiz edildi. Bir p değeri ≤0,05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Git: 3. Sonuçlar ve tartışma

3.1. MS Metabolit Profilleme

Günümüzde ESI-MS, yüksek hızı ve duyarlılığı nedeniyle metabolomikte tercih edilen bir yöntem olarak kabul edilmektedir [ 38 , 39 ]]. Bu çalışmada, yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile birleştirilmiş doğrudan infüzyon ESI, sadece küçük miktarlarda mevcut olan polar bileşikleri de (orta derecede) tespit etmek için metabolom kapsamını arttırmayı amaçlamıştır. Tipik olarak dar bir dizi hedef bileşiği ölçmek için kullanılan sıvı kromatografiye (LC-MS) bağlı kütle spektrometrisine kıyasla, burada uygulanan hedeflenmemiş metabolit profili, kapsamlı bir metabolik parmak izi ve kemotaksonomik tanımlama için hızlı ve güvenilir bir tarama aracıdır. izomerik yapılar için İzomer ayrımı, moleküler formül ataması ile çözülmeyen ve özel olarak ele alınması gereken bir sorun olmaya devam etmektedir.

Burada, dört farklı SEO'yu karakterize etmek için doğrudan infüzyon ESI FT-ICR MS uygulandı, zaman alıcı ön kromatografik ayrımlardan kaçınıldı [ 40 , 41 ], bunun yerine FT-ICR'nin emsalsiz kütle doğruluğundan ve çözümleme gücünden yararlanıldı. Ayrıca, CID deneyleri, karmaşık karışımların analizinde yaygın olarak yapıldığı gibi, ticari standartların yokluğunda metabolitlerin tanımlanmasına izin vererek ek yapısal bilgiler sağlamıştır [ 42 ].

Tüm SEO örneklerinde tanımlanan temel formüller , her öğenin deneysel m / z oranını, atanan moleküler formülü ve karşılık gelen teorik m / z oranını, kütle hatasını ve varsayılan bileşik açıklamalarını içerdiği Tablo S1–S4'te listelenmiştir . İncelenen m / z aralığında, örneklenen dört SEO, Tablo S5'te rapor edilen çok çeşitli açıklamalı tepe noktaları sunar.burada SEO1 ve SEO2, ESI(+)'da sırasıyla en yüksek (# 2922) ve en düşük (# 702) tespit edilen iyon sayısını sunarken, ESI(-)'deki tepe noktalarının sayısı farklı SEO'lar arasında daha dengeli görünmektedir. ESI(+)'da elde edilen SEO'ların kütle spektrumlarının örnekleri şurada rapor edilmiştir:Figür 3düşük kütle aralığında büyütmeler olarak ( m / z 90–450). Önceki kanıtlarla uyumlu olarak, SEO'lar kimyasal bileşimde önemli bir değişkenlik sunar ( Tablolar S1–S4 ) [ 43 ]. Genel olarak, tüm numuneler, karvakrol/timol, p- simen, kamphen/limonen/terpinen, kafur, okaliptol/borneol/terpinen-4-ol, linalool-oksit, öjenol ve doymuş serbest yağ asitleri dahil olmak üzere SEO'ların karakteristik metabolitlerini içerir. [ 21 , 44 ].

Ayrı bir pencerede aç
Figür 3
SEO örneklerinin (kırmızı spektrum, SEO1; mavi spektrum, SEO2; mor spektrum, SEO3; yeşil spektrum, SEOT) yüksek çözünürlüklü ESI(+) Fourier dönüşümü iyon siklotron rezonans (FT-ICR) kütle spektrumları genişletilmiş aralıkta gösterilir ve m / z 90-450.

m / z 193.11975'te sodyumlu iyon olarak tanımlanan linalool oksit, SEO1, 2 ve 3'ün yaygın, belirgin bir zirvesi iken, Arnavutluk'ta yetiştirilen bir popülasyondan gelen ticari yağ SEOT'da zar zor tespit edilirken, zaten linalool zayıf bir kemotip olduğu gösterildi/bulundu [ 21 ]. Farmasötik anksiyolitik aktivite [ 45 ] oksijenlenmemiş öncü linalool ile ilişkili olmasına rağmen , linalool oksit hayvan modellerinde ek antinosiseptif ve antikonvülzan etkiler göstermiştir [ 10 ], SEO1, 2 ve 3'ün biyolojik potansiyele göre daha yüksek biyolojik potansiyeline işaret etmektedir. SEOT. Tersine, SEOT kolin açısından zengindir ( m / z104.10701), SEO2 ve SEO3'te de ortaya çıkan temel bir besindir. Tüm SEO'lar, metil- ve dihidroksi-vitamin D3 gibi D vitamini türevlerini sunarken, SEO1 ve SEOT, sırasıyla karotenoid zeta-karoten ve retinol (C ₂₀ H ₃₀ O) ve retinal (C ₂₀ H ₂₈ O) vitaminlerini tutar. SEOT için bir ön katkı rapor edildiği gibi [ 24 γ-terpinen olarak ortaya gibi, (i) terpenler [C:], vahşi büyüyen popülasyonlarından tüm örnekler içeren SEO1-3 ₁₀ H ₁₇ ] ⁺ de ESI (+) 'de m / z 137,13245, ve ilgili bileşikler, örneğin, p -cymene [C olarak algılanabilir ₁₀ H₁₅ ] ⁺ m / z'de ESI(+)'da 135.11693; protonu giderilmiş bir tür olarak bulunan karvakrol ve timol içeren, (ii) terpenoidler, [Cı- ₁₀ , H ₁₄ O-H] ^- de m / z 149,09717, SEO3 (kütle spektrumunda görüldüğü gibi Şekil S1 ); (iii) m / z 227.20182, 255.23239 ve Sırasıyla 283.26299 ve tekli doymamış FA, yani m / z'de oleik (18:1) asit281.24859. Ek olarak, alkollü (heksenol) ve aldehidik (heksanal ve oktanal) ürünler de dahil olmak üzere spesifik lezzet gelişiminden [ 46 ] sorumlu FA türevleri , sırasıyla SEO3'te veya SEO1 ve SEO2'de ortaya çıkarılmıştır. APCI-MS QTRAP tarafından gerçekleştirilen deneyler, daha az polar bileşiklerin iyonizasyon büyütmek için ve tepe noktası durumunda olduğu gibi, daha sonra CID deneyleri yürütmek için izin m / z 155 [Cı protonlanmış terpenoid atanmış ₁₀ , H ₁₉ O] ⁺ ( Şekil S2, Tablo S1 ), daha önce SEOT için bildirildiği gibi, ayrışma paterni borneol ve linalool ile uyumlu olan [ 24]. Sırasıyla Şekil S3A,B'de gösterildiği gibi [limonen + H] ⁺ ve [limonen aldehit - H] ^- dahil olmak üzere diğer metabolitler de aynı prosedürle karakterize edildi . Önemli sayıda atanan formülden bilgi toplamak için, tanımlanan tüm bileşikler, van Krevelen diyagramlarında H/C ve O/C moleküler oranına dayalı olarak ayrı bölgelerde kümelenmiştir.Şekil 4. Genel olarak, vurgulanan bölgelerle gösterilen en kalabalık metabolit sınıfları şunlara karşılık gelir: (i) yağ asitleri ve steroid benzeri bileşikler dahil lipidler; (ii) polifenoller; ve (iii) terpenoidler. Beklenmedik bir şekilde, SEO'ların hazırlanması için uygulanan fiziksel kimyasal prosedürden uçucu bileşenlerin ayrıcalıklı ekstraksiyonu nedeniyle karbonhidratlar büyük ölçüde temsil edilmiyor. Yine de daha az uçucu bileşikler (örneğin yağ asitleri) daha önce belgelendiği gibi SEO'ların karmaşık kimyasal bileşimine katkıda bulunur [ 8 ]. Açıkça, FT-ICR kütle spektrometrik analizinin yüksek hassasiyetinden dolayı, oldukça zengin bir bileşik dizisi ortaya çıkarılmıştır.

