Duyuru

***maturidi*** · 22 July 2019, 17:05

Schinus terebinthifolius Raddi'nin Yapraklarındaki Metanol Fraksiyonunun Nöropatik Ağrılı Sıçanlarda Nosisepsiyon ve Omurilik Oksidatif Biyobelirteçler Üzerine Etkileri .

Scheid T ¹ , Moraes MS ¹ , Henriques TP ¹ , Eyfel APK ¹ , Belló-Klein A ¹ , Poser GLV ² , Ethur EM ³ , Partata WA ¹ . Yazar bilgileri

soyut

Schinus terebinthifolius'un yapraklarından elde edilen fraksiyonların antioksidan potansiyelini belirledikBrezilya'da aroeira olarak bilinen ve en iyi verim ve antioksidan performansa sahip fraksiyonu seçmek için kullanılan bir şifalı bitki. Bu nitelikler, nöropatik bir ağrı modeli olan siyatik sinirin kronik daralma yaralanmasına (CCİ) sahip sıçanlara periton içine (20 mg / kg / gün) 3 ve 10 gün boyunca uygulanan metanol fraksiyonunda (MeF) bulundu. MeF, CCİ'nin düşürdüğü mekanik ve termal eşikleri arttırdı. Buna paralel olarak, lumbosakral omurilik, süperoksit dismutazda bir artış gösterdi, ancak salin ve MeF ile muamele edilmiş CCI sıçanlarında glutatyon peroksidaz ve glutatyon-S-transferaz aktivitelerinde bir azalma gösterdi. Katalaz aktivitesi sadece tuzlu su ile tedavi edilen CCİ sıçanlarında 10 gün boyunca azaldı. Total tioller salin ve MeF ile tedavi edilen CCI sıçanlarında azalmıştır. Askorbik asit, 3. günde bu sıçanlarda artmış, ancak sadece 10. günde salinle muamele edilmiş CCI sıçanlarında artmıştır. Hidrojen peroksit ve lipid hidroperoksitte herhangi bir değişiklik bulunamadı. Açık alan ve yüksek artı labirent testleri ve karaciğer fonksiyonunun kan parametreleri değişmedi. Böylece, MeF yapraklarındanS. terebinthifolius , toksik etkisi olmayan antinosiseptif bir etkiye sahiptir ve CCI ile sıçanların omuriliğindeki oksidan biyobelirteçlerini etkiler.

***maturidi*** · 22 July 2019, 17:07

Effects of Methanol Fraction from Leaves of Schinus terebinthifolius Raddi on Nociception and Spinal-Cord Oxidative Biomarkers in Rats with Neuropathic Pain

Taína Scheid,¹ Maira Silmara Moraes,¹ Thiago Pereira Henriques,¹ Ana Paula Konzen Riffel,¹ Adriane Belló-Klein,¹ Gilsane Lino Von Poser,² Eduardo Miranda Ethur,³ and Wania Aparecida Partata¹
¹Department of Physiology, Institute of Basic Health Sciences, University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS, Brazil
²Institute of Pharmacy, University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS, Brazil
³Department of Exact and Technological Sciences, UNIVATES, Lajeado, RS, Brazil

Correspondence should be addressed to Wania Aparecida Partata; partataw@gmail.com

Received 30 January 2018; Accepted 2 April 2018; Published 3 May 2018

Academic Editor: Ke Ren

Copyright © 2018 Taína Scheid et al. This is an open access article distributed under the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. Abstract

We determined the antioxidant potential of fractions obtained from leaves of Schinus terebinthifolius, a medicinal plant known in Brazil as aroeira, to select the fraction with the best yield and antioxidant performance. These qualities were found in the methanol fraction (MeF), which was administered intraperitoneally (20 mg/kg/day) for 3 and 10 days to rats with chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve, a model of neuropathic pain. The MeF increased the mechanical and thermal thresholds that had been lowered by CCI. In parallel, the lumbosacral spinal cord showed an increase in superoxide dismutase but a decrease in glutathione peroxidase and glutathione-S-transferase activities in saline- and MeF-treated CCI rats. Catalase activity decreased only in saline-treated CCI rats for 10 days. Total thiols decreased in saline- and MeF-treated CCI rats. Ascorbic acid increased in these rats at day 3 but only in saline-treated CCI rats at day 10. No change was found in hydrogen peroxide and lipid hydroperoxide. Open-field and elevated plus-maze tests and blood parameters of liver function did not change. Thus, the MeF from leaves of S. terebinthifolius has an antinociceptive action with no toxic effects, and it affects oxidant biomarkers in the spinal cord of rats with CCI. 1. Introduction

Neuropathic pain, which arises as a direct consequence of a lesion or disease affecting the somatosensory system, affects 6.0–10% of the population and negatively impacts the quality of life of patients [1]. The pathophysiological mechanisms are not fully understood [2]. The lack of effective analgesic has impelled a continuing search to find novel molecules with beneficial effects in neuropathic pain. Natural products appear to be the most promising sources of new drugs [3], and the identification of bioactive compounds from plants that may be used to treat neuropathic pain has been a highly active area of pharmaceutical research.

Recently, Piccinelli et al. [4] demonstrated that the essential oil of Schinus terebinthifolius Raddi (Anacardiaceae), a plant native to South America and widely distributed in Brazil, popularly known as aroeira [5], induced antinociception in rats with spared nerve injury-induced neuropathic pain. In pain studies, each animal model has been created with a specific methodology, and the results tend to vary widely with slight changes in the methodology used to induce pain; therefore, it is essential that data from different pain models be reported and interpreted in the context of the specific pain model [6]. An answerable question is whether extracts from S. terebinthifolius have an antinociceptive effect in rats with chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve. Rats with CCI are one of the most commonly employed animal models of neuropathic pain; CCI simulates the symptoms of chronic nerve compression that correspond to causalgia or complex regional pain syndrome in human patients [6].

Saponins, triterpenes, steroids [7], and phenolic compounds [8] have been found in extracts from S. terebinthifolius. Many of these compounds are scavengers of reactive oxygen species (ROS), which are formed in several circumstances including normal cellular metabolism, and participate in a number of functions, for instance, in pain modulation [9, 10]. Antioxidant agents have been tested to treat neuropathic pain [11, 12], but the effects of treatment with extracts from S. terebinthifolius on oxidative biomarkers in nervous tissue have not been investigated.

The present study was designed to investigate the antinociceptive effect of a fraction rich in antioxidant compounds obtained from S. terebinthifolius in rats with CCI-induced neuropathic pain and also to explore the effect of this fraction on prooxidant and antioxidant markers in the lumbosacral spinal cord. Since the yield of the methanol fraction (MeF) was highest and this fraction showed good antioxidant activity, this fraction was chosen to be intraperitoneally administered (20 mg/kg/day) for 3 and 10 days in rats with CCI. Then, the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), and glutathione-S-transferase (GST) and the total contents of thiols and ascorbic acid were assessed as antioxidant status markers in the lumbosacral spinal cord of rats with CCI. We also assessed the levels of lipid hydroperoxides and hydrogen peroxide (H₂O₂) in this tissue, as prooxidant status markers.

Our study also evaluated the locomotor and anxiety-like behaviors of the rats, using open-field (OF) and elevated plus-maze (EPM) tests, respectively; the blood parameters of gamma-glutamyltransferase (GGT), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and bilirubin; and the body weight in naive rats 10 days after treatment, to reveal possible side effects of the treatment. 2. Materials and Methods

2.1. Plant Material and Preparation of Fractions

After authorization by the Conselho de Gestão do Patrimônio Genético (CGEN – 010738/2013-4), leaves of S. terebinthifolius were collected at Lajeado, Rio Grande do Sul, Brazil, and authenticated through the Department of Botany, Federal University of the Rio Grande do Sul, where the voucher specimen (number 166738) was deposited. The fractions were obtained by successive extractions of dried and powdered leaves, starting with n-hexane (He) and followed by dichloromethane (Dc), ethyl acetate (Et), and methanol (Me) by static maceration (0.5 L of solvent, daily exchanges for 12 days, for each solvent). The extractive solutions were evaporated to dryness under vacuum at low temperature (°C) and stored at 8°C. The yields of the fractions were HeF (3.84%), DcF (1.49%), EtF (1.63%), and MeF (5.30%). 2.2. Antioxidant Properties of Schinus terebinthifolius Fractions

2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Radical Scavenging Activity. The free radical scavenging activity of the fractions and antioxidant standards ascorbic acid and butylated hydroxytoluene (BHT) in different concentrations (25–500 μg/mL) were measured [13]. All experiments were repeated three times independently. The percentage inhibition of DPPH free-radical scavenging activity was calculated using the following equation: DPPH inhibition% = , where is the absorbance of the control reaction (3 mL of methanol and 1 mL of DPPH solution, without a sample of extracts) and is the absorbance in the presence of the fractions or standards. The % inhibition data were then plotted versus the concentration and graphed, and the IC₅₀ (half-maximal inhibitory concentration) value was calculated by linear regression analysis.

Hydroxyl Radical Scavenging Activity. This assay quantified hydroxyl radicals indirectly through the 2-deoxy-D-ribose degradation product, malondialdehyde, as described by Chobot [14], using fractions and BHT in different concentrations (25–250 μg/mL). Assays were performed in triplicate and the results were expressed in IC₅₀ values.

Total Reactive Antioxidant Potential (TRAP). The TRAP was determined by measuring the chemiluminescence (CL) intensity of luminol induced by ABAP, as described by Dresch et al. [15]. The CL was measured in a liquid scintillation counter (LKB Rack Beta Liquid Scintillation Spectrometer-1215, Sweden) using fractions at concentrations of 2.5, 5.0, 10.0, and 25.0 μg/mL. The Trolox equivalents of the sample were calculated using a standard curve of Trolox.

Phytochemical Screening. Qualitative phytochemical analysis of Schinus terebinthifolius fractions was carried out by TLC (Silicagel, 60 F₂₅₄) to evaluate the presence of alkaloids, anthracene derivatives, triterpenes/steroids, phenolic compounds in general, coumarins, flavonoids, and saponins as described by Wagner and Bladt [16].

Determination of Total Phenolic Content. The total phenolic content was determined as described by Siatka and Kašparová [13]. Results were expressed as milligram-equivalents of gallic acid per g of extract (EGA mg/g). All analyses were carried out in triplicate. 2.3. Animals and Treatment

Animal procedures were approved by the Ethics Committee of the Federal University of Rio Grande do Sul (# 19388). Male Wistar rats (230–290 g) were randomly and blindly divided into three experimental groups (naive, Sham, and CCI), and each was further divided into two subgroups (/subgroup), which received MeF at a dose of 20 mg/kg/day or 0.9% saline solution, intraperitoneally, for 3 and 10 d. The choice of dose was guided by previous studies that also employed alcoholic extracts of S. terebinthifolius and showed anti-inflammatory effects [17] and absence of genotoxic and mutagenic effect [18]. The time of study (3 and 10 days) was chosen because our previous studies showed that the spinal-cord oxidative biomarkers changed in rats with CCI-induced neuropathic pain [12]. Since the literature contains study showing that the extract of S. terebinthifolius may be used with both routes of administration (oral and intraperitoneal) [19], intraperitoneal administration was chosen because the basic goal of this drug delivery is to increase the local drug concentration and the duration of drug exposure while decreasing systemic drug toxicity [20]. The administration started on the day of surgery (after recovery from anesthesia) and was performed daily at 17:00 h by the same researcher. 2.4. Induction of Chronic Constriction Injury (CCI)

After anesthesia (90 mg/Kg ketamine and 10 mg/Kg xylazine), the right common sciatic nerve was exposed proximal to its trifurcation via a mid-thigh incision, and four ligatures (4.0 Shalon Chromic Catgut) were tied loosely around it as described by Bennett and Xie [21], with slight modifications [12]. After nerve ligation, the muscle and skin layer were immediately sutured with thread and a topical antibiotic was applied. To expose the sciatic nerve in Sham rats, all surgical procedures involved in the CCI were used except the ligature. 2.5. Thermal and Mechanical Thresholds

Rats were subjected to sensitivity assessments before the surgical procedure (day 0) and at 3, 5, 7, and 10 days after surgery. Thermal hyperalgesia was measured by placing the rats on a hot plate maintained at 50°C (±2°C). Withdrawal latency was considered as when the animal jumped or licked a hind paw, independently of the side. A cutoff time of 30 s was employed to prevent tissue injury.

To measure mechanical sensitivity, the responses of the injured hindpaw to electronic von Frey apparatus (Insight, Brazil) were measured. For this, increasing pressure was applied against the plantar surface. A positive response was indicated by an abrupt withdrawal of the paw, and the intensity of the pressure was automatically recorded (in grams). A single trial consisted of five applications of the plastic tip, once every 5–10 s. The mean of five readings was taken as the threshold for a particular timing trial.

