Cedrus Libani'den izole edilen 2-Himachelen-7-ol'ün Antikanser ve Antiinflamatuar Aktivitelerinin In Vitro ve In Vivo Değerlendirilmesi
Andree Elias , 1 Wassim N. Shebaby , 1 Bilal Nehme , 1 Wissam Faour , 2 Bassem S. Bassil , 3 Joelle El Hakim , 1 Rita Iskandar , 1 Nahia Dib-Jalbout , 1 Mohamad Mroueh , 4 Costantine Daher , 1 ve Robin I Tablo 1
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır . İlişkili Veriler
Soyut
Cedrus libani , Lübnan, Suriye ve Türkiye'nin Akdeniz dağlarına özgü görkemli, yaprak dökmeyen bir ağaçtır. Bu çalışmada, koyu renkli bir yağ olarak C. libani yağı özü (CLOE) üretmek için ağaç öz odunu heksan kullanılarak ekstrakte edildi. CLOE'nin GCMS analizi, 2-himachalen-7-ol (7-HC)'nin en bol (%40) olduğu 30'a kadar bileşik tanımladı. 7-HC, kolon kromatografisi kullanılarak izole edildi ve beyaz kristalli katının kimliği, NMR spektroskopisi ve X-Işını Kristallografisi ile doğrulandı. 7-HC beyin (SF-268, IC de dahil olmak üzere çeşitli insan kanser hücre çizgilerine karşı güçlü sitotoksik aktivite gösterdi 50 (HT-29, Ic 8.1 ug / mL) ve kolon 50 10.1 ug / mL, Caco-2 IC 50 9.9 ug / mL) yumurtalıklı (Sk-OV-3, IC 50 > 50 μg/mL) hücreler en dirençli olanlardır. Bununla birlikte, HT-29, Cisplatin'e direnç gösterirken, 7-HC, 8-10 kat daha güçlüydü. 7-HC ve Cisplatin ile birlikte tedavi, SF-268, HT-29 ve Caco-2 hücrelerine karşı önemli bir sinerjistik anti-proliferatif etki gösterdi. 7-HC ayrıca, sıçanlarda formalin kaynaklı pençe ödeminde önemli anti-inflamatuar etki sergiledi. Western blot analizi, 7-HC'nin izole edilmiş sıçan monositlerinde LPS ile indüklenen COX-2 protein ekspresyonunun doza bağlı inhibisyonunu gösterdiğini ortaya koydu. Mevcut çalışma, 7-HC'nin umut verici antikanser ve anti-inflamatuar aktivitelere sahip olduğunu ve kanser tedavisinde öncü bir molekül olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.
Konu terimleri: Kemoterapi, Toksiko Tanıtıtım
Phytomedicine, çeşitli bitki türevli bileşiklerin 1 pro-apoptotik ve anti-proliferatif aktivitelerinden dolayı, çeşitli kanser türlerinin tedavisinde ve kemoprevensiyonunda yoğun bir şekilde kullanılmıştır . Mevcut antikanser ilaçları arasında, 1940 ve 2002 yılları arasında kanser tedavisi için onaylanan ilaçların %60'ından fazlası ya doğal ürünler ya da doğal ürünlere dayalı formülasyonlar olmuştur; diğer herhangi bir ilaç geliştirme alanından daha yüksek bir oran 2 .
Lübnan Sediri ( Cedrus libani, C. libani ), Lübnan ve Suriye'nin Akdeniz dağlarının yanı sıra Türkiye'nin Toros Dağları'na özgü bir kozalaklı ağaç türüdür 3 . Ait Etnobotanik ve geleneksel kullanımları Cedrus onun esansiyel yağ geleneksel tıpta kullanılan sayede cinsi izleri antik çağlara kadar geri 4 . Birkaç Cedrus türünden elde edilen yağların fitokimyasal analizi, steroidlerin, prosiyanidinlerin ve terpenoidlerin ana bileşenler olduğunu ortaya çıkardı 5 , 6 . Bu fitokimyasalların, antikanser 7 , anti-inflamatuar 8 gibi çok çeşitli biyolojik aktivitelere sahip olduğu gösterilmiştir.ve antimikrobiyal etkiler 9 . C. libani'nin odun yağının, K562 insan kronik miyeloid lösemi hücrelerine ve ayrıca çoklu ilaca dirençli lösemi hücrelerine karşı güçlü antitümör etkisine sahip olduğu gösterildi 10 , 11 . Ek olarak, C. libani odun yağı, fetal globin genlerinin 10 ekspresyonunu uyardığı bilinen terminal fazda eritroid farklılaşmasına neden oldu . Dikkat çekici bir şekilde, yağ çapraz direnç göstermedi ve bu nedenle bu fenomen , ilaca dirençli lösemi ve dirençli tümörlerin tedavisinde kullanılan ajanlar olarak formüle edilebilecek umut verici bir doğal aktif bileşik kaynağı olarak C. libani yağlarının itibarını yükseltiyor.10 .
Enflamasyon, istilacı patojenleri ortadan kaldırmak ve iyileşme sürecini başlatmak için bir konak savunma mekanizmasıdır, ancak enflamatuvar mediatörlerin aşırı üretimi, neoplastik transformasyona ve malignitelerin ilerlemesine yol açan kronik enflamasyonla birlikte konak hücrelerde hasara neden olabilir 12 . Bir inflamatuar yanıt sırasında, reaktif oksijen türleri (ROS), reaktif nitrojen türleri (RNS), tümör nekroz faktörü-α (TNF-α) ve PGE 2 13 gibi pro-inflamatuar biyobelirteçler aşırı derecede üretilir . Bu bağlamda, özellikle nitrik oksit RNS (NO), indüklenebilir nitrik oksit sentazı (iNOS) oluşturulmaktadır 14 ve PGE 2 COX-2 ile arakidonik asit metabolitlerinin üretilmiştir 15 . PGE 2anormal hücre bölünmesini arttırmak, apoptozu azaltmak, anjiyogenezi artırmak ve tümör invazivliğini ve metastazı 16 teşvik ettiği gösterilmiştir . Diğer çalışmalar, COX-2'nin aşırı ekspresyonunun, meme, deri, kolon, akciğer ve prostat 17 dahil olmak üzere çeşitli epitelyal hücre kaynaklı kanser türlerinin gelişimi ile yüksek oranda ilişkili olduğunu göstermiştir . Ayrıca, indüklenebilir COX-2 18'in nonsteroidal antiinflamatuar ilaçlar tarafından inhibisyonu, anjiyogenezde bir azalmaya neden olmuştur, dolayısıyla bunların kullanımı tümör progresyonunun ve metastazın inhibisyonuna yol açabilir 19. Genel olarak, steroidler ve steroid olmayan antienflamatuar ilaçlar, iskemik olayların önlenmesi ve ağrı, ateş ve iltihaplanma tedavisi için etkili ilaçlar olarak kabul edilir. Bununla birlikte, bu ilaçlar, gastrointestinal veya kardiyovasküler komplikasyonlar 20 geliştirme açısından önemli bir risk ile ilişkilidir . Bu nedenle, COX-2 aktivitesinin veya ekspresyonunun seçici olarak hedeflenmesi, önemli ölçüde klinik öneme sahiptir.
Laboratuvarımızdaki ön çalışmalar, C. libani odun yağının birkaç insan kanser hücre hattına karşı güçlü antikanser aktivite sergilediğini gösterdi . Ham petrolün analizi, 2-himachalene-7-ol'ün (himachalol; 7-HC), özütün yaklaşık %40'ını oluşturan ana bileşen olduğunu ortaya çıkardı. Bu çalışma, 7-HC'yi izole etmeyi ve çeşitli kanser hücre dizileri üzerindeki antikanser aktivitesini araştırmayı ve ayrıca in vivo ve in vitro anti-inflamatuar özelliklerini değerlendirmeyi amaçlamaktadır .
Git: Sonuçlar
2-himachelen-7-ol'ün ekstraksiyonu ve karakterizasyonu
C. libani ahşabı, sıcak heksan kullanılarak özütlenerek C. libani Yağ Özü, CLOE) koyu bir yağ (%1.95 verim) halinde elde edildi. CLOE'nin GCMS analizi (Tablo 1) yağ ekstraktının yaklaşık %83'ünü oluşturan 30 bileşik tanımladı ve kalan %17, tanımlanamayan birkaç bileşik oluşturdu, bu sayede hiçbirinin %2'den fazla mevcut olmadığı bulundu. Bununla birlikte, özellikle 7-HC (Şek. 1) CLOE'nin %40'ı gibi şaşırtıcı bir konsantrasyonda mevcut olduğu gösterildi. 7-HC'yi izole etme girişiminde, yağ daha sonra silika jel bazlı kolon kromatografisine tabi tutuldu, bu sayede üç fraksiyon (F1, F2 ve F3) heksan:etil asetatın bir gradyan mobil fazı kullanılarak elde edildi. 7-HC, TLC ile gösterildiği gibi 8:2 heksan:etil asetat kullanılarak F2 içinde ayrıştırıldı, burada plakalar anisaldehit ile boyandı ve seskiterpen, Rf değeri 0.78 olan pembe bir nokta olarak göründü . Seskiterpen daha sonra beyaz kristalli bir katı (%97 saflık; Şek. 1). Ana bileşiğin kimliğini ve yapısını NIST11 ve Wiley9 kütle spektral veri tabanı kullanılarak GCMS analizi ile 2-himachelene-7-ol gibi yoluyla doğrulanmıştır 13 (Ek Şekiller NMR spektroskopisi S1 - S7 ). tablo 1
CLOE'nin Gaz Kromatografisi analizi.
Ayrı bir pencerede aç
Ayrı bir pencerede aç
Şekil 1
7-HC'nin yapısı ve X-ışını kristal yapısı.
7-HC'nin doza bağımlı in vitro sitotoksisitesi
7-HC'nin sitotoksik etkisi, birkaç insan kanser hücre hattı üzerinde incelenmiştir. Sonuçlar gösterdi (Şek. 2) 25 ug/mL'de proliferasyonun neredeyse tamamen inhibisyonu ile SF-268, HT-29 ve Caco-2 hücre dizilerinde hücre hayatta kalmasında doza bağlı bir azalma. IC 50 dört kanseri hücre hatlarında 7-HC ve Sisplatin değerleri Tablo l'de sunulmuştur 2. Karşılaştırılabilir IC 50 7-HC ve Sisplatin değerleri SF-268 ve Caco-2 hücreleri için de gözlenmiştir. HT-29 Sisplatin için dayanıklılık sergileyen ancak bununla birlikte, 7-HC 8-10 kat daha güçlü bir IC oldu 50 9.1-10.1 ug / mL. SK-OV-3 hücreleri, bir IC ile tedaviye çok dirençli 50 değeri> 50 ug / mL.
Ayrı bir pencerede aç
şekil 2
7-HC'nin hücre sağkalımı üzerindeki sitotoksik etkisi. SF-268 ( A ), Caco-2 ( B ), HT-29 ( C ) ve Sk-OV-3 ( D ) hücreleri, 24 ve 48 saat boyunca çeşitli 7-HC konsantrasyonları ile işleme tabi tutuldu. Veriler, 3 deneyden elde edilen ortalama ± SEM olarak sunulmuştur. *P < 0.05'e karşılık . DMSO grubu. Tablo 2
IC 50 (ug / mL), farklı insan kanser hücresi türlerine karşı 7-HC ve Sisplatin değerleri.
Cisplatin ve 7-HC birlikte tedavisinin sinerjik etkisi
7-HC ve Cisplatin'in birlikte tedavisinin 24 ve 48 saat boyunca dört hücre hattı üzerindeki etkisi incelendi (Tablo 3). Sonuçlar, Cisplatin ve 7-HC'nin en yüksek konsantrasyonlarda (sırasıyla 5 ve 10 μg/mL) birlikte tedavisinin, tek bir tedaviye kıyasla SF-268, Caco-2 ve HT-29 hücreleri üzerinde önemli bir sinerjistik sitotoksik etki uyguladığını göstermektedir. Her ilacın (Tablolar 4, ,5).5). SF-268 hücrelerinin bu kombine tedaviye en duyarlı olduğu bulundu. Her iki ilacın sinerjistik inhibitör etkisi, Sk-OV-3 hücrelerinde gözlenmedi.
Tablo 3
7-HC, Cisplatin ve bunların kombinasyonlarının insan kanser hücresi sağkalımı üzerindeki etkisi.
Değerler, üç bağımsız deneyden elde edilen ortalama ± SEM olarak ifade edilir. Üst simge ' a ' ve/veya ' b ' olan ortalamalar, sırasıyla benzer dozlarda Cisplatin ve/veya 7-HC ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde (p < 0.05) farklıdır.
Tablo 4
7-HC ve sisplatin tedavisinin kombinasyon indeksi.
Tablo 5
Çeşitli inhibitör etkilerde ekstrapolasyonlu CI değerleri.
Ayrı bir pencerede aç
Sıçanlarda kronik inflamasyonun inhibisyonu
7-HC, doza bağımlı olmayan bir şekilde kullanılan tüm konsantrasyonlarda sıçanlarda kronik iltihabı önemli ölçüde inhibe etti (Tablo 6). 100 mg/kg 7-HC dozu, %63.1 pençe ödemi inhibisyonu ile Diklofenak (10 mg/kg) ile karşılaştırılabilir etkiler göstermiştir. Artan 7-HC konsantrasyonlarının, LPS ile aktive olan sıçan periferik kan mononükleer hücrelerinde (PBMC) COX-2'nin protein ekspresyonu seviyesi üzerindeki etkisi araştırıldı. Western blot analizi (Şek. 3; kırpılmış Western Blot'lar), 7-HC'nin, kontrol grubuna kıyasla COX-2 ekspresyonunu belirgin şekilde inhibe ettiğini gösterdi (tam Western Blot'lar için lütfen Ek Şekiller S8 , S9 )'a bakın. 25 ve 50 µg/mL konsantrasyonlarda COX-2 protein indüksiyonunun önemli ölçüde baskılandığı gözlemlendi.
Tablo 6
7-HC intraperitoneal tedavinin sıçanlarda formalin kaynaklı kronik inflamasyon üzerindeki etkisi.
* Kontrolle ilgili olarak önemli fark ( p < 0.05).
Figür 3
7-HC, sıçan monositlerinde (kırpılmış Western Blot'lar) LPS ile indüklenen COX-2 protein ekspresyonunu bloke etti. PMBC, tek başına araç kontrolü ile, tek başına LPS (100 ng/ml) ile veya 6 için LPS (100 ng/mL) ile stimülasyondan önce 30 dakika süreyle 5, 10, 25 veya 50 μg/mL 7-HC ile inkübe edildi. h ( n = 3).
