Sulu ve etanolik özler etkisi Lippia citriodora ile Candida albicans
Maryam Ghasempour , 1 Saeid Mahdavi Omran , 2 Ali Akbar Moghadamnia , 3 ve Faranak Shafiee 4
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk reddi
Bu makale PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır .
Şuraya gidin: Öz
Giriş
Yaygın antifungal ilaç aktivitesine karşı direnç ve yan etkiler nedeniyle, antifungal aktiviteye sahip bitkisel maddeler üzerinde araştırmalar sıktır. Limon mineçiçeği (Lippia citriodora) , Verbenaceae ailesinin bir üyesidir . Bu çalışmanın amacı, limon mineçiçeği yapraklarının etanolik ve sulu özlerinin anti-kandida aktivitelerini belirlemek ve bunları nistatin ve flukonazol ile karşılaştırmaktır . Yöntemler
Bu 2015 çalışmasında, 15 klinik izolat ve standart candida albicans PTCC 5027 suşu kullanılmış ve etanolik ve sulu ekstraktlar olan Nistatin ve Flukonazol'ün inhibitör etkileri disk ve kuyu difüzyon yöntemleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Ayrıca minimum inhibitör konsantrasyon (MIC) belirlendi. Disk ve kuyu difüzyon yöntemlerinde beş konsantrasyon sulu ve etanolik ekstrakt (156–2500 μg / ml), Nistatin (8-128 μg / ml) ve Flukonazol (4-64 μg / ml) ve dokuz konsantrasyonda sulu ve etanolik özler (19–5000 μg / ml), NistatinMİK için (0,5–128 μg / ml) ve Flukonazol (0,25–64 μg / ml) uygulandı. Veriler, Tukey'in post-hoc ve tek yönlü ANOVA testleri kullanılarak analiz edildi. Bu çalışmada anlamlı düzey p <0,05 olarak kabul edilmiştir. Sonuçlar
Kuyu ve disk difüzyon tekniklerinde, farklı etanolik ekstrakt konsantrasyonlarında bazı klinik izolatlar etrafında sınırlı büyüme inhibisyonu haleleri üretildi ; bununla birlikte, sulu ekstraktın herhangi bir konsantrasyonunda büyümeyi engelleyici halo gözlenmedi. Klinik izole ve standart suş için etanolik ekstrakt, sulu ekstrakt, Nistatin ve Flukonazol'ün MIC değerleri 833 ± 78.5 ve 625μg / ml idi; 4156 ± 67,4 ve 2500 μg / ml; 10.13 ± 1.91 ve 4 μg / ml; ve sırasıyla 1,97 ± 0,25 ve 1 μg / ml. Sonuç
Sonuçlar, etanolik özütün, bu bitkinin ilaçlara alternatif olarak kullanılabilen sulu özünden daha güçlü olduğunu gösterdi . Bu bitkinin etanolik özütünün etkinliği ve özelliklerinin daha iyi değerlendirilmesi için in vivo araştırılması tavsiye edilir.
Anahtar Kelimeler: Anti-Candida albicans aktivitesi, Lippia citriodora, Ethanolic ve Aqeoues ekstreleri, Nystatin, Fluconazole
Şuraya gidin: 1. Giriş
Oral kandidiyaz, ağız boşluğunu etkileyen çeşitli klinik belirtilere sahip en yaygın fırsatçı enfeksiyonlardan biridir. Önceki çalışmalara göre, Candida albicans bu durum için en sık görülen etiyolojik ajandır ( 1 , 2 ). Araştırmalar, çocuklarda Candida kolonileri ile çocukluk çağındaki erken çürük lezyonlar arasında önemli bir ilişki olduğunu göstermiştir ( 3 , 4 ). Polienler ( nistatin ) ve azoller (flukonazol), kandidiyazis tedavisinde en yaygın olarak kullanılan lokal ajanlardır; ancak, dirençli Candida türlerinin varlığı, toksisite ve yetersiz biyoyararlanım nedeniyle, bu ajanların sadece küçük bir kısmı terapötik olarak etkilidir ( 5). Son yıllarda bitki türevleri büyük ilgi gördü ( 6 ). Mükemmel terapötik özelliklere sahip bu bitkilerden biri , Verbena ailesinden Lippia citriodora'dır . Bitki Kuzey Amerika'ya özgüdür; ancak yararlı özellikleri nedeniyle bazı Avrupa ülkelerinde ve İran'da sera koşullarında ılıman hava koşullarına sahip bölgelerde (kuzey bölgeler) ekilmiştir ( 7 ). Bu bitkinin yaprakları, geleneksel çayı hazırlamak için kullanılan aromatik bileşenlere sahiptir. L. citriodora güvenli bitkilerden biri olarak listelenmiştir ve alkollü ve geleneksel çay formlarının kullanımı güvenli kabul edilmiştir ( 8 ). Sitral ( geranial, neral), geraniol , limonen ve cineol, L. citriodora ( 9 ) özütünün ana bileşenleridir . Bu bitki geleneksel tıpta astım, spazmlar, soğuk algınlığı, kolik, ishal, emilim bozukluğu ve anksiyete tedavisinde kullanılmaktadır ( 10 ). Özü ve yaprak ekstraktından izole biyolojik aktivite ve malzemeyi değerlendirilmesi L. citriodora onun bir sonucu olarak bir anti-oksidan, bir anti-mikrobiyal, anti-enflamatuar ve anti-mantar aktiviteleri ve analjezik etkiler gösterdi fenolik asit , flavonoid , ve terpenoid bileşikler. L. citriodora'nın uçucu yağlarıoksidatif stres nedeniyle hücresel lizizi azaltır ve nöronal bozulmaya yol açan durumlar için iyi bir adaydır ( 8 , 10 - 13 ). Bu çalışmanın amacı, L. citriodora yapraklarının sulu ve etanolik ekstraktlarının , hastaların dil sırtından izole edilen Candida albicans ve kültür ortamındaki standart suş üzerindeki inhibitör etkisini belirlemektir .
Şuraya gidin: 2. Gereç ve Yöntemler
2.1. Çalışma tasarımı ve ayarı
Bu in vitro çalışmada, İran Endüstriyel Mikroorganizma Toplama Merkezi'nden temin edilen standart Candida albicans suşu (PTCC 5027) ve 15 C. albicans kullandık.Babol Tıp Bilimleri Üniversitesi Çocuk Diş Hekimliği Anabilim Dalı'na sevk edilen 4-12 yaş arası çocukların dil sırtından izole edilen örnekler. Dahil etme kriterleri, geçen ay boyunca anti-mikrobiyal gargaraların kullanılmaması ve anti-fungal ajanların, antihistaminiklerin ve kortikosteroidlerin kullanılmamasından ve> 4 çürük indeksinden oluşuyordu. formlar. Örnekler, kloramfenikol ile birlikte Sabouraud dekstroz agar plakalarında (Scharlau-Merck, Almanya) hemen kültürlendi. Mantar büyümesinden sonra, koloninin bir kısmı CHROMagar kültür ortamına (CHROMagar Candida, Paris, Fransa) aktarıldı. C. albicans türleri, CHROMagar besiyerinde üretilen renk ve serumda bir germ tüpünün oluşumu ve mısır unu agar medyanında veziküllerin üretilmesi (Himedia Laboratories, Ltd, Mumbai, Hindistan) artı% 1 Tween 80 ile doğrulanmıştır. Sabouraud Dextrose Agar with Chloramphenicol besiyerinde fizyolojik serum kullanılarak 48 saatlik maya kolonileri hazırlandı. Daha sonra disk placemat yöntemi ile kuyucuk tekniği kullanılarak standart 0.5 McFarland konsantrasyonu hazırlandı. Mayaların mikrodilüsyonları 5 × 10'da hazırlandı Disk placemat yöntemi ile kuyu tekniği kullanılarak 5 McFarland konsantrasyonu hazırlandı. Mayaların mikrodilüsyonları 5 × 10'da hazırlandı Disk placemat yöntemi ile kuyu tekniği kullanılarak 5 McFarland konsantrasyonu hazırlandı. Mayaların mikrodilüsyonları 5 × 10'da hazırlandı2 - 2.5 x 10 3 RPMI ortamı (Sigma-Aldrich, Almanya) kullanımı ile her bir çözeltiye ilave edildi. 2.2. L. citriodora'nın sulu ve etanolik yaprak ekstresinin hazırlanması
L. citrodora yaprakları Mayıs 2015'te Babol Tıp Bilimleri Üniversitesi Araştırma Bahçesinden toplanmış, durulanmış, oda sıcaklığında 27 saat kurutulmuş ve öğütülmüştür. Sulu özü hazırlamak için, yaprakların 30 g kuru tozu, önceden kaynatılmış olan 70-80 ° C'de 100 mL su ile karıştırıldı ve 24 saat oda sıcaklığında saklandı. Elde edilen öz, Whatman filtre kağıtlarından (Whatman No. 1) süzüldü ve kurutma için 40-50 ° C'de bir fırına yerleştirildi. Malzemenin kuru ağırlığı belirlendi. Bu özüt, L. citriodora'nın sulu özütü olarak kabul edildi . Etanolik hazırlamak içinözü, 75 g kuru malzeme ve 250 mL% 95 susuz etanol bir beher içine döküldü ve 48 saat sonra elde edilen çözelti No. 1 Whatman kağıt filtrelerinden süzüldü ve bir vakumlu makinede kurutuldu. Kuru etanolik ekstrakt tartıldı. Bu özüt, kuru etanolik özüt olarak kabul edildi . 2.3. Disk difüzyon tekniği kullanılarak antifungal aktivitenin değerlendirilmesi