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 4
SEO1–3 ve SEOT'un Van Krevelen diyagramları. Önemli değişikliklere dahil olan ana metabolit sınıfları lipidler, terpenoidler ve polifenollerdir. Terpenler (açıklamada vurgulanmamıştır) y ekseni üzerindedir.

Buna göre Şekil 4, SEO1, en yüksek sayıda yoğunlaştırılmış hidrokarbonu gösterir. Tanımlanan moleküler formüllerin nispi frekans dağılımı şurada rapor edilir:Şekil 5 Örneklenen SEO'lardaki temel dağılımın niteliksel bir değerlendirmesini elde etmek için.

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 5
SEO örneklerinde açıklamalı metabolitlerin elementel bileşimi.

Tüm SEO'lar, farmasötik aktivite ve lezzetten sorumlu olan FA'ler, alkoller, fenoller, birçok poliketid ve terpenoidler dahil olmak üzere CHO bileşiklerinin çoğunluğunu ve ardından amino asitler, amino-şekerler ve amino FA'ler gibi CHNO özelliklerini içerir. SEOT ve SEO3, özellikle terpenoidler ve lipidler tarafından doldurulan en yüksek CHO bileşiklerini (%52-%53) sunar.Şekil 4, SEO2 ise en küçük olanı (%45) sunar. SEO3 muhtemelen en yüksek terpen ve terpenoid değişkenliğine sahip vahşi büyüyen örnek olarak düşünülebilir. SEO2, CHNO bileşenlerinin büyük biyoçeşitliliğini (%30) sunarken, SEO3 en küçüğünü (%23) sunar. SEO1, en yüksek sayıda fosforile edilmiş bileşik içerir (hem CHOP hem de CHNOP). Son bir not olarak, terpenlerin ESI-MS'de kolayca iyonlaşmadığı fikrine göre, SEO2 (%1.5) ve SEOT arasında küçük farklılıklar olmakla birlikte, örneklenen tüm SEO'larda CH sınıfındaki türlerin miktarı %3'ü geçmez. (%2.8), gösterildiği gibiŞekil 4. 3.2. Uçucu Bileşenlerin GC-MS Analizi

SEO'ların GC-MS analizi ( Tablolar S6–S8 ), büyük ölçüde üst üste bindirilebilir üç kromatogram sergiledi (Tablo 2ve Tablolar S6–S8 ). Tespit edilen fitokimyasallar terpenler (%24,7–%30,6), terpenoidler (%66,5–72,8) ve seskiterpenler (%0,4–0,5) olarak sınıflandırılmıştır. Daha ayrıntılı olarak, en yüksek nispi bolluğa sahip bileşikler, SEO'lardır: karvakrol (%23,9-%29), izomeri timol (%14,5-16,5), linalool (%16,0-16,4), y-terpinen (%12,3) –%15,0), p- simen (%9,4–%12,3) ve okaliptol (%6,2–6,8). Karvakrol/timol (C/T) oranının [ 47 ], daha önce yayınlanmış kanıtlarla [ 43 ] karşılaştırıldığında önemli ölçüde farklı olduğunu gözlemledik . Ayrıca, SEOs1–3 ve ticari SEOT [ 23 ] (Tablo 2) birkaç önemli farklılığı gösterir: (i) SEOS1-3'ün karvakrol/timol (C/T) oranı [ 47 ], SEOT'da ölçülen 5.8 değerinden farklı olarak 1.6-1.8 arasında değişir. Bununla birlikte, SEOs1–3'te bulunmayan timol ve metil eteri ilgili hesaplamada gruplandırılırsa, SEOT C/T oranı 3,7'ye düşürülebilir. (ii) SEOs1–3'te önemli ölçüde bol olan Linalool ve okaliptol, SEOT'da tamamen yoktur. (iii) SEOs1–3'te tespit edilen γ-terpinen nispi bolluğu, SEOT örneğinde gözlemlenenin yaklaşık üç katıdır. Belirtilen tüm farklılıklara rağmen, üç bileşik sınıfının göreceli bolluğunun birbirine çok yakın olduğunu belirtmekte fayda var. Tablo 2

SEO 1-3 ve SEOT'un uçucu bileşenlerinin yüzdesi.

monoterpen	α-tujen	-	-	-	0.1
a-pinen	0,4	0,4	0,4	1.3
kafur	0.1	0.1	0,2	0,4
β-pinen	0,2	0,2	0,2	-
β-mirsen	0.1	0.1	0,5	0,6
3-karen	-	-	-	0,2
a-terpinen	-	-	-	0,8
p -simen	10.3	9.4	12.3	15.3
limonen	1.3	1.3	1.8	0.9
terpenoid	okaliptol	6.2	6.3	6.8	-
monoterpen	okimen	-	-	0,2	-
y-terpinen	12.3	14.7	15.0	4.5
terpenoid	linaloksit (cis)	0,4	0,2	0,2	-
monoterpen	terpinolen	-	-	-	0.1
terpenoid	linaloksit (trans)	0,3	0,2	0.1	-
linalool	16.1	16.0	16.4	-
kafur	0,2	0,2	0,3	0.1
borneol	-	-	0,5	3.1
terpinen-4-ol	-	-	-	1.2
y-terpineol	-	-	0,2	-
a-terpineol	1.5	1.5	1.6	-
timolmetileter	-	-	-	4.3
D-karvon	1.6	1.5	1.6	-
timol	16.5	16.1	14.5	7.6
karvakrol	29.0	28.7	23.9	43.9
öjenol	1.0	0,8	0,4	-
seskiterpen	β-karyofillen	0.1	0,2	0,4	3.4
α-humulen	-	-	0.1	-
karyofillenoksi	0,4	0,2	-	-
	tanımlanamayan	2.0	1.9	2.4	12.2
monoterpen		24.7	26.2	30.6	24.2
terpenoid		72.8	71.5	66.5	60.2
seskiterpen		0,5	0,4	0,5	3.4

Ayrı bir pencerede aç
^(a) Bakınız [ 23 ].