7-HC'nin sıçan monositlerine karşı aktivitesi
WST kullanarak 7-HC'nin sitotoksik etkisi (Şekil 1). 4) 6 saatlik tedaviden sonra izole monositler üzerinde test edildi. Sonuçlar, 2-himachalen-7-ol'ün 10 µg/mL, 25 µg/mL ve 50 µg/mL konsantrasyonlarda hücre sağkalımında sırasıyla sadece %7.7, %11.5 ve %12.7 azalmaya neden olduğunu ortaya koydu.
Şekil 4
Tedaviden 6 saat sonra izole edilmiş sıçan monositlerine karşı WST kullanılarak 7-HC aktivitesi.
Git: Tartışma
CLOE'nin fitokimyasal analizi, seskiterpenlerin ana bileşenler olduğunu, 7-HC (%40), α-himachalen (%2.96), β-himachalen (%3.18) ve γ-himachalen'in (%3.37) ana bileşenler olduğunu ortaya koydu. Yukarıda bahsedilen seskiterpenlerin benzer bir kalitatif bileşimi daha önce Lübnan sedir ağacı yağında 21 rapor edilmişti . Bununla birlikte, bu çalışmada, CLOE'de bulunan α-himachalen, β-himachalene ve γ-himachalene yüzde bileşimi, daha önce bildirilen öz odun yağından daha düşüktü 21 . Bu niceliksel farklılık, coğrafi konum, nem, rakım seviyesi, toplama süresi, ekstraksiyon tekniği ve bitki yaşı gibi faktörlere bağlanabilir.
Bu çalışmada, 7-HC'nin %97 saflıkta CLOE'den izolasyonunu sağlayan bir kromatografik prosedürü optimize ettik. Arıtılmış seskiterpen daha sonra çeşitli kanser hücrelerine karşı in vitro sitotoksik etkilerinin yanı sıra in vivo ve in vitro anti-inflamatuar aktivitesi açısından değerlendirildi. Sonuçlar, 7-HC'nin, belirli kanser hücre hatlarına karşı seçiciliği gösteren, Sk-OV-3 dışında test edilen tüm kanser hücrelerine karşı doza bağlı bir sitotoksisite uyguladığını gösterdi. Bu antikanser etkisi, CLOE'nin insan lösemi hücrelerine karşı daha önce bildirilen aktivitesinin 7-HC 11'e atfedilebileceğini düşündürmektedir.. Ek olarak, laboratuvarımızdaki daha önceki çalışmalar, yabani havuçtan izole edilen 7-HC'nin bir izomeri olan β-2-himachalene-6-ol'ün, birkaç insan ve murin kanser hücre hattına karşı güçlü antikanser aktivite gösterdiğini gösterdi 22 , 23 . β-2-Himachalene-6-ol'ün ayrıca farelerde 24 DMBA/TPA cilt karsinogenezine ve dimetilhidrazin kaynaklı kolon karsinogenezine karşı önemli bir anti-tümör teşvik edici etki gösterdiği bulunmuştur .
En yaygın olarak kullanılan antineoplastik ajan olan sisplatin, antikanser aktivitesine DNA hasarı, apoptotik yolların aktivasyonu ve inflamasyon ve oksidatif stres 25 yoluyla hücrelere zarar verme dahil olmak üzere çeşitli sitotoksik mekanizmalar aracılığıyla aracılık eder . Mevcut sonuçlar, HT-29 hücreleri, Cisplatin (IC dirençli olduğunu göstermiştir 50 > 100 ug / ml ve 24 ve 48 saatte sırasıyla 78.78 ug / ml) 7-HC kuvvetli doza bağımlı anti-kanser aktivitesi sergilerken, (IC 50 = sırasıyla 24 ve 48 saatte 9.122 µg/mL ve 10.11 µg/mL). SK-OV-3 hücreleri, ancak 7-HC ve cisplatin tedavisinin hem (IC karşı dirençli olduğu gösterilmiştir 50 > 100 ug / mL). IC 50aynı kanser hücre dizileri üzerindeki Cisplatin değerleri literatür 26 , 27 ile uyumludur . İyileştirilmiş bir terapötik sonuç elde etme girişiminde, 4 hücre hattının tümü, 7-HC ve geleneksel antineoplastik ilaç Cisplatin'in bir kombinasyonuna tabi tutuldu (Tablo 3). İlaç Kombinasyon İndeksi (CI), yaygın olarak kullanılan Loewe katkı modeli ve CompuSyn yazılımı 28 kullanılarak belirlendi . Kısaca, 1'e eşit CI değerleri toplamsallığı, 1'in altındaki değerler sinerjiyi, 1'in üzerindeki değerler ise antagonizma 28'i gösterir . Tablo 4sinerjizme yol açan en çok arzu edilen kombinasyonların Kombinasyon 2: Cis(2.5) + 7-HC(10) ve Kombinasyon 4: Cis(5) + 7-HC(10)'a karşılık geldiğini göstermektedir. Ek olarak, Loewe modeli 28 tahmin eder (Tablo 5) 7-HC ve Cisplatin kombinasyonları ile %75 hücre inhibisyonuna (SF-268, Caco-2 ve HT-29) veya üzeri yol açan sinerjizmin meydana geleceği. Sonuçlar, yüksek bir 7-HC konsantrasyonundan (10 µg/mL) ve düşük bir Cisplatin konsantrasyonundan (2.5 µg/mL) oluşan kombinasyonların, sinerjistik yollar yoluyla önemli hücre inhibisyonunu indükleyeceğini ortaya koymaktadır. Böyle bir sinerjistik etki, kanserli hücrelere 25 karşı gücü korurken doz sınırlayıcı nefrotoksisiteyi ortadan kaldırarak Cisplatin'in olumsuz etkilerini azaltmada kullanılabilir . Tablo 4ayrıca dört ilaç kombinasyonunun hepsinin Sk-OV-3 hücre hattına karşı sinerjistik bir etki uyguladığını gösterir, ancak sinerjizm yoluyla hücre inhibisyonu %15'i geçmediği için bu sonuçlar önemsizdir. Literatürde rapor edildiği gibi, sinerjistik etkiler, SF-268, Caco-2 ve HT-29 hücre hatlarına 28 karşı Kombinasyonlar (2) ve (4) ile gözlemlendiği gibi önemli hücre inhibisyonu eşlik ettiğinde esas olarak arzu edilir .
Her iki elde edilen kanıt önemli bir vücut in vivo ve in vitro çalışmalar seskiter, alkaloidler, fenol ve flavonoidler içeren bu bitki türevi özler, TNF-a, NF-KB dahil olmak üzere çeşitli iltihabik biyolojik belirteçler seviyelerini kontrol ederek, anti-enflamatuar aktivite gösteren rapor , NO, iNOS ve COX-2 29 . Siklooksijenaz-2 (COX-2), LPS veya sitokinler tarafından indüklenen önemli bir pro-inflamatuar enzimdir ve inflamasyon, maligniteler ve anjiyogenez ile ilişkili olduğu bulunmuştur 30. Bu nedenle, COX-2 proteini üzerinde inhibitör etkisi olan yeni bir bileşiğin belirlenmesi, iltihaplanma ile ilgili bozuklukların tedavisi için önemli bir gereklilik olarak kabul edilmektedir. Bu çalışmanın sonuçları, 7-HC'nin sıçanlarda kronik inflamasyona karşı önemli anti-inflamatuar aktiviteye sahip olduğunu göstermektedir. Kininler, prostaglandinler ve serotonin gibi çeşitli inflamatuar mediatörler, subplantar formalin enjeksiyonunun neden olduğu ödem oluşumunu açıklayabilir 31. Prostaglandinlerin artan sentezi, membran fosfolipidlerinden araşidonik asidin artan salınımına ve/veya COX-2'nin yukarı regülasyonuna bağlı olabilir. Western blot analizi, sıçan monositlerinin LPS tedavisinden sonra COX-2 üretiminin belirgin şekilde yükseldiğini gösterdi. Bununla birlikte, 7-HC'nin farklı dozlarının uygulanması, doza bağlı bir şekilde LPS tarafından COX-2'nin protein ekspresyonunu inhibe etti. Bu nedenle, 7-HC'nin anti-inflamatuar aktivitesine kısmen COX-2 ekspresyonunun baskılanması aracılık eder. Önceki raporlar ahşap türetilen himachalol, ortaya C deodara önemli ölçüde anti-alerjik bir aktivite sergiledi ve bir büyük anti-spazmodik bir bileşen olarak tespit edilmiştir 32. 7-HC'nin sıçan monositlerine karşı sitotoksik etkisinin, 10 µg/mL, 25 µg/mL ve 50 µg/mL konsantrasyonlarında hücre sağkalımında sırasıyla %7.7, %11.5 ve %12.7 azalma ile önemsiz olduğu gösterilmiştir. Bu, 7-HC'nin izole edilmiş sıçan monositleri üzerinde (seçilen konsantrasyonlarda) küçük bir sitotoksik etkiye sahip olduğunu gösterir. Bu sonuç aynı zamanda normal hücrelere göre kanser hücreleri üzerinde 2-himachalen-7-ol'ün seçiciliğini de desteklemektedir.
Git: Çözüm
C. libani uçucu yağı özütlendi ve GCMS ile analiz edildi, burada 2-himahkalen-7-ol (7-HC)'nin yağın %40'ını oluşturduğu bulundu. 7-HC, beyaz kristalli bir katı ve %97 saflık halinde seskiterpenler verecek şekilde silika jel kolon kromatografisi kullanılarak izole edildi. 7-HC, SF-268 (IC karşı kuvvetli sitotoksik aktivite gösterdi 50 -29 HT (IC 8.1 ug / mL), 50 10.1 ug / mL) ve Caco-2 (IC 509,9 μg/mL). Ek olarak, HT-29, Cisplatin'e direnç gösterirken, 7-HC 8-10 kat daha güçlüydü. 7-HC:Cisplatin (2:1 ve 4:1 oranı) kombinasyonları ile birlikte tedavi, SF-268, HT-29 ve Caco-2 hücrelerine karşı önemli bir sinerjistik anti-proliferatif etki gösterdi. 7-HC ayrıca sıçanlarda formalin ile indüklenen pençe ödeminde önemli anti-inflamatuar etki ve ayrıca izole edilmiş sıçan monositlerinde LPS ile indüklenen COX-2 protein ekspresyonunun doza bağlı inhibisyonu sergilemiştir. Mevcut çalışma, 7-HC'nin umut verici antikanser ve anti-inflamatuar aktivitelere sahip olduğunu ve kanser tedavisinde öncü bir molekül olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.
Git: Malzemeler ve yöntemler
Genel deneysel prosedürler
UV spektrumları, bir Shimadzu UV2450 spektrofotometresi kullanılarak kaydedildi. 1 , H, 13 ° C ve 2D NMR spektrumları, dahili bir referans olarak TMS kullanılarak bir Bruker Avanc3-400 MHz NMR spektrometresi veya Varian Mercury-300 NMR spektrometresi kullanılarak elde edildi. TLC analizi, silika jel plakaları (ACROS Organics, New Jersey, ABD) üzerinde gerçekleştirilmiştir. Kolon kromatografisi için silika jel 60 (230-400 göz veya 70-230 göz, 47 cm x 2.5 cm, ACROS organik, New Jersey, ABD) kullanıldı. GCMS analizi, kaynaşmış silika HP5-MS %5 fenil metil siloksan başlık sütunu (30 m x 0.25 mm id, film kalınlığı 0.25) ile donatılmış ve doğrudan MS'ye bağlanmış Hewlett Packard, HP6890 serisi kullanılarak gerçekleştirildi. ELIZA mikroplaka okuyucusu BioTek'ten (Winooski, VT, ABD) satın alındı.
kimyasallar ve tepkimeler
Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM) ve dimetil sülfoksit (DMSO), Sigma'dan (St. Louis, Missouri, ABD) satın alındı. PVDF membranları Pall Corporation'dan (Ann Arbor, MI, ABD) satın alındı. Aktin ve Cox-2 antikorları Abcam'dan (Cambridge, MA, ABD) satın alındı. HRP-bağlı ikincil antikorlar, Promega Corporation'dan (Madison, WI, ABD) satın alındı. ECL kiti Abcam'dan (Milton, Cambridge, İngiltere) satın alındı. Fetal bovin serum (FBS), penisilin-streptomisin, glisin, lizis tampon solüsyonu, fosfat tamponlu salin (PBS), bovin serum albümini (BSA), Tween 20 ® ile tris-tamponlu salin(TBST), HEPES tamponu, sodyum dodesil sülfat (SDS), kuyu plakaları, pentan, dietil eter, heksan, etil asetat, anisaldehit, etanol, paraformaldehit, tripan mavisi, Ficoll (Histopaque-1077). Kristal viyole, tripsin, d 6 -DMSO ve CDC! 3 , aksi belirtilmedikçe, Sigma'dan (St. Louis, Missouri, ABD) 'dan satın alınmıştır.
Cedrus libani çıkarma
Sedir ağacı, sonraki sezonda büyümelerini artırmak için ağaçların budandığı Şubat ayı boyunca olgun sedir ağaçlarından Kuzey Lübnan'dan toplandı. Budanmış odun parçaları Amioun Belediyesi, El-Koura'dan izin alındıktan sonra toplandı. Ağaç, “Dünyanın Şifalı Bitkileri” 33 kitabında açıklanan özelliklerine göre tanımlanmıştır.. Bir örnek, (ID 2015-0019) Lübnan'daki Lübnan Amerikan Üniversitesi Sanat ve Bilim Okulu'na yatırıldı. Odun numunesi gölgede havayla kurutuldu, parçalandı ve heksan ekstraksiyonuna tabi tutuldu (72 saat). Filtrelenen ekstrakt, indirgenmiş basınç altında kuruyana kadar buharlaştırıldı ve kalan yağ (CLOE), susuz sodyum sülfat (verim %1.95) üzerinde kurutuldu ve kullanıma kadar 4 °C'de kapalı bir amber şişede saklandı. CLOE (5 g), üç fraksiyon (9:1, 600 mL, F1; 8:2, 600 mL, F2) toplamak için bir heksan/etil asetat gradyan mobil fazı kullanılarak bir silika jel kolonu (230-400 ağ) üzerinde kromatografiye tabi tutuldu. 7:3, 500+ mL, F3). Fraksiyonlar, mobil faz olarak heksan:etil asetat (8:2) kullanılarak TLC ile analiz edildi ve plakalar, bir Rf ile pembe bir nokta olarak 2-himachelen-7-ol'ün göründüğü %2 anisaldehit ile boyandı.0.78 değeri. F2 (1.8 g) daha sonra asetonitril ile karıştırıldı ve 2-himachelen-7-ol'ü beyaz kristalli bir katı (1.2 g, %97 saflık) halinde yeniden kristalleştirmek için dondurucuda 3 gün saklandı. 13 CDC C NMR 75 MHz 3 ö 133.4, 125.6, 76.2, 51.9, 43.6, 41.4, 38.4, 36.4, 33.5, 32.7, 31.7, 26.7, 23.6, 22.3 ve 19.9 ppm.