Steril kağıt diskler, 156–2500 μg / mL sulu (suda çözülmüş) ve etanolik (dimetil sülfoksit , DMSO'da çözülmüş ) özütleri, 4-64 μg / mL flukonazol (suda çözülmüş) nihai konsantrasyonlarına daldırıldı ve 8-128 μg / mL nistatin ( dimetil sülfoksit , DMSO içinde çözülmüş ) ve sonra kurutulur. Steril fizyolojik serum içinde C. albicans'tan hazırlanan süspansiyon , steril bir çubuk kullanılarak Sc ortamı içeren bir plakaya yayıldı. Farklı konsantrasyonlarda L. citriodora , nistatin sulu ve etanolik ekstraktlarını içeren beş diskve flukonazol her plakaya ayrı ayrı yerleştirildi. Diskler, plaka kenarından 15 mm ve bitişik diskin merkezinden 24 mm mesafeye yerleştirildi. Hazırlığı olmayan bir disk ve% 0.2 DMSO içeren bir disk, negatif kontroller olarak kabul edildi. Daha sonra, her diskin etrafındaki şeffaf hale çapı ölçüldü. Halo çapları 2 mm antifungal aktiviteye işaret etti ( 14 ). Tüm plakalar iki kopya halinde hazırlandı ve 37 ° C'de 48 saat inkübe edildi. 2.4. Kuyu tekniği kullanılarak antifungal aktivitenin değerlendirilmesi
Steril fizyolojik serum içinde C. albicans'tan hazırlanan süspansiyon , bir steril sürüntü kullanılarak kloramfenikol ile birlikte Sabouraud dekstroz agar kültür ortamı içeren bir plakaya aşılanmıştır . İki saat sonra içinde 6 mm çapında oyuklar hazırlandı. Çukurlara farklı konsantrasyonlarda sulu özüt (suda çözülmüş), etanolik özüt (DMSO içinde çözülmüş), flukonazol (suda çözülmüş) ve nistatin (DMSO içinde çözülmüş) eklenmiştir. Tüm plakalar iki kopya halinde hazırlandı ve 37 ° C'de 48 saat inkübe edildi. 2.5. Minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) belirlemek için mikrodilüsyon
MİK, ilacın inhibe edici ve öldürücü etkisini belirlemek için CLSI-M27-A3 (Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü) standart tekniği kullanılarak belirlendi ( 15 ). 19–5000 μg / mL, 0,25–64 μg / mL flukonazol, 0,5–128 μg / mL nistatin nihai konsantrasyonlarında, steril 96'da toplam 100 μL hacimde dokuz farklı ekstrakt konsantrasyonları iki kez hazırlandı 96 -100 μL RPMI içeren düz tabanlı iyi ELISA plakaları. Daha sonra, 5 konsantrasyonlarda mantar süspansiyonu x 10 2 - 2.5 x 10 3plakalara 100 uL hacimde maya hücreleri / mL eklenmiştir. Tüm plakalar iki kopya halinde hazırlandı ve 35 ° C'de 48 saat inkübe edildi. Pozitif ve negatif kontroller ve DMSO solüsyonu da dikkate alındı. 2.6. istatistiksel analiz
Veriler, SPSS 18 yazılımı kullanılarak Tukey'in post hoc ve Tek Yönlü ANOVA testleri kullanılarak analiz edildi ve ortalama ± ortalamanın standart hatası (SEM) olarak ifade edildi. Limon mineçiçeği etanolik ve sulu özlerinden elde edilen veriler , kontrol grubu flukonazol ve nistatin bulguları ile karşılaştırıldı ve p <0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Şuraya gidin: 3. Sonuçlar
Mevcut in vitro çalışmada, örnekler, sırasıyla 5,5 ve 8,6 ortalama DMFT skoru ile 4-6 yaş grubundan 10 kişi ve 7-12 yaş grubundan 12 kişi olmak üzere 22 gönüllüden toplanmıştır. Kültüre alınan 22 numuneden ikisi C. albicans numunesi değildi ve beş numunede mantar üremesine rastlanmadı. 15 CHROMagar kültür ortamında yeşil kolonilerin varlığı, C. albicans (Şekil 1). Ek olarak, tüm bu mikroorganizmalar mısır unu agarında germ tüpleri ve veziküller ( klamydoconidium ) ve 13 tabakta% 1 Tween 80 (şekil 2). Bu çalışmada, L. citiodora yapraklarının farklı konsantrasyonlardaki sulu ve etanolik ekstraktlarının C. albicans'a karşı anti-fungal aktiviteleri, nistatin ve flukonazole kıyasla disk difüzyon, kuyu ve mikrodilüsyon teknikleri kullanılarak değerlendirilmiştir .
Ayrı bir pencerede aç
Şekil 1
C. albicans büyümesini gösteren CHROMagar kültür ortamı
Ayrı bir pencerede aç
şekil 2
Mısır unu agarındaki Chlamydoconidium
Kuyucuk ve disk difüzyon tekniklerinde, klinik olarak izole edilmiş birkaç lekenin çevresinde küçük büyüme inhibe edici haleler gözlendi; bununla birlikte, standart suşların çevresinde hiçbir inhibitör halo gözlenmedi. Ek olarak, sulu özüt, disk difüzyonunda ve kuyu tekniklerinde hiçbir engelleyici halo sergilemedi. Nistatin içeren disklerle (izole edilmiş ve standart lekeler etrafında minimum konsantrasyon 8 μg / mL) büyüme inhibe edici halelerin çapları 0.53 ± 0.53 ve 0; klinik olarak izole edilmiş ve standart boyalar etrafında 128 μg / mL konsantrasyonda büyüme inhibe edici halelerin maksimum çapları doza bağlı bir şekilde 16.13 ± 0.44 ve 17'ye yükselmiştir. Ek olarak, minimum nistatin ile kuyu tekniğinde aynı sırada büyüme inhibe edici halelerkonsantrasyon 0.535 ± 0.55 ve 0 idi ve maksimum konsantrasyonda 17.8 ± 0.59 ve 17 idi. 0.55 ve 0 ve kuyu tekniğinde 0 ve 0 idi. Maksimum konsantrasyonda (64 μg / mL) çaplar sırasıyla 15.53 ± 1.28 ve 17 ve 17.33 ± 0.36 ve 18 idi. MIC'ler şu şekilde sunulur:tablo 1. MIC sonuçları , L. citriodora'nın etanolik özütünün sulu özütüne göre daha yüksek bir önleyici etki gösterdi . Ek olarak, standart suş, değerlendirilen konsantrasyonlarda klinik olarak izole edilmiş C. albicans suşlarından daha yüksek hassasiyet sergilemiştir. Sulu ekstraktı içeren disklerde ve kuyucuklarda büyüme inhibe edici haleler tespit edilmemesine rağmen, MIC tekniğinde, klinik ve standart suşlar için büyüme inhibisyonları sırasıyla 833 ± 78.5 ve 2500 μg / mL idi. Etanolik ekstraktın MIC değeri, izole edilmiş ve standart suşlar için sırasıyla 833 ± 78.5 ve 625 μg / mL idi, bu da etanolik ekstrakt için sulu ekstrakttan daha yüksek inhibitör potansiyeli gösterdi (p = 0). Ek olarak, MICKlinik ve standart suşlar için nistatin sırasıyla 10.13 ± 1.91 ve 4, flukonazol için sırasıyla 1.97 ± 0.25 ve 1 μg / mL idi. L. citriodora'nın etanolik özütünün MIC'si , nistatin ve flukonazolünkinden daha yüksek olmasına rağmen (p = 0), bu özüt, anti-fungal aktivite sergilemiştir. tablo 1
Lippia citriodora , Nystatin ve Fluconazol e'nin sulu ve etanolik ekstraktlarının Candida albicans'a karşı minimum inhibitör konsantrasyonunun (MIC) ortalamaları ve standart sapması
Şuraya gidin: 4. Tartışma