Son olarak, SEO3'teki karvakrol ve timol içeriğinin mutlak nicel analizi, bunların numunenin genel bileşimindeki gerçek alaka düzeyini değerlendirmek için gerçekleştirilmiştir. İlginç bir şekilde, gerçek kütle yüzdeleri (Tablo 3), rapor edilen GC-MS ile sonuçlanan nispi bolluklara çok yakındır. Tablo 2, analiz edilen EO'daki uçucu fraksiyonun hayati önemini gösterir. Tablo 3

SEO3'te timol ve karvakrolün kantitatif analizi.

karvakrol	29.9
timol	16.0

3.3. Satureja Montana L. Uçucu Yağ Nanoemülsiyonlarının Karakterizasyonu

Tüm dağıtım sistemleri SEO1, 2, 3 ve T ile hazırlandı ve en fazla terpen ve terpenoid sayısı ve daha büyük miktarlarda bulunabilirliği nedeniyle, yabani büyüyen türler arasında seçim örneği olarak SEO3 seçildi. Kimyasal fiziksel karakterizasyon parametreleri şurada raporlanmıştır:Tablo 4 ve Tablo 5. Kimyasal olarak DI-FTICR-MS, bu yağın doğal numuneler arasında yüksek terpen ve terpenoid varyansına sahip olduğunu göstermiştir. DLS ölçümleri (Şekil 6) farklı yüzey aktif madde oranlarının (tablo 1) farklı boyutlarda NE'lere yol açar (Tablo 4) ancak yüzey aktif madde içeriği arttıkça boyutun azaldığı belirtilebilir. Aynı yağ/yüzey aktif madde miktarı kullanılıyorsa, Hepes tamponundaki NE'lerin boyutları aynı aralıktaydı (A1–B1; A2–B2). Elektron mikroskobu gözlemleri (Şekil 7), tüm numunelerin DLS analizi ile ortaya çıkanlara karşılık gelen şekil ve boyutlarla neredeyse küresel göründüğünü gösterdi. Ayrıca, tüm numuneler negatif ζ-potansiyel değerleri gösterir.

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 6
NEs DLS ölçümleri.


Ayrı bir pencerede aç
Şekil 7
SEO NE'lerinin transmisyon elektron mikroskobu. Panel ( A ), A1 ve B1 nanoemülsiyonlarını temsil ederken, panel ( B ), A2 ve B2 NE'leri temsil ediyordu. Tablo 4

NE'lerin hidrodinamik çap (HD), ζ-potansiyel ve polidispersite indeksi (PDI) değerleri.

A1	118.40 ± 0.61	-19,00 ± 0,21	0.26 ± 0.01
A2	55,86 ± 0,93	-16.61 ± 1.06	0.18 ± 0.03
B1	95.05 ± 1.55	-13.02 ± 0.36	0.23 ± 0.01
B2	56.08 ± 1.17	-14,14 ± 0,25	0.17 ± 0.01

Tablo 5

NE yağ fazı karakterizasyonu.

A1	4,49 ± 0,07	1,62 ± 0,13
A2	4.04 ± 0.16	1,47 ± 0,23
B1	4,69 ± 0,11	1,44 ± 0,07
B2	3,79 ± 0,21	1,50 ± 0,06

NE'lerin kararlılığı karmaşık bir konudur ve tümü birbiriyle ilişkili olan kimyasal kararlılık ve fiziksel kararlılığı içerir. Stabilite gibi parametrelerin değerlendirilmesi (Şekil 8 ve Şekil 9) veya NEs yağ fazı karakterizasyonu (Tablo 5) gelecekteki potansiyel uygulamaları belirlemek için esastır. Stabilite çalışmaları, daha önce açıklanan yönteme göre yapıldı. Özellikle A1 ve B1 NE'ler, her iki deneysel sıcaklıkta da depolandığında en az 3 ay stabildir. Daha yüksek miktarda yüzey aktif madde ile karakterize edilen A2 ve B2, 25 °C'de daha belirgin olan önemli olmayan bir boyut artışı gösterir. Tüm numuneler, zamanla artan, önemli vezikül agregasyonunu önleyebilen ve NE'lerin stabilitesini arttırabilen negatif ζ-potansiyel değerleri gösterir.

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 8
A1–B1 NE'lerin 25 ve 4 °C'de stabilite çalışmaları.


Ayrı bir pencerede aç
Şekil 9
A2–B2 NE'lerin 25 ve 4 °C'de stabilite çalışmaları.

Klasik DLVO teorisi, katı kolloidler için geliştirilmiştir ve lipozom veya yağ nano damlacık yüzeyleri gibi çok hidrofilik sistem çalışmalarında DLVO olmayan kuvvetler dikkate alınmalıdır.

Amfipilik "kabuklar" deforme olabilir ve bu özelliğin nanosistem yüzeyindeki van der Waals potansiyeli üzerinde önemli bir etkisi olmalıdır [ 48 , 49 ].

İyonik olmayan yüzey aktif madde ile stabilize edilmiş nanoemülsiyonun zeta potansiyelinin negatif değerleri, Tweens'in oksietilen grubu ile su molekülleri arasında hidrojen bağı oluşumunun bir sonucu olarak yağ-su arayüzünde [ 50 ] hidroksil iyonunun seçici adsorpsiyonu ile ilişkilendirilebilir [ 50 ]. 51 ]. Ayrıca, Roger ve ark. emülsifiye sistemlerde negatif zeta potansiyeli değerlerine neden olan anyonik safsızlıkların varlığını bildirmiştir [ 52 ].

Zaman içinde zeta potansiyeli değerlerinin artması, su molekülleri ve yüzey aktif madde kutup başları arasında farklı bir etkileşimle sonuçlanan, yağ/su damlacık ara yüzeyinde hidroksil iyonlarının ve/veya anyonik safsızlıkların değiştirilmiş adsorpsiyonu ile ilgili olabilir.

Yağ fazı çalışmaları, daha önce tarif edildiği gibi floresan analizleri ile gerçekleştirilmiştir. NE'ler için kullanılan farklı yüzey aktif maddelerin yağ fazının özellikleri üzerindeki kalitatif ve kantitatif etkisi, Pyrene deneyleri ile araştırılmış ve elde edilen veriler gösterilmektedir.Tablo 5. NE'lerin polarite değerleri tüm numuneler için benzerdi, bu nedenle iki farklı yüzey aktif cisminin (Tween 20 veya Tween 80) varlığının, bunların farklı konsantrasyonlarının yanı sıra yağ fazı mikroviskozitesi ve polaritesi üzerinde hiçbir etkisi olmadığını gösterir. Kararlılık, mikroviskozite ve polarite eğiliminin temel olarak yağ fazının doğası ile ilgili olduğu sonucuna varmak mümkündür.

Salım çalışmaları da daha önce tarif edildiği gibi gerçekleştirilmiştir. NR'nin NE'lere göre salım profilleri şurada gösterilmektedir:Şekil 10. Elde edilen sonuçlardan, formülasyonda bulunan belirli bir miktarda NR'nin alıcı bölmede salındığını doğrulamak mümkündür. NR'nin NE'lerdeki tuzak verimliliği düşüktür ve salım yüzdesini etkiler. Bu davranış, probun kimyasal özelliklerine bağlıdır.

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 10
NEs tarafından Nil kırmızısı serbest bırakma profili. 3.4. Antimikrobiyal Duyarlılık Testleri

VITEK2 sistemi kullanılarak antimikrobiyal duyarlılık testleri yapıldı. Antibiyotik direnç profili şu şekilde gösterilir:Tablo 6. Suşların çoğu çoklu ilaca dirençlidir (MDR) (3 ≥ sınıf). Stafilokok suşlarının tümü, penisilinaz kararlı penisilinlere (Oksasilin) dirençlidir. L. monocytogenes , Gram pozitif enfeksiyonlara özgü bir antibiyotik olan daptomisine dirençliydi. Tablo 6

Antibiyotik direnç profili.