Gaz Kromatografisi ve Kütle Spektrometrisi (GC-MS) analizi
CLOE, fraksiyonlar ve 7-HC, taşıyıcı gaz olarak helyum kullanılarak bölünmesiz enjeksiyon ve 1.2 mL/dakika akış hızı kullanılarak GC-MS yoluyla analiz edildi. Sıcaklık programı 70 °C'de 2.0 dakika, 8 °C/dk'da 70'den 130 °C'ye ve 5 dakika, 130'dan 180 °C'ye 2 °C/dk'da ve 10 dakika, 180'den 220 °C'de 15 °C/dk'da ve 2 dakika ve ardından 220'den 280 °C'de 15 °C/dk'da tutun ve 22 dakika tutun. Tüm bileşiklerin ön tanımlaması, kütle spektrumları literatürle (NIST11 ve Wiley9) karşılaştırılarak yapıldı. Yüzde bileşimi, GC pik alanlarından hesaplandı. GC-MS: CHC 3 m / z : 222.2 (1), 204.2 (46), 189.2 (17), 175.1 (4), 161.1 (20), 147.1 (16), 133.1 (34), 119.1 (100), 105.1 (44), 91.1 (41), 77.1 (21), 69.1 (15) ve 55.1 (16).
Hücre hayatta kalma tahlili
Bu çalışmada dört insan kanser hücre dizisi kullanıldı: SF-268 (insan astrositoma hücre dizisi), Caco-2 (insan kolon kanseri hücre dizisi), HT-29 (insan kolon kanseri hücre dizisi) ve Sk-OV-3 ( insan yumurtalık kanseri hücre hattı). SF-268, Sk-OV-3, Dulbecco'nun modifiye Eagle's ortamında (DMEM) büyütülürken, Caco-2 ve HT-29, Roswell Park Memorial Institute Medium'da (RPMI) muhafaza edildi. Her iki ortam da %10 Fetal Bovine Serum (FBS) ve 100 μg/mL streptomisin ve 100 U/mL penisilin içeriyordu. Tüm hücre çizgileri, CO, 37 ° C'de, nemlendirilmiş bir odada kuluçkaya bırakıldı ve% 5 bulundu 2 . Hücreler (1 × 10 4hücre/mL) 24 saat 96 oyuklu plakalara kaplandı ve daha sonra DMSO (1, 5, 10, 15 ve 25 ug/mL) içinde 7-HC veya 24 saat ve 48 saat sisplatin ile işlendi. Ek olarak, 7-HC (2,5 ve 5 μg/mL) ve Cisplatin (5 ve 10 μg/mL) ile eş zamanlı tedavi uygulandı. Hücre canlılığı, WST-1 (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, ABD) kullanılarak ölçüldü. Absorbans, Multiskan FC mikroplaka ELISA okuyucusu (Thermo fisher Scientific, Rockford, IL, ABD) kullanılarak 450 nm'de ölçüldü. Hücreler iki kopya halinde kaplandı ve deneyler üç kez tekrarlandı.
Monositler izolasyonu ve stimülasyonu
Deney, Laboratuar Hayvanları Refahı Ofisi (NIH, PHS Policy on Human Care and Use of Laboratuar Hayvanları, ABD 2015) tarafından belirlenen ve Lübnan Amerikan Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylanan uluslararası kabul görmüş ilkelere uygun olarak gerçekleştirildi. Daha önce tarif edildiği gibi, taze periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC'ler), monositler ve lenfositler oluşan izolasyonu gerçekleştirilmiştir 26(6 haftalık; 250 g ağırlığında) sağlıklı genç erkek Sprague Dawley sıçanlarının kan örneklerinden ve EDTA ile ön işleme tabi tutulmuştur. EDTA ile muamele edilmiş kan (4 mM), eşit steril hacimde ılık PBS ile seyreltildi ve Ficoll üzerinde santrifüjlendi. Ara yüzeyde oluşan ve monosit hücrelerinin çoğunu içeren buffy coat, steril bir pipet ile dikkatlice çıkarılır ve steril 50 ml'lik bir konik tüpe aktarılır ve santrifüjleme yoluyla iki kez steril ılık PBS ile yıkanır. Hücreler daha sonra, altı oyuklu kültür plakaları içinde FBS (% 10), penisilin (100 U / ml) ve streptomisin (100 ug / ml) ile desteklenmiş 2 ml RPMI ortamı içinde tohumlanmıştır (4 x 10 5 hücre / cm 2 ) ve izin verilen yapışan bir gece boyunca (37 ° C,% 5 CO 2). Yapışmayan hücreler (esas olarak lenfositler), ılık steril PBS ile (üç kez) kuvvetli yıkama ile çıkarıldı. Elde edilen monositler/makrofajlar %95 saflığı aştı. Hücre canlılığını belirlemek için tripan mavisi dışlama kullanıldı. Hücre canlılığını belirlemek için tripan mavisi dışlama kullanıldı. Monositler, bakteriyel LPS (100 ng/mL) varlığında veya yokluğunda ve artan konsantrasyonlarda 7-HC (5, 10, 25) varlığında altı oyuklu plakalarda 6 saat boyunca toplam 2 mL'lik bir hacimde RPMI içermeyen ortamda kültürlendi. , 50 ug/mL). 7-HC, LPS ile stimülasyondan 30 dakika önce ilave edildi.
Western blot analizi
PBMC'ler buz üzerinde toplandı, PBS ile yıkandı, lizis tamponu ile parçalandı ve 4 °C'de 10 dakika boyunca 12.000 g'de santrifüjlendi. Hücre lizatı 100 °C'de 5 dakika ısıtıldı ve protein içeriği Bio-Rad protein tahlili (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD) kullanılarak belirlendi. Proteinlerin eşit konsantrasyonları %10 SDS-PAGE'ye yüklendi ve daha sonra PVDF membranına (Pall Corporation, Ann Arbor, ABD) aktarıldı ve blokaj tamponu (1 x TBS, %0.1 Tween-20, %5 yağsız süt) ile bloke edildi. 2 saat Zarlar daha sonra Actin ve Cox-2'ye karşı birincil antikorlarla gece boyunca 4 °C'de problanmıştır. Birincil antikorlar daha sonra 2 saat boyunca TBST ile yıkandı ve zarlar, 1 saat boyunca yaban turpu peroksidaz (HRP)-bağlı ikincil antikorlar ile işlendi ve ardından TBST ile yıkandı. Protein tespiti, kemilüminesans ECL kiti kullanılarak yapıldı. Nihayet,
Monositler hücre hayatta kalma tahlili
Fare monositler FBS (% 10), penisilin (100 U / ml) ve streptomisin (100 ug / ml) ile takviye edilmiş RPMI ortamında 12 oyuklu plakalara plakalanır ve bir gece yapışmaya bırakılmış (37 ° C, 5% CO 2 ) 24 saat Hücreler daha sonra artan konsantrasyonlarda 7-HC (10, 25 ve 50 μg/mL) ile 6 saat süreyle işleme tabi tutuldu. Hücre canlılığı, WST-1 (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, ABD) kullanılarak ölçüldü. Absorbans, Multiskan FC mikroplaka ELISA okuyucusu (Thermo fisher Scientific, Rockford, IL, ABD) kullanılarak 450 nm'de ölçüldü. Hücreler iki kopya halinde kaplandı ve deneyler üç kez tekrarlandı.
Formalin kaynaklı pençe ödemi
Sprague Dawley sıçanları, her biri altı hayvandan oluşan altı gruba ayrıldı. Tüm gruplarda, sağ arka pençeye 34 20 uL %2 formalin subplantar enjeksiyonu ile kronik enflamasyon üretildi . Formalin enjeksiyonundan otuz dakika önce, dört grup salin içinde 10, 25, 50 veya 100 mg/kg VA konsantrasyonunda 7-HC (ip) aldı, bir grup standart referans ilaç diklofenak (10 mg/Kg VA, ip) ve bir grup negatif kontrol olarak görev yaptı. 7-HC ve diklofenak uygulamasına arka arkaya 6 gün boyunca günde bir kez devam edildi. Pençe kalınlığı, formalin enjeksiyonundan 31 önce ve 6 gün sonra bir Vernier kumpas kullanılarak ölçüldü . Pençe kalınlığındaki artış şu formül kullanılarak hesaplanmıştır: [P t – P 0 ]; nerede Ptformalin enjeksiyonundan 6 gün sonra pençenin kalınlığıdır ve P 0 , 0 zamanındaki pençe kalınlığıdır. İnhibisyon yüzdesi şu formül kullanılarak hesaplanmıştır: [(C − T)/C × 100]; burada C , pozitif kontrolün pençe kalınlığındaki artıştır ve T , tedavilerinkidir.
istatistiksel analiz
Sonuçlar, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak istatistiksel anlamlılık açısından analiz edildi. Her grup içinde test edilen farklı parametrelerin değerleri, ortalama ± SEM olarak sunulur. Tüm veriler istatistiksel paket SPSS 18 ile analiz edildi ve p-değeri < 0.05 ise gruplar arasındaki farklılıklar istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. IC 50 değerleri Windows için Graph Pad Prism 5.0 sürümü yazılımın kullanımı ile doğrusal olmayan regresyon eğrisi kullanılarak hesaplandı.
Git: Ek bilgi
Cedrus Libani'den (1.1M, docx) izole edilen 2-Himachelen-7-ol'ün Antikanser ve Antiinflamatuar Aktivitelerinin In Vitro ve In Vivo Değerlendirilmesi
Git: Teşekkür
Lübnan Amerikan Üniversitesi'ndeki Fen Edebiyat Fakültesi ve Eczacılık Fakültesi'ne, bu yazıda açıklanan analizi gerçekleştirmek için finansman ve olanaklar sağladığı için teşekkür ederiz. In vivo deneylerde yardımcı olan Bay Jean Karam'a özel teşekkürler .
Git: Yazar Katkıları
Yazarlar, Andree Elias, Wassim N. Shebaby, Bilal Nehme, Wissam Faour, Bassem S. Bassil, Joelle El Hakim, Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Mohamad Mroueh, Costantine Daher ve Robin I. Taleb, sahip olduklarını beyan ederler. tümü, katkıları katkıda bulunan yazarlardan biri olarak bağlantılarını garanti ettiği ölçüde, bu yazıda önemli ölçüde katkıda bulunmuştur. Joelle El Hakim, Bilal Nehme, Bassem Bassil ve Robin Taleb, 7-HC'nin ekstraksiyonu, izolasyonu ve yapısal karakterizasyonunu gerçekleştirdi. Andree Elias, Joelle El Hakim, Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Wassim Shebaby, Mohamad Mroueh ve Costantine Daher hücre hayatta kalma deneylerini gerçekleştirdi. Andree Elias, Wassim N. Shebaby ve Wissam Faour, monositlerin izolasyonunu ve stimülasyonunu gerçekleştirdi. Andree Elias, Joelle El Hakim, Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Wassim Shebaby, Mohamad Mroueh ve Costantine Daher western blot analizini gerçekleştirdi. Wassim Shebaby, Robin Taleb ve Costantine Daher, monosit hücre hayatta kalma tahlilini gerçekleştirdi. İlaç Kombinasyon İndeksi Robin Taleb tarafından hesaplanmıştır. Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Mohamad Mroueh ve Costantine Daher, formalin kaynaklı pençe ödemi iltihabı deneyini gerçekleştirdi. Şekil ve tablolar Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından hazırlanmıştır. El yazması Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından yazıldı ve Robin Taleb, Costantine Daher ve Mohamad Mroueh tarafından düzenlendi. Mohamad Mroueh ve Costantine Daher, formalin kaynaklı pençe ödemi iltihabı deneyini gerçekleştirdi. Şekil ve tablolar Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından hazırlanmıştır. El yazması Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından yazıldı ve Robin Taleb, Costantine Daher ve Mohamad Mroueh tarafından düzenlendi. Mohamad Mroueh ve Costantine Daher, formalin kaynaklı pençe ödemi iltihabı deneyini gerçekleştirdi. Şekil ve tablolar Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından hazırlanmıştır. El yazması Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından yazıldı ve Robin Taleb, Costantine Daher ve Mohamad Mroueh tarafından düzenlendi.
Git: Veri kullanılabilirliği
Yazarlar, makalenin, makalede bildirilen yöntemleri ve bulguları yorumlamak, çoğaltmak ve geliştirmek için gereken minimum veri kümesini içerdiğini beyan eder.
Git: Rekabet İlgi Alanları
Ben, Robin I. Taleb, yazarların Nature Research tarafından tanımlanan rakip çıkarları veya bu makalede bildirilen sonuçları ve/veya tartışmaları etkilediği düşünülebilecek diğer çıkarları olmadığını beyan ederim.
Git: Dipnotlar
Yayıncının notu: Springer Nature, yayınlanan haritalarda ve kurumsal bağlantılarda yargı yetkisi iddiaları konusunda tarafsız kalır.
Git: Ek bilgi
Bu belgeye 10.1038/s41598-019-49374-9 adresinde ek bilgiler eşlik etmektedir.
Git: Referanslar
1. Uhtit A, et al. Bir fitokimyasal süper kokteyl ile meme kanseri hücrelerinde hücre döngüsü, proliferasyon, hayatta kalma, metastatik yollar ve apoptoz indüksiyonunun eşzamanlı inhibisyonu: Etki modunu destekleyen genler. Kanser Dergisi. 2014; 4 :703–715. doi: 10.7150/jca.7235. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Sak K, Jürisoo K, Raal A. Doğal antikanser ilaçları üzerine Estonya halk geleneksel deneyimleri: Geçmişten geleceğe. Farmasötik Biyoloji. 2014; 52 :855-866. doi: 10.3109/13880209.2013.871641. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
3. Panetsos K, Christou A, Scaltsoyiannes A. Sedir türlerinde (Cedrus sp.) allozim varyasyonu üzerine ilk analiz Silvae Genetica. 1992; 41 :339–342. [ Google Akademik ]
4. Reddy SE, Kirti Dolma S, Koundal R, Singh B. Uçucu yağların elmas sırtlı güve, Plutella xylostella (L.) (Lepidoptera: Yponomeutidae)'ye karşı kimyasal bileşimi ve böcek öldürücü aktiviteleri Doğal ürün araştırması. 2016; 30 :1834–1838. doi: 10.1080/14786419.2015.1068772. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Barrero AF, et al. Cedrus atlantica'nın konilerinden Abietan diterpenleri. Fitokimya. 2005; 66 :105-111. doi: 10.1016/j.phytochem.2004.10.017. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Derwich E, Benziane Z, Boukir A. Cedrus atlantica'nın uçucu yağının kimyasal bileşimi ve in vitro antibakteriyel aktivitesi. Int. J. Agric . Biol. 2010; 12 :381–385. [ Google Akademik ]
7. Singh SK, et al. Cedrus deodara kök ağacından elde edilen kimyasal olarak standardize edilmiş izolatlar, antikanser aktiviteye sahiptir. Bitki ilacı. 2007; 73 :519–526. doi: 10.1055/s-2007-967185. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Shinde U, et al. Membran stabilize edici aktivite—Cedrus deodara odun yağının anti-inflamatuar aktivitesi için olası bir etki mekanizması. Fitoterapi. 1999; 70 :251–257. doi: 10.1016/S0367-326X(99)00030-1. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
9. Dakir M, et al. Cedrus atlantica'dan antibakteriyel diterpenoidler. Doğal ürün araştırması. 2005; 19 :719–722. doi: 10.1080/14786410512331330675. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
10. Guerrini, A. Cedrus libani tohum ekstraktlarının K562 insan kronik miyelogenus lösemi hücrelerine karşı antiproliferatif ve eritroid farklılaşma aktiviteleri. International Journal of Pharmaceutical & Biological Archive 2 (2011).