Bu çalışma , L. citriodora yapraklarının sulu ve etanolik ekstraktlarının C. albicans üzerindeki anti-fungal etkilerini değerlendirdi . Sonuçlar, CHROMagar kültür ortamında bu mantar türlerinin 15 kolonisinin yeşil renkte olduğunu gösterdi, bu da C. albicans varlığını gösterir . Ek olarak, bu kolonilerin tümü germ tüpleri üretti ve 13 suş , mısır unu agar ortamında veziküller ( Chlamydoconidium ) üretti . Önceki bir çalışma, L. citriodora'nın yaprak özütünün anti-oksidatif aktivitesini gösterdi. Ek olarak, L. citriodora yapraklarının anti-mikrobiyal ve anti-fungal özellikleri, yapraklardaki aromatik ve polifenolik bileşiklere atfedilmiştir (16 - 18 ). Bu çalışmada, L. citriodora yapraklarının sulu ve etanolik ekstraktlarının etkileri disk difüzyon, kuyu difüzyon ve MIC teknikleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Kuyu ve disk difüzyon tekniklerinde, farklı etanolik konsantrasyonlarda bazı klinik izolatlar etrafında sınırlı büyüme inhibisyon haleleri üretildi.Ayıkla; bununla birlikte, sulu ekstraktın herhangi bir konsantrasyonunda büyümeyi önleyici hiçbir hale gözlenmedi. Ekstraktı içeren disklerin etrafında büyümeyi engelleyici halelerin olmaması, bu çalışmada, önceki çalışmalara kıyasla daha düşük bir ekstrakt konsantrasyonu kullanıldığı gerçeğine bağlanabilir. Ek olarak, kuyu ve disk difüzyon tekniğindeki etkili materyal yavaş yavaş çevreye yayıldığından ve büyüyen kolonilerin sınırlarını etkilediğinden, söz konusu mantar türleri, savunma mekanizmalarını kullanarak materyalin toksisitesine karşı koyma fırsatı buldu. uygun teknik; bununla birlikte, mikro-seyreltme tekniğinde, ekstraktın kültür ortamı ile karıştırılması, çevrenin tüm alanlarında etkili malzemenin mevcudiyetiyle sonuçlanmıştır. Bu nedenle,19 ). MIC etanolik özü, bu çalışmada, klinik olarak izole edilmiş ve standart suşlar daha gösterdi Oskay, bir 2005 çalışmada daha düşük, sırasıyla 833 ± 78.5 ve 625 ug / mL, olduğu MIC metanolik ekstresi ve L. citriodora yapraklar C. albicans 6 mg / ml oldu ( 20 ). Bu çalışmada, inhibisyon, Oskay'ın çalışmasındakinden daha düşük bir konsantrasyonda meydana geldi; bu, ekstraktta daha yüksek polifenol ve aromatik bileşik seviyelerine atfedilebilir ( 13 , 17). Mevcut çalışmada, klinik olarak izole edilmiş ve standart suşlara sahip sulu özütlerin MIC'leri sırasıyla 4156 ± 67.4 ve 2500 ug / mL idi ve bu, sulu özütün etanolik özütten daha düşük bir inhibitör potansiyeline işaret etti . Koohsari ile 2013 çalışmada, sulu ve antibakteriyel etkisi etanolik ekstreleri L. citriodora diski difüzyon ve iyi bilinen teknikler kullanılarak dokuz patojenik türleri üzerinde 125-1000 mg / ml konsantrasyonlarda değerlendirildi. Sonuçlar, etanolik özütün bir antibakteriyel etki sergilediğini gösterdi ; bununla birlikte sulu ekstraktın patojenik türler üzerinde hiçbir inhibitör etkisi yoktu. Sonuçlar göstermiştir ki E. faecalis , S. epidermidisve S. aureus gram pozitif bakteriler arasında en duyarlı bakterilerdi ve Y. enterocolitica en dirençli gram negatif bakteri türüydü ( 14 ). Çoğu bitki özütü, anti-mikrobiyal özelliklere sahiptir ve doymuş organik veya aromatik bileşiklerden oluşur. Çoğu durumda, etanolik veya metanolik çözücüler ilk ekstraksiyonları için kullanılır ve tipik olarak çalışmaların çoğunda bitki türevlerinin ekstraksiyonu için su kullanımından kaçınılır ( 21). Bitki özütlerindeki fenolik bileşenlerin varlığı, anti-mikrobiyal etkilerinin ana nedenlerinden biri olduğundan, sulu özütte çok az miktarda fenolik bileşik bulunmasının, düşük antimikrobiyal etkisinin nedeni olması mümkündür. bu özü ( 17 ). Lozado Her 2012 çalışmada elde edilen uçucu yağların etkileri değerlendirildi L. citriodora ve L. origanoid büyüme inhibisyonu Moniliophthora roreri (ve sonuç 600-1000 ug / mL konsantrasyonlarda mantar büyümesi tam olarak önlendiğini gösterdi 22 ) . L. citriodora'nın uçucu yağlarıyla ilgili gözlemler, H. pylori'ye karşı yüksek antibakteriyel aktivitesini göstermiştir.( 23 ). Ramzi tarafından yapılan bir 2010 çalışması, L. citriodora ekstresinin gram pozitif bakteriler üzerinde inhibe edici bir etkiye sahip olduğunu , ancak Candida maltosa üzerinde hiçbir etkisi olmadığını gösterdi ( 24 ). 2012 yılında Ansari, metisiline dirençli S. aureus suşuna karşı MİK belirlemek için disk difüzyon tekniğini kullanarak 1/2, 1/4, 1/8 ve 1/16 konsantrasyonlarında 100 μl L. citriodora ekstresi içeren bir çalışma yürütmüştür . Sonuçlar, inhibitör etkinin, özüt konsantrasyonundaki 55 μg / mL'ye kadar artışla arttığını gösterdi. Ek olarak, MIC 15 μg / mL olarak belirlendi ve sonuçlar, hücrelere karşı çok düşük toksisiteye rağmen metisiline dirençli S. aureus'a karşı yüksek bir anti-mikrobiyal aktivite gösterdi (25 ). Ekstraktın antibakteriyel aktivitesi, kimyasal yapısında alkaloidlerin, flavonoidlerin ve tanenin varlığına bağlanabilir ( 23 ). Tatsadjieu antifungal aktivitesi değerlendirildi Lippia rugosa yaprakları ve gösterdi geraniyol , neral , ve geranial ekstraktta karşı mantarlarla mücadele etkinlikleri bakımından sorumlu ajanlar olarak Aspergillus flavus ( 26 ). Royaro tarafından 2009 yılında yapılan bir araştırma, L. citriodora yapraklarının ekstraktının sırasıyla C. krusei ve Aspergillus fumigatus'a karşı 99.21 ve 65.5 μg / mL'lik inhibitör konsantrasyonlarda en yüksek anti-fungal aktiviteyi sergilediğini göstermiştir ( 22). Lozada'nın tarafından 2012 yılında bir çalışma, temel yağlar gösterdi L. citriodora ve L. origanoid 200 ug / mL bir konsantrasyonda mantar büyümesinin% 90 inhibisyonu ile sonuçlanmıştır; ancak 800-1000 μg / mL aralığındaki konsantrasyonlarda% 100 inhibisyon sağlandı ( 27 ). 2007 yılında Oliviera tarafından damla difüzyon tekniği kullanılarak L. origanoid'in antibakteriyel aktivitesi üzerine yapılan bir çalışmada , S. aureus ve C. albicans dahil olmak üzere gram pozitif mikroorganizmalar üzerindeki inhibitör etkileri gösterilmiştir ( 28 ). 1994'te Villon ve Chaumont tarafından yapılan bir araştırma, Lippia multiflora ve Lippia chevalieri'nin antifungal aktivitesini gösterdi.Aspergillus flavus'a karşı ekstreler . Bu rapor trepenoids özellikle, sitral ve geraniyol L. ekstre içinde mevcut olduğu citriodora , anti-mantar aktivitesi (sorumlu 29 ). Başka anti-mantar maddeler , beta-karyofilen ve beta-karyofılen ait oksit cisquiterpens ve bitki ekstreleri içinde bulunan Lippia rehmanii ve Lippia citriodora ( 30). Diğer antifungal ajanlarla ilgili olarak önceki çalışmalarda bildirilen komplikasyonlara rağmen, L. citriodora yaprak ekstresi kullanımından sonra hiçbir yan etki bildirilmemiştir ; aksine genel sağlık üzerindeki olumlu koruyucu etkileri gösterilmiştir ( 7 , 10 , 11 , 16 , 30 , 31 ).
Şuraya gidin: 5. Sonuçlar
Mevcut çalışmanın sonuçları , L. citriodora'nın yapraklarının sulu özütünün ve özellikle etanolik özütün, C. albicans'a karşı aktiviteye sahip olduğunu göstermiştir; bu , özler ve polifenoller dahil olmak üzere aromatik ajanların daha yüksek içeriğine atfedilebilir. etanolik sulu ekstrakt ile karşılaştırıldığında ekstre. Bu özütün, değerlendirildikten sonra gönüllülere C. albicans'a karşı bir ajan olarak kullanılması önerilebilir .
Şuraya gidin: Teşekkürler
Bu çalışma, Faranak Shafiee tarafından yürütülen lisansüstü araştırmaya dayanmaktadır. Yazarlar, Babol Tıp Bilimleri Üniversitesi Araştırma Merkezi'nin mali desteğini takdir ettiler (hibe numarası 9339423). Ayrıca bazı pratik çalışmalar sağladığı için Bayan Maryamosadat Shafiee'ye teşekkür ederiz.
Şuraya gidin: Dipnotlar
iThenticate taraması: 28 Şubat 2016, İngilizce düzenleme: 17 Mayıs 2016, Kalite kontrol: 02 Ağustos 2016
Çıkar çatışması:
Beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yazar katkıları:
Tüm yazarlar bu projeye ve makaleye eşit katkıda bulundu. Tüm yazarlar makalenin son halini okudu ve onayladı.