Behavioral assessments were conducted at the same time of day (08:00 h) and by the same researcher. 2.6. Locomotor and Anxiety-Like Behaviors

Naive rats were divided into two groups (/group) that received saline or MeF (20 mg/kg/d, intraperitoneally). The tests were performed in the morning, but on separate days to avoid stress to the animals. The OF were performed after 9 days of treatment (day 10 after CCI) and the EPM were conducted after 10 days of injections (day 11 after CCI). The EPM was assessed as described by de Souza et al. [22]. For the OF, an apparatus that consists of a brightly illuminated circular arena (90 cm diameter, 50 cm-high walls) with the floor marked in 12 sectors by concentric circles was used. 2.7. Preparation of Tissue Samples

The body weight was evaluated in naive rats that received saline and MeF (20 mg/kg/d) for 10 days. The weight of animals was recorded before the start of the injections (day 0) and at the end of the treatment period (day 11).

All rats were killed by decapitation and blood and lumbosacral spinal cord were promptly collected. The blood was centrifuged (Sorvall RC 5B, Rotor SM 24) for 20 min at 1000 ×g and the plasma was used to determine GGT, AST, ALT, and bilirubin (Labtest). Commercially available kits (LABTEST) were used for these assays.

The spinal cord was immediately divided into two parts. One part was cooled in liquid nitrogen and processed to determine H₂O₂. Another part was homogenized in 1.15% KCl diluted 1 : 5 (w/v) containing 1 mmol/L phenylmethylsulfonyl fluoride. The homogenates were centrifuged at 800 ×g for 20 min at 4°C to remove the nuclei and cell debris. The supernatant was frozen at −80°C and used for assays of the antioxidant parameters. 2.8. Determination of Antioxidant Enzyme Activities

The activity of SOD was measured based on its action to neutralize the superoxide radicals to prevent oxidation of adrenalin to adrenochrome, a colorful byproduct that can be measured at 480 nm. The reaction medium contained glycine buffer (50 mM, pH 11.3) and adrenalin (60 mM, pH 2.0) and the results were expressed as units per milligram of protein [23].

The CAT activity was determined at 240 nm in a reaction medium containing phosphate buffer (0.1 M, pH 7.4) and H₂O₂ (0.88 M), and the results were expressed as pmol of H₂O₂ reduced per minute per milligram of protein [24].

The GPx activity was measured at 340 nm and the reaction medium contained phosphate buffer (140 mM, pH = 7.5), EDTA (1 mM), NADPH (0.24 mM), sodium azide (1 mM), GSH (5 mM), glutathione reductase (0.25 U/mL), and tertiary butyl hydroperoxide (0.5 mM) [25]. Results were expressed as nmoles of peroxide/reduced hydroperoxide per minute per milligram of protein.

GST activity, expressed as nanomoles per milligram of protein, was measured by the rate of formation of dinitrophenyl-S-glutathione at 340 nm [26]. 2.9. Determination of Ascorbic Acid and Total Thiol Levels

Ascorbic acid (AA) concentration was determined according to method described by Roe and Kuether [27]. The assay mixture contained 0.3 mL homogenate treated with charcoal and filtered, 0.01 mL 10% thiourea, and 0.075 mL 2% 2,4-Dinitrophenylhydrazine and was incubated at 37°C for 3 h. Following this, color was produced by adding 0.375 mL 85% sulfuric acid and the absorbance was read at 540 nm. Standard curve was prepared by using different concentration of AA and slope was used to express amount of AA as micromole of AA per milligram of protein.

The total thiol content was determined as described by Aksenov and Markesbery [28]. The reaction medium contained phosphate/EDTA buffer (pH = 7.5) and 5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic) acid (DTNB, 10 mM). After 30 minutes of incubation, the absorbances were read at 412 nm. Results were expressed as micromoles of TNB per milligram of protein. 2.10. Determination of H₂O₂ and Lipid Hydroperoxides Levels

The assay was based on horseradish peroxidase- (HRPO-) mediated oxidation of phenol red by H₂O₂, leading to the formation of a compound that is absorbed at 610 nm. Sections of fresh tissue from the lumbosacral spinal cord were incubated for 30 min at 37°C in 10 mmol/L phosphate buffer (140 mmol/L NaCl and 5 mmol/L dextrose). The supernatants were transferred to tubes with 0.28 mmol/L phenol red and 8.5 U/mL HRPO. After 5 min incubation, 1 mol/L NaOH was added, and the solution was read at 610 nm. The results were expressed in μmoles H₂O₂ per mg tissue [29].

The lipid hydroperoxides were measured by oxidation of Fe²⁺ by LOOH in an acid medium containing xylenol orange dye, which forms a complex with Fe³⁺, as described by Jiang et al. [30]. Results are expressed in nmol per g tissue. 2.11. Protein Measurement

Protein was measured by the method of Lowry et al. [31], using bovine serum albumin as the standard. 2.12. Statistical Analysis

Data were analyzed by two independent researchers; one was blinded to treatment. Data for antioxidant assays of the extract were analyzed by one-way ANOVA followed by Tukey’s post hoc test. Pearson’s correlation coefficient () was calculated between total phenolic content and the methods used to assess the antioxidant activity. Data for von Frey and hot-plate tests were analyzed by repeated-measures ANOVA followed by Tukey’s test. The results for EPM, plasma parameters, and body weight were analyzed by unpaired Student’s -test, while results of the OF were assessed by Mann–Whitney test. Data for spinal-cord oxidative biomarkers were compared by three-way ANOVA followed by Holm-Sidak post hoc test. Differences were considered statistically significant when was <0.05. All statistical analyses were carried out with the software Origin 8. 3. Results

3.1. Antioxidant Properties of Schinus terebinthifolius Fractions

In the hydroxyl scavenging assay, the HeF and EtF showed IC₅₀ values similar to the antioxidant standard. The DcF and MeF showed higher values () (Table 1). In the DPPH assay, the MeF and EtF showed excellent scavenging activities, superior to BHT and similar to ascorbic acid. The HeF and DcF, in turn, showed weaker activities, with IC₅₀ values at least 80 times higher than the other fractions (). In the TRAP assay, the greatest potential was found in the MeF, followed by the EtF, DcF, and HeF (). The highest content of total phenols was found in the MeF, while the lowest occurred in the DcF and HeF (). A high linear correlation (; ) was observed between TRAP values and phenolic content. No linear correlation was found in other antioxidant tests.

Table 1: Antioxidant properties and chemical compounds of the fractions of Schinus terebinthifolius. 3.2. Phytochemical Screening of Schinus terebinthifolius Fractions

Anthraquinones and triterpenes/steroids were present in all fractions. Flavonoids and saponins were present only in the EtF and MeF. Coumarins were found only in the MeF (Table 1). 3.3. Behavioral Assessment

After CCI, no rat displayed gross deficits in motor behavior that might have influenced the assessment of thermal and mechanical sensitivities. No significant change was found in the naive group throughout the experimental period (Figure 1).

Figure 1: Assessment of behavioral hypersensitivity after chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve in rats treated with methanol fraction (MeF) (20 mg/kg/day, i.p.) from leaves of Schinus terebinthifolius for 10 days. (a) Latency time against heat stimuli; (b) mechanical hypersensitivity. Data represent the means ± SEM ( for each group). indicates a significant difference compared to pre-nerve lesion values (repeated-measures ANOVA followed by Tukey post hoc test, ).

At day 3 after surgery, the paw-withdrawal latency decreased (48.2%) in the saline-treated CCI rats, while no significant reduction was found in the MeF-treated CCI rats, compared to the pre-nerve-lesion level (Figure 1(a)). At days 5, 7, and 10, no significant change was found in the saline- and MeF-treated CCI rats compared to before nerve lesion. Despite baseline differing between saline- and MeF-treated sham rats, sham groups showed no significant changes in paw-withdrawal latency throughout the experimental periods.

The mechanical threshold in the saline-treated CCI rats decreased around 51% at day 3 compared to pre-nerve-lesion levels. The same response was found at days 5, 7, and 10. However, the MeF-treated CCI rats showed no decrease in the mechanical threshold (Figure 1(b)). At day 3 after surgery, the mechanical threshold of the MeF-treated CCI rats was similar to the pre-nerve-lesion threshold. However, a significant increase occurred at later time points: at 5, 7, and 10 days after surgery, the mechanical threshold was increased (76%) in the MeF-treated CCI rats compared to before nerve lesion.

Similar to the saline-treated CCI rats, the mechanical threshold in the saline-treated Sham rats also showed a reduction (56%), although only at day 3 compared to pre-procedure levels. No significant difference between the pre- and post-procedure levels was found at days 5, 7, and 10. The MeF-treated Sham rats showed no decrease in the mechanical threshold 3 days after surgery (Figure 1(b)).

No significant difference was found in the EPM and OF results for the naive rats treated with saline or MeF for 10 days (Table 2).

Table 2: Effect of methanol fraction (MeF) from Schinus terebinthifolius (20 mg/kg/day) on locomotor activity and anxiety-like behaviors in naive rats. 3.4. Effects on Biochemical Parameters of the Spinal Cord

At days 3 and 10 after CCI, the spinal-cord SOD activity increased by approximately 60% in the saline- and MeF-treated CCI rats. The saline- and MeF-treated Sham rats also showed significant increases in this parameter at days 3 and 10, compared to the naive group (Figure 2(a)). While the increase was 42 and 54% in the saline- and MeF-treated Sham rats, respectively, at day 3, the corresponding percentages were 46 and 78% at day 10.

Figure 2: Activities of (a) superoxide dismutase, (b) catalase, (c) glutathione peroxidase, and (d) glutathione-S-tranferase in spinal cord of rats treated with methanol fraction (MeF) (20 mg/kg/d) or saline for 3 and 10 days. Data represent mean ± SEM (/group). indicates a significant difference compared to naive and Sham or naive and CCI at same treatment and experimental period. indicates a significant difference compared to naive at same treatment and experimental period (; three-way ANOVA followed by Holm-Sidak post hoc test).

At day 3, no significant change was found in spinal-cord CAT activity in the saline- and MeF-treated CCI rats. While this treatment did not produce a significant change in the MeF-treated CCI rats at day 10, the saline-treated CCI rats showed a decrease (46%) at this time point (Figure 2(b)). In Sham rats, CAT activity increased 48 and 51% in the spinal cord of the rats that received saline and MeF for 3 days, respectively. However, CAT activity decreased by around 60% in the saline- and MeF-treated Sham rats at day 10.

At days 3 and 10 after CCI, GPx activity was significantly reduced in the spinal cord of the saline- and MeF-treated CCI rats (Figure 2(c)). In Sham rats, while GPx activity decreased in animals that received saline for 3 days, the activity of this enzyme showed no significant change in the MeF-treated rats at this time point. At day 10, GPx activity decreased in both the saline- and MeF-treated Sham rats.

The GST activity decreased around 45% in the spinal cord from CCI rats that received MeF and saline for 3 and 10 days, compared to naive rats. In the Sham rats the activity of this enzyme also decreased. The reduction was approximately 50% in the saline- and MeF-treated Sham rats after 3 and 10 days (Figure 2(d)).

The ascorbic-acid content increased more than 50% in the spinal cord of CCI rats that received MeF and saline for 3 days, compared to naive rats. At day 10, only the saline-treated CCI rats showed an increase in ascorbic-acid levels. In the spinal cord of the MeF-treated CCI rats, the ascorbic-acid level was similar to that found in naive rats (Figure 3(a)). No significant change was found in Sham rats.

Figure 3: Ascorbic acid (a), total thiols (b), hydrogen peroxide (c), and lipid hydroperoxides (d) levels in spinal cord of rats treated with methanol fraction (MeF) (20 mg/kg/d) or saline for 3 and 10 days. Data represent mean ± SEM (/group). indicates a significant difference compared to naive and Sham or naive and CCI at same treatment and experimental period. indicates a significant difference compared to naive at same treatment and experimental period (; three-way ANOVA followed by Holm-Sidak post hoc test).

At days 3 and 10 after CCI, the total thiol was reduced in the spinal cord of the saline- and MeF-treated rats. At day 3, the decrease was around 43% in the spinal cord of these rats. At day 10, the decrease was 50% in the spinal cord of the saline-treated CCI rats, but approximately 28% in the spinal cord of the MeF-treated CCI rats (Figure 3(b)). In Sham rats, the total thiol content decreased in the spinal cord of the rats that received saline for 3 days, but increased (57%) in the MeF-treated rats. At day 10, there was a reduction of 43% in the spinal-cord total thiol content in the saline- and MeF-treated Sham rats.

No significant change was found in H₂O₂ levels in the spinal cord from the saline- and MeF-treated CCI rats after 3 and 10 days (Figure 3(c)). The MeF administration did not change the H₂O₂ level in the spinal cord from Sham rats that received treatment for 3 and 10 days. However, this prooxidant marker increased 122 and 88% in rats that received saline for 3 and 10 days, respectively.

Despite high variation, there was no significant difference in spinal-cord lipid hydroperoxide levels in CCI and Sham rats that received MeF and saline for 3 and 10 days (Figure 3(d)). 3.5. Effect on Blood Parameters and Body Weight

GGT, AST, ALT, and bilirubin levels did not change significantly with MeF administration (Table 3). Similarly, the MeF did not induce changes in body weight (initial: g; final: g) compared to the saline group (initial: g; final: g).