11. Saab AM, et al. Lübnan şifalı bitkilerinden elde edilen uçucu yağların çoklu ilaca dirençli lösemi hücrelerine karşı fitokimyasal analiz ve sitotoksisite. Planta Medica. 2012; 78 :1927–1931. doi: 10.1055/s-0032-1327896. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Piazza GA, et al. NSAID'ler: eski ilaçlar yeni antikanser hedeflerini ortaya çıkarır. İlaç. 2010; 3 :1652-1667. doi: 10.3390/ph3051652. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Zha S, Yegnasubramanian V, Nelson WG, Isaacs WB, De Marzo AM. Kanserde siklooksijenazlar: ilerleme ve bakış açısı. Kanser Let. 2004; 215 :1–20. doi: 10.1016/j.canlet.2004.06.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
14. Salvemini D, Marino MH. İndüklenebilir nitrik oksit sentaz ve inflamasyon. Araştırma ilaçları hakkında uzman görüşü. 1998; 7 :65-75. doi: 10.1517/13543784.7.1.65. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Harris RE, Beebe-Donk J, Schuller HM. Sigara içenler arasında nonsteroid antiinflamatuar ilaçlarla akciğer kanserinin kemoprevensiyonu. Onkoloji raporları. 2002; 9 :693–696. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
16. Greenhough A, et al. COX-2/PGE2 yolu: kanserin ayırt edici özelliklerinde ve tümör mikroçevresine adaptasyonda kilit roller. Karsinojenez. 2009; 30 :377–386. doi: 10.1093/carcin/bgp014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Shim JY, et al. Siklooksijenaz-2'nin aşırı ekspresyonu, meme karsinomu ve onun kötü prognostik faktörleri ile ilişkilidir. Modern patoloji. 2003; 16 :1199–1204. doi: 10.1097/01.MP.00000097372.73582.CB. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Yuan C, et al. Siklooksijenaz allosterizmi, siklooksijenaz homodimerlerinin monomerleri arasında yağ asidi aracılı çapraz konuşma. Biyolojik Kimya Dergisi. 2009; 284 :10046–10055. doi: 10.1074/jbc.M808634200. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Umar A, Steele VE, Menter DG, Hawk ET. Kanser önlemede nonsteroid antiinflamatuar ilaçların mekanizmaları. Onkoloji Seminerleri. 2016; 43 :65-77. doi: 10.1053/j.seminoncol.2015.09.010. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Vonkeman, HE & van de Laar, MA In Semin. Artrit Rheum . 294–312 (Elsevier). [ PubMed ]
21. Saab AM, Harb FY, Koenig WA. Lübnan'dan Cedrus libani ve Cedrus atlantica'nın öz odunundaki uçucu yağ bileşenleri. Minerva Biotecnologica. 2005; 17 :159-161. [ Google Akademik ]
22. Taleb RI, et al. β-2-himachalen-6-ol: Lübnan yabani havuçuna özgü yeni bir antikanser seskiterpen. Etnofarmakoloji Dergisi. 2016; 190 :59-67. doi: 10.1016/j.jep.2016.05.053. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Daaboul HE, et al. β-2-himachalen-6-ol'ün kolon kanserindeki antitümör aktivitesine, PI3K ve MAPK yolaklarının inhibisyonu aracılığıyla aracılık edilir. Kimyasal-Biyolojik Etkileşimler. 2017; 275 :162–170. doi: 10.1016/j.cbi.2017.08.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Daaboul HE, et al. β-2-himachalen-6-ol , in vitro ve in vivo cilt kanseri gelişimine karşı korur . Eczacılık ve Farmakoloji Dergisi. 2017; 69 :1552–1564. doi: 10.1111/jphp.12796. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Manohar S, Leung N. Cisplatin nefrotoksisitesi: literatürün gözden geçirilmesi. Nefroloji Dergisi. 2018; 31 :15–25. doi: 10.1007/s40620-017-0392-z. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
26. Abd El Razik HA, et al. Yeni pirazolo [3, 4-d] pirimidin türevlerinin sentezi ve bunların antienflamatuar ve antikanser aktivitelerinin değerlendirilmesi. Kimyasal biyoloji ve ilaç tasarımı. 2017; 90 :83-96. doi: 10.1111/cbdd.12929. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Rone A, et al. Oral uygulama için potansiyel antikanser adayları olarak insan topoizomeraz inhibisyonu ve Ru (II)-SCAR komplekslerinin DNA/BSA bağlanması. BiyoMetaller. 2017; 30 :321–334. doi: 10.1007/s10534-017-0008-z. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
28. Huang, L., Jiang, Y. & Chen, Y. İlaç Kombinasyon İndeksinin Tahmin Edilmesi ve Uyuşturucu Hedefli EGFR-ERK Sinyal Yolunun Matematiksel Modellenmesi ile Ağ Düzenleme Dinamiklerinin Simüle Edilmesi. Bilimsel Raporlar 7 , 40752, 10.1038/srep40752, https://www.nature.com/articles/srep...ry-information (2017). [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ]
29. Wei WC, et al. 2008 ve 2012 yılları arasında Tayvan'ın yumuşak mercanlarından izole edilen doğal ürünlerin anti-inflamatuar aktiviteleri. Deniz ilaçları. 2013; 11 :4083–4126. doi: 10.3390/md11104083. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
30. Regulski M, et al. COX-2 inhibitörleri: meme kanseri tedavisinde yeni bir strateji. Bugün ilaç keşfi. 2016; 21 :598-615. doi: 10.1016/j.drudis.2015.12.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Jose N, Ajith T, Janardhanan K. İstiridye mantarının metanol özütü, Pleurotus florida, iltihabı ve trombosit agregasyonunu engeller. Fitoterapi Araştırması: Doğal Ürün Türevlerinin Farmakolojik ve Toksikolojik Değerlendirmesine Adanmış Uluslararası Bir Dergi. 2004; 18 :43-46. doi: 10.1002/ptr.1355. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Gupta P, Kulshrestha D, Patnaik G. Cedrus deodara'nın antialerjik aktivitesi. J Med Aromatik Bitki Sci. 1997; 19 :1007–1008. [ Google Akademik ]
33. Van Wyk, B.-E. & Wink, M. Dünyanın şifalı bitkileri: önemli şifalı bitkiler ve kullanımları için resimli bir bilimsel rehber . 1 baskı, 124 (Briza Yayınları, 2004).
34. Ajith, T. & Janardhanan, K. Phellinus rimosus (Berk) Pilat'ın metanol ekstraktının antioksidan ve anti-inflamatuar aktiviteleri. (2001). [ PubMed
Sedir ağacı nedir?
Sedir ağacı özellikleri ile merak edilen ağaç türleri arasında yer alıyor. Sedir, çamgiller (Pinaceae) familyasından Cedrus cinsini oluşturan iğne yapraklı ağaç türlerine verilen isimdir. Ortalama ömürleri 1000 yıl kadardır, 40 metre boya ve 2 metre çapa kadar büyüyebilirler.
Haberin Devamı
Tomurcuk çok küçük olup, az sayıda pullarla örtülüdür. İğne yapraklar genellikle üç köşeli, yatay kesitlerinde bitişik iki adet reçine kanalı bulunmaktadır. Yapraklar uzun sürgünler üzerinde tek tek, seyrek ve dağınık olarak dizilirken, kısa sürgünlerde püskül şeklindedir. İğne yapraklar dökülmeden ağaç üzerinde 3-6 yıl kalırlar. Bir evcikli çiçekler yalnız olarak terminal halde bulunurlar. Erkek çiçekler silindirik yapıda olup 5 cm uzunluğunda, sarı renkli ve kısa sürgün üzerinde dik dururlar. Dişi çiçekler daha küçüktür. 1-1,5 cm, yeşilimsi renkte olup döllenme ilkbaharda oluşmaktadır. Kozalak ise 26 ayda olgunlaşmaktadır. Kozalak genellikle fıçı görünümündedir. Kısa sürgün üzerinde adeta oturmuş şekildedir. Kısa ve kalın bir sapı vardır. Kozalak pulları olgunlaştığında dağılır.
Tohumların büyük, üçgen biçiminde genişçe kanadı olup, tohumu tek yüzünden örtmüştür. Tohumların üzerlerinde bol sayıda reçine bezeleri vardır. Çenek sayıları 9-10'dur.
Haberin Devamı
Ekolojik istekleri
Sedirler yarı ışık ağacıdır. Nem istekleri az, sıcaklık istekleri fazladır. Yetiştirilmeleri tohumla olur.
Sedir ağaçları hangi bölgelerde var?
Lübnan, Himalaya, Kıbrıs ve Atlas türleri bulunan sedir ağaçlarının iğne yaprakları genellikle üç köşelidir ve yatay kesitlerinde bitişik iki adet reçine kanalı bulunmaktadır. Genel olarak Akdeniz ikliminin hakim olduğu yerlerde, Anadolu'da batı, orta ve doğu Toroslar'da doğal olarak yayılış gösterir. Kuzeyde Erbaa ve Niksar çevrelerinde küçük ve izole halde bulunur. Boyları 40, çapları 3 metreye kadar ulaşan sedir ağaçları, gençken piramit görünüşlü olurlar. Yaşlılar ise geniş, yassı tepeli, düzgün gövdeli güzel görünüşlüdür. Derine giden kazık kök sistemine sahiptir. Özellikle kireç taşı topraklarda, yarık ve çatlaklarda oldukça derine gider. Türkiye'de birçok yerde görülebilen sedir ağaçları, nispeten kurak ve kalkerli yamaçlarda çoğu kez kayalar arasında yetişir. Sedir ağaçları mobilya, doğrama, tel direği, inşaat ve gemi kerestesi, kağıt, lif ve selüloz odunu ile yonga levha imalatında kullanılmaktadır.
Andree Elias , 1 Wassim N. Shebaby , 1 Bilal Nehme , 1 Wissam Faour , 2 Bassem S. Bassil , 3 Joelle El Hakim , 1 Rita Iskandar , 1 Nahia Dib-Jalbout , 1 Mohamad Mroueh , 4 Costantine Daher , 1 ve Robin I Tablo 1
Yazar bilgileri Makale notları Telif hakkı ve Lisans bilgileri Sorumluluk Reddi
Bu makale, PMC'deki diğer makaleler tarafından alıntılanmıştır . İlişkili Veriler
Soyut
Cedrus libani , Lübnan, Suriye ve Türkiye'nin Akdeniz dağlarına özgü görkemli, yaprak dökmeyen bir ağaçtır. Bu çalışmada, koyu renkli bir yağ olarak C. libani yağı özü (CLOE) üretmek için ağaç öz odunu heksan kullanılarak ekstrakte edildi. CLOE'nin GCMS analizi, 2-himachalen-7-ol (7-HC)'nin en bol (%40) olduğu 30'a kadar bileşik tanımladı. 7-HC, kolon kromatografisi kullanılarak izole edildi ve beyaz kristalli katının kimliği, NMR spektroskopisi ve X-Işını Kristallografisi ile doğrulandı. 7-HC beyin (SF-268, IC de dahil olmak üzere çeşitli insan kanser hücre çizgilerine karşı güçlü sitotoksik aktivite gösterdi 50 (HT-29, Ic 8.1 ug / mL) ve kolon 50 10.1 ug / mL, Caco-2 IC 50 9.9 ug / mL) yumurtalıklı (Sk-OV-3, IC 50 > 50 μg/mL) hücreler en dirençli olanlardır. Bununla birlikte, HT-29, Cisplatin'e direnç gösterirken, 7-HC, 8-10 kat daha güçlüydü. 7-HC ve Cisplatin ile birlikte tedavi, SF-268, HT-29 ve Caco-2 hücrelerine karşı önemli bir sinerjistik anti-proliferatif etki gösterdi. 7-HC ayrıca, sıçanlarda formalin kaynaklı pençe ödeminde önemli anti-inflamatuar etki sergiledi. Western blot analizi, 7-HC'nin izole edilmiş sıçan monositlerinde LPS ile indüklenen COX-2 protein ekspresyonunun doza bağlı inhibisyonunu gösterdiğini ortaya koydu. Mevcut çalışma, 7-HC'nin umut verici antikanser ve anti-inflamatuar aktivitelere sahip olduğunu ve kanser tedavisinde öncü bir molekül olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.
Konu terimleri: Kemoterapi, Toksiko Tanıtıtım
Phytomedicine, çeşitli bitki türevli bileşiklerin 1 pro-apoptotik ve anti-proliferatif aktivitelerinden dolayı, çeşitli kanser türlerinin tedavisinde ve kemoprevensiyonunda yoğun bir şekilde kullanılmıştır . Mevcut antikanser ilaçları arasında, 1940 ve 2002 yılları arasında kanser tedavisi için onaylanan ilaçların %60'ından fazlası ya doğal ürünler ya da doğal ürünlere dayalı formülasyonlar olmuştur; diğer herhangi bir ilaç geliştirme alanından daha yüksek bir oran 2 .