L. monositogenler	Oksasilin, Levofloksasin, Daptomisin
S. aureus (SA1)	Eritromisin, Fosfomisin, Gentamisin, Levofloksasin, Oksasilin, Rifampisin, Tetrasiklin, Sülfametoksazol/Trimetoprim
S. aureus (SA2)	Benzilpenisilin, Klindamisin, Eritromisin, Levofloksasin, Oksasilin
S. hemolitikus	Klindamisin, Eritromisin, Fosfomisin, Gentamisin, Levofloksasin, Oksasilin, Sülfametoksazol/Trimetoprim
E. koli	Tam duyarlı
K. pnömoni	Amoksisilin/Klavulanat, Sefepim, Sefotaksim, Seftazidim, Siprofloksasin, Fosfomisin, Gentamisin, Sülfametoksazol/Trimetoprim
P. aeruginosa	Amoksisilin/Klavulanat, Sefotaksim, Ertapenem, Fosfomisin, Tigesiklin, Sülfametoksazol/Trimetoprim
S. marcescens	Amoksisilin/Klavulanat, Colistin

3.5. EO'ların ve NE'lerin Antibakteriyel Aktivitesi

Sonuçlar, SEO'nun çoklu ilaç bakteri suşlarına karşı etkinliğini doğrulamaktadır. Diğer çalışmalara göre [ 24 , 53 , 54 ], rapor edildiği gibiTablo 7, MİK ve MBC değerleri 0,39 ile 6,25 mg·mL ^-1 arasında değişmektedir . Ticari SEOT, Gram pozitif ve Gram negatif bakterilere karşı en düşük MIC ve MBC değerlerini gösterdi. Çıkarılan laboratuvar arasında, SEO3 bakteri suşlarına karşı daha güçlü antimikrobiyal aktivite gösterdi. MIC ve MBC değerleri genellikle çakışıyordu. Sonuçlar, yağın hem klinik hem de referans suşlar olan S. aureus'a karşı benzer antibakteriyel aktivitesini gösterdi ; MİK değerleri 0.39-0.78 mg·mL ⁻¹ aralığında ve MBC 0.78 mg·mL ⁻¹ (Tablo 7). L. monocytogenes'e karşı , MİK 0.78–1.56 mg·mL ^-1 aralığındaydı ; MBC, MIC değerinin üzerinde bir konsantrasyondu. İle ilgili olarak , E. coli suşları, petrol için MIC ve MBC değeri aralığı 1,56-3,12 mg denk · ml ^-1 . Satureja cinsinin üyelerinin antimikrobiyal aktivitesi iyi bilinmektedir [ 3 , 24 , 25 ]. SEO'nun önemli antimikrobiyal aktivitesi, daha önce, muhtemelen membran hasarı yoluyla, karvakrol, timol ve terpinen-4-ol dahil olmak üzere ikincil metabolitlerdeki içeriği ile ilişkilendirilmiştir [ 19].]. Terpenlerin antimikrobiyal aktivite mekanizması tam olarak bilinmemekle birlikte, bu lipofilik bileşiklerin, mantarlarda olduğu kadar Gram-negatif ve Gram-pozitif bakterilerde hücre zarının yapısal ve fonksiyonel bütünlüğünü değiştirebileceği görülmektedir. Tablo 7

Farklı SEO'ların minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) ve minimum bakterisidal konsantrasyonu (MBC).

L. monositogenler	1.56	3.12	1.56	3.12	0.78	1.56	0.78	0.78
S. aureus (SA1)	3.12	3.12	1.56	3.12	1.56	1.56	0.78	0.78
S. aureus (SA2)	3.12	3.12	1.56	1.56	1.56	1.56	0.78	0.78
S. hemolitikus	3.12	3.12	1.56	1.56	1.56	1.56	0.78	0.78
E. koli	3.12	6.25	1.56	3.12	3.12	3.12	1.56	1.56
K. pnömoni	1.56	3.12	1.56	3.12	0.78	0.78	0.39	0.39
P. aeruginosa	3.12	3.12	3.12	3.12	3.12	3.12	1.56	1.56
S. marcescens	3.12	3.12	1.56	1.56	0.78	0.78	0.39	0.39

SEO'lar için MIC ve MBC. SEOT: ticari yağ; SEO1, SEO2 ve SEO3 _: laboratuvardan çıkarılan uçucu yağlar. Sonuçlar mg·mL ^-1 olarak ifade edilir .

NEs SEO3 formülasyonu, tek başına uçucu yağa kıyasla antimikrobiyal aktiviteyi korumayı ve iyileştirmeyi başardı. Gösterildiği gibiTablo 7 ve Tablo 8, NE formülasyonları, S. aureus , E. coli ve S. marcescens için MIC'de bir azalmaya neden oldu ve bu , bazı Gram-pozitif ve Gram-negatif bakteriyel patojenlere karşı umut verici bir bakterisidal aktivite olduğunu ortaya koydu [ 26 ]. Tablo 8

NE'lerin Gram-pozitif ve Gram-negatif bakteri suşlarına karşı antimikrobiyal aktivitesi.

L. monositogenler	0.78	1.56	1.56	1.56	1.56	1.56	1.56	1.56
S. aureus (SA1)	0.78	1.56	0.78	1.56	0.78	1.56	1.56	1.56
S. aureus (SA2)	0.78	1.56	0.78	1.56	0.78	1.56	1.56	1.56
S. hemolitikus	1.56	2.3	9.2	9.2	2.3	4.6	9.2	9.2
E. koli	0.39	0.78	1.56	1.56	0.39	1.56	1.56	1.56
K. pnömoni	0.78	0.78	1.56	1.56	0.78	0.78	1.56	1.56
P. aeruginosa	4.6	4.6	9.2	9.2	9.2	9.2	9.2	9.2
S. marcescens	0.78	0.78	0.78	1.56	0.39	0.78	1.56	1.56

SEO3 içeren NE'ler (A1, A2, B1, B2) için MIC ve MBC. Sonuçlar mg·mL ^-1 olarak ifade edilir . 3.6. Sitotoksisite Testleri

Birkaç çalışma, insan mesane hücrelerini içeren farklı kökenlerden gelen tümör hücre hatlarına yönelik uçucu yağların ve NE formülasyonlarının sitotoksik aktivitesini tanımlamıştır [ 55 , 56 ].

Olası SEO NEs uygulamaları arasında, kateter ilişkili idrar yolu enfeksiyonlarının tedavisinde tıbbi cihazı kateter olarak kaplayabilen bu formülasyonun antiseptik olarak kullanılması yararlı olabilir.

MTT tahlili kullanılarak, insan mesane hücreleri üzerinde SEO3 yağının ve NE'lerin sitotoksik aktiviteleri değerlendirildi. Uçucu yağa 24 kez maruz kaldıktan sonra hücre çizgisinin büyümesi doza bağlı bir şekilde engellendi. 50 µg·mL ^{-1 üzerindeki} değerler, önemli sitotoksik konsantrasyonlar olarak kabul edildi (S45). NE'lerle kompleks haline getirilmiş SEO3'e maruz kalan hücrelerin hayatta kalması, aynı miktarda serbest yağ ile muamele edilen numunelerde tespit edilenden önemli ölçüde daha yüksekti, bu da yağ/yüzey aktif madde NE preparasyonunda SEO'nun toksik etkisinin azaldığını gösteriyor. Özel olarak, 50 ug-ml ^-1 SEO3 (veriler gösterilmemiştir) NE zaman, muamele edilmemiş kontrol ile karşılaştırıldığında, sitotoksisite% 25 değeri yaklaşık 50 'dan%. Birkaç çalışma, farklı hücre hatlarına karşı karvakrol ve timolün önemli sitotoksik aktivitesini göstermiştir.57 , 58 , 59 , 60 ]; ayrıca, bazı yazarlar, küçük bileşenlerin, muhtemelen sinerjik etkiler üreterek farklı aktivitelerde rol oynadığını ve diğer bileşenlerin katkı sağlayan özelliklerinin göz ardı edilemeyeceğini göstermişlerdir [ 61 ].