Şuraya gidin: Referanslar
1. Neville BW, Damm OD, Allen CM, Bouquot JE. Ağız Diş ve Çene Patolojisi. 3. baskı. ch6. Elsevier Sunders; 2009. s. 213–8. [ Google Scholar ]
2. Williams D, Lewis M. Oral kandidozun patogenezi ve tedavisi. J Oral Mikrobiyal. 2011; 3 (10): 3402–7. doi: 10.3402 / jom.v3i0.5771. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
3. Raja M, Hannan A, Ali K. Çocuklarda diş çürüğü olan oral kandida taşıma derneği. Caries Res. 2010; 44 (3): 272–6. doi: 10.1159 / 000314675. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Silva DS, Cavalho FC, Hebling J. Streptococci mutantlarının ve candida spp. Çürük dişlerin diş plağı / dentininde ve erken çocukluk çürüklerinde. Caries Res. 2006; 51 (11): 1024–8. doi: 10.1016 / j.archoralbio.2006.06.001. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Pina-Vaz C, Rodrigues AG, Pinto E, Costa-de-oliveira S, Tavares C, Salgueiro L, vd. Timus yağlarının ve ana bileşenlerinin antifungal aktivitesi. J Eur Acad Dermatol. 2004; 18 (1): 73–8. doi: 10.1111 / j.1468-3083.2004.00886.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Zarei Mahmoudabadi A. Antifungal ilaçlar. İlk ed. Ahvaz: Tıp Bilimleri Üniversitesi Ahvaz Pub; 2002. Farsça. [ Google Scholar ]
7. Abderrahim F, Estrella S, Susin C, Arribas SM, González MC, Condezo-Hoyos L. Limon mineçiçeği infüzyonunun antioksidan aktivitesi ve stabilitesi. J Med Food. 2011; 14 (5): 517–27. doi: 10.1089 / jmf.2010.0102. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Mothana RAA, Abdo SA, Hasson S, Althawab FM, Alaghbari SA, Lindequist U. Antimikrobiyal, antioksidan ve sitotoksik aktiviteler ve bazı Yemenli tıbbi bitkilerin fitokimyasal taraması. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternat Med. 2010; 7 (3): 323–30. doi: 10.1093 / ecam / nen004. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Chavallier A. Şifalı bitkiler Ansiklopedisi, Dorling Kinderseley London: 1996. 227 [ Google Scholar ]
10. Santos G, fernandes F. Mine çiçekleri ve yapraklarından elde edilen uçucu yağların bileşimi. J Essent Oil Res. 2005; 17 (1): 73–7. doi: 10.1080 / 10412905.2005.9698835. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Pastorelli G, Rossi R, Corino C. Lippia citriodora verbacoside'in domuz yavrularında büyüme performansı, antioksidan durumu ve serum immünoglobulin içeriği üzerindeki etkisi. Çekçe J Anim Sci. 2012; (7): 312–22. [ Google Scholar ]
12. Valentão P, Fernandes E, Carvalho F, Andrade PB, Seabra RM, de Lourdes Basto M. Lippia citriodora infüzyonunun antioksidan aktivitesi üzerine çalışmalar: süperoksit radikali, hidroksil radikali ve hipokloröz asit üzerindeki temizleme etkisi. Biol Pharm Bull. 2002; 25 : 1324–7. doi: 10.1248 / bpb.25.1324. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Cushnie TPT, Kuzu AJ. Flavonoidlerin antimikrobiyal aktivitesi. Int J antimikrobiyal ajanlar. 2005; 26 (5): 343–56. doi: 10.1093 / ecam / nen004. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Koohsari H, Ghaemi EA, sheshpoli M, Sadegh A. Limon mineçiçeği yapraklarının antibakteriyel aktivitesinin değerlendirilmesi. Ann Bio Res. 2013; 4 (10): 52–5. [ Google Scholar ]
15. Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüleri. Mayaların Et Suyu Seyreltme Antifungal Duyarlılık Testi için Referans Yöntemi. (Onaylı Standart-Üçüncü Baskı) 2008; 28 (14) M27-A3. [ Google Scholar ]
16. Valentao P, Fernandes E, Carvalho H. Lippiacitriodora infüzyonunun antioksidan aktivitesi üzerine çalışmalar: süperoksit radikali, hidroksil radikali ve hipoklorus asit üzerindeki süpürücü etkiler. Biol Pharm Bull. 2002; 25 (10): 1324–1327. doi: 10.1248 / bpb.25.1320. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Choupani M, Arabsha S, Delouee I, Alami M. Limon Mine Çiçeği (Lippia Citriodora) Yapraklarının Çeşitli Solvent Ekstraktlarının Antioksidan Özellikleri. Int j Advan Biol ve Biomed Res. 2014; 2 (4): 1340–6. [ Google Scholar ]
18. Carnat A, Carnat AP, Chavignon O, Heitz A, Wylde R, Lamaison JL. Aloysiatriphylla ve Verbena officinalis'in başlıca flavonoid bileşiği olan Luteolin 7-diglucuronid. Planta Med. 1995; 61 (5): 490–1. doi: 10.1055 / s-2006-958152. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Marzuk Z, Marzuk B, chraief I, Boukef K. Monastir'den Tunus Menthapulegium L. yağlarının analizi. SIPAM. 2006 [ Google Scholar ]
20. Oskay M, Usame Tamer A, Güngör AY, Sarı D, Aktaş K. Lippia triphylla O. Kuntze (Verbenaceae) Yapraklarının Bakteri ve Mayalara Karşı Antimikrobiyal Aktivitesi. J Biol Scien J. 2005; 5 (5): 620–2. doi: 10.3923 / jbs.2005.620.622. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Cowan MM. Antimikrobiyal ajanlar olarak bitki ürünleri. Clinical Microbiol Rev. 1999; 12 : 564–82. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
22. Lozada BS, Viviana Herrera L, Perea JA, Stanshenko E, Escobar P. Üç Lippia türünün uçucu yağlarının kakao moniliazisine neden olan Moniliophthora roreri (Cif. Ve Par.) Üzerindeki in vitro etkisi. Acta Agron. 2012; 61 (2): 94–102. [ Google Scholar ]
23. Ohno T, Kita M, Yamaoka Y, Imamura S, Yamamoto T, Mitsufuji S, vd. Uçucu yağların Helicobacter pylori'ye karşı antimikrobiyal aktivitesi. Helicobacter. 2003; 8 : 207–15. doi: 10.1046 / j.1523-5378.2003.00146.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Ramzi AA, Mothana Salah AA, Abdo Sidgi H, Faisal MN, Althawab Sama AZ. Antimikrobiyal, Antioksidan ve Sitotoksik Aktiviteler ve bazı Yemen şifalı bitkilerinin fitokimyasal taraması. Act Screen Yemeni Med Plant. 2010; 7 (3): 323–30. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
25. Ansari M, Laricani K, Tehrani MS. Lippa citriodora bitki özünün MRSA Staphylococcus aureaus'a karşı antibakteriyel aktivitesi. AJMR. 2012; 6 : 16–9. [ Google Scholar ]
26. Tatsadjieu NL, Jazet Dongmo PM, Nagssoum MB, Etoac FX, Mbofung CMF. Kamerun'dan Lippiarugosa'nın uçucu yağı, Aspergillus flavus ex Fries'e karşı antifungal ajan olarak potansiyel kullanımı için araştırmalar. Gıda Kontrolü. 2009; 20 (2): 161–6. doi: 10.1016 / j.foodcont.2008.03.008. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Correa-Royero J, Tangarife V, Duran C. Invitro antifungal aktivitesi ve tıbbi ve aromatik bitki özlerinin ve uçucu yağların Candida Krusei ve Aspergillus fumigatus'a karşı sitotoksik etkisi. Braz J Pharm. 2009; 20 (5): 734–41. [ Google Scholar ]
28. Oliveira DR, Leitao GG, Bizzo HR, Lopes D, Alviano DS, Alviano CS, Leitao SG. Lippia origanoides HBK Food Chemistry uçucu yağının kimyasal ve antimikrobiyal analizleri . 2007; 101 : 236–240. doi: 10.1016 / j.foodchem.2006.01.022. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Viollon C, Chaumont JP. Cryptococcus neoformans üzerindeki uçucu yağların ve ana bileşenlerinin antifungal özellikleri. Mikopatoloji. 1994; 128 : 151–3. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
30. Pascual ME, Slowing K, Carretero E, Sanchez D, Mata D, Villar A. Lippia: geleneksel kullanımlar, kimya ve farmakoloji: bir inceleme. J Ethnopharmacol. 2001; 76 : 201–14. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
31. Santoro A, Bianco G, Picerno P, Aquino RP, Autore G, Marzocco S, vd. Verminosid ve Verbacoside kaynaklı genotoksisite, insan lenfositleri üzerinde: PARP1 ve P53 proteinlerinin dahil edilmesi. Toxicolo izin ver. 2008; 178 (2): 71–6. doi: 10.1016 / j.toxlet 2008.02.006. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
Maryam Ghasempour , 1 Saeid Mahdavi Omran , 2 Ali Akbar Moghadamnia , 3 ve Faranak Shafiee 4
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk reddi
Bu makale PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır .
Şuraya gidin: Öz
Giriş
Yaygın antifungal ilaç aktivitesine karşı direnç ve yan etkiler nedeniyle, antifungal aktiviteye sahip bitkisel maddeler üzerinde araştırmalar sıktır. Limon mineçiçeği (Lippia citriodora) , Verbenaceae ailesinin bir üyesidir . Bu çalışmanın amacı, limon mineçiçeği yapraklarının etanolik ve sulu özlerinin anti-kandida aktivitelerini belirlemek ve bunları nistatin ve flukonazol ile karşılaştırmaktır . Yöntemler
Bu 2015 çalışmasında, 15 klinik izolat ve standart candida albicans PTCC 5027 suşu kullanılmış ve etanolik ve sulu ekstraktlar olan Nistatin ve Flukonazol'ün inhibitör etkileri disk ve kuyu difüzyon yöntemleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Ayrıca minimum inhibitör konsantrasyon (MIC) belirlendi. Disk ve kuyu difüzyon yöntemlerinde beş konsantrasyon sulu ve etanolik ekstrakt (156–2500 μg / ml), Nistatin (8-128 μg / ml) ve Flukonazol (4-64 μg / ml) ve dokuz konsantrasyonda sulu ve etanolik özler (19–5000 μg / ml), NistatinMİK için (0,5–128 μg / ml) ve Flukonazol (0,25–64 μg / ml) uygulandı. Veriler, Tukey'in post-hoc ve tek yönlü ANOVA testleri kullanılarak analiz edildi. Bu çalışmada anlamlı düzey p <0,05 olarak kabul edilmiştir. Sonuçlar
Kuyu ve disk difüzyon tekniklerinde, farklı etanolik ekstrakt konsantrasyonlarında bazı klinik izolatlar etrafında sınırlı büyüme inhibisyonu haleleri üretildi ; bununla birlikte, sulu ekstraktın herhangi bir konsantrasyonunda büyümeyi engelleyici halo gözlenmedi. Klinik izole ve standart suş için etanolik ekstrakt, sulu ekstrakt, Nistatin ve Flukonazol'ün MIC değerleri 833 ± 78.5 ve 625μg / ml idi; 4156 ± 67,4 ve 2500 μg / ml; 10.13 ± 1.91 ve 4 μg / ml; ve sırasıyla 1,97 ± 0,25 ve 1 μg / ml. Sonuç
Sonuçlar, etanolik özütün, bu bitkinin ilaçlara alternatif olarak kullanılabilen sulu özünden daha güçlü olduğunu gösterdi . Bu bitkinin etanolik özütünün etkinliği ve özelliklerinin daha iyi değerlendirilmesi için in vivo araştırılması tavsiye edilir.
Anahtar Kelimeler: Anti-Candida albicans aktivitesi, Lippia citriodora, Ethanolic ve Aqeoues ekstreleri, Nystatin, Fluconazole
Şuraya gidin: 1. Giriş
Oral kandidiyaz, ağız boşluğunu etkileyen çeşitli klinik belirtilere sahip en yaygın fırsatçı enfeksiyonlardan biridir. Önceki çalışmalara göre, Candida albicans bu durum için en sık görülen etiyolojik ajandır ( 1 , 2 ). Araştırmalar, çocuklarda Candida kolonileri ile çocukluk çağındaki erken çürük lezyonlar arasında önemli bir ilişki olduğunu göstermiştir ( 3 , 4 ). Polienler ( nistatin ) ve azoller (flukonazol), kandidiyazis tedavisinde en yaygın olarak kullanılan lokal ajanlardır; ancak, dirençli Candida türlerinin varlığı, toksisite ve yetersiz biyoyararlanım nedeniyle, bu ajanların sadece küçük bir kısmı terapötik olarak etkilidir ( 5). Son yıllarda bitki türevleri büyük ilgi gördü ( 6 ). Mükemmel terapötik özelliklere sahip bu bitkilerden biri , Verbena ailesinden Lippia citriodora'dır . Bitki Kuzey Amerika'ya özgüdür; ancak yararlı özellikleri nedeniyle bazı Avrupa ülkelerinde ve İran'da sera koşullarında ılıman hava koşullarına sahip bölgelerde (kuzey bölgeler) ekilmiştir ( 7 ). Bu bitkinin yaprakları, geleneksel çayı hazırlamak için kullanılan aromatik bileşenlere sahiptir. L. citriodora güvenli bitkilerden biri olarak listelenmiştir ve alkollü ve geleneksel çay formlarının kullanımı güvenli kabul edilmiştir ( 8 ). Sitral ( geranial, neral), geraniol , limonen ve cineol, L. citriodora ( 9 ) özütünün ana bileşenleridir . Bu bitki geleneksel tıpta astım, spazmlar, soğuk algınlığı, kolik, ishal, emilim bozukluğu ve anksiyete tedavisinde kullanılmaktadır ( 10 ). Özü ve yaprak ekstraktından izole biyolojik aktivite ve malzemeyi değerlendirilmesi L. citriodora onun bir sonucu olarak bir anti-oksidan, bir anti-mikrobiyal, anti-enflamatuar ve anti-mantar aktiviteleri ve analjezik etkiler gösterdi fenolik asit , flavonoid , ve terpenoid bileşikler. L. citriodora'nın uçucu yağlarıoksidatif stres nedeniyle hücresel lizizi azaltır ve nöronal bozulmaya yol açan durumlar için iyi bir adaydır ( 8 , 10 - 13 ). Bu çalışmanın amacı, L. citriodora yapraklarının sulu ve etanolik ekstraktlarının , hastaların dil sırtından izole edilen Candida albicans ve kültür ortamındaki standart suş üzerindeki inhibitör etkisini belirlemektir .
Şuraya gidin: 2. Gereç ve Yöntemler
2.1. Çalışma tasarımı ve ayarı
Bu in vitro çalışmada, İran Endüstriyel Mikroorganizma Toplama Merkezi'nden temin edilen standart Candida albicans suşu (PTCC 5027) ve 15 C. albicans kullandık.Babol Tıp Bilimleri Üniversitesi Çocuk Diş Hekimliği Anabilim Dalı'na sevk edilen 4-12 yaş arası çocukların dil sırtından izole edilen örnekler. Dahil etme kriterleri, geçen ay boyunca anti-mikrobiyal gargaraların kullanılmaması ve anti-fungal ajanların, antihistaminiklerin ve kortikosteroidlerin kullanılmamasından ve> 4 çürük indeksinden oluşuyordu. formlar. Örnekler, kloramfenikol ile birlikte Sabouraud dekstroz agar plakalarında (Scharlau-Merck, Almanya) hemen kültürlendi. Mantar büyümesinden sonra, koloninin bir kısmı CHROMagar kültür ortamına (CHROMagar Candida, Paris, Fransa) aktarıldı. C. albicans türleri, CHROMagar besiyerinde üretilen renk ve serumda bir germ tüpünün oluşumu ve mısır unu agar medyanında veziküllerin üretilmesi (Himedia Laboratories, Ltd, Mumbai, Hindistan) artı% 1 Tween 80 ile doğrulanmıştır. Sabouraud Dextrose Agar with Chloramphenicol besiyerinde fizyolojik serum kullanılarak 48 saatlik maya kolonileri hazırlandı. Daha sonra disk placemat yöntemi ile kuyucuk tekniği kullanılarak standart 0.5 McFarland konsantrasyonu hazırlandı. Mayaların mikrodilüsyonları 5 × 10'da hazırlandı Disk placemat yöntemi ile kuyu tekniği kullanılarak 5 McFarland konsantrasyonu hazırlandı. Mayaların mikrodilüsyonları 5 × 10'da hazırlandı Disk placemat yöntemi ile kuyu tekniği kullanılarak 5 McFarland konsantrasyonu hazırlandı. Mayaların mikrodilüsyonları 5 × 10'da hazırlandı2 - 2.5 x 10 3 RPMI ortamı (Sigma-Aldrich, Almanya) kullanımı ile her bir çözeltiye ilave edildi. 2.2. L. citriodora'nın sulu ve etanolik yaprak ekstresinin hazırlanması
L. citrodora yaprakları Mayıs 2015'te Babol Tıp Bilimleri Üniversitesi Araştırma Bahçesinden toplanmış, durulanmış, oda sıcaklığında 27 saat kurutulmuş ve öğütülmüştür. Sulu özü hazırlamak için, yaprakların 30 g kuru tozu, önceden kaynatılmış olan 70-80 ° C'de 100 mL su ile karıştırıldı ve 24 saat oda sıcaklığında saklandı. Elde edilen öz, Whatman filtre kağıtlarından (Whatman No. 1) süzüldü ve kurutma için 40-50 ° C'de bir fırına yerleştirildi. Malzemenin kuru ağırlığı belirlendi. Bu özüt, L. citriodora'nın sulu özütü olarak kabul edildi . Etanolik hazırlamak içinözü, 75 g kuru malzeme ve 250 mL% 95 susuz etanol bir beher içine döküldü ve 48 saat sonra elde edilen çözelti No. 1 Whatman kağıt filtrelerinden süzüldü ve bir vakumlu makinede kurutuldu. Kuru etanolik ekstrakt tartıldı. Bu özüt, kuru etanolik özüt olarak kabul edildi . 2.3. Disk difüzyon tekniği kullanılarak antifungal aktivitenin değerlendirilmesi
