Duyuru

**igokcek** · 14 September 2010, 14:31

Ağaç | 2-6 m | 1-3 m | Ar

Kaşu Akasyası, Gerberakazie, Acacia catechu
Tanen Akasyası Syn: Acacia catechuoides
Siyah Kaşu Mimosa sundra
Hint Kaşusu

Familyası: Mimozagillerden, MimosengewÃ¢chse, Mimosaceae

Drugları: Kaşu; Catechu
Kaşu Akasyasının gövdesi ince kıyıldıktan su buharı ile damıtılması ile elde edilen hülasa ısıtılarak elde edilen madde kurutularak parça madde elde edilir ve buna Kaşu denir.

Botanik: Kaşu Akasyası Hindistan, Burma, Malezya ve Tayland gibi ülkelerde yetişir. Çok miktarda Tanen içerdiğinden Tanen Akasyası diye de anılır. Hindistan’da çok yaygın olarak yetişen Tanin Palmiyesinin (Areca catechu) Tanin Akasyası ile bir ilgisi yoktur. Sadece ikisi de çok miktarda Tanen içerir. Tanen Akasyası 10-20m boyunda, kabukları esmer, dalları hafif tüylü ve oldukça sık yapraklıdır. Ana yaprak yan kanat yapraklardan meydana gelir. Yan kanat yapraklarda 30-50 yaprakçık bulunur ve bu yaprakçıklar 1cm büyüklüğünde ve yeşilimsi renklidir. Çiçekleri sarı renkli, küre şeklinde, sayısız döllenme tozluklarından oluşan 20-30 çiçekli bir sapa dizilmiş olarak bulunur. Meyveleri fasulye kapçığı şeklinde, 10-15cm uzunluğunda ve içinde 6-8adet çekirdek bulunur.

Hasat zamanı: Kaşu Akasyasının gövdesi ve dalları kesilerek ince kıyılır, 10-15sa suda kaynatılır ve odunlar çıkarıldıktan sonra geri kalan sıvı 1-2sa süreyle kaynatılır ve bu şurup şeklindeki sıvı form yataklarına dökülür ve soğutulduktan sonra sertleşerek şekil alan esmerimsi kırmızı, kokusuz, Kaşu adi ile anılan madde elde edilir.

Birleşimi: Birleşimindeki maddeler;
a) %20-60 oranında Tanin türevleri; Catechin ve Epicatechin (Beşparmak otuna bakınız) yekun içinde %2-12 arasında bir oran olup geri kalan Tanen türevleri henüz tamamen analiz edilememiştir.
b) Flavon it türevlerinden; Quercetin, Quercitrin ve Fisetin

Tesir şekli: Damarları büzücü, antiseptik (mikropları öldürücü), kanamayı durdurucu ve iltihapları önleyicidir.

Kullanılması: Dişeti, ağız içi ve yutak iltihaplarına karşı gargara yapmak için, bağırsak iltihapları, ishal ve bağırsak üşütmesine karşı içilir. Kadınlarda görülen beyaz akıntıya karşı vajina yıkanır.

Çayı: Kaşudan 0,5-2gr demliğe konur ve üzerine 200-400ml kaynar su ilave edilerek elde edilen sıvı ile gargara yapılır. Şayet içilecek ise 0,3gr Kaşu kaynar suda eritildikten sonra içilir.

Yan tesirleri: Bilinen bir yan tesiri yoktur. Türkiye’de yaşayanların Beş-parmak kökü çayı, Hindistan’dakilerin Kaşu kullanması daha ekonomiktir.

**igokcek** · 14 September 2010, 14:32

Ağaç | 1-30 m | 5-8 Aylar | Ar

C) Aroma Akasyası, Akazienblüten Acacia farnesiana
Rayihalı Akasya Syn: Mimosa farnesiana
Akasya çiçeği
Akasya çalısı

Familyası: Mimozagillerden, MimosengewÃ¢chse, Mimosaceae

Drugları: Akasya esansı; Acacia farnesiana aetheroleum
“ “ ; Cassieol
Sadece bu Aroma Akasyasının çiçeklerinin su buharı ile damıtılması (destilasyonu) ile akasya esansı (Akasya eter yağı) elde edilir ve bu esans dahilen kullanılmaz.

Botanik: Vatanı Karaip Adaları olduğu tahmin edilen bitki önce İspanya’ya sonra İtalya’ya getirilmiş ve İtalyan Farnese (Roma) bahçesinde 1611’de yetiştirdiğinden onun ismi ile anılır. Aroma Akasyası 1-3m boyunda, bazen çalı, bazen ağaç görünümünde olan bu akasyanın gövdesi gri lekeli, dalları eğri büğrüdür. Ana yaprakları 2-6çift yan kanatlardan ve yan kanatları 10-20yaprakçıktan meydana gelir ve bu yaprakçıklar 4-6mm büyüklüğündedir. Çiçekleri sarı renkli, taç yaprakları oldukça 0,3-0,4cm büyüklüğünde döllenme tozlukları 0,5cm uzunluğundadır. Meyveleri fasulye kapçığı şeklinde, 5-8cm uzunluğunda ve içi de yeşilimsi esmer renklidir.

Hasat zamanı: Yaz aylarında toplanan A.Akasya çiçekleri kaynar yağla veya petrol eterle hülasası elde edilir ve sonrada destilasyonu ile saf eter yağı elde edilir.

Birleşimi: Birleşimindeki Uçucu yağ türevleri; Benzylalkol, Benzaldehyd, Camin alkol, Caminaldehyd, farnesol, geraniol, Granylasetat, x-ionen, Linalool, Linalylasetat, Metil salisilat, nerolidol ve trincol içerir.

Tesir şekli: Teskin edici, cinsel gücü artırıcı, depresyonu önleyici, kramp-ları çözücü ve insana canlılık vericidir.

Kullanılması:
Aromaterapide; baş ağrısı ve migrene karşı A.Akasya eter yağından şakaklara sürülür. Stres, korku, telaş, sinirlilik, ruhi dengesizlik (depres-yon) gibi rahatsızlıklarda Aroma lambası, Aroma konisi veya bir fincan suya 5-10damla A.Akasya eter yağı damlatılır. Haşerelere karşı A.Akasya eter yağından 3-4damla içi su dolu olan bir fincan suya damlatılır veya Aroma lambasına katılırsa oraya sivrisinekler ve haşereler yaklaşmaz. Bilindiği gibi Cassie, Sinamekigiller verilen isim olup Cassie yağı denince Sinameki yağı anlaşılmamalıdır. Çünkü Sinamekinin yağı olmaz.

Yan tesirleri: A.Akasya eter yağı (Cassie yağı) dahilen kullanılmaz.

**igokcek** · 14 September 2010, 14:34

Ağaç | 6-20 m | 5-6 Aylar | Hafif Zehirli

D) Sahte Akasya Rubine Robinia pseudoacacia
Salkım ağacı

Familyası: Baklagillerden, Schmettelingsblüttler, Fabaceae

Drugları: S.Akasya kabuğu; Robinia pseudoacaciae cortex
“ çiçeği; “ “ folium
S.Akasyanın çiçek, yaprak ve kabukları çay yapımında kullanılır.

Botanik: Vatanı Florida olup oradan 1601 yılında Avrupa'ya getirilmiş, buradan park, bahçe ve yol kenarlarına ekilmiş bir süs bitkisidir. Yaprakları kanat şeklinde olup her kanatta 11-19adet yapraktan medyana gelir. Yaprakçıkları yumurta şeklinde olup kısa saplıdır. Çiçekleri sarkmış üzüm salkımı şeklinde ve kelek gibidir. Meyveleri fasulye kapçığı şeklindedir.

Kullanılması: Aşırı mide asidi, mide ekşimesi, kusma, ishaller, ağızda ekşi bir tat ve yüzde gerilme gibi durumlarda kullanılır.

Çay: Kabuk, sürgün, çiçek veya yapraklarından 1 kahve kaşığı demliğe konur ve üzerine 200-300ml kaynar su ilave edilerek 5-10dk demlenmeye bırakıldıktan sonra süzülerek içilir.

Yan tesirleri: Tarife uyulduğunda yan tesiri yoktur fakat fazla dozajda alınması zehirlenmeye sebep olabilir.

***maturidi*** · 14 December 2021, 19:02

Acacia Catechu Willd'in Apoptotik Kaynaklı Etkileri . İnsan Kolon Kanseri Hücrelerinde Özü

Elda Chiaino , ^1,^†Matteo Micucci , ^2,^†Miriam Durante , ¹Roberta Budriesi , ²Roberto Gotti , ²Carla Marzetti , ³Alberto Chiarini , ² ve Maria Frosini ^1,^*
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır . İlişkili Veriler

Ek Malzemeler
Git: Soyut

Kolon adenokarsinomlarına karşı yenilikçi tedaviler için araştırma hala büyük bir zorluktur. akasya catechuWilld. Öz odun özü (AC), özellikle gastrointestinal düzeyde sağlığı geliştirici niteliklere sahiptir. Bu çalışma, AC'yi kateşin içeriği açısından karakterize etti ve insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücrelerinde apoptozu arttırıcı etkinin yanı sıra sağlıklı dokuyu koruma yeteneğini araştırdı. AC aracılı sitotoksisitenin zaman sürecini, konsantrasyon bağımlılığını ve tersine çevrilebilirliğini tanımlamak için MTT tahlili kullanıldı. Apoptozu, ROS oluşumu, mitokondriyal membran potansiyeli (MMP) değişiklikleri ve kaspaz aktiviteleri ile birlikte değerlendirmek için hücre döngüsü analizi ve AV-PI ve DAPI boyaması yapıldı. Sıçan ileum ve kolon halkaları, sağlıklı doku üzerindeki AC etkilerini araştırmak için canlılık ve işlevsellik açısından test edildi. Nicel analiz, AC'nin (±)-kateşin (31.5 ± 0.82 mg/g) ve (-)-epikateşin (12.5 ± 0.42 mg/g) açısından zengin olduğunu vurguladı. AC, konsantrasyona bağlı, ancak zamana bağlı olmayan bir şekilde hücre canlılığını geri dönüşümsüz olarak azalttı. Sitotoksisiteye apoptotik hücrelerde ve ROS'ta artış, MMP'de bir azalma ve kaspaz-9 ve 3 aktivitelerinde artışlar eşlik etti. AC, sıçan ileum ve kolon halkalarının canlılığını ve işlevselliğini etkilemedi, bu da sağlıklı dokuya yönelik güvenli bir profil önerdi. Mevcut bulgular, kolon kanseri tedavisi için AC'nin potansiyelini özetlemektedir.

Anahtar Kelimeler: Acacia Catechu Willd., kolorektal kanser, apoptoz, HT-29 hücreleri, ROS, mitokondriyal membran potansiyeli, kateşinler, polifenoller, doğal bileşikler
Git: 1. Giriş

Kolorektal kanser (CRC), dünya çapında tümör ölümlerinin en yaygın nedenlerinden biridir [ 1 ]. Avrupa'da, kadınlar ve erkekler için sırasıyla ikinci ve üçüncü en yaygın kanser türüdür. Oluşumu ve ilerlemesi, aralarında aile, yaş, cinsiyet ve kişisel geçmişin başlıca risk faktörlerini oluşturduğu birçok konuya bağlıdır [ 2 ]. Standart tedaviler cerrahi ve kemoterapiyi içerir. İkinci durumda, ilaçlar DNA hasarını indükler veya hücre döngüsü durması, DNA onarımı vb. dahil olmak üzere kanser hücresi ölümüne yol açan çoklu sinyal yollarını başlatır. Bununla birlikte, hastalarda kemoterapötik ilaçların sonucu, kanser alt tipi ile ilişkilidir ve sıklıkla sitotoksisite, ilaç direnci ve advers reaksiyonların etkileri ezici problemler oluşturur [ 3 ].