Lübnan Sediri ( Cedrus libani, C. libani ), Lübnan ve Suriye'nin Akdeniz dağlarının yanı sıra Türkiye'nin Toros Dağları'na özgü bir kozalaklı ağaç türüdür 3 . Ait Etnobotanik ve geleneksel kullanımları Cedrus onun esansiyel yağ geleneksel tıpta kullanılan sayede cinsi izleri antik çağlara kadar geri 4 . Birkaç Cedrus türünden elde edilen yağların fitokimyasal analizi, steroidlerin, prosiyanidinlerin ve terpenoidlerin ana bileşenler olduğunu ortaya çıkardı 5 , 6 . Bu fitokimyasalların, antikanser 7 , anti-inflamatuar 8 gibi çok çeşitli biyolojik aktivitelere sahip olduğu gösterilmiştir.ve antimikrobiyal etkiler 9 . C. libani'nin odun yağının, K562 insan kronik miyeloid lösemi hücrelerine ve ayrıca çoklu ilaca dirençli lösemi hücrelerine karşı güçlü antitümör etkisine sahip olduğu gösterildi 10 , 11 . Ek olarak, C. libani odun yağı, fetal globin genlerinin 10 ekspresyonunu uyardığı bilinen terminal fazda eritroid farklılaşmasına neden oldu . Dikkat çekici bir şekilde, yağ çapraz direnç göstermedi ve bu nedenle bu fenomen , ilaca dirençli lösemi ve dirençli tümörlerin tedavisinde kullanılan ajanlar olarak formüle edilebilecek umut verici bir doğal aktif bileşik kaynağı olarak C. libani yağlarının itibarını yükseltiyor.10 .
Enflamasyon, istilacı patojenleri ortadan kaldırmak ve iyileşme sürecini başlatmak için bir konak savunma mekanizmasıdır, ancak enflamatuvar mediatörlerin aşırı üretimi, neoplastik transformasyona ve malignitelerin ilerlemesine yol açan kronik enflamasyonla birlikte konak hücrelerde hasara neden olabilir 12 . Bir inflamatuar yanıt sırasında, reaktif oksijen türleri (ROS), reaktif nitrojen türleri (RNS), tümör nekroz faktörü-α (TNF-α) ve PGE 2 13 gibi pro-inflamatuar biyobelirteçler aşırı derecede üretilir . Bu bağlamda, özellikle nitrik oksit RNS (NO), indüklenebilir nitrik oksit sentazı (iNOS) oluşturulmaktadır 14 ve PGE 2 COX-2 ile arakidonik asit metabolitlerinin üretilmiştir 15 . PGE 2anormal hücre bölünmesini arttırmak, apoptozu azaltmak, anjiyogenezi artırmak ve tümör invazivliğini ve metastazı 16 teşvik ettiği gösterilmiştir . Diğer çalışmalar, COX-2'nin aşırı ekspresyonunun, meme, deri, kolon, akciğer ve prostat 17 dahil olmak üzere çeşitli epitelyal hücre kaynaklı kanser türlerinin gelişimi ile yüksek oranda ilişkili olduğunu göstermiştir . Ayrıca, indüklenebilir COX-2 18'in nonsteroidal antiinflamatuar ilaçlar tarafından inhibisyonu, anjiyogenezde bir azalmaya neden olmuştur, dolayısıyla bunların kullanımı tümör progresyonunun ve metastazın inhibisyonuna yol açabilir 19. Genel olarak, steroidler ve steroid olmayan antienflamatuar ilaçlar, iskemik olayların önlenmesi ve ağrı, ateş ve iltihaplanma tedavisi için etkili ilaçlar olarak kabul edilir. Bununla birlikte, bu ilaçlar, gastrointestinal veya kardiyovasküler komplikasyonlar 20 geliştirme açısından önemli bir risk ile ilişkilidir . Bu nedenle, COX-2 aktivitesinin veya ekspresyonunun seçici olarak hedeflenmesi, önemli ölçüde klinik öneme sahiptir.
Laboratuvarımızdaki ön çalışmalar, C. libani odun yağının birkaç insan kanser hücre hattına karşı güçlü antikanser aktivite sergilediğini gösterdi . Ham petrolün analizi, 2-himachalene-7-ol'ün (himachalol; 7-HC), özütün yaklaşık %40'ını oluşturan ana bileşen olduğunu ortaya çıkardı. Bu çalışma, 7-HC'yi izole etmeyi ve çeşitli kanser hücre dizileri üzerindeki antikanser aktivitesini araştırmayı ve ayrıca in vivo ve in vitro anti-inflamatuar özelliklerini değerlendirmeyi amaçlamaktadır .
Git: Sonuçlar
2-himachelen-7-ol'ün ekstraksiyonu ve karakterizasyonu
C. libani ahşabı, sıcak heksan kullanılarak özütlenerek C. libani Yağ Özü, CLOE) koyu bir yağ (%1.95 verim) halinde elde edildi. CLOE'nin GCMS analizi (Tablo 1) yağ ekstraktının yaklaşık %83'ünü oluşturan 30 bileşik tanımladı ve kalan %17, tanımlanamayan birkaç bileşik oluşturdu, bu sayede hiçbirinin %2'den fazla mevcut olmadığı bulundu. Bununla birlikte, özellikle 7-HC (Şek. 1) CLOE'nin %40'ı gibi şaşırtıcı bir konsantrasyonda mevcut olduğu gösterildi. 7-HC'yi izole etme girişiminde, yağ daha sonra silika jel bazlı kolon kromatografisine tabi tutuldu, bu sayede üç fraksiyon (F1, F2 ve F3) heksan:etil asetatın bir gradyan mobil fazı kullanılarak elde edildi. 7-HC, TLC ile gösterildiği gibi 8:2 heksan:etil asetat kullanılarak F2 içinde ayrıştırıldı, burada plakalar anisaldehit ile boyandı ve seskiterpen, Rf değeri 0.78 olan pembe bir nokta olarak göründü . Seskiterpen daha sonra beyaz kristalli bir katı (%97 saflık; Şek. 1). Ana bileşiğin kimliğini ve yapısını NIST11 ve Wiley9 kütle spektral veri tabanı kullanılarak GCMS analizi ile 2-himachelene-7-ol gibi yoluyla doğrulanmıştır 13 (Ek Şekiller NMR spektroskopisi S1 - S7 ). tablo 1
CLOE'nin Gaz Kromatografisi analizi.
| 1 | 4.597 | 0.0692 | β - Pinen |
| 2 | 14.73 | 2.9642 | α-Himakalen |
| 3 | 15.83 | 3.1818 | γ-Himakalen |
| 4 | 16.74 | 3.3695 | β-Himakalen |
| 5 | 17.2 | 0.3641 | Bütillenmiş Hidroksitoluen |
| 6 | 17.23 | 0.4236 | Bütillenmiş Hidroksitoluen |
| 7 | 18.26 | 0.3495 | 1,1,2,2,3,3-Heksametilindan |
| 8 | 20.82 | 0.8447 | 4,4-Dimetil-3-(3-metilbut-3-eniliden)-2-metilenbisiklo[4.1.0]heptan |
| 9 | 22.18 | 0.841 | δ-Himakalen |
| 10 | 23.24 | 40.2246 | 2-Himachalen-7-ol |
| 11 | 23.76 | 2.7206 | 1H-Benzosiklohepten |
| 12 | 25.53 | 7.4441 | dodesil akrilat |
| 13 | 34.25 | 0.9166 | (S)-Fenol, 2-metil-5-(1,2,2-trimetilsiklopentil) |
| 14 | 38.16 | 0.9471 | dibütil ftalat |
| 15 | 53.48 | 0.2794 | metil izopimarat |
| 16 | 53.66 | 0.5158 | Abietadien-18-al |
| 17 | 54.69 | 0.4301 | metil levopimarat |
| 18 | 55.48 | 0.125 | metil abietat |
| 19 | 55.91 | 0.3668 | tetrakozan |
| 20 | 57.02 | 0.5515 | metil 2,7,13 - abietatrienoat |
| 21 | 57.08 | 0.3106 | oktadekan |
| 22 | 57.8 | 0.3232 | trikontametilsiklopentadekasiloksan |
| 23 | 57.97 | 0.1247 | Eikozan |
| 24 | 58.76 | 0.2048 | Eikozan |
| 25 | 59.48 | 2.7469 | (Z)-9-Oktadesenamid |
| 26 | 60.1 | 0.2388 | tetrakosametil-siklododekasiloksan |
| 27 | 65.36 | 2.3188 | 3β-Ergost-5-en-3-ol |
| 28 | 67.21 | 7.8082 | gama sitosterol |
| 29 | 68.15 | 0,4482 | (24 R)-Ergost-4-tr-3-bir |
| 30 | 70.49 | 1.37 | Stigmast-4-tr-3-bir |
Ayrı bir pencerede aç
Şekil 1
7-HC'nin yapısı ve X-ışını kristal yapısı.
7-HC'nin doza bağımlı in vitro sitotoksisitesi
7-HC'nin sitotoksik etkisi, birkaç insan kanser hücre hattı üzerinde incelenmiştir. Sonuçlar gösterdi (Şek. 2) 25 ug/mL'de proliferasyonun neredeyse tamamen inhibisyonu ile SF-268, HT-29 ve Caco-2 hücre dizilerinde hücre hayatta kalmasında doza bağlı bir azalma. IC 50 dört kanseri hücre hatlarında 7-HC ve Sisplatin değerleri Tablo l'de sunulmuştur 2. Karşılaştırılabilir IC 50 7-HC ve Sisplatin değerleri SF-268 ve Caco-2 hücreleri için de gözlenmiştir. HT-29 Sisplatin için dayanıklılık sergileyen ancak bununla birlikte, 7-HC 8-10 kat daha güçlü bir IC oldu 50 9.1-10.1 ug / mL. SK-OV-3 hücreleri, bir IC ile tedaviye çok dirençli 50 değeri> 50 ug / mL.
Ayrı bir pencerede aç
şekil 2
7-HC'nin hücre sağkalımı üzerindeki sitotoksik etkisi. SF-268 ( A ), Caco-2 ( B ), HT-29 ( C ) ve Sk-OV-3 ( D ) hücreleri, 24 ve 48 saat boyunca çeşitli 7-HC konsantrasyonları ile işleme tabi tutuldu. Veriler, 3 deneyden elde edilen ortalama ± SEM olarak sunulmuştur. *P < 0.05'e karşılık . DMSO grubu. Tablo 2
IC 50 (ug / mL), farklı insan kanser hücresi türlerine karşı 7-HC ve Sisplatin değerleri.
| 24 saat | 9,2 ± 0,21 | 13,9 ± 0,76 | 9,6 ± 1,40 | 16.7 ± 2.29 | 9,1 ± 0,38 | >100 | >50 | >100 |
| 48 saat | 8.1 ± 0.29 | 5,9 ± 0,32 | 9,9 ± 0,45 | 9,3 ± 0,21 | 10.1 ± 0.36 | 78,8 ± 5,68 | >50 | >100 |
7-HC ve Cisplatin'in birlikte tedavisinin 24 ve 48 saat boyunca dört hücre hattı üzerindeki etkisi incelendi (Tablo 3). Sonuçlar, Cisplatin ve 7-HC'nin en yüksek konsantrasyonlarda (sırasıyla 5 ve 10 μg/mL) birlikte tedavisinin, tek bir tedaviye kıyasla SF-268, Caco-2 ve HT-29 hücreleri üzerinde önemli bir sinerjistik sitotoksik etki uyguladığını göstermektedir. Her ilacın (Tablolar 4, ,5).5). SF-268 hücrelerinin bu kombine tedaviye en duyarlı olduğu bulundu. Her iki ilacın sinerjistik inhibitör etkisi, Sk-OV-3 hücrelerinde gözlenmedi.
Tablo 3
7-HC, Cisplatin ve bunların kombinasyonlarının insan kanser hücresi sağkalımı üzerindeki etkisi.
| Cis (2.5) | 90.1 ± 4.6 | 73,0 ± 1,5 | 89.8 ± 4.4 | 87.9 ± 3.1 | 92.6 ± 3.6 | 89.7 ± 2.8 | 97.9 ± 1.9 | 93,7 ± 1,7 |
| Cis (5) | 79,0 ± 4,8 | 61,7 ± 3,3 | 68,3 ± 1,9 | 50,1 ± 2,9 | 88.9 ± 3.4 | 88.7 ± 2.3 | 95.6 ± 2.2 | 91.7 ± 1.8 |
| 7-HC (5) | 86,2 ± 2,9 | 80,1 ± 2,1 | 85,1 ± 4,1 | 87,3 ± 3,2 | 86.8 ± 3.7 | 89,6 ± 2,7 | 97.2 ± 2.8 | 99.1 ± 2.5 |
| 7-HC (10) | 43,7 ± 2,5 | 36,8 ± 2,4 | 49.7 ± 3.8 | 49.2 ± 3.4 | 46,5 ± 4,1 | 54,3 ± 3,0 | 97.4 ± 3.2 | 97.3 ± 2.3 |
| Cis (2.5) + 7-HC (5) | 81,4 ± 2,4 | 57,3 ± 1,8 a,b | 78,4 ± 2,1 | 74,6 ± 3,9 | 79,9 ± 2,5 | 82,2 ± 3,9 | 95.6 ± 1.5 | 89.4 ± 3.2 |
| Cis (2.5) + 7-HC (10) | 35,3 ± 2,3 bir | 12.4 ± 3.9 a,b | 41,2 ± 2,5 bir | 36,4 ± 2,8 bir | 35,6 ± 3,9 bir | 44,1 ± 2,8 a,b | 93.9 ± 2.5 | 88,4 ± 4,1 |
| Cis (5) + 7-HC (5) | 66,3 ± 3,2 a,b | 44,1 ± 2,9 a,b | 59,3 ± 4,3 b | 50,9 ± 3,1 b | 76,2 ± 2,8 bir | 78.9 ± 3.8 | 94.0 ± 1.8 | 86,7 ± 2,6 |
| Cis (5) + 7-HC (10) | 26,7 ± 1,9 a,b | 7,7 ± 1,3 a,b | 27,1 ± 2,6 a,b | 23.4 ± 3.9 a,b | 36,6 ± 2,2 bir | 40,1 ± 3,5 a,b | 92.8 ± 2.7 | 87.7 ± 2.8 |
Tablo 4
7-HC ve sisplatin tedavisinin kombinasyon indeksi.
| Kombo 1: Cis (2.5) + 7-HC (5) | 1,63 | 1.79 | 1.87 | 0.32 |
| Kombo 2: Cis (2.5) + 7-HC (10) | 0.81 | 1.18 | 1.19 | 0.31 |
| Kombo 3: Cis (5) + 7-HC (5) | 1.59 | 1.23 | 1.87 | 0.39 |
| Kombo 4: Cis (5) + 7-HC (10) | 0.68 | 0.96 | 1.12 | 0,52 |
Çeşitli inhibitör etkilerde ekstrapolasyonlu CI değerleri.
| Fa | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0,2 | 0.25 | 0,3 | 0.35 | 0,4 | 0.45 | 0,5 | 0,55 | 0,6 | 0.65 | 0.7 | 0.75 | 0,8 | 0.85 | 0.9 | 0.95 | 0.97 |
| SF-268 | 4.5 | 3.3 | 2.8 | 2.4 | 2.2 | 2.0 | 1.8 | 1.7 | 1.6 | 1.5 | 1.4 | 1.3 | 1.2 | 1.1 | 1.0 | 0.9 | 0,8 | 0.7 | 0,6 | 0,5 |
| kako-2 | 3.1 | 2.5 | 2.2 | 2.0 | 1.8 | 1.7 | 1.6 | 1.5 | 1.4 | 1.3 | 1.2 | 1.2 | 1.1 | 1.0 | 0.9 | 0.9 | 0,8 | 0.7 | 0,6 | 0,5 |
| HT-29 | 3.7 | 2.5 | 2.0 | 1.8 | 1.6 | 1.5 | 1.4 | 1.3 | 1.3 | 1.2 | 1.2 | 1.1 | 1.1 | 1.0 | 0.9 | 0.9 | 0.9 | 0,8 | 0.7 | 0,6 |
| SK-OV-3 | 0.04 | 0,3 | 0.9 | 2.5 | 5.6 | 11 | 21 | 40 | 73 | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ | 99+ |
Sıçanlarda kronik inflamasyonun inhibisyonu
7-HC, doza bağımlı olmayan bir şekilde kullanılan tüm konsantrasyonlarda sıçanlarda kronik iltihabı önemli ölçüde inhibe etti (Tablo 6). 100 mg/kg 7-HC dozu, %63.1 pençe ödemi inhibisyonu ile Diklofenak (10 mg/kg) ile karşılaştırılabilir etkiler göstermiştir. Artan 7-HC konsantrasyonlarının, LPS ile aktive olan sıçan periferik kan mononükleer hücrelerinde (PBMC) COX-2'nin protein ekspresyonu seviyesi üzerindeki etkisi araştırıldı. Western blot analizi (Şek. 3; kırpılmış Western Blot'lar), 7-HC'nin, kontrol grubuna kıyasla COX-2 ekspresyonunu belirgin şekilde inhibe ettiğini gösterdi (tam Western Blot'lar için lütfen Ek Şekiller S8 , S9 )'a bakın. 25 ve 50 µg/mL konsantrasyonlarda COX-2 protein indüksiyonunun önemli ölçüde baskılandığı gözlemlendi.