Steril kağıt diskler, 156–2500 μg / mL sulu (suda çözülmüş) ve etanolik (dimetil sülfoksit , DMSO'da çözülmüş ) özütleri, 4-64 μg / mL flukonazol (suda çözülmüş) nihai konsantrasyonlarına daldırıldı ve 8-128 μg / mL nistatin ( dimetil sülfoksit , DMSO içinde çözülmüş ) ve sonra kurutulur. Steril fizyolojik serum içinde C. albicans'tan hazırlanan süspansiyon , steril bir çubuk kullanılarak Sc ortamı içeren bir plakaya yayıldı. Farklı konsantrasyonlarda L. citriodora , nistatin sulu ve etanolik ekstraktlarını içeren beş diskve flukonazol her plakaya ayrı ayrı yerleştirildi. Diskler, plaka kenarından 15 mm ve bitişik diskin merkezinden 24 mm mesafeye yerleştirildi. Hazırlığı olmayan bir disk ve% 0.2 DMSO içeren bir disk, negatif kontroller olarak kabul edildi. Daha sonra, her diskin etrafındaki şeffaf hale çapı ölçüldü. Halo çapları 2 mm antifungal aktiviteye işaret etti ( 14 ). Tüm plakalar iki kopya halinde hazırlandı ve 37 ° C'de 48 saat inkübe edildi. 2.4. Kuyu tekniği kullanılarak antifungal aktivitenin değerlendirilmesi
Steril fizyolojik serum içinde C. albicans'tan hazırlanan süspansiyon , bir steril sürüntü kullanılarak kloramfenikol ile birlikte Sabouraud dekstroz agar kültür ortamı içeren bir plakaya aşılanmıştır . İki saat sonra içinde 6 mm çapında oyuklar hazırlandı. Çukurlara farklı konsantrasyonlarda sulu özüt (suda çözülmüş), etanolik özüt (DMSO içinde çözülmüş), flukonazol (suda çözülmüş) ve nistatin (DMSO içinde çözülmüş) eklenmiştir. Tüm plakalar iki kopya halinde hazırlandı ve 37 ° C'de 48 saat inkübe edildi. 2.5. Minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) belirlemek için mikrodilüsyon
MİK, ilacın inhibe edici ve öldürücü etkisini belirlemek için CLSI-M27-A3 (Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü) standart tekniği kullanılarak belirlendi ( 15 ). 19–5000 μg / mL, 0,25–64 μg / mL flukonazol, 0,5–128 μg / mL nistatin nihai konsantrasyonlarında, steril 96'da toplam 100 μL hacimde dokuz farklı ekstrakt konsantrasyonları iki kez hazırlandı 96 -100 μL RPMI içeren düz tabanlı iyi ELISA plakaları. Daha sonra, 5 konsantrasyonlarda mantar süspansiyonu x 10 2 - 2.5 x 10 3plakalara 100 uL hacimde maya hücreleri / mL eklenmiştir. Tüm plakalar iki kopya halinde hazırlandı ve 35 ° C'de 48 saat inkübe edildi. Pozitif ve negatif kontroller ve DMSO solüsyonu da dikkate alındı. 2.6. istatistiksel analiz
Veriler, SPSS 18 yazılımı kullanılarak Tukey'in post hoc ve Tek Yönlü ANOVA testleri kullanılarak analiz edildi ve ortalama ± ortalamanın standart hatası (SEM) olarak ifade edildi. Limon mineçiçeği etanolik ve sulu özlerinden elde edilen veriler , kontrol grubu flukonazol ve nistatin bulguları ile karşılaştırıldı ve p <0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Şuraya gidin: 3. Sonuçlar
Mevcut in vitro çalışmada, örnekler, sırasıyla 5,5 ve 8,6 ortalama DMFT skoru ile 4-6 yaş grubundan 10 kişi ve 7-12 yaş grubundan 12 kişi olmak üzere 22 gönüllüden toplanmıştır. Kültüre alınan 22 numuneden ikisi C. albicans numunesi değildi ve beş numunede mantar üremesine rastlanmadı. 15 CHROMagar kültür ortamında yeşil kolonilerin varlığı, C. albicans (Şekil 1). Ek olarak, tüm bu mikroorganizmalar mısır unu agarında germ tüpleri ve veziküller ( klamydoconidium ) ve 13 tabakta% 1 Tween 80 (şekil 2). Bu çalışmada, L. citiodora yapraklarının farklı konsantrasyonlardaki sulu ve etanolik ekstraktlarının C. albicans'a karşı anti-fungal aktiviteleri, nistatin ve flukonazole kıyasla disk difüzyon, kuyu ve mikrodilüsyon teknikleri kullanılarak değerlendirilmiştir .
Ayrı bir pencerede aç
Şekil 1
C. albicans büyümesini gösteren CHROMagar kültür ortamı
Ayrı bir pencerede aç
şekil 2
Mısır unu agarındaki Chlamydoconidium
Kuyucuk ve disk difüzyon tekniklerinde, klinik olarak izole edilmiş birkaç lekenin çevresinde küçük büyüme inhibe edici haleler gözlendi; bununla birlikte, standart suşların çevresinde hiçbir inhibitör halo gözlenmedi. Ek olarak, sulu özüt, disk difüzyonunda ve kuyu tekniklerinde hiçbir engelleyici halo sergilemedi. Nistatin içeren disklerle (izole edilmiş ve standart lekeler etrafında minimum konsantrasyon 8 μg / mL) büyüme inhibe edici halelerin çapları 0.53 ± 0.53 ve 0; klinik olarak izole edilmiş ve standart boyalar etrafında 128 μg / mL konsantrasyonda büyüme inhibe edici halelerin maksimum çapları doza bağlı bir şekilde 16.13 ± 0.44 ve 17'ye yükselmiştir. Ek olarak, minimum nistatin ile kuyu tekniğinde aynı sırada büyüme inhibe edici halelerkonsantrasyon 0.535 ± 0.55 ve 0 idi ve maksimum konsantrasyonda 17.8 ± 0.59 ve 17 idi. 0.55 ve 0 ve kuyu tekniğinde 0 ve 0 idi. Maksimum konsantrasyonda (64 μg / mL) çaplar sırasıyla 15.53 ± 1.28 ve 17 ve 17.33 ± 0.36 ve 18 idi. MIC'ler şu şekilde sunulur:tablo 1. MIC sonuçları , L. citriodora'nın etanolik özütünün sulu özütüne göre daha yüksek bir önleyici etki gösterdi . Ek olarak, standart suş, değerlendirilen konsantrasyonlarda klinik olarak izole edilmiş C. albicans suşlarından daha yüksek hassasiyet sergilemiştir. Sulu ekstraktı içeren disklerde ve kuyucuklarda büyüme inhibe edici haleler tespit edilmemesine rağmen, MIC tekniğinde, klinik ve standart suşlar için büyüme inhibisyonları sırasıyla 833 ± 78.5 ve 2500 μg / mL idi. Etanolik ekstraktın MIC değeri, izole edilmiş ve standart suşlar için sırasıyla 833 ± 78.5 ve 625 μg / mL idi, bu da etanolik ekstrakt için sulu ekstrakttan daha yüksek inhibitör potansiyeli gösterdi (p = 0). Ek olarak, MICKlinik ve standart suşlar için nistatin sırasıyla 10.13 ± 1.91 ve 4, flukonazol için sırasıyla 1.97 ± 0.25 ve 1 μg / mL idi. L. citriodora'nın etanolik özütünün MIC'si , nistatin ve flukonazolünkinden daha yüksek olmasına rağmen (p = 0), bu özüt, anti-fungal aktivite sergilemiştir. tablo 1
Lippia citriodora , Nystatin ve Fluconazol e'nin sulu ve etanolik ekstraktlarının Candida albicans'a karşı minimum inhibitör konsantrasyonunun (MIC) ortalamaları ve standart sapması
| Sulu | 19–5000 | 4156 ± 67.4 | 2500 |
| Etanolik | 19–5000 | 833 ± 78.5 | 625 |
| Nistatin | 0,5–128 | 10.13 ± 1.91 | 4 |
| Flukonazol | 0.25 - 64 | 1.97 ± 0.25 | 1 |