Table 3: Effect of the methanol fraction (MeF) from Schinus terebinthifolius on blood parameters of liver function in naive rats. 4. Discussion

The present study showed that extracts prepared from S. terebinthifolius leaves, particularly the MeF, have high antioxidant potential. The occurrence of an antioxidant potential in extracts from S. terebinthifolius is in line with the previous study by El-Massry et al. [8].

Our study showed for the first time that administration of the MeF induces attenuation of CCI-induced neuropathic pain. Since antioxidants are candidates for the treatment of neuropathic pain [11, 12], it is possible that the increase in the thermal and mechanical sensitivities of the MeF-treated CCI rats is related to the antioxidant potential of the MeF. However, the screening also indicated the presence of triterpenes/steroids and saponins in this fraction. These kinds of compounds also show an ameliorative effect on neuropathic pain [32], and therefore may also be contributing to the antinociceptive effect of the MeF. Another contributor to antinociception may be the anti-inflammatory effect of S. terebinthifolius. Some compounds of extracts from this plant appear to have anti-inflammatory activity [33]. Câmara et al. [34] demonstrated that reduction of the inflammatory process contributes to antinociception in rats with CCI. Thus, more tests are necessary to better characterize the chemical compounds of the MeF that may be contributing to antinociceptive effect of this fraction in rats with CCI.

The reduction in the mechanical threshold in the Sham rats may be due to the procedures involving manipulation of deep tissues, such as muscles and adjacent connective tissue, which induce pain [10]. Since MeF administration induced an antinociceptive effect in these animals, this result also reinforces the antinociceptive effect of the MeF in pain conditions. The lack of significant changes in the paw-withdrawal latency in the saline-treated CCI rats 5, 7, and 10 days after the surgery suggests a reversion of the thermal hyperalgesia, but we do not believe that a total reversion of symptoms occurs within 5 days. This may indicate a limitation of the test used in our study.

Our study also focused on ROS because of their emerging role in the pain mechanism [9–12]. For the first time, we demonstrated that the administration of an extract from S. terebinthifolius induced changes in spinal-cord prooxidant and antioxidant markers. Interestingly, the changes were not exclusive to the MeF-treated CCI rats, but some of them were also present in the saline-treated CCI rats and the saline- and MeF-treated Sham rats. These results suggest that the changes may be more related to the peripheral lesion than to the treatment. However, while the ascorbic-acid content increased in the saline-treated CCI rats after 10 days, this content was reduced in the MeF-treated CCI rats at this time point. This decrease suggests that the treatment induced a modulation in ascorbic acid. The increase in the ascorbic-acid content 3 days after CCI may indicate that the modulation of ascorbic acid occurred later. Ascorbic acid is involved in the first line of antioxidant defense in the brain, protecting the lipid membranes and proteins from oxidative damage [35]. Extracellular ascorbic-acid concentrations are increased in response to brain activity [35]. Glutamate and other neurotransmitters are increased in neuropathic pain [1, 2]. Thus, the increase in ascorbic-acid levels may be related to high synaptic activity in the spinal cord of rats with CCI. The reduction may be related to antioxidant molecules present in the MeF. Ji et al. [36] suggested that scavenging ROS appears to present an opportunity to normalize brain functions associated with pain. Since the MeF treatment did not decrease ascorbic-acid levels after 3 days, this result suggests that the modulation of ascorbic acid by MeF occurs later. Differences in the time of modulation may be related to the dose used in our study. Further studies with high doses of the MeF may help to clarify this suggestion.

When ascorbic acid carries out its antioxidant activity, it becomes oxidized. However, the reduction of its oxidized form is an enzymatic reaction, which may depend on glutathione [35], the most abundant thiol in mammals. Since ascorbic acid was increased in the CCI rats, the use of glutathione to reduce the oxidized form of ascorbic acid may have contributed to the decrease in the total thiols in the spinal cord of the CCI rats. Glutathione is a cofactor for GPx and GST [37]. The reduction in glutathione may explain the decrease in GPx and GST activities. In the Sham rats, the reduction in total thiols may be indicating the effects of these molecules. Total thiols constitute a group of molecules that act as cofactors in some enzymatic systems, and they can directly neutralize radicals [37]. The reduction in total thiols may be due to the important role of the antioxidants in muscle regeneration. Kozakowska et al. [38] demonstrated that oxidative stress is an important modulator of skeletal muscle regeneration after injury. The glutathione reduction may explain the change in GPx and GST activities in Sham rats.

Increased SOD activity was found in the Sham and CCI rats at all time points studied. SOD converts the superoxide anion to H₂O₂. Therefore, one would expect an increase in H₂O₂ levels in the spinal cord of these animals. In fact, the levels of this molecule increased in the Sham rats treated with saline for 3 and 10 days. This increase may be responsible for the increased CAT activity at day 3. CAT, an enzyme located in peroxisomes, catalyzes the breakdown of H₂O₂ to H₂O and O₂ [39]. After muscle injury, the induction of CAT is delayed and the peak of its activity occurs on the 2nd day after injury, followed by thioredoxin activity, which reaches its highest level on day 7 [40]. Thioredoxin is an antioxidant protein that limits the activity of ROS [39, 41]. With the increase in thioredoxin, CAT activity may be reduced, which explains the decrease in CAT in the saline-treated Sham rats after 10 days. Both glutathione and thioredoxin support enzyme systems for the elimination of peroxides, but each system has different kinetics and functions [41]. Thus, the probable activity of the thioredoxin does not exclude the possibility of a positive effect of the thiols found at day 10.

The presence of antioxidant molecules in the MeF may be responsible for the lack of a significant change in catalase activity in the MeF-treated Sham rats. A similar suggestion may apply to the MeF-treated CCI rats. However, catalase activity was also decreased in the saline-treated CCI rats. We suggest that this result may be related to the use of thiols, which was also decreased in these animals. The use of thiols may be related to the increase in ascorbic acid, as discussed above.

According to Goecks et al. [9], CCI injury, in contrast to the situation in Sham animals, probably mobilizes more antioxidant systems to prevent oxidative stress, given the greater excitation of the central sensory neurons. Since excessive ROS formation must be corrected only to prevent the accumulation of oxidative damage, and a slight prooxidative balance is necessary for optimal cell signaling processes [42], the different excitation of central sensory neurons may be responsible for the differences between the CCI and Sham rats. The mobilization of antioxidant systems may contribute to the absence of a significant change in lipid hydroperoxides in the spinal cord.

The lack of changes in the EPM and OF tests, plasma indicators, and body weight suggests that the MeF has no toxic effect, which raises the possibility that the MeF might be used clinically as an adjuvant to treat neuropathic pain. A recent study indicated that S. terebinthifolius has a toxic potential [43]. However, this study administered a treatment for 83 days, and the harmful effects occurred mainly at doses of 176 and 352 mg/kg body weight. Thus, the dose appears to be an important factor in determining the toxic effect of extracts from this plant. 5. Conclusion

The fractions obtained by successive extractions of dried and powdered leaves from Schinus terebinthifolius,particularly the MeF, contained antioxidant molecules. This is the first demonstration that MeF, in a dose of 20 mg/kg/d administered for 3 and 10 days, induces antinociception without apparent toxic effects, which suggests that this fraction could possibly be used to treat neuropathic pain. In addition, this study provided evidence that MeF administration changes prooxidant and antioxidant markers in the spinal cord, markers that had been altered after a peripheral lesion. We suggest that the changes may be related to antioxidant molecules present in the MeF, because scavenging ROS appears to present an opportunity to help to normalize the spinal-cord oxidative status altered by pain. However, we cannot exclude the possibility that other compounds of the extract may be contributing to antinociceptive effect. Further studies are necessary to better understand the relation between MeF treatment, antinociception, and oxidative stress parameters in the spinal cord of rats with CCI-induced neuropathic pain. Conflicts of Interest

The authors declare that there are no conflicts of interest regarding the publication of this paper. Authors’ Contributions

Taína Scheid and Wania Aparecida Partata were responsible for the study concept and design and they prepared and wrote the manuscript. Taína Scheid, Maira Silmara Moraes, Thiago Pereira Henriques, Ana Paula Konzen Riffel, and Eduardo Miranda Ethur performed the experiments. Adriane Belló-Klein, Gilsane Lino Von Poser, and Eduardo Miranda Ethur provided research material. All authors approved the final manuscript. Acknowledgments

This study was supported by grants from Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS). References