Git: 4. Sonuçlar

FT ICR-MS'nin yüksek doğruluğu ve hassasiyetinin, SEO'lar üzerine bu çalışmada olduğu gibi, karmaşık karışımların kapsamlı bir araştırması için güçlü bir araç olduğu onaylanmıştır. Terpenler ve terpenoidler, polialkoller ve yağ asitleri dahil olmak üzere yüksek sayıda ikincil metabolit, SEO etkinliğini haklı çıkarmak için önemli bir nokta olarak kabul edilebilir. Aynı zamanda, doğrudan infüzyon FT-ICR MS ile belirlendiği gibi (daha az) polar metabolitlerin bileşimindeki dikkate değer değişkenliğin yanı sıra GC-MS tarafından ortaya konan nispeten daha yüksek karvakrol ve timol bolluğu, bizi şu sonuca götürür: SEO'nun antimikrobiyal özelliklerinin çoğunu bu fenolik bileşiklere atfeder. Ayrıca, SEO'ların ve yüzey aktif maddelerin uygun şekilde karıştırılması, nanometrik aralıkta damlacık hidrodinamik çapa sahip O/W nanoemülsiyonlarının oluşmasını sağladı,

Uçucu yağların seçilmiş moleküler bileşenlerinin antimikrobiyal etkiye katkısını tanımak, difüzyonu ve kalıcılığı geliştirmek ve bu malzemenin farmasötik amaçlarla potansiyel uygulamalarını keşfetmek için henüz tam olarak düşünülmemiş bitki çeşitliliğini karakterize etmek için daha ileri çalışmalara ihtiyaç vardır [ 62]. ].

SEO NE'ler, Gram pozitif ve Gram negatif klinik izolatlara karşı aktif olan umut verici bir çözümü temsil edebilir. Antibakteriyel aktiviteyi iyileştirmek için SEO NE'lerini aktif bileşiklerle yüklemek için daha ileri çalışmalar devam etmektedir. Bununla birlikte, bu çalışmada açıklanan SEO NE'leri, ilaçların çevresel etkisini ve antibiyotik direncini azaltmaya katkıda bulunabilecek yüzey dezenfeksiyon uygulamalarına uygulanmaya zaten uygun görünmektedir. Sonuç olarak, nanoemülsiyonların diğer dağıtım sistemlerine göre bir takım potansiyel faydaları vardır. Örneğin, yağlar, uçucu yağlar ve emülgatörler gibi nispeten ucuz olan çok çeşitli gıda ve farmasötik sınıf içeriklerden elde edilebilirler. Ayrıca, NE'ler, farmasötik ve gıda endüstrisinde halihazırda yaygın olarak kullanılan spesifik işleme operasyonları kullanılarak ticari ölçekte üretilebilir. yüksek basınçlı homojenizasyon, mikroakışkanlaştırma ve sonikasyon gibi. Açıkçası, ölçek büyütme, ticari olarak uygun ürünler geliştirmek için kritik öneme sahiptir ve bu nedenle, pilot ölçekte bir nanoemülsiyon formülasyonu da test edilmelidir. SEO NE üretimi için işleme koşulları, formülasyon ve işlem süresi ayarlanarak laboratuvar ölçeğinde optimize edildi. Pilot ölçekli üretim için NE'lerin potansiyelini test etmek için laboratuvar ölçekli sürecinkilere benzer hidrodinamik koşulların sağlanması önemli bir zorluk olacaktır. SEO NE üretimi için işleme koşulları, formülasyon ve işlem süresi ayarlanarak laboratuvar ölçeğinde optimize edildi. Pilot ölçekli üretim için NE'lerin potansiyelini test etmek için laboratuvar ölçekli sürecinkilere benzer hidrodinamik koşulların sağlanması önemli bir zorluk olacaktır. SEO NE üretimi için işleme koşulları, formülasyon ve işlem süresi ayarlanarak laboratuvar ölçeğinde optimize edildi. Pilot ölçekli üretim için NE'lerin potansiyelini test etmek için laboratuvar ölçekli sürecinkilere benzer hidrodinamik koşulların sağlanması önemli bir zorluk olacaktır.

Git: Teşekkür

Bu çalışma İtalyan Eğitim, Üniversiteler ve Araştırma Bakanlığı —Dipartimenti di Eccellenza—L. 232/2016 (İlaç Kimyası ve Teknolojileri Bölümü). Yazarlar, SEO2 ve SEO3'ün hazırlanmasından elde edilen vahşi büyüyen Satureja montana L.'nin tam çiçek açan bitkilerinin hava kısımlarının nazik hediyesi için M. Sarandrea'ya minnettardır .

Git: Ek Malzemeler

Aşağıdakiler çevrimiçi olarak https://www.mdpi.com/1999-4923/12/1/7/s1 , Şekil S1 adresinde mevcuttur . SEO3'ün ESI(−) FT-ICR kütle spektrumunun m / z 135–305 kütle aralığındaki kısmı. Belirgin zirve, karvakrol ve timol karışımlarına atanır ( m / z 149.09717), miristik, palmitik ve stearik serbest yağ asitleri sırasıyla m / z 227.20182, 255.23239 ve 283.26299'da kaydedilir . Şekil S2. SEOT'un APCI (+)-MS spektrumu. Bu iyonizasyon kaynağı, daha az polar metabolitlerin vurgulanmasını belirlemeye izin verdi. Ek, m / z'nin CID spektrumunu gösterir155 terpenenoidlerin karışımına atanmıştır (ana metne bakınız). Şekil S3. Panel A'da, APCI(+) MS analizi ile elde edilen protonlanmış limonenin ( m / z 137) CID spektrumları ; panel B'de, APCI(-) MS analizi ile elde edilen protonu giderilmiş limonen aldehit ( m / z 165) spektrumunun CID'si . Şekil S4. NEs DLS ölçümleri. Şekil S5. 24 saat sonra MTT tahlilleri ile değerlendirilen T-24 hücre hattı üzerinde SEO3 tarafından indüklenen sitotoksisite. Tablo S1. SEO1 Hedefsiz ESI FT-ICR Açıklamaları. Tablo S2. SEO2 Hedefsiz ESI FT-ICR Açıklamaları. Tablo S3. SEO3 Hedefsiz ESI FT-ICR Açıklamaları. Tablo S4. SEOT Hedefsiz ESI FT-ICR Açıklamaları. Tablo S5. Örneklenen SEO'ların ESI FT-ICR kütle analizi tarafından kaydedilen tepe sayısı. Tablo S6. Satureja montana'nın GC-MS analiziL. uçucu yağ (SEO1). Tablo S7. Satureja montana L. uçucu yağının (SEO2) GC-MS analizi . Tablo S8. Satureja montana L. uçucu yağının (SEO3) GC-MS analizi .
Ek veri dosyası için buraya tıklayın. ^{(631K, sıkıştırılmış)}
Git: Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma: CL, MEC, MC, FR, MGA, CM, CF, AF; Veri iyileştirme: AM, LV, LM (Linda Maurizi), AI; Resmi analiz: AM, LV, LM (Linda Maurizi), AI; Finansman temini: CL, SF; Soruşturma: AM, LV, LM (Linda Maurizi), AI; Metodoloji: CL, MEC, MC, FR, MGA; Proje yönetimi: CL; Kaynaklar: LM (Luigi Menghini), SF, PG, CL; Denetim: CL, MEC, MC, CM, CF; Doğrulama: CL, MEC, MC, FR, MGA, CM; Görselleştirme: AM, LV, AI; Yazma—orijinal taslak: CL, MEC, MC, FR, MGA, CM; Yazma—inceleme ve düzenleme: CL, MEC, MC, FR, MGA, CM Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okumuş ve kabul etmiştir.