Doğal ürünler, farmakolojik aktivitelere sahip bileşikler için, özellikle birçok kanser türünün tedavisi için olanlar için yol gösterici olmaya devam etmektedir [ 4 ]. Yakın tarihli bir rapor, 1940'lardan 2014'e kadar kanser alanında onaylanan küçük moleküllerin %49'unun doğal ürünler veya doğrudan bunlardan türetilen yeni yapılar olduğunu vurguladı [ 5]. Bu bileşikler, apoptoz indüksiyonu, DNA hasarı vb. ile birlikte tümör hücresi büyümesinin inhibisyonu gibi birçok farklı etki mekanizması nedeniyle sitotoksik özelliklere sahiptir. Ayrıca antikanser ilaçları, bitki ile kombinasyon halinde uygulandıklarında tümör hücrelerini öldürme potansiyeli daha yüksektir. -türetilmiş bileşikler ve umarım daha az olumsuz etkiye sahiptir. Bu olasılığı araştırmak için, CRC için olanlar da dahil olmak üzere çeşitli kanserler için birkaç klinik deney yapıldı [ 6 ].

Akasya catechu Willd. Ekstraktlar geleneksel tıpta çeşitli hastalıkların tedavisi için kullanılmıştır. Hepatoprotektif, antipiretik, antidiyareik, hipoglisemik, antiinflamatuar, immünomodülatör, antinosiseptif, antimikrobiyal, serbest radikal süpürücü ve antioksidan aktivitelere sahiptir [ 7 , 8 , 9 , 10 ]. Ayrıca, son çalışmalar Acacia catechu Willd olduğunu göstermiştir . Lactobacilli ve Bifidobacteria'yı etkilemeden kalsiyum kanalları ve muskarinik reseptörlerle etkileşime girerek in vitro spazmolitik ve antispastik aktiviteler uygular ,en çok temsil edilen bağırsak türleri, ishalden mustarip hastalara fayda sağlayabileceğini düşündürmektedir [ 11 ]. Akasya catechu Willd. kateşin, - (-) - özütü, flavan-3-ol, (+) flavonoid'lerin yüksek miktarda içerir epikateşin, (-) - epikateşin-3-O-galat ve (-) - epigalokateçin-3- O -gallate [ 12 ]. Bu türevler ve ilgili polifenoller, birkaç kanser hücre hattında apoptozu indükleyen aktiviteye sahiptir [ 13 ]. Bu nedenle, bu çalışma Acacia catechu tarafından elde edilen bir müstahzarın etkilerini araştırmaktadır.Willd. Kanser tedavisinde potansiyel kullanımını vurgulamak için insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücre hattı üzerinde kaynatma yoluyla öz odun (AC). AC'nin normal dokunun canlılığını ve işlevselliğini koruma yeteneği klinik olarak ilgi çekici olabileceğinden, bu yön sıçan ileum ve kolon halkalarında da araştırılmıştır. Sonuçlar, AC'nin, sağlıklı dokuyu korurken, geri dönüşü olmayan anti-proliferatif etkiler gösterdiği ve içsel apoptozu indüklediği için bir anti-kanser ajanı olarak potansiyele sahip olduğunu gösterdi.

Git: 2. Sonuçlar

2.1. AC Kimyasal Karakterizasyonu

Akasya catechu Willd'in kaynatılması . Öz odun, bitkisel ilaç standardizasyonu için uygun fitomarkerlar olarak en çok temsil edilen monomerik polifenoller varsayılarak, kateşin içeriği ile karakterize edilmiştir [ 11 , 12 ]. UV saptama [ 14 ] ile birleştirilmiş HPLC'ye dayanan uygulanan yöntem, karmaşık matrislerdeki ana kateşinleri çözme ve niceleme yeteneği gösterdi; içindeŞekil 1a Acacia catechu örneğinin temsili HPLC kromatogramıkaynatma bildirilir. Kateşinlerin tanımlanması, numunedeki analitik piklerin alıkonma sürelerinin saf standartlarınkiyle karşılaştırılmasıyla gerçekleştirilmiştir. Bileşiklerin kimliklerinin daha fazla teyidi, standart ekleme yöntemiyle ve DAD dedektörü tarafından elde edilen çevrimiçi UV spektrumlarının karşılaştırılmasıyla elde edildi. İncelenen monomerik kateşinlerden sadece kateşin ((±)-C) ve epikateşin ((-)-EC) analiz edilen ekstrede bulunurken, yöntemin duyarlılık düzeyinde (tespit sınırı) diğer ana kateşinler tespit edilmemiştir. —LOD— bileşiğe bağlı olarak 1-10 μg/g içinde). Pik alanına dayalı harici standart kantitasyon ile (±)-C ve (-)-EC sırasıyla 31.5 ± 0.82 mg/g ve 12.5 ± 0.42 mg/g bulundu.15 ]. İlginç bir şekilde, bitkiler aleminde meydana gelen başlıca kateşinler arasında, kateşinin (2R, 3S) konfigürasyonlu (+)-izomeri olduğu ve (+)-C olarak etiketlendiği bildirilmektedir. Öte yandan, doğal epikateşin (-)-diastereomerdir (2R, 3R), (-)-EC olarak etiketlenir. Yana cis- ilişkili bileşikler daha termodinamik daha az kararlı olan trans- lı olanlar, (2R, 3R) epimerizasyon (-) - EC, doğal olmayan üzere, (2S, 3R) (-) - Cı kolayca numunelerde ortaya çıkabilir ( örneğin, işlenmiş gıda ve bitkisel ilaçlar), Theobroma kakaodan çikolata üretiminde gözlemlendiği gibi [ 15 ]. (±)-C'nin enantiyo-çözünürlüğünü sağlayan önerilen CD-MEKC yöntemi, böylece Acacia catechu'nun sulu ekstraktının analizine uygulandı.Willd. kaynatma. İlginç bir şekilde, hem enantiyomerlerin, yani doğal (+)-C hem de artefakt (-)-C'nin yaklaşık olarak aynı içerik seviyesinde varlığı gözlemlendi (Şekil 1B). Sonuncusu, kaynatma hazırlamada (termal işlem) uygulanan işlemin sonucu olarak epimerizasyonun bir işareti olarak kabul edildi. Karanlıkta oda sıcaklığında çok uzun süreli (en az iki yıl) saklanan kaynatma preparatlarının analizi, (-)-EC ve (+)-C kaybı veya epimerizasyon ilerlemesi göstermedi, bu nedenle çok yüksek kimyasal olduğunu gösterdi Preparatın kararlılığı.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-21-02102-g001.jpg

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 1
( a ) Acacia catechu kaynatma örneğinin (sulu özüt) HPLC kromatogramı . Yöntem, ana kateşinlerin ayrılmasını sağlar; yani (±)-C, (-)-EC, (-)-EKG, (-)-EGC, (-)-EGCG ve (-)-GCG. Numunede sadece (±)-C ve (-)-EC miktar sınırının üzerindeki seviyelerde bulundu. ( b ) A)'dakiyle aynı örneğin CD-MEKC'si. Yöntem, HPLC yönteminde olduğu gibi, ana kateşinlerin ayrılmasına izin verir. Ek olarak, (±)-C'nin enantioseparasyonu sağlandı ve önemli miktarda doğal olmayan (-)-C'nin varlığını ortaya çıkardı. HPLC ve CD-MEKC koşulları, Malzemeler ve Yöntemler bölümünde açıklanmıştır. 2.2. AC Konsantrasyona Bağlı, ancak Zamana Bağlı Değil, Geri Dönüşümsüz HT-29 Hücre Ölümüne Neden Oldu

İnsan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücrelerine yönelik sitotoksik etkiler, 24, 48 ve 72 saatlik AC tedavisinden (0.01-1000 µg/mL) sonra bir MTT testi kullanılarak değerlendirildi. Sonuçlar, HT-29 hücre canlılığının 10 µg/mL'ye kadar etkilenmediğini, AC 50 µg/mL (72 saat için), 100 µg/mL (48 saat) ve 250 µg/mL ile 250 µg/mL ile önemli ölçüde azaldığını gösterdi. 1000 µg/mL (24 sa) (şekil 2a). IC Bu etki, zaman-bağımlı değildir, konsantrasyona bağımlıydı, ama ₅₀ seçilen zaman noktaları arasındaki değerler hemen hemen karşılaştırılabilir (IC ₅₀ , 72 saat; 48 saat, 156.1 ± 11.3 ug / mL, 24 saat 199.4 ± 10.3 ug / mL 139,5 ± 11,2 µg/mL).

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-21-02102-g002.jpg

Ayrı bir pencerede aç
şekil 2
( bir ). Acacia catechu Willd ile tedaviden sonra insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücrelerinin canlılığı . 24, 48 ve 72 saat boyunca özüt (AC). Panel B. AC'nin neden olduğu geri döndürülebilir veya geri döndürülemez sitotoksik etki. HT-29 hücreleri AC (250 ve 500 ug/mL, 24 saat) ile işlendi. Daha sonra, AC yıkandı ve hücreler, 24 veya 48 saat daha taze serum içeren ortam ile inkübe edildi. Her zaman noktasından sonra, Malzemeler ve Yöntemler'de ayrıntılı olarak anlatıldığı gibi MTT testi yapıldı. Her iki panelde de değerler, dört nokta/konsantrasyon/zaman çalıştırılan 4 veya 5 bağımsız deneyin ortalama ± SEM'leridir; kontroller (AC 0 µg/mL) işlenmemiş hücreleri temsil eder. İstatistiksel anlamlılık, ANOVA ve ardından Dunnett son testi ile değerlendirildi. ( a ): * p < 0.05, ***p < 0.001 ve kontroller, aynı zaman noktası. ( b ): *** p < 0.001 ile 24 saat AC ile muamele edilmiş hücreler; ° p < 0.05 vs. 24 saat + 24 saat orta işlem görmüş hücreler.

HT-29 hücre morfolojisindeki değişiklikler MTT sonuçlarını yansıttı. Normal olarak sıkı koloniler halinde büyüyen HT-29 ile muamele edilmemiş hücrelerden farklı olarak, AC (250 ve 500 µg/mL, 24 saat) ile muamele edilmiş olanlar hem sayı hem de boyutta önemli değişiklikler gösterdi; görüntülenen daha büyük hücre dışı boşluklar; ve küçülmeye, yuvarlanmaya ve parçalanmaya başladı, böylece apoptotik bir hücrenin tipik görünümüne benziyordu. Bu değişiklikler, AC konsantrasyonundaki artış üzerine aşamalı olarak belirgindi ve sitotoksisite dereceleri 2, 3 (250-500 µg/mL) ve şiddetli – derece 4 (1000 µg/mL) – meydana geldi (bakınız Şekil S1 ).