Tablo 6
7-HC intraperitoneal tedavinin sıçanlarda formalin kaynaklı kronik inflamasyon üzerindeki etkisi.
| Kontrol (DMSO) | 1.25 ± 0.112 | %0 |
| Diklofenak (10 mg/kg) | 0,498 ± 0,067** | %60,2 |
| 7-HC (10 mg/kg) | 0,740 ± 0,051** | %40.9 |
| 7-HC (25 mg/kg) | 0,760 ± 0,123** | %39.3 |
| 7-HC (50 mg/kg) | 0,304 ± 0,075* | %75.7 |
| 7-HC (100 mg/kg) | 0,462 ± 0,121** | %63.1 |
Figür 3
7-HC, sıçan monositlerinde (kırpılmış Western Blot'lar) LPS ile indüklenen COX-2 protein ekspresyonunu bloke etti. PMBC, tek başına araç kontrolü ile, tek başına LPS (100 ng/ml) ile veya 6 için LPS (100 ng/mL) ile stimülasyondan önce 30 dakika süreyle 5, 10, 25 veya 50 μg/mL 7-HC ile inkübe edildi. h ( n = 3).
7-HC'nin sıçan monositlerine karşı aktivitesi
WST kullanarak 7-HC'nin sitotoksik etkisi (Şekil 1). 4) 6 saatlik tedaviden sonra izole monositler üzerinde test edildi. Sonuçlar, 2-himachalen-7-ol'ün 10 µg/mL, 25 µg/mL ve 50 µg/mL konsantrasyonlarda hücre sağkalımında sırasıyla sadece %7.7, %11.5 ve %12.7 azalmaya neden olduğunu ortaya koydu.
Şekil 4
Tedaviden 6 saat sonra izole edilmiş sıçan monositlerine karşı WST kullanılarak 7-HC aktivitesi.
Git: Tartışma
CLOE'nin fitokimyasal analizi, seskiterpenlerin ana bileşenler olduğunu, 7-HC (%40), α-himachalen (%2.96), β-himachalen (%3.18) ve γ-himachalen'in (%3.37) ana bileşenler olduğunu ortaya koydu. Yukarıda bahsedilen seskiterpenlerin benzer bir kalitatif bileşimi daha önce Lübnan sedir ağacı yağında 21 rapor edilmişti . Bununla birlikte, bu çalışmada, CLOE'de bulunan α-himachalen, β-himachalene ve γ-himachalene yüzde bileşimi, daha önce bildirilen öz odun yağından daha düşüktü 21 . Bu niceliksel farklılık, coğrafi konum, nem, rakım seviyesi, toplama süresi, ekstraksiyon tekniği ve bitki yaşı gibi faktörlere bağlanabilir.
Bu çalışmada, 7-HC'nin %97 saflıkta CLOE'den izolasyonunu sağlayan bir kromatografik prosedürü optimize ettik. Arıtılmış seskiterpen daha sonra çeşitli kanser hücrelerine karşı in vitro sitotoksik etkilerinin yanı sıra in vivo ve in vitro anti-inflamatuar aktivitesi açısından değerlendirildi. Sonuçlar, 7-HC'nin, belirli kanser hücre hatlarına karşı seçiciliği gösteren, Sk-OV-3 dışında test edilen tüm kanser hücrelerine karşı doza bağlı bir sitotoksisite uyguladığını gösterdi. Bu antikanser etkisi, CLOE'nin insan lösemi hücrelerine karşı daha önce bildirilen aktivitesinin 7-HC 11'e atfedilebileceğini düşündürmektedir.. Ek olarak, laboratuvarımızdaki daha önceki çalışmalar, yabani havuçtan izole edilen 7-HC'nin bir izomeri olan β-2-himachalene-6-ol'ün, birkaç insan ve murin kanser hücre hattına karşı güçlü antikanser aktivite gösterdiğini gösterdi 22 , 23 . β-2-Himachalene-6-ol'ün ayrıca farelerde 24 DMBA/TPA cilt karsinogenezine ve dimetilhidrazin kaynaklı kolon karsinogenezine karşı önemli bir anti-tümör teşvik edici etki gösterdiği bulunmuştur .
En yaygın olarak kullanılan antineoplastik ajan olan sisplatin, antikanser aktivitesine DNA hasarı, apoptotik yolların aktivasyonu ve inflamasyon ve oksidatif stres 25 yoluyla hücrelere zarar verme dahil olmak üzere çeşitli sitotoksik mekanizmalar aracılığıyla aracılık eder . Mevcut sonuçlar, HT-29 hücreleri, Cisplatin (IC dirençli olduğunu göstermiştir 50 > 100 ug / ml ve 24 ve 48 saatte sırasıyla 78.78 ug / ml) 7-HC kuvvetli doza bağımlı anti-kanser aktivitesi sergilerken, (IC 50 = sırasıyla 24 ve 48 saatte 9.122 µg/mL ve 10.11 µg/mL). SK-OV-3 hücreleri, ancak 7-HC ve cisplatin tedavisinin hem (IC karşı dirençli olduğu gösterilmiştir 50 > 100 ug / mL). IC 50aynı kanser hücre dizileri üzerindeki Cisplatin değerleri literatür 26 , 27 ile uyumludur . İyileştirilmiş bir terapötik sonuç elde etme girişiminde, 4 hücre hattının tümü, 7-HC ve geleneksel antineoplastik ilaç Cisplatin'in bir kombinasyonuna tabi tutuldu (Tablo 3). İlaç Kombinasyon İndeksi (CI), yaygın olarak kullanılan Loewe katkı modeli ve CompuSyn yazılımı 28 kullanılarak belirlendi . Kısaca, 1'e eşit CI değerleri toplamsallığı, 1'in altındaki değerler sinerjiyi, 1'in üzerindeki değerler ise antagonizma 28'i gösterir . Tablo 4sinerjizme yol açan en çok arzu edilen kombinasyonların Kombinasyon 2: Cis(2.5) + 7-HC(10) ve Kombinasyon 4: Cis(5) + 7-HC(10)'a karşılık geldiğini göstermektedir. Ek olarak, Loewe modeli 28 tahmin eder (Tablo 5) 7-HC ve Cisplatin kombinasyonları ile %75 hücre inhibisyonuna (SF-268, Caco-2 ve HT-29) veya üzeri yol açan sinerjizmin meydana geleceği. Sonuçlar, yüksek bir 7-HC konsantrasyonundan (10 µg/mL) ve düşük bir Cisplatin konsantrasyonundan (2.5 µg/mL) oluşan kombinasyonların, sinerjistik yollar yoluyla önemli hücre inhibisyonunu indükleyeceğini ortaya koymaktadır. Böyle bir sinerjistik etki, kanserli hücrelere 25 karşı gücü korurken doz sınırlayıcı nefrotoksisiteyi ortadan kaldırarak Cisplatin'in olumsuz etkilerini azaltmada kullanılabilir . Tablo 4ayrıca dört ilaç kombinasyonunun hepsinin Sk-OV-3 hücre hattına karşı sinerjistik bir etki uyguladığını gösterir, ancak sinerjizm yoluyla hücre inhibisyonu %15'i geçmediği için bu sonuçlar önemsizdir. Literatürde rapor edildiği gibi, sinerjistik etkiler, SF-268, Caco-2 ve HT-29 hücre hatlarına 28 karşı Kombinasyonlar (2) ve (4) ile gözlemlendiği gibi önemli hücre inhibisyonu eşlik ettiğinde esas olarak arzu edilir .
Her iki elde edilen kanıt önemli bir vücut in vivo ve in vitro çalışmalar seskiter, alkaloidler, fenol ve flavonoidler içeren bu bitki türevi özler, TNF-a, NF-KB dahil olmak üzere çeşitli iltihabik biyolojik belirteçler seviyelerini kontrol ederek, anti-enflamatuar aktivite gösteren rapor , NO, iNOS ve COX-2 29 . Siklooksijenaz-2 (COX-2), LPS veya sitokinler tarafından indüklenen önemli bir pro-inflamatuar enzimdir ve inflamasyon, maligniteler ve anjiyogenez ile ilişkili olduğu bulunmuştur 30. Bu nedenle, COX-2 proteini üzerinde inhibitör etkisi olan yeni bir bileşiğin belirlenmesi, iltihaplanma ile ilgili bozuklukların tedavisi için önemli bir gereklilik olarak kabul edilmektedir. Bu çalışmanın sonuçları, 7-HC'nin sıçanlarda kronik inflamasyona karşı önemli anti-inflamatuar aktiviteye sahip olduğunu göstermektedir. Kininler, prostaglandinler ve serotonin gibi çeşitli inflamatuar mediatörler, subplantar formalin enjeksiyonunun neden olduğu ödem oluşumunu açıklayabilir 31. Prostaglandinlerin artan sentezi, membran fosfolipidlerinden araşidonik asidin artan salınımına ve/veya COX-2'nin yukarı regülasyonuna bağlı olabilir. Western blot analizi, sıçan monositlerinin LPS tedavisinden sonra COX-2 üretiminin belirgin şekilde yükseldiğini gösterdi. Bununla birlikte, 7-HC'nin farklı dozlarının uygulanması, doza bağlı bir şekilde LPS tarafından COX-2'nin protein ekspresyonunu inhibe etti. Bu nedenle, 7-HC'nin anti-inflamatuar aktivitesine kısmen COX-2 ekspresyonunun baskılanması aracılık eder. Önceki raporlar ahşap türetilen himachalol, ortaya C deodara önemli ölçüde anti-alerjik bir aktivite sergiledi ve bir büyük anti-spazmodik bir bileşen olarak tespit edilmiştir 32. 7-HC'nin sıçan monositlerine karşı sitotoksik etkisinin, 10 µg/mL, 25 µg/mL ve 50 µg/mL konsantrasyonlarında hücre sağkalımında sırasıyla %7.7, %11.5 ve %12.7 azalma ile önemsiz olduğu gösterilmiştir. Bu, 7-HC'nin izole edilmiş sıçan monositleri üzerinde (seçilen konsantrasyonlarda) küçük bir sitotoksik etkiye sahip olduğunu gösterir. Bu sonuç aynı zamanda normal hücrelere göre kanser hücreleri üzerinde 2-himachalen-7-ol'ün seçiciliğini de desteklemektedir.
Git: Çözüm
C. libani uçucu yağı özütlendi ve GCMS ile analiz edildi, burada 2-himahkalen-7-ol (7-HC)'nin yağın %40'ını oluşturduğu bulundu. 7-HC, beyaz kristalli bir katı ve %97 saflık halinde seskiterpenler verecek şekilde silika jel kolon kromatografisi kullanılarak izole edildi. 7-HC, SF-268 (IC karşı kuvvetli sitotoksik aktivite gösterdi 50 -29 HT (IC 8.1 ug / mL), 50 10.1 ug / mL) ve Caco-2 (IC 509,9 μg/mL). Ek olarak, HT-29, Cisplatin'e direnç gösterirken, 7-HC 8-10 kat daha güçlüydü. 7-HC:Cisplatin (2:1 ve 4:1 oranı) kombinasyonları ile birlikte tedavi, SF-268, HT-29 ve Caco-2 hücrelerine karşı önemli bir sinerjistik anti-proliferatif etki gösterdi. 7-HC ayrıca sıçanlarda formalin ile indüklenen pençe ödeminde önemli anti-inflamatuar etki ve ayrıca izole edilmiş sıçan monositlerinde LPS ile indüklenen COX-2 protein ekspresyonunun doza bağlı inhibisyonu sergilemiştir. Mevcut çalışma, 7-HC'nin umut verici antikanser ve anti-inflamatuar aktivitelere sahip olduğunu ve kanser tedavisinde öncü bir molekül olarak hizmet edebileceğini göstermektedir.