Git: Finansman

Bu araştırma, Ricerca Scientifica 2016 “Sapienza” Üniversitesi tarafından C. Longhi'ye finanse edildi.

Git: Çıkar çatışmaları

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Git: Referanslar

1. Fatemeh J., Zahra L., Hossein A. Şifalı bitkiler: Geçmiş tarih ve gelecek perspektifi. J. Herbmed Pharmacol. 2018; 7 :1–7. doi: 10.15171/jhp.2018.01. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Bilia AR, Piazzini V., Asprea M., Risaliti L., Vanti G., Bergonzi MC Nanotaşıyıcılara yüklenen bitki özleri: Acil bir formüle etme yaklaşımı. Nat. Ürün Komün. 2018; 13 :1157–1160. doi: 10.1177/1934578X1801300914. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
3. Jafari F., Ghavidel F., Zarshenas MM Popüler satureja türlerinin farmakolojik ve klinik yönlerine eleştirel bir bakış. J. Akupunktur. Meridyen Saplaması. 2016; 9 :118–127. doi: 10.1016/j.jams.2016.04.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Chorianopoulos N., Kalpoutzakis E., Aligiannis N., Mitaku S., Nychas GJ, Haroutounian SA Satureja , Origanum ve Thymus türlerinin uçucu yağları : Gıda kaynaklı patojenlere karşı kimyasal bileşim ve antibakteriyel aktiviteler. J. Agric. Gıda Kimyası 2004; 52 :8261–8267. doi: 10.1021/jf049113i. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Milos M., Radonic A., Bezic N., Dunkic V. Satureja montana L. ve S. cuneifolia Ten'in uçucu yağlarının kimyasal bileşimindeki lokaliteler ve mevsimsel değişimler . Lezzet Frag. J. 2001; 16 :157–160. doi: 10.1002/ffj.965. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Kremer D., Košir IJ, Končić MZ, Čerenak A., Potočnik T., Srečec S., Randić M., Kosalec I. Satureja montana L. ve S. subspicata Vis'in Antimikrobiyal ve Antioksidan Özellikleri . (Lamiaceae) Kör. İlaç Hedefleri. 2015; 16 :1623-1633. doi: 10.2174/1389450116666150202161926. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
7. Elgndi MA, Filip S., Pavlić B., Vladić J., Stanojković T., Žižak Ž., Zeković Z. Uçucu yağların ve Satureja montana L., Coriandrum sativum L. ve Ocimum basilicum özlerinin antioksidan ve sitotoksik aktivitesi L. süperkritik sıvı ekstraksiyonu ile elde edilir. J. Supercrit. sıvılar 2017; 128 :128–137. doi: 10.1016/j.supflu.2017.05.025. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Cavar S., Maksimovic M., Solic ME, Jerkovic-Mujkic A., Besta R. İki Satureja esansiyel yağının kimyasal bileşimi ve antioksidan ve antimikrobiyal aktivitesi . Gıda Kimyası 2008; 111 :648-653. doi: 10.1016/j.foodchem.2008.04.033. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
9. Momtaz S., Abdollahi M. Satureja türlerinin farmakolojisi üzerine bir güncelleme ; Antioksidan, antimikrobiyal, antidiyabet ve antihiperlipidemiden üreme stimülasyonuna kadar. Int. J. Pharmacol. 2010; 6 :454-461. doi: 10.3923/ijp.2010.346.353. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
10. Souto-Maior FN, da Fonêca DV, Rodrigues Salgado PR, de Oliveira Monte L., de Sousa DP, de Almeida RN Monoterpen linalol oksitin antinosiseptif ve antikonvülsan etkileri. Eczacılık Biol. 2017; 55 :63-67. doi: 10.1080/13880209.2016.1228682. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Kustrak D., Kuftinec J., Blazevic N., Maffei M. Satureja montana'nın iki alt türünün uçucu yağ bileşiminin karşılaştırılması . J. Essent. Petrol Res. 1996; 8 :7-13. doi: 10.1080/10412905.1996.9700546. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Hazem SE, Ippolito C. Bazı Akdeniz esansiyel yağlarının insan sağlığı üzerindeki biyolojik etkilerine genel bir bakış. BioMed. Araş. Int. 2017; 2 :1–14. doi: 10.1155/2017/9268468. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Bakkali F., Averbeck S., Averbeck D., Idaomar M. Uçucu yağların biyolojik etkileri—Bir inceleme. Gıda Kimyası Toksikol. 2008; 46 :446-475. doi: 10.1016/j.fct.2007.09.106. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
14. Baydar H., Sağdıç Ö., Özkan G., Karadoğan T. Türkiye'de ticari önemi olan Origanum , Thymbra ve Satureja türlerinden elde edilen uçucu yağların antibakteriyel aktivitesi ve bileşimi . Gıda Kontrolü. 2004; 15 :169-172. doi: 10.1016/S0956-7135(03)00028-8. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Šućur J., Popović A., Petrović M., Anačkov G., Bursić V., Kiprovski B., Prvulović D. Satureja montana L. J. Serb'in sulu ekstraktlarının allelopatik etkileri ve böcek öldürücü aktivitesi . Kimya Soc. 2015; 80 :125–128. doi: 10.2298/JSC020714106S. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
16. Magi G., Marini E., Facinelli B. Uçucu yağların ve karvakrolün antimikrobiyal aktivitesi ve klinik, eritromisine dirençli Grup A Streptokoklara karşı karvakrol ve eritromisinin sinerjisi. Ön. Mikrobiyol. 2015; 6 :1–7. doi: 10.3389/fmicb.2015.00165. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Slavkovska V., Jancic R. Satureja montana L. (Lamiaceae) J. Essent türünün uçucu yağ bileşiminin değişkenliği. Petrol Res. 1997; 9 :629-634. doi: 10.1080/10412905.1997.9700801. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Chrpová D., Kourimska L., Gordon MH, Heřmanová V., Roubíčková I., Pánek J. Tıbbi durumlar için diyetlerde kullanılan seçilmiş fenollerin ve bitkilerin antioksidan aktivitesi. Çek J. Gıda Bilimi. 2010; 28 :317–335. doi: 10.17221/129/2010-CJFS. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Exarchou V., Nenadis N., Tsimidou M., Gerothanassis IP, Troganis A., Boskou D. Antioksidan aktiviteler ve Yunan kekik, Yunan adaçayı ve yaz kokulu ekstraktların fenolik bileşimi. J. Agric. Gıda Kimyası 2002; 50 :5294–5299. doi: 10.1021/jf020408a. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Tepe B., Çilkiz M. Satureja'ya farmakolojik ve fitokimyasal bir bakış . Eczacılık Biol. 2016; 54 :375–412. doi: 10.3109/13880209.2015.1043560. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Hajdari A., Mustafa B., Kaçiku A., Mala X., Lukas B., Ibraliu A., Stefkov G., Novak J. Uçucu yağın kimyasal bileşimi, toplam fenolikler, toplam flavonoidler ve metanolik antioksidan aktivitesi özütleri Satureja montana L. Rec. Nat. Ürün 2016; 10 :750–760. [ Google Akademik ]