AC büyüme-inhibitör etkisinin tersine çevrilebilir olup olmadığını kontrol etmek için, hücreler başlangıçta 24 saatlik bir süre boyunca ekstreye maruz bırakıldı, ardından tedaviyi ortadan kaldırmak için iyice yıkandı ve bir süre daha ilaçsız ortamda kültürlendi; yani, 24 veya 48 saat. 2. veya 3. derece toksisiteye neden olan 250 ve 500 µg/mL'lik AC konsantrasyonları test edildi. (b)'de bildirildiği gibişekil 2AC, hem 250 hem de 500 µg/mL'de geri dönüşü olmayan bir sitotoksik etkiye neden oldu, çünkü ilaçsız ortamla fazladan 48 saatlik bir kuluçka döneminden sonra bile canlılıkta şiddetli bir düşüş görüldü. 2.3. AC, Apoptoz Aracılı HT-29 Hücre Ölümüne Neden Oldu

AC ile 24 saatlik tedaviden sonra gözlemlenen hücre ölümüne neden olan mekanizmaları daha ayrıntılı incelemek için akış sitometrisi aracılı hücre döngüsü analizi yapıldı. En yüksek AC güvenli konsantrasyonu olarak alınan 100 µg/mL ile birlikte 250 ve 500 µg/mL (toksisitenin 2. veya 3. derecesi) AC konsantrasyonları kullanılmıştır. AC tedavisi üzerine G0/G1'dekilerde bir azalmanın eşlik ettiği alt G0/G1 hipodiploid hücrelerde konsantrasyona bağlı bir artış gözlendi (Figür 3a). 100 µg/mL hücre döngüsü dağılımını etkilemezken, 250 µg/mL apoptotik hücreleri artırdı (subG0/G1 +%9.9, p < 0.01 kontrole karşı), aynı zamanda önemli ölçüde olmasa da G0/' dakileri azalttı. G1(−6,4%, p > 0,05 vs. kontrol). Buna göre, 500 µg/mL AC, subG0/G1 (+11.5%, p < 0.01 kontrole karşı), G0/G1 (-%23.4, p < 0.01 vs. kontrol) ve G2/m ( +13.0, p < 0.01 ve kontroller) hücreler etkilendi. Apoptoz, AV-PI tahlili ile daha da araştırıldı (Figür 3B). AC ile mücadele, erken apoptotikte (sırasıyla 250 ve 500 µg/mL AC için +7.8 ve +%17.8, p < 0.01 kontrole karşı), geç apoptotikte (+%12.6, p < 0.01 kontrole karşı kontrol ) belirgin bir artışa neden oldu . 500 µg/mL AC) ve nekrotik HT-29 hücreleri ( 500 µg/mL AC için kontrole karşı +5.0%, p < 0.05). Bu etkiye, sağlıklı olarak puanlanan AV- ve PI-negatif hücrelerde ilerleyici azalma eşlik etti. DAPI boyaması, kromatin yoğunlaşması, nükleer piknoz, yüksek sayıda nükleer gövde parçası ve nükleus etrafındaki düzensiz kenarlar gibi AC tarafından ortaya çıkan ve konsantrasyona bağlı bir şekilde artan karakteristik apoptotik değişiklikleri destekledi (yıldız ile gösterilir).Figür 3C).

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-21-02102-g003.jpg

Ayrı bir pencerede aç
Figür 3
( bir ). Akasya catechu Willd. insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücre döngüsü üzerinde (AC) aracılı etkileri özüt. SubG0/G1, G0/G1, s ve G2/M fazlarındaki hücre yüzdeleri. ( b ). Annexin V (AV) ve propidium iyodür (PI) ile çift boyama ile apoptotik hücrelerin tespiti. Değerler, dört nokta/konsantrasyonun çalıştırıldığı dört veya beş bağımsız deneyin ortalama ± SEM'leridir; kontroller (AC 0 µg/mL) işlenmemiş hücreleri temsil eder. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001 ile kontroller (ANOVA, ardından Dunnett son testi). ( c). DAPI boyama ile değerlendirilen DNA yoğunlaşması ve hasar. Yıldız işaretleri, apoptotik olarak kabul edilen, parçalanmış çekirdeklere ve yoğun DNA'ya sahip hücreleri gösterir. Her fotoğraf üç bağımsız gözlemi temsil ediyordu (ölçek çubuğu 75 μm). 2.4. AC, Mitokondri Membran Potansiyelinde Kayıp ile Birlikte ROS Oluşumunun Neden Olduğu

Birçok kemoterapi ilacı, hücre apoptozunu ve DNA hasarını daha da uyaran ROS oluşumunu indükleyerek hücre apoptozisine neden olur [ 16 ]. Bu nedenle, floresan olmayan 2',7'-diklorofloresinin floresan 2',7'-diklorofloreseine (DCF) dönüşümü izlenerek ROS oluşumu değerlendirildi. Sonuçlar, AC tedavisi üzerine DCF'de büyük bir artış meydana geldiğini ve bu da önemli bir ROS oluşumunu düşündürdüğünü gösterdi (Şekil 4a). Ancak bu etki, 250 ve 500 µg/mL AC konsantrasyonları (sırasıyla +166,2 ± 14.3 ve +195.5 ± 18.3) arasında neredeyse karşılaştırılabilirdi. AC'nin sitotoksik etkilerinde ROS'un rolünü daha da desteklemek için ROS temizleyici N -asetil-L-sistein (NAC, 1 mM) kullanıldı. Bildirildiği gibiŞekil 4b, HT-29 hücrelerinin canlılığı, NAC varlığında önemli ölçüde geri kazanıldı, bu, ROS'un AC aracılı HT-29 hücre ölümünde önemli bir rol oynadığını ortaya koydu. Apoptozdaki erken olaylardan biri mitokondriyal membran bütünlüğünün değişmesinden oluştuğu için, AC ile muamele edilmiş hücrelerin mitokondri membran potansiyelindeki (MMP) değişiklikler, R123 ile boyanarak değerlendirildi. Bu boya seçici olarak mitokondriye sağlam bir zar potansiyeli ile girer ve MMP kaybolmadığı sürece korunur ve R123'ün hücrelerden yıkanmasına neden olur. Bildirildiği gibiŞekil 4c, hücre içi R123 floresansı, hem 250 hem de 500 µg/mL AC konsantrasyonları için yaklaşık %50-60 oranında önemli ölçüde azaldı.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-21-02102-g004.jpg

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 4
Akasya catechu Willd. 2',7'-diklorofloresein'in (DCF) hücre içi konsantrasyonu ( a ) üzerindeki ekstrakt (AC) aracılı etkiler ; insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücrelerinde N-asetil-L-sistein (NAC) ( b ) ve rodamin 123 (R123) boyaması ( c ) varlığında hücre canlılığı . NAC (1 mM), AC (250 veya 500 ug/mL) eklenmeden önce 2 saat süreyle ön inkübe edildi. Veriler, dört nokta/konsantrasyonun çalıştırıldığı en az dört bağımsız deneyin ortalama ± SEM'leri olarak rapor edilir; kontroller (AC 0 µg/mL) işlenmemiş hücreleri temsil eder. *** p < 0.001 ve kontroller; ^§§§p < 0.01 - aynı AC konsantrasyonuna karşı (ANOVA, ardından Dunnett son testi). 2.5. Kaspaz Aktivitesinde AC Kaynaklı Değişiklikler

Apoptozun farklı yolları, sırasıyla kaspaz-9 ve 8'in temel rol oynadığı mitokondri aracılı ve dışsal reseptör aracılı yollar dahil olmak üzere hücre ölümünün uyarılmasında rol oynar. Bunlar da kaspaz-3'ü ve DNA'nın parçalanmasını aktive eder [ 17 , 18 ]. Bu kaspazların katılımını araştırmak için, AC ile muamele edilmiş HT-29 hücre lizatları, spesifik kaspaz-3, 8 ve 9 substratları ile floresan tahlilleri yapmak için kullanıldı.

Kaspaz-3, apoptotik yanıtlarda merkezi bir rol oynar. Da gösterildiği gibiŞekil 5, hem bölünmüş kaspaz-3 hem de 9'un aktiviteleri, AC ile muamele edilmiş HT-29 hücrelerinde, tedaviden etkilenmeyen kaspaz-8'in aksine, önemli ölçüde arttı; dışsal reseptör aracılı apoptoz yolu.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-21-02102-g005.jpg

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 5
Akasya catechu Willd. insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücrelerinde kaspaz-3, 8 ve 9 aktiviteleri üzerindeki ekstrakt (AC)-aracılı etkiler. Spesifik florojenik substratlar DEVD-AMC (kaspaz-3), IETD-AMC (kaspaz-8) ve LEHD-AMC (kaspaz-9) kullanıldı ve aktif kaspazlar tarafından salınan AMC fragmanının floresansı 380'de ölçüldü. ve sırasıyla 460 nm uyarma ve emisyon dalga boyları. Veriler, dört nokta/konsantrasyonun çalıştırıldığı ve kontrollerin (AC 0 µg/mL) işlenmemiş hücreleri temsil ettiği en az üç bağımsız deneyin ortalama ± SEM'leri olarak rapor edilir. * p < 0.05, ** p < 0.01 kontrollere karşı (ANOVA, ardından Dunnett son testi). 2.6. AC, Sağlıklı Sıçan İlia ve Proksimal Kolon Halkalarının Canlılığını ve İşlevselliğini Etkilemez

Kanser hücrelerini hedef alan ilaçlar için sağlıklı dokulara toksisiteden kaçınmak çok önemlidir. Bu nedenle AC'nin sıçan proksimal kolon dokusu canlılığı üzerindeki etkileri değerlendirildi.

Mide-bağırsak yolunun en büyük bölümünü ince bağırsak dokusu oluşturduğundan, İlia da test edildi. Sıçan ileum ve kolon halkalarında olduğu gibi, hücre tek tabakasına göre hücre dışı ortamda daha düşük miktarda AC elde edilebilir, AC konsantrasyonu 1000 µg/mL'ye yükseltildi.

Sonuçlar, AC ile 24 saatlik tedavinin, sıçanların ilia veya proksimal kolon halkalarının canlılığını değiştirmediğini gösterdi (Şekil 6a). İlginç bir şekilde, en yüksek AC konsantrasyonu, yüksek potasyum içeren çözelti tarafından uyarılan doku kontraktilitesini etkilemedi (Şekil 6b), böylece sağlıklı dokuya doğru güvenli bir AC profili önerir.

Resim, illüstrasyon vb. içeren harici bir dosya. Nesne adı ijms-21-02102-g006.jpg

Ayrı bir pencerede aç
Şekil 6
Acacia catechu Willd ile tedaviden sonra sıçan ileum ve proksimal kolon halkalarının canlılıkları ( a ) ve yüksek potasyumla uyarılmış kasılma (KCl 60 mM) ( b ) . 24 saat boyunca özüt (AC). Veriler, dört halka/konsantrasyonun çalıştırıldığı en az üç bağımsız deneyin ortalama ± SEM'leri olarak rapor edilir; FRESH ve AC 0 µg/mL, sırasıyla 24 saat boyunca PSS ile eksplante edildikten veya tedavi edildikten hemen sonra halkalara karşılık gelir.

Git: 3. Tartışma

Doğal ürünler, yeni antikanser moleküllerinin önemli bir kaynağını oluşturur ve böylece kanserlerin önlenmesi ve tedavisi için yeni bir yön verir [ 6 ]. Doğal ürün türevli ilaçlar, metastaz ve anjiyogenezi engelleyerek ve insan kanserlerinin en önemli özellikleri olan apoptozu teşvik ederek antikanser etkiler gösterir [ 6 , 18 ]. Ayrıca, doğal ürünlerden elde edilen ilaçlar genellikle daha iyi biyoaktivitelere ve daha düşük toksisiteye sahiptir ve bunların bazıları kanser hücrelerinin duyarlılığını artırmak için geleneksel tedavilerle birleştirilmiştir [ 19 ].