L. Colloca, T. Ludman, D. Bouhassira et al., “Neuropathic pain,” Nature Reviews Disease Primers, vol. 3, Article ID 17002, 2017. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
F. T. Nickel, F. Seifert, S. Lanz, and C. Maihöfner, “Mechanisms of neuropathic pain,” European Neuropsychopharmacology, vol. 22, no. 2, pp. 81–91, 2012. View at Publisher · View at Google Scholar ·View at Scopus
D. J. Newman and G. M. Cragg, “Natural products as sources of new drugs over the 30 years from 1981 to 2010,” Journal of Natural Products, vol. 75, no. 3, pp. 311–335, 2012. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
A. C. Piccinelli, J. A. Santos, E. C. Konkiewitz et al., “Antihyperalgesic and antidepressive actions of (R)-(+)-limonene, α-phellandrene, and essential oil from Schinus terebinthifolius fruits in a neuropathic pain model,” Nutritional Neuroscience, vol. 18, no. 5, pp. 217–224, 2015. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
M. P. Corrêa, Dicionário De Plantas Úteis Do Brasil E Das Exóticas Cultivadas, Imprensa Nacional, Rio de Janeiro, Brazil, 1984.
A. S. Jaggi, V. Jain, and N. Singh, “Animal models of neuropathic pain,” Fundamental & Clinical Pharmacology, vol. 25, no. 1, pp. 1–28, 2011. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
S. Johann, N. P. Sá, L. A. Lima et al., “Antifungal activity of schinol and a new biphenyl compound isolated from Schinus terebinthifolius against the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis,” Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials, vol. 9, no. 1, p. 30, 2010. View at Publisher · View at Google Scholar
K. F. El-Massry, A. H. El-Ghorab, H. A. Shaaban, and T. Shibamoto, “Chemical compositions and antioxidant/antimicrobial activities of various samples prepared from Schinus terebinthifolius leaves cultivated in Egypt,” Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 57, no. 12, pp. 5265–5270, 2009.View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
C. S. B. Goecks, A. Horst, M. S. Moraes et al., “Assessment of oxidative parameters in rat spinal cord after chronic constriction of the sciatic nerve,” Neurochemical Research, vol. 37, no. 9, pp. 1952–1958, 2012.View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
T. Scheid, L. D. Bosco, R. P. Guedes, M. A. Pavanato, A. Belló-Klein, and W. A. Partata, “Sciatic nerve transection modulates oxidative parameters in spinal and supraspinal regions,” Neurochemical Research, vol. 38, no. 5, pp. 935–942, 2013. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
J. Yowtak, J. Wang, H. Y. Kim, Y. Lu, K. Chung, and J. M. Chung, “Effect of antioxidant treatment on spinal GABA neurons in a neuropathic pain model in the mouse,” PAIN, vol. 154, no. 11, pp. 2469–2476, 2013. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
A. P. K. Riffel, J. A. de Souza, M. D. C. Q. Santos et al., “Systemic administration of vitamins C and E attenuates nociception induced by chronic constriction injury of the sciatic nerve in rats,” Brain Research Bulletin, vol. 121, pp. 169–177, 2016. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
T. Siatka and M. Kašparová, “Seasonal variation in total phenolic and flavonoid contents and DPPH scavenging activity of Bellis perennis L. flowers,” Molecules, vol. 15, no. 12, pp. 9450–9461, 2010. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
V. Chobot, “Simultaneous detection of pro- and antioxidative effects in the variants of the deoxyribose degradation assay,” Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 58, no. 4, pp. 2088–2094, 2010. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
M. T. K. Dresch, S. B. Rossato, V. D. Kappel et al., “Optimization and validation of an alternative method to evaluate total reactive antioxidant potential,” Analytical Biochemistry, vol. 385, no. 1, pp. 107–114, 2009. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
H. Wagner and S. Bladt, Plant Drug Analysis: A Thin Layer Chromatography Atlas, Springer, Berlin, Germany, 2nd edition, 1996.
E. C. Rosas, L. B. Correa, T. D. A. Pádua et al., “Anti-inflammatory effect of Schinus terebinthifolius Raddi hydroalcoholic extract on neutrophil migration in zymosan-induced arthritis,” Journal of Ethnopharmacology, vol. 175, pp. 490–498, 2015. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
L. E. S. Fedel-Miyasato, A. S. N. Formagio, S. A. Auharek et al., “Antigenotoxic and antimutagenic effects of Schinus terebinthifolius Raddi in Allium cepa and Swiss mice: a comparative study,” Genetics and Molecular Research, vol. 13, no. 2, pp. 3411–3425, 2014. View at Publisher · View at Google Scholar ·View at Scopus
O. C. Pires, A. V. C. Taquemasa, G. Akisue et al., “Análise preliminar da toxicidade aguda e dose letal mediana (DL50) comparativa entre os frutos de Pimenta-do-Reino do Brasil (Schinus terebinthifoliusRaddi) e Pimenta-do-Reino (Pipper nigrum L.),” Acta Farmaceutica Bonaerense, vol. 23, pp. 176–182, 2004. View at Google Scholar
Z.-Y. Cai, P. Galettis, Y. Lu, D. L. Morris, and M. H. Pourgholami, “Pharmacokinetics of albendazole in New Zealand white rabbits: Oral versus intraperitoneal administration,” Anticancer Reseach, vol. 27, no. 1 A, pp. 417–422, 2007. View at Google Scholar · View at Scopus
G. J. Bennett and Y. K. Xie, “A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man,” PAIN, vol. 33, no. 1, pp. 87–107, 1988. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
M. A. de Souza, L. A. Centenaro, P. R. Menegotto et al., “Prenatal stress produces social behavior deficits and alters the number of oxytocin and vasopressin neurons in adult rats,” Neurochemical Research, vol. 38, no. 7, pp. 1479–1489, 2013. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
H. P. Misra and I. Fridovich, “The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase.,” The Journal of Biological Chemistry, vol. 247, no. 10, pp. 3170–3175, 1972. View at Google Scholar · View at Scopus
H. Aebi, “[13] Catalase in vitro,” Methods in Enzymology, vol. 105, pp. 121–126, 1984. View at Publisher ·View at Google Scholar · View at Scopus
L. Flohe and W. A. Gunzler, “Assays of glutathione peroxidase,” Methods in Enzymology, vol. 105, pp. 114–121, 1984. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
B. Mannervik and C. Guthenberg, “[28] Glutathione transferase (human placenta),” Methods in Enzymology, vol. 77, pp. 231–235, 1981. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
J. H. Roe and C. A. Kuether, “The determination of ascorbic acido in whole blood and urine through the 2,4-dinitrophenylhydrazine derivative of dehydroascorbic acid,” The Journal of Biological Chemistry, vol. 147, pp. 399–407, 1943. View at Google Scholar
M. Y. Aksenov and W. R. Markesbery, “Changes in thiol content and expression of glutathione redox system genes in the hippocampus and cerebellum in Alzheimer’s disease,” Neuroscience Letters, vol. 302, no. 2-3, pp. 141–145, 2001. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
E. Pick and Y. Keisari, “A simple colorimetric method for the measurement of hydrogen peroxide produced by cells in culture,” Journal of Immunological Methods, vol. 38, no. 1-2, pp. 161–170, 1980. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
Z.-Y. Jiang, A. C. S. Woollard, and S. P. Wolff, “Lipid hydroperoxide measurement by oxidation of Fe²⁺ in the presence of xylenol orange. Comparison with the TBA assay and an iodometric method,” Lipids, vol. 26, no. 10, pp. 853–856, 1991. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, and R. J. Randall, “Protein measurement with the Folin phenol reagent.,” The Journal of Biological Chemistry, vol. 193, no. 1, pp. 265–275, 1951. View at Google Scholar ·View at Scopus
A. Muthuraman and N. Singh, “Neuroprotective effect of saponin rich extract of Acorus calamus L. in rat model of chronic constriction injury (CCI) of sciatic nerve-induced neuropathic pain,” Journal of Ethnopharmacology, vol. 142, no. 3, pp. 723–731, 2012. View at Publisher · View at Google Scholar
M. K. Jain, Bao-Zhu Yu, J. M. Rogers et al., “Specific competitive inhibitor of secreted phospholipase A2 from berries of Schinus terebinthifolius,” Phytochemistry, vol. 39, no. 3, pp. 537–547, 1995. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
C. C. Câmara, H. F. Ramos, A. P. da Silva et al., “Oral gabapentin treatment accentuates nerve and peripheral inflammatory responses following experimental nerve constriction in Wistar rats,” Neuroscience Letters, vol. 556, pp. 93–98, 2013. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
A. Covarrubias-Pinto, A. I. Acuña, F. A. Beltrán, L. Torres-Díaz, and M. A. Castro, “Old things new view: ascorbic acid protects the brain in neurodegenerative disorders,” International Journal of Molecular Sciences, vol. 16, no. 12, pp. 28194–28217, 2015. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
G. Ji, Z. Li, and V. Neugebauer, “Reactive oxygen species mediate visceral pain-related amygdala plasticity and behaviors,” PAIN, vol. 156, no. 5, pp. 825–836, 2015. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
H. Sies, “Glutathione and its role in cellular functions,” Free Radical Biology & Medicine, vol. 27, no. 9-10, pp. 916–921, 1999. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
M. Kozakowska, K. Pietraszek-Gremplewicz, A. Jozkowicz, and J. Dulak, “The role of oxidative stress in skeletal muscle injury and regeneration: focus on antioxidant enzymes,” Journal of Muscle Research and Cell Motility, vol. 36, no. 6, pp. 377–393, 2015. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
S. K. Powers, L. L. Ji, A. N. Kavazis et al., “Reactive oxygen species: impact on skeletal muscle,” Comprehencive Physiology, vol. 1, pp. 941–969, 2011. View at Google Scholar
S. Singh, D. C. Canseco, S. M. Manda et al., “Cytoglobin modulates myogenic progenitor cell viability and muscle regeneration,” Proceedings of the National Acadamy of Sciences of the United States of America, vol. 111, no. 1, pp. E129–E138, 2014. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
D. P. Jones, “Radical-free biology of oxidative stress,” American Journal of Physiology-Cell Physiology, vol. 295, no. 4, pp. C849–C868, 2008. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
B. Poljsak, D. Šuput, and I. Milisav, “Achieving the balance between ROS and antioxidants: when to use the synthetic antioxidants,” Oxidative Medicine and Cellular Longevity, vol. 2013, Article ID 956792, pp. 1–11, 2013. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus
E. A. Carlini, J. M. Duarte-Almeida, and R. Tabach, “Assessment of the toxicity of the Brazilian pepper trees Schinus terebinthifolius Raddi (Aroeira-da-praia) and Myracrodruon urundeuva Allemão (Aroeira-do-sertão),” Phytotherapy Research, vol. 27, no. 5, pp. 692–698, 2013. View at Publisher · View at Google Scholar · View at Scopus

***maturidi*** · 23 July 2019, 10:36

Brezilya Biber Ağacı Raddi yapraklarından metanol fraksiyonunun nöropatik ağrı olan sıçanlarda Nosisepsiyon ve omurilik oksidatif Biyomarkerleri üzerine etkileri
Taína Scheid, 1 Maira Silmara Moraes, 1 Thiago Pereira Henriques, 1 Ana Paula Konzen Riffel, 1 Adriane Belló-Klein, 1 Gilsane Lino Von Poser, 2 Eduardo Miranda Ethur, 3 ve Wania Aparecida Partata1

1 Rio Grande do Sul (UFRGS) Üniversitesi, Temel Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Fizyoloji anabilim dalı, Porto Alegre, RS, Brezilya
2 Institute of Pharmacy, University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS, Brezilya
3 kesin ve teknolojik Bilimler Bölümü, UNİVATES, LAJEADO, RS, Brezilya

Yazışmalar Vania Aparecida Partita'ya gönderilmelidir; partataw@gmail.com

Alınan 30 Ocak 2018; Kabul Edildi 2 Nisan 2018; Yayınlandı 3 May 2018

Akademik Editör: Karen

Özet
Schinus terebinthifolius, Brezilya aroeira olarak bilinen tıbbi bir bitki, en iyi verimi ve antioksidan performans kısmını seçmek için yapraklarından elde edilen fraksiyonların antioksidan potansiyelini belirledik. Bu nitelikler, nöropatik bir ağrı modeli olan siyatik sinirin kronik daralma yaralanması (CCI) olan sıçanlara 3 ve 10 gün boyunca intraperitoneal (20 mg/kg/gün) uygulanan metanol fraksiyonunda (MeF) bulundu. MeF, CCI tarafından düşürülen mekanik ve termal eşikleri arttırdı. Buna paralel olarak, lumbosakral omurilik, süperoksit dismutazda bir artış, ancak salin ve MeF ile tedavi edilen CCI sıçanlarında glutatyon peroksidaz ve glutatyon-s-transferaz aktivitelerinde bir azalma gösterdi. Katalaz aktivitesi sadece 10 gün boyunca tuzlu su ile muamele edilen CCI sıçanlarda azalmıştır. Toplam tiyoller salin ve mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarda azaldı. Askorbik asit, bu sıçanlarda 3. günde, ancak 10. günde sadece tuzlu su ile muamele edilmiş CCI sıçanlarda artmıştır. Hidrojen peroksit ve lipid hidroperoksitte herhangi bir değişiklik bulunamadı. Açık alan ve yükseltilmiş artı-labirent testleri ve karaciğer fonksiyonunun kan parametreleri değişmedi. Böylece, S. terebinthifolius'un yapraklarından gelen MeF, toksik etkileri olmayan bir antinosiseptif etkiye sahiptir ve CCI ile sıçanların omuriliğindeki oksidan biyomarkerleri etkiler.

1. Giriş
Somatosensor sistemi etkileyen bir lezyonun veya hastalığın doğrudan bir sonucu olarak ortaya çıkan nöropatik ağrı, nüfusun %6.0-10'unu etkiler ve hastaların yaşam kalitesini olumsuz etkiler [1]. Patofizyolojik mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır [2]. Etkili analjezik eksikliği nöropatik ağrı yararlı etkileri olan yeni molekülleri bulmak için sürekli bir arama etkiledi. Doğal ürünler, yeni ilaçların en umut verici kaynakları gibi görünmektedir [3] ve nöropatik ağrıyı tedavi etmek için kullanılabilecek bitkilerden biyoaktif bileşiklerin tanımlanması, farmasötik araştırmanın oldukça aktif bir alanı olmuştur.

Son zamanlarda, Piccinelli ve ark. [4] gösterdi Schinus terebinthifolius Raddi esansiyel yağı (Anacardiaceae), Güney Amerika'ya özgü ve yaygın Brezilya'da dağıtılan bir bitki, halk aroeira olarak bilinen [5], bağışladı sinir yaralanması kaynaklı nöropatik ağrı ile sıçanlarda antinociception indüklenen. Ağrı çalışmalarında, her bir hayvan modeli belirli bir metodoloji ile yaratılmıştır ve sonuçlar, ağrıyı indüklemek için kullanılan metodolojide hafif değişikliklerle geniş ölçüde değişme eğilimindedir; bu nedenle, farklı ağrı modellerinden gelen verilerin spesifik ağrı modeli [6] bağlamında raporlanması ve yorumlanması esastır. Sorumlu bir soru, S. terebinthifolius'tan elde edilen ekstraktların siyatik sinirin kronik daralma yaralanması (CCI) olan sıçanlarda antinosiseptif bir etkiye sahip olup olmadığıdır. TSO ile fareler nöropati ağrısının en sık kullanılan hayvan modelleri vardır; TSO [6] insan hastalarda causalgia veya kompleks bölgesel ağrı sendromu karşılık gelen kronik sinir sıkışması belirtileri taklit eder.

Saponinler, triterpenler, steroidler [7] ve fenolik bileşikler [8] S. terebinthifolius'un özlerinde bulunmuştur. Bu bileşiklerin çoğu, normal hücresel metabolizma da dahil olmak üzere çeşitli durumlarda oluşan reaktif oksijen türlerinin (ROS) temizleyicileridir ve örneğin ağrı modülasyonunda bir takım işlevlere katılırlar [9, 10]. Antioksidan ajanlar nöropatik ağrıyı tedavi etmek için test edilmiştir [11, 12], ancak S. terebinthifolius'un sinir dokusunda oksidatif biyomarkerler üzerindeki özleri ile tedavinin etkileri araştırılmamıştır.

Bu çalışma, S. terebinthifolius'tan elde edilen antioksidan bileşiklerden zengin bir fraksiyonun CCI kaynaklı nöropatik ağrıya sahip sıçanlarda antinosiseptif etkisini araştırmak ve ayrıca bu fraksiyonun lumbosakral omurilikte prooksidan ve antioksidan belirteçler üzerindeki etkisini araştırmak için tasarlanmıştır. Metanol fraksiyonunun (MeF) verimi en yüksek olduğu ve bu fraksiyonun iyi antioksidan aktivite gösterdiği için, bu fraksiyonun CCI'Lİ sıçanlarda 3 ve 10 gün boyunca intraperitoneal olarak (20 mg/kg/gün) uygulanacağı seçilmiştir. Daha sonra süperoksit dismutaz (SOD), katalaz (CAT), glutatyon peroksidaz (GPx) ve glutatyon-s-transferaz (GST) ve tiyollerin ve askorbik asidin toplam içeriği CCI'Lİ sıçanların lumbosakral omuriliğinde antioksidan durum belirteçleri olarak değerlendirildi. Ayrıca bu dokuda lipid hidroperoksit ve hidrojen peroksit (H2O2) düzeylerini prooksidan durum belirteçleri olarak değerlendirdik.