Git: Malzemeler ve yöntemler
Genel deneysel prosedürler
UV spektrumları, bir Shimadzu UV2450 spektrofotometresi kullanılarak kaydedildi. 1 , H, 13 ° C ve 2D NMR spektrumları, dahili bir referans olarak TMS kullanılarak bir Bruker Avanc3-400 MHz NMR spektrometresi veya Varian Mercury-300 NMR spektrometresi kullanılarak elde edildi. TLC analizi, silika jel plakaları (ACROS Organics, New Jersey, ABD) üzerinde gerçekleştirilmiştir. Kolon kromatografisi için silika jel 60 (230-400 göz veya 70-230 göz, 47 cm x 2.5 cm, ACROS organik, New Jersey, ABD) kullanıldı. GCMS analizi, kaynaşmış silika HP5-MS %5 fenil metil siloksan başlık sütunu (30 m x 0.25 mm id, film kalınlığı 0.25) ile donatılmış ve doğrudan MS'ye bağlanmış Hewlett Packard, HP6890 serisi kullanılarak gerçekleştirildi. ELIZA mikroplaka okuyucusu BioTek'ten (Winooski, VT, ABD) satın alındı.
kimyasallar ve tepkimeler
Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM) ve dimetil sülfoksit (DMSO), Sigma'dan (St. Louis, Missouri, ABD) satın alındı. PVDF membranları Pall Corporation'dan (Ann Arbor, MI, ABD) satın alındı. Aktin ve Cox-2 antikorları Abcam'dan (Cambridge, MA, ABD) satın alındı. HRP-bağlı ikincil antikorlar, Promega Corporation'dan (Madison, WI, ABD) satın alındı. ECL kiti Abcam'dan (Milton, Cambridge, İngiltere) satın alındı. Fetal bovin serum (FBS), penisilin-streptomisin, glisin, lizis tampon solüsyonu, fosfat tamponlu salin (PBS), bovin serum albümini (BSA), Tween 20 ® ile tris-tamponlu salin(TBST), HEPES tamponu, sodyum dodesil sülfat (SDS), kuyu plakaları, pentan, dietil eter, heksan, etil asetat, anisaldehit, etanol, paraformaldehit, tripan mavisi, Ficoll (Histopaque-1077). Kristal viyole, tripsin, d 6 -DMSO ve CDC! 3 , aksi belirtilmedikçe, Sigma'dan (St. Louis, Missouri, ABD) 'dan satın alınmıştır.
Cedrus libani çıkarma
Sedir ağacı, sonraki sezonda büyümelerini artırmak için ağaçların budandığı Şubat ayı boyunca olgun sedir ağaçlarından Kuzey Lübnan'dan toplandı. Budanmış odun parçaları Amioun Belediyesi, El-Koura'dan izin alındıktan sonra toplandı. Ağaç, “Dünyanın Şifalı Bitkileri” 33 kitabında açıklanan özelliklerine göre tanımlanmıştır.. Bir örnek, (ID 2015-0019) Lübnan'daki Lübnan Amerikan Üniversitesi Sanat ve Bilim Okulu'na yatırıldı. Odun numunesi gölgede havayla kurutuldu, parçalandı ve heksan ekstraksiyonuna tabi tutuldu (72 saat). Filtrelenen ekstrakt, indirgenmiş basınç altında kuruyana kadar buharlaştırıldı ve kalan yağ (CLOE), susuz sodyum sülfat (verim %1.95) üzerinde kurutuldu ve kullanıma kadar 4 °C'de kapalı bir amber şişede saklandı. CLOE (5 g), üç fraksiyon (9:1, 600 mL, F1; 8:2, 600 mL, F2) toplamak için bir heksan/etil asetat gradyan mobil fazı kullanılarak bir silika jel kolonu (230-400 ağ) üzerinde kromatografiye tabi tutuldu. 7:3, 500+ mL, F3). Fraksiyonlar, mobil faz olarak heksan:etil asetat (8:2) kullanılarak TLC ile analiz edildi ve plakalar, bir Rf ile pembe bir nokta olarak 2-himachelen-7-ol'ün göründüğü %2 anisaldehit ile boyandı.0.78 değeri. F2 (1.8 g) daha sonra asetonitril ile karıştırıldı ve 2-himachelen-7-ol'ü beyaz kristalli bir katı (1.2 g, %97 saflık) halinde yeniden kristalleştirmek için dondurucuda 3 gün saklandı. 13 CDC C NMR 75 MHz 3 ö 133.4, 125.6, 76.2, 51.9, 43.6, 41.4, 38.4, 36.4, 33.5, 32.7, 31.7, 26.7, 23.6, 22.3 ve 19.9 ppm.
Gaz Kromatografisi ve Kütle Spektrometrisi (GC-MS) analizi
CLOE, fraksiyonlar ve 7-HC, taşıyıcı gaz olarak helyum kullanılarak bölünmesiz enjeksiyon ve 1.2 mL/dakika akış hızı kullanılarak GC-MS yoluyla analiz edildi. Sıcaklık programı 70 °C'de 2.0 dakika, 8 °C/dk'da 70'den 130 °C'ye ve 5 dakika, 130'dan 180 °C'ye 2 °C/dk'da ve 10 dakika, 180'den 220 °C'de 15 °C/dk'da ve 2 dakika ve ardından 220'den 280 °C'de 15 °C/dk'da tutun ve 22 dakika tutun. Tüm bileşiklerin ön tanımlaması, kütle spektrumları literatürle (NIST11 ve Wiley9) karşılaştırılarak yapıldı. Yüzde bileşimi, GC pik alanlarından hesaplandı. GC-MS: CHC 3 m / z : 222.2 (1), 204.2 (46), 189.2 (17), 175.1 (4), 161.1 (20), 147.1 (16), 133.1 (34), 119.1 (100), 105.1 (44), 91.1 (41), 77.1 (21), 69.1 (15) ve 55.1 (16).
Hücre hayatta kalma tahlili
Bu çalışmada dört insan kanser hücre dizisi kullanıldı: SF-268 (insan astrositoma hücre dizisi), Caco-2 (insan kolon kanseri hücre dizisi), HT-29 (insan kolon kanseri hücre dizisi) ve Sk-OV-3 ( insan yumurtalık kanseri hücre hattı). SF-268, Sk-OV-3, Dulbecco'nun modifiye Eagle's ortamında (DMEM) büyütülürken, Caco-2 ve HT-29, Roswell Park Memorial Institute Medium'da (RPMI) muhafaza edildi. Her iki ortam da %10 Fetal Bovine Serum (FBS) ve 100 μg/mL streptomisin ve 100 U/mL penisilin içeriyordu. Tüm hücre çizgileri, CO, 37 ° C'de, nemlendirilmiş bir odada kuluçkaya bırakıldı ve% 5 bulundu 2 . Hücreler (1 × 10 4hücre/mL) 24 saat 96 oyuklu plakalara kaplandı ve daha sonra DMSO (1, 5, 10, 15 ve 25 ug/mL) içinde 7-HC veya 24 saat ve 48 saat sisplatin ile işlendi. Ek olarak, 7-HC (2,5 ve 5 μg/mL) ve Cisplatin (5 ve 10 μg/mL) ile eş zamanlı tedavi uygulandı. Hücre canlılığı, WST-1 (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, ABD) kullanılarak ölçüldü. Absorbans, Multiskan FC mikroplaka ELISA okuyucusu (Thermo fisher Scientific, Rockford, IL, ABD) kullanılarak 450 nm'de ölçüldü. Hücreler iki kopya halinde kaplandı ve deneyler üç kez tekrarlandı.
Monositler izolasyonu ve stimülasyonu
Deney, Laboratuar Hayvanları Refahı Ofisi (NIH, PHS Policy on Human Care and Use of Laboratuar Hayvanları, ABD 2015) tarafından belirlenen ve Lübnan Amerikan Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylanan uluslararası kabul görmüş ilkelere uygun olarak gerçekleştirildi. Daha önce tarif edildiği gibi, taze periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC'ler), monositler ve lenfositler oluşan izolasyonu gerçekleştirilmiştir 26(6 haftalık; 250 g ağırlığında) sağlıklı genç erkek Sprague Dawley sıçanlarının kan örneklerinden ve EDTA ile ön işleme tabi tutulmuştur. EDTA ile muamele edilmiş kan (4 mM), eşit steril hacimde ılık PBS ile seyreltildi ve Ficoll üzerinde santrifüjlendi. Ara yüzeyde oluşan ve monosit hücrelerinin çoğunu içeren buffy coat, steril bir pipet ile dikkatlice çıkarılır ve steril 50 ml'lik bir konik tüpe aktarılır ve santrifüjleme yoluyla iki kez steril ılık PBS ile yıkanır. Hücreler daha sonra, altı oyuklu kültür plakaları içinde FBS (% 10), penisilin (100 U / ml) ve streptomisin (100 ug / ml) ile desteklenmiş 2 ml RPMI ortamı içinde tohumlanmıştır (4 x 10 5 hücre / cm 2 ) ve izin verilen yapışan bir gece boyunca (37 ° C,% 5 CO 2). Yapışmayan hücreler (esas olarak lenfositler), ılık steril PBS ile (üç kez) kuvvetli yıkama ile çıkarıldı. Elde edilen monositler/makrofajlar %95 saflığı aştı. Hücre canlılığını belirlemek için tripan mavisi dışlama kullanıldı. Hücre canlılığını belirlemek için tripan mavisi dışlama kullanıldı. Monositler, bakteriyel LPS (100 ng/mL) varlığında veya yokluğunda ve artan konsantrasyonlarda 7-HC (5, 10, 25) varlığında altı oyuklu plakalarda 6 saat boyunca toplam 2 mL'lik bir hacimde RPMI içermeyen ortamda kültürlendi. , 50 ug/mL). 7-HC, LPS ile stimülasyondan 30 dakika önce ilave edildi.
Western blot analizi
PBMC'ler buz üzerinde toplandı, PBS ile yıkandı, lizis tamponu ile parçalandı ve 4 °C'de 10 dakika boyunca 12.000 g'de santrifüjlendi. Hücre lizatı 100 °C'de 5 dakika ısıtıldı ve protein içeriği Bio-Rad protein tahlili (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD) kullanılarak belirlendi. Proteinlerin eşit konsantrasyonları %10 SDS-PAGE'ye yüklendi ve daha sonra PVDF membranına (Pall Corporation, Ann Arbor, ABD) aktarıldı ve blokaj tamponu (1 x TBS, %0.1 Tween-20, %5 yağsız süt) ile bloke edildi. 2 saat Zarlar daha sonra Actin ve Cox-2'ye karşı birincil antikorlarla gece boyunca 4 °C'de problanmıştır. Birincil antikorlar daha sonra 2 saat boyunca TBST ile yıkandı ve zarlar, 1 saat boyunca yaban turpu peroksidaz (HRP)-bağlı ikincil antikorlar ile işlendi ve ardından TBST ile yıkandı. Protein tespiti, kemilüminesans ECL kiti kullanılarak yapıldı. Nihayet,
Monositler hücre hayatta kalma tahlili
Fare monositler FBS (% 10), penisilin (100 U / ml) ve streptomisin (100 ug / ml) ile takviye edilmiş RPMI ortamında 12 oyuklu plakalara plakalanır ve bir gece yapışmaya bırakılmış (37 ° C, 5% CO 2 ) 24 saat Hücreler daha sonra artan konsantrasyonlarda 7-HC (10, 25 ve 50 μg/mL) ile 6 saat süreyle işleme tabi tutuldu. Hücre canlılığı, WST-1 (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, ABD) kullanılarak ölçüldü. Absorbans, Multiskan FC mikroplaka ELISA okuyucusu (Thermo fisher Scientific, Rockford, IL, ABD) kullanılarak 450 nm'de ölçüldü. Hücreler iki kopya halinde kaplandı ve deneyler üç kez tekrarlandı.
Formalin kaynaklı pençe ödemi
Sprague Dawley sıçanları, her biri altı hayvandan oluşan altı gruba ayrıldı. Tüm gruplarda, sağ arka pençeye 34 20 uL %2 formalin subplantar enjeksiyonu ile kronik enflamasyon üretildi . Formalin enjeksiyonundan otuz dakika önce, dört grup salin içinde 10, 25, 50 veya 100 mg/kg VA konsantrasyonunda 7-HC (ip) aldı, bir grup standart referans ilaç diklofenak (10 mg/Kg VA, ip) ve bir grup negatif kontrol olarak görev yaptı. 7-HC ve diklofenak uygulamasına arka arkaya 6 gün boyunca günde bir kez devam edildi. Pençe kalınlığı, formalin enjeksiyonundan 31 önce ve 6 gün sonra bir Vernier kumpas kullanılarak ölçüldü . Pençe kalınlığındaki artış şu formül kullanılarak hesaplanmıştır: [P t – P 0 ]; nerede Ptformalin enjeksiyonundan 6 gün sonra pençenin kalınlığıdır ve P 0 , 0 zamanındaki pençe kalınlığıdır. İnhibisyon yüzdesi şu formül kullanılarak hesaplanmıştır: [(C − T)/C × 100]; burada C , pozitif kontrolün pençe kalınlığındaki artıştır ve T , tedavilerinkidir.
istatistiksel analiz
Sonuçlar, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak istatistiksel anlamlılık açısından analiz edildi. Her grup içinde test edilen farklı parametrelerin değerleri, ortalama ± SEM olarak sunulur. Tüm veriler istatistiksel paket SPSS 18 ile analiz edildi ve p-değeri < 0.05 ise gruplar arasındaki farklılıklar istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. IC 50 değerleri Windows için Graph Pad Prism 5.0 sürümü yazılımın kullanımı ile doğrusal olmayan regresyon eğrisi kullanılarak hesaplandı.
Git: Ek bilgi
Cedrus Libani'den (1.1M, docx) izole edilen 2-Himachelen-7-ol'ün Antikanser ve Antiinflamatuar Aktivitelerinin In Vitro ve In Vivo Değerlendirilmesi
Git: Teşekkür
Lübnan Amerikan Üniversitesi'ndeki Fen Edebiyat Fakültesi ve Eczacılık Fakültesi'ne, bu yazıda açıklanan analizi gerçekleştirmek için finansman ve olanaklar sağladığı için teşekkür ederiz. In vivo deneylerde yardımcı olan Bay Jean Karam'a özel teşekkürler .
Git: Yazar Katkıları
Yazarlar, Andree Elias, Wassim N. Shebaby, Bilal Nehme, Wissam Faour, Bassem S. Bassil, Joelle El Hakim, Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Mohamad Mroueh, Costantine Daher ve Robin I. Taleb, sahip olduklarını beyan ederler. tümü, katkıları katkıda bulunan yazarlardan biri olarak bağlantılarını garanti ettiği ölçüde, bu yazıda önemli ölçüde katkıda bulunmuştur. Joelle El Hakim, Bilal Nehme, Bassem Bassil ve Robin Taleb, 7-HC'nin ekstraksiyonu, izolasyonu ve yapısal karakterizasyonunu gerçekleştirdi. Andree Elias, Joelle El Hakim, Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Wassim Shebaby, Mohamad Mroueh ve Costantine Daher hücre hayatta kalma deneylerini gerçekleştirdi. Andree Elias, Wassim N. Shebaby ve Wissam Faour, monositlerin izolasyonunu ve stimülasyonunu gerçekleştirdi. Andree Elias, Joelle El Hakim, Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Wassim Shebaby, Mohamad Mroueh ve Costantine Daher western blot analizini gerçekleştirdi. Wassim Shebaby, Robin Taleb ve Costantine Daher, monosit hücre hayatta kalma tahlilini gerçekleştirdi. İlaç Kombinasyon İndeksi Robin Taleb tarafından hesaplanmıştır. Rita Iskandar, Nahia Dib-Jalbout, Mohamad Mroueh ve Costantine Daher, formalin kaynaklı pençe ödemi iltihabı deneyini gerçekleştirdi. Şekil ve tablolar Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından hazırlanmıştır. El yazması Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından yazıldı ve Robin Taleb, Costantine Daher ve Mohamad Mroueh tarafından düzenlendi. Mohamad Mroueh ve Costantine Daher, formalin kaynaklı pençe ödemi iltihabı deneyini gerçekleştirdi. Şekil ve tablolar Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından hazırlanmıştır. El yazması Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından yazıldı ve Robin Taleb, Costantine Daher ve Mohamad Mroueh tarafından düzenlendi. Mohamad Mroueh ve Costantine Daher, formalin kaynaklı pençe ödemi iltihabı deneyini gerçekleştirdi. Şekil ve tablolar Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından hazırlanmıştır. El yazması Wassim Shebaby ve Robin Taleb tarafından yazıldı ve Robin Taleb, Costantine Daher ve Mohamad Mroueh tarafından düzenlendi.