22. Aziz ZAA, Ahmad A., Setapar SHM, Karakucuk A., Aziz MM, Rafatullah M., Ganash M., Kamal MA, Ashraf GM Essential yağlar: Ekstraksiyon teknikleri, farmasötik ve terapötik potansiyel—A inceleme. Kör. İlaç Metab. 2018; 19 :1100–1110. doi: 10.2174/1389200219666180723144850. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Périno-Issartier S., Ginies C., Cravotto G., Chemat F. Lavandinden farklı ekstraksiyon işlemleriyle elde edilen uçucu yağların karşılaştırılması: Ultrason, mikrodalga, turbohidrodistilasyon, buhar ve hidrodistilasyon. J. Kromatogr. C. 2013; 1305 :41–47. doi: 10.1016/j.chroma.2013.07.024. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Vitanza L., Maccelli A., Marazzato M., Scazzocchio F., Comanducci A., Fornarini S., Crestoni ME, Filippi A., Fraschetti C., Rinaldi F., et al. Satureja montana L. esansiyel yağı ve antimikrobiyal aktivitesi tek başına veya gentamisin ile kombinasyon halinde. Mikrop. Patog. 2019; 126 :323–331. doi: 10.1016/j.micpath.2018.11.025. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Chouhan S., Sharma K., Guleria S. Bazı uçucu yağların antimikrobiyal aktivitesi—Mevcut durum ve gelecek perspektifleri. İlaçlar. 2017; 4 : 58. doi: 10.3390/ilaçlar4030058. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
26. Krishnamoorthy R., Athinarayanan J., Periasamy VS, Adisa AR, Al-Shuniaber MA, Gassem MA, Alshatw AA Nanoemülsiyonun ilaca dirençli bakteriyel patojenler üzerindeki antimikrobiyal aktivitesi. Mikrop. Patog. 2018; 120 :85-96. doi: 10.1016/j.micpath.2018.04.035. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Roullier-Gall C., Witting M., Moritz F., Gil RB, Goffette D., Valade M., Schmitt-Kopplin P., Gougeon RD Şampanya şarabının tortularda yaşlanma sırasında doğal oksijenlenmesi: Hormesisin metabolomik resmi . Gıda Kimyası 2016; 203 :207–215. doi: 10.1016/j.foodchem.2016.02.043. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
28. Maia M., Monteiro F., Sebastiana M., Marques AP, Ferreira AEN, Freire AP, Cordeiro C., Figueiredo A., Silva MS Asma yapraklarının yüksek verimli FTICR-MS tabanlı metabolomikleri için Metabolit ekstraksiyonu. EuPA Açık Proteom. 2016; 12 :4–9. doi: 10.1016/j.euprot.2016.03.002. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Wägele B., Witting M., Suhre K. MassTRIX yeniden yüklendi: Transkriptome ve metabolom verilerinin birleşik analizi ve görselleştirilmesi. PLoS BİR. 2012; 7 :e39860. doi: 10.1371/journal.pone.0039860. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
30. Guijas C., Montenegro-Burke JR, Domingo-Almenara X., Palermo A., Warth B., Hermann G., Koellensperger G., Huan T., Uritboonthai W., Siuzdak G. METLIN: Bir teknoloji platformu bilinenleri ve bilinmeyenleri belirlemek. Anal. Kimya 2018; 90 :3156–3164. doi: 10.1021/acs.analchem.7b04424. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Patiny L., Borel A. ChemCalc: Yarının kimyasal altyapısı için bir yapı taşı. J. Chem. Enf. modeli. 2013; 53 :1223–1228. doi: 10.1021/ci300563h. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Kim S., Kramer RW, Hatcher PG Doğal organik maddenin ultra yüksek çözünürlüklü geniş bant kütle spektrumunun analizi için grafik yöntem, van Krevelen diyagramı. Anal. Kimya 2003; 75 :5336–5344. doi: 10.1021/ac034415p. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
33. Rinaldi F., Hanieh PN, Longhi C., Carradori S., Secci D., Zengin G., Ammendolia MG, Mattia E., Del Favero E., Marianecci C., et al. Neem Yağı Nanoemülsiyonları: Karakterizasyon ve antioksidan aktivite. J. Enzim. Engelle. Med. Kimya 2017; 32 :1265–1273. doi: 10.1080/14756366.2017.1378190. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
34. Zachariasse KA Sodyum dodesil sülfat miselleri için bir mikroakışkanlık probu olarak diarilalkanlarla molekül içi eksimer oluşumu. Kimya Fizik Lett. 1978; 57 :429–432. doi: 10.1016/0009-2614(78)85541-9. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
35. Ingallina C., Rinaldi F., Bogni A., Ponti J., Passeri D., Reggente M., Rossi M., Kinsner-Ovas Kainem A., Mehn D., Rossi F., et al. Beyin dağıtımına niozomal yaklaşım: Geliştirme, karakterizasyon ve in vitro toksikolojik çalışmalar. Int. J. Ecz. 2016; 511 :969-982. doi: 10.1016/j.ijpharm.2016.08.002. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
36. Rinaldi F., Del Favero E., Moeller J., Hanieh PN, Passeri D., Rossi M., Angeloni L., Venditti I., Marianecci C., Carafa M., et al. Niozomlara yüklenen hidrofilik gümüş nanopartiküller: Biyolojik uygulamalar açısından fiziksel-kimyasal karakterizasyon. Nanomater. Basel. 2019; 9 :1177. doi: 10.3390/nano9081177. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
37. Murbach Teles Andrade BF, Nunes Barbosa L., da Silva Probst I., Fernandes Júnior A. Uçucu yağların antimikrobiyal aktivitesi. J. Essent. Petrol Res. 2014; 26 :34-40. doi: 10.1080/10412905.2013.860409. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
38. Dettmer K., Aronov PA, Hamak BD Kütle spektrometrisi tabanlı metabolomikler. Kütle Spektromu. Rev. 2007; 26 :51-78. doi: 10.1002/mas.20108. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
39. Becker L., Poutaraud A., Hamm J., Muller JF, Merdinoglu D., Carré V., Chaimbault P. Negatif iyon elektrosprey kullanılarak tüylü küf ile enfekte olmuş asma yapraklarının metabolik çalışması—Fourier transform iyon siklotron rezonans kütle spektrometrisi. Anal. Chim. Acta. 2013; 795 :44-51. doi: 10.1016/j.aca.2013.07.068. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
40. Kirwan JA, Weber RJ, Broadhurst DI, Viant MR Doğrudan infüzyon kütle spektrometrisi metabolomik veri seti: Veri işleme ve kalite kontrol için bir kıyaslama. bilim Veri. 2014; 1 :140012. doi: 10.1038/sdata.2014.12. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
41. Pascale R., Bianco G., Cataldi TRI, Schmitt-Kopplin P., Bosco F., Vignola L., Uhl J., Lucio M., Milella L. Fagioli di'nin hipoglisemik aktivitesi için kütle spektrometrisine dayalı fitokimyasal tarama Sarconi fasulyesi ( Phaseolus vulgaris L.) Gıda Chem. 2018; 242 :497-504. doi: 10.1016/j.foodchem.2017.09.091. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