Çalışmamız, sırasıyla açık alan (OF) ve yükseltilmiş artı-labirent (EPM) testleri kullanılarak sıçanların lokomotor ve anksiyete benzeri davranışlarını; gama-glutamiltransferaz (GGT), aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT) ve bilirubinin kan parametrelerini ve tedaviden 10 gün sonra naif sıçanlarda vücut ağırlığını, tedavinin olası yan etkilerini ortaya çıkarmak için değerlendirdi.

2. Malzemeler ve yöntemler
2.1. Bitki materyali ve Fraksiyonların hazırlanması
Conselho de Gestão do Patrimônio Genético (cgen – 010738/2013-4) tarafından yetkilendirildikten sonra, S. terebinthifolius'un yaprakları Lajeado, Rio Grande do Sul, Brezilya'da toplandı ve Botanik bölümü aracılığıyla doğrulandı.Rio Grande do Sul Federal Üniversitesi, kupon örneğinin (sayı 166738) yatırıldığı yer. Fraksiyonlar, n-hekzan (He) ile başlayan ve ardından diklorometan (Dc), Etil asetat (Et) ve metanol (Me) ile statik maserasyon (0.5 l çözücü, her bir çözücü için 12 gün boyunca günlük değişim) ile kurutulmuş ve toz haline getirilmiş yaprakların ardışık ekstraksiyonları ile elde edildi. Ekstraksiyon çözeltileri düşük sıcaklıkta (°C) vakum altında kuruluğa buharlaştırıldı ve 8 ° C'de saklandı. fraksiyonların verimi HeF (%3.84), DcF (%1.49), EtF (%1.63) ve mef (%5.30) idi.

2.2. Schinus terebinthifolius Fraksiyonlarının antioksidan özellikleri
2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikal Temizleme aktivitesi. Fraksiyonların serbest radikal temizleme aktivitesi ve antioksidan standartlar askorbik asit ve farklı konsantrasyonlarda (25-500 µg/mL) bütile hidroksitolüen (BHT) ölçülmüştür [13]. Tüm deneyler üç kez bağımsız olarak tekrarlandı. Dpph serbest radikal temizleme aktivitesinin yüzde inhibisyonu aşağıdaki denklem kullanılarak hesaplandı: DPPH inhibisyonu% =, kontrol reaksiyonunun absorbansı (3 mL metanol ve 1 ml DPPH çözeltisi, ekstraktlar örneği olmadan) ve fraksiyonların veya standartların varlığında absorbanstır. % İnhibisyon verileri daha sonra konsantrasyona karşı çizildi ve grafiklendi ve IC50 (yarım maksimal inhibitör konsantrasyon) değeri doğrusal regresyon analizi ile hesaplandı.

Hidroksil Radikal Temizleme Aktivitesi. Bu deney, dolaylı olarak 2-deoksi-d-riboz bozunma ürünü olan malondialdehit yoluyla, Chobot [14] tarafından tarif edildiği gibi, farklı konsantrasyonlarda (25-250 µg/mL) fraksiyonlar ve BHT kullanılarak, hidroksil radikallerini nicelleştirmiştir. Testler üç nüsha halinde yapıldı ve sonuçlar IC50 değerlerinde ifade edildi.

Toplam reaktif antioksidan potansiyeli (tuzak). Tuzak, ABAP tarafından indüklenen Luminolün kemilüminesans (CL) yoğunluğunu, Dresch ve ark. [15]. CL, 2.5, 5.0, 10.0 ve 25.0 µg/mL konsantrasyonlarında fraksiyonlar kullanılarak bir sıvı sintilasyon sayacında (Lkb Rack Beta sıvı Sintilasyon spektrometresi-1215, İsveç) ölçüldü. Numunenin Troloks eşdeğerleri standart bir troloks eğrisi kullanılarak hesaplanmıştır.

Fitokimyasal Tarama. Schinus terebinthifolius fraksiyonlarının nitel fitokimyasal analizi, ALKALOİDLER, antrasen türevleri, triterpenler/steroidler, genel olarak fenolik bileşikler, kumarinler, flavonoidler ve saponinlerin varlığını değerlendirmek için TLC (Silicagel, 60 F254) tarafından gerçekleştirilmiştir.Wagner ve Bladt tarafından tarif edilmiştir [16].

Toplam fenolik içeriğin belirlenmesi. Toplam fenolik içerik siatka ve Kašparová tarafından tarif edildiği gibi belirlendi [13]. Sonuçlar, g ekstrakt başına miligram eşdeğer gallik asit (EGA mg/g) olarak ifade edildi. Tüm analizler üç nüsha halinde gerçekleştirilmiştir.

2.3. Hayvanlar ve tedavi
Hayvan prosedürleri Rio Grande do Sul Federal Üniversitesi etik Komitesi tarafından onaylandı (#19388). Erkek Wistar sıçanları (230-290 g) rastgele ve körü körüne üç deney grubuna (naif, Sham ve CCI) ayrıldı ve her biri 20 mg/kg/gün dozunda MeF alan iki alt gruba (/alt gruba) ayrıldı veya 0.9 ve 3 d için intraperitoneal olarak %10 salin solüsyonu. terebinthifolius ve anti-inflamatuar etkiler gösterdi [17] ve genotoksik ve mutajenik etki yokluğu [18]. Çalışma zamanı (3 ve 10 gün) seçildi çünkü önceki çalışmalarımız, CCI kaynaklı nöropatik ağrı ile sıçanlarda omurilik oksidatif biyomarkerlerin değiştiğini gösterdi [12]. Literatür, s'nin özütünü gösteren bir çalışma içerdiğinden. terebinthifolius her iki uygulama yolu ile de kullanılabilir (oral ve intraperitoneal) [19], intraperitoneal uygulama seçildi, çünkü bu ilacın verilmesinin temel amacı lokal ilaç konsantrasyonunu ve ilaca maruz kalma süresini arttırırken sistemik ilaç toksisitesini azaltmaktır [20]. Yönetim ameliyat gününde (anesteziden iyileştikten sonra) başladı ve aynı araştırmacı tarafından her gün 17: 00 saatinde gerçekleştirildi.

2.4. Kronik daralma Yaralanmasının indüksiyonu (CCI)
Anesteziden sonra (90 mg/kg ketamin ve 10 mg/Kg xylazine), sağ ortak siyatik sinir, orta uyluk insizyonu ile trifürkasyonuna proksimal olarak maruz bırakıldı ve dört ligatür (4.0 Shalon Kromik Katgüt), Bennett ve Xie tarafından tarif edildiği gibi gevşek bir şekilde bağlandı [21], hafif modifikasyonlarla [12]. Sinir ligasyonu sonrası kas ve deri tabakası hemen iplikle dikildi ve topikal bir antibiyotik uygulandı. Sahte sıçanlarda siyatik siniri ortaya çıkarmak için, LİGATÜR dışında CCI'DE yer alan tüm cerrahi prosedürler kullanıldı.

2.5. Termal ve mekanik eşikler
Sıçanlar cerrahi işlem öncesi (gün 0) ve ameliyattan 3, 5, 7 ve 10 gün sonra duyarlılık değerlendirmelerine tabi tutuldu. Termal hiperaljezi, sıçanların 50°C'de (±2°C) muhafaza edilen sıcak bir tabağa yerleştirilmesi ile ölçüldü. Çekilme gecikmesi, hayvanın yan taraftan bağımsız olarak bir arka pençe atladığı veya yaladığı zaman olarak kabul edildi. Doku yaralanmasını önlemek için 30 saniyelik bir kesme süresi kullanıldı.

Mekanik duyarlılığı ölçmek için, yaralı hindpaw elektronik von Frey aparatına (Insight, Brezilya) verilen yanıtlar ölçüldü. Bunun için plantar yüzeye karşı artan basınç uygulandı. Olumlu bir yanıt, pençenin ani bir şekilde geri çekilmesi ile gösterildi ve basıncın yoğunluğu otomatik olarak kaydedildi (gram cinsinden). Tek bir deneme, her 5-10 saniyede bir plastik ucun beş uygulamasından oluşuyordu. beş okuma ortalaması, belirli bir zamanlama denemesi için eşik olarak alındı.

Davranışsal değerlendirmeler günün aynı saatinde (08:00 h) ve aynı araştırmacı tarafından yapılmıştır.

2.6. Lokomotor ve anksiyete benzeri davranışlar
Naif sıçanlar, salin veya MeF (20 mg/kg/d, intraperitoneal olarak) alınan iki gruba (/grup) ayrıldı. Testler sabah yapıldı, ancak hayvanlara stresi önlemek için ayrı günlerde yapıldı. 9 günlük tedaviden sonra (CCI'DEN 10 gün sonra) ve EPM 10 günlük enjeksiyondan sonra (CCI'DEN 11 gün sonra) gerçekleştirildi. EPM de Souza ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi değerlendirildi. [22]. 'Nin için, 12 sektörde eşmerkezli daireler ile işaretlenmiş zemin ile parlak aydınlatılmış dairesel bir arenadan (90 cm çapında, 50 cm yüksekliğinde duvarlar) oluşan bir cihaz kullanıldı.

2.7. Doku örneklerinin hazırlanması
Vücut ağırlığı, 10 gün boyunca salin ve MeF (20 mg/kg/d) alan naif sıçanlarda değerlendirildi. Hayvanların ağırlığı enjeksiyonların başlamasından önce (gün 0) ve tedavi süresinin sonunda (gün 11) kaydedildi.

Tüm sıçanlar dekapitasyon ile öldürüldü ve kan ve lumbosakral omurilik derhal toplandı. Kan santrifüjlendi (Sorvall RC 5B, Rotor SM 24) 1000 ×g'de 20 dakika boyunca ve plazma GGT, AST, ALT ve bilirubin (Labtest) belirlemek için kullanıldı. Bu tahliller için piyasada bulunan kitler (LABTEST) kullanılmıştır.

Omurilik hemen iki kısma ayrıldı. Bir kısım sıvı azot içinde soğutuldu ve H2O2'Yİ belirlemek için işlendi. 1 mmol/L fenilmetilsülfonil florür içeren 1 : 5 (W/v) seyreltilmiş %1.15 KCl homojenleştirilmiştir. Homojenatlar, çekirdekleri ve hücre kalıntılarını gidermek için 800°C'de 20 dakika boyunca 4 ×g'de santrifüj edildi. Süpernatant -80°C'de donduruldu ve antioksidan parametrelerin tahlilleri için kullanıldı.

2.8. Antioksidan enzim aktivitelerinin belirlenmesi
SOD aktivitesi, 480 nm'de ölçülebilen renkli bir yan ürün olan adrenalinin adrenokroma oksidasyonunu önlemek için süperoksit radikallerini nötralize etme eylemine dayanarak ölçülmüştür. Reaksiyon ortamı glisin tamponu (50 mM, pH 11.3) ve adrenalin (60 mM, pH 2.0) içeriyordu ve sonuçlar miligram protein başına birim olarak ifade edildi [23].

Cat aktivitesi, fosfat tamponu (0.1 m, pH 7.4) ve H2O2 (0.88 M) içeren bir reaksiyon ortamında 240 nm'de belirlendi ve sonuçlar miligram protein başına dakikada H2O2 pmolü olarak ifade edildi [24].

GPx aktivitesi 340 nm'de ölçüldü ve reaksiyon ortamı fosfat tamponu (140 mM, pH = 7.5), EDTA (1 mM), NADPH (0.24 mM), sodyum azid (1 mM), GSH (5 mM), glutatyon redüktaz (0.25 U/mL) ve üçüncül bütil hidroperoksit (0.5 mM) [25] içeriyordu. Sonuçlar, miligram protein başına dakikada peroksit/indirgenmiş hidroperoksit nmolleri olarak ifade edildi.

Miligram protein başına nanomol olarak ifade edilen GST aktivitesi, 340 nm [26] ' da dinitrofenil-s-glutatyon oluşum oranı ile ölçülmüştür.

2.9. Askorbik asit ve toplam Tiyol düzeylerinin belirlenmesi
Askorbik asit (AA) konsantrasyonu, Roe ve Kuether [27] tarafından tarif edilen yönteme göre belirlendi. Deney karışımı 0,3 ml homojenat kömür ile muamele edilmiş ve filtrelenmiş, 0,01 mL %10 tiyoüre ve 0,075 mL %2 2,4-Dinitrofenilhidrazin içeriyordu ve 37°C'de 3 saat inkübe edildi. bunu takiben, 0.375 mL %85 sülfürik asit eklenerek renk üretildi ve absorbans 540 nm'de okundu. Standart eğri, farklı AA konsantrasyonu kullanılarak hazırlanmıştır ve eğim, miligram protein başına AA mikromolü olarak AA miktarını ifade etmek için kullanılmıştır.