Git: Veri kullanılabilirliği
Yazarlar, makalenin, makalede bildirilen yöntemleri ve bulguları yorumlamak, çoğaltmak ve geliştirmek için gereken minimum veri kümesini içerdiğini beyan eder.
Git: Rekabet İlgi Alanları
Ben, Robin I. Taleb, yazarların Nature Research tarafından tanımlanan rakip çıkarları veya bu makalede bildirilen sonuçları ve/veya tartışmaları etkilediği düşünülebilecek diğer çıkarları olmadığını beyan ederim.
Git: Dipnotlar
Yayıncının notu: Springer Nature, yayınlanan haritalarda ve kurumsal bağlantılarda yargı yetkisi iddiaları konusunda tarafsız kalır.
Git: Ek bilgi
Bu belgeye 10.1038/s41598-019-49374-9 adresinde ek bilgiler eşlik etmektedir.
Git: Referanslar
1. Uhtit A, et al. Bir fitokimyasal süper kokteyl ile meme kanseri hücrelerinde hücre döngüsü, proliferasyon, hayatta kalma, metastatik yollar ve apoptoz indüksiyonunun eşzamanlı inhibisyonu: Etki modunu destekleyen genler. Kanser Dergisi. 2014; 4 :703–715. doi: 10.7150/jca.7235. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
2. Sak K, Jürisoo K, Raal A. Doğal antikanser ilaçları üzerine Estonya halk geleneksel deneyimleri: Geçmişten geleceğe. Farmasötik Biyoloji. 2014; 52 :855-866. doi: 10.3109/13880209.2013.871641. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
3. Panetsos K, Christou A, Scaltsoyiannes A. Sedir türlerinde (Cedrus sp.) allozim varyasyonu üzerine ilk analiz Silvae Genetica. 1992; 41 :339–342. [ Google Akademik ]
4. Reddy SE, Kirti Dolma S, Koundal R, Singh B. Uçucu yağların elmas sırtlı güve, Plutella xylostella (L.) (Lepidoptera: Yponomeutidae)'ye karşı kimyasal bileşimi ve böcek öldürücü aktiviteleri Doğal ürün araştırması. 2016; 30 :1834–1838. doi: 10.1080/14786419.2015.1068772. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
5. Barrero AF, et al. Cedrus atlantica'nın konilerinden Abietan diterpenleri. Fitokimya. 2005; 66 :105-111. doi: 10.1016/j.phytochem.2004.10.017. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
6. Derwich E, Benziane Z, Boukir A. Cedrus atlantica'nın uçucu yağının kimyasal bileşimi ve in vitro antibakteriyel aktivitesi. Int. J. Agric . Biol. 2010; 12 :381–385. [ Google Akademik ]
7. Singh SK, et al. Cedrus deodara kök ağacından elde edilen kimyasal olarak standardize edilmiş izolatlar, antikanser aktiviteye sahiptir. Bitki ilacı. 2007; 73 :519–526. doi: 10.1055/s-2007-967185. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
8. Shinde U, et al. Membran stabilize edici aktivite—Cedrus deodara odun yağının anti-inflamatuar aktivitesi için olası bir etki mekanizması. Fitoterapi. 1999; 70 :251–257. doi: 10.1016/S0367-326X(99)00030-1. [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
9. Dakir M, et al. Cedrus atlantica'dan antibakteriyel diterpenoidler. Doğal ürün araştırması. 2005; 19 :719–722. doi: 10.1080/14786410512331330675. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
10. Guerrini, A. Cedrus libani tohum ekstraktlarının K562 insan kronik miyelogenus lösemi hücrelerine karşı antiproliferatif ve eritroid farklılaşma aktiviteleri. International Journal of Pharmaceutical & Biological Archive 2 (2011).
11. Saab AM, et al. Lübnan şifalı bitkilerinden elde edilen uçucu yağların çoklu ilaca dirençli lösemi hücrelerine karşı fitokimyasal analiz ve sitotoksisite. Planta Medica. 2012; 78 :1927–1931. doi: 10.1055/s-0032-1327896. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
12. Piazza GA, et al. NSAID'ler: eski ilaçlar yeni antikanser hedeflerini ortaya çıkarır. İlaç. 2010; 3 :1652-1667. doi: 10.3390/ph3051652. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
13. Zha S, Yegnasubramanian V, Nelson WG, Isaacs WB, De Marzo AM. Kanserde siklooksijenazlar: ilerleme ve bakış açısı. Kanser Let. 2004; 215 :1–20. doi: 10.1016/j.canlet.2004.06.014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
14. Salvemini D, Marino MH. İndüklenebilir nitrik oksit sentaz ve inflamasyon. Araştırma ilaçları hakkında uzman görüşü. 1998; 7 :65-75. doi: 10.1517/13543784.7.1.65. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
15. Harris RE, Beebe-Donk J, Schuller HM. Sigara içenler arasında nonsteroid antiinflamatuar ilaçlarla akciğer kanserinin kemoprevensiyonu. Onkoloji raporları. 2002; 9 :693–696. [ PubMed ] [ Google Akademik ]
16. Greenhough A, et al. COX-2/PGE2 yolu: kanserin ayırt edici özelliklerinde ve tümör mikroçevresine adaptasyonda kilit roller. Karsinojenez. 2009; 30 :377–386. doi: 10.1093/carcin/bgp014. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
17. Shim JY, et al. Siklooksijenaz-2'nin aşırı ekspresyonu, meme karsinomu ve onun kötü prognostik faktörleri ile ilişkilidir. Modern patoloji. 2003; 16 :1199–1204. doi: 10.1097/01.MP.00000097372.73582.CB. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
18. Yuan C, et al. Siklooksijenaz allosterizmi, siklooksijenaz homodimerlerinin monomerleri arasında yağ asidi aracılı çapraz konuşma. Biyolojik Kimya Dergisi. 2009; 284 :10046–10055. doi: 10.1074/jbc.M808634200. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
19. Umar A, Steele VE, Menter DG, Hawk ET. Kanser önlemede nonsteroid antiinflamatuar ilaçların mekanizmaları. Onkoloji Seminerleri. 2016; 43 :65-77. doi: 10.1053/j.seminoncol.2015.09.010. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
20. Vonkeman, HE & van de Laar, MA In Semin. Artrit Rheum . 294–312 (Elsevier). [ PubMed ]
21. Saab AM, Harb FY, Koenig WA. Lübnan'dan Cedrus libani ve Cedrus atlantica'nın öz odunundaki uçucu yağ bileşenleri. Minerva Biotecnologica. 2005; 17 :159-161. [ Google Akademik ]
22. Taleb RI, et al. β-2-himachalen-6-ol: Lübnan yabani havuçuna özgü yeni bir antikanser seskiterpen. Etnofarmakoloji Dergisi. 2016; 190 :59-67. doi: 10.1016/j.jep.2016.05.053. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
23. Daaboul HE, et al. β-2-himachalen-6-ol'ün kolon kanserindeki antitümör aktivitesine, PI3K ve MAPK yolaklarının inhibisyonu aracılığıyla aracılık edilir. Kimyasal-Biyolojik Etkileşimler. 2017; 275 :162–170. doi: 10.1016/j.cbi.2017.08.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
24. Daaboul HE, et al. β-2-himachalen-6-ol , in vitro ve in vivo cilt kanseri gelişimine karşı korur . Eczacılık ve Farmakoloji Dergisi. 2017; 69 :1552–1564. doi: 10.1111/jphp.12796. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
25. Manohar S, Leung N. Cisplatin nefrotoksisitesi: literatürün gözden geçirilmesi. Nefroloji Dergisi. 2018; 31 :15–25. doi: 10.1007/s40620-017-0392-z. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
26. Abd El Razik HA, et al. Yeni pirazolo [3, 4-d] pirimidin türevlerinin sentezi ve bunların antienflamatuar ve antikanser aktivitelerinin değerlendirilmesi. Kimyasal biyoloji ve ilaç tasarımı. 2017; 90 :83-96. doi: 10.1111/cbdd.12929. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
27. Rone A, et al. Oral uygulama için potansiyel antikanser adayları olarak insan topoizomeraz inhibisyonu ve Ru (II)-SCAR komplekslerinin DNA/BSA bağlanması. BiyoMetaller. 2017; 30 :321–334. doi: 10.1007/s10534-017-0008-z. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
28. Huang, L., Jiang, Y. & Chen, Y. İlaç Kombinasyon İndeksinin Tahmin Edilmesi ve Uyuşturucu Hedefli EGFR-ERK Sinyal Yolunun Matematiksel Modellenmesi ile Ağ Düzenleme Dinamiklerinin Simüle Edilmesi. Bilimsel Raporlar 7 , 40752, 10.1038/srep40752, https://www.nature.com/articles/srep...ry-information (2017). [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ]
29. Wei WC, et al. 2008 ve 2012 yılları arasında Tayvan'ın yumuşak mercanlarından izole edilen doğal ürünlerin anti-inflamatuar aktiviteleri. Deniz ilaçları. 2013; 11 :4083–4126. doi: 10.3390/md11104083. [ PMC ücretsiz makale ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
30. Regulski M, et al. COX-2 inhibitörleri: meme kanseri tedavisinde yeni bir strateji. Bugün ilaç keşfi. 2016; 21 :598-615. doi: 10.1016/j.drudis.2015.12.003. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
31. Jose N, Ajith T, Janardhanan K. İstiridye mantarının metanol özütü, Pleurotus florida, iltihabı ve trombosit agregasyonunu engeller. Fitoterapi Araştırması: Doğal Ürün Türevlerinin Farmakolojik ve Toksikolojik Değerlendirmesine Adanmış Uluslararası Bir Dergi. 2004; 18 :43-46. doi: 10.1002/ptr.1355. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Akademik ]
32. Gupta P, Kulshrestha D, Patnaik G. Cedrus deodara'nın antialerjik aktivitesi. J Med Aromatik Bitki Sci. 1997; 19 :1007–1008. [ Google Akademik ]
33. Van Wyk, B.-E. & Wink, M. Dünyanın şifalı bitkileri: önemli şifalı bitkiler ve kullanımları için resimli bir bilimsel rehber . 1 baskı, 124 (Briza Yayınları, 2004).
34. Ajith, T. & Janardhanan, K. Phellinus rimosus (Berk) Pilat'ın metanol ekstraktının antioksidan ve anti-inflamatuar aktiviteleri. (2001). [ PubMed
Sedir ağacı nedir?
Sedir ağacı özellikleri ile merak edilen ağaç türleri arasında yer alıyor. Sedir, çamgiller (Pinaceae) familyasından Cedrus cinsini oluşturan iğne yapraklı ağaç türlerine verilen isimdir. Ortalama ömürleri 1000 yıl kadardır, 40 metre boya ve 2 metre çapa kadar büyüyebilirler.
Haberin Devamı
Tomurcuk çok küçük olup, az sayıda pullarla örtülüdür. İğne yapraklar genellikle üç köşeli, yatay kesitlerinde bitişik iki adet reçine kanalı bulunmaktadır. Yapraklar uzun sürgünler üzerinde tek tek, seyrek ve dağınık olarak dizilirken, kısa sürgünlerde püskül şeklindedir. İğne yapraklar dökülmeden ağaç üzerinde 3-6 yıl kalırlar. Bir evcikli çiçekler yalnız olarak terminal halde bulunurlar. Erkek çiçekler silindirik yapıda olup 5 cm uzunluğunda, sarı renkli ve kısa sürgün üzerinde dik dururlar. Dişi çiçekler daha küçüktür. 1-1,5 cm, yeşilimsi renkte olup döllenme ilkbaharda oluşmaktadır. Kozalak ise 26 ayda olgunlaşmaktadır. Kozalak genellikle fıçı görünümündedir. Kısa sürgün üzerinde adeta oturmuş şekildedir. Kısa ve kalın bir sapı vardır. Kozalak pulları olgunlaştığında dağılır.
Tohumların büyük, üçgen biçiminde genişçe kanadı olup, tohumu tek yüzünden örtmüştür. Tohumların üzerlerinde bol sayıda reçine bezeleri vardır. Çenek sayıları 9-10'dur.
Haberin Devamı
Ekolojik istekleri
Sedirler yarı ışık ağacıdır. Nem istekleri az, sıcaklık istekleri fazladır. Yetiştirilmeleri tohumla olur.
Sedir ağaçları hangi bölgelerde var?
Lübnan, Himalaya, Kıbrıs ve Atlas türleri bulunan sedir ağaçlarının iğne yaprakları genellikle üç köşelidir ve yatay kesitlerinde bitişik iki adet reçine kanalı bulunmaktadır. Genel olarak Akdeniz ikliminin hakim olduğu yerlerde, Anadolu'da batı, orta ve doğu Toroslar'da doğal olarak yayılış gösterir. Kuzeyde Erbaa ve Niksar çevrelerinde küçük ve izole halde bulunur. Boyları 40, çapları 3 metreye kadar ulaşan sedir ağaçları, gençken piramit görünüşlü olurlar. Yaşlılar ise geniş, yassı tepeli, düzgün gövdeli güzel görünüşlüdür. Derine giden kazık kök sistemine sahiptir. Özellikle kireç taşı topraklarda, yarık ve çatlaklarda oldukça derine gider. Türkiye'de birçok yerde görülebilen sedir ağaçları, nispeten kurak ve kalkerli yamaçlarda çoğu kez kayalar arasında yetişir. Sedir ağaçları mobilya, doğrama, tel direği, inşaat ve gemi kerestesi, kağıt, lif ve selüloz odunu ile yonga levha imalatında kullanılmaktadır.