Bu çalışma , L. citriodora yapraklarının sulu ve etanolik ekstraktlarının C. albicans üzerindeki anti-fungal etkilerini değerlendirdi . Sonuçlar, CHROMagar kültür ortamında bu mantar türlerinin 15 kolonisinin yeşil renkte olduğunu gösterdi, bu da C. albicans varlığını gösterir . Ek olarak, bu kolonilerin tümü germ tüpleri üretti ve 13 suş , mısır unu agar ortamında veziküller ( Chlamydoconidium ) üretti . Önceki bir çalışma, L. citriodora'nın yaprak özütünün anti-oksidatif aktivitesini gösterdi. Ek olarak, L. citriodora yapraklarının anti-mikrobiyal ve anti-fungal özellikleri, yapraklardaki aromatik ve polifenolik bileşiklere atfedilmiştir (16 - 18 ). Bu çalışmada, L. citriodora yapraklarının sulu ve etanolik ekstraktlarının etkileri disk difüzyon, kuyu difüzyon ve MIC teknikleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Kuyu ve disk difüzyon tekniklerinde, farklı etanolik konsantrasyonlarda bazı klinik izolatlar etrafında sınırlı büyüme inhibisyon haleleri üretildi.Ayıkla; bununla birlikte, sulu ekstraktın herhangi bir konsantrasyonunda büyümeyi önleyici hiçbir hale gözlenmedi. Ekstraktı içeren disklerin etrafında büyümeyi engelleyici halelerin olmaması, bu çalışmada, önceki çalışmalara kıyasla daha düşük bir ekstrakt konsantrasyonu kullanıldığı gerçeğine bağlanabilir. Ek olarak, kuyu ve disk difüzyon tekniğindeki etkili materyal yavaş yavaş çevreye yayıldığından ve büyüyen kolonilerin sınırlarını etkilediğinden, söz konusu mantar türleri, savunma mekanizmalarını kullanarak materyalin toksisitesine karşı koyma fırsatı buldu. uygun teknik; bununla birlikte, mikro-seyreltme tekniğinde, ekstraktın kültür ortamı ile karıştırılması, çevrenin tüm alanlarında etkili malzemenin mevcudiyetiyle sonuçlanmıştır. Bu nedenle,19 ). MIC etanolik özü, bu çalışmada, klinik olarak izole edilmiş ve standart suşlar daha gösterdi Oskay, bir 2005 çalışmada daha düşük, sırasıyla 833 ± 78.5 ve 625 ug / mL, olduğu MIC metanolik ekstresi ve L. citriodora yapraklar C. albicans 6 mg / ml oldu ( 20 ). Bu çalışmada, inhibisyon, Oskay'ın çalışmasındakinden daha düşük bir konsantrasyonda meydana geldi; bu, ekstraktta daha yüksek polifenol ve aromatik bileşik seviyelerine atfedilebilir ( 13 , 17). Mevcut çalışmada, klinik olarak izole edilmiş ve standart suşlara sahip sulu özütlerin MIC'leri sırasıyla 4156 ± 67.4 ve 2500 ug / mL idi ve bu, sulu özütün etanolik özütten daha düşük bir inhibitör potansiyeline işaret etti . Koohsari ile 2013 çalışmada, sulu ve antibakteriyel etkisi etanolik ekstreleri L. citriodora diski difüzyon ve iyi bilinen teknikler kullanılarak dokuz patojenik türleri üzerinde 125-1000 mg / ml konsantrasyonlarda değerlendirildi. Sonuçlar, etanolik özütün bir antibakteriyel etki sergilediğini gösterdi ; bununla birlikte sulu ekstraktın patojenik türler üzerinde hiçbir inhibitör etkisi yoktu. Sonuçlar göstermiştir ki E. faecalis , S. epidermidisve S. aureus gram pozitif bakteriler arasında en duyarlı bakterilerdi ve Y. enterocolitica en dirençli gram negatif bakteri türüydü ( 14 ). Çoğu bitki özütü, anti-mikrobiyal özelliklere sahiptir ve doymuş organik veya aromatik bileşiklerden oluşur. Çoğu durumda, etanolik veya metanolik çözücüler ilk ekstraksiyonları için kullanılır ve tipik olarak çalışmaların çoğunda bitki türevlerinin ekstraksiyonu için su kullanımından kaçınılır ( 21). Bitki özütlerindeki fenolik bileşenlerin varlığı, anti-mikrobiyal etkilerinin ana nedenlerinden biri olduğundan, sulu özütte çok az miktarda fenolik bileşik bulunmasının, düşük antimikrobiyal etkisinin nedeni olması mümkündür. bu özü ( 17 ). Lozado Her 2012 çalışmada elde edilen uçucu yağların etkileri değerlendirildi L. citriodora ve L. origanoid büyüme inhibisyonu Moniliophthora roreri (ve sonuç 600-1000 ug / mL konsantrasyonlarda mantar büyümesi tam olarak önlendiğini gösterdi 22 ) . L. citriodora'nın uçucu yağlarıyla ilgili gözlemler, H. pylori'ye karşı yüksek antibakteriyel aktivitesini göstermiştir.( 23 ). Ramzi tarafından yapılan bir 2010 çalışması, L. citriodora ekstresinin gram pozitif bakteriler üzerinde inhibe edici bir etkiye sahip olduğunu , ancak Candida maltosa üzerinde hiçbir etkisi olmadığını gösterdi ( 24 ). 2012 yılında Ansari, metisiline dirençli S. aureus suşuna karşı MİK belirlemek için disk difüzyon tekniğini kullanarak 1/2, 1/4, 1/8 ve 1/16 konsantrasyonlarında 100 μl L. citriodora ekstresi içeren bir çalışma yürütmüştür . Sonuçlar, inhibitör etkinin, özüt konsantrasyonundaki 55 μg / mL'ye kadar artışla arttığını gösterdi. Ek olarak, MIC 15 μg / mL olarak belirlendi ve sonuçlar, hücrelere karşı çok düşük toksisiteye rağmen metisiline dirençli S. aureus'a karşı yüksek bir anti-mikrobiyal aktivite gösterdi (25 ). Ekstraktın antibakteriyel aktivitesi, kimyasal yapısında alkaloidlerin, flavonoidlerin ve tanenin varlığına bağlanabilir ( 23 ). Tatsadjieu antifungal aktivitesi değerlendirildi Lippia rugosa yaprakları ve gösterdi geraniyol , neral , ve geranial ekstraktta karşı mantarlarla mücadele etkinlikleri bakımından sorumlu ajanlar olarak Aspergillus flavus ( 26 ). Royaro tarafından 2009 yılında yapılan bir araştırma, L. citriodora yapraklarının ekstraktının sırasıyla C. krusei ve Aspergillus fumigatus'a karşı 99.21 ve 65.5 μg / mL'lik inhibitör konsantrasyonlarda en yüksek anti-fungal aktiviteyi sergilediğini göstermiştir ( 22). Lozada'nın tarafından 2012 yılında bir çalışma, temel yağlar gösterdi L. citriodora ve L. origanoid 200 ug / mL bir konsantrasyonda mantar büyümesinin% 90 inhibisyonu ile sonuçlanmıştır; ancak 800-1000 μg / mL aralığındaki konsantrasyonlarda% 100 inhibisyon sağlandı ( 27 ). 2007 yılında Oliviera tarafından damla difüzyon tekniği kullanılarak L. origanoid'in antibakteriyel aktivitesi üzerine yapılan bir çalışmada , S. aureus ve C. albicans dahil olmak üzere gram pozitif mikroorganizmalar üzerindeki inhibitör etkileri gösterilmiştir ( 28 ). 1994'te Villon ve Chaumont tarafından yapılan bir araştırma, Lippia multiflora ve Lippia chevalieri'nin antifungal aktivitesini gösterdi.Aspergillus flavus'a karşı ekstreler . Bu rapor trepenoids özellikle, sitral ve geraniyol L. ekstre içinde mevcut olduğu citriodora , anti-mantar aktivitesi (sorumlu 29 ). Başka anti-mantar maddeler , beta-karyofilen ve beta-karyofılen ait oksit cisquiterpens ve bitki ekstreleri içinde bulunan Lippia rehmanii ve Lippia citriodora ( 30). Diğer antifungal ajanlarla ilgili olarak önceki çalışmalarda bildirilen komplikasyonlara rağmen, L. citriodora yaprak ekstresi kullanımından sonra hiçbir yan etki bildirilmemiştir ; aksine genel sağlık üzerindeki olumlu koruyucu etkileri gösterilmiştir ( 7 , 10 , 11 , 16 , 30 , 31 ).
Şuraya gidin: 5. Sonuçlar
Mevcut çalışmanın sonuçları , L. citriodora'nın yapraklarının sulu özütünün ve özellikle etanolik özütün, C. albicans'a karşı aktiviteye sahip olduğunu göstermiştir; bu , özler ve polifenoller dahil olmak üzere aromatik ajanların daha yüksek içeriğine atfedilebilir. etanolik sulu ekstrakt ile karşılaştırıldığında ekstre. Bu özütün, değerlendirildikten sonra gönüllülere C. albicans'a karşı bir ajan olarak kullanılması önerilebilir .
Şuraya gidin: Teşekkürler
Bu çalışma, Faranak Shafiee tarafından yürütülen lisansüstü araştırmaya dayanmaktadır. Yazarlar, Babol Tıp Bilimleri Üniversitesi Araştırma Merkezi'nin mali desteğini takdir ettiler (hibe numarası 9339423). Ayrıca bazı pratik çalışmalar sağladığı için Bayan Maryamosadat Shafiee'ye teşekkür ederiz.
Şuraya gidin: Dipnotlar
iThenticate taraması: 28 Şubat 2016, İngilizce düzenleme: 17 Mayıs 2016, Kalite kontrol: 02 Ağustos 2016
Çıkar çatışması:
Beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yazar katkıları:
Tüm yazarlar bu projeye ve makaleye eşit katkıda bulundu. Tüm yazarlar makalenin son halini okudu ve onayladı.