Toplam tiyol içeriği Aksenov ve Markesbery tarafından tarif edildiği gibi belirlendi [28]. Reaksiyon ortamı fosfat/EDTA tamponu (pH = 7.5) ve 5,5'-dithiobis (2-nitrobenzoik) asit (DTNB, 10 mM) içeriyordu. 30 dakika inkübasyondan sonra absorbanslar 412 nm'de okundu. Sonuçlar miligram protein başına TNB mikromolleri olarak ifade edildi.

2.10. H2O2 ve Lipid Hidroperoksit düzeylerinin belirlenmesi
Deney, H2O2 tarafından fenol kırmızısının horseradish peroksidaz- (HRPO-) aracılı oksidasyonuna dayanıyordu ve 610 nm'de emilen Bir bileşiğin oluşumuna yol açtı. Lumbosakral omurilikten taze doku bölümleri 10 mmol/L fosfat tamponunda (140 mmol/L NaCl ve 5 mmol/L dekstroz) 37°C'de 30 dakika inkübe edildi. Süpernatanlar 0.28 mmol/L fenol kırmızı ve 8.5 U/mL HRPO ile tüplere transfer edildi. 5 dk inkübasyondan sonra 1 mol / L NaOH ilave edildi ve çözüm 610 nm'de okundu. Sonuçlar mg doku başına µmol H2O2 olarak ifade edildi [29].

Lipid hidroperoksitler, Fe2+ ' nın oksidasyonu ile looh tarafından, Jiang ve ark. tarafından tarif edildiği gibi Fe3+ ile kompleks oluşturan ksilenol turuncu boya içeren bir asit ortamında ölçülmüştür. [30]. Sonuçlar g dokusu başına nmol olarak ifade edilir.

2.11. Protein Ölçümü
Protein Lowry ve ark yöntemi ile ölçüldü. [31], standart olarak sığır serum albümini kullanarak.

2.12. İstatistiksel Analiz
Veriler iki bağımsız araştırmacı tarafından analiz edildi; biri tedaviye kör oldu. Ekstraktın antioksidan deneyleri için veriler tek yönlü ANOVA tarafından analiz edildi ve ardından Tukey'nin post hoc testi yapıldı. Pearson korelasyon katsayısı () toplam fenolik içerik ve antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kullanılan yöntemler arasında hesaplanmıştır. Von Frey ve hot-plate testlerine ilişkin veriler, tekrarlanan önlemler ANOVA ve ardından Tukey testi ile analiz edildi. EPM, plazma parametreleri ve vücut ağırlığı sonuçları eşleştirilmemiş Öğrenci testi ile analiz edilirken, sonuçları Mann-Whitney testi ile değerlendirildi. Spinal-kord oksidatif biyomarkerler için veriler Üç yönlü Anova ve ardından Holm-Sidak post hoc testi ile karşılaştırıldı. Farklılıklar <0.05 iken istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Tüm istatistiksel analizler Software Origin 8 ile gerçekleştirilmiştir.

3. Sonuçlar
3.1. Schinus terebinthifolius Fraksiyonlarının antioksidan özellikleri
Hidroksil temizleme deneyinde, hef ve EtF, antioksidan standarda benzer IC50 değerleri gösterdi. DcF ve MeF daha yüksek değerler gösterdi () (Tablo 1). DPPH deneyinde, MEF ve EtF, BHT'DEN üstün ve askorbik aside benzer mükemmel temizleme faaliyetleri gösterdi. HeF ve DcF, diğer fraksiyonlardan en az 80 kat daha yüksek IC50 değerleri ile daha zayıf faaliyetler gösterdi (). Tuzak deneyinde, Mef'de en büyük potansiyel bulundu, ardından EtF, DcF ve HeF (). Toplam fenollerin en yüksek içeriği Mef'de bulunurken, en düşük DcF ve HeF () ' de meydana geldi. Tuzak değerleri ile fenolik içerik arasında yüksek doğrusal korelasyon (; ) gözlendi. Diğer antioksidan testlerde doğrusal korelasyon saptanmadı.

Tablo 1: Schinus terebinthifolius fraksiyonlarının antioksidan özellikleri ve kimyasal bileşikleri.

3.2. Schinus terebinthifolius Fraksiyonlarının fitokimyasal taraması
Tüm fraksiyonlarda antrakinonlar ve triterpenler/steroidler mevcuttu. Flavonoidler ve saponinler sadece EtF ve Mef'de mevcuttu. Kumarinler sadece Mef'de bulundu (Tablo 1).

3.3. Davranışsal Değerlendirme
CCI'DEN sonra, hiçbir sıçan motor davranışında termal ve mekanik hassasiyetlerin değerlendirilmesini etkileyebilecek brüt açıkları göstermedi. Deneysel dönem boyunca naif grupta önemli bir değişiklik bulunamadı (Şekil 1).

Şekil 1: 10 gün boyunca Schinus terebinthifolius yapraklarından metanol fraksiyonu (mef) (20 mg/kg/gün, i.p.) ile tedavi edilen sıçanlarda siyatik sinirin kronik daralma yaralanmasından (CCI) sonra davranışsal aşırı duyarlılığın değerlendirilmesi. (a) ısı uyaranlara karşı gecikme süresi; (b) Mekanik aşırı duyarlılık. Veriler, ± SEM ( her grup için) araçlarını temsil eder. sinir öncesi lezyon değerlerine göre anlamlı bir fark olduğunu gösterir (tekrarlanan ANOVA ve ardından Tukey post hoc testi ).
Ameliyattan sonraki 3. günde, salin ile tedavi edilen CCI sıçanlarda pençe geri çekilme gecikmesi azalırken (%48.2), mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarda pre-sinir lezyonu seviyesine göre anlamlı bir azalma saptanmadı (Şekil 1 (a)). 5, 7 ve 10. günlerde, sinir lezyonuna kıyasla salin ve mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarda önemli bir değişiklik görülmedi. Salin ve MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlar arasında bazal farklılık göstermesine rağmen, sham grupları deneysel dönemler boyunca pençe çekilme gecikmesinde önemli bir değişiklik göstermedi.

Salin ile tedavi edilen CCI sıçanlarındaki mekanik eşik, sinir öncesi lezyon seviyelerine göre 3. günde yaklaşık %51 azaldı. Aynı yanıt 5, 7 ve 10. günlerde bulundu. Bununla birlikte, mef ile tedavi edilen CCI sıçanları mekanik eşikte bir azalma göstermedi (Şekil 1 (b)). 3 gün ameliyat sonrası MeF mekanik eşik-TSO fareler öncesi sinir lezyonu eşik gibi davrandı. Bununla birlikte, daha sonraki zaman noktalarında önemli bir artış meydana geldi: ameliyattan 5, 7 ve 10 gün sonra, mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarında sinir lezyonuna kıyasla mekanik eşik arttı (%76).

Tuzlu su ile muamele edilmiş CCI sıçanlarına benzer şekilde, tuzlu su ile muamele edilmiş sahte sıçanlardaki mekanik eşik, prosedür öncesi seviyelere kıyasla sadece 3. günde bir azalma (56%) gösterdi. İşlem öncesi ve sonrası düzeyleri arasında 5, 7 ve 10. günlerde anlamlı bir fark saptanmadı. Mef ile tedavi edilen sahte sıçanlar, ameliyattan 3 gün sonra mekanik eşikte bir azalma göstermedi (Şekil 1 (b)).

Epm'de ve 10 gün boyunca salin veya MeF ile tedavi edilen naif sıçanların sonuçlarında anlamlı bir fark bulunmamıştır (Tablo 2).

Tablo 2: metanol fraksiyonunun (Mef) schinus terebinthifolius'tan (20 mg/kg/gün) naif sıçanlarda lokomotor aktivite ve anksiyete benzeri davranışlara etkisi.
3.4. Omuriliğin biyokimyasal parametrelerine etkileri
CCI'DEN 3 ve 10. günlerde, omurilik SOD aktivitesi salin ve MeF ile tedavi edilen CCI sıçanlarında yaklaşık %60 oranında artmıştır. Tuzlu ve MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlar, bu parametrede 3 ve 10 günlerinde, naif gruba kıyasla önemli artışlar gösterdi (Şekil 2 (a)). Salin ve Mef ile tedavi edilen sahte sıçanlarda 3. günde artış 42 ve 54% iken, karşılık gelen yüzdeler 10. günde 46 ve 78 % idi.

IMG]https://bitkiara.com/vb5//galeri/albums/userpics/10001/4-2.PNG[/IMG]

Şekil 2: (A) süperoksit dismutaz, (b) katalaz, (c) glutatyon peroksidaz ve (d) 3 ve 10 gün boyunca metanol fraksiyonu (mef) (20 mg/kg/d) veya salin ile tedavi edilen sıçanların omuriliğinde glutatyon-s-tranferaz faaliyetleri. Veriler ortalama ± SEM (/grup) temsil eder. aynı tedavi ve deneysel dönemde naif ve sahte veya naif ve CCI ile karşılaştırıldığında önemli bir fark olduğunu gösterir. aynı tedavi ve deneysel dönemde naif ile karşılaştırıldığında önemli bir fark olduğunu gösterir (; üç yollu Anova, ardından Holm-Sidak post hoc testi).
3. günde, salin ve mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarındaki omurilik kedisi aktivitesinde önemli bir değişiklik bulunamadı. Bu tedavi, 10. günde MeF ile tedavi edilen CCI sıçanlarda önemli bir değişiklik yapmamakla birlikte, tuzlu su ile tedavi edilen CCI sıçanları şu anda bir azalma (%46) gösterdi (Şekil 2 (b)). Sıçanlarda, kedi aktivitesi sırasıyla 3 gün boyunca salin ve MeF alan sıçanların omuriliğinde 48 ve 51% arttı. Bununla birlikte, kedi aktivitesi, 10. günde salin ve MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlarda yaklaşık %60 oranında azalmıştır.

CCI'DEN 3 ve 10. günlerde, salin ve mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarının omuriliğinde GPx aktivitesi önemli ölçüde azaldı (Şekil 2 (c)). Sıçanlarda, 3 gün boyunca salin alan hayvanlarda GPx aktivitesi azalırken, bu enzimin aktivitesi şu anda MeF ile tedavi edilen sıçanlarda önemli bir değişiklik göstermedi. 10. günde, GPx aktivitesi hem salin hem de MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlarda azaldı.

GST aktivitesi, naif sıçanlara kıyasla 3 ve 10 gün boyunca mef ve salin alan CCI sıçanlarından omurilikte yaklaşık %45 oranında azaldı. Sahte sıçanlarda bu enzimin aktivitesi de azalmıştır. 3 ve 10 gün sonra salin ve MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlarda azalma yaklaşık %50 idi(Şekil 2 (d)).

Askorbik asit içeriği, saf sıçanlara kıyasla 3 gün boyunca mef ve salin alan CCI sıçanlarının omuriliğinde %50'den fazla artmıştır. 10. günde, sadece tuzlu su ile muamele edilen CCI sıçanları askorbik asit seviyelerinde bir artış gösterdi. Mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarının omuriliğinde, askorbik asit seviyesi naif sıçanlarda bulunana benzerdi (Şekil 3(A)). Sahte sıçanlarda önemli bir değişiklik bulunamadı.

Şekil 3: askorbik asit (a), toplam tiyoller (b), hidrojen peroksit (c) ve lipid hidroperoksitler (D) 3 ve 10 gün boyunca metanol fraksiyonu (mef) (20 mg/kg/d) veya salin ile tedavi edilen sıçanların omuriliğindeki seviyeler. Veriler ortalama ± SEM (/grup) temsil eder. aynı tedavi ve deneysel dönemde naif ve sahte veya naif ve CCI ile karşılaştırıldığında önemli bir fark olduğunu gösterir. aynı tedavi ve deneysel dönemde naif ile karşılaştırıldığında önemli bir fark olduğunu gösterir (; üç yollu Anova, ardından Holm-Sidak post hoc testi).
CCI'DEN 3 ve 10. günlerde, salin ve MeF ile tedavi edilen sıçanların omuriliğinde toplam tiyol azaltıldı. 3. günde, bu sıçanların omuriliğinde azalma Yaklaşık %43 idi. 10. günde, salin ile tedavi edilen CCI sıçanlarının omuriliğinde azalma %50, ancak mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarının omuriliğinde yaklaşık %28 idi (Şekil 3 (b)). Sıçanlarda, toplam tiyol içeriği 3 gün boyunca salin alan sıçanların omuriliğinde azaldı, ancak MeF ile tedavi edilen sıçanlarda (%57) arttı. 10. günde, salin ve MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlarda spinal kord toplam tiyol içeriğinde %43 azalma vardı.

Omurilikte H2O2 düzeylerinde 3 ve 10 gün sonra salin ve mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarından önemli bir değişiklik saptanmadı (Şekil 3 (c)). Mef uygulaması omurilikte H2O2 seviyesini 3 ve 10 gün boyunca tedavi gören sahte sıçanlardan değiştirmedi. Bununla birlikte, bu prooksidan işaretleyici sırasıyla 122 ve 88 gün boyunca salin alan sıçanlarda 3 ve 10% arttı.