42. Sobolev AP, Mannina L., Capitani D., Sanzò G., Ingallina C., Botta B., Fornarini S., Crestoni ME, Chiavarino B., Carradori S., et al. İtalyan PDO “Cornetto di Pontecorvo” kırmızı tatlıbiber çalışmasında çoklu metodolojik bir yaklaşım. Gıda Kimyası 2018; 255 :120–131. doi: 10.1016/j.foodchem.2018.02.050. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
43. Bilia AR, Cioni P., Morelli I. Satureja montana L. ssp. Montana . Farklı Çevre Koşullarında Yetiştirilen Bitkilerin Bileşimi ve Verimleri. J. Essent. Petrol Res. 1992; 4 :563–568. doi: 10.1080/10412905.1992.9698136. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
44. Pellegrini M., Ricci A., Serio A., Chaves-López C., Mazzarrino G., D'Amato S., Lo Sterzo C., Paparella A. Abruzzo otokton bitkilerinden elde edilen uçucu yağların karakterizasyonu: Antioksidan ve gıda uygulaması için antimikrobiyal aktivite değerlendirmesi. yiyecekler. 2018; 7 : 19. doi: 10.3390/foods7020019. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
45. Souto-Maior FN, de Carvalho FL, de Morais LC, Netto SM, de Sousa DP, de Almeida RN Deneysel fare kaygı modellerinde solunan linalool oksitin anksiyolitik benzeri etkileri. farmakol. Biyokimya. Davran. 2011; 100 :259–263. doi: 10.1016/j.pbb.2011.08.029. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
46. Ruiz JJ, Alonso A., Garcìa-Martìnez S., Valero M., Blasco P., Ruiz-Bevia F. Aroma uçucularının kantitatif analizi, yakından ilişkili geleneksel domates çeşitleri arasındaki farklılıkları tespit eder. J. Sci. Gıda Tarımı. 2005; 85 :54–60. doi: 10.1002/jsfa.1879. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
47. Rùa J., del Valle P., de Arriaga D., Fernández-Álavarez L., García-Armesto MR Karvakrol ve timol kombinasyonu: Staphylococcus aureus'a karşı antimikrobiyal aktivite ve antioksidan aktivite. Gıda. Yol. Dis. 2019; 16 :622–629. doi: 10.1089/fpd.2018.2594. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
48. Labhasetwar V., Mohan MS, Dorle AK Lipozomların zeta potansiyeli ve dielektrik sabiti üzerine bir çalışma. J. Mikroenkapsül. 1994; 11 :663–668. doi: 10.3109/02652049409051117. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
49. Tsermentseli SK, Kontogiannopoulos KN, Papageorgiou VP, Assimopoulou VP Şikonin için taşıyıcılar olarak PEGile edilmiş ve geleneksel lipozomların karşılaştırmalı çalışması. sıvılar 2018; 3 : 36. doi: 10.3390/sıvılar3020036. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
50. Stachurski J., MichaŁek M. Polar olmayan bir su içinde yağ emülsiyonunun stabilitesi üzerindeki ζ potansiyelinin etkisi. J. Kolloid Arayüz Sci. 1996; 184 :433–436. doi: 10.1006/jcis.1996.0637. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
51. Liu W., Sun D., Li C., Liu Q., Xu J. Emülsiyon ters çevirme noktası yöntemiyle hazırlanan parafin su içinde yağ nano emülsiyonlarının oluşumu ve stabilitesi. J. Kolloid Arayüz Sci. 2006; 303 :557–563. doi: 10.1016/j.jcis.2006.07.055. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
52. Roger K., Cabane B. Hidrofobik/su arayüzleri neden negatif yüklü? Ange. Kimya Int. Ed. 2012; 51 :5625–5628. doi: 10.1002/anie.201108228. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
53. Yousefzadi M., Riahi-Madvar A., Hadian J., Rezaee F., Rafiee R., Biniaz M. Satureja khuzistanica'nın uçucu yağının toksisitesi: In vitro sitotoksisite ve anti-mikrobiyal aktivite. J. İmmünotoksikol. 2013; 11 :1–6. doi: 10.3109/1547691X.2013.789939. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
54. Javad Sharifi-Rad J., Sharifi-Rad M., Hoseini-Alfatemi SM, Iriti M., Majid Sharifi-Rad M., Sharifi-Rad M. Satureja intermedia CA mey esansiyel yağının bileşimi, sitotoksik ve antimikrobiyal aktiviteleri. Int. J. Mol. bilim 2015; 16 :17812–17825. doi: 10.3390/ijms160817812. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
55. Sadeghi I., Yousefzadi M., Behmanesh M., Sharifi M., Moradi A. Satureja intermedia'dan uçucu yağın in vitro sitotoksik ve antimikrobiyal aktivitesi. İran. Kırmızı. Hilal Med. J.2013 ; 15 :70-74. doi: 10.5812/ircmj.4989. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
56. Gomes MRF, Schuh RS, Jacques ALB, Augustin OA, Bordignon SAL, Dias DO, Kelmann RG, Koester LS, Gehring MP, Morrone FB, ve diğerleri. Drimys angustifolia ve D. brasiliensis'in uçucu yağlarının ve nanoemülsiyonlarının insan glioblastoma (U-138 MG) ve insan mesane karsinomu (T24) hücre hatları üzerinde in vitro sitotoksik aktivite değerlendirmesi . Rev. Sütyen. Farmacogn. 2013; 23 :259–267. doi: 10.1590/S0102-695X2012005000136. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
57. Kundaković T., Stanojković T., Kolundzija B., Marković S., Sukilović B., Milenković M., Lakusić B. Satureja montana subsp. pisidica (Lamiaceae). Nat. Ürün Komün. 2014; 9 :569-572. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
58. Liang WZ, Lu CH Carvacrol ile indüklenen [Ca ²⁺ ] i, insan glioblastoma hücrelerinde yükselir ve apoptoz. Hayat Bilimi. 2012; 90 :703–711. doi: 10.1016/j.lfs.2012.03.027. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
59. Hsu SS, Lin KL, Chou CT, Chiang AJ, Liang WZ, Chang HT, Tsai JY, Liao WC, Huang FD, Huang JK, ve diğerleri. Timolün insan glioblastoma hücrelerinde Ca2 ⁺ homeostazı ve canlılığı üzerindeki etkisi . Avro. J. Pharmacol. 2011; 670 :85–91. doi: 10.1016/j.ejphar.2011.08.017. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
60. Tzou Chi Huang T., Ting Lin Y., Pin Chuang K. Carvacrol, C6 glioma hücrelerinde reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretiminin başlatıcı etkilerine sahiptir. Gıda Tarımı. immünol. 2010; 21 :47-55. doi: 10.1080/09540100903418842. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
61. Burt S. Uçucu yağlar: Antibakteriyel özellikleri ve gıdalardaki potansiyel uygulamaları—Bir inceleme. Int. J. Gıda Mikrobiol. 2004; 94 :223–253. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2004.03.022. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
62. Bilia AR Antiplazmodiyal Aktiviteye Sahip Azotlu Olmayan Bitki Türevli Bileşenler. Nat. Ürün Komün. 2006; 1 :1181–1204. doi: 10.1177/1934578X0600101218. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]