Şuraya gidin: Referanslar
1. Neville BW, Damm OD, Allen CM, Bouquot JE. Ağız Diş ve Çene Patolojisi. 3. baskı. ch6. Elsevier Sunders; 2009. s. 213–8. [ Google Scholar ]
2. Williams D, Lewis M. Oral kandidozun patogenezi ve tedavisi. J Oral Mikrobiyal. 2011; 3 (10): 3402–7. doi: 10.3402 / jom.v3i0.5771. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
3. Raja M, Hannan A, Ali K. Çocuklarda diş çürüğü olan oral kandida taşıma derneği. Caries Res. 2010; 44 (3): 272–6. doi: 10.1159 / 000314675. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
4. Silva DS, Cavalho FC, Hebling J. Streptococci mutantlarının ve candida spp. Çürük dişlerin diş plağı / dentininde ve erken çocukluk çürüklerinde. Caries Res. 2006; 51 (11): 1024–8. doi: 10.1016 / j.archoralbio.2006.06.001. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Pina-Vaz C, Rodrigues AG, Pinto E, Costa-de-oliveira S, Tavares C, Salgueiro L, vd. Timus yağlarının ve ana bileşenlerinin antifungal aktivitesi. J Eur Acad Dermatol. 2004; 18 (1): 73–8. doi: 10.1111 / j.1468-3083.2004.00886.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Zarei Mahmoudabadi A. Antifungal ilaçlar. İlk ed. Ahvaz: Tıp Bilimleri Üniversitesi Ahvaz Pub; 2002. Farsça. [ Google Scholar ]
7. Abderrahim F, Estrella S, Susin C, Arribas SM, González MC, Condezo-Hoyos L. Limon mineçiçeği infüzyonunun antioksidan aktivitesi ve stabilitesi. J Med Food. 2011; 14 (5): 517–27. doi: 10.1089 / jmf.2010.0102. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Mothana RAA, Abdo SA, Hasson S, Althawab FM, Alaghbari SA, Lindequist U. Antimikrobiyal, antioksidan ve sitotoksik aktiviteler ve bazı Yemenli tıbbi bitkilerin fitokimyasal taraması. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternat Med. 2010; 7 (3): 323–30. doi: 10.1093 / ecam / nen004. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
9. Chavallier A. Şifalı bitkiler Ansiklopedisi, Dorling Kinderseley London: 1996. 227 [ Google Scholar ]
10. Santos G, fernandes F. Mine çiçekleri ve yapraklarından elde edilen uçucu yağların bileşimi. J Essent Oil Res. 2005; 17 (1): 73–7. doi: 10.1080 / 10412905.2005.9698835. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
11. Pastorelli G, Rossi R, Corino C. Lippia citriodora verbacoside'in domuz yavrularında büyüme performansı, antioksidan durumu ve serum immünoglobulin içeriği üzerindeki etkisi. Çekçe J Anim Sci. 2012; (7): 312–22. [ Google Scholar ]
12. Valentão P, Fernandes E, Carvalho F, Andrade PB, Seabra RM, de Lourdes Basto M. Lippia citriodora infüzyonunun antioksidan aktivitesi üzerine çalışmalar: süperoksit radikali, hidroksil radikali ve hipokloröz asit üzerindeki temizleme etkisi. Biol Pharm Bull. 2002; 25 : 1324–7. doi: 10.1248 / bpb.25.1324. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Cushnie TPT, Kuzu AJ. Flavonoidlerin antimikrobiyal aktivitesi. Int J antimikrobiyal ajanlar. 2005; 26 (5): 343–56. doi: 10.1093 / ecam / nen004. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
14. Koohsari H, Ghaemi EA, sheshpoli M, Sadegh A. Limon mineçiçeği yapraklarının antibakteriyel aktivitesinin değerlendirilmesi. Ann Bio Res. 2013; 4 (10): 52–5. [ Google Scholar ]
15. Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüleri. Mayaların Et Suyu Seyreltme Antifungal Duyarlılık Testi için Referans Yöntemi. (Onaylı Standart-Üçüncü Baskı) 2008; 28 (14) M27-A3. [ Google Scholar ]
16. Valentao P, Fernandes E, Carvalho H. Lippiacitriodora infüzyonunun antioksidan aktivitesi üzerine çalışmalar: süperoksit radikali, hidroksil radikali ve hipoklorus asit üzerindeki süpürücü etkiler. Biol Pharm Bull. 2002; 25 (10): 1324–1327. doi: 10.1248 / bpb.25.1320. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Choupani M, Arabsha S, Delouee I, Alami M. Limon Mine Çiçeği (Lippia Citriodora) Yapraklarının Çeşitli Solvent Ekstraktlarının Antioksidan Özellikleri. Int j Advan Biol ve Biomed Res. 2014; 2 (4): 1340–6. [ Google Scholar ]
18. Carnat A, Carnat AP, Chavignon O, Heitz A, Wylde R, Lamaison JL. Aloysiatriphylla ve Verbena officinalis'in başlıca flavonoid bileşiği olan Luteolin 7-diglucuronid. Planta Med. 1995; 61 (5): 490–1. doi: 10.1055 / s-2006-958152. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Marzuk Z, Marzuk B, chraief I, Boukef K. Monastir'den Tunus Menthapulegium L. yağlarının analizi. SIPAM. 2006 [ Google Scholar ]
20. Oskay M, Usame Tamer A, Güngör AY, Sarı D, Aktaş K. Lippia triphylla O. Kuntze (Verbenaceae) Yapraklarının Bakteri ve Mayalara Karşı Antimikrobiyal Aktivitesi. J Biol Scien J. 2005; 5 (5): 620–2. doi: 10.3923 / jbs.2005.620.622. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
21. Cowan MM. Antimikrobiyal ajanlar olarak bitki ürünleri. Clinical Microbiol Rev. 1999; 12 : 564–82. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
22. Lozada BS, Viviana Herrera L, Perea JA, Stanshenko E, Escobar P. Üç Lippia türünün uçucu yağlarının kakao moniliazisine neden olan Moniliophthora roreri (Cif. Ve Par.) Üzerindeki in vitro etkisi. Acta Agron. 2012; 61 (2): 94–102. [ Google Scholar ]
23. Ohno T, Kita M, Yamaoka Y, Imamura S, Yamamoto T, Mitsufuji S, vd. Uçucu yağların Helicobacter pylori'ye karşı antimikrobiyal aktivitesi. Helicobacter. 2003; 8 : 207–15. doi: 10.1046 / j.1523-5378.2003.00146.x. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Ramzi AA, Mothana Salah AA, Abdo Sidgi H, Faisal MN, Althawab Sama AZ. Antimikrobiyal, Antioksidan ve Sitotoksik Aktiviteler ve bazı Yemen şifalı bitkilerinin fitokimyasal taraması. Act Screen Yemeni Med Plant. 2010; 7 (3): 323–30. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ Google Akademik ]
25. Ansari M, Laricani K, Tehrani MS. Lippa citriodora bitki özünün MRSA Staphylococcus aureaus'a karşı antibakteriyel aktivitesi. AJMR. 2012; 6 : 16–9. [ Google Scholar ]
26. Tatsadjieu NL, Jazet Dongmo PM, Nagssoum MB, Etoac FX, Mbofung CMF. Kamerun'dan Lippiarugosa'nın uçucu yağı, Aspergillus flavus ex Fries'e karşı antifungal ajan olarak potansiyel kullanımı için araştırmalar. Gıda Kontrolü. 2009; 20 (2): 161–6. doi: 10.1016 / j.foodcont.2008.03.008. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Correa-Royero J, Tangarife V, Duran C. Invitro antifungal aktivitesi ve tıbbi ve aromatik bitki özlerinin ve uçucu yağların Candida Krusei ve Aspergillus fumigatus'a karşı sitotoksik etkisi. Braz J Pharm. 2009; 20 (5): 734–41. [ Google Scholar ]
28. Oliveira DR, Leitao GG, Bizzo HR, Lopes D, Alviano DS, Alviano CS, Leitao SG. Lippia origanoides HBK Food Chemistry uçucu yağının kimyasal ve antimikrobiyal analizleri . 2007; 101 : 236–240. doi: 10.1016 / j.foodchem.2006.01.022. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
29. Viollon C, Chaumont JP. Cryptococcus neoformans üzerindeki uçucu yağların ve ana bileşenlerinin antifungal özellikleri. Mikopatoloji. 1994; 128 : 151–3. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
30. Pascual ME, Slowing K, Carretero E, Sanchez D, Mata D, Villar A. Lippia: geleneksel kullanımlar, kimya ve farmakoloji: bir inceleme. J Ethnopharmacol. 2001; 76 : 201–14. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
31. Santoro A, Bianco G, Picerno P, Aquino RP, Autore G, Marzocco S, vd. Verminosid ve Verbacoside kaynaklı genotoksisite, insan lenfositleri üzerinde: PARP1 ve P53 proteinlerinin dahil edilmesi. Toxicolo izin ver. 2008; 178 (2): 71–6. doi: 10.1016 / j.toxlet 2008.02.006. [ PubMed ] [ Google Akademik ]