Yüksek varyasyona rağmen, 3 ve 10 gün boyunca mef ve salin alan CCI ve Sham sıçanlarında spinal kord lipid hidroperoksit düzeylerinde anlamlı bir fark yoktu (Şekil 3 (d)).

3.5. Kan parametreleri ve vücut ağırlığı üzerindeki etkisi
GGT, AST, ALT ve bilirubin düzeyleri mef yönetimi ile önemli ölçüde değişmedi (Tablo 3). Benzer şekilde, mef, vücut ağırlığındaki değişiklikleri (başlangıç: g; son: g) salin grubuna kıyasla (başlangıç: g; son: g) indüklemedi.

Tablo 3: schinus terebinthifolius'tan metanol fraksiyonunun (MeF) naif sıçanlarda karaciğer fonksiyonunun kan parametreleri Üzerine Etkisi.
4. Tartışma
Bu çalışma, S. terebinthifolius yapraklarından, özellikle Mef'den hazırlanan ekstraktların yüksek antioksidan potansiyele sahip olduğunu göstermiştir. S. terebinthifolius'tan elde edilen ekstraktlarda bir antioksidan potansiyelin ortaya çıkması, El-Massry ve ark. tarafından yapılan bir önceki çalışma ile uyumludur. [8].

Çalışmamız ilk kez MeF uygulamasının CCI kaynaklı nöropatik ağrının zayıflamasına neden olduğunu gösterdi. Antioksidanlar nöropatik ağrı tedavisi için aday olduğu için [11, 12], mef ile tedavi edilen CCI sıçanların termal ve mekanik hassasiyetlerindeki artışın Mef'in antioksidan potansiyeli ile ilişkili olması mümkündür. Bununla birlikte, tarama, bu fraksiyonda triterpenler/steroidler ve saponinlerin varlığını da göstermiştir. Bu tür bileşikler aynı zamanda nöropatik ağrı üzerinde iyileştirici bir etki gösterir [32] ve bu nedenle Mef'nin antinosiseptif etkisine katkıda bulunabilir. Antinosisepsiyona bir başka katkıda bulunan S. terebinthifolius'un anti-inflamatuar etkisi olabilir. Bu bitkiden elde edilen bazı ekstraktların bileşikleri anti-inflamatuar aktiviteye sahip görünmektedir [33]. Camara ve ark. [34] enflamatuar sürecin azaltılmasının CCI'Lİ sıçanlarda antinosisepsiyona katkıda bulunduğunu göstermiştir. Bu nedenle, bu fraksiyonun CCI'Lİ sıçanlarda antinosiseptif etkisine katkıda bulunabilecek Mef'nin kimyasal bileşiklerini daha iyi karakterize etmek için daha fazla test gereklidir.

Sahte sıçanlarda mekanik eşikteki azalma, ağrıya neden olan kaslar ve bitişik bağ dokusu gibi derin dokuların manipülasyonunu içeren prosedürlere bağlı olabilir [10]. Mef uygulaması bu hayvanlarda antinosiseptif bir etki yarattığından, bu sonuç Mef'in ağrı koşullarında antinosiseptif etkisini de güçlendirir. Ameliyattan 5, 7 ve 10 gün sonra salin ile tedavi edilen CCI sıçanlarda pençe çekilme gecikmesinde önemli değişiklikler olmaması, termal hiperaljezinin geri dönüşünü önermektedir, ancak semptomların toplam geri dönüşünün 5 gün içinde gerçekleştiğine inanmıyoruz. Bu, çalışmamızda kullanılan testin bir sınırlamasını gösterebilir.

Çalışmamız ayrıca ağrı mekanizmasında ortaya çıkan rollerinden dolayı ROS üzerine odaklanmıştır [9-12]. İlk kez, S. terebinthifolius'un spinal kord prooksidan ve antioksidan belirteçlerdeki değişikliklere neden olduğu bir ekstraktın uygulandığını gösterdik. İlginçtir ki, değişiklikler MeF ile tedavi edilen CCI sıçanlarına özel değildi, ancak bazıları salin ile tedavi edilen CCI sıçanlarında ve salin ve MeF ile tedavi edilen sahte sıçanlarda da mevcuttu. Bu sonuçlar, değişikliklerin periferik lezyonla tedaviden daha fazla ilişkili olabileceğini düşündürmektedir. Bununla birlikte, askorbik asit içeriği 10 gün sonra salin ile tedavi edilen CCI sıçanlarda artarken, bu içerik şu anda mef ile tedavi edilen CCI sıçanlarda azalmıştır. Bu azalma, tedavinin askorbik asitte bir modülasyona neden olduğunu göstermektedir. CCI'DEN 3 gün sonra askorbik asit içeriğindeki artış, askorbik asidin modülasyonunun daha sonra meydana geldiğini gösterebilir. Askorbik asit, beyindeki antioksidan savunmanın ilk satırında yer alır ve lipid zarlarını ve proteinleri oksidatif hasardan korur [35]. Beyin aktivitesine yanıt olarak hücre dışı askorbik asit konsantrasyonları artar [35]. Nöropatik ağrıda glutamat ve diğer nörotransmitterler artar [1, 2]. Bu nedenle, askorbik asit seviyelerindeki artış, ccı'li sıçanların omuriliğinde yüksek sinaptik aktivite ile ilişkili olabilir. İndirgeme, Mef'de bulunan antioksidan moleküllerle ilişkili olabilir. Ji ve ark. [36] Ros atma ağrı ile ilişkili beyin fonksiyonlarını normalleştirmek için bir fırsat sunmak gibi görünüyor önerdi. Mef tedavisi 3 gün sonra askorbik asit seviyelerini azaltmadığından, bu sonuç MeF tarafından askorbik asit modülasyonunun daha sonra gerçekleştiğini göstermektedir. Modülasyon zamanındaki farklılıklar, çalışmamızdaki doz ile ilişkili olabilir. Yüksek dozlarda MeF ile yapılan daha ileri çalışmalar bu öneriyi açıklığa kavuşturmaya yardımcı olabilir.

Askorbik asit antioksidan aktivitesini gerçekleştirdiğinde oksitlenir. Bununla birlikte, oksitlenmiş formunun azaltılması, memelilerde en bol tiyol olan glutatyona [35] bağlı olabilen enzimatik bir reaksiyondur. CCI sıçanlarda askorbik asit arttığından, okside askorbik asit formunu azaltmak için glutatyon kullanımı, CCI sıçanlarının omuriliğindeki toplam tiyollerin azalmasına katkıda bulunmuş olabilir. Glutatyon GPx ve GST için bir kofaktördür [37]. Glutatyondaki azalma, GPx ve GST aktivitelerindeki azalmayı açıklayabilir. Sahte sıçanlarda, toplam tiyollerdeki azalma bu moleküllerin etkilerini gösteriyor olabilir. Toplam tiyoller, bazı enzimatik sistemlerde kofaktör olarak işlev gören bir grup molekül oluşturur ve radikalleri doğrudan nötralize edebilirler [37]. Toplam tiyollerde azalma, Kas rejenerasyonunda antioksidanların önemli rolüne bağlı olabilir. Kozakowska ve ark. [38] oksidatif stresin yaralanma sonrası iskelet kası rejenerasyonunun önemli bir modülatörü olduğunu gösterdi. Glutatyon azaltma, sahte sıçanlarda GPx ve GST aktivitelerindeki değişikliği açıklayabilir.

Çalışılan tüm zaman noktalarında sahte ve CCI sıçanlarda artan SOD aktivitesi bulundu. SOD, süperoksit anyonunu H2O2'YE dönüştürür. Bu nedenle, bu hayvanların omuriliğinde H2O2 seviyelerinde bir artış beklenir. Aslında, bu molekülün seviyeleri 3 ve 10 gün boyunca salin ile tedavi edilen sahte sıçanlarda artmıştır. Bu artış, 3. günde artan kedi aktivitesinden sorumlu olabilir. Peroksizomlarda bulunan bir enzim olan CAT, H2O2'NİN H2O ve O2 [39] ile parçalanmasını katalize eder. Kas yaralanmasından sonra, kedinin indüksiyonu gecikir ve aktivitesinin Zirvesi yaralanmadan sonraki 2.günde gerçekleşir, ardından 7. günde en yüksek seviyesine ulaşan tioredoksin aktivitesi [40]. Thioredoxin, ROS'UN aktivitesini sınırlayan bir antioksidan proteindir [39, 41]. Tioredoksin artışı ile kedi aktivitesi azaltılabilir, bu da 10 gün sonra salin ile tedavi edilen sahte sıçanlarda kedinin azalmasını açıklar. Hem glutatyon hem de tiyoredoksin, peroksitlerin ortadan kaldırılması için enzim sistemlerini destekler, ancak her sistemin farklı kinetik ve işlevleri vardır [41]. Böylece, tiyoredoksin Olası aktivitesi, 10. günde bulunan tiyollerin olumlu bir etkisi olasılığını dışlamaz.

Mef'de antioksidan moleküllerin varlığı, mef ile tedavi edilen sahte sıçanlarda katalaz aktivitesinde önemli bir değişiklik olmamasından sorumlu olabilir. Benzer bir öneri mef tedavi CCI sıçanlar için geçerli olabilir. Bununla birlikte, tuzlu su ile muamele edilen CCI sıçanlarda katalaz aktivitesi de azalmıştır. Bu sonucun, bu hayvanlarda da azalmış olan tiyollerin kullanımı ile ilgili olabileceğini öneriyoruz. Tiyollerin kullanımı, yukarıda tartışıldığı gibi askorbik asit artışıyla ilişkili olabilir.

Goecks ve ark göre. [9], CCI yaralanması, sahte hayvanlardaki durumun aksine, muhtemelen merkezi duyusal nöronların daha fazla uyarılması göz önüne alındığında, oksidatif stresi önlemek için daha fazla antioksidan sistemi harekete geçirir. Aşırı ROS oluşumu sadece oksidatif hasarın birikmesini önlemek için düzeltilmelidir ve optimal hücre sinyalizasyon süreçleri için hafif bir prooksidatif denge gereklidir [42], merkezi duyusal nöronların farklı uyarımı, CCI ve sahte sıçanlar arasındaki farklılıklardan sorumlu olabilir. Antioksidan sistemlerin harekete geçirilmesi, omurilikte lipid hidroperoksidlerde önemli bir değişikliğin olmamasına katkıda bulunabilir.

EPM'DE ve testlerde, plazma göstergelerinde ve vücut ağırlığında değişiklik olmaması, Mef'in toksik bir etkisi olmadığını ve bu da Mef'in nöropatik ağrıyı tedavi etmek için klinik olarak bir adjuvan olarak kullanılabileceğini düşündürmektedir. Yakın tarihli bir çalışma, S. terebinthifolius'un toksik bir potansiyele sahip olduğunu göstermiştir [43]. Bununla birlikte, bu çalışma 83 gün boyunca bir tedavi uygulandı ve zararlı etkiler esas olarak 176 ve 352 mg/kg vücut ağırlığında meydana geldi. Bu nedenle, doz, bu bitkiden ekstraktların toksik etkisini belirlemede önemli bir faktör gibi görünmektedir.

5. Sonuç
Schinus terebinthifolius'tan, özellikle de Mef'den kurutulmuş ve toz haline getirilmiş yaprakların ardışık ekstraksiyonları ile elde edilen fraksiyonlar antioksidan moleküller içeriyordu. Bu, 3 ve 10 gün boyunca uygulanan 20 mg/kg/d dozunda Mef'nin belirgin toksik etkiler olmaksızın antinosisepsiyona neden olduğu ilk gösteridir, bu da bu fraksiyonun nöropatik ağrıyı tedavi etmek için kullanılabileceğini düşündürmektedir. Buna ek olarak, bu çalışma, mef uygulamasının omurilikte prooksidan ve antioksidan belirteçleri, periferik bir lezyondan sonra değiştirilmiş belirteçleri değiştirdiğine dair kanıtlar sağlamıştır. Değişikliklerin Mef'de bulunan antioksidan moleküllerle ilişkili olabileceğini öneriyoruz, çünkü Ros atma, ağrı ile değiştirilen omurilik oksidatif durumunu normalleştirmeye yardımcı olmak için bir fırsat sunuyor gibi görünüyor. Ancak, özü diğer bileşikler antinociceptive yönde katkı sağlıyor olabileceği ihtimalini de göz ardı edemeyiz. CCI kaynaklı nöropatik ağrı ile sıçanların omuriliğinde mef tedavisi, antinosisepsiyon ve oksidatif stres parametreleri arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamak için daha ileri çalışmalar gereklidir.

Çıkar çatışmaları
Yazarlar, bu makalenin yayınlanmasıyla ilgili çıkar çatışması olmadığını beyan etmektedir.

Yazarların Katkıları
Taína Scheid ve Wania Aparecida Partata, çalışma konseptinden ve tasarımından sorumluydu ve el yazmasını hazırladılar ve yazdılar. Taína Scheid, Maira Silmara Moraes, Thiago Pereira Henriques, Ana Paula Konzen Riffel ve Eduardo Miranda Ethur deneyleri gerçekleştirdi. Adriane Belló-Klein, Gilsane Lino Von Poser ve Eduardo Miranda Ethur araştırma materyali sağladı. Tüm yazarlar son el yazmasını onayladı.