Bu çalışma, CRC tedavisinde potansiyel kullanımını vurgulamak için AC'nin insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücre hattı üzerindeki apoptozu arttırıcı etkisini araştırmaktadır. İlk adım olarak, Acacia catechu Willd'in kaynatılması . öz odun kateşin içeriği ile karakterize edildi ve sadece kateşin (±)-C ve epikateşin (-)-EC'nin mevcut olduğu bulundu. Bu iki kateşinin (toplam ~40 mg/g) miktarlarının karşılaştırılabilir ve hatta ortalama içerikleri 6 mg/g ve 1.5 mg/g olan yeşil çayda [ 20 ] rapor edilenlerden daha yüksek olması dikkat çekicidir. (−)-EC ve (±)-C için sırasıyla yaklaşık yüz analiz edilen numunede belirlendiği gibi [ 21]. Bu, kabuk ekstraktının kateşin içeriğinin yeşil çay veya bazı meyvelere [ 22 , 23 ] göre mevsimsel değişikliklere daha az maruz kaldığı gözlemiyle birlikte AC'yi çok ilginç bir aktif polifenol kaynağı yapar.

Biyolojik deneyler, AC'nin bir konsantrasyonda HT-29 hücre canlılığını etkilediğini, ancak zamana bağlı bir şekilde olmadığını gösterdi. AC işlem süresi, aslında, 48 ve 72 saat için 24 yükselmiştir, IC ₅₀ değerleri 190-140 ug / mL, AC konsantrasyonu (yani, 26-19 uM kateçin içeriği) aralığında kaldı. Bu etki, 24 saatlik tedaviden sonra apoptoz geçiren tedavi edilen HT-29 hücrelerinin (aşağıya bakınız) AC ile uzun süreli inkübasyon nedeniyle nekroza ilerlemiş olabileceği düşünülerek açıklanabilir. Caco2 hücrelerinde MTT tahlili, hücre döngüsü analizi ve DAPI boyaması için ilginç, karşılaştırılabilir değerler bulundu (bakınız Şekil S2 ), bağırsak epitelindeki enterositlere yüksek homoloji ile karakterize edilen bu diğer yaygın olarak kullanılan kolorektal adenokarsinom hücre hattının, AC'den eşit olarak etkilenir.

Kanser hücreleri söz konusu olduğunda, bir hücre çizgisinin ilaç tedavisi üzerine çoğalma aktivitesini yeniden başlatıp başlatamayacağını araştırmak zorunludur. Aslında hücre hasarı ve hücre ölümü arasında bir sınır çizgisi olan “dönüşü olmayan nokta”nın varlığını göstermek çok önemlidir; geri dönüşü olmayan hasara neden olan sollama. AC aracılı sitotoksisitenin tersine çevrilebilir veya geri döndürülemez olup olmadığını değerlendirmek için HT-29 hücreleri, 24 saat boyunca özüt ile işleme tabi tutuldu, daha sonra yıkandı ve 24 veya 48 saat daha taze serum içeren ortam ile inkübe edildi. Sonuçlar AC'nin HT-29 hücrelerine karşı geri dönüşü olmayan bir sitotoksik etki ortaya çıkardığını, çünkü fazladan 48 saatlik bir süre boyunca ilaçsız ortam ile inkübasyondan sonra bile canlılıkta ciddi bir düşüş meydana geldiğini gösterdi. Dahası, akış sitometrik analizi ve DAPI boyama, sitotoksik etkilerin çoğunlukla apoptoz aracılı hücre ölümünden oluştuğunu gösterdi. Erken ve geç apoptotik ve bazı nekrotik hücreler aslında AC tedavisi üzerine AV-PI testi ile vurgulandı - sitoplazmik büzülme, kontrast faz mikroskopisi ile gözlemlenen zar kabarması, DNA parçalanması (DAPI testi) ve alt G0/G1'de bir artış ile de doğrulandı hücreler (hücre döngüsü analizi).

Apoptoz indüksiyonunu takiben, mitokondriyal membran potansiyelinin bozulması, ana ve en erken hücre içi olaylardan biridir. Mitokondri, hücresel ROS ve ATP'nin ana kaynağı olduklarından, hücrenin hayatta kalma/ölüm dengesini kontrol eden mekanizmaların kilit düzenleyicileridir [ 6 , 18 ]. Sonuç olarak, tedavi edilen hücrelerde ROS üretimi değerlendirildi ve sonuçlar, AC tehdidi üzerine oluşumlarında önemli bir artışın meydana geldiğini gösterdi.

Aşırı ROS üretimi, antiapoptotik faktörlerin baskılanmasında başarısızlıkla sonuçlanan ve böylece apoptozu daha da tetikleyen önemli bir negatif unsurdur. Floresan probu R123, bu nedenle, yükseltilmiş ROS üretiminin, işlenmiş HT-29 hücrelerinde MMP'nin işlevi üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanıldı. MMP'de mitokondrinin membran depolarizasyonuna yol açan bir düşüş gösterildi, bu da AC tarafından apoptozun uyarılmasının mitokondri aracılı yolun aktivasyonu ile ilişkili olabileceğini düşündürdü. Bununla birlikte, AC'nin ROS ve MMP üzerindeki etkileri, bir platoya ulaşıldığını gösteren 250 ve 500 µg/mL arasında karşılaştırılabilirdi. Bu plato etkisi, 30-100 μM EC'ye maruz kalan insan kolon kanseri HT-29 hücreleri için de rapor edilmiştir [ 24], bu çalışmada kullanılanlarla karşılaştırılabilir bir konsantrasyon - benzer şekilde çok yüksek (500-1000 μM) EKG seviyelerine maruz kalan insan kolon kanseri LoVo hücreleri için [ 25 , 26 ].

ROS oluşumu, AC kateşinlerin hücre kültürü ortamında ROS oluşturmak için oto-okside olabileceği ve bunun sonucunda hücre ölümüne neden olabileceği düşünülerek açıklanabilir [ 27 , 28 ]. Aslında polifenoller, fenolik hidroksil gruplarının otoksidasyonunu teşvik etme potansiyeline sahiptir [ 29 ] ve bu mekanizma onların antibakteriyel ve anti-kanser aktivitelerinin temelindedir [ 28 ]. Özellikle, kateşinler, kritik bir eşiğin üzerinde ROS oluşumunu teşvik ederek ve endojen kromatine bağlı bakır iyonlarının mobilizasyonu yoluyla kanser hücrelerini seçici olarak öldürebilir [ 30 ]. Kateşinler arasında yeşil çaydan elde edilen EGCG en çok çalışılanlardan biridir ve kolorektal dahil olmak üzere birçok kanser türüne karşı aktif olduğu bildirilmiştir [ 31].], akciğer [ 32 ], meme [ 33 ] ve karaciğer [ 34 ]. Bu etkiler temel olarak proapoptotik etkileri teşvik etme, anjiyogenezi inhibe etme, hücresel metabolik yolları düzenleme ve inflamatuar faktörleri azaltma yeteneklerinden kaynaklanmaktadır [ 28 , 35 ]. EGCG, geleneksel antikanser tedavilerinin aktivitelerini [ 36 , 37 , 38 ] ve ilaç hücre direncini tersine çevirebilir ve bu, çeşitli kanser türlerinin ve diğer hastalıkların tedavisi için klinik deneylerde kullanımını teşvik etmiştir [ 39 ]. akasya catechuWilld. öz odun, yapraklar ve parça reçinede farklı şekilde dağılmış çeşitli kateşin monomerleri içerir, (-)-EC ve (+)-C en bol olarak rapor edilir [ 12 ]. Buna göre, bu çalışmada kullanılan öz odun özütü, gerçekleştirilen nicel analizde belirtildiği gibi (-)-EC ve (±)-C'nin varlığını göstermiştir. Farmakolojik özellikleri, EGCG ile ilgili olarak çok daha az araştırılmış olmasına rağmen , prooksidan aktivitelerine sıkı sıkıya bağlı bir etki olan apoptozu [ 40 ] indükleme kabiliyetini içerir [ 41 , 42 , 43 ]. Daha önce belirtildiği gibi, kateşinler Cu(II) varlığında prooksidanlar gibi davranarak sitotoksik etkiye yol açar [ 41].]. Hücresel bakır seviyesi kanser hücrelerinde önemli ölçüde yükseldiğinden [ 43 , 44 ], mevcut deneysel koşullarda HT-29 hücrelerinin, ROS oluşturmak için bakır iyonları ve AC kateşinler arasındaki elektron transferine daha fazla maruz kalması düşünülebilir. Antioksidan sistemlerini değiştiren kanser hücreleri, artan büyüme ve metabolizma hızı nedeniyle sürekli oksidatif stres altındadır [ 45 , 46 ].], AC kateşinler tarafından üretilen daha fazla ROS oluşumu, HT-29 hücrelerinin antioksidan kapasitesini aşabilir ve geri dönüşü olmayan hasara ve apoptoza yol açabilir. Bu, hücre canlılığındaki azalmanın ROS süpürücü NAC tarafından önemli ölçüde geri döndürüldüğü gerçeğiyle desteklendi, bu nedenle AC aracılı etkilerde ROS oluşumunun gerekli olabileceğini düşündürdü. Bakıra bağlı ROS oluşumu, daha önce tartışılan plato etkisini de açıklayabilir, çünkü sınırlı bakır mevcudiyeti nedeniyle artan AC konsantrasyonunda ROS'ta daha fazla bir artış meydana gelmeyebilir. Kateşinlerin, mitokondrideki elektron taşıma zincirini [ 47 ] veya kateşin aracılı hidrojen-peroksit oluşumunu [ 48 ] içerebilen farklı mekanizma(lar) ile ROS üretimini de indükleme olasılığı.], ancak, göz ardı edilemez.

Sistein-aspartik aside özgü proteazların bir ailesi olan kaspazların aktivasyonu, apoptozun indüklenmesinde kritik bir olaydır ve bu sonuçta kromatin yoğunlaşması, DNA fragmantasyonu ve plazma zarı kabarması gibi apoptozun kendisinin ayırt edici özelliklerine yol açar [ 17]. , 18 ].

Hücre ölümünün mitokondriye bağımlı yolu, apoptozom oluşumu yoluyla aşağı akış kaspaz-9'un aktivasyonunu içerir, bu da birçok hücresel hedefe sahip en etkili kaspazlar olan aktif kaspaz-3 ve 7'ye yol açar [ 17 , 18 ]. Bu hipotez, AC tedavisini takiben kaspaz-9 ve kaspaz 3 aktivitelerinde artışlar gösteren florimetrik kaspaz deneyleriyle doğrulandı.

Apoptoz, ölüm reseptörlerinin aracılık ettiği sözde dışsal yolla da meydana gelebilir. Bu, yukarıda belirtilen aşağı akış cellat kaspazlarını parçalayan ve aktive eden kaspaz-8'in aktivasyonu anlamına gelir [ 17 , 18 ]. Ancak bu çalışmada, AC tedavisi kaspaz-8'in aktivitesini etkilemedi, böylece HT-29 hücrelerinde indüklenen apoptozun dışsal, ölüm reseptörü bağlantılı kaspaz-8 yolu aracılığıyla değil, içsel mitokondriyal yol aracılığıyla aracılık edildiğini doğruladı. Son olarak, içsel apoptotik sinyalleşme, kateşinle tedavi edilen birçok kanser hücresinde oksidatif stres tarafından potansiyel olarak tetiklense de [ 40 , 41 , 42 , 43]], AC'nin apoptozu ROS'tan bağımsız bir mekanizma yoluyla aktive etme olasılığı daha fazla çalışılmalıdır.

Hep birlikte ele alındığında, MTT tahlilleri, AV-PI ve DAPI boyaması, hücre döngüsü analizi, ROS üretimi, MMP değişiklikleri ve kaspaz 3 ve 9'un aktivasyonundan elde edilen kanıtlar, AC'nin insan kolorektal adenokarsinomu HT-29'a karşı umut verici pro-apoptotik aktivitesini gösterdi. CRC tedavisine veya önlenmesine bir destek olarak yararlı olabileceğini düşündüren, içsel mitokondriyal yol yoluyla hücre hattı. Ağızdan verilen ilaçlar değişen bir ortama maruz kalırlar ve kolonu hedef alması planlansa bile hem gastrointestinal sistemin üst kısmı hem de kolonun kendisi ile doğrudan temas halinde olacaktır. Bu nedenle sağlıklı dokunun tedaviden etkilenmemesi zorunludur. AC'nin sıçan ileumu ve proksimal kolon canlılığı ve işlevselliği üzerindeki etkileri böylece değerlendirildi ve sonuçlar AC'nin güvenli profilini vurguladı, kanser dokularına karşı seçici bir aktivite gösterir. Bu koruyucu aktivite, birçok kanser hücre hattında EGCG ve EGC için zaten rapor edilmiştir [49 , 50 , 51 , 52 , 53 ] ve kesin mekanizma hala tartışılsa da, malign olmayan hücrelerin daha düşük hücre içi bakır içeriği temel farkı oluşturabilir [ 54 ]. Son olarak, AC, Gram-negatif ( Escherichia coli, klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis ve Pseudomonas aeruginosa ) ve Gram-pozitif bakterilere ( Staphylococcus aureus ve Streptococcus pneumoniae ) karşı antibakteriyel aktiviteye sahiptir [ 11 , 55 ]; aynı zamanda Lactobacilli ve Bifidobacteria'ya karşı etkisizdir., en çok temsil edilen bağırsak türleri. Disbiyoz çeşitli bozukluklar ve CRC dahil olmak üzere birçok kanser türü ile ilişkili olduğundan, insan gastrointestinal mikrobiyotası insan sağlığında kilit bir role sahiptir [ 56 ]. Böylece, AC'nin mikrobiyotayı koruma yeteneği, kateşinlerin ve epikateşinlerin genel güvenlik profili ile birlikte, AC'nin terapötik potansiyelini arttırır. Ayrıca, yakın zamanda, kateşin ve epikateşinin plazma konsantrasyonlarının, sıçanlarda oral AC verildikten sonra hızla zirve yaptığı, tüm dokularda, özellikle bağırsaklarda hızlı ve geniş bir dağılımla [ 57 ], etkili olduğu ortaya çıkanlarla karşılaştırılabilir miktarlara ulaştığı bildirilmiştir. mevcut çalışma. Böylece, Reagan-Shaw'ın translasyonel doz hesaplamasını kullanarak [ 58], bir erkek için yaklaşık 10 mg/kg kateşin ve epikateşinlik ekstrapolasyonlu bir doz elde edilir, bu miktar, gelecekteki olası klinik uygulamalar için AC özütünün uygulanmasını mümkün kılan bir miktardır.

Git: 4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Bitki malzemeleri

Acacia catechu Willd'den elde edilen bir müstahzar . kaynatma yoluyla öz odun (AC), BIO-LOGICA SRL (via della Zecca 1, 40100 Bologna, İtalya) tarafından sağlandı. Acacia catechu Willd bitkisinden hidroalkolik sıvı özü üretimi . Avrupa Farmakopesi 8.0'a göre maserasyon ve perkolasyon yoluyla elde edilmiştir. Daha fazla bilgi için lütfen Minardi'yi (A. Minardi ve figli srl, Boncellino 18/A 48012 Bagnacavallo (RA) İtalya; web sitesi, www.minardierbe.it ) ziyaret edin. 4.2. Fitokimyasal Analiz

4.2.1. kimyasallar

Kateşin standart referansları, (±)-kateşin hidrat ((±)-C), (+)-kateşin ((+)-C), (-)-epikateşin (-)-EC, (-)-epigallokateşin (-) -EGC, (-)-epikateşin gallat (-)-EKG, (-)-epigallokateşin gallat (-)-EGCG, (-)-gallocatechin gallat (-)-GCG, sodyum dodesil sülfat (SDS) ve (2-hidroksipropil )-β-siklodekstrin (HP-βCD, ikame derecesi ~0.6). Borik asit, fosforik asit, sodyum hidroksit, trifloroasetik asit (TFA), asetonitril (HPLC derecesi) ve diğer tüm kimyasallar Sigma-Aldrich'ten (Milan, İtalya, www.sigmaaldrich.com ) satın alındı . Standart solüsyonların, çalışan tamponların ve HPLC mobil fazların hazırlanması için kullanılan su, bir Milli-Q cihazı (Millipore, Milford, MA, ABD, www.merckmillipore.com ) ile saflaştırıldı . 4.2.2. HPLC Yöntemi

100 mg AC kaynatma alikotları, 15 dakika boyunca oda sıcaklığında ultrasonik bir banyoda 10 mL su ile özümlendi. Filtrelenen çözelti, su ile 1/1 (h/h) seyreltildi ve ters faz koşulları altında HPLC ile analiz edildi. Agilent 1050 Ti serisinden (Agilent Technologies, Waldbronn, Almanya, www.agilent.com ) bir DAD dedektörü (tespit 280 nm'ye ayarlandı) ile donatılmış bir Sıvı Kromatografı kullanıldı. Durağan faz, Phenomenex (Castelmaggiore, Bologna, İtalya, www.phenomenex.com ) tarafından üretilen 150 × 4.6 mm (5 um, 100 Â) çekirdek-kabuk tipi Kinetex PFP (pentafloro-fenil) idi.). Mobil faz, gradyan elüsyonu altında asetonitril (A) ve sulu TFA %0.1'den (h/v) (B) oluşuyordu: 10 dakikada 10/90'dan (A/B) 20/80'e (A/B) 1 mL/dk akış hızı. Numune enjeksiyonları, bir Rehodyne Model 7125 enjektörü (hacim 20 μL) ile manuel olarak yapıldı.

Kalibrasyon grafikleri ve hassasiyet. Önceki bir yönteme göre [ 14] kateşinler için kalibrasyon yapıldı: (-)-EKG (2,5–250 µg/mL), (–)-EGCG (25–500 μg/mL), (–)-EC (5–200 μg/mL) ), (−)-EGC (10–300 μg/mL), (±)-C (0,3–50,0 μg/mL) ve (−)-GCG (2–50 μg/mL) parantez içinde verilen konsantrasyon aralıklarında . Her kalibrasyon noktası için üçlü enjeksiyonlar yapıldı ve analitlerin pik alanları, karşılık gelen bileşiklerin her birinin konsantrasyonlarına karşı çizildi; belirleme katsayıları 0.9990'dan yüksek bulunmuştur. Algılama limitleri (LOD'ler) ve niceleme limitleri (LOQ'lar) olarak hassasiyet verileri, standart çözeltilerin sırasıyla 3:1 ve 10:1 sinyal-gürültü oranlarına kadar seyreltilmesiyle belirlendi. Değerler bileşiğe bağlı olarak 0,01-0,1 µg/mL (LOD) ve 0,05-0,3 µg/mL (LOQ) aralığındaydı. 4.2.3. Kapiler Elektroforez Yöntemi (Siklodekstrin-Modifiye Misel Elektrokinetik Kromatografi, CD-MEKC)

Elektroforetik deneyler, Agilent Technologies tarafından bir HP ^3D CE cihazı ile gerçekleştirilmiştir . Kaynaşmış silika kılcal damarlar (50 um id, 30 cm toplam uzunluk, dedektöre göre 8,5 cm uzunluk) CM Scientific Ltd.'dendi (Ryefield Way Silsden, Birleşik Krallık, www.cmscientific.com). Ayırmalar, 15 kV'luk sabit bir voltajda gerçekleştirildi ve kartuş sıcaklığı 25 °C idi. Tespit, çevrimiçi DAD dedektörü kullanılarak gerçekleştirildi ve kantitasyon, 200 nm dalga boyunda yapıldı. Hidrodinamik enjeksiyonlar 5 s boyunca 25 mbar'da yapıldı. Yeni kılcal damarlar, sırasıyla 1 M sodyum hidroksit, 0.1 M sodyum hidroksit ve suyun her biri 10 dakika boyunca sırayla yıkanmasıyla şartlandırılmıştır. Enjeksiyonlar arasında kapiler, her biri 3 dakika süreyle 0.1 M sodyum hidroksit, su ve akış tamponu ile durulandı.

Borat-fosfat tamponu, arka plan elektroliti (BGE) olarak kullanıldı; standart bir prosedür izlenerek 12.5 mM'lik bir konsantrasyonda ve pH 2.5'te hazırlandı. Elde edilen tampon daha sonra SDS (90 mM) ve HP-βCD (25 mM) ile desteklendi.

Kalibrasyon grafikleri ve hassasiyet. Önceki bir yönteme göre [ 11 , 15 ], kateşinler için kalibrasyon gerçekleştirilmiştir: (-)-EC (5.0–300.0 µg/mL), (+)-C ve (−)-C (0,3–50,0 µg) /mL) parantez içinde verilen konsantrasyon aralıklarında. Her kalibrasyon noktası için üçlü enjeksiyonlar yapıldı ve analitlerin pik alanları, konsantrasyonlara karşı çizildi; belirleme katsayıları 0.9990'dan yüksek bulunmuştur. Duyarlılık verileri LOD ve LOQ, standart çözeltilerin sırasıyla 3:1 ve 10:1 sinyal-gürültü oranlarına kadar seyreltilmesiyle belirlendi. Değerler (−)-EC, (−)-C ve (+)-C içindi: 0,1 µg/mL (LOD) ve 0,4 µg/mL (LOQ). 4.3. Hücre Kültürleri, AC Tedavileri ve Hücre Canlılığı Testi

İnsan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücreleri (ATCC ^® HTB-38 ™, 10-20 geçitleri),% 95 hava ve% 5 CO 'nin nemlendirilmiş bir atmosferinde büyütüldü ₂ , daha önce rapor edildiği gibi, 37 ° C'de [ 59 ]. AC, kullanımdan hemen önce PBS içinde 10 mg/mL stok solüsyonu olarak hazırlandı ve istenen nihai konsantrasyona seyreltilmeden önce pH 7.5'e ayarlandı. Çözelti, 0.2 mikronluk steril bir filtreden geçirilerek steril süzüldü. AC etkilerini değerlendirmek için HT-29 hücreleri (5 × 10 ³hücreler/kuyu, son hacim 200 uL), 24, 48 veya 72 saat boyunca ekstrakt (0-500 ug/mL) ile işlendi, her 24 saatte bir AC solüsyonu yenilendi. AC aracılı sitotoksisitede ROS'un rolünü değerlendirmek için, N-asetil-L-sistein (NAC, 1 mM) 2 saat önceden inkübe edildi ve ardından AC (250 veya 500 µg/mL) eklendi ve 24 saat bırakıldı . Tedavilerin sonunda, her kuyuya MTT (PBS içinde 20 uL 5 mg/mL solüsyon) ilave edildi ve deney, daha önce tarif edildiği gibi [ 60 ] yapıldı. AC sitotoksisitesinin tersine çevrilebilirliği, hücrelere 24 saat boyunca ekstrakt ile muamele edilerek, ardından taze AC içermeyen kültür ortamı eklenerek ve 24 veya 48 saat daha inkübasyondan sonra hücre canlılığı değerlendirilerek test edildi [ 61 ]. 4.4. Hücre Morfolojik Tahlilleri

Çekirdeklerinde hasar yaşayan apoptotik hücreler, hücre büzülmesi, zar kabarması ve apoptotik cisimlerin varlığı ile öne çıkar. AC'nin neden olduğu bu değişiklikleri izlemek için, HT-29 hücreleri bir faz kontrastlı ışık mikroskobu kullanılarak incelendi ve sonuçlar USP 28'de (United States Pharmacopeia edition 2005) (grade 0-4) açıklanan derece ölçeği kullanılarak değerlendirildi. ) malzemelerin sitotoksik potansiyellerinin aşağıdaki şekilde değerlendirilmesi için: derece 0—reaktivite yok (ayrık intrasitoplazmik granüller, hücre lizizi yok); derece 1—hafif reaktivite (hücrelerin en fazla %20'si yuvarlak, gevşek şekilde bağlı ve intrasitoplazmik granüller içermez; ara sıra parçalanmış hücreler bulunur); derece 2-hafif reaktivite (hücrelerin en fazla %50'si yuvarlaktır ve intrasitoplazmik granüllerden yoksundur; geniş hücre lizizi ve hücreler arasında boş alanlar yoktur); 3. derece — orta (hücrelerin %70'e kadarı yuvarlatılmış veya parçalanmıştır); 4. derece - şiddetli (hücrelerin neredeyse tamamen yok edilmesi). [62 , 63 ]. 4.5. Apoptoz Analizleri

Hücre döngüsü ve alt G0/G1 popülasyon analizi ve anneksin V/propidyum iyodür (AV/PI) ve 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) boyaması gibi akış sitometrisi teknikleri, apoptotiği tanımlamak için uygulandı. hücreler. HT-29 hücreleri (5 x 10 ⁵ hücre / çukur, 2 mL nihai hacim), daha önce tarif edilen protokoller kullanılarak 24 saat süre ile ac ile muamele edildi ve daha sonra analiz gerçekleştirilmiştir [ 62 ]. Alexa fluor 488™-AV/PI çift boyama kiti (Life Tecnologies Italia, Monza, İtalya) apoptotik hücrelerde fosfatidilserinin dışsallaşmasını saptamak için kullanıldı [ 64]. Örnekler, CellQuest yazılımı v. 3.0 (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) kullanılarak bir FACScan akış sitometresinde (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) analiz edildi. Canlı hücreler hem AV hem de PI negatifti; erken apoptozdaki hücreler AV pozitif ve PI negatifti; geç apoptozdaki hücreler hem AV hem de PI pozitifti; nekrotik hücreler PI pozitif ve AV negatifti. Apoptoz, daha önce tarif edildiği gibi DAPI boyama kiti (Life Tecnologies Italia, Monza, İtalya) ile nükleer morfolojideki değişiklikleri analiz ederek de değerlendirildi [ 62 ]. 4.6. ROS Algılama

HT-29 hücreleri 5 x 10 6-çukurlu plakalara tohumlanmıştır ⁵ hücre / standart koşullar altında 24 saat için büyütülmüştür ve daha sonra 24 st için AC ile muamele edilmiştir. ROS üretimi, PBS ile durulanan ve 37 °C'de 10 dakika boyunca 10 uM 2',7'-diklorofloresin diasetat (DCFDA) ile yüklenen hücrelerde değerlendirildi, daha sonra yıkandı, 13.000 x g'de 5 dakika boyunca santrifüjlendi ve 0.7'de yeniden askıya alındı. ml PBS. Hücre içi floresan (504 nm uyarım, 529 nm emisyon, Fluoroskan Ascent florimetre, Thermo Labsystems, Helsinki, Finlandiya), numunelerin mg hücresel proteinine normalleştirildi ve işlenmemiş kontrol hücrelerinin yüzdesi olarak ifade edildi [ 65 ]. 4.7. Rodamin-123 Boyama

Floresan probu rodamin-123 (R123), mitokondri bütünlüğünü kontrol etmek için kullanıldı [ 64 ]. Bu boya seçici olarak mitokondriye sağlam bir zar potansiyeli ile girer ve MMP kaybolmadığı sürece burada tutulur, böylece R123'ün hücrelerden yıkanmasına neden olur. AC muamelesinden sonra, HT-29 hücreleri karanlıkta 37 °C'de 10 dakika boyunca R123 (4 uM) ile lekelendi ve daha sonra PBS ile iyice yıkandı. Daha sonra 10000 tek hücre/numunenin floresansı, 505 nm'de (R123) FACScan akış sitometresi (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) ile ölçülmüştür. Hücre içi floresan tayini için CellQuest yazılımı v. 3.0 (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) kullanıldı. 4.8. Kaspaz Aktivitesi

Tedavilerin uçlarında, hücreler kaspaz liziz tamponu (20 mmol / L Hepes / KOH, 10 mmol / L KCl, 1.5 mmol / L MgCİ, 500 uL ilave edildi ₂ , 1 mmol / L EGTA, 1 mmol / L EDTA 1, 1 mmol/L DTT, 1 mmol/L PMSF ve 10 μg/mL leupeptin, pH 7.5). Daha sonra hücre lizatları (20 ug proteinler), aşağıdaki florojenik substratlarla (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) 37 °C'de 1 saat süreyle inkübe edildi: kaspaz-9 LEHD-AMC (Ac-Leu-Glu-His-Asp -7-amino-4-metilkumarin, AMC, 7-Amino-4-metilkumarin); kaspaz-3 DEVD-AMC (Ac-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-metilkumarin); kaspaz-8 IETD-AMC (Ac-Ile-Glu-Thr-Asp-AMC). Bunlar, 0.25 mL kaspaz tahlil tamponu (25 mmol/L Hepes, %0.1 w/v CHAPS, %10 w/v sukroz, 10 mmol/L DTT, %0.01 w/v) içinde 20 uM'de kullanıldı.yumurta albümini, pH 7.5). Reaksiyon, %0.1 a/h buz gibi soğuk trikloroasetik asit (0.75 mL) eklenerek durduruldu ve aktif kaspazlar tarafından salınan AMC fragmanının floresansı daha sonra 380 nm ve 460 nm'de okundu (Fluoroskan Ascent florimetre, ThermoLabsystems, Helsinki, Finlandiya) (sırasıyla uyarma ve emisyon dalga boyları) [ 66 ]. 4.9. Sıçan İleum veya Kolon Halkaları

Tüm hayvan bakımı ve deney protokolleri, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımına İlişkin Avrupa Birliği Yönergelerine uygundur (Avrupa Birliği Yönergesi 2010/63/EU, http://ec.europa.eu/environment/chem...ls/home_en.htm ) ve İtalyan Sağlık Bakanlığı (666/2015-PR) tarafından onaylanmıştır. Erkek Wistar sıçanları (250-350 g; Charles River Italia, Calco, İtalya) kullanıldı: 0,5 cm ileum ve proksimal kolon halkaları [ 67 , 68 ] protokollerine göre hazırlandı . 118 NaCl, 4.75 KCI, 2.5 CaC Özel olarak, halkalar modifiye Krebs-Henseleit, fizyolojik tuz çözeltisine (PSS) mM olarak (kompozisyonun 10 mL içeren bir su-ceketli (37 ° C) organ banyosu içine yerleştirilmiştir ₂ , 1.19 MgSO ₄ , 1.19 KH ₂PO ₄ , 25 NaHCO ₃ ve 5.5 glikoz,% 95 O ile köpürtüldü ₂ 5% CO ₂ gaz karışımı, pH 7.4) ve bir kuvvet transdüktörüne bağlandı biri iki paslanmaz çelik teller, üzerine monte edilmiş ölçülenin izometrik gerilim kontraktilitesini değerlendirmek için. İleum veya proksimal kolon halkaları daha sonra 1.0 g dinlenme gerilimi altında 90 dakika dengelendi ve yüksek potasyum içeren PSS (KCl 60 mM) ile büzüldü. Kasılma izometrik gerilimi, eksplantlarından hemen sonra hazırlanan halkalar (“taze” kontroller) ve tedavi edilenler için bir PowerLab veri toplama sistemi ve LabChart 7.3.7 Pro (Power Lab; ADInstruments, Castle Hill, Avustralya) aracılığıyla kaydedildi ve analiz edildi. PSS (kontroller, 0 µg/mL AC) veya AC 500-1000 µg/mL ile 24 saat [67 ].

Doku canlılığı da MTT tahlili [ 69 ] kullanılarak değerlendirildi . Halkalar 24 çoklu kuyuya, bir halka/kuyuya yerleştirildi ve bir saat boyunca 37 °C'de 800 ul MTT solüsyonu (0.5 mg/mL) ile inkübe edildi. Daha sonra halkalar 96 MW'ye (bir halka/oyuk) aktarıldı ve 800 uL DMSO eklendi. Plaka, oluşan formazan tuzlarının çözünmesine izin vermek için 30 dakika karıştırıldı. Daha sonra 100 µL süpernatan alınmış ve bir plak okuyucu (Multiskan TM GO, Thermo Scientific, Waltham, MA, ABD) kullanılarak absorbans değerlendirilmiştir (560-630 nm). 4.10. Verilerin Analizi

Veriler, en az dört bağımsız deneyden dört kopya halinde toplandı. Sonuçlar ortalama ± SEM olarak ifade edildi. Hücre canlılığı, işlenmemiş hücrelerin (kontroller) yüzdesi olarak ifade edildi. İstatistiksel anlamlılık, ANOVA ve ardından Dunnett son testi (GraphPad Prism sürüm 5.04, GraphPad Software Inc., San Diego, CA, ABD) kullanılarak değerlendirildi. Tüm karşılaştırmalarda istatistiksel anlamlılık düzeyi ( p ) 0,05 olarak belirlendi.

Git: 5. Sonuçlar

Bu çalışma, apoptotik hücrelerde ve ROS oluşumunda artışların eşlik ettiği insan kolorektal adenokarsinom HT-29 hücrelerinin sitotoksisitesini indüklediği için AC'nin CRC tedavisi için potansiyelini özetlemektedir; MMP'de bir azalma; ve kaspaz-9 ve 3 aktivitelerinde artış. AC, sıçan ileum ve kolon halkalarının canlılığını ve işlevselliğini etkilemedi, bu da sağlıklı dokuya yönelik güvenli bir profil önerdi. Ayrıca, AC ana bileşenleri hızla emilir ve yavaş yavaş elimine edilir [ 57 ] ve bu, AC'nin CRC'nin önlenmesi için potansiyel kullanımına bir katma değer oluşturabilir.

Git: Teşekkür

Yazarlar, bazı deneylerde teknik yardımları için Elena Croci ve Martina Bartoli'ye teşekkür etmek isterler.

Git: Kısaltmalar

AC	Akasya catechu Willd. öz odun özü
AMC	7-amino-4-metilkumarin
AV	ek V
C	kateşin
CRC	kolorektal kanser
DAPI	4',6-diamidino-2-fenilindol
DCFDA	2',7'-diklorofloresin diasetat
DEVD-AMC	Ac-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-metilkumarin
AT	epikateşin
EKG	epikateşin gallat
EGC	epigallokateşin
EGCG	Epigallokatekin galat
IETD-AMC	Ac-Ile-Glu-Thr-Asp-7-amino-4-metilkumarin
LEHD-AMC	Ac-Leu-Glu-His-Asp-7-amino-4-metilkumarin
MMP	mitokondriyal membran potansiyeli
MTT	4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür
PI	propidyum iyodür
R123	rodamin-123

Git: Ek Malzemeler

Ek materyaller https://www.mdpi.com/1422-0067/21/6/2102/s1 adresinde bulunabilir .
Ek veri dosyası için buraya tıklayın. ^{(589K, pdf)}
Git: Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma, RB ve MF; biçimsel analiz, MF; soruşturma, EC, MM, MD, RG ve CM; denetim, MF; yazma-orijinal taslak, MF; yazma-inceleme ve düzenleme, EC, MM, MD, RB, RG, CM, AC ve MF Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okumuş ve kabul etmiştir.

Git: Finansman

Bu araştırma hiçbir dış finansman almamıştır.

Git: Çıkar çatışmaları

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Git: Referanslar

1. Keum N., Giovannucci E. Kolorektal kanserin küresel yükü: Ortaya çıkan eğilimler, risk faktörleri ve önleme stratejileri. Nat. Rev. Gastroenterol. hepatol. 2019; 16 :713–732. doi: 10.1038/s41575-019-0189-8. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Malvezzi M., Carioli G., Bertuccio P., Boffetta P., Levi F., La Vecchia C., Negri E. Kolorektal kansere odaklanan 2018 yılı için Avrupa kanser ölüm tahminleri. Anne. Onkol. 2018; 29 :1016-1022. doi: 10.1093/annonc/mdy033. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
3. Van der Jeught K., Xu HC, Li YJ, Lu XB, Ji G. Kolorektal kanserde ilaç direnci ve yeni tedaviler. Dünya J. Gastroenterol. 2018; 24 :3834–3848. doi: 10.3748/wjg.v24.i34.3834. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Harvey AL, Edrada-Ebel R., Quinn RJ Genomik çağda ilaç keşfi için doğal ürünlerin yeniden ortaya çıkışı. Nat. Rev. İlaç Disov. 2015; 14 :111-129. doi: 10.1038/nrd4510. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Newman DJ, Cragg GM Doğal Ürünler 1981'den 2014'e Yeni İlaçların Kaynakları Olarak. J. Nat. Ürün 2016; 79 :629-661. doi: 10.1021/acs.jnatprod.5b01055. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Huang XM, Yang ZJ, Xie Q., Zhang ZK, Zhang H., Ma JY Kolorektal kanser tedavisi için doğal ürünler: Mekanistik bir inceleme. Biyomedya. Eczacılık 2019; 117 :109142. doi: 10.1016/j.biopha.2019.109142. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
7. Burnett BP, Jia Q., Zhao Y., Levy RM Scutellaria baicalensis ve Acacia catechu'nun tıbbi özü, iltihabı azaltmak için siklooksijenaz ve 5-lipoksijenazın ikili inhibitörü olarak işlev görür. J. Med. Gıda. 2007; 10 :442–451. doi: 10.1089/jmf.2006.255. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. İsmail S., Asad M. Acacia catechu'nun immünomodülatör aktivitesi . Hint J. Physiol Ecz. 2009; 53 :25–33. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
9. Lakshmi T., Ezhilarasan D., Vijayaragavan R., Bhullar SK, Rajendran R. Akasya catechu etanolik ağaç kabuğu özü, insan oral skuamöz karsinom hücrelerinde apoptozu indükler. J.Av. Eczacılık Teknolojisi. Araş. 2017; 8 :143–149. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
10. Rahmatullah M., Hossain M., Mahmud A., Sultana N., Rahman SM, Islam MR, Khatoon MS, Jahan S., Islam F. Akasya odununun kaynatılmasından hazırlanan 'khoyer'in antihiperglisemik ve antinosiseptif aktivite değerlendirmesi su içinde catechu . Afr. J. Gelenek Tamamlayıcı. Alternatif Med. 2013; 10 :1–5. doi: 10.4314/ajtcam.v10i4.1. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Micucci M., Gotti R., Corazza I., Tocci G., Chiarini A., De Giorgio M., Camarda L., Frosini M., Marzetti C., Cevenini M., et al. Akasya catechu Willd'in İshal Önleyici Etkilerine İlişkin Yeni Görüşler . Gine domuzunda ekstrakt. J. Med. Gıda. 2017; 20 :592–600. doi: 10.1089/jmf.2016.0154. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Shen D., Wu Q., Wang M., Yang Y., Lavoie EJ, Simon JE Acacia catechu'daki baskın kateşinlerin sıvı kromatografisi/elektrosprey iyonizasyon-kütle spektrometrisi ile belirlenmesi. J. Agric. Gıda Kimyası 2006; 54 :3219–3224. doi: 10.1021/jf0531499. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Hazafa A., Rehman KU, Jahan N., Jabeen Z. Kanser Hücrelerinin Tedavisinde Polifenol (Flavonoidler) Bileşiklerinin Rolü. Nutr. Yengeç Burcu. 2019:1–12. doi: 10.1080/01635581.2019.1637006. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
14. Fiori J., Pasquini B., Caprini C., Orlandini S., Furlanetto S., Gotti R. Yeşil çayın siklodekstrin ile modifiye edilmiş misel elektrokinetik kromatografisi ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile karakterizasyonunda theanine ve kateşinin kiral analizi. J. Kromatogr. A. 2018; 1562 :115–122. doi: 10.1016/j.chroma.2018.05.063. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Gotti R., Furlanetto S., Pinzauti S., Cavrini V. Theobroma kakao çekirdeklerindeki kateşinlerin siklodekstrin ile modifiye edilmiş misel elektrokinetik kromatografi ile analizi. J. Kromatogr. A. 2006; 1112 :345–352. doi: 10.1016/j.chroma.2005.11.058. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
16. Wang X., Peralta S., Moraes CT Karsinojenez sırasında mitokondriyal değişiklikler: Metabolik dönüşüm ve antikanser tedavileri için hedefler üzerine bir inceleme. reklam Kanser Araş. 2013; 119 :127-160. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
17. Jan R., Chaudhry GE Apoptozu ve Apoptotik Yolları Hedefli Kanser Tedavilerini Anlamak. reklam Eczacılık Boğa. 2019; 9 :205–218. doi: 10.15171/apb.2019.024. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Pfeffer CM, Singh ATK Apoptoz: Antikanser Tedavisi için Bir Hedef. Int. J. Mol. bilim 2018; 19 :E448. doi: 10.3390/ijms19020448. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Rejhova A., Opattova A., Cumova A., Sliva D., Vodicka P. Kolorektal kanser tedavisinde doğal bileşikler ve kombinasyon tedavisi. Avro. J. Med. Kimya 2018; 144 :582–594. doi: 10.1016/j.ejmech.2017.12.039. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Saito ST, Welzel A., Suyenaga ES, Bueno F. HPLC kullanılarak yeşil çayda epigallokateşin gallat (EGCG), epikateşin (EC), kateşin (C) ve kafeinin (CAF) hızlı tayini için bir yöntem. Gıda Bilimi Teknoloji. 2006; 26 :394–400. doi: 10.1590/S0101-20612006000200023. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Pasquini B., Orlandini S., Goodarzi M., Caprini C., Gotti R., Furlanetto S. Yeşil çay örneklerinin orijin ayrımı için kiral siklodekstrin ile modifiye edilmiş misel elektrokinetik kromatografi ve kemometrik teknikler. Talant. 2016; 150 :7-13. doi: 10.1016/j.talanta.2015.12.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
22. Arts ICW, Van de Putte B., Hollman PCH Catechin Hollanda'da Yaygın Olarak Tüketilen Gıdaların İçeriği. 1. Meyveler, Sebzeler, Temel Gıdalar ve İşlenmiş Gıdalar. J. Agric. Gıda Kimyası 2000; 48 :1746-1751. doi: 10.1021/jf000025h. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Gabr S., Nikles S., Pferschy Wenzig EM, Ardjomand-Woelkart K., Hathout RM, El-Ahmady S., Motaal AA, Singab A., Bauer R. Alakalı olarak Acacia türlerinden fenolik ekstraktların karakterizasyonu ve optimizasyonu anti-inflamatuar aktivitelerine. Biyokimya. Sist. ekol. 2018; 78 :21–30. doi: 10.1016/j.bse.2018.03.001. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Yang GY, Liao J., Kim K., Yurkow EJ, Yang CS İnsan kanser hücre dizilerinde büyümenin ve apoptozun çay polifenolleri tarafından indüklenmesi. Karsinojenez. 1998; 19 :611–616. doi: 10.1093/karsin/19.4.611. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Babich H., Krupka ME, Nissim HA, Zuckerbraun HL (-)-epikateşin gallatın (EKG) kansere ve insan ağız boşluğundaki normal hücrelere karşı in vitro farklı sitotoksisitesi. Toksikol. Laboratuvar ortamında. 2005; 19 :231–242. doi: 10.1016/j.tiv.2004.09.001. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
26. Tan X., Hu D., Li S., Han Y., Zhang Y., Zhou D. LoVo hücrelerinde hücre döngüsü durdurma ve apoptoz indüksiyonunda dört kateşinin farklılıkları. Kanser Let. 2000; 158 :1–6. doi: 10.1016/S0304-3835(00)00445-6. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Hou Z., Sang S., You H., Lee MJ, Hong J., Chin KV, Yang CS (-)-epigallocatechin-3-gallate'in etki mekanizması: Epidermal büyüme faktörünün oto-oksidasyona bağlı inaktivasyonu insan özofagus kanseri KYSE 150 hücrelerinde reseptör ve büyüme inhibisyonu üzerindeki doğrudan etkiler. Kanser Araş. 2005; 65 :8049–8056. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-05-0480. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
28. Yang CS, Wang H. Çay Kateşinlerinin Kanser Önleyici Faaliyetleri. Moleküller. 2016; 21 :1679. doi: 10.3390/moleküller21121679. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Shishido S., Miyano R., Nakashima T., Matsuo H., Iwatsuki M., Nakamura K., Kanno T., Egusa H., Niwano Y. Prooksidatifi ile ilgili olarak kateşinin fotooksidasyonu için yeni bir yol aktivite. bilim Cum. 2018; 8 :12888. doi: 10.1038/s41598-018-31195-x. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
30. Farhan M., Oves M., Chibber S., Hadi SM, Ahmad A. Nükleer Bakırın Yeşil Çay Polifenol Epikateşin-3-Gallat ile Mobilizasyonu ve Hücresel DNA'nın Müteakip Prooksidan Kırılması: Kanser Kemoterapisine Etkileri. Int. J. Mol. bilim 2016; 18 : 34. doi: 10.3390/ijms18010034. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Shin CM, Lee DH, Seo AY, Lee HJ, Kim SB, Son WC, Kim YK, Lee SJ, Park SH, Kim N., et al. Kolorektal adenomların endoskopik olarak çıkarılması uygulanan hastalarda metakron kolorektal poliplerin önlenmesi için yeşil çay özleri: Randomize bir klinik çalışma. klinik. Nutr. 2018; 37 :452-458. doi: 10.1016/j.clnu.2017.01.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Rawangkan A., Wongsirisin P., Namiki K., Iida K., Kobayashi Y., Shimizu Y., Fujiki H., Suganuma M. Green Tea Catechin, PD-L1 İfadesini ve Akciğeri Engelleyen Alternatif Bir Bağışıklık Kontrol Noktası İnhibitörü Tümör Büyümesi. Moleküller. 2018; 23 :2071. doi: 10.3390/moleküller23082071. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
33. Sinha D., Biswas J., Nabavi SM, Bishayee A. Meme kanseri önleme ve müdahale için çay fitokimyasalları: Tezgahtan başucuna ve ötesine. Semin Kanser Biol. 2017; 46 :33–54. doi: 10.1016/j.semcancer.2017.04.001. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
34. Bimonte S., Albino V., Piccirillo M., Nasto A., Molino C., Palaia R., Cascella M. Hepatosellüler karsinomun önlenmesi ve tedavisinde epigallocatechin-3-gallate: Deneysel bulgular ve translasyonel perspektifler. İlaç Des. gel. 2019; 13 :611-621. doi: 10.2147/DDDT.S180079. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
35. Liu C., Li P., Qu Z., Xiong W., Liu A., Zhang S. Sindirim Sistemi Tümörlerinin Tedavisinde Epigallocatechin-3-gallate Antagonizmasındaki Gelişmeler. Moleküller. 2019; 24 :1726. doi: 10.3390/moleküller24091726. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
36. Berindan-Neagoe I., Braicu C., Irimie A. Epigallocatechin 3-gallat'ın kemoterapötik etkilerinin siRNA aracılı p53 yıkımıyla birleştirilmesi, sinerjik pro-apoptotik etkilerle sonuçlanır. Int. J. Nanomed. 2012; 7 :6035–6047. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
37. Chen S., Zhu X., Lai X., Xiao T., Wen A., Zhang J. Geleneksel olmayan ilaçlarla kombine kanser tedavisi: Tüm yollar AMPK'ye çıkar. Mini Rev. Med. Kimya 2014; 14 :642–654. doi: 10.2174/1389557514666140820104444. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
38. Hsieh CH, Lu CH, Chen WT, Ma BL, Chao CY İnvaziv olmayan düşük güçlü darbeli elektrik alanının EGCG tedavisine uygulanması, PANC-1 hücreleri üzerindeki inhibisyon etkisini sinerjik olarak arttırdı. PLoS BİR. 2017; 12 :e0188885. doi: 10.1371/journal.pone.0188885. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
39. Colomer R., Sarrats A., Lupu R., Puig T. Doğal Polifenoller ve Gelişen Antikanser Ajanlar Olarak Sentetik Analogları. Kör. İlaç Hedefleri. 2017; 18 :147–159. doi: 10.2174/1389450117666160111113930. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
40. Bernatoniene J., Kopustinskiene DM Oksidatif Strese Hücresel Tepkilerde Kateşinlerin Rolü. Moleküller. 2018; 23 :965. doi: 10.3390/moleküller23040965. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
41. Farhan M., Khan HY, Oves M., Al-Harrasi A., Rehmani N., Arif H., Hadi SM, Ahmad A. Catechins'in Kanser Tedavisi, Bakır İyonlarının Redoks Döngüsünü ve Reaktif Oksijen türlerinin Üretimini İçerir. Toksinler (Basel) 2016; 8 : 37. doi: 10.3390/toksinler8020037. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
42. Hadi SM, Asad SF, Singh S., Ahmad A. Bitki kaynaklı polifenolik bileşiklerin antikanser ve apoptozu indükleyen özellikleri için varsayılan mekanizma. Iubmb. Hayat. 2000; 50 :167-171. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
43. Hadi SM, Bhat SH, Azmi AS, Hanif S., Shamim U., Ullah MF Bitki polifenolleri ile hücresel DNA'nın oksidatif kırılması: Antikanser özellikleri için varsayılan bir mekanizma. Semin Kanser Biol. 2007; 17 :370-376. doi: 10.1016/j.semcancer.2007.04.002. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
44. Ebadi M., Swanson S. Kanser hastalarında çinko, bakır ve metallotioneinin durumu. Prog Kliniği. Biol. Araş. 1988; 259 :161–175. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
45. Kong Q., Beel JA, Lillehei KO Kanser tedavisi için bir eşik kavramı. Med. hipotezler. 2000; 55 :29–35. doi: 10.1054/mehy.1999.0982. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
46. Oberley TD, Oberley LW Kanserde antioksidan enzim seviyeleri. Histol. Histopatol. 1997; 12 :525–535. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
47. Tao L., Forester SC, Lambert JD Yeşil çay kateşin, (-)-epigallocatechin-3-gallate, oral hücrelerde sitotoksik etkilerinde mitokondriyal oksidatif stresin rolü. Mol. Nutr. Gıda Araş. 2014; 58 :665–676. doi: 10.1002/mnfr.201300427. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
48. Hong J., Lu H., Meng X., Ryu JH, Hara Y., Yang CS Stabilite, hücresel alım, biyotransformasyon ve HT-29 insan kolonunda çay polifenol (-)-epigallocatechin-3-gallat akışı adenokarsinom hücreleri. Kanser Araş. 2002; 62 :7241–7246. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
49. Ahmad N., Gupta S., Muhtar H. Yeşil çay polifenol epigallokateşin-3-gallat, normal hücrelere karşı kanser hücrelerinde nükleer faktör kappaB'yi farklı şekilde modüle eder. Kemer Biyokimya. Biyofiz. 2000; 376 :338–346. doi: 10.1006/abbi.2000.1742. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
50. Mayanagi K., Gaspar T., Katakam PV, Kis B., Busija DW Mitokondriyal K(ATP) kanal açıcı BMS-191095, sıçanlarda geçici fokal serebral iskemiden sonra nöronal hasarı azaltır. J. Cereb. Kan Akışı Metab. 2007; 27 :348–355. doi: 10.1038/sj.jcbfm.9600345. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
51. Mittal A., Pate MS, Wylie RC, Tollefsbol TO, Katiyar SK EGCG, insan meme kanseri MCF-7 hücrelerinde telomerazı aşağı regüle ederek hücre canlılığının baskılanmasına ve apoptozun indüklenmesine yol açar. Int. J. Oncol. 2004; 24 :703-710. doi: 10.3892/ijo.24.3.703. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
52. Rudolfova P., Hanusova V., Skalova L., Bartikova H., Matouskova P., Bousova I. Seçilen kateşinlerin doksorubisin antiproliferatif etkinliği ve in vitro hepatotoksisite üzerindeki etkisi. Acta Ecz. 2014; 64 :199–209. doi: 10.2478/acph-2014-0018. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
53. Yang CS, Wang H., Chen JX, Zhang J. Çay Kateşinlerinin Kanser Sinyal Yolları Üzerindeki Etkileri. Enzimler. 2014; 36 :195–221. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
54. Parmar A., Pascali G., Voli F., Lerra L., Yee E., Ahmed-Cox A., Kimpton K., Cirillo G., Arthur A., Zahra D., et al. In vivo [(64)Cu]CuCl2 PET görüntüleme, Dextran-Catechin'in tümör bakır homeostazı üzerindeki aktivitesini ortaya koyuyor. Teranostik. 2018; 8 :5645-5659. doi: 10.7150/thno.29840. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
55. Dashtdar M., Dashtdar MR, Dashtdar B., Shirazi MK, Khan SA In-Vitro, Akasya catechu (LF)Willd, Castanea sativa, Ephedra sinica stapf ve shilajita mumiyo'nun Gram Pozitif ve Gram Negatif Bakteriler. J. Farmakopunktur. 2013; 16 :15–22. doi: 10.3831/KPI.2013.16.014. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
56. Kosumi K., Mima K., Baba H., Ogino S. Bağırsak mikrobiyotasının disbiyozu ve kolorektal kanser: Moleküler patolojik epidemiyolojinin temel hedefi. J. Lab. Hassas Med. 2018; 3 : 76. doi: 10.21037/jlpm.2018.09.05. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
57. Wang L., Shen X., Mi L., Jing J., Gai S., Liu X., Wang Q., Zhang S. Acacia catechu (Lf) Willd ve Scutellaria baicalensis'teki dört ana biyoaktif bileşenin eşzamanlı tayinleri LC-MS/MS ile Georgi ekstreleri: Sıçanlarda farmakokinetik, doku dağılımı ve atılım çalışmalarına dayalı bitki-bitki etkileşimlerine uygulama. Bitkisel ilaç. 2019; 56 :64-73. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
58. Reagan-Shaw S., Nihal M., Ahmad N. Hayvandan insan çalışmalarına doz çevirisi yeniden gözden geçirildi. Faseb. J. 2008, 22 :659-661. doi: 10.1096/fj.07-9574LSF. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
59. Terzuoli E., Nannelli G., Frosini M., Giachetti A., Ziche M., Donnini S. Hidroksitirosol-setuksimab kombinasyonu ile hücre döngüsü ilerlemesinin inhibisyonu, kolon kanseri hücrelerinde gelişmiş kemoterapötik etkinlik sağlar. Oncotarget. 2017; 8 :83207-83224. doi: 10.18632/oncotarget.20544. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
60. Bechi N., Sorda G., Spagnoletti A., Bhattacharjee J., Vieira Ferro EA, De Freitas Barbosa B., Frosini M., Valoti M., Sgaragli G., Paulesu L., et al. Bazı çevre kirletici kimyasallar ve 17beta-estradiol için trofoblast hücreleri üzerinde toksisite değerlendirmesi. Toksikol. Laboratuvar ortamında. 2013; 27 :995–1000. doi: 10.1016/j.tiv.2013.01.013. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
61. Santulli C., Brizi C., Durante M., Micucci M., Budriesi R., Chiarini A., Frosini M. İnsan SH-SY5Y Nöroblastom Hücrelerinde Castanea sativa Kabuğu Ekstraktının Apoptotik Etkileri. Nat. Ürün Komün. 2018; 13 :887-890. doi: 10.1177/1934578X1801300726. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
62. Brizi C., Santulli C., Micucci M., Budriesi R., Chiarini A., Aldinucci C., Frosini M. Castanea sativa Mill'in Nöroprotektif Etkileri. Oksidatif Strese Maruz İnsan Nöroblastom Hücrelerinde Kabuk Özü. J. Hücre Biyokimyası. 2016; 117 :510–520. doi: 10.1002/jcb.25302. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
63. Santulli C., Brizi C., Micucci M., Del Genio A., De Cristofaro A., Bracco F., Pepe GL, Di Perna I., Budriesi R., Chiarini A., et al. Castanea sativa Mill. Kabuk Özü, U-373 MG Hücrelerini ve Sıçan Beyin Dilimlerini İskemi ve Reperfüzyon Yaralanmasına Karşı Korur. J. Hücre Biyokimyası. 2016; 118 :839-850. doi: 10.1002/jcb.25760. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
64. Durante M., Frosini M., Fusi F., Neri A., Sticozzi C., Saponara S. Tariquidar'ın in vitro vasküler toksisitesi, in vivo PET çalışmaları için potansiyel bir araç. Toksikol. Laboratuvar ortamında. 2017; 44 :241–247. doi: 10.1016/j.tiv.2017.07.015. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
65. Riganti C., Gazzano E., Gulino GR, Volante M., Ghigo D., Kopecka J. İki tekrarlanan düşük doz doksorubisin, P-glikoproteini aşırı eksprese eden tümörlere karşı tek bir yüksek dozdan daha etkilidir. Kanser Let. 2015; 360 :219–226. doi: 10.1016/j.canlet.2015.02.008. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
66. Riganti C., Rolando B., Kopecka J., Campia I., Chegaev K., Lazzarato L., Federico A., Fruttero R., Ghigo D. Mitokondriyal hedefleme nitrooksi-doksorubisin: İlacın üstesinden gelmek için yeni bir yaklaşım rezistans. Mol. Eczacılık 2013; 10 :161-174. doi: 10.1021/mp300311b. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
67. Watters DA, Smith AN, Eastwood MA, Anderson KC, Elton RA Sıçan kolonunun mekanik özellikleri: Yaş, cinsiyet ve farklı saklama koşullarının etkisi. Q J. Uzm. Fizol. 1985; 70 :151-162. doi: 10.1113/expphysicol.1985.sp002887. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
68. Wu Q., Harada N., Nakamura A., Yoshida M., Mawatari K., Hattori A., Li Q., Shimohata T., Lian X., Nakano M., et al. Bir lipoprotein lipaz aktivatörü olan NO-1886, sıçan bağırsak halkası preparatlarının kasılmasını azaltır. J. Med. Yatırım 2008; 55 :61–70. doi: 10.2152/jmi.55.61. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
69. Contartese A., Valoti M., Corelli F., Pasquini S., Mugnaini C., Pessina F., Aldinucci C., Sgaragli G., Frosini M. Yeni bir CB2 agonisti, COR167, sıçan beyin kortikal dilimlerini güçlü bir şekilde korur OGD ve reperfüzyon hasarına karşı. Eczacılık Araş. 2012; 66 :555-563. doi: 10.1016/j.phrs.2012.08.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]

Duyuru

Akasya, Gummi-Akazie, Acacia Senegal

Akasya, Gummi-Akazie, Acacia Senegal

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap

Yorum yap