Alındılar
Bu çalışma Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS) hibe ile desteklenmiştir.

Başvuru
L. Colloca, T. Ludman, D. Bouhassira ve ark.,” Nöropatik ağrı, " Doğa değerlendirmeleri hastalık Astarları, vol. 3, makale kimliği 17002, 2017. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
F. T. nikel, F. Seifert, S. Lanz ve C. maihöfner, "nöropatik ağrı mekanizmaları", Avrupa Nöropsikofarmakolojisi, cilt. 22, no. 2, S. 81-91, 2012. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
D. J. Newman ve G. M. Cragg, "1981'den 2010'a kadar 30 yıl boyunca yeni ilaçların kaynağı olarak doğal ürünler" doğal ürünler Dergisi, vol. 75, no. 3, s. 311-335, 2012. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
A. C. Piccinelli, J. A. Santos, E. C. Konkiewitz ve ark.,” Antihiperaljezik ve antidepresan eylemler (r)-(+)-limonen, α-phellandrene, ve bir nöropatik ağrı modelinde schinus terebinthifolius meyve uçucu yağ, " beslenme Nörobilim, cilt. 18, no. 5, S. 217-224, 2015. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
M. P. Corrêa, Dicionário de Plantas Úteis Do Brasil E Das Exóticas Cultivadas, Imprensa Nacional, Rio de Janeiro, Brezilya, 1984.
A. S. Jaggi, V. Jain ve N. Singh,” nöropatik ağrının hayvan modelleri", Temel ve klinik Farmakoloji, cilt. 25, no. 1, S. 1-28, 2011. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
S. Johann, N. P. Sá, L. A. Lima ve ark.,” Schinol Antifungal aktivitesi ve patojenik mantar paracoccidioides brasiliensis karşı Schinus terebinthifolius izole yeni bir bifenil bileşik, " Klinik Mikrobiyoloji ve antimikrobiyal Yıllıkları, cilt. 9, no. 1, S. 30, 2010. Publisher'da görüntüle * Google Scholar'da görüntüle
K. F. El-Massry, A. H. El-Ghorab, H. A. Shaaban ve T. Shibamoto, "Mısır'da yetiştirilen Schinus terebinthifolius yapraklarından hazırlanan çeşitli örneklerin kimyasal bileşimleri ve antioksidan / antimikrobiyal aktiviteleri," Tarım ve gıda kimyası Dergisi, Cilt. 57, no. 12, s. 5265-5270, 2009. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
C. S. B. Goecks, A. Horst, M. S. Moraes ve ark.,” Siyatik sinirin kronik daralmasından sonra sıçan omuriliğinde oksidatif parametrelerin değerlendirilmesi, " Nörokimyasal araştırma, cilt. 37, No. 9, s. 1952-1958, 2012. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
T. Scheid, L. D. Bosco, R. P. Guedes, M. A. Pavanato, A. Belló-Klein ve W. A. Partata,” siyatik sinir transeksiyonu spinal ve supraspinal bölgelerde oksidatif parametreleri modüle eder " Nörokimyasal araştırma, cilt. 38, no. 5, S. 935-942, 2013. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
J. Yowtak, J. Wang, H. Y. Kim, Y. Lu, K. Chung ve J. M. Chung,” antioksidan tedavinin faredeki nöropatik ağrı modelinde spinal GABA nöronları Üzerindeki Etkisi " ağrı, vol. 154, no. 11, s. 2469-2476, 2013. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
A. P. K. Riffel, J. A. de Souza, M. D. C. Q. Santos ve ark.,” C ve e vitaminlerinin sistemik uygulanması, sıçanlarda siyatik sinirin kronik daralma yaralanması ile indüklenen nosisepsiyonu zayıflatır, " beyin araştırma Bülteni, cilt. 121, s. 169-177, 2016. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
T. Siatka ve M. Kašparová,” Bellis perennis L. çiçeklerinin toplam fenolik ve flavonoid içeriğindeki mevsimsel varyasyon ve DPPH atma aktivitesi " molekülleri, vol. 15, no. 12, s. 9450-9461, 2010. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
V. Chobot,” deoksiriboz degradasyon deneyinin varyantlarında pro - ve antioksidan etkilerin eşzamanlı tespiti, " Tarım ve gıda kimyası Dergisi, vol. 58, no. 4, s. 2088-2094, 2010. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
M. T. K. Dresch, S. B. Rossato, V. D. Kappel ve ark.,” Toplam reaktif antioksidan potansiyelini değerlendirmek için alternatif bir yöntemin optimizasyonu ve doğrulanması, " analitik Biyokimya, vol. 385, no. 1, S. 107-114, 2009. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
H. Wagner ve S. Bladt, bitki ilaç analizi: ince tabaka Kromatografi Atlas, Springer, Berlin, Almanya, 2. Baskı, 1996.
E. C. Rosas, L. B. Correa, T. D. A. Pádua ve ark.,” Zimosan kaynaklı artrit nötrofil göç Schinus terebinthifolius Raddi hidroalkolik özü Anti-inflamatuar etkisi, " Etnofarmakoloji Dergisi, Cilt. 175, s. 490-498, 2015. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
L. E. S. Fedel-Miyasato, A. S. N. Formagio, S. A. Auharek ve ark.,” Allium cepa ve İsviçre farelerde schinus terebinthifolius Raddi antigenotoksik ve antimutajenik etkileri: karşılaştırmalı bir çalışma, " genetik ve Moleküler araştırma, cilt. 13, no. 2, S. 3411-3425, 2014. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
O. C. Pires, A. V. C. Taquemasa, G. Akisue ve ark., "Análise preliminar da toxicidade aguda e dose letal mediana (DL50) comparativa entre os frutos de Pimenta-do-Reino do Brasil (Schinus terebinthifolius Raddi) e pimenta-do-Reino” Pipper Nigrum L.)," Acta Farmaceutica Bonaerense, cilt. 23, S. 176-182, 2004. Google Scholar de görüntüle
Z.-Y. Cai, P. Galettis, Y. Lu, dl Morris ve M. H. Pourgholami,” Yeni Zelanda beyaz tavşanlarda albendazolün farmakokinetiği: oral ve intraperitoneal uygulama, " antikanser Reseach, vol. 27, no. 1 A, S. 417-422, 2007. Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
G. J. Bennett ve Y. K. Xie,” insanda görülenler gibi ağrı hissi bozuklukları üreten sıçanda periferik bir mononöropati " ağrı, vol. 33, no. 1, S. 87-107, 1988. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
M. A. de Souza, L. A. Centenaro, P. R. Menegotto ve ark.,” Prenatal stres sosyal davranış açıkları üretir ve yetişkin sıçanlarda oksitosin ve Vazopressin nöronların sayısını değiştirir, " Nörokimyasal araştırma, cilt. 38, no. 7, s. 1479-1489, 2013. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
HP Misra ve I. Fridovich, " epinefrin otoksidasyonunda süperoksit anyonunun rolü ve süperoksit dismutaz için basit bir deney., "Biyolojik Kimya Dergisi, vol. 247, No. 10, s. 3170-3175, 1972. Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
H. Aebi,” [13] katalaz in vitro, " Enzimolojide yöntemler, cilt. 105, s. 121-126, 1984. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
L. Flohe ve W. A. Gunzler,” glutatyon Peroksidazın deneyleri", enzimolojide yöntemler, cilt. 105, s. 114-121, 1984. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
B. Mannervik ve C. Guthenberg,” [28] glutatyon transferaz (insan plasenta), " Enzimolojide yöntemler, cilt. 77, s. 231-235, 1981. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
J. H. Roe ve C. A. Kuether,” dehidroascorbik asidin 2,4-dinitrofenilhidrazin türevi yoluyla tam kan ve idrarda askorbik asido tayini, " biyolojik Kimya Dergisi, vol. 147, s. 399-407, 1943. Google Scholar de görüntüle
M. Y. Aksenov ve W. R. Markesbery, "Alzheimer hastalığında hipokampus ve serebellumdaki glutatyon redoks sistemi genlerinin tiyol içeriğindeki ve ekspresyonundaki değişiklikler," nörobilim mektupları, vol. 302, no. 2-3, s. 141-145, 2001. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
E. pick ve Y. Keisari,” kültürde hücreler tarafından üretilen hidrojen peroksit ölçümü için basit bir kolorimetrik yöntem", immünolojik yöntemler Dergisi, Cilt. 38, hayır. 1-2, s. 161-170, 1980. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
Z.-Y. Jiang, A. C. S. Woollard ve S. P. Wolff, " fe2+ oksidasyonu ile lipid hidroperoksit ölçümü xylenol turuncu varlığında. TBA testi ve bir iyodometrik yöntem ile karşılaştırma,” lipidler, vol. 26, No. 10, s. 853-856, 1991. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr ve R. J. Randall, " Folin fenol Reaktifi ile Protein ölçümü., "Biyolojik Kimya Dergisi, vol. 193, no. 1, S. 265-275, 1951. Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
A. Muthuraman ve N. Singh,” siyatik sinir kaynaklı nöropatik ağrı kronik daralma yaralanma (CCI) sıçan modelinde acorus calamus L. saponin zengin özü Nöroprotektif etkisi, " Etnofarmakoloji Dergisi, Cilt. 142, no. 3, s. 723-731, 2012. Publisher'da görüntüle * Google Scholar'da görüntüle
M. K. Jain, Bao-Zhu Yu, J. M. Rogers ve ark.,” Schinus terebinthifolius meyvelerinden salgılanan fosfolipaz A2 spesifik rekabetçi inhibitörü, " Fitokimya, cilt. 39, no. 3, s. 537-547, 1995. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
C. C. Camara, H. F. Ramos, A. P. Da Silva ve ark.,” Oral gabapentin tedavisi, Wistar sıçanlarda deneysel sinir daralmasını takiben sinir ve periferik inflamatuar yanıtları vurgular, " Nörobilim mektupları, cilt. 556, s. 93-98, 2013. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
A. Covarrubias-Pinto, A. I. Acuña, F. A. Beltrán, L. Torres-Díaz ve M. A. Castro,” eski şeyler yeni görünüm: askorbik asit nörodejeneratif bozukluklarda beyni korur, " Uluslararası moleküler Bilimler Dergisi, vol. 16, no. 12, s. 28194-28217, 2015. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
G. Ji, Z. Li ve V. Neugebauer,” reaktif oksijen türleri visseral ağrıya bağlı amigdala plastisitesine ve davranışlarına aracılık eder " ağrı, vol. 156, no. 5, S. 825-836, 2015. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
H. Sies,” glutatyon ve hücresel işlevlerdeki rolü", serbest radikal Biyoloji ve Tıp, cilt. 27, no. 9-10, s. 916-921, 1999. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
M. Kozakowska, K. Pietraszek-Gremplewicz, A. Jozkowicz ve J. Dulak, "iskelet kası yaralanmasında ve rejenerasyonunda oksidatif stresin rolü: antioksidan enzimlere odaklanma," Kas araştırması ve hücre motilitesi Dergisi, Cilt. 36, no. 6, S. 377-393, 2015. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
S. K. Powers, L. L. Ji, A. N. Kavazis ve ark., "Reaktif oksijen türleri: iskelet kası üzerindeki etkisi," Comprehencive Physiology, vol. 1, S. 941-969, 2011. Google Scholar de görüntüle
S. Singh, D. C. Canseco, S. M. Manda ve ark., "Sitoglobin miyojenik progenitör hücre canlılığı ve kas rejenerasyonu modüle," Amerika Birleşik Devletleri, vol Bilimler Ulusal Acadamy Bildiriler. 111, no. 1, S. E129-E138, 2014. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
D. P. Jones, “oksidatif stresin radikal içermeyen biyolojisi” American Journal of Physiology-Cell Physiology, vol. 295, hayır. 4, s. C849-C868, 2008. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
B. Poljsak, D. Šuput ve I. Milisav,” Ros ve antioksidanlar arasındaki dengeyi sağlamak: sentetik antioksidanlar ne zaman kullanılır, " oksidatif Tıp ve hücresel uzun ömür, cilt. 2013, makale kimliği 956792, s. 1-11, 2013. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle
E. A. Carlini, J. M. Duarte-Almeida ve R. Tabach, " Brezilyalı biber ağaçlarının toksisitesinin değerlendirilmesi Schinus terebinthifolius Raddi (Aroeira-da-praia) ve myracrodruon urundeuva Allemão (Aroeira-do-sertão),” Fitoterapi Araştırması, cilt. 27, no. 5, S. 692-698, 2013. Yayıncı de görüntüle * Google Scholar de görüntüle * Scopus de görüntüle

Duyuru

Berezilya Biberi, Schinus terebinthifolius, Brezilya Biber Ağacı, Pembe Biber Nedir Faydaları Zararları

Berezilya Biberi, Schinus terebinthifolius, Brezilya Biber Ağacı, Pembe Biber Nedir Faydaları Zararları

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap